CN106929603A - 一种改良型hcv rna检测试剂盒 - Google Patents
一种改良型hcv rna检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106929603A CN106929603A CN201710014636.5A CN201710014636A CN106929603A CN 106929603 A CN106929603 A CN 106929603A CN 201710014636 A CN201710014636 A CN 201710014636A CN 106929603 A CN106929603 A CN 106929603A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hcv rna
- detection
- kit
- design
- probe
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 21
- 101100098985 Caenorhabditis elegans cct-3 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 abstract description 23
- 238000007689 inspection Methods 0.000 abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 10
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 5
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 abstract description 4
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 abstract description 4
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 abstract description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 abstract description 3
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 abstract description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 abstract 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 20
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 19
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 14
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 6
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 2
- 241000033695 Sige Species 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010057573 Chronic hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 208000010334 End Stage Liver Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 108090000119 Nucleotidyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000003832 Nucleotidyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 101800001554 RNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 238000007622 bioinformatic analysis Methods 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 208000011444 chronic liver failure Diseases 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 239000006101 laboratory sample Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940048102 triphosphoric acid Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/706—Specific hybridization probes for hepatitis
- C12Q1/707—Specific hybridization probes for hepatitis non-A, non-B Hepatitis, excluding hepatitis D
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于生物技术分子诊断领域，提供了一种改进型的丙型肝炎核酸检测试剂盒的设计、制造方法。本发明技术核心为，在病毒基因组两个保守区上设计引物探针，并组合成该病毒覆盖率全且特异的一步法RT‑PCR寡核酸检测系统。该试剂盒与现有同类产品比较，双RT引物在逆转录酶指导下两个独立位点开始启动，解决了单RT引物受复杂模板二级结构影响，结合不充分，逆转录效率低下的弊端，显著提高了检测灵敏度，同时避免了可能的漏检。本发明试剂盒操作简捷、安全，可应用于高敏定量检测丙型肝炎病毒核酸，或定性检测丙型肝炎病毒核酸。
Description
技术领域：本发明属于一种生物技术分子诊断领域，特别是涉及一种丙型肝炎病毒的核酸检测试剂及其使用方法。
背景技术：
丙型肝炎是一种主要经血液传播的疾病，丙型肝炎病毒慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌，对患者的健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题。
丙型肝炎呈全球性流行，是欧美及日本等国家终末期肝病的最主要原因。据世界卫生组织2014年统计，全球约1.85亿人感染HCV，其中约1.5亿为慢性感染，每年有35万～50万人死于丙肝并发症，每年新发感染病例约300万～400万例。
HCV1b和2a基因型在我国较为常见，其中以1b型为主；某些地区有1a、2b和3b型报道；6型主要见于香港和澳门地区，在南方边境省份也可见此基因型。
HCV属于黄病毒科(flaviviridae)，其基因组为单股正链RNA，易变异，目前可分为6个基因型及50多种不同亚型，按照国际通行的方法，以阿拉伯数字表示HCV基因型，以小写的英文字母表示基因亚型(如1a、2b、3c等)。基因1型呈全球性分布，占所有HCV感染的70％以上。HCV基因组含有一个开放读框(open reading frame,ORF)，编码10余种结构和非结构(NS)蛋白，NS3蛋白是一种多功能蛋白，氨基端具有蛋白酶活性，羧基端具有螺旋酶/三磷酸核苷酶活性；NS5B蛋白是RNA依赖的RNA聚合酶，为HCV复制所必需，是抗病毒治疗的重要靶位，其末端具有核苷酸转移酶活性，但由于RNA酶缺乏矫正功能不能修正错配，多次复制后易导致HCV多种变异产生。
HCV RNA定量检测方法包括实时荧光逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、分枝DNA(bDNA)等。本发明所指的HCV RNA定量试剂是指利用qRT-PCR方法的核酸检测技术，以HCV基因序列为检测靶标，对人血清、血浆及其他人体样本中的HCV RNA进行体外定量检测的试剂，可作为HCV现症感染的证据和抗病毒疗效评估的观察指标。
现有HCV RNA定量试剂的设计为：生物信息学分析、保守区的靶标选择，合成引物对靶标的扩增与检测，一般为5’NCR区，由于病毒基因组突变规律存在较大随机性的原因，有些设计者针对同一靶标采用兼并引物或多条引物避免漏检的方法。
然而，由于基因突变的普遍性，碱基置换、移码(包括缺失、插入、重复)的发生往往是随机的，构成了病毒的准种突变的复杂性。对HCV RNA病毒来讲，其逆转录酶缺乏校正功能，尤其容易自发突变。基因库中的病毒序列再多，也无法覆盖真实样本中的所有病毒序列，更何况有得研究者，压根不上传有意义的病毒分离株的测序结果。分子诊断试剂研发者只能根据文献及基因库中的现有序列，通过序列比对，分析保守区及其中碱基的突变概率，估算错配发生率及带来的漏检风险等一系列概率统计，设计出相对优秀的引物探针，兼顾检测灵敏度及亚型覆盖率。经实践验证其可行性，在随后的临床试验中扩大样本量验证其适用性。引物探针设计属于分子诊断试剂的核心思想，
关系到试剂的灵敏度、特异性等基本性能。没有一种试剂可以宣称不漏检，只能尽量覆盖所检测病毒的基因型、基因亚型，其设计思想是不漏检全球的主要流行株、使用国家或地区的优势地域株。
本发明是针对上述分子诊断试剂的种种不足，创新设计双靶标的检测，以最大限度地避免漏检，理论上，双保守区在一次检测中的漏检概率是两个单保守区漏检率的乘机，设计见图1-1，双区域靶标设计，引物对①②、引物对③④可对靶标有效扩增，引物对①④也可参与扩增。意外地，本发明还大大提高了灵敏度，推测为双区域扩增的协同作用，尤其是双区域RT引物解决了一步法RT-PCR的RT效率低的通病。常规一步法RT-PCR检测病毒时，使用一条或多条针对一个区域靶标的特异性引物为逆转录引物，出于方便性的考虑，或出于企业不同产品采用相同RT-PCR程序的考虑，通常使用一种RT温度如50度或55度，然而众所周知，病毒基因组不同区域的GC％含量不同，导致指定温度下二级结构未处于完全打开状态而严重影响逆转录效率，虽然扩增试剂中可以使用熟知的一些技巧如二甲亚砜、甘油、甲酰胺、甜菜碱等变性剂，但带来负面的影响却难以预期。通过设计，双区域的RT引物可使病毒基因组二级结构打开更充分，两条RT引物在逆转录酶牵引下两个独立位点开始启动，容易发生协同作用，在一种RT温度下实现高效的逆转录效率。
双区扩增的产物本身多于单区扩增是毋庸置疑的，而外侧的一条引物还可能组成一对扩增组合，使得双区扩增可能在双区全漏检的情况下还有一种横跨双区的长片段组合不漏检，这原本是设计中的副产物，但在极端条件下仍可避免漏检，且有可能增加产物量，对提升灵敏度有贡献。
当然，双区域扩增也存在一个缺点，当设计的引物或探针存在交叉时，或者其他一些未知的原因，或特殊干扰核酸的存在时，可能会有非特异反应。但是，通过优选引物探针总是可以排除。研究者都应深知，任何PCR软件设计出来的引物探针并不总是很好地胜任工作，而是必须通过具体实验等实践活动来最终筛选出合格的双靶标的引物及探针。这一点与单靶标引物探针的设计并没有什么不同，只是多了一项特异性检测。
附图说明：
图1-1是本发明双区域靶标设计原理示意图
图2-1是本发明双区域靶标设计和单区域靶标设计对不同浓度HCV RNA样品进行HCV RNA病毒检测的荧光PCR结果对比图，横坐标代表扩增循环数，纵坐标代表荧光值强度。
图2-2是本发明双区域靶标设计和单区域靶标设计对阴性以及低浓度HCV RNA样品进行HCV RNA病毒检测的荧光PCR结果对比图，横坐标代表扩增循环数，纵坐标代表荧光值强度。
图3-1是本发明双区域靶标设计对HCV RNA样品中加入内标和不加入内标进行HCVRNA病毒检测的荧光PCR结果对比图，横坐标代表扩增循环数，纵坐标代表荧光值强度。
图3-2是本发明双区域靶标设计对HCV RNA样品中加入内标样品进行内标检测的荧光PCR结果图，横坐标代表扩增循环数，纵坐标代表荧光值强度。
实施案例1
设计针对HCV 5’NCR前端约110bp的一对引物探针：正向引物KL034,反向引物KL037，TaqMan探针KL101,序列委托Takara合成，要求PAGE或HPLC纯化，为冻干粉。用纯水复溶至100μM。
KL001：5’-ctg tga gga act wct gtc ttc acg-3’
KL002:5’-ccg cag acc act atg gct ct-3’
KL101:5’-FAM-cta gcc atg gcg tta gta yga gtg tcg-BHQ1-3’
设计针对HCV 5’NCR后端及C区前端约90bp的一对引物探针：正向引物NC201、NC202，反向引物NC203，TaqMan探针NC204，序列委托Takara合成，要求PAGE或HPLC纯化，为冻干粉。用纯水复溶至100μM。
NC201：5’-gag tag tgt tgg gtc gcg aa-3’
NC202：5’-gag tag cgt tgg gtt gcg aa-3’
NC203：5’-ggt gca cgg tct acg agr cc t-3’
NC204:5'-FAM-tcgcaagcrccctatcaggcag-BHQ1-3’
使用上海纽思格生物科技有限公司的RT-PCR Mix(50μl扩增体系中15μl每个检测)及Enzyme Mix(50μl扩增体系中10μl每个检测)，也可使用ThermoFisher旗下Invitrogen的同类产品。
RT-PCR反应液的配制方法如下：
管1-3均按每孔30μl分装至PCR管，加上不同浓度的HCV RNA模板(来自上海纽思格生物磁珠法提取系统对阴性血、HCV50IU/ml,1000IU/ml,10000IU/ml浓度的阳性血进行提取后的产物，0.2ml上样，0.1ml洗脱；也可使用与之相当效果的凯杰生物的柱膜式提取试剂盒)20μl，上ABI7500，扩增程序设置为50-60℃10-15分钟，95℃2-5分钟，95℃5-10秒、60℃30-40秒，循环45次，60℃末读取荧光FAM，试验结果如图2-1。由图2-1可见，双靶标扩增使检测Ct提前，对漏检的预防尚难通过有限数量的实验室标本观察到，但对检测灵敏度的提高是立竿见影的。为验证该结论，我们对阴性、15IU/ml HCV RNA、50IU/ml HCV RNA的标本各重复检测10次，结果如图2-2。由图2-2可见，只有双靶标设计的管3可以检测50IU/ml HCVRNA(10/10)和15IU/ml HCV RNA(10/10)为阳性。
实施案例2在前述实施案例中的双区扩增体系中(管3)增加非竞争性内对照的引物及探针，并在核酸提取时，裂解液中加入外源性假病毒颗粒，或者不加外源性内标，使用内源性持家基因的mRNA，实施管内质控，要求内质控必须为阳性。
设计一对内源性内参引物探针如下HBDF、HBDR、HBDP，序列委托Life合成，要求PAGE或HPLC纯化，为100μM液体。
HBDF:5’-AGTCCTTTGGGGATCTGTC-3’
HBDR:5’-GCTTGTCACAGTGCAGCTC-3’
HBDP:VIC-TCCTGATGCTGTTATGGGCAACC-BHQ1
RT-PCR反应液的配制方法如下：
我们对阴性、25IU/ml HCV RNA的标本各重复检测20次，管3和管4的检测结果一致。试验结果如图3-1、3-2。由图3-1、3-2可见阴性无数值，阳性均检出，管4的内参Ct也检出。管4的优点是可以监控假阴性事件的发生，一旦内参为阴性，说明标本提取过程出了问题或者加样错误、或者实时扩增仪该扩增孔出了问题。
以上所述例子仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
KL001：5’-ctg tga gga act wct gtc ttc acg-3’
KL002: 5’-ccg cag acc act atg gct ct-3’
KL101: 5’-FAM-cta gcc atg gcg tta gta yga gtg tcg-BHQ1-3’
NC201：5’-gag tag tgt tgg gtc gcg aa -3’
NC202：5’-gag tag cgt tgg gtt gcg aa -3’
NC203：5’-ggt gca cgg tct acg agr cct-3’
NC204: 5'- FAM-tcgcaagcrccctatcaggcag-BHQ1-3’
Claims (2)
1.一种HCV RNA检测试剂盒，其特征在于使用两个保守区的引物探针组合，该两个保守区分别位于5’NCR的前端(1-150nt)及后端延伸至Core区(C区的N端100bp以内)。
2.根据权利要求说明书1所述的引物探针具备如下特征：
KL001：5’-ctg tga gga act wct gtc ttc acg-3’
KL002:5’-ccg cag acc act atg gct ct-3’
KL101:5’-FAM-cta gcc atg gcg tta gta yga gtg tcg-BHQ1-3’
NC201：5’-gag tag tgt tgg gtc gcg aa-3’
NC202：5’-gag tag cgt tgg gtt gcg aa-3’
NC203：5’-ggt gca cgg tct acg agr cct-3’
NC204:5'-FAM-tcgcaagcrccctatcaggcag-BHQ1-3’
上述任意组合的引物探针对均为本发明的主要内容，对其采用技巧性的修饰或标记均在本发明要求的权利之内。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710014636.5A CN106929603A (zh) | 2017-01-10 | 2017-01-10 | 一种改良型hcv rna检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710014636.5A CN106929603A (zh) | 2017-01-10 | 2017-01-10 | 一种改良型hcv rna检测试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106929603A true CN106929603A (zh) | 2017-07-07 |
Family
ID=59444081
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710014636.5A Pending CN106929603A (zh) | 2017-01-10 | 2017-01-10 | 一种改良型hcv rna检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106929603A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1274757A (zh) * | 1999-02-03 | 2000-11-29 | 奥索临床诊断有限公司 | 有效检测丙型肝炎病毒(hcv)的寡核苷酸引物及其应用方法 |
| CN102559930A (zh) * | 2012-01-16 | 2012-07-11 | 中山大学达安基因股份有限公司 | 一种荧光定量rt-pcr检测丙型肝炎病毒的试剂盒 |
-
2017
- 2017-01-10 CN CN201710014636.5A patent/CN106929603A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1274757A (zh) * | 1999-02-03 | 2000-11-29 | 奥索临床诊断有限公司 | 有效检测丙型肝炎病毒(hcv)的寡核苷酸引物及其应用方法 |
| CN1827780A (zh) * | 1999-02-03 | 2006-09-06 | 奥索临床诊断有限公司 | 有效检测丙型肝炎病毒(hcv)的寡核苷酸引物及其应用方法 |
| CN102559930A (zh) * | 2012-01-16 | 2012-07-11 | 中山大学达安基因股份有限公司 | 一种荧光定量rt-pcr检测丙型肝炎病毒的试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2969574T3 (es) | Composición, kit y método para detectar y tipificar virus que provocan una infección del tracto respiratorio y aplicación de composición, kit y método | |
| Pyke et al. | Detection of Australasian Flavivirus encephalitic viruses using rapid fluorogenic TaqMan RT-PCR assays | |
| Li et al. | SARS-coronavirus replicates in mononuclear cells of peripheral blood (PBMCs) from SARS patients | |
| CN104342503B (zh) | 一种同时检测12种常见呼吸道病毒的方法 | |
| CN105695631B (zh) | 人免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒快速联检试剂盒及其制备和应用 | |
| Nyan et al. | A method for rapid detection and genotype identification of hepatitis C virus 1–6 by one-step reverse transcription loop-mediated isothermal amplification | |
| CN101487062A (zh) | 同步检测肝炎、艾滋病毒和梅毒螺旋体核酸的试剂盒 | |
| Bartolomé et al. | Detection of hepatitis C virus in thyroid tissue from patients with chronic HCV infection | |
| CN110273027A (zh) | 诺如病毒gⅰ、gⅱ和gⅳ型核酸分型检测试剂盒及检测方法 | |
| CN109517927A (zh) | 一种甲型、乙型流感病毒快速分型检测试剂盒及其应用 | |
| CN107557496A (zh) | 一种用于检测MERS‑CoV病毒的荧光RT‑RAA引物、探针及检测方法 | |
| CN108034764A (zh) | 多重pcr检测柯萨奇病毒、肠道病毒71型和肠道病毒通用型用引物探针组 | |
| CN109609689A (zh) | 用于检测肠道病毒的核酸试剂、试剂盒及系统 | |
| CN102559930A (zh) | 一种荧光定量rt-pcr检测丙型肝炎病毒的试剂盒 | |
| CN101649356B (zh) | 甲型h1n1流感病毒荧光定量检测试剂盒及检测方法 | |
| CN109182600A (zh) | 一种同步检测乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒1型的荧光定量pcr试剂盒 | |
| Ponamgi et al. | Prevalence of hepatitis C virus (HCV) coinfection in HIV infected individuals in south India and characterization of HCV genotypes | |
| CN101328507A (zh) | 肠道病毒ev71核酸荧光定量rt-pcr检测试剂盒及检测方法 | |
| CN111621595A (zh) | 新型冠状病毒qRT-PCR一步法试剂盒反应液及其试剂盒和方法 | |
| CN105483289B (zh) | 一种肠道病毒三重直接荧光rt-pcr的检测试剂盒和反应体系 | |
| CN110106283B (zh) | 一种水产养殖动物病毒的高通量定量检测试剂盒 | |
| CN103225000B (zh) | 禽流感h7n9病毒检测试剂及检测试剂盒 | |
| CN102994648B (zh) | 一种基于毛细电泳的呼吸道病毒的多重基因检测方法 | |
| CN112501358B (zh) | 一种用于检测9种儿童消化道病原体的引物探针组合及试剂盒 | |
| CN106929603A (zh) | 一种改良型hcv rna检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Zhou Kelong Document name: Deemed not to have provided notice |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170707 |