CN102498103A - 作为dgat1抑制剂的吡嗪甲酰胺 - Google Patents

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Abstract

本发明描述了式(I)的DGAT-1抑制剂化合物、其药学上可接受的盐和前药以及药物组合物、制备它们的方法及它们在治疗例如肥胖症中的用途，其中，例如，r为0或1，且X1为直链(1-3C)烷基；q为0或1，且X1为氟、氯或(1-3C)烷基；Y1选自氟、氯、溴、氰基、(1-3C)烷基和(1-2C)烷氧基；n为0、1或2，且Y2为氟、氯或(1-3C)烷基；p为0、1或2，且Y3为(1-3C)烷基或形成(3-5C)环烷基环；Z为羧基或-CONHSO2Me或-CONRbRc，其中Rb和Rc独立地选自例如氢和(1-4C)烷基，或Rb和Rc相连以形成吗啉环或(4-6C)杂环，并且当Z为-CONRbRc时，Rb和Rc基团可任选地被羧基取代。

Description

作为DGAT1抑制剂的吡嗪甲酰胺
本发明涉及抑制乙酰CoA(乙酰辅酶A)：二酰甘油酰基转移酶(DGAT1)活性的化合物、它们的制备方法、包含它们作为活性成分的药物组合物、治疗与DGAT1活性相关的疾病的方法、它们作为药物的用途以及它们在制备用于抑制温血动物例如人内的DGAT1的药物中的用途。具体地讲，本发明涉及可用于治疗温血动物(例如人)内的II型糖尿病、胰岛素抗性、糖耐量减低和肥胖症的化合物，更具体地涉及这些化合物在制备用于治疗温血动物如人内的II型糖尿病、胰岛素抗性、糖耐量降低和肥胖症的药物中的用途。
酰基CoA：二酰甘油酰基转移酶(DGAT)存在于细胞的微粒体部分中。其通过促进二酰甘油与脂肪酰CoA的连接来催化磷酸甘油途径的最终反应，从而导致甘油三酯的形成，所述磷酸甘油途径被认为是细胞中甘油三酯合成的主要途径。尽管尚不清楚DGAT是否限制甘油三酯合成的速率，但其催化所述途径中唯一保证生成此类型分子的步骤[Lehner&Kuksis(1996)Biosynthesis of triacylglycerols.Prog.Lipid Res.35：169-201]。
已克隆和表征了两种DGAT基因(DGAT1和DGAT2)。尽管这两种编码蛋白不具有序列同源性，但两者均催化相同的反应。由于DGAT1基因类似于酰基CoA：胆固醇酰基转移酶(ACAT)基因，因此从序列数据库检索中对其进行了鉴定。[Cases等人(1998)，Identification of a gene encoding anacyl CoA：diacylglycerol acyltransferase，a key enzyme in triacylglycerolsynthesis.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95：13018-13023]。已经在许多哺乳动物组织(包括脂肪细胞)中发现DGAT1活性。
因为先前缺乏分子探针，所以对DGAT1调节的了解甚少。已知在脂肪细胞分化期间，DGAT1显著上调。
对基因敲除小鼠的研究表明，DGAT1活性调节剂具有治疗II型糖尿病和肥胖症的价值。如正常禁食血清甘油三酯水平和正常脂肪组织组成所证明，DGAT1敲除(Dgat1-/-)小鼠可以存活并且能够合成甘油三酯。Dgat1-/-小鼠具有比野生型小鼠少的基线脂肪组织，并且抵抗饮食诱导的肥胖症。就常规饮食和高脂肪饮食而言，Dgat1-/-小鼠比野生型小鼠的代谢率高约20％[Smith等人(2000)，Obesity resistance and multiple mechanisms oftriglyceride synthesis in mice lacking DGAT.Nature Genetics 25：87-90]。Dgat1-/-小鼠增加的能量支出部分因为其增加的体力活动。Dgat1-/-小鼠还表现出增加的胰岛素敏感度和增加20％的葡萄糖处理率。与脂肪质量下降50％相一致，Dgat1-/-小鼠中的瘦蛋白水平下降50％。
当Dgat1-/-小鼠与ob/ob小鼠杂交时，这些小鼠表现出ob/ob表型[Chen等人(2002)，Increased insulin and leptin sensitivity in mice lacking acylCoA：diacylglycerol acyltransferase J.Clin.Invest.109：1049-1055]，这表明Dgat1-/-表型需要完整的瘦蛋白途径。当Dgat1-/-小鼠与刺豚鼠(Agouti mice)杂交时，观察到体重降低，葡萄糖水平正常，与野生型刺豚鼠或ob/ob/Dgat1-/-小鼠相比，胰岛素水平降低70％。
将来自Dgat1-/-小鼠的脂肪组织移植到野生型小鼠中，在这些小鼠中产生对饮食诱导的肥胖症的抗性，以及改善的葡萄糖代谢[Chen等人(2003)Obesity resistance and enhanced glucose metabolism in mice transplanted withwhite adipose tissue lacking acyl CoA：diacylglycerol acyltransferase J.Clin.Invest.111：1715-1722]。
各种国际申请公开了抑制DGAT-1的化合物，例如WO 2006/064189描述了抑制DGAT-1的某些噁二唑化合物。然而，对具有所需性质(如药代动力学/动力学和/或物理化学和/或毒理学特性)的其它DGAT-1抑制剂一直存在需求。
因此，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药：
Figure BPA00001513975500021
其中各r独立地为0或1，并且各X1独立地选自直链(1-3C)烷基、(2-3C)烯基、(2-3C)炔基、(1-2C)烷氧基、甲氧基甲基、氨基和氰基；
各q独立地为0或1，并且各X2独立地选自氟、氯、溴、氨基、氰基、(1-3C)烷基、(2-3C)烯基、(2-3C)炔基和(1-2C)烷氧基；
Y1选自氟、氯、溴、氰基、(1-3C)烷基和(1-2C)烷氧基；
n为0、1或2，并且各Y2独立地选自氟、氯、溴、氰基、羟基、(1-3C)烷基和(1-2C)烷氧基；
p为0、1或2，并且各Y3独立地为(1-3C)烷基，或当p为2时，各Y3还可相连以形成(3-5C)环烷基环；
Z为羧基或选自-CONHSO2Me或下列环之一的基团Q：
Figure BPA00001513975500031
或Z为-CONRbRc，其中Rb和Rc独立地选自氢、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基乙基，或Rb和Rc相连以形成吗啉环或(4-6C)杂环，并且当Z为-CONRbRc时，所述(1-4C)烷基和可形成的吗啉环或(4-6C)杂环可任选地在可用的碳原子上被羧基或基团Q取代；
并且其中在上文所定义的直链(1-3C)烷基、包含(1-3C)烷基或(1-2C)烷氧基的基团中的任何碳原子可任选地被至多3个氟原子取代。
为避免疑惑，当p＝2时，基团
Figure BPA00001513975500032
表示基团
Figure BPA00001513975500033
当p＝0时，基团
Figure BPA00001513975500041
表示基团
Figure BPA00001513975500042
另一特征为权利要求和本文中实施方案中的任一特征，前提条件是，本文中任何具体实施例或这些具体实施例中任一个的药学上可接受的盐个别地弃权。
本发明的另一特征为包含羧酸拟似物或基团Z的生物电子等排体的式(I)化合物。如本文所用，对羧酸拟似物或生物电子等排体的提及包括如ThePractice of Medicinal Chemistry，Wermuth C.G.编辑：Academic Press：NewYork，1996年，第203页中所定义的基团，该文献通过引用并入本文中。此类基团的具体实例包括-SO3H、-S(O)2NHR13、S(O)2NHC(O)R13、-CH2S(O)2R13、-C(O)NHS(O)2R13、-C(O)NHOH、-C(O)NHCN、-CH(CF3)OH、C(CF3)2OH、-P(O)(OH)2和以下子式(a)-(i’)的基团
Figure BPA00001513975500043
Figure BPA00001513975500051
其中子式(k)中的p为1或2，R27和R28独立地选自氢、羟基、(1-6C)烷氧基、硫醇、(1-6C)烷硫基、-C(O)R29、-S(O)R30、-SO2R31、-NR32R33、-NHCN、卤素和三卤代甲基，其中R29、R30和R31为-OR34、(1-6C)烷基、-NR32R33或三卤代甲基，R32和R33独立地选自氢、(1-6C)烷基、-SO2R34和-COR35，其中R35为(1-6C)烷基或三卤代甲基，并且R34为氢、(1-6C)烷基或三卤代甲基，并且R13选自氢、(1-6C)烷基、羟基、卤素、氨基、氰基、((1-3C)烷基)CONH-、羧基、(1-6C)烷氧基、(1-6C)烷氧羰基、氨基甲酰基、N-((1-6C)烷基)氨基甲酰基、卤代((1-6C)烷基)(例如三氟甲基)、(1-6C)烷基磺酰基或(1-6C)烷基亚磺酰基。R27或R28的具体实例为羟基。
具体的羧酸拟似物或生物电子等排体是子式(b)的四唑基团和-C(O)NHS(O)2Me。
在本说明书中，除非另有说明，术语“烷基”包括直链烷基和支链烷基两者，并且提及单独的烷基例如“丙基”只具体指直链形式。类似的惯例适用于其它一般术语。除非另有说明，术语“烷基”有利地指具有1-10个碳原子(合适为1-6个碳原子，优选1-4个碳原子)的链。
在本说明书中，术语“烷氧基”指与氧原子连接的上文所定义的烷基。
对于直链(1-3C)烷基，具体含义包括甲基、乙基和丙基；对于(1-4C)烷基，具体含义包括甲基、乙基、丙基和丁基；对于(2-3C)烯基，具体含义包括乙烯基；对于(2-3C)炔基，具体含义包括乙炔基；对于(1-2C)烷氧基，具体含义包括甲氧基和乙氧基；对于(1-4C)烷氧基，具体含义包括甲氧基、乙氧基和丙氧基；对于-CONRbRc，具体含义包括-CONH2和-CONHMe。
对于可任选地被至多3个氟原子取代的直链(1-3C)烷基、(1-2C)烷氧基、(1-4C)烷基或(1-4C)烷氧基中的任何碳原子，具体含义包括诸如三氟甲基、二氟甲基、二氟甲氧基或三氟甲氧基的基团。
为避免疑惑，应该理解，在本说明书中，当基团被“上文所定义的”或“下文所定义的限定时，所述基团涵盖首次出现且最广泛的定义以及对该基团的每个和所有具体定义。
如果未另有说明，用于具体基团的合适的任选取代基是对于本文类似的基团所述的那些取代基。
式(I)化合物可形成稳定的酸式盐或碱式盐，并且在此类情况下，将化合物作为盐来给药可能是适当的，药学上可接受的盐可通过常规方法(例如后面所描述的那些方法)来制备。
合适的药学上可接受的盐包括酸加成盐，诸如甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、α-甘油磷酸盐、延胡索酸盐、盐酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、酒石酸盐和(较不优选)氢溴酸盐。还合适的是与磷酸和硫酸形成的盐。在另一方面，合适的盐是碱式盐，诸如(I)族(碱金属)盐；(II)族(碱土)金属盐；有机胺盐，例如三乙胺、吗啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、普鲁卡因、二苄胺、N，N-二苄基乙胺、三-(2-羟乙基)胺、N-甲基d-葡糖胺和氨基酸如赖氨酸。根据带电官能团的数目和阳离子或阴离子的化合价，可存在超过一个阳离子或阴离子。
其他合适的药学上可接受的盐由例如Berge等人(J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19)和/或Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection and Use，Stahl和Wermuth(Wiley-VCH，2002)提及，各文献通过引用并入本文中。
本发明的一个特征涉及本发明的化合物(如实施例中的任一化合物)，所述化合物为游离酸或游离碱形式或呈其药学上可接受的盐。此类形式可通过标准技术制成。
然而，为了在制备期间促进盐的分离，可优选较少溶于所选择溶剂中的盐，而无论其是否是药学上可接受的。
在本发明范围之内，应该理解，式(I)化合物或其盐可以表现出互变异构现象，并且本说明书中的式图(例如基团Q的那些)仅可代表一种可能的互变异构形式。应该理解，本发明包括涵盖抑制DGAT1活性的任何互变异构形式，并不仅限于式图中所采用的任何一种互变异构形式。
式(I)化合物的前药和其盐也在本发明范围内。
前药的各种形式在本领域中是已知的。此类前药衍生物的实例参见：
a)Design of Prodrugs，H.Bundgaard编辑(Elsevier，1985)和Methods inEnzymology，第42卷第309-396页，K.Widder等人编辑(Academic Press，1985)；
b)A Textbook of Drug Design and Development，Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard编辑，第5章“Design and Application of Prodrugs”，H.Bundgaard，第113-191页(1991)；
c)H.Bundgaard，Advanced Drug Delivery Reviews，8，1-38(1992)；
d)H.Bundgaard等人，Journal of Pharmaceutical Sciences，77，285(1988)；和
e)N.Kakeya等人，Chem Pharm Bull，32，692(1984)，
各文献均通过引用并入本文中。
此类前药的实例是本发明化合物的体内可裂解的酯。包含羧基的本发明化合物的体内可裂解的酯是例如在人或动物体内裂解以产生母体酸的药学上可接受的酯。适用于羧基的药学上可接受的酯包括(1-6C)烷基酯，例如甲酯或乙酯；(1-6C)烷氧基甲酯，例如甲氧基甲酯；(1-6C)烷酰氧基甲酯，例如新戊酰氧基甲酯；酞基酯；(3-8C)环烷氧基羰基氧基(1-6C)烷基酯，例如1-环己基羰基氧基乙酯；1，3-二氧杂环戊-2-基甲酯，例如5-甲基-1，3-二氧杂环戊-2-基甲酯；(1-6C)烷氧羰基氧基乙酯，例如1-甲氧羰基氧基乙酯；氨基羰基甲酯及其一-或二-N-((1-6C)烷基)形式，例如N，N-二甲基氨基羰基甲酯和N-乙基氨基羰基甲酯；并且可在本发明化合物的任何羧基处形成。包含羟基的本发明化合物的体内可裂解的酯是例如在人或动物体内裂解以产生母体羟基的药学上可接受的酯。适用于羟基的药学上可接受的酯包括(1-6C)烷酰基酯，例如乙酰基酯；和苯甲酰基酯，其中苯基可以被氨基甲基或N-取代的一-或二-(1-6C)烷基氨基甲基取代，例如4-氨基甲基苯甲酰基酯和4-N，N-二甲基氨基甲基苯甲酰基酯。
具体前药为选自下列的羧基的酯：(1-6C)烷基酯、(1-6C)烷氧基甲酯、(1-6C)烷酰氧基甲酯、酞基酯、(3-8C)环烷氧基羰基氧基(1-6C)烷基酯、1，3-二氧杂环戊-2-基甲酯、(1-6C)烷氧羰基氧基乙酯、氨基羰基甲酯和氨基羰基甲酯的一-或二-N-((1-6C)烷基)形式。
具体的前药是式(I)化合物中的羧酸的(1-4C)烷基酯。
本领域的技术人员应理解，式(I)的某些化合物包含不对称取代的碳和/或硫原子，因此可以旋光和外消旋形式存在和分离。式(I)的一些化合物可表现出多晶型现象。应理解，本发明涵盖任何外消旋、旋光、多晶型或立体异构形式或其混合物，所述形式具有可用于抑制DGAT1活性的性质，本领域熟知如何制备旋光形式(例如，通过重结晶技术拆分外消旋形式，通过从旋光原料合成，通过手性合成，通过酶法拆分，通过生物转化，或通过使用手性固定相的色谱分离)和如何通过下文所描述的标准试验来测定抑制DGAT1活性的功效。
还应该理解，式(I)的某些化合物和其盐可以以溶剂化形式和非溶剂化形式存在，例如水合形式。应该理解，本发明包括抑制DGAT1活性的所有此类溶剂化形式。
如前所述，提供了具有良好DGAT1抑制活性的一系列化合物。其通常具有良好的物理和/或药代动力学性质。这些化合物具有特别有利的药物和/或物理和/或药代动力学/动力学和/或毒理学性质和/或对DGAT1的选择活性。
在一个实施方案中，提供了权利要求中任一项要求保护的化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中吡嗪在可用的碳原子上被一个或两个直链(1-3C)烷基取代基，尤其甲基，且尤其二甲基所取代。
式(I)化合物中的取代基的具体含义如下(在适当的情况下，可将此类含义与上文或下文所定义的其他含义、定义、权利要求或实施方案中的任一者一起使用)，例如技术人员将理解，例如可将以下具体含义(2)和(3)并入本文权利要求或实施方案中的任一者中，以限定其中吡嗪为二甲基-吡嗪...的范围：
(1)X1为直链(1-3C)烷基；
(2)X1为甲基或乙基，特别为甲基；
(3)各X1为甲基
(4)r为1；
(5)r为2
(6)r为2，且各X1为直链(1-3C)烷基；
(7)r为2，且各X1为甲基；
(8)q为0或1；
(9)一个q为0且另一个q为1；
(10)X2为溴、氟或氯；
(11)X2为氟或氯；
(12)X2为氟；
(13)Y1为氟、氯、甲基或三氟甲基；
(14)Y1为氟或氯；
(15)Y1为氯；
(16)n为0或1；
(17)n为0；
(18)Y2为氟、氯或(1-3C)烷基；
(19)Y2为氟、氯或甲基；
(20)p为0或1；
(21)p为2；
(22)Y3为氟、氯、(1-3C)烷基或环丙基或环丁基环(由两个Y3基团形成)；
(23)Y3为(1-3C)烷基或环丙基或环丁基环(由两个Y3基团形成)；
(24)p为2，且Y3形成(3-5C)环烷基环；
(25)Z为羧基或-CONRbRc或
Figure BPA00001513975500101
(26)Z为羧基或-CONRbRc；
(27)Z为-CONRbRc；
(28)Z为羧基；
(29)Rb为(1-4C)烷基，其任选地被羧基取代；
(30)Rc为氢或(1-4C)烷基；
(31)Rc为氢或甲基，例如为氢；
(32)在X2、Y2或Y1中，直链(1-3C)烷基、包含(1-3C)烷基或(1-2C)烷氧基的基团中的任何碳原子可任选地被至多3个氟原子取代；
(33)Z为-CONRbRc，且Rb和Rc相连以形成吗啉环或(4-6C)杂环，如吖丁啶环；
(34)Z为-CONRbRc，且Rb和Rc相连以形成吗啉环或(4-6C)杂环，如哌啶环；
(35)Z为-CONRbRc，且所述(1-4C)烷基和可由Rb和Rc形成的吗啉环或(4-6C)杂环在可用的碳原子上被羧基Q取代。
(36)Z为-CONRbRc，且所述(1-4C)烷基和可由Rb和Rc形成的吗啉环或(4-6C)杂环在可用的碳原子上被羧基或基团Q取代。
因此，在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中各r为1，且各X1为甲基；
各q独立地为0或1，并且各X2独立地选自氟和氯；Y1选自氟、氯、和(1-3C)烷基；
n为0或1，且各Y2独立地选自氟、氯和(1-3C)烷基；
p为0、1或2，且Y3独立地为(1-3C)烷基，或当p为2时，各Y3还可相连以形成(3-5C)环烷基环；
Z为羧基或选自-CONHSO2Me或下列环之一的基团Q：
Figure BPA00001513975500111
或Z为-CONRbRc，其中Rb和Rc独立地选自氢、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基乙基，或Rb和Rc相连以形成吗啉环或(4-6C)杂环，并且当Z为-CONRbRc时，所述(1-4C)烷基和可形成的吗啉环或(4-6C)杂环可任选地在可用的碳原子上被羧基或基团Q取代；
并且其中在上文所定义的直链(1-3C)烷基、包含(1-3C)烷基或(1-2C)烷氧基的基团中的任何碳原子可任选地被至多3个氟原子取代。
在另一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药，其中
各r为1，且各X1为(1-3C)烷基，例如甲基；
各q独立地为0、1或2，且各X2独立地选自氟和氯；
Y1选自氟、氯、和任选地被至多三个氟原子取代的(1-3C)烷基；
n为0或1，且各Y2独立地选自氟、氯和(1-3C)烷基；
p为0、1或2，且Y3独立地为(1-3C)烷基，或当p为2时，各Y3还可相连以形成(3-5C)环烷基环；
Z为羧基或选自下列环之一的基团Q：
Figure BPA00001513975500121
例如Z为羧基，或基团
Figure BPA00001513975500122
或Z为-CONRbRc，其中Rb和Rc独立地选自氢和(1-4C)烷基，或Rb和Rc相连以形成(4-6C)杂环，例如哌啶，
并且当Z为-CONRbRc时，所述(1-4C)烷基和可形成的(4-6C)杂环在可用的碳原子上可任选地被羧基取代。
在另一个实施方案中，提供了本文任一实施方案中所定义的式(I)化合物，其中针对Z作为羧基的前药为(1-6C)烷基酯。
另一特征为本文中所定义的任何范围，前提条件是，具体实施例，例如实施例1、2、3、4等个别地弃权。
进一步具体的本发明化合物为各实施例，其中每一个实施例提供了本发明的另一个独立的方面。在其他方面，本发明还包括实施例的任一具体化合物或其药学上可接受的盐(例如，钠盐、镁盐、叔丁基铵盐、三(羟甲基)甲铵盐、三乙醇铵盐、二乙醇铵盐、乙醇铵盐、甲基乙醇铵盐、二乙基铵盐或烟酰胺盐)。
在另一方面，本发明还包括实施例化合物的任何具体异构体或其中任一个的药学上可接受的盐。
可以通过已知适用于制备化学上相关的化合物的任何方法制备式(I)化合物。当用于制备式(I)化合物或其药学上可接受的盐时，此类方法作为本发明的另一特征来提供。
在另一方面，本发明还提供了：式(I)化合物及其盐可通过以下方法、实施例的方法和类似方法(其中所有变量如上文中针对式(I)化合物所定义，除非另有说明)制备，然后如果需要，可以被移除任何保护基和/或形成适合的盐。任何定义的羧酸基团可适当地通过其拟似物或生物电子等排体(具体为本文中定义为Q的基团)替代。
对方案中示出的变量进行定义，或者可以根据本文针对本发明化合物所述变量的上下文来解释。方案和实施例中示出的类似化学方法可用于制备本发明范围内的其他环变体和可选的连接基。
作为本发明一个方面还包括的是通过本文所述方法或实施例的任一者获得的化合物。
方法A
通过在式(I)化合物中改变取代基或将取代基引入另一式(I)化合物。将取代基转化成其他取代基的合适方法是本领域已知的；例如，酸基可以转化成酰胺基。
式(I)化合物(其中例如Z为酰基磺酰胺基团或者Z为四唑或噁二唑酮)可由相应的羧酸制备。可在合成途径的早期经由酰胺(对于伯酰胺，其可通过标准方法转化成腈)引入四唑，然后其反过来通过与叠氮化物反应转化成四唑。四唑可以在其余合成中以受保护的形式携带，例如为N-苄基化或N-(2-氰乙基)化的。同样，可通过标准方法将上述腈在合成程序早期转化成噁二唑酮。
方法B
如以下方法(其中变量如本文权利要求、实施方案或实施例的任一者中适当地定义)中所述，可采用标准方法使用在合适的钯催化剂，例如1，1′-双(二苯基膦基)-二茂铁二氯化钯(II)使适当的三氟甲磺酸根、碘-、溴-或氯-取代的芳族化合物与适当取代的中间体含硼化合物进行Suzuki偶联。
方法B1
适当的三氟甲磺酸根、碘-、溴-或氯-取代的吡嗪衍生物(IV)与式(II)的适当取代的中间体含硼化合物Suzuki偶联。
Figure BPA00001513975500141
式(IV)中的X表示离去基团如三氟甲磺酸根、碘-、溴-或氯-，且式(II)中的E表示硼酸(-B(OH)2)或其衍生物如硼酸酯(-B(OR)2，其中此处的R为(1-4C)烷基)或环状硼酸酯，例如频那醇硼烷(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷)。
或者，可采用对适当的三氟甲磺酸根、碘-、溴-或氯-吡嗪酯(III)，尤其溴-或氯-吡嗪乙酯(III)的Suzuki偶联，然后通过碱水解(例如甲酯或乙酯)来移除保护基。然后吡嗪酸通过与氨在偶联剂例如PyBOP的存在下进行反应来转化成相应的伯酰胺。
Figure BPA00001513975500142
式(III)中的X表示离去基团，例如三氟甲磺酸根、碘-、溴-或氯。
在以下方案中提供了对方法B1的说明(针对二甲基吡嗪变体)，其中可使用(Tf)2O或PhNTf2。
Figure BPA00001513975500151
方案B1：示例性反应方案
在方案B1中，可变取代基为那些与反应条件相容的取代基。保护基(如果使用)可例如通过叔丁酯的酸催化水解移除，而得到式(I)化合物，其中Z＝CO2H。
式(III)化合物的制备
以下方案示出如何制备某些吡嗪环变体。对方案中示出的变量进行定义，或者可以根据本文针对本发明化合物所述变量的上下文来解释。方案和实施例中示出的类似化学方法可用于制备本发明范围内的其他化合物。
方案B1-A：二烷基吡嗪和衍生物的反应方案
方案B1-A中的R表示(1-4C)烷基，例如甲基或乙基。
Figure BPA00001513975500161
方案B1-B：单烷基吡嗪和衍生物的反应方案
式(III)和(IV)化合物的制备
Figure BPA00001513975500162
方案B1-C：二甲基吡嗪和衍生物的反应方案
吡嗪的类似物可使用C.Christensen，C.W.Tornoe和M.Meldal，QSAR&Combinatorial Science，2004，23，(2-3)，109-116所述程序制备，例如3-甲基吡嗪...
Figure BPA00001513975500171
方案B1-D：3-单甲基吡嗪和衍生物的反应方案
式(II)化合物的制备
以下方案示出如何制备某些变体。对方案中示出的变量进行定义，或者可以根据本文针对本发明化合物所述变量的上下文来解释。方案和实施例中示出的类似化学方法可用于制备本发明范围内的其他化合物。
对于式(II)化合物，其中许多适当的中间体是文献中的或可以此类推进行制备，并且各种取代型式的引入可通过联苯Suzuki偶联来实现(参见方案B1-E)：
Figure BPA00001513975500172
方案B1-E：联苯的反应方案
在方案B1-E中，X表示三氟甲磺酸根、碘、溴或氯，且E表示硼酸(-B(OH)2)、硼酸酯(-B(OR)2，其中此处的R为(1-4C)烷基)或环状硼酸酯，例如频那醇硼烷(pinacolato borane)。
然后通过标准方法将溴联苯转化成相应的含硼衍生物。
对于在“Y3取代位置”上引入α-烷基、二烷基和环烷基而言，可将标准烷基化方法用于任何合适的硼酸酯化合物，例如使用锂碱如LDA对α-脱质子成酯基，接着用适当的卤代烷或二卤代烷淬灭。此类化学方法适用于方法B1并且也适用于方法B3(参见后文)。
方法B2
在Suzuki偶联的替代程序中，式(V)的硼酸酯作为中间体生成(其中E表示硼酸(-B(OH)2)、硼酸酯(-B(OR)2，其中此处的R为(1-4C)烷基)或环状硼酸酯，例如频那醇硼烷)，如以下方案所示(针对二甲基吡嗪变体)。然后将此中间体用于另一Suzuki偶联中以生成式(I)联苯化合物。
式(V)化合物类(环A和环B)的制备
Figure BPA00001513975500181
方案B2-A：联苯变体的反应方案
在方案B2-A中，合适的芳族取代基为那些与反应条件相容的芳族取代基。使用PhN(Tf)2和合适的碱如碳酸钾将苯酚转化成相应的三氟甲磺酸酯。将苯基三氟甲磺酸酯转化成相应的硼酸酯，然后在标准方法和合适的钯催化剂(例如1，1′-双(二苯基膦基)-二茂铁二氯化钯(II))下进行随后的Suzuki反应。或者，可将硼酸酯转化成相应的硼酸。
Figure BPA00001513975500191
式(V-B)化合物可通过标准化学方法由相应的酚类化合物制备，或在用BBr3脱甲基化之后由相应的甲氧基化合物制备。
方法B3
在Suzuki偶联的替代程序中，式(VI)的含硼化合物(其中E表示硼酸(-B(OH)2)、硼酸酯(-B(OR)2，其中此处的R为(1-4C)烷基)或环状硼酸酯，例如频那醇硼烷)作为中间体生成，并且与方案B2-A中的式(V-A)三氟甲磺酸酯反应以生成式(I)的联苯化合物。
Figure BPA00001513975500192
手性化合物(例如在“Y3”位置)可按如下制备：
(i)通过从化合物最终混合物色谱分离(例如参见实施例)；合适的hplc手性固定相包括ChiralpakOJ柱和AD柱；
(ii)利用手性助剂、通过J.S Yadav等人，Tet.Lett.2007，48，2841-2843和以下方案中所示的方法进行直接的甲基化作用，然后对助剂进行Suzuki偶联和水解分裂，以得到相关实施例化合物的单一对映体；
Figure BPA00001513975500201
(iii)通过催化氢化对α-亚甲基酸进行最终的手性还原，例如R Noyori等人，J.Org.Chem.，1987，52，3174-3176和以下方案中所述：
Figure BPA00001513975500202
此类α-亚甲基酸可通过相应的α-未取代的酯与甲醛或等同物在标准条件下进行反应，然后进行酯的碱水解来制备。
如果不可商购，用于所述程序(例如上述那些)的必需原料可以通过选自以下的技术来制备：标准有机化学技术、与已知、结构上类似的化合物的合成方法类似的技术或在上面所给出的参考文献中所描述或说明的技术、或与上述程序或实施例中所描述程序类似的技术。关于反应条件和试剂的一般指导，请读者进一步参考Advanced Organic Chemistry，第5版，Jerry March和Michael Smith，John Wiley&Sons，2001年出版。
应当理解，式(I)化合物的一些中间体也具有新颖性并且将其作为本发明的单独的独立方面来提供。具体地讲，某些式(IV)化合物可形成本发明的另一独立方面。此外，式(I)化合物的酯衍生物形成本发明的另一方面。
还应埋解，在本文提及的一些反应中，保护化合物中的任何敏感基团可能是必须/希望的。其中保护是必须或希望的情况对于木领域的技术人员而言是已知的，用于此类保护的合适方法也是已知的。可以按照标准操作(例如参见T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wileyand Sons，1991)使用常规保护基。
可使用文献中描述或熟练的化学工作者已知的适于移除上述保护基的任何合宜方法来移除保护基，选择此类方法以便有效移除保护基且对分子中其他位置的基团的干扰最小。
因此，如果反应物包括诸如氨基、羧基或羟基的基团，则可能有利的是保护本文中提及的一些反应中的基团。
羟基的合适保护基的实例为例如酰基，例如烷酰基(如乙酰基)、芳酰基(如苯甲酰基)、甲硅烷基(如三甲基甲硅烷基)或芳基甲基(如苄基)。上述保护基的脱保护条件将必要地随保护基的选择而变化。因此，例如，可例如通过用合适的碱(如碱金属氢氧化物，如氢氧化钾或氢氧化钠)水解来移除酰基，例如烷酰基或芳酰基。或者，可例如通过氟化物或通过酸的水溶液来移除甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基或SEM；或例如可以在催化剂(例如钯碳)的存在下，通过氢化来移除芳基甲基，例如苄基。
氨基的合适保护基为例如酰基，例如烷酰基(如乙酰基)、烷氧羰基(如甲氧羰基、乙氧羰基或叔丁氧羰基)、芳基甲氧羰基(如苄氧羰基)或芳酰基(如苯甲酰基)。上述保护基的脱保护条件将必要地随保护基的选择而变化。因此，例如，可例如通过用合适的碱(如碱金属氢氧化物，如氢氧化钾或氢氧化钠)水解来移除酰基，例如烷酰基或烷氧羰基芳酰基。或者，可例如通过用合适的酸(如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸)处理来移除酰基(如叔丁氧羰基)，可例如通过催化剂(如钯碳)上的氢化或通过用路易斯酸(如三(三氟乙酸)硼)处理来移除芳基甲氧羰基，例如苄氧羰基。伯氨基的合适替代保护基为例如邻苯二甲酰基，其可以通过用烷基胺(例如二甲基氨基丙胺或2-羟乙胺)或用肼处理来移除。
羧基的合适保护基是例如酯化基团，例如甲基或乙基，其可例如通过用碱(如氢氧化钠)水解来移除；或例如叔丁基，其可例如通过用酸(如有机酸，如三氟乙酸)处理来移除；或例如苄基，其可例如通过催化剂((例如钯碳)上的氢化来移除。
树脂也可用作保护基。
可在合成的任何合宜的阶段使用化学领域熟知的常规技术移除保护基，或可在随后的反应步骤或后处理期间将其移除。
熟练的有机化学工作者能够使用和修改上述参考文献和其中所附的实施例以及本文的实施例所包含和提及的信息，以获得必需的原料和产物。
使用标准技术来移除任何保护基和形成药学上可接受的盐在普通有机化学工作者的技术范围之内。此外，上文已经提供了关于这些步骤的细节。
当需要旋光形式的本发明化合物时，它可以通过以下方式获得：使用旋光原料(例如通过合适反应步骤的不对称诱导所形成的)来实施上述程序之一；或使用标准程序拆分化合物或中间体的外消旋形式；或将非对映异构体(当产生时)色谱分离。酶促技术也可用于制备旋光化合物和/或中间体。
同样，当需要本发明化合物的纯区域异构体时，它可以通过以下方式获得：使用纯区域异构体作原料来实施上述程序之一；或使用标准程序拆分区域异构体或中间体的混合物。
根据本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含上文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂或载体。
本发明组合物可为适于口服使用的形式(例如作为片剂、锭剂、硬或软胶囊、水性或油性混悬剂、乳剂、可分散性粉剂或颗粒、糖浆或酏剂)、适于局部使用的形式(例如作为霜剂、膏剂、凝胶或水性或油性溶液或混悬剂)、适于吸入给药的形式(例如作为微细粉末或液体气雾剂)、适于吹入给药的形式(例如作为微细粉末)或适于肠胃外给药的形式(例如作为用于静脉内、皮下、肌内或肌内给药的无菌水性或油性溶液或作为用于直肠给药的栓剂)。
可以使用本领域熟知的常规药物赋形剂，通过常规程序获得本发明组合物。因此，旨在用于口服使用的组合物可含有例如一种或多种着色剂、甜味剂、调味剂和/或防腐剂。
片剂制剂的合适的药学上可接受的赋形剂包括例如惰性稀释剂，例如乳糖、碳酸钠、磷酸钙或碳酸钙；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉；防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯；和抗氧化剂，例如抗坏血酸。片剂制剂可以是未经包衣或经包衣的，以调节其在胃肠道内的崩解和随后的活性成分吸收，或改善其稳定性和/或外观，在任一种情况下，使用本领域熟知的常规包衣剂和程序。
用于口服使用的组合物可以是硬明胶胶囊形式，其中将活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合；或作为软明胶胶囊，其中将活性成分与水或油(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。
水性混悬剂通常含有细粉形式的活性成分连同一种或多种悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂，例如卵磷脂或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七基亚乙基氧基鲸蜡醇)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)、或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七基亚乙基氧基鲸蜡醇)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。水性混悬剂还可含有一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯)、抗氧化剂(例如抗坏血酸)、着色剂、调味剂和/或甜味剂(例如蔗糖、糖精或天冬甜素)。
可通过将活性成分悬浮在植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中来配制油性混悬剂。油性混悬剂还可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入甜味剂(例如上面列出的那些)和调味剂，以提供适口的口服制剂。可以通过加入抗氧化剂(例如抗环血酸)来保存这些组合物。
适于通过加入水制备水性混悬剂的可分散性粉剂和颗粒通常含有活性成分连同分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂通过上面已经提及的那些来举例说明。还可存在另外的赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂。
本发明药物组合物还可为水包油乳剂的形式。油相可为植物油(例如橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)或其中任意种的混合物。合适的乳化剂可为例如天然存在的胶，例如阿拉伯树胶或西黄蓍胶；天然存在的磷脂，例如大豆；卵磷脂；衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯例如脱水山梨糖醇单油酸酯)和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。所述乳剂还可含有甜味剂、调味剂和防腐剂。
糖浆和酏剂可以用甜味剂(例如廿油、丙二醇、山梨糖醇、天冬甜素或蔗糖)配制，并且还可含有缓和剂、防腐剂、调味剂和/或着色剂。
药物组合物还可为无菌的可注射水性或油性混悬剂的形式，其可按照已知的程序、使用一种或多种适当的上述分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌的可注射制剂还可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或混悬剂，例如在1，3-丁二醇中的溶液。
用于通过吸入给药的组合物可以是常规的加压气雾剂形式，其被设计为含有微细固体或液滴的气雾剂来分散活性成分。可使用常规的气雾剂推进剂，如挥发性氟化烃或烃，并且气雾剂装置经适宜地设计以分配计量量的活性成分。
关于制剂的进一步信息，请读者参考Comprehensive MedicinalChemistry(Corwin Hansch；编委员会主席)，Pergamon Press，1990年，第5卷中第25.2章。
与一种或多种赋形剂组合以产生单一剂型的活性成分的量将必要地根据所治疗的主体和具体给药途径而变化。例如，旨在用于人口服的制剂通常含有例如与适当且合宜量的赋形剂配混的0.5mg至2g活性剂，所述赋形剂可为总组合物重量的约5至约98重量％。剂量单位形式通常含有约1mg至约500mg活性成分。关于给药途径和剂量方案的进一步信息，请读者参考Comprehensive Medicinal Chemistry(Corwin Hansch；编委员会主席)，Pergamon Press，第5卷中第25.3章。
根据本发明的另一方面，提供了上文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药，其用于通过疗法治疗人或动物体的方法中。
我们发现本发明化合物抑制DGAT1，并因此对其血糖降低效果加以关注。
本发明的另一特征为用作药物的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药。
合宜地，其为用于(用作药物以用于)在温血动物(例如人)内对DGAT1活性产生抑制的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药。
具体地讲，其为用于(用作药物以用于)在温血动物(例如人)内治疗糖尿病和/或肥胖症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药。
因此，根据本发明的另一方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药在制备用于在温血动物(例如人)内对DGAT1活性产生抑制的药物中的用途。
因此，根据本发明的另一方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药在制备用于治疗温血动物(例如人)内的糖尿病和/或肥胖症的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含上文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药以及药学上可接受的赋形剂或载体，该组合物用于在温血动物(例如人)内对DGAT1活性产生抑制。
根据本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含上文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药以及药学上可接受的赋形剂或载体，该组合物用于治疗温血动物(例如人)内的糖尿病和/或肥胖症。
根据本发明的另一方面，提供了一种在需要此类治疗的温血动物(例如人)内对DGAT1活性产生抑制的方法，其包括给予所述动物有效量的上文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药。
根据本发明的另一方面，提供了一种治疗需要此类治疗的温血动物(例如人)内的糖尿病和/或肥胖症的方法，其包括给予所述动物有效量的上文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药。
如上所述，治疗性治疗或预防性治疗具体疾病状况所需剂量的大小将必要地根据所治疗的主体、给药途径和所治疗疾病的严重性而变化。优选地，采用0.1-50mg/kg范围的日剂量。在另一个实施方案中，日剂量的范围是0.01-50mg/kg，特别是0.01-10mg/kg、0.01-1mg/kg或0.01-0.1mg/kg。然而，所述日剂量将必要地根据所治疗的主体、具体给药途径和所治疗疾病的严重性而变化。因此，可由治疗任何具体患者的从业者来确定最佳剂量。
如上所述，本发明所定义的化合物令人关注的是其抑制DGAT1的活性的能力。因此，本发明化合物可用于预防、延缓或治疗一系列疾病状况，包括糖尿病，更具体为2型糖尿病(T2DM)和由此引起的并发症(例如视网膜病、神经病和肾病)、糖耐量降低(IGT)、空腹血糖降低病症、代谢性酸中毒、酮症；代谢障碍综合征、关节炎、骨质疏松症、肥胖症和肥胖症相关病症(其包括外周血管疾病(包括间歇性跛行)、心力衰竭和某些心肌病、心肌缺血、脑缺血和再灌注、高脂血症、动脉粥样硬化、不育症和多囊卵巢综合征)；本发明化合物还可用于治疗肌无力、皮肤疾病(例如痤疮)、各种免疫调节疾病(例如牛皮癣)、HIV感染、炎性肠综合征和炎性肠病(例如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)。
尤其，本发明化合物由于预防、延缓或治疗糖尿病和/或肥胖症和/或肥胖症相关病症而令人关注。在一个方面，本发明化合物用于预防、延缓或治疗糖尿病。在另一方面，本发明化合物用于预防、延缓或治疗肥胖症。在另一方面，本发明化合物用于预防、延缓或治疗肥胖症相关病症。
本文所述的DGAT1活性抑制可作为单独疗法应用，或与针对所治疗适应症的一种或多种其他物质和/或治疗进行联合。可通过同时、按序或分开使用所述治疗的各个组分来实现此类联合治疗。同时治疗可以为单一片剂或分开的片剂。例如，此类联合治疗可有利于治疗代谢综合征[定义为腹部肥胖症(如通过腰围与人种和性别特异性切割点对比所测定的)外加下列中的任何两种：：高甘油三酯血症(＞150mg/dl；1.7mmol/l)；低HDLc(对于男性：＜40mg/dl或＜1.03mmol/l；对于女性：＜50mg/dl或1.29mmol/l)或对于低HDL(高密度脂蛋白)的治疗；高血压(SBP≥130mmHg DBP≥85mmHg)或对于高血压的治疗；和高血糖(空腹血糖≥100mg/dl或5.6mmol/l或糖耐量降低或或之前存在的糖尿病(pre-existingdiabetes mellitus))-International Diabetes Federation&input fromIAS/NCEP]。
此类联合治疗可包括下列主要类型：
1)抗肥胖症治疗药，例如通过影响食物摄取、营养吸收或能量支出而导致体重减轻的那些疗法，例如奥利斯泰(orlistat)、西布曲明(sibutramine)等；
2)促胰岛素分泌素，包括磺酰脲类(例如格列本脲、格列吡嗪)、膳食葡萄糖调节剂(例如瑞格列奈、那格列奈)；
3)改善肠降血糖素作用的药剂(例如二肽基肽酶IV抑制剂和GLP-1激动剂)；
4)胰岛素敏感剂，包括PPAR γ激动剂(例如匹格列酮和罗格列酮)，和具有组合的PPAR α和γ活性的药剂；
5)调节肝脏葡萄糖平衡的药剂(例如二甲双胍、1，6-二磷酸果糖酶抑制剂、糖原磷酸化酶抑制剂、糖原合酶激酶抑制剂、葡糖激酶活化剂)；
6)设计来减少从肠吸收葡萄糖的药剂(例如阿卡波糖)；
7)防止肾对葡萄糖重吸收的药剂(SGLT抑制剂)；
8)设计来治疗长期(prolonged)高血糖症的并发症的药剂(例如醛糖还原酶抑制剂)；
9)抗血脂障碍剂，例如HMG-CoA还原酶抑制剂(例如他汀类药物)；PPAR α-激动剂(贝特类药物(fibrate)，例如吉非罗齐)；胆汁酸多价螯合剂(消胆胺)；胆固醇吸收抑制剂(植物甾烷醇、合成抑制剂)；胆汁酸吸收抑制剂(IBATi)和烟酸及类似物(烟酸和缓释制剂)；
10)抗高血压剂，例如β-阻断剂(例如阿替洛尔、恩特来)；ACE抑制剂(例如赖诺普利)；钙拮抗剂(例如尼非地平)；血管紧张素受体拮抗剂(例如坎地沙坦)、α-拮抗剂和利尿剂(例如呋塞米、苄噻嗪)；
11)止血调节剂，例如抗血栓形成剂、纤维蛋白溶解活化剂和抗血小板剂；凝血酶拮抗剂；Xa因子抑制剂；VIIa因子抑制剂)；抗血小板剂(例如阿司匹林、氯吡格雷)；抗凝血剂(肝素和低分子量类似物、水蛭素)和华法林；
12)对抗高血糖素作用的药剂；和
13)抗炎剂，例如非甾族抗炎药(例如阿司匹林)和甾族抗炎剂(例如可的松)。
除了它们在治疗性药物中的用途之外，式(I)化合物及其药学上可接受的盐还在体外和体内试验系统的开发和标准化中用作药理学工具，用于在实验动物(例如猫、狗、兔、猴子、大鼠和小鼠)中评价DGAT1活性的抑制剂的作用，作为寻找新治疗剂的一部分。
在上述其它的药物组合物、过程、方法、用途和药物制备特征中，本文所述的本发明化合物的替代、具体和优选的实施方案也适用。本文所述的本发明化合物的替代、具体和优选的实施方案还适用于式(I)化合物或其药学上可接受的盐或前药。
如上所指出，所有化合物及其相应的药学上可接受的盐可用于抑制DGAT1。可采用下述酶测定来证明式(I)化合物及其相应的药学上可接受的(酸加成)盐抑制DGAT1的能力：
人的酶测定
参见例如国际申请WO 2005/044250。
鉴定DGAT1抑制剂的体外测定使用在昆虫细胞膜中表达的人DGAT1作为酶源(Proc.Natl.Acad.Sci.1998，95，13018-13023)。简言之，用含有人DGAT1编码序列的重组杆状病毒感染sf9细胞，并在48小时之后收获。将细胞通过超声处理裂解，并通过在4℃下以41％蔗糖梯度以28000rpm离心1小时将膜分离。收集相界面(interphase)处的膜组分，洗涤，并保存在液氮中。
通过改进Coleman(Methods in Enzymology 1992，209，98-102)所述的方法来测定DGAT1活性。在96孔板中，将0.0000256μM(或0.003μM)-33μM(终浓度)(通常10μM)的化合物与4μg/ml(终浓度)膜蛋白、5mM MgCl2和100μM、1，2二油酰基-sn-甘油(溶解于丙酮中，丙酮的最终测定浓度为10％)一起培育，总测定体积为200μl。通过添加14C油酰基辅酶A(30μM终浓度)来开始反应，并在室温下培育30分钟。通过添加200μl 2-丙醇∶庚烷(7∶1)来终止反应。通过添加300μl庚烷和100μl 0.1M碳酸盐缓冲溶液(pH 9.5)将放射性油酸甘油酯产物分离到有机相中。通过液体闪烁照相法计算上部庚烷层的份数来定量DGAT1活性。
使用此测定，化合物通常显示IC50为大约或低于10μM，优选低于10μM(即，IC50＜10μM)，优选＜1μM，更优选＜0.1μM，特别是＜0.05μM，并且更特别是＜0.01μM的活性。所述数字通常是根据标准操作的多次测定(通常是2次测定)的平均值。
实施例1至10分别显示IC50＝0.0061μM；0.0077μM；0.017μM；0.012μM；0.014μM；0.018μM；0.027μM；0.012μM；0.018μM；0.011μM。
实施例11至20分别显示IC50＝0.017μM；0.02μM；0.021μM；0.0036μM；0.011μM；0.013μM；0.013μM；0.016μM；0.023μM；0.024μM。
实施例21至30分别显示IC50＝0.015μM；0.0084μM；0.014μM；0.013μM；0.025μM；0.0063μM；0.013μM；0.017μM；0.018μM；0.011μM。
可采用以下全细胞测定来进一步证明式(I)化合物及其相应的药学上可接受的(酸)盐抑制DGAT1的能力：
HuTu 80细胞中甘油三酯合成的测定
在6孔板中，在含有胎牛血清的极限必需培养基中将HuTu80细胞细胞培养至汇合。对于本实验，将培养基改为无血清培养基，并且用化合物(溶解在DMSO中，终浓度0.1％)预培育细胞30分钟。通过向每个孔中加入0.12mM油酸钠外加与0.03mM BSA复合的1μCi/mL 14C-油酸钠，持续另外2小时，以测定重新的脂肪生成。将细胞在磷酸盐缓冲盐水中洗涤，并溶解在1％十二烷基硫酸钠中。取出等分试样，用于根据Lowry的方法(J.Biol.Chem.，1951，193，265-275)使用蛋白评价试剂盒(Perbio)进行蛋白测定。根据Coleman的方法(Methods in Enzymology，1992，209，98-104)先后使用庚烷∶丙-2-醇∶水(80∶20∶2)混合物以及水和庚烷的等份试样，将脂质萃取到有机相中。收集有机相，在氮气流下蒸发溶剂。根据Silversand和Haux(1997)的方法，将萃取物溶解在异己烷∶乙酸(99∶1)中，使用Lichrospher二醇-5，4×250mM柱和异己烷∶乙酸(99∶1)与异己烷∶丙-2-醇∶乙酸(85∶15∶1)的梯度溶剂体系(流速1mL/分钟)，经由正相高效液相色谱法(HPLC)分离脂类。使用与HPLC仪连接的Radiomatic Flo-one检测器(Packard)来分析甘油三酯流分中放射标记物的结合情况。
实施例
以下实施例用于进行说明而非旨在限制本申请的范围。各例示的化合物代表本发明特定和独立的方面。在以下非限制性实施例中，除非另有说明，其中：
(i)通过在减压下旋转蒸发来进行蒸发，并在移除残余固体(例如通过过滤出去干燥剂)之后进行后处理程序；
(ii)在室温下(即在18-25℃的温度范围内)并且通常在惰性气体(如氢气或氮气)气氛下进行操作；
(iii)给出的产率仅用于说明，未必是可得到的最大产率；
(iv)通过核(通常是质子)磁共振(NMR)和质谱技术来确认式(I)的最终产物的结构；在δ标度上测定质子核磁共振化学位移值，峰多重性按照如下显示：s，单峰；d，双峰；t，三重峰；m，多重峰；br，宽峰；q，四重峰；quin，五重峰；
(v)通常未充分地表征中间体，通过薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、红外(IR)或NMR分析来评价纯度；
(vi)在硅胶(silica)上进行快速色谱法，除非另外说明，在Biotage SP1或SP4仪上采用Biotage硅胶硅柱进行快速色谱纯化；
(vii)在Finnigan LCQ Duo离子收集器质谱仪上记录质谱，该离子收集器质谱仪配备有电喷雾接口(LC-MS)或由Waters ZQ组成并使用LC-Agilent1100LC系统的LC-MS系统；
(viii)1H NMR测定在Varian Mercury VXR 300和400仪上进行，以300和400的1H频率操作；并且在Varian UNITY plus 400、500和600光谱仪下进行，分别以400、500和600的1H频率操作。以ppm给出化学位移，溶剂为内标。当在NMR中检测时仅报道杂原子上的质子，例如NH和OH质子，并且因此可缺失。
(ix)HPLC分离在Waters YMC-ODS AQS-3 120Angstrom 3×500mm或在Waters Delta Prep Systems上使用Kromasil C8，10μM柱上进行。酸性HPLC采用流动相A：100％ACN和流动相B：5％ACN+95％H2O+0.2％FA的梯度进行。中性HPLC采用流动相A：100％ACN和流动相B：5％ACN+95％0.1M NH4OAc的梯度进行。
(x)在微波炉中进行的反应在Biotage Initiator Instrumen中运行。
(xi)在化合物命名时使用了许多化学命名软件包，例如Struc＝Name/CambridgeSoft ELN。
本文可能使用的缩写列表：
Figure BPA00001513975500321
实施例1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸
Figure BPA00001513975500322
在45℃下，将氢氧化钾粉末(45.2mg，0.81mmol)一次性添加到在叔丁醇(10mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体1-1；110mg，0.27mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌15分钟，缓慢形成白色浓稠悬浮液。添加2M HCl(2mL)，并蒸发混合物以移除有机溶剂。将悬浮液通过过滤收集，用水(5mL)洗涤并真空干燥，得到呈白色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸(82mg，77％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，3.68(2H，s)，7.34(1H，d)，7.43(1H，d)，7.51(1H，s)，7.57(2H，d)，7.61(1H，s)，7.85(2H，d)，8.04(1H，s)，12.45(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝396
中间体1-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸 甲酯
Figure BPA00001513975500331
向3，5-二甲基-6-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)吡嗪-2-甲酰胺(中间体7-6；196mg，0.55mmol)在DME(6mL)、乙醇(1.5mL)和水(1.5mL)中的脱气溶液中添加磷酸三钾(141mg，0.67mmol)、2-(3-氯-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(中间体1-2；185mg，0.55mmol)，然后添加(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(DCM加合物)(36.5mg，0.04mmol)。在80℃下，将所得混合物在氮气中搅拌4小时。将反应混合物冷却至环境温度，蒸发，并在EtOAc(75mL)和饱和盐水(50mL)之间分配，然后通过硅藻土过滤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的20％至80％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸甲酯(110mg，48.4％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，3.65(3H，s)，3.79(2H，s)，7.35(1H，d)，7.44(1H，d)，7.53(1H，s)，7.57(2H，d)，7.61(1H，s)，7.85(2H，d)，8.03(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝410
中间体1-2：2-(3-氯-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500341
在0℃和氮气下，将三乙胺(50.4mL，361.88mmol)经15分钟的时间逐滴添加到2-(3-氯-4-羟苯基)乙酸甲酯(24.2g，120.63mmol)和三氟甲磺酸酐(中间体1-3；29.7mL，180.94mmol)在DCM(500mL)中的搅拌溶液中。将所得溶液在0℃下搅拌90分钟。将反应混合物依次用饱和NaHCO3(300mL)和饱和盐水(300mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈黄色油状物的2-(3-氯-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(36.1g，90％)，其在静置时固化。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ3.63(2H，s)，3.73(3H，s)，7.25-7.28(1H，m)，7.31(1H，d)，7.47(1H，s).m/z(ES-)(M-H)-＝331
中间体1-3：2-(3-氯-4-羟苯基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500342
将3-氯-4-羟苯基乙酸(24.55g，131.57mmol)和硫酸(0.701mL，13.16mmol)在甲醇(600mL)中的溶液在75℃下搅拌3小时。将反应混合物冷却至环境温度，蒸发至干，并再溶于EtOAc(500mL)中，并用饱和盐水(2×300mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到呈浅黄色油状物的2-(3-氯-4-羟苯基)乙酸甲酯(24.20g，92％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ3.53(2H，s)，3.70(3H，s)，5.49(1H，s)，6.96(1H，d)，7.07-7.10(1H，m)，7.26(1H，s).m/z(ES-)(M-H)-＝199
实施例2：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′，6′-二氟联苯-4- 基)乙酸
在50℃下，将氢氧化钾粉末(111mg，1.98mmol)一次性添加到在叔丁醇(10mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′，6′-二氟联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体2-1；295mg，0.66mmol)中。将所得溶液在50℃下搅拌45分钟，添加2M HCl(2mL)并蒸发混合物以移除有机溶剂。将悬浮液通过过滤收集，用水(50mL)洗涤并风干，得到呈膏状固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′，6′-二氟联苯-4-基)乙酸(220mg，77％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.68(3H，s)，2.78(3H，s)，3.71(2H，s)，7.39(1H，d)，7.48(1H，d)，7.58(1H，s)，7.64(1H，s)，7.71-7.76(2H，m)，8.16(1H，s)，12.50(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝432
中间体2-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′，6′-二氟联苯- 4-基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500352
将6-氯-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(中间体A)(228mg，1.23mmol)和2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体2-2；521mg，1.23mmol)和磷酸三钾(314mg，1.48mmol)在DME(15mL)、MeOH(3.75mL)和水(3.75mL)中的溶液充分脱气。将混合物用PdCl2(dppf)-DCM加合物(50.3mg，0.06mmol)处理，再次脱气，并将气氛替换为氮气，然后加热至80℃并保持17小时。将反应混合物冷却至室温，然后蒸发。将粗产物在EtOAc(75mL)和2M HCl(50mL)之间分配，将水相用另外80mL EtOAc萃取。将有机萃取物合并，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的10％至70％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′，6′-二氟联苯-4-基)乙酸甲酯(295mg，53.7％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.68(3H，s)，2.78(3H，s)，3.67(3H，s)，3.83(2H，s)，7.38-7.42(1H，m)，7.49(1H，d)，7.61(1H，s)，7.64(1H，s)，7.71-7.76(2H，m)，8.16(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝446
中间体2-2：2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基) 联苯-4-基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500361
将2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-(三氟甲磺酰基氧基)联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体2-3；675mg，1.52mmol)在二噁烷(13.8mL)中的溶液用氮脱气5分钟的时间。添加乙酸钾(447mg，4.55mmol)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂环戊硼烷)(424mg，1.67mmol)、(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(74.9mg，0.09mmol)和1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(51.0mg，0.09mmol)，并密封到微波管中。将反应物在微波反应器中加热至140℃并保持25分钟，冷却至室温。将反应混合物浓缩并用EtOAc(15mL)稀释，然后将混合物通过硅胶过滤。蒸发滤液，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色胶状物的2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)联苯-4-基)乙酸甲酯(521mg，81％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.36(12H，s)，3.65(2H，s)，3.73(3H，s)，7.26-7.34(2H，m)，7.37-7.42(2H，m)，7.46(1H，s)
中间体2-3：2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-(三氟甲磺酰基氧基)联苯-4-基)乙酸甲酯
将2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-羟基联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体2-4；964mg，3.08mmol)、1，1，1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲磺酰基)甲磺酰胺(1.101g，3.08mmol)和碳酸钾(1.278g，9.25mmol)悬浮在THF(15mL)中，并密封到微波管中。将反应物在微波反应器中加热至120℃并保持8分钟，冷却至室温。过滤悬浮液，用EtOAc(20mL)洗涤固体，蒸发滤液，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至10％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈浅黄色油状物的2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-(三氟甲磺酰基氧基)联苯-4-基)乙酸甲酯(675mg，49.2％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ3.67(2H，s)，3.74(3H，s)，6.97-7.03(2H，m)，7.28-7.30(1H，m)，7.37-7.40(1H，m)，7.48(1H，s).m/z(ES-)(M-H)-＝443
中间体2-4：2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-羟基联苯-4-基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500371
在环境温度和氮气下，将三溴化硼(1.494mL，15.80mmol)逐滴添加到在二氯甲烷(30mL)中的2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-甲氧基联苯-4-基)乙酸(中间体2-5；822mg，2.63mmol)中。将所得溶液在环境温度下搅拌90分钟。将反应混合物小心地添加到冰水冷却的甲醇(50mL)中，并将混合物搅拌另外20分钟。将反应混合物蒸发至干，并再溶于EtOAc(150mL)中，然后依次用2M HCl(50mL)和饱和盐水(50mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到呈黄色胶状物的2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-羟基联苯-4-基)乙酸甲酯(822mg，100％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ3.65(2H，s)，3.74(3H，s)，6.46-6.51(2H，m)，7.15-7.19(1H，m)，7.26-7.30(2H，m).m/z(ES-)(M-H)-＝311
中间体2-5：2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-甲氧基联苯-4-基)乙酸
将4-溴-3，5-二氟苯甲醚(645mg，2.89mmol)和2-氯-4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯基硼酸(中间体2-6；859mg，3.76mmol)和碳酸钠(2.89mL，5.78mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(207mg，0.18mmol)在DME(20mL)中的溶液脱气，然后在85℃下搅拌17小时。将反应混合物冷却，蒸发，并在EtOAc(75mL)、水(40mL)和饱和盐水(15mL)之间分配。将水相用2M HCl酸化，并萃取到EtOAc(2×125mL)中。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到呈白色固体的2-(2-氯-2′，6′-二氟-4′-甲氧基联苯-4-基)乙酸(654mg，72.4％)，其不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ3.67(2H，s)，3.83(3H，s)，6.52-6.56(2H，m)，7.15-7.20(1H，m)，7.28-7.30(1H，m)，7.46(1H，s).m/z GCMS(ES-)(M-H)-＝311
中间体2-6：2-氯-4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯基硼酸
Figure BPA00001513975500381
将高碘酸钠(1.967g，9.20mmol)和乙酸铵(0.709g，9.20mmol)添加到2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(中间体2-7；0.952g，3.07mmol)在丙酮(20mL)和水(10mL)中的搅拌溶液中。将所得悬浮液在环境温度下搅拌17小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，并用EtOAc(3×250mL)萃取。将有机萃取物合并，用饱和盐水(100mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到呈膏油状物的2-氯-4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯基硼酸(0.656g，94％)，其在静置时固化且不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ3.61(3H，s)，3.68(2H，s)，7.14-7.17(1H，m)，7.26(1H，s)，7.35(1H，d)，8.24(2H，s)
中间体2-7：2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸 甲酯
Figure BPA00001513975500382
向2-(3-氯-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(中间体1-2；6.56g，19.72mmol)在二噁烷(150mL)中的脱气溶液中添加乙酸钾(6.00g，61.13mmol)、联硼酸频那醇酯(7.51g，29.58mmol)、1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(0.663g，1.18mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.966g，1.18mmol)。将悬浮液脱气，然后在氮气下加热至100℃过夜。反应不完全，添加另外的PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.966g，1.18mmol)，并将混合物在100℃下搅拌另外4小时。将反应混合物冷却、浓缩，用EtOAc(300mL)稀释，并用饱和盐水(300mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物，将该粗产物通过硅胶垫(1″×3″)过滤，用EtOAc充分洗涤。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色油状物的2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(6.11g，100％)，其在静置时固化。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.36(12H，s)，3.59(2H，s)，3.68(3H，s)，7.14-7.16(1H，m)，7.28(1H，s)，7.65(1H，d).
中间体A：6-氯-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
Figure BPA00001513975500391
将中间体A-1(227g，1057.54mmol)在氨(MeOH中，7N)(1957mL，89633.59mmol)中在环境温度下搅拌过夜。将混合物蒸发至干，并将残留物用醚研磨，过滤悬浮液，在40℃下在真空中得到呈淡褐色固体的标题化合物(181g，92％)。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ2.59(3H，s)，2.67(3H，s)，7.70(1H，s)，7.99(1H，s)m/z 186(M+H)+.
中间体A-1：6-氯-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酸乙酯
Figure BPA00001513975500392
向中间体A-2(0.23g，1.17mmol)在丁腈(4mL)中的悬浮液中添加POCl3(0.27mL，2.93mmol)。将反应物在微波炉中加热至150℃并保持10分钟，然后冷却至室温。向反应混合物中添加水(2mL)并分离各相。将有机层在减压下浓缩。将粗产物通过快速色谱法(将在DCM中的0.5％HOAc用作洗脱液)纯化，得到标题化合物(0.18g，73％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.43(t，3H)，2.68(s，3H)，2.78(s，3H)，4.46(q，2H)；m/z215(M+H)+.
中间体A-2：3，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢吡嗪-2-甲酸乙酯
Figure BPA00001513975500401
向中间体A-3(800mg，2.53mmol)在无水DCE(40mL)中的溶液中添加TFA(1.95mL，25.3mmol)。将反应混合物加热回流4小时。蒸发溶剂，并将粗产物通过快速色谱法(将在庚烷中的EtOAc(20-80％)用作洗脱液)纯化。浓缩纯流分，得到呈黄白色粉末状的标题化合物(160mg，32％)。可任选地将得自此反应的粗产物不经纯化而直接用于下一步骤。
1H NMR(400Mhz，CDCl3)δ4.42(q，2H)，2.61(s，3H)，2.52(s，3H)，1.41(t，3H)；m/z197(M+H)+.
中间体A-3：2-{[N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酰]氨基}-3-氧代丁酸乙酯
Figure BPA00001513975500402
将中间体A-4(500mg，3.2mmol)和BOC-Ala-NH2(843.8mg，4.5mmol，CAS 85642-13-3)添加到圆底烧瓶，密封并用氩气回填。经由注射器添加无水甲苯(30mL)，并将所得不均匀混合物在90℃下搅拌10分钟，得到均匀溶液。同时，将辛酸铑(II)二聚体(62.3mg，0.080mmol，CAS 73482-96-9)溶于甲苯(5mL)中，并在超声波浴中放置5分钟，得到微细的Rh分散体。然后将此分散体在80℃下逐滴添加到反应混合物中(观察到剧烈的N2泡腾)。在高温下搅拌另外20分钟后，将反应混合物在减压下浓缩，得到黑色糊状固体。此时可将N-H插入反应产物纯化或直接用于下一步骤。将粗产物通过快速色谱法(使用在庚烷中的EtOAc(20-80％))纯化，得到呈黄色油状物的标题化合物(850mg，84％)(非对映体混合物)。m/z 317(M+H)+。
中间体A-4：2-重氮基-3-氧代丁酸乙酯
Figure BPA00001513975500411
将聚合物键合对甲苯磺酰叠氮(11g，15.4mmol)(典型负载：1,4mmol/g，根据Merz等人J.Org.Chem.2001，66，2509-2511制备)在无水DCM(40mL)中溶胀。将乙酰乙酸乙酯(1.0g，7.7mmol，CAS 141-97-9)和TEA(3.2mL，23.1mmol)溶于DCM(10mL)中，并添加到含聚合物的溶液中。然后将所得混合物在RT下在氮气中摇动，直到通过TLC判断反应结束为止，通常耗时6小时。滤出上清液，然后用DCM(3×30mL)洗涤所得树脂(resin)，以冲洗掉残余产物。然后将反应混合物蒸发至干，得到呈黄色油状物的标题化合物(1.1g，92％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.28(q，2H)，2.45(s，3H)，1.33(t，3H).
由于这些中间体具有高能性质，因此通常不对其进行表征(Clark等人，Thermochimica Acta，386，2002，73-79)，而继续以粗产物用于下一步骤。
替代制备方式
中间体A-1：6-氯-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酸乙酯
Figure BPA00001513975500412
将中间体A-2(268g，1365.93mmol)在磷酰氯(1273mL，13659.31mmol)中的悬浮液在90℃下在氮气中加热1小时，然后冷却至环境温度。将反应物在剧烈搅拌的情况下小心添加到水(6L)中，同时将温度保持在介于17℃和20℃之间。然后将混合物用DCM(5×2.5L)萃取，用水、饱和盐水洗涤，经MgSO4干燥并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至25％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈黄色油状物的标题化合物(227g，77％)，其在静置时固化。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.43(3H，t)，2.68(3H，s)，2.77(3H，s)，4.46(2H，q)；m/z215(M+H)+.
中间体A-2：6-羟基-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酸乙酯
Figure BPA00001513975500421
将2M盐酸在1，4-二氧杂环己烷(1177mL，4709.97mmol)中的溶液添加到中间体A-3(745g，2354.99mmol)中，并在室温下搅拌15分钟，然后温热至40℃并保持另外40分钟。然后缓慢添加吡啶(6500mL)，然后在存在空气的情况下将反应物加热至80℃并保持2小时。然后将反应物冷却至环境温度并蒸发至干，得到粘稠油状物。将其悬浮在DCM(2.5L)和洗涤的水(1.5L)中。然后将DCM经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到橙色半固体，将其用1∶1EtOAc/异己烷(250mL)研磨，得到呈膏状固体的6-羟基-3，5-二甲基-1，4-二氢吡嗪-2-甲酸乙酯(127g，27.1％)。然后将母液通过快速硅胶色谱法(梯度：20％乙酸乙酯/异己烷至80％乙酸乙酯/异己烷)纯化。浓缩含有所需产物的流分，将残留物用少量1∶1EtOAc/异己烷研磨，得到标题化合物(9.00g，1.948％)。
在环境温度下，将二氧化锰(150g)添加到6-羟基-3，5-二甲基-4，5-二氢吡嗪-2-甲酸乙酯(121g，610.44mmol)在DCM(1.8L)中的悬浮液中，以产生2℃温升。将反应物搅拌10分钟，然后温热至35℃并保持1小时。反应不完全，因此添加额外的115g二氧化锰，并将反应物在35℃下搅拌1小时，然后搅拌冷却至环境温度。将反应物通过短硅胶床过滤，并用2L 1∶1EtOAc/异己烷且最终用2×2L EtOAc充分洗涤。然后合并流分并真空浓缩，得到橙色固体，将其在300mL 1∶1EtOAc/异己烷中浆化，过滤并用异己烷洗涤，得到呈橙色固体的标题化合物(87g，72.6％)。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ1.31(3H，t)，2.35(3H，s)，2.50(3H，s)，4.31(2H，q)，11.93(1H，s)；m/z 197(M+H)+
中间体A-3还可通过以下程序制备：
中间体A-3：2-(2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰胺基)-3-氧代丁酸乙酯
Figure BPA00001513975500431
将4-甲基吗啉(900g)在THF(15L)中的溶液添加到2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(1690g，8933.17mmol)中。将混合物冷却至-25℃并添加氯甲酸异丁酯(1.164L，8933.17mmol)。20分钟后，添加第二等量的4-甲基吗啉(900g)，然后添加悬浮于THF(2.5L)中的2-氨基-3-氧代丁酸乙酯甲苯磺酸盐(参见J-P.Genet等人，Eur.J.Org.Chem.，2004，3017-3026)(2700g，8507.78mmol)。将混合物在-25℃下搅拌30分钟，然后温热至环境温度过夜。将反应物用水(15L)淬灭，用EtOAc(3×5L)萃取，并将合并的萃取物用50％饱和盐水(5L)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的50％至80％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到2-(2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酰胺基)-3-氧代丁酸乙酯(1850g，68.7％)。
实施例3：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-5-甲基联苯-4-基) 乙酸
Figure BPA00001513975500432
在55℃下，将氢氧化钾粉末(88mg，1.56mmol)一次性添加到在叔丁醇(15mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-5-甲基联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体3-1；228mg，0.52mmol)中。将所得混合物在55℃下搅拌45分钟，添加2M HCl(～1mL)并蒸发混合物以移除有机溶剂。将悬浮液通过过滤收集，用水(20mL)洗涤并风干，得到呈浅黄色固体的粗产物，其含有微量杂质。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈膏状固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-5-甲基联苯-4-基)乙酸(193mg，90％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.27(3H，s)，2.64(3H，s)，2.76(3H，s)，3.67(2H，s)，7.30(1H，s)，7.43(1H，s)，7.57(2H，d)，7.61(1H，s)，7.84(2H，d)，8.04(1H，s)，12.46(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝410
中间体3-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-5-甲基联苯-4- 基)乙酸乙酯
Figure BPA00001513975500441
将4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯基硼酸(中间体5-1；284mg，1.05mmol)与2-(5-氯-2-甲基-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸乙酯(中间体3-2；336mg，0.93mmol)和2M碳酸钠(0.757mL，1.51mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(66.7mg，0.06mmol)和氯化锂(69.1mg，1.63mmol)在DME(20mL)和乙醇(5mL)中的溶液脱气，然后在85℃下搅拌。4小时后，添加另外的四(三苯基膦)钯(0)(100mg)和2M碳酸钠(0.5mL)，并持续加热另外17小时(过夜)。将反应混合物冷却，蒸发，并在EtOAc(100mL)、水(50mL)和2M HCl(10mL)之间分配。将水相用EtOAc(100mL)再萃取，将合并的有机萃取物经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至50％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈黄色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-5-甲基联苯-4-基)乙酸乙酯(288mg，70.6％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.21(3H，t)，2.26(3H，s)，2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，3.76(2H，s)，4.12(2H，q)，7.32(1H，s)，7.45(1H，s)，7.57(2H，d)，7.61(1H，s)，7.84(2H，d)，8.04(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝438
中间体3-2：2-(5-氯-2-甲基-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸乙酯
Figure BPA00001513975500451
将2-(5-氯-4-羟基-2-甲基苯基)乙酸乙酯(中间体3-3；310mg，1.36mmol)、1，1，1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲磺酰基)甲磺酰胺(484mg，1.36mmol)和碳酸钾(562mg，4.07mmol)悬浮在THF(10mL)中，并密封到微波管中。将反应物在微波反应器中加热至120℃并保持8分钟，冷却至室温。过滤悬浮液，用EtOAc(20mL)洗涤固体，蒸发滤液，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(5-氯-2-甲基-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸乙酯(336mg，68.7％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.27(3H，t)，2.32(3H，s)，3.60(2H，s)，4.17(2H，q)，7.16(1H，s)，7.36(1H，s).m/z(ES-)(M-H)-＝359
中间体3-3：2-(5-氯-4-羟基-2-甲基苯基)乙酸乙酯
Figure BPA00001513975500452
在环境温度和氮气下，将三溴化硼(1.068mL，11.30mmol)逐滴添加到在二氯甲烷(10mL)中的2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)乙酸乙酯(中间体3-4；456mg，1.88mmol)中。将所得橙红色溶液在0℃下搅拌45分钟。将反应混合物用水(25mL)小心淬灭，用EtOAc(2×100mL)萃取，将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到呈黄色胶状物的粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色油状物的2-(5-氯-4-羟基-2-甲基苯基)乙酸乙酯(310mg，72.2％)，其在静置时固化。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.25(3H，t)，2.24(3H，s)，3.51(2H，s)，4.15(2H，q)，5.40(1H，s)，6.84(1H，s)，7.15(1H，s).m/z(ES-)(M-H)-＝227
中间体3-4：2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)乙酸乙酯
Figure BPA00001513975500461
在氮气下，将铁粉(193mg，3.46mmol)添加到2-氯-2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)乙酸乙酯(中间体3-5；480mg，1.73mmol)在AcOH(2mL)中的搅拌溶液中，并将所得混合物在60℃下搅拌17小时。将反应混合物冷却至环境温度，用EtOAc(50mL)稀释，通过硅藻土过滤并用饱和盐水(3×25mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色胶状物的2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)乙酸乙酯(190mg，45.2％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.25(3H，t)，2.28(3H，s)，3.52(2H，s)，3.88(3H，s)，4.15(2H，q)，6.74(1H，s)，7.19(1H，s).m/z GCMS(EI+)M+＝242
中间体3-5：2-氯-2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)乙酸乙酯
Figure BPA00001513975500462
在氮气下，将2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)-2-羟基乙酸乙酯(中间体3-6；1.1g，4.25mmol)在亚硫酰氯(3.42mL，46.89mmol)中的溶液在80℃下搅拌30分钟。将反应混合物冷却，浓缩，用水(20mL)稀释，用EtOAc(2×20mL)萃取，将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到呈黄色胶状物的2-氯-2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)乙酸乙酯(1.170g，99％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.27(3H，t)，2.40(3H，s)，3.89(3H，s)，4.20-4.30(2H，m)，5.50(1H，s)，6.73(1H，s)，7.52(1H，s)
中间体3-6：2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)-2-羟基乙酸乙酯
Figure BPA00001513975500463
将2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)-2-氧代乙酸乙酯(中间体3-7；6.12g，23.84mmol)在温AcOH(60mL)中的溶液添加到锌粉(7.80g，119.21mmol)在AcOH(20mL)中的搅拌悬浮液中，并将所得悬浮液在环境温度下搅拌16小时。将反应混合物过滤，并将滤液用EtOAc(200mL)稀释，并用饱和盐水(3×125mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到呈浅黄色油状物的2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)-2-羟基乙酸乙酯(5.70g，92％)，其在静置时固化且不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.23(3H，t)，2.40(3H，s)，3.89(3H，s)，4.15-4.31(2H，m)，5.25(1H，s)，6.73(1H，s)，7.30(1H，s)；未观察到OH。
中间体3-7：2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)-2-氧代乙酸乙酯
Figure BPA00001513975500471
在0℃和氮气下，将2-氯-2-氧代乙酸乙酯(6.43mL，57.47mmol)经5分钟的时间逐滴添加到三氯化铝(7.66g，57.47mmol)在DCM(60mL)中的搅拌悬浮液中。将所得悬浮液在0℃下搅拌15分钟。经5分钟的时间逐滴添加1-氯-2-甲氧基-4-甲苯(5g，31.93mmol)在DCM(50mL)中的溶液，并将所得混合物在0℃下搅拌90分钟。在0℃下，将反应混合物用水(300mL)小心地淬灭，用EtOAc(2×200mL)萃取，将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到膏状固体。将粗固体用DCM研磨，得到固体，将该固体通过过滤收集并真空干燥，得到呈白色固体的2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)-2-氧代乙酸乙酯(4.27g)。将残留物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)-2-氧代乙酸乙酯(1.85g)。2-(5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯基)-2-氧代乙酸乙酯的总产率(6.12g，74.7％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.30(3H，t)，2.53(3H，s)，3.97(3H，s)，4.38(2H，q)，7.22(1H，s)，7.76(1H，s)
实施例4：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，5-二氯联苯-4-基)乙 酸
在55℃下，将氢氧化钾粉末(56.1mg，1.00mmol)一次性添加到在叔丁醇(10mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，5-二氯联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体4-1；148mg，0.33mmol)中。将所得溶液在55℃下搅拌45分钟，添加2M HCl(2mL)并蒸发混合物以移除有机溶剂。将悬浮液通过过滤收集，用水(50mL)洗涤并风干，得到呈浅黄色固体的粗产物，其含有微量杂质。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，5-二氯联苯-4-基)乙酸(79mg，55.2％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，3.80(2H，s)，7.57-7.62(4H，m)，7.70(1H，s)，7.87(2H，d)，8.04(1H，s)，12.62(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝430
中间体4-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，5-二氯联苯-4-基) 乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500482
将4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯基硼酸(中间体5-1；312mg，1.15mmol)与2-(2，5-二氯-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(中间体4-2；375mg，1.02mmol)和2M碳酸钠(0.830mL，1.66mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(73.2mg，0.06mmol)和氯化锂(76mg，1.79mmol)在DME(10mL)中的溶液脱气，然后在85℃下搅拌17小时。将反应混合物浓缩并用EtOAc(75mL)稀释，并依次用2M HCl(25mL)和饱和盐水(25mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至50％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈黄色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，5-二氯联苯-4-基)乙酸甲酯(148mg，32.6％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.64(3H，s)，2.76(3H，s)，3.67(3H，s)，3.91(2H，s)，7.59-7.63(4H，m)，7.73(1H，s)，7.87(2H，d)，8.03(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝444
中间体4-2：2-(2，5-二氯-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500491
将2-(2，5-二氯-4-羟苯基)乙酸甲酯(中间体4-3；258mg，1.10mmol)、1，1，1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲磺酰基)甲磺酰胺(392mg，1.10mmol)和碳酸钾(455mg，3.29mmol)悬浮在THF(10mL)中，并密封到微波管中。将反应物在微波反应器中加热至120℃并保持8分钟，冷却至室温。过滤悬浮液，用EtOAc(20mL)洗涤固体，蒸发滤液，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈浅黄色油状物的2-(2，5-二氯-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(375mg，93％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ3.75(3H，s)，3.77(2H，s)，7.42(1H，s)，7.50(1H，m/z(ES-)(M-H)-＝365
中间体4-3：2-(2，5-二氯-4-羟苯基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500492
在环境温度和氮气下，将三溴化硼(1.581mL，16.72mmol)逐滴添加到在二氯甲烷(20mL)中的2-(2，5-二氯-4-甲氧基苯基)乙酸(中间体4-4；655mg，2.79mmol)中。将所得溶液在环境温度下搅拌60分钟。将反应混合物小心地添加到甲醇(100mL)中(-注意：反应剧烈且放热-添加期间混合物适度变热)，并将混合物在环境温度下搅拌另外2小时。将反应混合物蒸发至干，并再溶于DCM(100mL)中，然后依次用2M HCl(50mL)和饱和盐水(50mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干燥，得到呈浅黄色固体的2-(2，5-二氯-4-羟苯基)乙酸甲酯(258mg，39.4％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ3.67(2H，s)，3.72(3H，s)，5.62(1H，s)，7.07(1H，s)，7.26(1H，s).m/z(ES-)(M-H)-＝233
中间体4-4：2-(2，5-二氯-4-甲氧基苯基)乙酸
Figure BPA00001513975500501
将2-(2，5-二氯-4-甲氧基苯基)丙二酸二乙酯(中间体4-5；1.88g，5.61mmol)在THF(55mL)和EtOH(5mL)中的溶液用2M氢氧化钠(11.22mL，22.44mmol)一次性处理，并将所得溶液在60℃下搅拌17小时。将反应混合物蒸发，并将水性残留物用2M HCl酸化。将沉淀物通过过滤收集，用水(25mL)洗涤并真空干燥，得到呈灰色固体的2-(2，5-二氯-4-甲氧基苯基)乙酸(0.800g，60.7％)，其不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ3.64(2H，s)，3.87(3H，s)，7.23(1H，s)，7.49(1H，s)，12.43(1H，s).m/z(ES-)(M-H)-＝233
中间体4-5：2-(2，5-二氯-4-甲氧基苯基)丙二酸二乙酯
Figure BPA00001513975500502
将1-溴-2，5-二氯-4-苯甲醚(中间体4-6；3.82g，14.93mmol)、碳酸铯(14.59g，44.78mmol)和二环己基(2′，4′，6′-三异丙基联苯-2-基)膦(0.427g，0.90mmol)在甲苯(220mL)中的溶液充分脱气。将混合物用二乙酰氧基钯(0.101g，0.45mmol)和丙二酸二乙酯(2.505mL，16.42mmol)处理，并将所得溶液在氮气氛中于100℃下搅拌18小时。将反应混合物冷却至环境温度，蒸发至干，并在EtOAc(150mL)和水(100mL)之间分配。过滤混合物并分离水层，用EtOAc(150mL)再萃取。将有机萃取物合并，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈黄色油状物的2-(2，5-二氯-4-甲氧基苯基)丙二酸二乙酯(1.880g，37.6％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.28(6H，t)，3.89(3H，s)，4.21(4H，q)，5.09(1H，s)，6.96(1H，s)，7.53(1H，s).m/z(ES-)(M-H)-＝335
中间体4-6：1-溴-2，5-二氯-4-苯甲醚
Figure BPA00001513975500511
在环境温度和空气下，将碘甲烷(1.861mL，29.76mmol)添加到4-溴-2，5-二氯苯酚(4.8g，19.84mmol)和碳酸钾(8.23g，59.53mmol)在DMF(20mL)中的搅拌悬浮液中。将所得悬浮液在50℃下搅拌90分钟。将反应混合物冷却，用EtOAc(200mL)稀释，并依次用饱和盐水(2×150mL)和水(100mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈褐色固体的1-溴-2，5-二氯-4-苯甲醚(3.82g，75％)。1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ3.89(3H，s)，7.02(1H，s)，7.59(1H，s)
实施例5：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-(三氟甲基)联苯-4-基) 乙酸
Figure BPA00001513975500512
将4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯基硼酸(中间体5-1；278mg，1.02mmol)与2-(3-(三氟甲基)-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(中间体5-2；300mg，0.82mmol)和碳酸钠(0.666mL，1.33mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(58.7mg，0.05mmol)和氯化锂(60.8mg，1.43mmol)在DME(20mL)中的溶液脱气，然后在85℃下搅拌17小时。将反应混合物用2M HCl酸化并蒸发。将沉淀物通过过滤收集，用水(20mL)洗涤并真空干燥，得到呈褐色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-(三氟甲基)联苯-4-基)乙酸(197mg，55.9％)，将其通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在DCM中的0至6％MeOH)。未纯化物料，因此通过制备型HPLC(WatersXBridge Prep C18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)进一步纯化，其中采用极性渐降的水(含1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-(三氟甲基)联苯-4-基)乙酸(197mg，55.9％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.64(3H，s)，2.75(3H，s)，3.79(2H，s)，7.41-7.46(3H，m)，7.62-7.64(2H，m)，7.77(1H，s)，7.83(2H，d)，8.04(1H，s)，12.51(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝430
中间体5-1：4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯基硼酸
Figure BPA00001513975500521
将高碘酸钠(19.64g，91.81mmol)一次性添加到在THF(320mL)和水(80mL)中的3，5-二甲基-6-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)吡嗪-2-甲酰胺(中间体7-6；10.81g，30.60mmol)中，并将所得浑浊悬浮液在环境温度下搅拌30分钟。添加1M盐酸(21.42mL，21.42mmol)，并将所得悬浮液在环境温度下搅拌17小时。将反应混合物蒸发并用水(100mL)稀释，将沉淀物通过过滤收集，用水(400mL)洗涤，并在65℃下经4小时真空干燥，得到呈白色固体的4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯基硼酸(7.13g，86％)，其不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.58(3H，s)，2.74(3H，s)，7.60(1H，s)，7.69(2H，d)，7.91(2H，d)，7.98(1H，s)，8.13(2H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝272
中间体5-2：2-(3-(三氟甲基)-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500522
在0℃和氮气下，将三乙胺(1.964mL，14.09mmol)经3分钟的时间逐滴添加到2-(4-羟基-3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(中间体5-3；1.10g，4.70mmol)和三氟甲磺酸酐(1.156mL，7.05mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中。将所得溶液在0℃下搅拌90分钟。将反应混合物用DCM(100mL)稀释，并依次用饱和NaHCO3(75mL)和饱和盐水(75mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈黄色油状物的2-(3-(三氟甲基)-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(1.410g，82％)，其在静置时固化。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ3.71(2H，s)，3.74(3H，s)，7.47(1H，d)，7.57-7.60(1H，m)，7.67(1H，s).m/z(ES-)(M-H)-＝365
中间体5-3：2-(4-羟基-3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500531
将三溴化硼(8.02mL，84.87mmol)逐滴添加到在二氯甲烷(250mL)中的2-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基)乙酸(3.31g，14.13mmol)中，同时使温度保持低于10℃。添加结束后，将反应混合物从冰浴中移除，并在环境温度下于氮气中搅拌90分钟。将反应混合物逐滴添加到冰冷的甲醇(150mL)中，并将混合物在环境温度下搅拌另外40分钟。将反应混合物蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈浅黄色油状物的2-(4-羟基-3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(1.100g，33.2％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ3.59(2H，s)，3.71(3H，s)，5.71(1H，s)，6.88(1H，d)，7.30-7.34(1H，m)，7.40-7.41(1H，m).m/z(ES-)(M-H)-＝233
实施例6：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，2′-二氟联苯-4-基)乙 酸
Figure BPA00001513975500541
在45℃下，将氢氧化钾粉末(96mg，1.71mmol)一次性添加到在叔丁醇(10mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，2′-二氟联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体6-1；234mg，0.57mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌30分钟，添加2M HCl(2mL)并蒸发混合物以移除有机溶剂。将悬浮液通过过滤收集，用水(5mL)洗涤并真空干燥，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，2′-二氟联苯-4-基)乙酸(132mg，58.5％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.66(3H，s)，2.77(3H，s)，3.69(2H，s)，7.23-7.29(2H，m)，7.46(1H，t)，7.58(1H，t)，7.62(1H，s)，7.71(1H，d)，7.80(1H，d)，8.10(1H，s)，12.49(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝398
中间体6-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，2′-二氟联苯-4-基) 乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500542
将三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯酯(中间体6-4；302mg，0.77mmol)和2-(3-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(中间体6-2；226mg，0.77mmol)和磷酸三钾(196mg，0.92mmol)在DME(10mL)、甲醇(5mL)和水(2.5mL)中的溶液充分脱气。将混合物用PdCl2(dppf)-DCM加合物(31.4mg，0.04mmol)处理，再次脱气，并将气氛替换为氮气，然后加热至90℃并保持4小时。将反应混合物冷却至室温，然后蒸发。将粗产物在EtOAc(75mL)和饱和盐水(75mL)之间分配。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至70％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈膏状固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，2′-二氟联苯-4-基)乙酸甲酯(240mg，76％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.66(3H，s)，2.77(3H，s)，3.66(3H，s)，3.81(2H，s)，7.24-7.31(2H，m)，7.48(1H，t)，7.58(1H，t)，7.62(1H，s)，7.71(1H，d)，7.80(1H，d)，8.10(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝412
中间体6-2：2-(3-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸 甲酯
Figure BPA00001513975500551
向2-(3-氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(中间体6-3；1.82g，5.76mmol)在二噁烷(35mL)中的脱气溶液中添加乙酸钾(1.751g，17.84mmol)、联硼酸频那醇酯(2.192g，8.63mmol)、1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(0.194g，0.35mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.282g，0.35mmol)。将悬浮液脱气，然后在氮气下加热至80℃过夜。将反应混合物冷却，蒸发，并将残留物悬浮在EtOAc中。使其通过硅胶垫(3″直径×1″深度)，用EtOAc洗涤。蒸发滤液，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色油状物的2-(3-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(1.340g，79％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.35(12H，s)，3.62(2H，s)，3.69(3H，s)，6.98(1H，d)，7.05(1H，d)，7.69(1H，t).m/z GCMS(EI+)M+＝294
中间体6-3：2-(3-氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500552
在氮气下，将三氟甲磺酸酐(2.67mL，16.29mmol)经5分钟的时间逐滴添加到冷却至0℃的2-(3-氟-4-羟苯基)乙酸甲酯(2g，10.86mmol)在DCM(47.1mL)中的搅拌溶液中。经5分钟逐滴添加三乙胺(4.54mL，32.58mmol)，并将所得溶液在环境温度和氮气下搅拌4小时。将反应混合物用DCM(100mL)稀释，并依次用水(100mL)、饱和NaHCO3(100mL)和水(100mL)洗涤。将有机层通过相分离柱干燥并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈草黄色油状物的2-(3-氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(2.250g，65.5％)。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ3.64(2H，s)，3.73(3H，s)，7.11-7.14(1H，m)，7.22-7.31(2H，m).m/z(ES-)(M-H)-＝315.19
中间体6-4：三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯酯
Figure BPA00001513975500561
将6-(3-氟-4-羟苯基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(中间体6-5；450mg，1.72mmol)，1，1，1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲磺酰基)甲磺酰胺(615mg，1.72mmol)和碳酸钾(714mg，5.17mmol)悬浮在THF(15mL)中，并密封到微波管中。将反应物在微波反应器中加热至120℃并保持8分钟，冷却至室温。过滤悬浮液，用EtOAc(20mL)洗涤固体，蒸发滤液，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的10％至60％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯酯(508mg，75.0％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.62(3H，s)，2.76(3H，s)，7.63(1H，s)，7.77-7.85(2H，m)，8.09(1H，d)，8.12(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝394
中间体6-5：6-(3-氟-4-羟苯基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
Figure BPA00001513975500562
将6-氯-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(中间体A)(492mg，2.65mmol)和2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚(中间体6-6；630mg，2.65mmol)以及磷酸三钾(674mg，3.18mmol)在DME(10mL)、乙醇(5mL)和水(2.5mL)中的溶液充分脱气。将混合物用PdCl2(dppf)-DCM加合物(108mg，0.13mmol)处理，再次脱气，并将气氛替换为氮气，然后加热至80℃并保持4小时。将反应混合物冷却至室温，然后蒸发。将粗产物在EtOAc(75mL)和1N柠檬酸(25mL)之间分配，并将沉淀物通过过滤收集，用水(10mL)洗涤并风干，得到呈米色固体的6-(3-氟-4-羟苯基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(481mg，69.6％)，其不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.66(3H，s)，2.78(3H，s)，7.11(1H，t)，7.47(1H，d)，7.65(1H，s)，7.70(1H，d)，8.09(1H，s)，10.24(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝262
中间体6-6：2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚
Figure BPA00001513975500571
将4-溴-2-氟苯酚(1.032mL，9.42mmol)在二噁烷(60.2mL)中的溶液用氮脱气10分钟的时间。添加乙酸钾(3.70g，37.70mmol)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂环戊硼烷)(3.59g，14.14mmol)、(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(0.465g，0.57mmol)和1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(0.317g，0.57mmol)。在85℃下，将所得混合物在氮气中搅拌17小时(过夜)。将反应混合物浓缩并用EtOAc(100mL)稀释，并将混合物用1N柠檬酸(75mL)酸化，并将混合物通过硅藻土过滤。将水相分离并用EtOAc(150mL)萃取，并将有机萃取物合并，用饱和盐水(150mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物，将该粗产物通过硅胶垫过滤，用EtOAc充分洗涤。蒸发滤液，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈浅褐色油状物的2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚(2.020g，90％)，其在静置时固化。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.33(12H，s)，5.38(1H，s)，6.98(1H，t)，7.47-7.51(2H，m).m/z(ES-)(M-H)-＝237
实施例7：1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)环丁烷 甲酸
在40℃和氮气下，将氢氧化钾粉末(56.9mg，1.01mmol)一次性添加到在叔丁醇(10mL)中的1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)环丁烷甲酸甲酯(中间体7-1；152mg，0.34mmol)中。将所得悬浮液在40℃下搅拌1小时。LCMS显示反应结束。将反应混合物用在乙醇(10mL)中的HCl(2.027mL，2.03mmol)淬灭，并将所得溶液搅拌另外20分钟，然后蒸发至干燥。将所得固体用水(50mL)洗涤，并在干燥器中干燥，得到呈膏状固体的1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)环丁烷甲酸(68.0mg，46.2％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)1.91-2.01(1H，m)，2.11-2.20(1H，m)，2.55-2.63(2H，m)，2.73(3H，s)，2.89-2.96(2H，m)，3.00(3H，s)，5.84(1H，s)，7.31-7.33(1H，m)，7.38(1Hd，J＝8.0Hz)，7.48(1H d，J＝1.8Hz)，7.57-7.59(2H，m)，7.65-7.67(2H，m)，7.84(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝436.16
中间体7-1：1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)环丁 烷甲酸甲酯
Figure BPA00001513975500582
将三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯酯(中间体7-4；289mg，0.77mmol)和1-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)环丁烷甲酸甲酯(中间体7-2；270mg，0.77mmol)以及磷酸三钾(196mg，0.92mmol)在DME(10mL)、MeOH(5mL)和水(2.5mL)中的溶液充分脱气。将混合物用PdCl2(dppf)-DCM加合物(31.4mg，0.04mmol)处理，再次脱气，并将气氛替换为氮气，然后加热至90℃并保持4小时。将反应混合物冷却、用EtOAc(40mL)和水(20mL)稀释。使其通过硅胶垫，用EtOAc洗涤。将滤液分离并用盐水(20mL)洗涤，然后蒸发得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至70％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色胶状物的1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)环丁烷甲酸甲酯(239mg，69.0％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.90-1.98(1H，m)，2.06-2.14(1H，m)，2.51-2.58(2H，m)，2.73(3H，s)，2.85-2.91(2H，m)，3.00(3H s)，3.71(3H，s)，5.45(1H，s)，7.27-7.29(1H，m)，7.36(1H d，J＝8.0Hz)，7.44(1H d，J＝1.8Hz)，7.57-7.59(2H，m)，7.65-7.67(2H，m)，7.81(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝450.14
中间体7-2：1-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)环丁 烷甲酸甲酯
Figure BPA00001513975500591
在氮气下，将双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(0.872mL，0.87mmol)逐滴添加到冷却至0℃的在THF(10mL)中的5-溴-2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)戊酸甲酯(中间体7-3；342mg，0.79mmol)中，并将反应物在0℃下搅拌12小时。将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，并用EtOAc(75mL)稀释。将有机层分离并用EtOAc(75mL)再萃取。将合并的有机物用饱和盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到粗产物。将该粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至30％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色胶状物的1-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)环丁烷甲酸甲酯(273mg，98％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.20(12H，s)，1.69-1.73(1H，m)，1.85-1.91(1H，m)，2.28-2.35(2H，m)，2.62-2.68(2H，m)，3.47(3H，s)，6.98-7.00(1H，m)，7.11(1H d，J＝11.9Hz)，7.49(1H d，J＝7.8Hz)
中间体7-3：5-溴-2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基) 戊酸甲酯
在氮气下，将氢化钠(0.153g，3.83mmol)一次性添加到冷却至0℃的在DMF(20mL)中的2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(中间体2-7；1.08g，3.48mmol)中。将所得溶液在0℃下搅拌10分钟。将1，3-二溴丙烷(0.392mL，3.83mmol)添加到反应物中，并在0℃下搅拌5分钟。将氢化钠(0.153g，3.83mmol)一次性添加到反应物中，并在0℃下搅拌1小时。将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭。将反应混合物用EtOAc(75mL)稀释，并依次用水(4×50mL)和饱和盐水(50mL)稀释，经MgSO4干燥。蒸发有机层得到粗产物。将该粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至30％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色胶状物的5-溴-2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)戊酸甲酯(0.362g，24.12％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)1.36(12H，s)，1.71-1.86(2H，m)，1.87-2.00(1H，m)，2.14-2.23(1H，m)，3.36(2H t，J＝6.7Hz)，3.52(1H t，J＝7.7Hz)，3.64(3H，s)，7.13-7.17(1H，m)，7.29(1H q，J＝1.7Hz)，7.65(1H d，J＝7.7Hz)
中间体7-4：三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯酯
Figure BPA00001513975500602
将6-(4-羟苯基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(中间体7-5；22g，90.44mmol)、1，1，1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲磺酰基)甲磺酰胺(32.3g，90.44mmol)和碳酸钾(37.5g，271.31mmol)悬浮在THF(611mL)中并搅拌16小时。过滤悬浮液，用EtOAc(250mL)洗涤固体，蒸发滤液，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至80％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈膏状固体的三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯酯(34.5g，102％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)2.59(3H，s)，2.75(3H，s)，7.62-7.64(3H，m)，7.93-7.97(2H，m)，8.05(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝376.03
中间体7-5：6-(4-羟苯基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
将6-氯-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(中间体A)(20.17g，108.67mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚(26.3g，119.53mmol)和磷酸三钾(34.6g，163.00mmol)在DME(500mL)、MeOH(250mL)和水(125mL)中的溶液脱气，然后添加(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(DCM加合物)(4.47g，5.43mmol)。将反应混合物在氮气下加热至80℃，并搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，然后蒸发。将残留物在水(1L)、2M HCl水溶液(1L)和EtOAc(1L)之间分配。将水溶液用EtOAc(2L)再萃取，并将合并的有机物用盐水(1L)洗涤，干燥(MgSO4)，并蒸发，得到粗产物。将水溶液过滤，并将固体用水(2L)洗涤，得到纯产物。将来自有机层的粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的20％至80％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈膏状固体的6-(4-羟苯基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(22.00g，83％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)2.58(3H，s)，2.71(3H，s)，6.85-6.89(2H，m)，7.56-7.60(3H，m)，7.95(1H，s)，9.72(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝244.19
中间体7-6：3，5-二甲基-6-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯 基)吡嗪-2-甲酰胺
Figure BPA00001513975500612
在室温和氮气下，将与二氯甲烷(1∶1)(2.59g，3.20mmol)复合的[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)经5分钟的时间添加到在二噁烷(239mL)中的三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯酯(中间体7-4；20g，53.29mmol)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂环戊硼烷)(14.88g，58.62mmol)、乙酸钾(15.69g，159.86mmol)以及1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(1.747g，3.20mmol)中。将所得悬浮液脱气并用氮气再填充，然后在80℃下搅拌17小时。将反应混合物冷却至RT，用EtOAc和水稀释。收集有机层，用盐水洗涤并蒸发，得到褐色油状物，其在静置时固化。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的20％至80％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈膏状固体的3，5-二甲基-6-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)吡嗪-2-甲酰胺(17.20g，91％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)1.38(12H，s)，2.65(3H，s)，2.99(3H，s)，5.45(1H，s)，7.56-7.59(2H，m)，7.78(1H，s)，7.93-7.95(2H，m).m/z(ES+)(M+H)+＝354.22
实施例8：(S)-2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)丙酸 和
实施例9：(R)-2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)丙 酸
Figure BPA00001513975500621
在45℃下，将氢氧化钾粉末(331mg，5.90mmol)一次性添加到在叔丁醇(20mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)丙酸甲酯(中间体8-1；834mg，1.97mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌30分钟。添加2M HCl(6mL)，并蒸发混合物以移除有机溶剂。将悬浮液通过过滤收集，用水洗涤并真空干燥，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在DCM中的0至10％MeOH)。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的外消旋2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)丙酸(603mg，74.8％)。将其在OJ柱上通过制备型手性HPLC纯化，用在异己烷中的30％EtOH(用AcOH酸化)作为洗脱液洗脱。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到：
呈白色固体的(R)-2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)丙酸(第一洗脱物：0.531g，40.8％)
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.59(3H，d，J＝7.2Hz)，2.73(3H，s)，3.00(3H，s)，3.81(1Hq，J＝7.2Hz)，5.84(1H，s)，7.32-7.39(2H，m)，7.50(1H，s)，7.57(2H d，J＝8.3Hz)，7.66(2H d，J＝8.3Hz)，7.84(1H，s).LCMS：m/z(ES+)(M+H)+＝410
和(S)-2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)丙酸(第二洗脱物：0.537g，41.3％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.60(3H，d，)，2.73(3H，s)，3.00(3H，s)，3.78-3.82(1H，m)，5.80(1H，s)，7.32-7.39(2H，m)，7.50(1H，s)，7.57(2H d，J＝8.3Hz)，7.66(2H d，J＝8.3Hz)，7.83(1H，s).LCMS：m/z(ES+)(M+H)+＝410
将R-对映体(150mg，0.37mmol)通过从EtOH中结晶而纯化，得到呈浅黄色结晶固体的(R)-2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)丙酸(56.0mg，37.3％)。
m/z(ES+)(M+H)+＝410。
根据有助于测量衍射强度的反常散射，由单晶X射线结晶学推断出R-对映体的绝对构型。
中间体8-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)丙酸 甲酯
Figure BPA00001513975500631
将三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯酯(中间体7-4；1.249g，3.33mmol)和2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸甲酯(中间体8-2；1.08g，3.33mmol)和磷酸三钾(0.847g，3.99mmol)在DME(16mL)、甲醇(8.00mL)和水(4.00mL)中的溶液充分脱气。将混合物用PdCl2(dppf)-DCM加合物(0.136g，0.17mmol)处理，再次脱气，并将气氛替换为氮气，然后在微波炉中加热至90℃并保持4小时。将反应混合物冷却至室温，然后蒸发。将粗产物在EtOAc(75mL)和饱和盐水(75mL)之间分配。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至70％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈米色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)丙酸甲酯(0.841g，59.6％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)1.56(3H d，J＝7.2Hz)，2.73(3H，s)，3.00(3H，s)，3.72(3H，s)，3.77(1H q，J＝7.2Hz)，5.47(1H，s)，7.28-7.31(1H，m)，7.46(1H d，J＝1.8Hz)，7.35-7.81(2H，m)，7.56-7.59(2H，m)，7.65-7.68(2H，m).m/z(ES+)(M+H)+＝424
中间体8-2：2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸 甲酯
Figure BPA00001513975500641
在氮气下，将双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(7.79mL，7.79mmol)添加到冷却至0℃的在THF(50mL)中的2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(中间体2-7；2.2g，7.08mmol)中。将所得溶液在0℃下搅拌30分钟。然后添加碘甲烷(0.530mL，8.50mmol)，并将反应物搅拌30分钟。在剧烈搅拌下添加氯化铵(饱和)(50mL)，添加乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，并将有机相分离，用水(50mL)和饱和盐水(50mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至40％EtOAc)。将纯流分蒸发至干燥，得到呈无色油状物的2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸甲酯(1.290g，56.1％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)1.36(12H，s)，1.48(3H d，J＝7.2Hz)，3.65(3H，s)，3.65-3.69(1H，m)，7.15-7.17(1H，m)，7.29(1H d，J＝1.7Hz)，7.65(1H d，J＝7.7Hz)
实施例10：1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)环丙烷 甲酸
Figure BPA00001513975500651
在45℃下，将氢氧化钾粉末(52.1mg，0.93mmol)一次性添加到在叔丁醇(5mL)中的1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)环丙烷甲酸甲酯(中间体10-1；135mg，0.31mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌30分钟。添加2N HCl(1mL)，并蒸发混合物以移除有机溶剂。将悬浮液通过过滤收集，用水洗涤并真空干燥，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％TFA)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)环丙烷甲酸(30.0mg，22.96％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)1.23-1.25(2H，m)，1.48-1.51(2H，m)，2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，7.41(2H t，J＝7.6Hz)，7.53-7.58(3H，m)，7.61(1H，s)，7.84-7.86(2H，m)，8.04(1H，s)，12.47(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝422
中间体10-1：1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)环丙 烷甲酸甲酯
Figure BPA00001513975500652
将三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯酯(中间体7-4；245mg，0.65mmol)和1-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)环丙烷甲酸甲酯(中间体10-2；220mg，0.65mmol)以及磷酸三钾(166mg，0.78mmol)在DME(4mL)、甲醇(2mL)和水(1mL)中的溶液充分脱气。将混合物用PdCl2(dppf)-DCM加合物(26.7mg，0.03mmol)处理，再次脱气，并将气氛替换为氮气，然后在微波炉中加热至至90℃并保持4小时。将反应混合物冷却至室温，然后蒸发。将粗产物在EtOAc(75mL)和饱和盐水(75mL)之间分配。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至70％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色胶状物的1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)环丙烷甲酸甲酯(141mg，49.5％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)1.24-1.27(2H，m)，1.66-1.69(2H，m)，2.73(3H，s)，3.00(3H，s)，3.69(3H，s)，5.52(1H，s)，7.34-7.68(7H，m)，7.82(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝436
中间体10-2：1-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)环 丙烷甲酸甲酯
Figure BPA00001513975500661
在氮气下，将双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(7.08mL，7.08mmol)逐滴添加到冷却至0℃的在THF(20mL)中的2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(1g，3.22mmol)中。将所得溶液在0℃下搅拌30分钟，然后将1，2-二溴乙烷(0.305mL，3.54mmol)添加到反应物中，并在0℃下搅拌5分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，并用EtOAc(75mL)稀释。将有机层分离并用EtOAc(75mL)再萃取。将合并的有机物用饱和盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到粗产物。将该粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至30％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色胶状物的1-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)环丙烷甲酸甲酯(0.182g，16.79％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.15-1.18(2H，m)，1.36(12H，s)，1.58-1.61(2H，m)，3.61-3.61(3H，m)，7.19-7.22(1H，m)，7.33(1H d，J＝1.6Hz)，7.64(1H d，J＝7.7Hz)
实施例11：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)丁酸
Figure BPA00001513975500671
将三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯酯(中间体11-1；760mg，2.03mmol)和2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丁酸甲酯(686mg，2.03mmol)以及磷酸三钾(516mg，2.43mmol)在DME(10mL)、乙醇(5mL)和水(2.5mL)中的溶液充分脱气。将混合物用PdCl2(dppf)-DCM加合物(83mg，0.10mmol)处理，再次脱气，并将气氛替换为氮气，然后加热至90℃并保持4小时。将反应混合物冷却、用EtOAc(40mL)和水(20mL)稀释。使其通过硅胶垫，用EtOAc洗涤。将滤液分离并用盐水(20mL)洗涤，然后蒸发得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至70％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到无色胶状物，在45℃和氮气下，将氢氧化钾粉末(597mg，10.63mmol)一次性添加到该无色胶状物的叔丁醇(25mL)溶液中。将所得溶液在45℃下搅拌1小时。将混合物用在乙醇(20mL)中的乙酸(0.812mL，14.18mmol)处理，并在室温下搅拌10分钟。然后在真空下蒸发混合物，得到灰白色固体。将其用水(20mL)研磨，滤出，并用水(10mL)洗涤，然后真空干燥，得到粗固体。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在DCM中的0至10％MeOH)。将含有所需产物的流分蒸发至干燥，得到呈白色泡沫的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)丁酸(42.0mg，5.59％)。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ0.93(3H，t)，1.82(1H，dt)，2.12(1H，dt)，2.66(3H，s)，2.92(3H，s)，3.48(1H，t)，6.22(1H，d)，7.28(2H，dd)，7.44(1H，d)，7.51(2H，dt)，7.58(2H，dt)，7.79(1H，d).m/z(ES+)(M+H)+＝424.38
中间体11-1：2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丁 酸甲酯
Figure BPA00001513975500681
在氮气下，将双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(3.86mL，3.86mmol)添加到冷却至0℃的在THF(10mL)中的2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(中间体2-7；1g，3.22mmol)中。将所得溶液在0℃下搅拌30分钟。添加用银(0.258mL，3.22mmol)稳定的碘乙烷，并将反应物搅拌30分钟。在剧烈搅拌下添加氯化铵(饱和)(25mL)，添加乙酸乙酯(50mL)，并将有机相分离，用水(25mL)和饱和盐水(25mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至10％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色油状物的2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丁酸甲酯(0.686g，62.9％)。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ0.80(2H，t)，1.29(12H，s)，1.86-2.06(2H，m)，3.34(1H，t)，3.57(3H，s)，7.04(1H，d)，7.19(2H，d)，7.58(1H，d).
m/z(EI+)(M+H)+＝338
实施例12：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-甲基联苯-4-基)乙酸
Figure BPA00001513975500682
在45℃和氮气下，将氢氧化钾粉末(65.9mg，1.17mmol)一次性添加到在叔丁醇(2mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-甲基联苯-4-基)乙酸乙酯(中间体12-1；79mg，0.20mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌1小时。将混合物用在乙醇(1mL)中的乙酸(0.090mL，1.57mmol)处理，并在室温下搅拌10分钟。然后在真空下蒸发混合物，得到灰白色固体。将其用水(10mL)研磨，滤出，并用水(10mL)洗涤，然后真空干燥，得到所需产物。
1H NMR(400.13MHz，DMSO-d6)δ2.28(3H，s)，2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，3.58(2H，s)，7.19(3H，dd)，7.47(2H，dd)，7.61(1H，s)，7.82(2H，dt)，8.03(1H，s)，12.30(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝376.37
中间体12-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-甲基联苯-4-基)乙 酸乙酯
Figure BPA00001513975500691
将4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯基硼酸(138mg，0.51mmol)、2-(3-甲基-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(中间体12-2；159mg，0.51mmol)和磷酸三钾(162mg，0.76mmol)在DME(3mL)、乙醇(1.5mL)和水(0.5mL)中的溶液脱气，然后添加(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(DCM加合物)(33.5mg，0.04mmol)。将反应混合物在氮气下加热至80℃，并搅拌过夜16小时。将反应混合物冷却至室温，然后蒸发。将残留物在水(20mL)和EtOAc(50mL)之间分配。将水溶液用EtOAc(2×10mL)再萃取，并将合并的有机物用盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并蒸发，得到粗产物。将粗产物在12g silicycle柱上通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的10％至100％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色油状物的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-甲基联苯-4-基)乙酸乙酯(79mg，38.4％)，其在静置时结晶。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.17(3H，t)，2.28(3H，s)，2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，3.67(2H，s)，4.08-4.13(2H，m)，7.17-7.24(3H，m)，7.47(2H，d)，7.61(1H，s)，7.82(2H，d)，8.02(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝404
中间体12-2：2-(3-甲基-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500692
在0℃和氮气下，将三氟甲磺酸酐(0.217mL，1.32mmol)逐滴添加到在DCM(4mL)中的2-(4-羟基-3-甲基苯基)乙酸甲酯(159mg，0.88mmol)中。然后将所得溶液用三乙胺(0.369mL，2.65mmol)处理，温热并在18℃下搅拌16小时。将混合物用DCM(20mL)和水(20mL)稀释，并分离有机物。将有机物用饱和NaHCO3(水溶液，50mL)、盐水(10mL)洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到粗料。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至30％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色油状物的2-(3-甲基-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(169mg，61.3％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.30(3H，s)，3.62(3H，s)，3.72(2H，s)，7.26-7.29(1H，m)，7.33(1H，d)，7.35-7.36(1H，m).m/z(ES-)(M-H)-＝311
实施例13：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟联苯-4-基)-2-甲 基丙酸
在氮气下，将双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(9.66mL，9.66mmol)添加到冷却至0℃的在THF(25mL)中的2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(中间体2-7；2.5g，8.05mmol)中。将所得溶液在0℃下搅拌30分钟。添加碘甲烷(0.752mL，12.07mmol)，并将反应物搅拌30分钟。在剧烈搅拌下添加氯化铵(饱和)(25mL)，添加乙酸乙酯(50mL)，并将有机相分离，用水(25mL)和饱和盐水(25mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物(5.67g)。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至10％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到无色油状物。向该无色油状物中添加三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯酯(中间体7-4；809mg，2.16mmol)和磷酸三钾(549mg，2.59mmol)在DME(10mL)、甲醇(5.00mL)和水(2.500mL)中的溶液，并充分脱气。将混合物用PdCl2(dppf)-DCM加合物(88mg，0.11mmol)处理，再次脱气，并将气氛替换为氮气，然后加热至90℃并保持4小时。将反应混合物冷却、用EtOAc(40mL)和水(20mL)稀释。使其通过硅胶垫，用EtOAc洗涤。将滤液分离并用盐水(20mL)洗涤，然后蒸发得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至70％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到膏状固体，在45℃和氮气下，在叔丁醇(25mL)中，将氢氧化钾粉末(476mg，8.49mmol)一次性添加到该膏状固体中。将所得溶液在100℃下搅拌16小时。将混合物用在乙醇(20mL)中的乙酸(0.648mL，11.32mmol)处理，并在室温下搅拌10分钟。然后在真空下蒸发混合物，得到灰白色固体。将其用水(20mL)研磨，滤出，并用水(10mL)洗涤，然后真空干燥，得到粗固体。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge PrepC18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色泡沫体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)-2-甲基丙酸(53.0mg，8.83％)。
1H NMR(400.13MHz，DMSO-d6)δ1.53(6H，s)，2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，7.43(2H，dd)，7.50(1H，d)，7.58(2H，dt)，7.61(1H，s)，7.85(2H，dt)，8.04(1H，s)，12.57(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝424.37
实施例14：2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙 酰胺基)-2-甲基丙酸
Figure BPA00001513975500711
在室温下，将氢氧化钾(109mg，1.94mmol)一次性添加到在叔丁醇(4164μl)中的2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)-2-甲基丙酸甲酯(中间体14-1；319.5mg，0.65mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌5小时，并形成沉淀物。将反应混合物用2M HCl(5mL)淬灭。将反应混合物蒸发至干，并再溶于水(10mL)中，并通过尼龙过滤，用水洗涤并真空干燥。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge PrepC18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)-2-甲基丙酸(18.20mg，5.86％)。
1H NMR(400.132MHz，MeOD)δ1.50(6H，s)，2.69(3H，s)，2.87(3H，s)，3.57(2H，s)，7.37(2H，d)，7.49(1H，s)，7.57(2H，d)，7.75(2H，d).m/z(ES+)，(M+H)+＝481
中间体14-1：2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙 酰胺基)-2-甲基丙酸甲酯
Figure BPA00001513975500721
在室温下，将2-氨基-2-甲基丙酸甲酯盐酸盐(88mg，0.57mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(342μl)中的混合物用2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸(实施例1；205mg，0.52mmol)、1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(124mg，0.65mmol)、1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-醇(70.0mg，0.52mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(2049μl)中的溶液处理。将所得溶液在室温下搅拌20小时。将反应混合物蒸发至干，并再溶于DCM(5mL)中，并用水(5mL)洗涤。蒸发有机层，得到2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)-2-甲基丙酸甲酯(320mg，125％)，其不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ1.25-1.27(3H，m)，1.51(4H，s)，2.59(1H，s)，2.66(3H，s)，2.81(14H，s)，2.89-2.93(16H，m)，2.92(1H，s)，3.50(1H，s)，3.69(2H，s)，5.23(21H，s)，7.19(4H，s)，7.30(1H，s)，7.51(2H，d)，7.59(2H，d)，7.95(5H，s)m/z(ES+)，(M+H)+＝495
实施例15：(S)-2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基) 乙酰胺基)-4-甲基戊酸
Figure BPA00001513975500722
在室温下，将氢氧化钾(70.3mg，1.25mmol)一次性添加到在叔丁醇(2696μl)中的(S)-2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)-4-甲基戊酸乙酯(中间体15-1；224.4mg，0.42mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌5小时，形成沉淀物。将反应混合物用2M HCl(5mL)淬灭。将反应混合物蒸发至干，并再溶于水(10mL)中，并通过尼龙过滤，用水洗涤并真空干燥。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge PrepC18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的(S)-2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)-4-甲基戊酸(20.40mg，9.59％)。
1H NMR(400.132MHz，MeOD)d0.92(3H，d)，0.97(3H，d)，1.44(1H，s)，1.60-1.77(3H，m)，2.69(3H，s)，2.87(3H，s)，3.63(2H，s)，4.43-4.50(1H，m)，7.33-7.40(2H，m)，7.52(2H，s)，7.56(1H，s)，7.57(2H，d)，7.76(2H，d).m/z(ES+)，(M+H)+＝509
中间体15-1：(S)-2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4- 基)乙酰胺基)-4-甲基戊酸乙酯
Figure BPA00001513975500731
在室温下，将(S)-2-氨基-4-甲基戊酸乙酯盐酸盐(111mg，0.57mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(342μl)中的混合物用2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸(实施例1；205mg，0.52mmol)、1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(124mg，0.65mmol)、1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-醇(70.0mg，0.52mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(2049μl)中的溶液处理。将所得溶液在室温下搅拌20小时。反应不完全，因此将温度升至50℃并将反应混合物搅拌另外3小时。将反应混合物用EtOAc(20mL)稀释，并依次用水(50mL)、饱和盐水(50mL)和水(100mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到(S)-2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)-4-甲基戊酸乙酯(224mg，81％)，其不经进一步纯化而使用。
m/z(ES+)，(M+H)+＝537
实施例16：3-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙 酰胺基)丙酸
Figure BPA00001513975500741
在室温下，将氢氧化钾(131mg，2.34mmol)一次性添加到在叔丁醇(5038μl)中的3-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)丙酸乙酯(中间体16-1；386.5mg，0.78mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌5小时，形成沉淀物。将反应混合物用2M HCl(5mL)淬灭。将反应混合物蒸发至干，并再溶于水(10mL)中，并通过尼龙过滤，用水洗涤并真空干燥。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的3-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)丙酸(56.4mg，15.47％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.47(2H，t)，2.71(3H，s)，2.83(3H，s)，3.35(2H，s)，3.55(2H，s)，7.38(1H，d)，7.48(1H，d)，7.54(1H，d)，7.63(2H，d)，7.68(1H，s)，7.91(2H，d)，8.11(1H，s)，8.26(1H，t)，12.27(1H，s).m/z(ES+)，(M+H)+＝467
中间体16-1：3-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙 酰胺基)丙酸乙酯
Figure BPA00001513975500742
在室温下，将3-氨基丙酸乙酯盐酸盐(88mg，0.57mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(342μl)中的混合物用2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸(实施例1；205mg，0.52mmol)、1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(124mg，0.65mmol)，1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-醇(70.0mg，0.52mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(2049μl)中的溶液处理。将所得溶液在室温下搅拌20小时。将反应混合物蒸发至干，并再溶于DCM(5mL)中，并用水(5mL)洗涤。蒸发有机层，得到3-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)丙酸乙酯(387mg，151％)，其不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ1.18(3H，t)，1.28(3H，d)，2.48(2H，t)，2.66(3H，s)，2.81(7H，s)，2.89-2.93(10H，m)，3.48(3H，t)，4.07(2H，t)，5.23(5H，s)，7.19(4H，s)，7.20(1H，s)，7.29-7.31(1H，m)，7.35(1H，d)，7.49-7.51(2H，m)，7.58-7.61(2H，m)，7.95(2H，s).m/z(ES+)，(M+H)+＝495
实施例17：(S)-2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基) 乙酰胺基)-3-甲基丁酸
Figure BPA00001513975500751
在室温下，将氢氧化钾(108mg，1.93mmol)一次性添加到在叔丁醇(4150μl)中的(S)-2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)-3-甲基丁酸甲酯(中间体17-1；327.4mg，0.64mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌5小时，形成沉淀物。将反应混合物用2M HCl(5mL)淬灭。将反应混合物蒸发至干，并再溶于水(10mL)中，并通过尼龙过滤，用水洗涤并真空干燥。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge PrepC18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的(S)-2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)-3-甲基丁酸(93mg，29.1％)。
1H NMR(400.132MHz，MeOD)δ0.98(3H，d)，0.99(3H，d)，2.15-2.26(1H，m)，2.69(3H，s)，2.88(3H，s)，3.67(2H，s)，4.33-4.39(1H，m)，7.52(1H，s)，7.57(2H，d)，7.63(1H，d)，7.76(2H，d)，7.80(1H，d).m/z(ES+)，(M+H)+＝495
中间体17-1：(S)-2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4- 基)乙酰胺基)-3-甲基丁酸甲酯
Figure BPA00001513975500761
在室温下，将(S)-2-氨基-3-甲基丁酸甲酯盐酸盐(95mg，0.57mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(342μl)中的混合物用2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸(实施例1；205mg，0.52mmol)、1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(124mg，0.65mmol)、1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-醇(70.0mg，0.52mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(2049μl)中的溶液处理。将所得溶液在室温下搅拌20小时。将反应混合物蒸发至干，并再溶于DCM(5mL)中，并用水(5mL)洗涤。蒸发有机层，得到(S)-2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)-3-甲基丁酸甲酯(327mg，124％)，其不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ-0.07(2H，s)，0.81(3H，d)，0.86-0.87(3H，m)，1.26(2H，d)，2.59(1H，s)，2.66(3H，s)，2.81(9H，s)，2.88-2.93(12H，m)，3.57(2H，s)，3.68(3H，s)，4.51-4.54(1H，m)，5.23(10H，s)，7.19-7.24(4H，m)，7.32(2H，d)，7.39(1H，d)，7.50-7.52(2H，m)，7.58-7.60(2H，m)，7.95(3H，s).
m/z(ES+)，(M+H)+＝509
实施例18：2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)-N- 甲基乙酰胺基)-2-甲基丙酸
Figure BPA00001513975500762
将2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-1；氯联苯-4-基)-N-甲基乙酰胺基)-2-甲基丙酸苄酯(中间体18-1：2.46g，0.78mmol)在EtOAc(13.3mL)和MeOH(2.2mL)中的溶液在使用55mM 10％碳载钯管状柱的H-Cube氢化室中，在室温和50巴下以1毫升/分钟的流速进行氢化。蒸发所得溶液，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge PrepC18OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和3∶1MeOH/MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)-N-甲基乙酰胺基)-2-甲基丙酸(21.60mg，5.61％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)d1.18(1H，s)，1.46(3H，s)，2.64(3H，s)，2.92(3H，s)，2.99(3H，s)，3.42(3H，s)，3.71(2H，s)，6.37(1H，s)，7.16(1H，d)，7.25(1H，d)，7.34(1H，s)，7.46(2H，d)，7.55(2H，d)，7.77(1H，s).m/z(ES+)，(M+H)+＝495
中间体18-1：2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)- N-甲基乙酰胺基)-2-甲基丙酸苄酯
Figure BPA00001513975500771
在室温下，将2-甲基-2-(甲氨基)丙酸苄酯(118mg，0.57mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(342μl)中的混合物用2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸(实施例1；205mg，0.52mmol)、1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(124mg，0.65mmol)、1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-醇(70.0mg，0.52mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(2049μl)中的溶液处理。将所得溶液在室温下搅拌20小时。将反应混合物蒸发至干，并再溶于DCM(5mL)中，并用水(5mL)洗涤。蒸发有机层，得到粗产物，其不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ1.41(6H，s)，2.59(1H，s)，2.66(3H，s)，2.81(11H，s)，2.88(11H，s)，2.93(3H，d)，2.94(3H，s)，3.67(2H，s)，4.63(3H，s)，5.08(2H，s)，7.20(5H，d)，7.23(1H，s)，7.24(1H，s)，7.25-7.26(2H，m)，7.29(1H，s)，7.28-7.30(8H，m)，7.49(2H，d)，7.59(2H，d)，7.94(4H，s).m/z(ES+)，(M+H)+＝585
实施例19：1-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙 酰基)哌啶-4-甲酸
Figure BPA00001513975500781
在室温下，将氢氧化钾(91mg，1.63mmol)一次性添加到在叔丁醇(3505μl)中的1-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰基)哌啶-4-甲酸乙酯(中间体19-1；290.7mg，0.54mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌5小时，形成沉淀物。将反应混合物用2M HCl(5mL)淬灭。将反应混合物蒸发至干，并再溶于水(10mL)中，并通过尼龙过滤，用水洗涤并真空干燥。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的1-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰基)哌啶-4-甲酸(59.8mg，21.71％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)d1.55-1.68(1H，m)，1.82-1.98(2H，m)，2.50-2.59(1H，m)，2.66(3H，s)，2.89(1H，s)，2.92(3H，s)，3.14(1H，t)，3.42(2H，s)，3.70(2H，s)，3.82(1H，d)，4.38(1H，d)，5.90(1H，s)，7.17(1H，s)，7.29(1H，d)，7.34(1H，s)，7.51(2H，d)，7.59(2H，d)，7.78(1H，s).m/z(ES+)，M+＝507
中间体19-1：1-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙 酰基)哌啶-4-甲酸乙酯
Figure BPA00001513975500782
在室温下，将哌啶-4-甲酸乙酯(90mg，0.57mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(342μl)中的混合物用2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸(实施例1；205mg，0.52mmol)、1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(124mg，0.65mmol)、1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-醇(70.0mg，0.52mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(99μl，0.57mmol)在DMF(2049μl)中的溶液处理。将所得溶液在室温下搅拌20小时。将反应混合物蒸发至干，并再溶于DCM(5mL)中，并用水(5mL)洗涤。蒸发有机层，得到1-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰基)哌啶-4-甲酸乙酯(291mg，105％)，其不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ1.19(3H，t)，2.59(1H，s)，2.66(3H，s)，2.81-2.81(5H，m)，2.88-2.93(8H，m)，3.68(2H，s)，4.08(2H，t)，5.23(4H，s)，7.18(1H，s)，7.19(3H，s)，7.28(1H，s)，7.33(1H，d)，7.50-7.52(2H，m)，7.58-7.60(2H，m)，7.95(2H，s).m/z(ES+)，(M+H)+＝535
实施例20：2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙 酰胺基)乙酸
Figure BPA00001513975500791
在45℃下，将氢氧化钾粉末(106mg，1.89mmol)一次性添加到在叔丁醇(4062μl)中的2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)乙酸甲酯(中间体20-1；294mg，0.63mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌150分钟，白色浓稠悬浮液缓慢形成沉淀物。添加2M HCl(5mL)，并蒸发混合物以移除有机溶剂。将反应混合物用EtOAc和水稀释。将有机层收集，经MgSO4干燥并蒸发，得到粗产物。将其通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)乙酸(56.8mg，19.92％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.72(3H，s)，2.83(3H，s)，3.64(2H，s)，3.85(2H，d)，7.13(1H，s)，7.41(1H，d)，7.49(1H，d)，7.63(2H，d)，7.68(1H，s)，7.91(2H，d)，8.10(1H，s)，8.52(1H，t).m/z(ES-)，M-＝451
中间体20-1：2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙 酰胺基)乙酸甲酯
在23℃下，将2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸(实施例1；250mg，0.63mmol)、1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(151mg，0.79mmol)、1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-醇(85mg，0.63mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(242μl，1.39mmol)在DMF(2499μl)中的溶液用2-氨基乙酸甲酯盐酸盐(87mg，0.69mmol)在DMF(417μl)中的溶液处理。将所得溶液在室温下搅拌4小时。将反应混合物蒸发至干，并再溶于EtOAc(25mL)中，然后依次用饱和盐水(50mL)和水(50mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到2-(2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酰胺基)乙酸甲酯(266mg，90％)，其不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.13MHz，DMSO-d6)δ1.18(2H，t)，2.00(2H，s)，2.60(1H，s)，2.67(4H，d)，2.67-2.67(1H，m)，2.76(5H，t)，3.59(2H，s)，3.65(3H，s)，3.89-3.90(2H，m)，4.04(1H，d)，7.36(1H，d)，7.43-7.45(1H，m)，7.53(1H，s)，7.57-7.59(2H，m)，7.72(1H，d)，7.85-7.87(2H，m)，7.99(1H，d).m/z(ES+)，(M+H)+＝467
实施例21：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)丙 酸
在室温下，将氢氧化钾(0.396g，7.05mmol)一次性添加到在叔丁醇(15.16mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)丙酸甲酯(中间体21-1；1g，2.35mmol)中。将所得溶液在45℃下搅拌5小时，形成沉淀物。将反应混合物用2M HCl(5mL)淬灭，蒸发至干，并再溶于水(10mL)中，并通过尼龙过滤，用水洗涤并真空干燥，得到呈白色固体的产物。将产物通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeCN的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色粉末的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)丙酸(0.530g，54.8％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.50(3H，d)，2.71(3H，s)，2.83(3H，s)，3.86-3.94(1H，m)，7.27(2H，d)，7.66(2H，d)，7.68(1H，s)，7.95(2H，d)，8.12(1H，s)，12.65(1H，s).m/z(ES+)，(M+H)+＝412
中间体21-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基) 丙酸甲酯
Figure BPA00001513975500811
将4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯基硼酸(175mg，0.65mmol)和2-(3，5-二氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)丙酸甲酯(中间体21-2；200mg，0.57mmol)以及碳酸钠(0.467mL，0.93mmol)，四(三苯基膦)钯(0)(41.1mg，0.04mmol)和氯化锂(42.6mg，1.01mmol)在DME(14.300mL)中的溶液脱气，然后在85℃下搅拌17小时。将反应混合物在EtOAc(10mL)和饱和盐水(15mL)之间分配。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至50％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)丙酸甲酯(164mg，67.1％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)d1.53-1.57(3H，m)，2.72(3H，s)，3.00(3H，s)，3.73(3H，s)，3.76(1H，q)，5.46(1H，s)，7.00(2H，d)，7.59(2H，d)，7.68(2H，d)，7.80(1H，s).m/z(ES+)，(M+H)+＝426
中间体21-2：2-(3，5-二氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)丙酸甲酯
Figure BPA00001513975500821
在0℃和氮气下，将三乙胺(4.82mL，34.55mmol)逐滴添加到在DCM(49.9mL)中的2-(3，5-二氟-4-羟苯基)丙酸甲酯(中间体21-3；2.49g，11.52mmol)和三氟甲磺酸酐(2.91mL，17.28mmol)中。将所得溶液在0℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，并依次用饱和NaHCO3(100mL)和饱和盐水(100mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至60％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈橙色油状物的2-(3，5-二氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)丙酸甲酯(3.13g，78％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)d1.44(3H，d)，3.64(3H，s)，3.64(1H，q)，6.98(2H，d)
中间体21-3：2-(3，5-二氟-4-羟苯基)丙酸甲酯
Figure BPA00001513975500822
在0℃和氮气下，将三溴硼烷(7.37mL，77.99mmol)逐滴添加到在二氯甲烷(96mL)中的2-(3，5-二氟-4-甲氧基苯基)丙酸(中间体21-4；2.81g，13.00mmol)中。将所得溶液在0℃下搅拌1小时。将反应混合物逐滴添加到甲醇(26.3mL，649.92mmol)中(-注意：反应剧烈且放热-将MeOH保持在冰浴中)，并将混合物搅拌另外20分钟。将反应混合物蒸发至干，并再溶于DCM(50mL)中，然后依次用饱和NaHCO3(50mL)和水(50mL)洗涤。将有机层用MgSO4干燥并蒸发，得到所需产物2-(3，5-二氟-4-羟苯基)丙酸甲酯(2.490g，89％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.46(3H，d)，3.62(1H，q)，3.68(3H，s)，5.10(1H，s)，6.87(2H，d).m/z(ES-)，(M-H)-＝215
中间体21-4：2-(3，5-二氟-4-甲氧基苯基)丙酸
在氮气下，将双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(25.4mL，25.35mmol)添加到冷却至0℃的在THF(60.8mL)中的2-(3，5-二氟-4-甲氧基苯基)乙酸(2.5g，12.37mmol)中。将所得溶液在0℃下搅拌30分钟。然后添加碘甲烷(0.925mL，14.84mmol)，并将反应物搅拌30分钟。在剧烈搅拌下添加氯化铵(饱和)(50mL)，添加乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)，并将有机相分离，用水(50mL)和饱和盐水(50mL)洗涤。水层用2M HCl(50mL)酸化并用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，并经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到2-(3，5-二氟-4-甲氧基苯基)丙酸(2.81g，105％)，其不经进一步纯化而使用。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)d1.33(3H，d)，3.49(1H，q)，3.82(3H，s)，6.72(2H，d).m/z(ES-)，(M-H)-＝215
实施例22：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，2′-二氯联苯-4-基) 乙酸
Figure BPA00001513975500832
在40℃和氮气下，将氢氧化钾粉末(0.045g，0.81mmol)一次性添加到在叔丁醇(2.00mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，2′-二氯联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体22-1；0.12g，0.27mmol)中。将所得悬浮液在40℃下搅拌20分钟。形成浓稠沉淀物，因此将反应物用在乙醇(20.0mL)中的HCl(1.620mL，1.62mmol)淬灭，并将所得溶液搅拌另外20分钟，然后蒸发至干。将所得固体在水(5mL)和EtOAc(15mL)之间分配。水层显示pH＝4-5。将有机层分离并将水溶液用EtOAc(2×5mL)再萃取。将合并的有机物用盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，并真空蒸发，得到产物。将其用醚(5mL)洗涤，并在室温下真空干燥，得到灰白色固体。将粗产物通过制备型HPLC(Waters-Xbridge Prep C18 5μM)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％氨)和{MeOH(3)∶MeCN(1)}的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈无色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，2′-二氯联苯-4-基)乙酸(0.063g，51.7％)。
1H NMR(400.13MHz，DMSO-d6)δ0.88-2.53(1H，m)，2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，3.55(2H，s)假定为此-被宽峰遮蔽，所述宽峰被认为是由水等所致，7.29-7.34(2H，m)，7.45-7.49(2H，m)，7.62-7.67(1H，m)，7.78-7.81(1H，m)，7.99(1H，d)，8.12(1H，s)。m/z(ES+)(M+H)+＝430.07
中间体22-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，2′-二氯联苯-4-基) 乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500841
将4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯苯基硼酸(中间体5-1；450mg，1.47mmol)、2-(3-氯-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(中间体1-2；490mg1.47mmol)和磷酸三钾(469mg，2.21mmol)在DME(6mL)、乙醇(3mL)和水(1.5mL)中的溶液置于真空中，并用氮气再填充，然后添加(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(DCM加合物)(97mg，0.12mmol)。将反应混合物加热，并搅拌过夜16小时。将反应混合物冷却至室温，然后蒸发。将残留物在水(20mL)和EtOAc(50mL)之间分配。将水溶液用EtOAc(2×10mL)再萃取，并将合并的有机物用盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并蒸发，得到粗产物。将粗产物在40g silicycle柱上通过快速硅胶色谱法纯化，洗脱梯度：在异己烷中的0％至50％EtOAc(在50％洗脱)。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，2′-二氯联苯-4-基)乙酸乙酯(130mg，19.26％)。反应期间发生酯交换作用，获得为乙酯而非甲酯的产物。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ1.30(3H，t)，2.73(3H，s)，3.01(3H，s)，3.67(2H，m)，4.21(2H，q)，5.58(1H，s)，7.29(2H，s)，7.40(1H，d)，7.46(1H，t)，7.53-7.56(1H，m)，7.72(1H，d)，7.78(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝458
实施例23：6-(2′-氯-4′-((5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-噁二唑-3-基)甲基)联苯-4-基)- 3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
Figure BPA00001513975500851
向4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯基硼酸(中间体5-1；562mg，2.07mmol)在DME(60mL)、甲醇(15mL)和水(15mL)的脱气溶液中添加磷酸三钾(660mg，3.11mmol)、3-(4-溴-3-氯苄基)-1，2，4-噁二唑-5(4H)-酮(中间体23-1；600mg，2.07mmol)，然后添加(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(DCM加合物)(341mg，0.41mmol)。在80℃下，将所得混合物在氮气中搅拌90分钟。将反应混合物冷却至环境温度，蒸发，并在DCM(100mL)和0.5M HCl(100mL)之间分配，过滤悬浮液(困难，因大部份物质为黏性胶状物)，并保留所得到的物质。分离出有机相，通过使其通过相分离柱干燥。减压移除溶剂，得到粗产物，将其与先前过滤的物质合并以供层析。将粗产物通过制备型HPLC(Waters-Xbridge Prep C18 5μM)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和{MeOH(3)∶MeCN(1)}的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈无色固体的6-(2′-氯-4′-((5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-噁二唑-3-基)甲基)联苯-4-基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(269mg，29.8％)。
1H NMR(400.13MHz，DMSO-d6)δ2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，3.99(2H，s)，7.38-7.40(1H，m)，7.48(1H，d)，7.56-7.62(5H，m)，7.84-7.87(2H，m)，8.04(1H，s)m/z(ES-)(M-H)-＝434.57
中间体23-1：3-(4-溴-3-氯苄基)-1，2，4-噁二唑-5(4H)-酮
Figure BPA00001513975500852
将(Z)-2-(4-溴-3-氯苯基)-1-(肟基)乙基氨基甲酸苯酯(中间体23-2；2g，5.21mmol)溶于无水甲苯(65.2mL)中。将所得溶液在回流下搅拌16小时。将冷却的反应混合物蒸发至干，再溶于DCM(50mL)中并用饱和NaHCO3(50mL)萃取。将水层用2M HCl酸化并用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机层合并，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化{CombiFlash Companion-Presearch Ltd}，柱大小＝120g，流速＝85毫升/分钟，洗脱梯度：在DCM中的0至10％MeOH}。将纯流分蒸发至干燥，得到呈无色固体的3-(4-溴-3-氯苄基)-1，2，4-噁二唑-5(4H)-酮(1.240g，82％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ3.91(2H，s)，7.20-7.24(1H，m)，7.61(1H，d)，7.74(1H，d)，12.00-12.50(1H，宽单峰).m/z(ES-)(M-H)-＝287.36
中间体23-2：(Z)-2-(4-溴-3-氯苯基)-1-(肟基)乙基氨基甲酸苯酯
Figure BPA00001513975500861
在0℃下，将三乙胺(0.889mL，6.38mmol)添加到在无水二氯甲烷(131mL)中的(Z)-2-(4-溴-3-氯苯基)-N′-羟基乙脒(acetimidamide)(中间体23-3；1.4g，5.31mmol)中。将所得黄色溶液在0℃下搅拌1小时。添加氯甲酸苯酯(0.815mL，6.38mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌另外1小时。将溶液依次用饱和Na2CO3(50mL)和水(50mL×2)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物～(Z)-2-(4-溴-3-氯苯基)-1-(肟基)乙基氨基甲酸苯酯(2.70g，132％)。不经进一步纯化而使用。
中间体23-3：(Z)-2-(4-溴-3-氯苯基)-N′-羟基乙脒
Figure BPA00001513975500862
在回流下，将在乙醇(15mL)中的2-(4-溴-3-氯苯基)乙腈(中间体23-4；2.4g，10.41mmol)经5分钟的时间逐滴添加到在乙醇(15mL)中的碳酸钾(8.92g，64.56mmol)和羟胺盐酸盐(0.724g，10.41mmol)中。将所得悬浮液在回流下搅拌8小时。将反应混合物冷却过夜，将盐过滤并用DCM(2×50mL)洗涤。蒸发滤液，得到粗产物。粗产物通过快速硅胶色谱法纯化{CombiFlash Companion-Presearch Ltd}，柱大小＝120g，流速＝85毫升/分钟，洗脱梯度：在DCM中的0至10％MeOH}。将纯流分蒸发至干，得到呈浅褐色油状物的(Z)-2-(4-溴-3-氯苯基)-N′-羟基乙脒(1.4g，51.0％)，其缓慢结晶。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ3.39(2H，s)，4.48(2H，s)，5.30(0.5H，s)，7.03-7.06(1H，m)，7.39(1H，d)，7.55-7.61(1H，m)
中间体23-4：2-(4-溴-3-氯苯基)乙腈
将在水(10mL)中的氰化钠(10.91g，222.52mmol)添加到氯化N-苄基-N，N-二乙基乙铵(25.3g，111.26mmol)的氯仿(20mL)溶液中。在室温下逐滴添加在氯仿(5mL)中的1-溴-4-(溴甲基)-2-氯苯(31.64g，111.26mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，然后加热至45℃并保持另外2小时。使反应混合物冷却，分离成两层，并将有机层先后用0.5N NaOH和盐水洗涤。将氯仿层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化{CombiFlashCompanion-Presearch Ltd}，柱大小＝330g，流速＝100毫升/分钟，洗脱梯度：在异己烷中的0至100％EtOAc，历经40分钟。将纯流分蒸发至干，得到呈橙色/黄色油状物的2-(4-溴-3-氯苯基)乙腈(2.430g，9.48％)，其在静置时固化。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ3.70(2H，s)，7.09-7.12(1H，m)，7.45(1H，d)，7.62-7.64(1H，m).m/z(ES-)(M-H)-＝228.31；230.35&232.34
中间体23-5：1-溴-4-(溴甲基)-2-氯苯
Figure BPA00001513975500872
在室温和氮气下，将过氧化苯甲酸酐(3.73g，15.41mmol)添加到1-溴-2-氯-4-甲苯(24.35g，118.50mmol)和1-溴吡咯烷-2，5-二酮(23.20g，130.35mmol)在CCl4(100mL)中的脱气混合物中。将所得混合物在回流下搅拌18小时。将反应物冷却，并用水(等体积)；饱和硫代亚硫酸钠(等体积)及水(等体积)洗涤。通过使混合物通过相分离柱而将其干燥。移除溶剂，得到呈浅褐色油状物的粗1-溴-4-(溴甲基)-2-氯苯(31.7g，94％)，其不经进一步纯化而继续使用。
实施例24：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)乙 酸
Figure BPA00001513975500881
在40℃和氮气下，将氢氧化钾粉末(0.039g，0.70mmol)一次性添加到在叔丁醇(2.00mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体24-1；0.096g，0.23mmol)中。将所得悬浮液在40℃下搅拌20分钟。形成浓稠沉淀物，因此将反应物用1M HCl水溶液(1.4mL，1.40mmol)淬灭，并将所得溶液搅拌另外20分钟，然后蒸发至干。将所得固体在水(5mL)和EtOAc(15mL)之间分配。将有机层分离并将水溶液用EtOAc(2×5mL)再萃取。将合并的有机物用盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，并真空蒸发，得到产物。将粗产物通过制备型HPLC(Waters-Xbridge Prep C18 5μM)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和{MeOH(3)∶MeCN(1)}的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈无色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)乙酸(0.052g，56.0％)。
1H NMR(400.13MHz，DMSO-d6)δ2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，3.71(2H，s)，7.16-7.21(2H，m)，7.59(3H，d)，7.87-7.89(2H，m)，8.05(1H，s).
m/z(ES+)(M+H)+＝398.22
中间体24-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基) 乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500882
将4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯基硼酸(243mg，0.90mmol)、2-(3，5-二氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(中间体24-2；300mg，0.90mmol)和磷酸三钾(286mg，1.35mmol)在丁腈(2mL)中的溶液置于真空中，并用氮气再填充，然后添加(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(DCM加合物)(59.1mg，0.07mmol)。将反应混合物在微波炉中于150℃下加热6小时。将反应混合物浓缩，用DCM(25mL)稀释，并用水(2×25mL)洗涤。通过使有机层通过相分离柱将其干燥并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化{CombiFlash Companion-Presearch Ltd}，柱大小＝12g，流速＝30毫升/分钟，洗脱梯度：在异己烷中的0至50％EtOAc。将纯流分蒸发至干，得到呈稍带颜色的(淡紫色)固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)乙酸甲酯(96mg，26.0％)。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ2.72(3H，s)，3.00(3H，s)，3.67(2H，s)，3.76(3H，s)，5.47(1H，s)，6.96-7.01(2H，m)，7.59-7.61(2H，m)，7.67-7.70(2H，m)，7.81(1H，s).m/z(ES+)M+＝412.37
中间体24-2：2-(3，5-二氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500891
在氮气下，将三氟甲磺酸酐(0.854mL，5.21mmol)经5分钟的时间逐滴添加到冷却至0℃的2-(3，5-二氟-4-羟苯基)乙酸甲酯(中间体24-3；0.702g，3.47mmol)在DCM(15.06mL)中的搅拌溶液中。经5分钟逐滴添加三乙胺(1.452mL，10.42mmol)(保持内部温度在5-10℃之间)，并将所得溶液在室温下于氮气中搅拌4小时。将反应混合物用DCM(100mL)稀释，并依次用水(100mL)、饱和NaHCO3(100mL)和水(100mL)洗涤。通过使有机层通过相分离柱将其干燥并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈草黄色油状物的2-(3，5-二氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(0.930g，80％)。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ3.63(2H，s)，3.74(3H，s)，7.02-7.06(2H，m)
中间体24-3：2-(3，5-二氟-4-羟苯基)乙酸甲酯
在环境温度和氮气下，将三溴硼烷(2.357mL，24.93mmol)逐滴添加到在二氯甲烷(5mL)中的2-(3，5-二氟-4-甲氧基苯基)乙酸(0.84g，4.16mmol)中。将所得溶液在环境温度下搅拌16小时。逐滴添加甲醇(8.41mL，207.76mmol)(-注意：反应剧烈并放热-混合物在添加期间保持回流)，并将混合物搅拌另外20分钟。将反应混合物蒸发至干，并再溶于DCM(50mL)中，并依次用饱和NaHCO3(50mL)和水(50mL)洗涤。通过使有机层通过相分离柱将其干燥，蒸发，得到所需产物2-(3，5-二氟-4-羟苯基)乙酸甲酯(0.660g，79％)。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ3.52(2H，s)，3.71(3H，s)，5.32(1H，s)，6.81-6.86(2H，m).m/z(ES-)(M-H)-＝201.27；HPLC tR＝1.78min.
实施例25：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟联苯-4-基)乙酸
Figure BPA00001513975500902
在40℃和氮气下，将氢氧化钾粉末(72.7mg，1.30mmol)一次性添加到在叔丁醇(2.0mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体25-1；170mg，0.43mmol)中。将所得悬浮液在40℃下搅拌20分钟。形成浓稠沉淀物，因此将反应物用在乙醇(20.0mL)中的乙酸(0.124mL，2.16mmol)淬灭，并将所得溶液搅拌另外20分钟，然后蒸发至干。将所得固体在水(5mL)和EtOAc(15mL)之间分配。水层显示pH＝4-5。将有机层分离并将水溶液用EtOAc(2×5mL)再萃取。将合并的有机物用盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，并真空蒸发，得到产物。将其用醚(5mL)洗涤，并在室温下真空干燥，得到灰白色固体。将粗产物通过制备型HPLC(Waters-Xbridge Prep C18 5μM)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和{MeOH(3)∶MeCN(1)}的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈无色物质的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟联苯-4-基)乙酸(80mg，48.8％)。
1H NMR(400.13MHz，DMSO-d6)δ2.64(3H，s)，2.76(3H，s)，3.67(2H，s)，7.21-7.27(2H，m)，7.56(2H，t)，7.67-7.69(2H，m)，7.85-7.87(2H，m)，8.03(1H，s)m/z(ES+)(M+H)+＝380.22
中间体25-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟联苯-4-基)乙酸 甲酯
Figure BPA00001513975500911
将3，5-二甲基-6-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)吡嗪-2-甲酰胺(353mg，1mmol)、2-(3-氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(中间体25-2；411mg，1.30mmol)和磷酸三钾(318mg，1.50mmol)在DME(6mL)、乙醇(3.00mL)和水(1.500mL)中的溶液置于真空中，并用氮气再填充，然后添加(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(DCM加合物)(65.8mg，0.08mmol)。将反应混合物加热，并搅拌过夜16小时。将反应混合物冷却至室温，然后蒸发。将残留物在水(20mL)和EtOAc(50mL)之间分配。将水溶液用EtOAc(2×10mL)再萃取，并将合并的有机物用盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并蒸发，得到粗产物。将粗产物在40g silicycle柱上通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至50％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟联苯-4-基)乙酸甲酯(180mg，45.8％)。
1H NMR(400.13MHz，DMSO-d6)δ2.64(3H，s)，2.79(3H，s)，3.68(3H，s)，3.77(2H，s)，7.23-7.25(2H，m)，7.55(1H，t)，7.67-7.70(2H，m)，7.80-7.82(2H，m).
m/z(ES+)(M+H)+＝394.37
中间体25-2：2-(3-氟-4-(三甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975500921
在氮气下，将三氟甲磺酸酐(2.67mL，16.29mmol)经5分钟的时间逐滴添加到冷却至0℃的2-(3-氟-4-羟苯基)乙酸甲酯(通过LCMS测定为85％)(2g，10.86mmol)在DCM(47.1mL)中的搅拌溶液中。经5分钟逐滴添加三乙胺(4.54mL，32.58mmol)(保持内部温度在5-10℃之间)，并将所得溶液在室温下于氮气中搅拌4小时。将反应混合物用DCM(100mL)稀释，并依次用水(100mL)、饱和NaHCO3(100mL)和水(100mL)洗涤。通过使有机层通过相分离柱将其干燥并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈草黄色油状物的2-(3-氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(2.250g，65.5％)。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ3.64(2H，s)，3.73(3H，s)，7.11-7.14(1H，m)，7.22-7.31(2H，m).m/z(ES-)(M-H)-＝315.19
实施例26和实施例27：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′- 氟联苯-4-基)丙酸对映体1和2
Figure BPA00001513975500922
将氢氧化钾粉末(432mg，7.69mmol)一次性添加到在叔丁醇(10mL)中的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′-氟联苯-4-基)丙酸甲酯(中间体26-1；680mg，1.54mmol)中。将所得黄色浑浊悬浮液在40℃下搅拌1小时。将反应混合物用在乙醇(2mL)中的乙酸(0.705mL，12.31mmol)淬灭，并将所得溶液搅拌另外10分钟，然后蒸发至干。将所得固体在水(20mL)和DCM(20mL)之间分配。将有机层分离并将水溶液用DCM(20mL)再萃取。将合并的有机物真空蒸发，得到呈灰白色固体的粗产物(578mg)。将粗产物通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeOH的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈白色固体的外消旋2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′-氟联苯-4-基)丙酸(359mg，54.5％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.43(3H，d)，2.67(3H，s)，2.76(3H，s)，3.81(1H，q)，7.42(2H，m)，7.51(2H，m)，7.62(1H，s)，7.70(1H，m)，7.80(1H，m)，8.11(1H，s)，12.51(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝428
外消旋2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′-氟联苯-4-基)丙酸的手性分离。将粗产物在Merck 50mm 20μm Chiralpak AD柱上通过制备型手性HPLC纯化，使用在70％异己烷中的30％EtOH(用AcOH 0.2％酸化)作为洗脱液进行等度洗脱。将含有所需化合物的流分蒸发至干，并在高真空下干燥过夜，得到：
(i)呈白色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′-氟联苯-4-基)丙酸(对映体1)(161mg，46.0％)
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.44(3H，d)，2.69(3H，s)，2.78(3H，s)，3.83(1H，q)，7.40(1H，m)，7.46(1H，d)，7.53(2H，m)，7.64(1H，s)，7.71(1H，m)，7.81(1H，m)，8.12(1H，s)，12.49(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝428.10.
经证实此对映体为更有效的DGAT1抑制剂，并已通过类推将S构型赋予实施例8和9。这随后通过200K下的单晶衍射确认。
和
(ii)呈白色固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′-氟联苯-4-基)丙酸(对映体2)(146mg，41.7％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.44(3H，d)，2.68(3H，s)，2.78(3H，s)，3.82(1H，q)，7.40(1H，m)，7.46(1H，d)，7.53(2H，m)，7.64(1H，s)，7.71(1H，m)，7.81(1H，m)，8.12(1H，s)，12.40(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝428.17.
经证实此对映体为较低效的DGAT1抑制剂，并通过类推将R-构型赋予实施例8和9。
中间体26-1：2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′-氟联苯-4- 基)丙酸甲酯
Figure BPA00001513975500941
将三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯酯(中间体6-4；703mg，1.79mmol)和2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸甲酯(中间体8-2；580mg，1.79mmol)、氯化锂(133mg，3.13mmol)和磷酸三钾(455mg，2.14mmol)在DME(20mL)、甲醇(10mL)和水(5mL)中的溶液充分脱气。将混合物用PdCl2(dppf)-DCM加合物(73.0mg，0.09mmol)处理，再次脱气，并将气氛替换为氮气，然后加热至85℃并保持17小时。将反应混合物冷却并蒸发，将残留物在EtOAc(100mL)和水(75mL)之间分配，并将水层进一步用EtOAc(100mL)萃取。合并有机层并用饱和盐水(100mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至60％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈膏状固体的2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′-氟联苯-4-基)丙酸甲酯(681mg，86％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.46(3H，d)，2.66(3H，s)，2.77(3H，s)，3.64(3H，s)，3.95(1H，q)，7.37-7.40(1H，m)，7.45(1H，d)，7.51(1H，t)，7.55-7.55(1H，m)，7.63(1H，s)，7.69-7.71(1H，m)，7.78-7.81(1H，m)，8.11(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝442
实施例28：1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)环 丙烷甲酸
将氢氧化钾粉末(91mg，1.62mmol)一次性添加到在叔丁醇(10mL)中的1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)环丙烷甲酸甲酯(中间体28-1；142mg，0.32mmol)中。将所得黄色浑浊悬浮液在40℃下搅拌1小时。将反应混合物用在乙醇(2mL)中的乙酸(0.149mL，2.60mmol)淬灭，并将所得溶液搅拌另外10分钟，然后蒸发至干。将所得固体在水(20m)和乙酸乙酯(20mL)之间分配。滤出不溶性固体。将有机层分离并将水溶液用乙酸乙酯(20mL)再萃取。将合并的有机物真空蒸发，得到呈灰白色固体的粗产物。将粗固体用DCM(3mL)和甲醇(3mL)的混合物研磨，得到固体，通过过滤收集该固体并真空干燥，得到呈白色固体的1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)环丙烷甲酸(52.0mg，37.8％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.30(2H，m)，1.51(2H，m)，2.66(3H，s)，2.79(3H，s)，7.25(2H，d)，7.60(3H，d)，7.89(2H，d)，8.06(1H，s)，12.58(1H，s).
m/z(ES+)(M+H)+＝424
中间体28-1：1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基) 环丙烷甲酸甲酯
Figure BPA00001513975500951
将4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)苯基硼酸(226mg，0.83mmol)、1-(3，5-二氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)环丙烷甲酸甲酯(中间体28-2；300mg，0.83mmol)、氯化锂(70.6mg，1.67mmol)和磷酸三钾(265mg，1.25mmol)在丁腈(2mL)中的溶液脱气10分钟，然后置于真空中，并用氮气再填充，然后添加(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(DCM加合物)(137mg，0.17mmol)。将反应混合物在微波炉中于150℃下加热1小时。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至90％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到1-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2，6-二氟联苯-4-基)环丙烷甲酸甲酯(160mg，43.9％)
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.34(2H，q)，1.53(2H，q)，2.65(3H，s)，2.76(3H，s)，3.62(3H，s)，7.27(2H，d)，7.59(3H，d)，7.88(2H，d)，8.05(1H，s).
m/z(ES+)(M+H)+＝438
中间体28-2：1-(3，5-二氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)环丙烷甲酸甲酯
Figure BPA00001513975500952
将1-(3，5-二氟-4-羟苯基)环丙烷甲酸甲酯(中间体28-3；635mg，2.78mmol)、1，1，1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲磺酰基)甲磺酰胺(994mg，2.78mmol)和碳酸钾(1154mg，8.35mmol)悬浮在THF(15mL)中，并密封到微波管中。将反应物在微波反应器中加热至120℃并保持8分钟，冷却至室温。过滤悬浮液，用EtOAc(20mL)洗涤固体，蒸发滤液，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的10％至20％EtOAc)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色油状物的1-(3，5-二氟-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)环丙烷甲酸甲酯(968mg，97％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.35(2H，m)，1.52(2H，m)，3.58(3H，s)，7.55(2H，m)
中间体28-3：1-(3，5-二氟-4-羟苯基)环丙烷甲酸甲酯
Figure BPA00001513975500961
在0℃和氮气下，将三溴硼烷(0.666mL，7.04mmol)逐滴添加到在二氯甲烷(46.2mL)中的1-(3，5-二氟-4-甲氧基苯基)环丙烷甲酸甲酯(中间体28-4；1.4216g，5.87mmol)中。将所得溶液在0℃下搅拌1小时。将反应混合物逐滴添加到甲醇(11.87mL，293.45mmol)中(注意：反应剧烈且放热-将MeOH保持在冰浴中)，并将混合物搅拌另外20分钟。将反应混合物蒸发至干，并再溶于DCM(50mL)中，然后依次用饱和NaHCO3(50mL)和水(50mL)洗涤。将有机层经MgSO4干燥并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化，以在异己烷中的25％EtOAc洗脱。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的1-(3，5-二氟-4-羟苯基)环丙烷甲酸甲酯(0.657g，49.1％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)d1.08(2H，q)，1.52(2H，q)，3.57(3H，s)，5.08(1H，s)，6.78-6.86(2H，m)m/z(ES-)，(M-H)-＝227
中间体28-4：1-(3，5-二氟-4-甲氧基苯基)环丙烷甲酸甲酯
Figure BPA00001513975500962
在0℃和氮气下，将氢化钠(0.326g，8.14mmol)一次性添加到在DMF(46.3mL)中的2-(3，5-二氟-4-甲氧基苯基)乙酸甲酯(1.76g，8.14mmol)中。将所得悬浮液在0℃下搅拌10分钟。此后，将1，2-二溴乙烷(0.772mL，8.96mmol)添加到将反应混合物中，并将溶液搅拌5分钟。然后添加另外的氢化钠(0.326g，8.14mmol)，并将反应物搅拌2小时。将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭。将反应混合物用EtOAc(75mL)稀释，并依次用水(4×50mL)和饱和盐水(50mL)洗涤。蒸发有机层，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(以在异己烷中的10％EtOAc洗脱)。将纯流分蒸发至干，得到呈无色胶状物的1-(3，5-二氟-4-甲氧基苯基)环丙烷甲酸甲酯(1.540g，78％)。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)d1.15(2H，q)，1.60(2H，q)，3.64(3H，s)，3.98(3H，s)，6.85-6.91(2H，m)
实施例29：3，5-二甲基-6-(2′-甲基-4′-((5-氧代-2，5-二氢-1，2，4-噁二唑-3-基)甲 基)联苯-4-基)吡嗪-2-甲酰胺
Figure BPA00001513975500971
将在DME(4mL)中的3-(4-碘-3-甲苄基)-1，2，4-噁二唑-5(2H)-酮(中间体29-1；200mg，0.63mmol)和2M碳酸钠(水溶液)(0.633mL，1.27mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(45.3mg，0.04mmol)脱气，然后在85℃下于氮气中搅拌17小时。将反应混合物蒸发，并在EtOAc(75mL)和饱和盐水(15mL)之间分配。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在异己烷中的0％至100％EtOAc)。将流分蒸发至干，得到膏状固体(117mg)。将产物通过制备型HPLC(WatersXBridge Prep C18 OBD柱、5μ硅胶、50mM直径、150mM长度)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和MeOH的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到3，5-二甲基-6-(2′-甲基-4′-((5-氧代-2，5-二氢-1，2，4-噁二唑-3-基)甲基)联苯-4-基)吡嗪-2-甲酰胺(13mg，0.031mmol，4.95％)
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.23(3H，s)，2.60(3H，s)，2.70(3H，s)，3.84(2H，s)，7.19(3H，m)，7.41(2H，d)，7.49(1H，m)，7.77(2H，d)，7.98(1H，s)，12.26(1H，s).
m/z(ES-)(M-H)-＝414
中间体29-1：3-(4-碘-3-甲苄基)-1，2，4-噁二唑-5(4H)-酮
将(Z)-1-(肟基)-2-(4-碘-3-甲基苯基)乙基氨基甲酸苯酯(中间体29-2；1.67g，4.07mmol)溶于无水甲苯(30mL)中。将所得溶液在回流下搅拌16小时。将冷却的反应混合物蒸发至干，再溶于DCM(50mL)中并用饱和NaHCO3(50mL)萃取。将水层用2M HCl酸化并用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机层合并，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到所需产物呈黄色固体的3-(4-碘-3-甲苄基)-1，2，4-噁二唑-5(4H)-酮(0.787g，61.2％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.34(3H，s)，3.81(2H，s)，6.87(1H，d)，7.27(1H，s)，7.78(1H，d)，12.25(1H，s).m/z(ES-)(M-H)-＝315
中间体29-2：(Z)-1-(肟基)-2-(4-碘-3-甲基苯基)乙基氨基甲酸苯酯
Figure BPA00001513975500982
在0℃下，将三乙胺(0.651mL，4.67mmol)添加到在无水二氯甲烷(30mL)中的(Z)-N′-羟基-2-(4-碘-3-甲基苯基)乙脒(中间体29-3；1.13g，3.90mmol)中。将所得黄色溶液在0℃下搅拌1小时。添加氯甲酸苯酯(0.598mL，4.67mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌另外1小时。将溶液依次用饱和Na2CO3(50mL)和水(50mL×2)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物(Z)-1-(肟基)-2-(4-碘-3-甲基苯基)乙基氨基甲酸苯酯(1.675g，105％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.41(3H，s)，3.38(2H，s)，6.69(1H，s)，6.99(1H，d)，7.42(7H，m)，7.82(1H，d).m/z(ES+)(M+H)+＝411
中间体29-3：(Z)-N′-羟基-2-(4-碘-3-甲基苯基)乙脒
Figure BPA00001513975500991
在回流下，将在乙醇(30mL)中的2-(4-碘-3-甲基苯基)乙腈(2g，7.78mmo1)经5分钟的时间逐滴添加到在乙醇(30mL)中的碳酸钾(6.67g，48.24mmol)和羟胺盐酸盐(0.541g，7.78mmol)中。将所得悬浮液在回流下搅拌8小时。将反应混合物冷却过夜，将盐过滤并用DCM(2×50mL)洗涤。蒸发滤液，得到粗产物。将粗产物在combi flash companion 40g柱上通过快速硅胶色谱法纯化(洗脱梯度：在DCM中的0至30％MeOH)。将纯流分蒸发至干，得到呈黄色胶状物的(Z)-N′-羟基-2-(4-碘-3-甲基苯基)乙脒(1.135g，50.3％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.32(3H，s)，3.18(2H，s)，5.35(2H，s)，6.84(1H，d)，7.22(1H，s)，7.70(1H，d)，8.86(1H，s).m/z(ES+)(M+H)+＝291
实施例30：6-(4′-(2-氨基-2-氧代乙基)-2′-氯联苯-4-基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲 酰胺
Figure BPA00001513975500992
将2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体1-1；60mg，0.15mmol)和氨(在甲醇中，7M)(2091μl，14.64mmol)密封到微波管中。将反应物在微波反应器中加热至140℃并保持1分钟，冷却至室温。减压移除溶剂，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(Waters-Xbridge Prep C18 5μM)纯化，其中采用极性渐降的水(含0.1％甲酸)和{MeOH(3)∶MeCN(1)}的混合物作为洗脱液。将含有所需产物的流分蒸发至干，得到呈无色固体的6-(4′-(2-氨基-2-氧代乙基)-2′-氯联苯-4-基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(16.20mg，28.0％)。
1H NMR(400.13MHz，CDCl3)δ2.73(3H，s)，3.00(3H，s)，3.63(2H，s)，5.49(3H，s)，7.30(1H，d)，7.40(1H，d)，7.46(1H，s)，7.57-7.61(2H，m)，7.67(2H，d)，7.82(1H，s)m/z(ES+)(M+H)+＝395.28
实施例31：(2S)-2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯 苯基]丙酸
Figure BPA00001513975501001
将在脱气甲醇(2.5L)和脱气甲苯(836mL)中的2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯苯基]丙-2-烯酸(中间体31-10；142g，283.44mmol)、双(1，5-环辛二烯)四氟硼酸铑(I)(1.381g，3.40mmol)、(R)-1-[(Sp)-2-(二叔丁基膦基)二茂铁基]乙基双(2-甲基苯基)膦(2.102g，3.68mmol)在5巴的氢气氛中于45℃下搅拌4小时。手性HPLC分析(chiralpak AD5μM，250mM×4.6mM柱，用60％异己烷/40％乙醇/0.2％乙酸洗脱，所需对映体的保留时间为14.5分钟)显示非所需对映体的比例为87∶13。真空移除溶剂。将粗产物溶于5％甲醇/二氯甲烷中，然后在硅胶上层析(5Kg Mercklichro制备型硅胶15-25μM，200mM直径柱)，用5％甲醇/二氯甲烷的溶剂混合物洗脱。将纯流分蒸发至干，得到对映体的混合物，手性制备型HPLC层析(5Kg chiralpak AD 20μM，200mM直径柱，用70％异己烷/30％乙醇/0.2％乙酸洗脱，所需对映体的保留时间为17分钟)，然后得到呈白色固体的(2S)-2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯苯基]丙酸(58g，40％，99％ee)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.43(3H d，J＝7.2Hz)，2.66(3H，s)，2.77(3H，s)，3.81(1H q，J＝7.1Hz)，7.38-7.45(2H，m)，7.51(1H t，J＝7.8Hz)，7.54(1H d，J＝1.9Hz)，7.63(1H，s)，7.69-7.71(1H，m)，7.78-7.81(1H，m)，8.11(1H，s)，12.51(1H，s)m/z(ES+)(M+H)+＝428
中间体31-1：2-(3-氯-4-羟苯基)乙酸甲酯
Figure BPA00001513975501002
将2-(3-氯-4-羟苯基)乙酸(1000g，5359mmol)和硫酸(0.029L，535mmol)在甲醇(10L)中的溶液在回流下搅拌3小时。将反应混合物冷却至25℃。然后真空移除溶剂。添加乙酸乙酯(5.0L)，并将溶液用水(4.0L)、盐水(2.0L)洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤，并真空移除溶剂。得到呈橙色油状物的2-(3-氯-4-羟苯基)乙酸甲酯(1078g，99％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.53(2H，s)，3.70(3H，s)，5.53(1H，s)，6.96(1H，d)，7.08(1H，dd)，7.25(1H+CHCl3，m).
m/z(ES-)(M-H)-＝199
中间体31-2：2-[3-氯-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基]乙酸甲酯
Figure BPA00001513975501011
在25℃下，将吡啶(0.068L，841mmol)添加到2-(3-氯-4-羟苯基)乙酸甲酯(中间体31-1；150g，672mmol)在甲苯(1.0L)中的搅拌溶液中。将反应物冷却至-5℃。然后经45分钟的时间添加三氟甲磺酸酐(130mL，773mmol)，同时保持温度低于0℃。然后将反应物温热至室温，并将所得悬浮液静置过夜。将反应物用磷酸钠(在500mL水中，50g)淬灭。添加乙酸乙酯(1.0L)。分离有机层，并用乙酸乙酯(1.0L)萃取水层。将有机物合并，并用50％盐水/水(500mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤，并真空移除溶剂。然后，使粗产物与甲苯(1.0L)共沸。得到呈浅橙色油状物的2-[3-氯-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基]乙酸酯(209g，93％)，其在静置时固化。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.64(3H，s)，3.81(2H，s)，7.43-7.46(1H，m)，7.60(1Hd，J＝8.5Hz)，7.71(1H d，J＝2.1Hz)
m/z(ES-)(M-H)-＝331
中间体31-3：2-[3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]乙 酸甲酯
Figure BPA00001513975501012
向2-(3-氯-4-(三氟甲磺酰基氧基)苯基)乙酸甲酯(中间体31-2；865g，2600mmol)在1，4-二氧杂环己烷(8.6L)中的脱气溶液中添加乙酸钾(766g，7800mmol)、联硼酸频那醇酯(806g，3172mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(37.2g，45.5mmol)。将悬浮液在25℃下搅拌30分钟，然后加热回流27小时，通过LCMS监测(230nm)。将反应物冷却至25℃，然后通过烧结玻璃(glass sinter)过滤。将所获得固体用1，4-二氧杂环己烷(5.0L)洗涤并扔弃。然后从合并的滤液中真空移除溶剂，得到粗产物。得到呈褐色泥状物的2-[3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]乙酸甲酯(1168g)，质子NMR强度显示52％纯(因此为607g，75％)。将此物质以粗制形式用于下一阶段。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.36(12H，s)，3.59(2H，s)，3.68(3H，s)，7.13-7.16(1H，m)，7.28-7.28(1H，m)，7.65(1H，d)
中间体31-4：2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚
Figure BPA00001513975501021
将4-溴-2-氟苯酚(143mL，1308mmol)在二噁烷(2.5L)中的溶液用氮脱气30分钟的时间。然后添加乙酸钾(514g，5235mmol)、联硼酸频那醇酯(399g，1570mmol)、(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯(II)(7.54g，9.2mmol)和1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(5.13g，9.2mmol)。将所得混合物在氮气氛下搅拌，并加热至100℃。一旦内部温度已达到＞85℃，反应强烈放热一次，10分钟后，反应停止起泡。使内部反应温度达到回流(～100℃)并将反应物搅拌20小时。然后将反应冷却至25℃。添加乙酸乙酯(2.5L)和水(2.5L)，然后将其经过硅藻土垫过滤。分离水层，并将有机层用50％盐水/水(2.5L)洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤，并真空移除溶剂。将粗产物在硅胶上层析(5KgMerck lichro制备型硅胶15-25μM，200mM直径柱)，用0-20％乙酸乙酯/异己烷的溶剂梯度洗脱。将纯流分蒸发至干，得到呈黄色固体的2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚(348g)，质子NMR强度显示80％纯(因此为278g，89％)。将此物质以粗制形式用于下一阶段。
1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.33(12H，s)，5.38(1H，s)，6.98(1H，t)，7.47-7.51(2H，m)
m/z(ES-)(M-H)-＝237
中间体31-5：6-(3-氟-4-羟苯基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺
Figure BPA00001513975501031
搅拌2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚(中间体31-4；348g，1169mmol)(质子NMR显示80％强度)、6-氯-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(217g，1169mmol)和磷酸三钾(298g，1403mmol)在DME(3.6L)、乙醇(0.9L)和水(1.8L)中的悬浮液。将混合物在30℃下用氮脱气30分钟。然后将二氯[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(8.60g，10.5mmol)添加到悬浮液中。将反应物进一步脱气10分钟，然后加热至80℃，搅拌4小时。将反应物冷却至25℃。然后真空移除溶剂，直到保持在水中的浆液为止。然后在搅拌下缓慢添加柠檬酸(640g)在水(6.0L)中的溶液。将悬浮液过滤，用水(2×2.5L)、MTBE(2.5L)洗涤，在烧结玻璃上吸干，然后在65℃下真空干燥48小时。得到呈淡褐色固体的6-(3-氟-4-羟苯基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(295g，97％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.66(3H，s)，2.78(3H，s)，7.11(1H，t)，7.47(1H，d)，7.65(1H，s)，7.70(1H，d)，8.09(1H，s)，10.24(1H，s)
m/z(ES+)(M+H)+＝262
中间体31-6：三氟甲磺酸[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基] 酯
Figure BPA00001513975501032
在氮气氛和25℃下，将碳酸钾(468g，3387mmol)一次性添加到6-(3-氟-4-羟苯基)-3，5-二甲基吡嗪-2-甲酰胺(中间体31-5；295g，1129mmol)和N-苯基双(三氟甲磺酰亚胺)(403g，1129mmol)在THF(3.0L)中的搅拌混合物中。将反应物在25℃下搅拌20小时。将反应物通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(5.0L)充分洗涤。真空移除溶剂。将粗产物溶于二氯甲烷中，然后在硅胶上层析(5Kg Merck lichro制备型硅胶15-25μM，200mM直径柱)，用40％乙酸乙酯/异己烷的溶剂混合物洗脱。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的三氟甲磺酸[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]酯(406g，91％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.62(3H，s)，2.76(3H，s)，7.63(1H，s)，7.77-7.85(2H，m)，8.09(1H，d)，8.12(1H，s)
m/z(ES+)(M+H)+＝394
中间体31-7：2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯苯 基]乙酸甲酯
Figure BPA00001513975501041
在20℃下，将二氯[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(68.2g，83.5mmol)一次性添加到三氟甲磺酸4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯酯(中间体31-6；730g，1856mmol)、2-(3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(中间体31-3；1164g，1948mmol)(质子NMR显示52％强度)、磷酸三钾(690g，3248mmol)和氯化锂(138g，3248mmol)在DME(5L)、甲醇(2.5L)和水(2.5L)中的搅拌混合物中，该搅拌混合物已用氮脱气30分钟。将反应物加热至回流，并在氮气氛下搅拌过夜。将反应物冷却至室温。将有机层通过玻璃烧结玻璃过滤。添加乙酸乙酯(10.0L)和30％盐水/水(5.0L)。分离水层，并用乙酸乙酯(5.0L)萃取，将有机层合并，用50％盐水/水(10.0L)洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤，并真空移除溶剂。将粗产物溶于二氯甲烷中，然后在硅胶上层析(5KgMerck lichro制备型硅胶15-25μM，200mM直径柱)，用0-70％乙酸乙酯/异己烷的溶剂梯度洗脱。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯苯基]乙酸甲酯(389g，49％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.68(3H，s)，2.79(3H，s)，3.68(3H，s)，3.84(2H，s)，7.39(1H，d)，7.46(1H，d)，7.52(1H，t)，7.58(1H，s)，7.63(1H，brs)，7.71(1H，d)，7.80(1H，d)，8.11(1H，brs)m/z(ES+)(M+H)+＝428
中间体31-8：2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯苯 基]-3-羟基丙酸甲酯
Figure BPA00001513975501051
在氮气氛下，将2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′-氟联苯-4-基)乙酸甲酯(中间体31-7；615g，1437mmol)在DMF(2.5L)中的搅拌溶液冷却至15℃。然后添加碳酸钾(214g，1545mmol)，接着添加低聚甲醛(47.5g，1581mmol)。将反应物在30℃下搅拌5小时。然后将反应物添加到搅拌的水(25.0L)和乙酸乙酯(10.0L)中。然后在搅拌下缓慢添加浓盐酸(430mL)。分离水层，并用乙酸乙酯(7.5L)萃取。将有机物合并，用50％盐水/水(10.0L)洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤，并真空移除溶剂。得到呈黄色胶状物的2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯苯基]-3-羟基丙酸甲酯(762g)，LCMS测定为64％(因此为488g，74％产率)。将此物质以粗制形式用于下一阶段。
m/z(ES+)(M+H)+＝458，460
中间体31-9：2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯苯 基]丙-2-烯酸甲酯
Figure BPA00001513975501052
在10℃下，将甲磺酰氯(0.145L，1865mmol)经5分钟添加到2-(4′-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氯-2′-氟联苯-4-基)-3-羟基丙酸甲酯(中间体31-8；488g，1065mmol)和三乙胺(0.520L，3730mmol)在四氢呋喃(5.0L)中的搅拌溶液中。将反应物加热至50℃，并搅拌2小时。然后将反应物冷却至20℃。将混合物用乙酸乙酯(10.0L)稀释，然后加入水(3.0L)。添加饱和氯化铵水溶液(4.1L)。分离有机层，并用乙酸乙酯(2.5L)萃取水层。将有机物合并，用50％盐水/水(5.0L)洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤，并真空移除溶剂。将粗产物溶于二氯甲烷中，然后在硅胶上层析(5Kg Merck lichro制备型硅胶15-25μM，200mM直径柱)，用0-70％乙酸乙酯/异己烷的溶剂梯度洗脱。将纯流分蒸发至干，得到呈白色固体的2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯苯基]丙-2-烯酸甲酯(188g，40％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.73(3H，s)，2.84(3H，s)，3.86(3H，s)，6.29(1H，s)，6.46(1H，s)，7.55-7.62(3H，m)，7.70(1H，s)，7.76(1H，d)，7.77-7.80(1H，m)，7.86-7.90(1H，m)，8.18(1H，s)
m/z(ES+)(M+H)+＝440，442
中间体31-10：2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯 苯基]丙-2-烯酸
Figure BPA00001513975501061
将氢氧化钾(薄片)(232g，4137mmol)添加到2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯苯基]丙-2-烯酸甲酯(中间体31-9；364g，827mmol)在叔丁醇(4.3L)中的悬浮液中。将反应物在30℃下搅拌4小时。将反应物倒入正在搅拌的饱和柠檬酸溶液(3.6L)中，将所得悬浮液(～pH 5)真空减压，直到仅保留水溶液为止。添加乙酸乙酯(700mL)，并将两相混合物在20℃下搅拌1小时。将白色固体滤出，先后用水(2×2.5L)和乙腈(2.0L)洗涤，在烧结玻璃上吸干，然后在真空烘箱中于65℃下过夜。得到黄色固体2-[4-[4-(6-氨基甲酰基-3，5-二甲基吡嗪-2-基)-2-氟苯基]-3-氯苯基]丙-2-烯酸(265g，75％)。
1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ2.67(3H，s)，2.77(3H，s)，6.12(1H，s)，6.33(1H，s)，7.47-7.54(3H，m)，7.63(1H，s)，7.69-7.73(2H，m)，7.79-7.83(1H，m)，8.11(1H，s)，没有看到COOH
m/z(ES-)(M-H)-＝424，426。

Claims (15)

1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FPA00001513975400011
其中各r独立地为0或1，并且各X1独立地选自直链(1-3C)烷基、(2-3C)烯基、(2-3C)炔基、(1-2C)烷氧基、甲氧基甲基、氨基和氰基；
各q独立地为0或1，并且各X2独立地选自氟、氯、溴、氨基、氰基、(1-3C)烷基、(2-3C)烯基、(2-3C)炔基和(1-2C)烷氧基；
Y1选自氟、氯、溴、氰基、(1-3C)烷基和(1-2C)烷氧基；
n为0、1或2，并且各Y2独立地选自氟、氯、溴、氰基、羟基、(1-3C)烷基和(1-2C)烷氧基；
p为0、1或2，并且各Y3独立地为(1-3C)烷基，或当p为2时，各Y3还可相连以形成(3-5C)环烷基环；
Z为羧基或选自-CONHSO2Me或下列环之一的基团Q：
Figure FPA00001513975400012
或Z为-CONRbRc，其中Rb和Rc独立地选自氢、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基乙基，或Rb和Rc相连以形成吗啉环或(4-6C)杂环，并且当Z为-CONRbRc时，所述(1-4C)烷基和可形成的吗啉环或(4-6C)杂环可任选地在可用碳原子上被羧基或基团Q取代；
并且其中在以上所定义的直链(1-3C)烷基、包含(1-3C)烷基或(1-2C)烷氧基的基团中的任何碳原子可任选地被至多3个氟原子取代。
2.根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中两个r均为1，且各X1为直链(1-3C)烷基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z为羧基、-CONRbRc或基团
Figure FPA00001513975400021
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z为羧基。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y1为氯、氟或甲基。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y1为氯。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中q为0。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中q为1，且X2为氯或氟。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中p为1，且Y3为甲基。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中p为2，且各Y3相连以形成(3-5C)环烷基环。
11.一种药物组合物，其包含权利要求1至10中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂或载体。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用作药物。
13.根据权利要求11所述的用作药物的化合物或其药学上可接受的盐，其用于在温血动物例如人内对DGAT-1活性产生抑制。
14.根据权利要求11所述的用作药物的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗温血动物例如人内的糖尿病和/或肥胖症。
15.一种制备权利要求1中所定义的式(I)化合物的方法，其包括：
(a)使其中X为离去基团的吡嗪衍生物(IV)与其中E为硼酸或其衍生物的式(II)的取代的中间体含硼化合物进行Suzuki偶联：
Figure FPA00001513975400031
(b)使其中P为保护基且X为离去基团的吡嗪酯(III)与其中E为硼酸或其衍生物的式(II)的取代的中间体含硼化合物进行Suzuki偶联，然后移除保护基且转化成相应的伯酰胺：
Figure FPA00001513975400032
(c)使其中X为离去基团的苯基衍生物(V-B1)与其中E为硼酸或其衍生物的式(V)的取代的吡嗪中间体含硼化合物进行Suzuki偶联：
Figure FPA00001513975400033
(d)使其中X为离去基团的吡嗪衍生物(V-A1)与其中E为硼酸或其衍生物的式(VI)的取代的苯基中间体含硼化合物进行Suzuki偶联：
Figure FPA00001513975400041
(e)其中p＝1，Y3为甲基且Z为羧基的本发明手性化合物可通过α亚甲基酸中间体(VII)经由催化氢化的手性还原以形成式(I)化合物来制备：
Figure FPA00001513975400042
且此后如果必要，则：
i)将一种式(I)化合物转化成另一种式(I)化合物；
ii)移除任何保护基；
iii)形成药学上可接受的盐。
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