CN106957826B - 一种病毒灭活剂及其应用 - Google Patents
一种病毒灭活剂及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106957826B CN106957826B CN201710148704.7A CN201710148704A CN106957826B CN 106957826 B CN106957826 B CN 106957826B CN 201710148704 A CN201710148704 A CN 201710148704A CN 106957826 B CN106957826 B CN 106957826B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- virus
- filtering
- filtrate
- precipitate
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 81
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 claims abstract description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims abstract description 6
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims abstract description 6
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 claims abstract description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 21
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 18
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 13
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 11
- KJPRLNWUNMBNBZ-QPJJXVBHSA-N (E)-cinnamaldehyde Chemical compound O=C\C=C\C1=CC=CC=C1 KJPRLNWUNMBNBZ-QPJJXVBHSA-N 0.000 claims description 10
- 229940117916 cinnamic aldehyde Drugs 0.000 claims description 10
- KJPRLNWUNMBNBZ-UHFFFAOYSA-N cinnamic aldehyde Natural products O=CC=CC1=CC=CC=C1 KJPRLNWUNMBNBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 2
- 235000020230 cinnamon extract Nutrition 0.000 abstract description 18
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 abstract description 2
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 abstract description 2
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 abstract description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 29
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 241000723347 Cinnamomum Species 0.000 description 16
- 235000017803 cinnamon Nutrition 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 6
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 5
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 244000080208 Canella winterana Species 0.000 description 3
- 235000008499 Canella winterana Nutrition 0.000 description 3
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 3
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 229940017545 cinnamon bark Drugs 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 244000037364 Cinnamomum aromaticum Species 0.000 description 2
- 235000014489 Cinnamomum aromaticum Nutrition 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000012200 cell viability kit Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 102000016912 Aldehyde Reductase Human genes 0.000 description 1
- 108010053754 Aldehyde reductase Proteins 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 235000021511 Cinnamomum cassia Nutrition 0.000 description 1
- 244000223760 Cinnamomum zeylanicum Species 0.000 description 1
- 235000004310 Cinnamomum zeylanicum Nutrition 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 241000037488 Coccoloba pubescens Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000628997 Flos Species 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 206010069767 H1N1 influenza Diseases 0.000 description 1
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000032376 Lung infection Diseases 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 244000184734 Pyrus japonica Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 244000000001 Virome Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003171 anti-complementary effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000012054 celltiter-glo Methods 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000065 noncytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000005727 virus proliferation Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16061—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2710/16063—Methods of inactivation or attenuation by chemical treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/10061—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2740/10063—Methods of inactivation or attenuation by chemical treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16161—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2760/16163—Methods of inactivation or attenuation by chemical treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16261—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2760/16263—Methods of inactivation or attenuation by chemical treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16311—Influenzavirus C, i.e. influenza C virus
- C12N2760/16361—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2760/16363—Methods of inactivation or attenuation by chemical treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18061—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2760/18063—Methods of inactivation or attenuation by chemical treatment
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种病毒灭活剂及其应用。所述的病毒灭活剂为终浓度0.5~1mg/ml的肉桂提取物。应用为所述的病毒灭活剂在制备灭活副黏液病毒、疱疹病毒、逆转录病毒以及流感病毒药物中的应用。本发明公开了一种肉桂提取物（KPC‑rg1）的病毒灭活作用，经研究表明，该种提取物在常温下即可以与病毒外壳的包膜蛋白发生迅速、强力结合，从而使病毒灭活、失去感染和扩增能力，但保有抗原性。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种病毒灭活剂及其应用。
背景技术
目前国内外应用的主要疫苗包括弱毒疫苗和灭活疫苗。由于灭活疫苗的生产工艺简单、安全、使用方便、易于保存、能刺激动物产生高滴度抗体和显著的疫苗保护效果等优点，因此开发优质高效的灭活疫苗是防控各种病毒感染疾病的最有效手段。灭活疫苗，顾名思义就是要将具有感染性的活的病原体用适当的物理或化学方法灭活，使其丧失致病性，但仍保留其免疫原性，用其制造的疫苗。
传统的病毒灭活剂甲醛，是一种有强烈刺激性的致癌物质。其既可作用于病毒含氨基的核苷酸碱基，又可作用于病毒壳蛋白。甲醛作用于病毒壳蛋白时，易使蛋白质发生交联或病毒颗粒聚集，从而使病原体蛋白的中和免疫原性遭到严重破坏。且用甲醛灭活时间长，一般需要在 37 ～39℃处理 24h 以上或更长时间 ；残留的游离甲醛，若随疫苗注入机体后，会产生刺激性反应。因此，在保证灭活绝对安全的前提下，提高灭活速度、缩短灭活时间，降低有效抗原的损失，一直是新型病毒灭活剂的开发目标。
肉桂是我国常用中药材，始载于《神农本草经》，列为上品，历代重要本草均有记载。肉桂及其所含的成分具有多方面的药理作用，常见报道的包括抗菌、抗氧化、降血糖、抗醛糖还原酶、抗炎、抗补体、抗肿瘤活性，以及对消化系统、心血管系统、免疫系统、中枢神经、内分泌系统的调节作用。肉桂用于预防和治疗病毒感染的报道极少。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种病毒灭活剂；第二目的在于提供所述的病毒灭活剂的应用。
本发明的第一目的是这样实现的，所述的病毒灭活剂为终浓度0.5~1mg/ml的肉桂提取物。
本发明的第二目的是这样实现的，所述的病毒灭活剂在制备灭活副黏液病毒、疱疹病毒、逆转录病毒以及流感病毒药物中的应用。
本发明公开了一种肉桂提取物（KPC-rg1）的病毒灭活作用，经研究表明，该种提取物在常温下即可以与病毒外壳的包膜蛋白发生迅速、强力结合，从而使病毒灭活、失去感染和扩增能力，但保有抗原性。
本发明所述的肉桂包括：肉桂、大叶清化桂、锡兰肉桂、华南桂、钝叶桂、阴香、天竺桂、银叶桂、香桂、柴桂、川桂；优选的，所述肉桂包括：肉桂、大叶清化桂和锡兰肉桂；更优选的，所述肉桂包括：肉桂和大叶清化桂。
所述肉桂的植物部位为树皮。
本发明所述的灭活剂灭活病毒的方法是将待灭活的病毒液用本发明所述的病毒灭活剂进行4~37℃的灭活。
附图说明
图1为本发明病毒灭活剂肉桂提取物（KPC-rg1）对vero细胞增殖的抑制作用示意图；
图2为HSV-1及KPC-rg1预处理的HSV-1病毒感染细胞后对细胞形态的影响示意图；
图3为KPC-rg1处理后，HSV-1病毒滴度变化示意图；
图4为H1N1攻毒后小鼠体重的变化情况示意图；
图5为小鼠血清中针对H1N1病毒的血凝抑制效价示意图；
图6为感染后第3天和实验终点（28天）各组小鼠肺部H1N1病毒M基因RNA拷贝数示意图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
本发明所述的病毒灭活剂为终浓度0.5~1mg/ml的肉桂提取物。
所述的病毒灭活剂还包括肉桂提取物重量百分比1~5%的桂皮醛；
所述的肉桂提取物是在PH值为1~5的条件下制备得到的肉桂水提液。
所述的肉桂提取物是以肉桂为原料经前处理、提取、后处理步骤制备得到，具体包括以下步骤：
A、前处理：将原料肉桂粉碎过筛的的物料a备用；
B、提取：物料a中加入物料a重量3~30倍的水，于温度4~80℃下提取1~3次，每次1~24h，合并提取液得到提取液b；
C、后处理：将提取液b浓缩至相对密度为1.01~1.05得到浓缩液c，浓缩液c中加入酸性磷酸盐缓冲液中，以盐酸调节pH值至1~5，静置8~24h，取沉淀部分即为所述的肉桂提取物；加入沉淀部分重量百分比1~5%的桂皮醛混合均匀即为目标物病毒灭活剂。
所述的肉桂提取物是以肉桂为原料经前处理、提取、后处理步骤制备得到，具体包括以下步骤：
A、前处理：将原料肉桂粉碎过筛的的物料a备用；
B、提取：物料a中加入物料a重量3~12倍的水，于温度4~40℃下提取1~3次，每次1~8h，合并提取液得到提取液b；
C、后处理：将提取液b浓缩至相对密度为1.01~1.05得到浓缩液c，浓缩液c中加入pH值3~6的酸性磷酸盐缓冲液中，以盐酸调节pH值至2~4，静置8~24h，取沉淀部分即为所述的肉桂提取物；加入沉淀部分重量百分比1~5%的桂皮醛混合均匀即为目标物病毒灭活剂。
所述的肉桂提取物是以肉桂为原料经前处理、提取、后处理步骤制备得到，具体包括以下步骤：
A、前处理：将原料肉桂粉碎过筛的的物料a备用；
B、提取：物料a中加入物料a重量10倍的水，于温度20℃下提取3次，每次2h，合并提取液得到提取液b；
C、后处理：将提取液b浓缩至相对密度为1.01~1.05得到浓缩液c，浓缩液c中加入pH值6的酸性磷酸盐缓冲液中，以盐酸调节pH值至3，静置12h，取沉淀部分即为所述的肉桂提取物；加入沉淀部分重量百分比1~5%的桂皮醛混合均匀即为目标物病毒灭活剂。
本发明所述的病毒灭活剂的应用为所述的病毒灭活剂在制备灭活副黏液病毒、疱疹病毒、逆转录病毒以及流感病毒药物中的应用。
所述的病毒灭活剂在制备灭活副黏液病毒、疱疹病毒、逆转录病毒以及流感病毒疫苗中的应用。
所述的灭活副黏液病毒、疱疹病毒、逆转录病毒以及流感病毒疫苗的制备方法包括以下步骤：
A、制备抗原液；
B、在抗原液中加入浓度为0.5~1mg/ml的肉桂提取物充分混匀后，将混合液放置于温度为20~30℃的条件下震荡孵育5~10min得到目标物灭活疫苗；其中肉桂提取物和抗原液的配比比例为1 ：2.5（其中肉桂提取物以质量单位计，病毒以血凝单位计）。
所述的制备抗原液是将病毒按体积百分数1%~3%的接种量接种在宿主细胞中，当宿主细胞生长到40%~90%时，将培养液更换为维持液，维持观察48~72h后收集病毒得到抗原液。
所述的培养液是所述的培养液是根据病毒宿主细胞不同对应选择（病毒宿主细胞不同，培养基也不同）；所述的维持液是含2%胎牛血清的培养液。
下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：
实施例1 病毒灭活剂的制备
步骤一：将肉桂树皮粉碎，以3倍量水4 ℃浸泡提取1次，提取1小时。步骤二：滤过，取滤液，药渣备用。步骤三：滤液加入乙醇至乙醇含量达65%，静置。步骤四、离心，上清液备用并保存沉淀。步骤五：取步骤四中的上清液，减压浓缩，真空干燥。步骤六：加水溶解，过滤。步骤七：滤液以稀盐酸调PH值至5。步骤八：过滤，取沉淀，干燥。将步骤四和步骤八及市售桂皮醛按10:10:0.5的比例混合既得所述病毒灭活剂。
实施例2 病毒灭活剂的制备
步骤一：将肉桂树皮粉碎，以8倍量水常温（20 ℃）搅拌3次，每次两小时。步骤二：滤过，取滤液，药渣备用。步骤三：滤液加入乙醇至乙醇含量达80%，静置。步骤四、离心，上清液备用，保留沉淀部分。步骤五：将步骤四中的上清液，减压浓缩，真空干燥。步骤六：加水溶解，过滤。步骤七：滤液以稀盐酸调PH值至2。步骤八：过滤，取沉淀，干燥。将步骤四和步骤八及市售桂皮醛按10:10:0.5的比例混合既得所述病毒灭活剂。
实施例3 肉桂树皮总多糖、总多酚的制备
肉桂树皮总多糖的制备：步骤一：将肉桂树皮粉碎，以30倍量水80 ℃搅拌提取3次，每次24小时。步骤二：滤过，取滤液，药渣备用。步骤三：滤液加入乙醇至乙醇含量达90%，静置。步骤四、离心，上清液备用，保留沉淀部分。步骤五：将步骤四中的上清液，减压浓缩，真空干燥。步骤六：加水溶解，过滤。步骤七：滤液以稀盐酸调PH值至1。步骤八：过滤，取沉淀，干燥。将步骤四和步骤八及市售桂皮醛按10:10:0.5的比例混合既得所述病毒灭活剂。
实施例6
KPC-rg1对vero细胞增殖的抑制作用
vero细胞铺板96孔板，在37℃，5% C02培养箱过夜长满单层后，加入不同浓度的肉桂提取物（kpc-rg1），分别设置实验组、细胞对照组、空白对照组，48h后用CCK8试剂盒检测每个浓度下的OD值，根据公式计算细胞存活率。结果显示，当kpc-rg1的浓度小于0.05mg/ml时，对vero细胞无细胞毒作用。具体数据见图1。
实施例7
KPC-rg1对HSV-1病毒活性的抑制
将40ug/ml的KPC-rg1和Mol=0.1的HSV-1病毒液在4度共同孵育24小时，再加入到vero细胞铺板的96孔板中，同时设病毒对照和细胞对照( 不加病毒，只加培养基) ，培养24小时后于显微镜下观察细胞形态，并计算病毒悬液的TCID50值。结果显示，KPC-rg1对HSV-1病毒的灭活作用显著，并对vero细胞起到了很好的保护作用。具体实验结果见图2、图3。
实施例8
KPC-rg1对RSV病毒及HIV-1病毒的体外抗病毒活性测试
样品配制：KPC-rg1用无菌水溶至8 mg/ml并于80℃水浴中加热15分钟溶解。溶液于2000 RPM离心2分钟后取上清储存于4 ℃作为KPC-rg1母液。在EC50测定实验中，KPC-rg1和参照化合物被3倍倍比稀释测试8个浓度点，每个浓度测试双复孔。最高测试浓度为1000μg/ml。细胞培养基中的DMSO最终浓度为0.5%。并按下表的方法进行抗病毒活性测试：
表1 抗病毒实验方法列表
RSV Along病毒致细胞病变实验：细胞以一定密度（表1）接种到微孔板并于37℃，5% CO2培养箱中培养过夜。第二天，不同浓度的化合物和病毒（表1）的预混液加入细胞板中于37℃，5% CO2培养3-5天至病毒对照孔中的细胞病变完全。细胞活性随后使用CCK8细胞活力检测试剂盒按照检测试剂的说明进行检测。化合物不同浓度下的抗病毒活性由对病毒引起的细胞病变效应的抑制作用来决定。所有数据经空白感染对照校准。EC50由GraphPadPrism软件进行分析计算。
HIV-1病毒致细胞病变实验：测试化合物和参照化合物倍比稀释后与病毒（表1）混合，随后化合物和病毒的混合液与MT-4细胞加入微孔板并于33℃或37℃，5% CO2培养箱中培养2-6天至病毒对照孔中的细胞病变完全。细胞活性随后使用CCK8或CellTiter Glo细胞活力检测试剂盒按照检测试剂的说明进行检测。化合物在不同浓度下的抗病毒活性由对病毒引起的细胞病变效应的抑制作用来决定。EC50由GraphPad Prism软件进行分析计算。
结果显示，本实验所有抗病毒活性实验的参照化合物的抗病毒活性与预期符合，证明本实验结果可靠。KPC-rg1的抗病毒活性与阳性对照药类似，对两种病毒均有较好活性抑制作用，结果见表2。
表2. 肉桂提取物抗病毒活性列表
实施例9
验证KPC-rg1的抗流感病毒作用以及由于KPC-rg1诱导的“原位固化免疫效应”而产生的动物保护作用
实验材料与动物分组
测试样品：KPC-rg1
实验病毒株：H1N1 (A/Puerto Rico/8/1934)。病毒通过狗肾细胞进行繁殖。病毒株在-70℃储存前测得其HA滴定度（HAU）为256；实验用病毒为250HAU。
实验动物与分组：28-30天年龄的小鼠。
A)PBS对照组：6只小鼠。
B)病毒组（PR8攻毒组）：8只小鼠（250 HAU/只）。
C）KPC-rg1给药组，共8只小鼠。
实验方法
指定剂量的KPC-rg1（100ug /只）与病毒（250 HAU/只）室温下用适量的PBS预先混合培养5-10 min。28-30天年龄的小鼠接种预先混合好的KPC-rg1/病毒溶液或者病毒溶液。KPC-rg1/病毒在PBS中的总体积为50 ul/只小鼠。接种前麻醉。PBS做为空白对照。观察小鼠28天存活水平。并于实验终点（28天）眼球采血收集小鼠血清，进行红细胞凝集抑制实验（HI）检测小鼠血清中针对H1N1病毒的血凝抑制效价（HI titer）。血凝抑制结果≧20为阳性有效HI效价。n=3。同时于感染后第3天和实验终点（28天）获取鼠肺，提取肺总RNA，RT-PCR检测各组小鼠肺部H1N1病毒M基因RNA拷贝数。
实验结果
小鼠28天存活情况
表3 各组小鼠28天存活水平
攻毒组小鼠在攻毒后第三天出现死亡，攻毒后一周内死亡过半，存活率为37.5%（8只小鼠共计死亡5只）。KPC-rg1组在攻毒后未出现死亡，存活率百分之百。体重和生存结果揭示药物对小鼠有显著保护性效果。
小鼠体重变化情况见图4
对照PBS组小鼠体重稳定增长，而涉及病毒攻击的攻毒组、KPC-rg1组小鼠体重均在攻毒后下降，一周后体重逐渐恢复并上升。
小鼠血凝抑制效价（抗体水平）见图5
感染后28天，攻毒组、KPC-rg1组小鼠血清中均可检测出128的血凝抑制效价，表明病毒对小鼠的攻击使小鼠免疫系统产生了相应抗体和保护性。
小鼠肺部病毒载量检测见图6
攻毒后3天检测病毒感染肺部情况，各组小鼠肺部病毒载量均达到10的7次方每50mg肺，表明病毒在小鼠肺部感染增殖情况。实验终点28天时，攻毒组小鼠肺部病毒载量已检测不到，表明病毒已被小鼠免疫系统清除。上述结果揭示了病毒从感染再到清除的肺部感染进程。
综合上述结果，病毒在攻毒后对各组小鼠肺部均发生了感染，导致攻毒组小鼠在感染后一周内死亡过半。而KPC-rg1组小鼠未出现死亡现象，表明药物对H1N1流感病毒攻击小鼠有显著保护效果。感染后28天存活下来的攻毒组和药物组小鼠均有显著的抗体产生，病毒也已被机体免疫系统清除。
Claims (2)
1.一种病毒灭活剂，其特征在于病毒灭活剂的制备方法为：
步骤一：将肉桂树皮粉碎，以3倍量水于4℃浸泡提取1次，提取1小时；滤过，取滤液，药渣备用；滤液加入乙醇至乙醇含量达65%，静置；离心，上清液备用，保留沉淀部分；步骤二：取步骤一中上清液减压浓缩，真空干燥；加水溶解，过滤；滤液以稀盐酸调pH值至5；过滤，取沉淀，干燥；将步骤一、步骤二的沉淀与市售桂皮醛按10:10:0.5的比例混合，得所述病毒灭活剂；
或者，步骤一：将肉桂树皮粉碎，以8倍量水于20℃搅拌3次，每次2小时；滤过，取滤液，药渣备用；滤液加入乙醇至乙醇含量达80%，静置；离心，上清液备用，保留沉淀部分；步骤二：将步骤一中上清液减压浓缩，真空干燥；加水溶解，过滤；滤液以稀盐酸调pH值至2；过滤，取沉淀，干燥；将步骤一、步骤二的沉淀与市售桂皮醛按10:10:0.5的比例混合，得所述病毒灭活剂；
或者，步骤一：将肉桂树皮粉碎，以30倍量水于80℃搅拌提取3次，每次24小时；滤过，取滤液，药渣备用；滤液加入乙醇至乙醇含量达90%，静置；离心，上清液备用，保留沉淀部分；步骤二：将步骤一中上清液减压浓缩，真空干燥；加水溶解，过滤；滤液以稀盐酸调pH值至1；过滤，取沉淀，干燥；将步骤一、步骤二的沉淀与市售桂皮醛按10:10:0.5的比例混合，得所述病毒灭活剂。
2.一种权利要求1所述病毒灭活剂的应用，其特征在于所述病毒灭活剂在制备灭活副黏液病毒、疱疹病毒、逆转录病毒或流感病毒药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710148704.7A CN106957826B (zh) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | 一种病毒灭活剂及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710148704.7A CN106957826B (zh) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | 一种病毒灭活剂及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106957826A CN106957826A (zh) | 2017-07-18 |
| CN106957826B true CN106957826B (zh) | 2020-02-07 |
Family
ID=59470645
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710148704.7A Active CN106957826B (zh) | 2017-03-14 | 2017-03-14 | 一种病毒灭活剂及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106957826B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112294868B (zh) * | 2019-07-31 | 2023-11-21 | 昆明扬添生物科技有限公司 | 用于病毒灭活与卫生消毒、激活机体免疫能力产生的药物 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1897958A (zh) * | 2003-12-24 | 2007-01-17 | 特拉维夫大学拉玛特有限公司 | 从天然肉桂提取物中获得的抗病毒制剂 |
| CN101460066A (zh) * | 2006-03-23 | 2009-06-17 | 草药科学新加坡私人有限公司 | 含肉桂物种的提取物及方法 |
| CN106397624A (zh) * | 2016-11-03 | 2017-02-15 | 宜春学院 | 一种肉桂多糖的水提取方法 |
| CN106606539A (zh) * | 2016-12-16 | 2017-05-03 | 昆药集团股份有限公司 | 一种肉桂多酚组合物的应用 |
-
2017
- 2017-03-14 CN CN201710148704.7A patent/CN106957826B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1897958A (zh) * | 2003-12-24 | 2007-01-17 | 特拉维夫大学拉玛特有限公司 | 从天然肉桂提取物中获得的抗病毒制剂 |
| CN101460066A (zh) * | 2006-03-23 | 2009-06-17 | 草药科学新加坡私人有限公司 | 含肉桂物种的提取物及方法 |
| CN106397624A (zh) * | 2016-11-03 | 2017-02-15 | 宜春学院 | 一种肉桂多糖的水提取方法 |
| CN106606539A (zh) * | 2016-12-16 | 2017-05-03 | 昆药集团股份有限公司 | 一种肉桂多酚组合物的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106957826A (zh) | 2017-07-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113151191B (zh) | 鸽源基因VI型新城疫病毒rVI-HZ株及其应用 | |
| CN112791179B (zh) | 一种预防手足口病的联合疫苗及其制备方法和应用 | |
| CN113082049B (zh) | 碘化钾或含有碘化钾的组合物在制备用于治疗非洲猪瘟的药物中的新用途 | |
| CN112717128A (zh) | 一种预防手足口病的联合疫苗及其制备方法和应用 | |
| CN104250637B (zh) | 一株禽流感h9n2亚型病毒株及其应用 | |
| CN114984035A (zh) | 甘草多糖在制备抗猪伪狂犬病病毒感染制剂中的应用 | |
| CN117045667A (zh) | 金丝桃苷抗马疱疹病毒8型感染的用途 | |
| CN114377127B (zh) | 一种三联卵黄抗体制剂及其制备方法和应用 | |
| US20030054047A1 (en) | Pharmaceutical composition for the treatment of viral infection | |
| CN111973587B (zh) | 槲皮素在制备抗草鱼呼肠孤病毒药物中的用途 | |
| CN101695511A (zh) | 石榴皮提取物及其生产方法和应用 | |
| CN104257745A (zh) | 一种夏枯草多糖提取物及其制备方法、制剂和用途 | |
| CN107468682B (zh) | 芒果苷在制备抗病毒药物中的应用 | |
| CN102533673B (zh) | 鸡传染性法氏囊病超强毒的细胞适应株及其应用 | |
| CN102166276B (zh) | 一种防治甲型流感的中药组合物及其制备方法和用途 | |
| CN103735599B (zh) | 臭灵丹提取物及组合物在抗甲型病毒性流感药物中的应用 | |
| CN104758340B (zh) | 一种忍冬叶中咖啡酰奎宁酸类提取物及其制备方法和用途 | |
| CN106552148B (zh) | 一种抗h7n9禽流感病毒的药物组合物 | |
| CN106957826A (zh) | 一种病毒灭活剂及其应用 | |
| CN115227738B (zh) | 紫苏叶提取物在制备抗病毒药物中的用途 | |
| CN111603526A (zh) | 一种复方银花解毒药物在制备抗病毒药物中的应用 | |
| CN119326769B (zh) | 一种雷公藤红素在制备抗ehv-8药物中的应用 | |
| CN117018047B (zh) | 虎耳草水提取物在制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒药物中的应用 | |
| CN117205213B (zh) | 白鲜碱在制备鱼类病毒性神经坏死病药物中的用途 | |
| KR101679206B1 (ko) | 복합 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |