CN1113103C - 一种co2吸收指示剂及用之于幽门螺杆菌诊断的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
一种CO2吸收指示剂及使用该CO2吸收指示剂的14C-UBT曲门螺杆菌(Hp)诊断试剂盒，前者由吸收剂乙醇胺溶液和指示剂超高浓度酚酞指示剂组成，后者包括：每例检测用量低于1uCi的14C-Urea以及上述CO2吸收指示剂。即通过超高浓度的指示剂来使饱和吸收CO2的终点与指示剂的变色点吻合，使肉眼能轻易地通过颜色变化来判断CO2的吸收量，从而大大降低试剂成本及放射剂量，减少毒性和腐蚀性。
Description
本发明涉及应用化学，具体涉及医用化学试剂，更具体地说，涉及一种可用于液闪制样并能用目测法判断吸收量的CO2吸收指示剂及利用该吸收指示剂的超微剂量14C-UBT的幽门螺杆菌(Hp)诊断试剂盒。
在闪液医学和生物应用技术中，有时需要定量采集人体呼出的一定量的CO2，为了满足液闪测量以及采集的方便性等条件，要求所用的吸收剂具有如下特性：1)一定量的吸收剂能吸收一定量的CO2，并在自然环境下，吸收量和吸收后的产物保持稳定；2)可用目测法判断吸收过程的完成；3)吸收完成时吸收剂的颜色是无色的。4)低化学发光。现行国际上使用的能符合上述四项要求的二氧化碳吸收剂通常是以百里酚酞为指示剂的海胺甲醇溶液，海胺十分昂贵且有毒和腐蚀性，对其推广和应用十分不利。
另一方面，检测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori下简称Hp)对正确诊断消化道疾病病因，对正确治疗、根治疾病在临床上有重要意义。在现有的六种检测Hp的方法中，无痛苦、无创伤性方法有两种：血清学免疫分析方法和标记尿素的呼吸试验方法。在呼吸试验方法中，14C-Urea Breath Test(以下筒称14C-UBT)是能实时反映Hp感染现状的高度灵敏且特异的方法。时至今日，14C-UBT方法没有被广泛推广使用的主要原因是该方法所用的试剂成本太高，两种主要试剂14C尿素14C-Urea)和海胺(Hyamineor Benzethonium hydroxide)价格昂贵。
本发明的一个目的在于提供一种新型的CO2吸收指示剂，这种CO2吸收指示剂适合于液闪制样并能用目测法判断CO2吸收量，可以克服现用的海胺吸收剂的缺点，成本低，无毒性和腐蚀性。
本发明的另一目的在于提供一种利用本发明的CO2吸收指示剂构造的新型的幽门螺杆菌(Hp)诊断试剂盒，这种试剂盒可以克服现有技术的缺点，具有极低的成本，并有很好的安全性及使用便利性，从而使之能在发展中国家和经济欠发达地区普遍推广使用。
本发明的上述目的是通过以下技术途径实现的：1).将每次检测所用试剂中14C-Urea的用量从已报道过的最小用量1uCi降低到小于1uCi，甚至可以只用0.5uCi的剂量；2).在检测Hp的14C-UBT方法中，用乙醇胺(Ethanolamine)来代替常规使用的海胺(Hyamine or Benzethonium hydroxide)；3)用超高浓度指示剂，来解决乙醇胺饱和吸收CO2的终点不能用符合液闪制样要求的指示剂指示的问题。虽然，乙醇胺可以吸收CO2早已为人所共知，但是，之所以在14C-UBT中一直用昂贵的海胺，原因在于，在14C-UBT试验中，要求吸收剂不仅能吸收CO2，而且饱和吸收的终点必须能用肉眼可轻易分辨其颜色从有色变到无色(液闪测量要求终点是无色)的指示剂来指示，而且指示剂的变色点必需与吸收剂饱和吸收的终点相吻合。在现有技术中，以海胺配上百里酚酞(Thymolphthalein)指示剂(兰色变到无色)可满足上述要求；对于乙醇胺，若按常规的浓度使用指示剂，则尚未找到与之配合使用后能满足上述要求的指示剂。酚酞指示剂在乙醇胺甲醇溶液中呈轻微的红色，但按常规浓度使用指示剂，即每50ml溶液加约3滴0.1-0.2％浓度醇溶液的酚酞指示剂，每滴约50ul，所产生的颜色变化极为轻微，不易用肉眼分辨，更为重要的是，指示剂的变色点与乙醇胺饱和吸收CO2的终点不同，即变色点的pH值远高于饱和吸收的终点的pH值，因此不指示饱和吸收的终点；酚酞指示剂在乙醇胺水溶液中呈深红色，但吸收CO2饱和终点时仍不褪色，也不能满足要求。本发明利用较高浓度的一色指示剂会使变色点向较低pH方向移动的现象，用超高浓度即常用浓度的数十倍至数百倍的酚酞醇溶液作指示剂来使指示剂变色点与饱和吸收的终点吻合，同时使颜色的变化更加明显，易于观察。这样，未吸收CO2的乙醇胺甲醇溶液在此超浓指示剂作用下呈深红色，而到饱和吸收CO2的终点又能褪为无色，变色过程所需的时间适合于医疗诊断使用。满足了既能用肉眼通过颜色的变化看到饱和吸收的终点，又能符合液闪测量要求无色和低化学发光的要求。这样就解决检测Hp的14C-UBT方法中必需使用海胺而导致的高成本问题。
为实现本发明的第一个目的，构造一种CO2吸收指示剂由吸收剂和指示剂组成，其特征在于所述吸收剂是乙醇胺溶液或二乙醇胺溶液或三乙胺或乙二胺溶液，溶剂可以是无水甲醇、无水乙醇或乙二醇。所述指示剂是超高浓度酚酞指示剂，所述超高浓度酚酞指示剂在所述吸收指示剂中的浓度是(0.005-0.2)％(g/ml)。
按照本发明第一方面提供的CO2吸收指示剂，其特征在于所述乙醇胺溶液或二乙醇胺溶液或三乙胺溶液或乙二胺溶液的溶剂可以是无水甲醇、无水乙醇或乙二醇，浓度可以是1-4mol。
为实现本发明的第二个目的，构造一种利用本发明的CO2吸收指示剂进行14C-UBT幽门螺杆菌(Hp)诊断的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：每例检测用量低于1uCi的14C-Urea以及由吸收剂乙醇胺溶液和指示剂超高浓度酚酞指示剂组成的CO2吸收指示剂，所述超高浓度酚酞指示剂在所述吸收指示剂中的浓度是(0.005-0.2)％(g/ml)。
按照本发明第二方面提供的Hp诊断试剂盒，其特征在于，每例检测所用的14C-Urea用量可以是0.5uCi 。
按照本发明第二方面提供的Hp诊断试剂盒，其特征在于，所述超高浓度酚酞指示剂在所述吸收指示剂中的浓度最好是0.08％(g/ml)。
按照本发明第二方面提供的Hp诊断试剂盒，其特征在于乙醇胺溶液的溶剂可以是无水甲醇、无水乙醇或乙二醇，浓度可以是1-4mol。
按照本发明第二方面提供的Hp诊断试剂盒，其特征在于，所述由乙醇胺甲醇溶液和超高浓度酚酞指示剂组成的CO2吸收指示剂分装在多个(2的整数倍)液闪计数瓶内，所述试剂盒还包括装有浓缩闪烁液(属现有技术)的容器，只要向该浓缩闪烁液中加入其体积2.5-3倍的的二甲苯或甲苯，即可使用，所述试剂盒还包括装有14C-Urea的容器。
实施本发明提供的CO2吸收指示剂，比传统的CO2吸收剂，具有成本大大降低且无毒性无污染的优点，而根据本发明实施的利用上述CO2吸收指示剂构造的幽门螺杆菌诊断试剂盒，与现有的测Hp的14C-UBT法相比，具有如下的优点：试剂成本降至原来的1/3以下，患者所受放射剂量减小，且乙醇胺与海胺甲醇溶液相比没有毒性和腐蚀性，更便于操作。
结合本发明的最佳实施方案，进一步说明本发明的特点：
按照本发明提供的CO2吸收指示剂(超高浓度酚酞指示剂配合下的乙醇胺醇溶液)同样适用于作为其它呼吸试验(Breath Test)方法的CO2吸收剂。
按照本发明提供的14C-UBT幽门螺杆菌(Hp)诊断试剂盒，是用超高浓度酚酞指示剂配合下的乙醇胺甲醇溶液代替海胺甲醇溶液(在百里酚酞指示剂配合下)作为诊断Hp的14C-UBT方法中的CO2吸收剂，而且每例的14C-Urea用量可以低于1uCi，甚至每例检测所用的14C-Urea用量可以是0.5uCi。其中指示剂在溶液中的浓度为(0.005-0.2)％(g/ml)，最佳为0.08％，这个浓度是常规浓度的数十倍至数百倍(通常，每50ml溶液中滴入0.1％(g/ml)浓度的酚酞指示剂3-4滴，每滴约50ul)，溶剂可以是醇类两性溶剂。可将酚酞干粉直接按上述比例投入吸收剂溶液中，使之溶解(以吸收剂溶液中的甲醇为溶剂)。所述乙醇胺溶液的溶剂可以是无水甲醇也可以是无水乙醇或乙二醇，其浓度可以是1-4mol。
在本发明提供的Hp诊断试剂盒中，乙醇胺甲醇溶液已被分装在液闪计数瓶内。盒内配备有浓缩闪烁液，只要向该浓缩闪烁液中加入其体积2.5-3倍的的二甲苯或甲苯，即可使用。
实施方案一
1.试剂用量：
(1)14C-Urea用1uCi；
(2)吸收剂与指示剂：吸收剂用2M浓度的乙醇胺无水甲醇溶液，将酚酞干粉加入吸收剂溶液中使之在溶液中的浓度为0.08％(g/ml)将这样配制出的吸收剂称为标准吸收剂。
2.使用方法：
步骤1：将1uCi的14C-Urea溶在约25ml蒸馏水中备用，并准备好两瓶各装有2ml标准吸收剂的液闪瓶(旋紧盖子)；
步骤2：清晨空腹漱口后，通过软管向一液闪瓶中的吸收剂呼气，至瓶内液体从红色变成无色，拧紧盖，作为本底瓶；
步骤3：一口喝下溶有1uCi的14C-Urea的蒸馏水，再另外用一杯蒸馏水漱口；
步骤4：静坐20分钟；
步骤5：向另一液闪瓶中的吸收剂吹气至完全褪色，拧紧瓶盖；
步骤6：向每液闪瓶加入4.5ml稀释后的本试剂盒配备的浓缩闪烁液，并上液闪仪测量；
步骤7：测量结果若大于等于250dpm/mmol CO2，则诊断为阳性。
实施方案二：
1.试剂用量：除了14C-Urea用量为0.5uCi外，其余同方案一。
2.步骤：除了静坐时间改为10分钟，阳性阈值为100dpm/mmolCO2外，其余同实施方案一。
Claims (7)
1.一种CO2吸收指示剂，由吸收剂和指示剂组成，所述吸收剂是乙醇胺溶液或二乙醇胺溶液或三乙醇胺溶液或乙二胺溶液，所述指示剂是酚酞指示剂，其特征在于：所述酚酞指示剂在所述吸收指示剂中的浓度是0.005-0.2％(g/ml)。
2.根据权利要求1所述的CO2吸收指示剂，其特征在于，所述乙醇胺溶液或二乙醇胺溶液或三乙醇胺溶液的溶剂是无水甲醇、无水乙醇或乙二醇，浓度是1-4mol。
3.一种用于进行14C-UBT幽门螺杆菌(Hp)诊断的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：每例检测用量低于1uCi的14C-Urea，以及由吸收剂乙醇胺溶液和指示剂酚酞指示剂组成的CO2吸收指示剂，所述酚酞指示剂在所述吸收指示剂中的浓度是0.005-0.2％(g/ml)。
4.根据权利要求3所述诊断试剂盒，其特征在于，每例检测所用的14C-Urea用量是0.5uCi。
5.根据权利要求3所述诊断试剂盒，其特征在于，所述酚酞指示剂在所述吸收指示剂中的浓度是0.08％(g/ml)。
6.根据权利要求3所述诊断试剂盒，其特征在于，所述乙醇胺溶液的溶剂可以是无水甲醇，也可以是无水乙醇或乙二醇，浓度可以是1-4mol。
7.根据权利要求3所述诊断试剂盒，其特征在于，所述由乙醇胺甲醇溶液和酚酞指示剂组成的CO2吸收指示剂分装在多个液闪计数瓶内，所述试剂盒包括装有14C-Urea的容器以及装有浓缩闪烁液的容器，只要向其中的浓缩闪烁液中加入其体积2.5-3倍的的二甲苯或甲苯即可使用。
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