CN113473992A

CN113473992A - 用于治疗和预防中性粒细胞胞外陷阱相关并发症的化合物

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Publication number: CN113473992A
Application number: CN201980092942.8A
Authority: CN
Inventors: 克里斯托弗·帕里什; 康纳·奥米拉; 露西·库普兰; 本杰明·朱·济·柯; 法尔扎内·科德巴赫; 安娜·贝佐斯; 安娜·布朗; 罗斯·史蒂芬斯; 格雷戈里·大卫·特雷德威尔; 李·安德鲁·菲利普; 凯伦·诺克斯; 劳伦斯·马克·冯·伊茨斯坦; 张智为; 安妮·布鲁斯特尔; 戴维·阿纳克·西蒙·戴维斯
Original assignee: Australian National University; Griffith University
Current assignee: Australian National University; Griffith University
Priority date: 2019-02-25
Filing date: 2019-02-25
Publication date: 2021-10-01
Also published as: US20220168327A1; IL285828B2; US12239650B2; IL285828B1; AU2019431212A1; JP2022530732A; EP3930726A4; KR20210132032A; EA202192345A1; BR112021016812A2; CA3130405A1; SG11202109032SA; EP3930726A1; WO2020172698A1; AU2019431212B2; IL285828A

Abstract

本发明涉及具有高化学稳定性的化合物和用于抑制受试者中NET病理活性的方法。特别地，本发明涉及具有高化学稳定性的化合物、其用途和用于抑制或改善NET介导的疾病(例如败血症、全身免疫反应综合征(SIRS)和缺血再灌注损伤(IRI))的方法。更具体地，本发明涉及在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷的方法和用途，其中取代基的存在导致分子具有高化学稳定性而不影响该分子有效治疗NET介导的疾病的能力。例如，本发明涉及β‑O‑甲基纤维二糖苷硫酸盐(mCBS)或其药学上可接受的盐(例如mCBS.Na)在治疗受试者中一系列NET介导的疾病中的方法和用途。

Description

用于治疗和预防中性粒细胞胞外陷阱相关并发症的化合物

技术领域

本发明涉及用于抑制受试者的中性粒细胞胞外陷阱(NET)的病理活性的化合物和方法。具体地，本发明涉及用于抑制或改善NET介导的疾病(例如败血症、全身免疫反应综合征(SIRS)和缺血再灌注损伤(IRI))的化合物、用途和方法。更具体地，本发明涉及聚阴离子硫酸化纤维二糖苷的方法和用途。优选地，聚阴离子硫酸化纤维二糖苷在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性，其中，取代基的存在导致分子具有高化学稳定性而不影响分子有效治疗NET介导的疾病的能力。例如，本发明涉及硫酸纤维二糖苷(CBS)、β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐(mCBS)或其药学上可接受的盐在治疗受试者的一系列NET介导的疾病中的方法和用途。

背景技术

中性粒细胞是先天免疫粒细胞(最丰富的白细胞)，其在病原体清除、免疫调节和疾病病理学中具有核心作用。它们通过吞噬作用、活性氧(ROS)生成和从中性粒细胞中释放杀微生物分子(脱粒)等机制消除致病因子。

中性粒细胞还挤出染色质纤维的网状结构，该网状结构装饰有颗粒衍生的抗微生物肽和酶，例如中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、组织蛋白酶G和髓过氧化物酶(MPO)。这些挤压结构称为中性粒细胞胞外陷阱(NET)。

NET的一个目的是使用病原体的高局部浓度抗微生物成分解除病原体的武装。因此，NET代表了一种固定和杀死入侵生物的重要策略。NET支架由直径为15nm至17nm的网状染色质纤维组成；DNA和组蛋白代表主要的NET成分。

除了它们的抗微生物特性之外，NET还充当防止病原体和潜在有害蛋白质传播的物理屏障。例如，将颗粒蛋白吸收到NET中可以防止潜在的有害蛋白质(如蛋白酶)从损伤处扩散开，从而在炎症部位附近的组织中引起损伤。

NET的形成和释放被认为出现在两种可能的情况下：

a.NETosis，一种独特的活性细胞死亡形式，特征为将去浓缩的染色质和颗粒内容物释放到细胞外空间。在NETosis期间，核膜和颗粒膜溶解，核内容物去浓缩到细胞质中。随后是质膜破裂和用颗粒蛋白装饰的染色质释放到细胞外空间；

b.来自完整中性粒细胞的DNA/丝氨酸蛋白酶挤出机制，其中线粒体DNA释放显然与细胞死亡无关。

NETosis主要是响应微生物诱因和内源性危险信号而诱导的，包括促炎细胞因子(TNF-α、IL-8)、血小板、活化的内皮细胞(EC)、一氧化氮、尿酸钠晶体和各种自身抗体。通常，该过程受到严格调控，以防止在急性炎症或慢性炎症和自身免疫性疾病期间过度组织损伤。

尽管NET的形成是先天免疫反应不可或缺的一部分，提供了对抗疾病的有益策略，但NET也在各种传染性和非传染性病理状态(例如缺氧或无菌炎症)的中心扮演重要角色。在这方面，NET由于其结构和性质是具有免疫效应和促炎作用的分子的假定来源，在易感个体中，可以促进一系列传染性和非传染性疾病、炎症、组织损伤和自身免疫。当它们形成过量时，NET会对内皮和下层组织造成伤害。这种损伤通常是由内源性和微生物来源的核酸酶降解NET造成的。当NET降解时，它们会释放组蛋白，这些组蛋白不仅对微生物而且对宿主上皮细胞和内皮细胞都具有细胞毒性。

NET已直接涉及一系列医学病症，包括或与之相关，例如且仅作为说明：对感染(包括细菌、病毒和寄生虫)的过度炎症反应，在败血症、先兆子痫、炎症性肠病溃疡性结肠炎患者的结肠粘膜期间，与感染恶性疟原虫(疟疾)的儿童产生IgG抗核双链DNA抗体有关；纤维化，其中功能性实质器官组织被纤维化组织取代，可严重削弱器官功能、输血相关的急性肺损伤、深静脉血栓形成和癌症。

尽管现代抗生素在临床上使用，但由于NET相关疾病的无效治疗，仍然存在显著水平的发病率和死亡率。因此，迫切需要能够中和过量NET的破坏作用而不妨碍中性粒细胞的有益作用的药物。

迄今为止，缺乏治疗NET诱发疾病的化合物。正是在这种背景下以及对NET在多种疾病中的作用的日益认识，产生了本发明。

发明内容

本发明基于以下发现：如本文所述的某些抗NET聚阴离子化合物与动物循环中的NET发生静电相互作用以中和NET的细胞病变特性。这种聚阴离子分子与活体动物循环中的NET络合提供了一种至少改善NET细胞毒活性的手段。

具体地，本发明人已确定某些硫酸化二糖可有效中和NET的病理作用。例如，聚阴离子硫酸化纤维二糖苷在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接取代基改性，提供了一种化学稳定的聚阴离子，能够为NET相关并发症(例如败血症、SIRS和IRI以及至少改善患者的这些病症)提供高效的治疗。

在其还原末端用小的不带电荷的取代基改性的硫酸化纤维二糖苷的用途，具有化学稳定性，提出或提供了在治疗患有NET相关并发症的患者和/或预防高危患者发生NET相关并发症的领域中的新的一般应用原则。

在本发明的第一方面，提供了一种用于治疗或预防受试者中至少一种NET相关并发症的化合物，该化合物包括：聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

优选地，当聚阴离子硫酸化纤维二糖苷被改性时，它理想地在聚阴离子硫酸化纤维二糖苷的还原末端具有小的不带电荷的糖苷连接的取代基。相对于在其还原端被硫酸化的相同聚阴离子，这改进了聚阴离子的化学稳定性。

当本发明的化合物以治疗或药学有效量存在时，提供了一种用于改善、治疗或预防NET相关并发症的手段。

在本发明的一个实施例中，改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷，具有一般结构：

其中：

R1是硫酸盐基团或小的不带电荷的糖苷连接的取代基，例如O-或S-(C_1-6)烷基；以及

R2至R8均选自：(i)小的不带电荷的O-连接的取代基或(ii)硫酸盐基团。

优选地，R1是O-或S-(C_1-6)烷基。当R1为O-或S-(C_1-6)烷基时，与在R1处具有硫酸盐基团的相同聚阴离子相比，取代基提高了聚阴离子的化学稳定性。

优选地，R2至R8均选自：(a)未改性的羟基；或(b)硫酸盐基团。

更优选地，R1是甲氧基或乙氧基并且R2至R8均是硫酸盐基团。

期望地，该类化合物具有高净负电荷，即它是聚阴离子。

小的不带电荷的糖苷取代基(R1)的异头构型可以在α或β位置。优选地，小的不带电荷的取代基处于β构型。

在本发明的高度优选的形式中，该化合物是CBS、mCBS或其药学上可接受的盐，当该化合物是mCBS时，其理想地是硫酸化的β-O-甲基纤维二糖二糖。举例来说，当化合物是mCBS时，它理想地是β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐，即β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐钠(mCBS.Na)。

mCBS是优选的，因为它相对于CBS高度稳定并且在高浓度下耐受性良好。

在本发明的第二方面，提供了一种用于治疗(治疗性或预防性地)受试者中涉及NET的医学病症、病痛或疾病的方法，该方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

在本发明的第三方面，提供了一种改善受试者中NET积累的方法，该方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

在本发明的第二或第三方面的一实施例中，所选择的化合物优选是在还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷。更优选地，相对于在其还原端被硫酸化的相同聚阴离子，小的不带电荷的糖苷连接的取代基提高了聚阴离子的化学稳定性。具体地，当化合物是mCBS时，它是硫酸化的β-O-甲基纤维二糖苷二糖或β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐，即mCBS.Na。

例如，在本发明的第二或第三方面的一实施例中，该方法用于治疗或预防与NET相关并发症例如败血症、SIRS或IRI相关的病症或疾病。

在根据本发明的第二或第三方面的某些示例性实施例中，该方法可以进一步包括以下步骤：与改性的硫酸化纤维二糖苷一起或伴随给予受试者治疗或药学有效量的选自以下的第二活性剂、化合物或组合物：一种或多种抗炎剂、抗生素剂、抗病毒剂、抗真菌剂和/或任何其他形式的药物组合物，其治疗患有或有患病风险的受试者的一种或多种病症。

根据该实施例，第二活性剂、化合物或组合物为针对NET相关并发症(例如败血症、SIRS或IRI)和/或与此类并发症相关的医学病症或疾病的治疗提供辅助治疗。优选地，第二活性剂、化合物或组合物包含一种或多种抗炎剂。

优选地，第二活性剂提供了对患者所患疾病的医学干预手段，该疾病与用本发明化合物治疗的医学疾病相关或不同，第二活性剂为患者提供辅助治疗。

在本发明的第四方面，提供了一种用于治疗或预防受试者的与NET细胞毒性相关的医学病症或疾病的方法，该方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

在本发明的第四方面的一实施例中，所选择的化合物优选是在还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷。更优选地，相对于在其还原端被硫酸化的相同聚阴离子，小的不带电荷的糖苷连接的取代基提高了聚阴离子的化学稳定性。具体地，当化合物是mCBS时，它是硫酸化的β-O-甲基纤维二糖苷二糖或β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐，即mCBS.Na。

在本发明第四方面的一个优选实施例中，该方法用于中和(i)对受试者的内皮具有细胞毒性的NET和/或(ii)导致受试者的内皮功能障碍的NET。

此外或可选地，该方法用于治疗败血症或SIRS病症或IRI或与败血症、SIRS或IRI相关的疾病，其由受试者在感染、炎症或缺氧或任何感染、炎症或缺氧反应后在受试者中释放NET引起或介导。

在本发明的第五方面，提供了一种用于治疗NET相关并发症的治疗或药物组合物，其包含：至少一种聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

在本发明第五方面的一实施例中，所选择的化合物优选是在还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷。更优选地，相对于在其还原端被硫酸化的相同聚阴离子，小的不带电荷的糖苷连接的取代基提高了聚阴离子的化学稳定性。具体地，当化合物是mCBS时，它是硫酸化的β-O-甲基纤维二糖苷二糖或β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐，即mCBS.Na。

优选地，化合物以治疗或药学有效量存在于治疗或药物组合物中。组合物还可包括治疗或药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。治疗或药物中的化合物是中性游离碱形式或盐形式。优选地，聚阴离子硫酸化纤维二糖苷化合物是mCBS或更具体地是β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐。

在某些示例性实施例中，根据本发明的第五方面，该组合物还可以包括选自以下的第二活性剂、化合物或组合物：一种或多种抗炎剂、抗生素剂、抗病毒剂、抗真菌剂和/或治疗受试者患有的一种或多种病症的任何其他形式的治疗或药物化合物。

根据该实施例，第二活性剂、化合物或组合物理想地为败血症、SIRS或IRI或与败血症、SIRS或IRI相关的医学病症或疾病提供辅助疗法。优选地，第二活性剂、化合物或组合物包含一种或多种抗炎剂。

在本发明的第六方面，提供了治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐的用途，在制造用于治疗涉及NET的医学病症、病痛或疾病的药物。

在本发明的第六方面的一实施例中，所选择的化合物优选是在还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷。更优选地，相对于在其还原端被硫酸化的相同聚阴离子，小的不带电荷的糖苷连接的取代基提高了聚阴离子的化学稳定性。具体地，当化合物是mCBS时，它是硫酸化的β-O-甲基纤维二糖苷二糖或β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐，即mCBS.Na。

例如，在本发明的第六方面的一实施例中，提供了治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐的用途，在制造用于治疗或预防受试者的败血症、SIRS或IRI或与败血症、SIRS或IRI相关的医学病症或疾病的药物中。优选地，改性的硫酸化纤维二糖苷是mCBS或更具体地是其药学上可接受的盐，例如mCBS.Na。

在这种用途的一实施例中，该药物用于治疗受试者的败血症或SIRS或与败血症或SIRS相关的医学病症或疾病，其中所述治疗改善或抑制所述败血症或SIRS或与所述败血症或SIRS相关的所述病症或疾病。

在这种用途的另一实施例中，该药物用于治疗受试者的IRI或与IRI相关的医学病症或疾病，其中所述治疗改善或抑制所述IRI或与所述损伤相关的所述病症或疾病。

在这种用途的又一实施例中，该药物用于中和NET，这些NET(i)对受试者的内皮细胞具有细胞毒性，或(ii)导致受试者的内皮功能障碍，或(iii)通过激活受试者的血小板引发凝血，或(iv)诱导受试者的红细胞脆性和由此产生的贫血。

在又一实施例中，制造的药物还可包括治疗或药学有效量的第二活性剂、化合物或组合物。根据该实施例，第二活性剂、化合物或组合物提供用于治疗涉及NET的医学病症、病痛或疾病的辅助疗法。理想地，第二活性剂、化合物或组合物提供用于治疗败血症、SIRS或IRI或用于与败血症、SIRS或IRI相关的医学病症或疾病的辅助疗法。优选地，第二活性剂选自：一种或多种抗炎剂、抗生素剂、抗病毒剂、抗真菌剂和/或治疗受试者患有的一种或多种病症的任何其他形式的治疗或药物化合物。更优选地，第二活性剂、化合物或组合物包含一种或多种抗炎剂。

当改性的硫酸化纤维二糖苷化合物用于本发明的任何方法中时，该化合物可以以单剂量的制剂给药或配制用于给药至有需要的受试者。在某些替代实施例中，改性的硫酸化纤维二糖苷化合物作为多剂量制剂给药或配制用于给药至有需要的受试者。

附加的目的、优点和新颖特征将在随后的描述中阐述，或者在检查附图和随后的几个非限制性实施例的随后详细描述后对于本领域技术人员来说将变得显而易见。

附图说明

参考以下附图，本公开将在优选实施例的以下描述中提供细节。

图1为所选化合物的化学结构。

图2示出了聚阴离子在抑制组蛋白介导的病理学方面与肝素一样有效的最低结构要求。a，抑制曲线显示硫酸化二糖mCBS和硫酸化三糖MTS在抑制组蛋白介导的HMEC-1细胞毒性方面与肝素一样有效，而硫酸化单糖、葡萄糖过氧硫酸盐和甲基β-葡萄糖苷过氧硫酸盐则表现出很少或没有抑制活性。b，在检查组蛋白诱导的红细胞脆性的抑制时获得的类似结果。数据为平均值±s.e.m.(n＝3个生物学重复)。

图3示出了组蛋白促进红细胞聚集并降低红细胞变形能力，这些过程完全被SPA抑制。将人红细胞(RBC)在37℃下(“生理盐水”对照)，或在组蛋白(400μg/mL)存在，在有或没有mCBS(200μg/mL)的情况下孵育1小时。a，基于前向(FSC)和侧向(SSC)散射参数和适当的门控策略，通过流式细胞术测量的红细胞聚集百分比，以区分聚集的红细胞与正常的(非聚集的)红细胞。b，扫描电子显微照片，描绘了(a)中描述的三种处理后在低和高放大倍数下的红细胞聚集水平。c，mCBS和MTS对组蛋白介导的RBC聚集的浓度依赖性抑制，在这种情况下，RBC聚集通过流式细胞术计算为RBC自发荧光相对于没有组蛋白的RBC的倍数增加。倍数增加值还提供了对每个聚集体中RBC数量的估计。d，测量RBC变形能力的人造脾脏中红细胞的保留。在通过人工脾脏之前，将RBC与增加浓度的组蛋白孵育1小时，并在使用的最高浓度(400μg/mL)下与mCBS或MTS(100和200μg/mL)一起孵育。数据为平均值±s.e.m.(n＝3个生物学重复)。***P<0.001,****P<0.0001(单向方差分析与Dunnett多重比较检验)。

图4示出了SPA抑制组蛋白诱导的血小板聚集和脱粒。a，组蛋白诱导的分离血小板聚集。b，SPA抑制组蛋白(HIS)(150μg/mL)诱导的血小板聚集。c，全血中组蛋白诱导的血小板脱粒，通过ATP释放测量。虚线ATP从凝血酶激活的血小板中释放。d，SPA抑制组蛋白诱导的血小板脱粒。(a，b)中的数据是平均值±s.e.m(n＝3个生物学重复)。(c，d)中的数据代表三个实验之一。

图5示出了组蛋白破坏脂质双层并诱导细胞Ca²⁺通量，这一过程被SPA阻断。a，单独暴露于组蛋白(HIS)(1μm)(n＝47)或存在SPA CBS(n＝52)或MTS(n＝40)(10μM)的人工脂质双层的寿命。对照双层(n＝125)含有RγR1离子通道蛋白(n＝生物学重复)。数据为平均值±s.e.m。使用非参数Kruskal-Wallis检验计算P值。b，代表性流式细胞术图，使用Ca²⁺敏感染料Indo-1，显示在添加组蛋白(100μg/mL)后1分钟，Ca²⁺流动HMEC-1。c，CBS和MTS(100μg/mL)对HMEC-1对组蛋白诱导的Ca²⁺通量的影响的时间过程。(c)中的数据来自两个独立实验之一，为两个生物学重复的平均值。

图6示出了体内SPA抑制组蛋白诱导的组织损伤、血小板减少症、贫血和DVT。a，在静脉注射组蛋白(50mg/kg)前10分钟腹内注射SPA剂量的小鼠(n＝5-28/组)，在组蛋白后4小时收集其血液用于评估肝脏(丙氨酸氨基转移酶，ALT)、肾脏(肌酐，Crea)和一般组织(乳酸脱氢酶，LDH)损伤。从10个单独的实验汇集数据，n＝5-28只小鼠/治疗。b，小鼠(n＝5/组)，如上处理但接受一个SPA剂量(100mg/kg)，在组蛋白后10分钟收集其血液和脾脏，用于评估循环血小板和RBC以及脾血红蛋白(Hb)。c，CBS和MTS对组蛋白诱导的DVT小鼠模型的影响(n＝7-10只小鼠/组)。数据为平均值±s.e.m。*P≤0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001(单向方差分析与Dunnett多重比较检验)。

图7示出了SPA抑制一系列涉及细胞外组蛋白的病理。a，进行盲肠结扎和穿刺(CLP)并接受生理盐水(对照)、CBS或MTS的大鼠(n＝8/组)的存活率。通过对数秩(Mantel-Cox)检验获得的P值。b，CLP大鼠的肾脏和肝脏损伤，通过ALT和血肌酐水平测量。c，CBS和MTS(n＝6-12/组)对大鼠心脏IRI的影响，测量左心室(LV)的缺血区(IZ)、微血管阻塞(MVO)和梗塞区域。d，mCBS和MTS对小鼠IRI皮瓣模型的影响(n＝3-5/组)，显示有代表性的照片。(b-d)的统计分析如图6所示。

图8示出了HMEC-1增殖是确定组蛋白细胞毒性和检测该细胞毒性抑制剂的高度灵敏的检测方法。a，亚汇合的HMEC-1单层暴露于增加浓度的组蛋白3小时，然后加入³H-胸苷，在接下来的24小时内通过³H-胸苷掺入测量HMEC-1增殖，HMEC-1增殖被组蛋白以高度依赖的方式抑制。b，SPA mCBS和MTS(100μg/mL)完全中和了组蛋白(400μg/mL)对HMEC-1单层的抗增殖作用。数据为平均值±s.e.m。(n＝3个生物学重复)。****P<0.0001(单向方差分析与Dunnett多重比较检验)。

图9示出了败血症患者的血清对内皮细胞有毒性，这种作用被DNase I、抗组蛋白抗体和SPA中和。a，APACHE II评分与败血症患者血清对HMEC-1(n＝20患者)的抗增殖作用的相关性(Spearman r值)。b，APACHE II评分与败血症患者血清细胞外DNA含量的相关性。c，DNase I或pAb对组蛋白3(αH3)和组蛋白4(αH4)(n＝4个生物学重复/治疗)对败血症患者5血清抗增殖作用的影响(红色圆圈，a组)。d，SPAs mCBS和MTS中和败血症患者血清(SS)的抗增殖作用的能力(n＝10名患者)。统计分析如图6。

具体实施方式

本发明涉及具有高化学稳定性的改性的硫酸化纤维二糖苷化合物在治疗或预防受试者的NET介导的疾病(例如败血症、SIRS或IRI)中的用途。此类化合物可改善或抑制或预防NET在受试者中的细胞毒性作用。

为了方便起见，以下各节大体概述了本文中使用的术语的各种含义。在该讨论之后，公开了示出本发明的一般示例性实施例，随后是提供更具体地示出本发明的各种示例性实施例的特性的特定示例。

通用

本领域技术人员将理解，在不脱离本文所描述的本发明的精神和范围的情况下，本文所描述的本发明可以进行除具体描述之外的变化和修改。本发明包括所有这样的变化和修改。本发明还包括说明书中单独或共同提及或指出的所有步骤、特征、组成和成分，以及所述步骤或特征的任何和所有组合或任何两个或更多个。功能上等效的产品、物质组成和方法显然在本文所述的本发明的范围内。

本文中引用的所有出版物、参考文献、文件、专利和专利申请，无论是上文还是下文，均通过引用全文并入本文，这意味着应阅读并考虑这些出版物、参考文献、文件、专利和专利申请作为本文的一部分。本文中所引用的任何出版物、参考文献、文件、专利和专利申请均未在本文中重复，仅出于简明原因。然而，引用本文提及的出版物、参考文献、文件、专利和专利申请是为了描述和公开在出版物中报道的并且可以与本发明结合使用的方案、试剂和产品。本文中的任何内容均不应解释为承认本发明由于在先发明或任何其他原因而无权早于此类公开。关于这些文件的日期或内容的所有陈述均基于申请人可获得的信息，并不构成对这些文件的日期或内容的正确性的承认。

本文提及的任何产品或在通过引用并入本文的任何文件中的任何制造商的说明、描述、产品规格和产品说明书，通过引用并入本文，并且可以在本发明的实践中采用。

本文使用的所选术语的定义可以在发明概述和本发明的详细描述中找到，并贯穿全文使用。除非另有定义，否则本文使用的所有其他科学和技术术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。如果术语的使用与此处提供的定义之间存在明显的差异，则以本说明书中提供的定义为准。

定义

除了在操作实施例中或在另外指出的地方，在本文中所有表达成分或反应条件的数量的数字在任何情况下均应理解为由术语“约”改性。例如，术语“约”当与百分比结合使用时可表示±10％。

除非上下文另外要求，或者说明书特别指出相反，在本文中作为单数的整数、步骤或元素列举的本发明的整数、步骤或元素清楚地涵盖了所述的整数、步骤或元素的单数形式和复数形式。在整个说明书中，除非另有说明或上下文另有要求，否则提及单个步骤、物质组成，一组步骤或一组物质组成应视为包含一个或多个(即一个或多个)或那些步骤、物质组成、一组步骤或一组物质组成。因此，如本文和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数引用，除非上下文另外明确指出。因此，例如，对“在其还原末端用小的不带电荷的取代基改性的硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐”的引用包括多种此类改性的硫酸化纤维二糖苷化合物或其多种盐，等等。

在整个说明书和权利要求中，除非上下文另外要求，否则单词“包括”或诸如“包括”的变体将被理解为暗示包括陈述的步骤或元素或整数或步骤组或元素或整数，但不排除任何其他步骤或元素或整数或一组步骤或元素或整数。

如本文中所使用的，术语“包括”以及诸如“包括”之类的变体也将被理解为非限制性的。

在本申请中，除非另有说明，否则“或”的使用表示“和/或”。

本文描述的发明可以包括一个或多个值范围(例如，大小、位移和场强等)。值的范围应理解为包括该范围内的所有值，包括定义范围的值，与该范围相邻的值，该值会导致与该值相邻的值(定义该范围的边界)的结果紧邻或相同或基本相同。例如，相关领域的技术人员将理解，范围的上限或下限的10％的变化可能是完全合适的，并且被本发明涵盖。更具体地，范围的上限或下限的变化将是5％或如本领域中公知的那样，以较大者为准。

如本文所用，术语“NET”是指核小体和蛋白质的胞外复合物，例如具有抗微生物活性的蛋白质。核小体可源自中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞或白细胞。

如本文所用，短语“NET相关并发症”是指但不限于NET相关：

a.针对感染(包括细菌、病毒、真菌、寄生虫感染)的全身性炎症反应，例如败血症(包括细菌、病毒、真菌、寄生虫、朊病毒引起的败血症)，或针对非传染性诱因的全身性炎症反应，包括非传染性全身炎症反应综合征手术、外伤、出血、烧伤、急性胰腺炎、先兆子痫和急性肾损伤；

b.由于动脉粥样硬化、血管自发性破裂、对血管的创伤性损伤以及包括与心脏和移植相关的IRI，导致的动脉阻塞后局部组织水平的缺氧；由于溺水、暴露于气体或心肺停止而导致呼吸停止后，以及包括疾病，例如急性呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺疾病和药物介导的组织损伤，导致的全身水平的缺氧；

c.止血或血管阻塞，例如心血管疾病或慢性心血管疾病，例如动脉粥样硬化、凝血和血栓形成(例如深静脉血栓形成)；输血相关的急性肺损伤(TRALI)；

d.功能性实质器官组织被纤维化组织取代的纤维化，可严重削弱器官功能，如肺纤维化、特发性肺纤维化；

e.自身免疫性疾病状态和炎症性疾病状态，例如多发性硬化症、肿瘤相关炎症、高炎症性疾病状态、系统性红斑狼疮、脊柱关节病、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、反应性关节炎、肠病性关节炎、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、囊性纤维化(CF)、哮喘、肾小球肾炎、慢性肺病、克罗恩病、过敏性肠病、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、相关血管炎(AAV)(例如肉芽肿性多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎和显微镜下多血管炎)，特征为小血管的破坏和炎症、家族性地中海热、肌萎缩侧索硬化、癌症、干燥综合征、早期关节炎、病毒性关节炎、银屑病、年龄相关器官纤维化、特发性肺纤维化、青少年糖尿病(I型)、糖尿病(2型)、抗磷脂综合征；

f.各种中枢神经系统疾病，如亨廷顿氏病；

g.细胞因子和趋化因子诱导降解，如痛风。

上述病症与增加的NETosis相关，因此可以靶向NET来治疗这些疾病。

如本文所用，术语“病状”、“病症”或“疾病”(可互换使用)是指与NET释放相关的医学并发症。

如本文所用，术语“败血症”包括败血症疾病或病状在其含义内的所有阶段，其由标准医学参考文献表征和/或本领域技术人员已知。例如，败血症包括严重的败血症、急性和慢性败血症和败血性休克。如本文所用的术语“败血症”还包括与感染相关的发作。本文使用的术语“SIRS”(系统性免疫反应综合征)包括与感染无关的发作，例如创伤、烧伤、胰腺炎、器官移植、手术、肿瘤治疗后的肿瘤溶解、围产期并发症和同种异体移植物的免疫抑制预防。

如本文所用，术语“与败血症或SIRS相关的病症”或“与败血症或SIRS相关的疾病”在其含义内包括与败血症或SIRS疾病或病症的任何或所有阶段直接或间接相关，源自或由其引起的所有体征和症状，这些疾病和病症以标准医学参考文献为特征和/或本领域技术人员已知。例如，与败血症或SIRS相关的医学病症或疾病包括与受试者的败血症或SIRS疾病或病症的任何或所有阶段相关的可能在受感染者或未受感染者中表现出来的由其引起或伴随其产生的以下一种或多种迹象或症状：动脉低血压、代谢性酸中毒、全身血管阻力降低、心率增加(心动过速)、呼吸频率增加(呼吸困难)、全身性或全身性炎症、白细胞计数升高或降低(白细胞增多症或白细胞减少症)、血液中NET增加、器官功能障碍，例如急性器官功能障碍、循环系统功能障碍、多器官功能障碍综合征、弥散性血管内凝血(DIC)、纤维蛋白在一个或多个器官的微脉管系统中的沉积、发烧、精神错乱、肺炎、咳嗽、肺炎、肾脏感染、伴有肾脏感染的排尿疼痛和/或败血性休克。

如本文所用，术语“减少”或“抑制”通常全部用于表示减少统计学上显著的量。但是，为免生疑问，“减少”或“抑制”是指与参考水平相比降低了至少10％，例如在没有药物的情况下，减少至少约20％，或至少约30％，或至少约40％，或至少约50％，或至少约60％，或至少约70％，或至少约80％。

如本文所用，术语“改善”、“增加”、“增强”或“激活”通常都表示增加了静态显著量。为免生疑问，术语“改善”、“增加”、“增强”或“激活”是指与参考水平相比增加了至少10％，例如在没有药物的情况下，与参考水平相比，增加至少约20％，或至少约30％，或至少约40％，或至少约50％，或至少约60％，或至少约70％，或至少约80％，或至少约2倍，或至少约3倍，或至少约4倍，或至少约5倍，或至少约10倍，或增加2倍至10倍或更多倍。

如本文所用，术语“施用”是指通过一种方法或途径将组合物放置在受试者体内，该方法或途径导致该组合物至少部分地定位在所需部位，从而产生所需效果。本文所述的化合物或组合物可以通过本领域已知的任何适当途径施用，包括但不限于，口服或非肠道途径，包括静脉内、肌内、皮下、经皮、气道(气雾剂)、肺、鼻、直肠和局部(包括颊和舌下)给药。在某些实施例中，该化合物是在其还原末端被小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。优选地，相对于在其还原末端被硫酸化的相同聚阴离子，存在于聚阴离子硫酸化纤维二糖苷的还原末端上的小的不带电荷的糖苷连接的取代基改善了聚阴离子的化学稳定性。当以上化合物存在于诸如治疗剂或治疗性组合物的组合物中时，将其制备用于肠胃外施用，或允许递送至靶位点的另一种其他方法。一些示例性的给药方式包括但不限于注射、输注、滴注、吸入或摄取。

如本文所用，术语“注射”包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、心室内、囊内、眼眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、荚膜下、蛛网膜下腔、脊柱内、脑脊髓、胸骨内注射和输注。在优选的实施例中，组合物通过静脉内输注或注射给药。

如本文所用，在本发明的上下文中，术语“治疗”等与本文所述的任何医学病症或疾病有关，是指缓解、减轻、改善、抑制、减慢、逆转或停止与这种医学病症或疾病相关的至少一种症状或并发症的进展、加重、恶化、进展、预期进展或严重程度。在一实施例中，医学病症或疾病的症状减轻了至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％或至少50％。

如本文所用，短语“有效量”、“治疗有效量”或“有效剂量”(在本文中可互换使用)在其含义内包括足以提供所需效果的本发明化合物或组合物的足够但无毒的量。所需化合物或组合物的确切数量因受试者而异，具体取决于因素，例如期望的效果、所治疗的物种、受试者的年龄和身体病症、所治疗疾病的严重程度、所给药的药剂、给药方式等。因此，不可能指定确切的“有效量”。然而，对于任何给定的情况，本领域普通技术人员可以仅使用常规实验来确定合适的有效量(剂量)。通常，治疗有效量可以随受试者的病史、年龄、病症、性别以及受试者中医学病症的严重性和类型以及其他药物活性剂的施用而变化。

如本文所用，在治疗或药物用途中提及化合物或组合物的使用将被理解为同样适用于人和非人的用途，例如兽医用途。因此，将理解，除非另有说明，否则，提及“患者”、“受试者”或“个体”(在本文中可互换使用)是指人类或非人类，例如具有社会、经济或研究重要性的任何物种的个体，包括但不限于哺乳动物、禽类、兔类、绵羊、牛、马、猪、猫、狗、灵长类和啮齿动物。更优选地，患者、受试者或个体是属于哺乳动物物种的动物。理想地，哺乳动物是人类或非人类的灵长类动物或伴侣动物，例如驯养的狗、猫、马、猴子、小鼠、大鼠、兔子、绵羊、山羊、牛或猪。在一个特别优选的实例中，患者、受试者或个体是人。

本文中使用的所选术语的定义可以在本发明的详细描述中找到并且贯穿全文使用。除非另有定义，否则本文使用的所有其他科学和技术术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

本发明的示例性实施例

仅出于说明本发明的目的而包括对本发明的随后的详细描述，并且不应该以任何方式将其理解为对本发明的广泛描述的限制，如上所述。

1.本发明的化合物

在本发明的第一方面，提供了一种用于治疗NET介导的并发症的化合物，其中该化合物包含：聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。相对于相同的聚阴离子，取代基使分子具有高化学稳定性，但在其还原末端被硫酸化。优选地，这类化合物应具有高净负电荷。

本发明的化合物可以在病症或疾病发生后的治疗期间预防性(即作为医疗程序的预防性预处理)或治疗性地改善NET介导的并发症(例如败血症或缺血再灌注损伤)。

在本发明的一实施例中，改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷，具有以下通用结构：

其中：

优选地，R1是O-或S-(C_1-6)烷基。当R1为O-或S-(C_1-6)烷基时，与在R1处具有硫酸盐基团的相同聚阴离子相比，所选的取代基优选提高了聚阴离子的化学稳定性。

优选地，R2至R8均选自：(a)未改性的羟基；或(b)硫酸盐基团。

更优选地，R1是甲氧基或乙氧基并且R2至R8均是硫酸盐基团。

期望地，该类化合物具有高净负电荷，即它是聚阴离子。

在本发明的高度优选的形式中，该化合物为β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐或其药学上可接受的盐，其为硫酸化的β-O-甲基纤维二糖苷二糖。举例来说，该化合物是β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐。

mCBS相对于CBS高度稳定并且在高浓度下耐受性良好。

存在于聚阴离子硫酸化纤维二糖苷的还原末端的小的不带电荷的糖苷连接的取代基相对于在其还原末端被硫酸化的相同聚阴离子提高了聚阴离子的化学稳定性。

如本文所用的化学稳定性表示本发明的化合物抵抗变化的趋势(特别是在自然环境中或暴露于空气、热、光、压力或其他自然条件下，或由于内部反应而分解)。

如果在预期使用条件或正常环境条件下储存至少一个月后，相对于在其还原末端被硫酸化的同一聚阴离子而言，本发明化合物没有明显分解，则它是“稳定的”。

如果在预期的使用条件或正常的环境条件下，在储存至少一个月后，本发明的化合物失去3个或更多硫酸盐基团，则该化合物将被明显分解。优选地，如果在预期的使用条件或正常的环境条件下，在储存至少一个月之后，本发明的化合物失去了两个硫酸盐基团，则该化合物将被明显分解。最优选地，如果在预期的使用条件或正常的环境条件下，在储存至少一个月后，本发明的化合物失去了1个硫酸盐基团，则该化合物将被明显分解。

优选地，当本发明的化合物储存在缓冲至pH 7.5的磷酸盐制剂中并储存在2-8℃时，其化学稳定性至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24个月。更优选地，将化合物储存在缓冲至pH 7.5的磷酸盐制剂中并储存在约2-8℃，在6个月至2年的时间内测量稳定性。

如本文所用，短语“药学上可接受的盐”包括那些盐，在合理的医学判断范围内，该盐适合与人和低等动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激性、过敏反应等，并且具有合理的收益/风险比。

药学上可接受的盐是本领域众所周知的。它们包括，例如，衍生自无机酸(例如，盐酸或磷酸)或有机酸(例如，柠檬酸、醋酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等)的酸加成盐(与蛋白质的游离氨基形成)。与蛋白质的游离羧基形成的盐也可以衍生自无机碱(例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁)或衍生自有机碱(例如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等)。

在本发明的优选形式中，本发明的改性的硫酸纤维二糖苷以可药用盐的形式存在。举例来说，该化合物是β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐，即β-O-甲基纤维二糖苷硫酸钠(mCBS.Na)。

用于本发明的方法或组合物中的改性的硫酸纤维二糖苷化合物或其药学上可接受的盐可以通过本领域技术人员已知的方法来制备。例如，在Katrin C Probst and HansPeter Wessel,2001,J.Carbohydrate Chemistry,20(7&8):549-560中通常描述了制备在其还原末端用不带电荷的取代基修改性的硫酸化化合物的方法，其全部内容通过引用并入本文。

2.治疗方法

由于本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物可以改善或预防NET的病理活性，作为本发明的第二个方面，本发明提供了一种治疗或预防NET相关并发症的方法，该方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

进一步，在本发明的第三方面，提供了一种改善受试者体内NET积累的方法，该方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

在本发明的第二和第三方面，所选择的化合物优选是在还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷。更优选地，相对于在其还原端被硫酸化的相同聚阴离子，小的不带电荷的糖苷连接的取代基提高了聚阴离子的化学稳定性。特别地，当化合物是mCBS时，它是硫酸化的β-O-甲基纤维二糖苷二糖或β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐，即mCBS.Na。

如本发明的第二和第三方面所描述的本发明考虑治疗改善或预防由NET的形成和由此产生的毒性引起的多种不同的NET疾病。根据本发明的这些方面，相应的方法可用于治疗或预防受试者的NET相关并发症。

通常NET相关病症可归因于增加的NETosis，因此，可以通过将NET的水平或活性改性(优选降低)至与其在受试者中的正常病理生理水平一致的基础浓度或数量，将NET靶向用于治疗这些疾病。

最大的一组NET激活剂是致病性革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌脂磷壁酸和LPS，以及原核蛋白质的分解产物。举例来说，诱导NET的细菌的一些例子包括：金黄色葡萄球菌、链球菌属、铜绿假单胞菌、百日咳博德特氏菌、溶血曼海姆氏菌、聚集性放线菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体属、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、单核细胞增生李斯特菌、结核分枝杆菌和弗氏链球菌)。NET激活也源于：真菌感染(示例包括：(曲霉属，例如构巢曲霉、烟曲霉和念珠菌属，例如白色念珠菌)；原生动物寄生虫感染(示例包括：亚马逊乳杆菌或其表面脂磷聚糖、粪类圆线虫、牛艾美球虫、利什曼原虫、弓形虫、恶性疟原虫)；或病毒感染(示例包括：HIV/SIV、汉坦病毒呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒)。这些病原体激活剂仅作为示例呈现，并不构成代表NET激活剂的已定义生物体列表。本领域技术人员将知道生物体的NET激活能力。

由诸如上文所列生物体感染引起的反应通常是引起炎症通路激活的炎症反应，然而，NET激活也可能导致其他反应，例如自身免疫反应、肺部疾病、血栓形成或其他微生物活动。NET激活也来自非传染性诱导物，包括非传染性全身炎症反应综合征、手术、外伤、出血、烧伤和肾损伤；局部组织水平或全身水平缺氧；止血或血管阻塞；纤维化，其中功能性实质器官组织被纤维化组织取代；自身免疫疾病状态和炎症疾病、各种中枢神经系统疾病以及细胞因子和趋化因子诱导的降解。

在本发明的第二或第三方面的实施例中，相应的方法还可以包括：与本发明的化合物同时或伴随地向受试者施用不同于本发明的化合物的第二治疗剂(例如抗炎剂、抗生素剂、抗病毒剂、抗真菌剂或其他形式的医疗干预)，其为受试者正在或可能患有的医学病症提供辅助治疗。

优选地，作为本发明这些方面的实例，相应的方法提供了用于治疗或预防受试者的败血症或SIRS或与败血症或SIRS相关的医学病症或疾病的手段。

作为本发明这些方面的另一个实例，相应的方法提供了用于治疗或预防受试者的IRI或与IRI相关的医学病症或疾病的手段。

优选地，该方法充分改善病症或疾病状态以允许医师施用其他药物来治疗继发病症。因此，本发明还包括向受试者施用治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐，以用于改善患者的NET相关并发症。

在根据本发明的第二或第三方面的某些示例性实施例中，该方法可以进一步包括以下步骤：与改性的硫酸化纤维二糖苷一起或伴随地向受试者施用治疗或药学有效量的选自以下的第二活性剂、化合物或组合物：一种或多种抗炎剂、抗生素剂、抗病毒剂、抗真菌剂和/或任何其他形式的药物组合物，其治疗受试者患有或有患病风险的一种或多种病症。

根据该实施例，第二活性剂、化合物或组合物为针对NET相关并发症(例如，败血症、SIRS或IRI)和/或与此类并发症相关的医学病症或疾病的治疗提供辅助治疗。优选地，第二活性剂、化合物或组合物包含一种或多种抗炎剂。

优选地，第二活性剂提供了对患者所患疾病的医学干预手段，该疾病与用本发明化合物治疗的医学疾病相关或不同，所述第二活性剂为患者提供辅助治疗。

本文公开的本发明的治疗剂和/或药物组合物可以治疗性或预防性给药。在治疗应用中，将化合物和组合物以足以治愈或至少部分阻止其症状的量给予已经患有NET相关并发症或与NET相关并发症相关疾病的患者。化合物或组合物应以足以有效治疗患者的活性化合物的量以单剂量或作为治疗方案例如多剂量治疗方案的一部分提供。在预防性应用中，将本发明的化合物和组合物以足以至少部分阻止疾病的症状和/或并发症的量给予有患与NET相关并发症相关疾病风险的受试者。

在本发明的第四方面，提供了一种用于治疗或预防受试者中与NET介导的病理学相关的医学病症、病痛或疾病的方法，其中该方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的：聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

在本发明第四方面的一实施例中，所选择的化合物优选是在还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷。更优选地，相对于在其还原端被硫酸化的相同聚阴离子，小的不带电荷的糖苷连接的取代基提高了聚阴离子的化学稳定性。特别地，当化合物是mCBS时，它是硫酸化的β-O-甲基纤维二糖苷二糖或β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐，即mCBS.Na。

在一个优选的实例中，该药物用于治疗NET，这些NET(i)对受试者的内皮细胞具有细胞毒性，或(ii)导致受试者的内皮功能障碍，或(iii)通过激活受试者的血小板引发凝血，或(iv)诱导受试者的红细胞脆性和由此产生的贫血。

患有由一种或多种上述鉴定的生物体引起的类型的感染的患者血液中存在的NET水平增加。

在本发明的第二、第三、第四方面的一实施例中，本文提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来治疗(预防性或治疗性地)受试者中NET相关败血症的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。优选地，相对于在其还原末端被硫酸化的相同聚阴离子，存在于聚阴离子硫酸化纤维二糖苷的还原末端的小的不带电荷的糖苷连接的取代基提高了聚阴离子的化学稳定性。更优选地，改性的硫酸化纤维二糖苷是mCBS或更特别地是其药学上可接受的盐，例如mCBS.Na。

如本文所证明的，本发明的化合物特别是mCBS阻断NET的毒性作用，因此可用作治疗败血症。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物，提供一种改善NET在败血症中的细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程的情况下)和败血症发生后的治疗。

在本发明的高度优选的示例性形式中，根据本文描述的任何方面、实施例或实例，本发明的化合物用于治疗或预防一种或多种以下讨论的疾病或病症。

A.败血症

败血症(包括败血性休克)是对感染的系统性反应，特征为动脉低血压、代谢性酸中毒、全身血管阻力降低、呼吸困难和器官功能障碍。败血症(包括败血性休克)也是对感染的全身性炎症反应，与多种宿主防御机制(包括细胞因子网络、白细胞以及补体和凝血纤维蛋白溶解系统)有关并由其激活。弥散性血管内凝血(DIC)和纤维蛋白广泛沉积在各个器官的微脉管系统中可能是败血症的早期表现。DIC是多器官衰竭综合征发展过程中的重要介体，并导致败血性休克患者预后不良。

引起败血症的免疫学反应是引起炎症和凝血途径广泛活化的全身性炎症反应。这可能会发展为循环系统功能障碍，即使在最佳治疗下，也可能导致多器官功能障碍综合征并最终导致死亡。

败血症的症状通常与潜在的感染过程有关，如果不及时治疗可表现为严重的败血症(患有急性器官功能障碍的败血症)或败血性休克(患有难治性动脉低血压的败血症)。如果满足两项或多项全身炎症反应综合征标准(例如，一般性炎症、发烧、白细胞计数升高(白细胞增多)以及心律加快(心动过速)和呼吸频率加快(呼吸急促))，而没有感染证据，可以简单地通过“SIRS”诊断患者，这是一种传染性炎症状态，会影响整个身体。

许多败血症患者在24-48小时内表现出快速衰退。快速治疗对于有效的败血症治疗至关重要。不幸的是，感染类型的诊断需要微生物学分析以鉴定可能需要几天的病原体。因此，必须在不了解病原体的类型和种类并且不知道感染程度的情况下开始消除病原体的治疗(例如抗生素治疗)。本发明提供了这样的方法。

患有败血症的患者血液中存在的NET水平升高。NET被认为是败血症病理学的重要介体。

在本发明的第二、第三或第四方面的一实施例中，提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来治疗(预防性或治疗性地)受试者中NET相关败血症的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

根据该实施例，所选择的化合物优选是在还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷。更优选地，相对于在其还原端被硫酸化的相同聚阴离子，小的不带电荷的糖苷连接的取代基提高了聚阴离子的化学稳定性。特别地，当化合物是mCBS时，它是硫酸化的β-O-甲基纤维二糖苷二糖或β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐，即mCBS.Na。

如本文所证明的，本发明的化合物特别是mCBS阻断NETs的毒性作用，因此可用作治疗败血症。

因此，本发明的化合物以及包括所述化合物的治疗或药物组合物提供改善败血症中NET的细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程的情况下)和败血症发生后的治疗。

B.非传染性SIRS

非传染性全身性炎症反应综合征(SIRS)是一种影响全身的炎症状态。它是人体对非传染性侵略的反应。尽管SIRS的定义将其称为“炎症”反应，但实际上它具有促炎和消炎成分。

SIRS是与全身性炎症、器官功能障碍和器官衰竭有关的严重疾病。它是细胞因子风暴的一个子集，其中各种细胞因子的调节异常。SIRS也与败血症密切相关，在败血症中，患者符合SIRS标准并有可疑或已证实的感染。非传染性SIRS的原因包括，例如：外科手术引起的创伤、创伤性出血、烧伤和急性胰腺炎。

在本发明的第二、第三或第四方面的一实施例中，提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来治疗(预防性或治疗性)受试者中NET相关的非传染性SIRS的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

如本文所证明的，本发明的化合物，特别是mCBS，阻断NET的毒性作用，因此可用作治疗非传染性SIRS。

因此，本发明的化合物以及包括所述化合物的治疗或药物组合物提供一种改善非传染性SIRS中NET细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程中)和发生非传染性SIRS后的治疗。

B.1创伤

身体创伤是严重的且会改变身体的身体伤害，例如肢体的挤压或截肢。

钝力创伤，是由钝物施加或施加于钝物的冲击或其他力引起的一种物理创伤，而穿透性创伤是其中皮肤或组织被物体刺穿的一种物理创伤。创伤也可以被描述为计划外的(例如意外事故)或计划内的手术。两者均可表现为轻度至严重的组织损伤、失血和/或休克，并且均可能导致SIRS，但也显著增加了随后感染和败血症的风险。

在没有感染的情况下，在创伤或严重的细胞应激后释放NET。遭受创伤的患者血液中的NET水平可能会升高。NET被认为是创伤病理学的重要介体。

在本发明的第二、第三或第四方面的一实施例中，提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来治疗(预防性或治疗性地)受试者中NET相关创伤的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS的化合物可以阻断NETs的毒性作用，因此可用作治疗创伤患者。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供一种改善NET在创伤中的细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程中)和创伤发生后的治疗。

B.2.手术

手术在患者身上使用操作手册和仪器技术以研究和/或治疗诸如疾病或损伤的病理状况，以帮助改善身体功能或外观，或有时出于某些其他原因。本发明可以解决由手术引起的创伤，如下文进一步定义。

在本发明的第二、第三或第四方面的一实施例中，提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来治疗(预防性或治疗性地)受试者的NET相关手术创伤的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

通常，当该过程涉及切割患者的组织或闭合先前持续的伤口时，该过程被认为是手术。可以将其他不一定属于此标准的过程(例如血管成形术或内窥镜检查)视为手术，如果它们涉及常见的手术过程或设置，例如使用无菌环境、麻醉、消毒条件、典型的外科器械以及缝合。所有形式的手术均被视为侵入性手术；所谓的非侵入性手术通常是指不穿透要处理的结构(例如，角膜的激光消融)或放射外科手术(例如，肿瘤的照射)的切除。

由于本发明的化合物以及包括所述化合物的治疗或药物组合物可以改善NET的细胞毒活性，本发明提供了一种用于外科创伤的治疗方法，包括预处理(在医疗过程中)和发生外科损伤后的治疗。

B.3.创伤性出血

创伤性出血在伤害的广泛国际影响中占很大比例，造成很大一部分死亡，并在伤害中造成很大的发病率。尽管在院前护理方面存在差异，但创伤性出血的急性治疗在世界范围内相似，并遵循公认的已发布指南。重伤患者的护理分为四个阶段，通常是重叠的部分：复苏、手术和重症监护阶段。在创伤护理的所有阶段中，出血的诊断和控制应作为重中之重，对于出血性休克患者尤其重要。早期的出血控制尝试包括直接按压、按压敷料或止血带直接控制可见的严重出血源；稳定长骨和骨盆骨折；并保持病人温暖。在复苏阶段，应提供温暖的静脉输液，在手术控制出血之前进行降压复苏以及适当输血和血制品。在手术阶段，对出血和任何其他伤害进行手术控制，并提供额外的输血。最后，重症监护阶段提供术后支持和组织灌注。

由于本发明的化合物以及包括所述化合物的治疗或药物组合物，可以改善NET的细胞毒活性，因此本发明提供了用于创伤性出血的治疗，包括预处理(在医疗过程中)和创伤性出血发生之后的治疗。

B.4.烧伤

烧伤可能是由热、冷、电、化学药品、摩擦或辐射引起的伤害。一级烧伤通常仅限于发红(红斑)、白色斑块和受伤部位的轻微疼痛。这些烧伤通常仅扩展到表皮。二级烧伤还充满透明液体，使皮肤表面出现水泡，视神经受累程度而定，或多或少会引起疼痛。二级烧伤累及浅层(乳头状)真皮，也可能累及深层(网状)真皮层。三级烧伤还会使皮肤焦化，并产生坚硬的皮革状焦油。焦痂是从身体的未受影响部位分离出来的痂。通常，也有紫色液体。这些类型的烧伤通常是无痛的，因为在烧伤部位神经末梢已被破坏。严重烧伤，特别是如果它们覆盖身体的大部分区域，可能会导致死亡；肺部有任何烧伤痕迹(例如，通过吸入烟雾)属于医疗紧急情况。

伤害皮肤下面的组织例如肌肉或骨骼的烧伤有时被归类为四级烧伤。这些烧伤可分为三个额外的级别：第四级烧伤导致皮肤无法挽回的损失；第五级烧伤导致肌肉无法挽回的损失；以及第六级烧伤导致骨骼烧焦。

各种烧伤导致NET水平的增加，这又与毒性有关。就存在NET毒性而言，本发明寻求使用本发明的药物组合物降低这种毒性，从而减轻或减轻患者的不适，以及允许更高剂量的治疗。

遭受烧伤的患者的血液中存在的NET水平可能增加。NET被认为是烧伤病理学的重要介体。

在本发明的第二或第三方面的一实施例中，提供了一种改善由烧伤对受试者引起的NET诱导的细胞毒性的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS之类的化合物可阻断NET的毒性作用，因此可用作治疗烧伤患者。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供一种用于改善受试者烧伤中NET的细胞毒活性的手段。

B.5.急性胰腺炎

急性胰腺炎的特征在于通过无菌炎症和腺泡细胞死亡(包括坏死和细胞凋亡)引起的快速发作的胰腺炎症。

根据其严重程度，尽管进行了治疗，急性胰腺炎仍可能具有严重的并发症和高死亡率。虽然轻度病例通常通过保守措施或腹腔镜手术成功治疗，但严重病例需要侵入性手术(通常不止一种干预)来控制疾病进程。

患有急性胰腺炎的患者血液中存在的NET水平可能增加。NET被认为是急性胰腺炎病理学的重要介体。

在本发明的第二、第三或第四方面的实施例中，提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来治疗(预防性或治疗性地)受试者的NET相关急性胰腺炎的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

根据该实施例，所选择的化合物优选是在还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷。更优选地，相对于在其还原端被硫酸化的相同聚阴离子，小的不带电荷的糖苷连接的取代基提高了聚阴离子的化学稳定性。特别地，当化合物是mCBS时，它是硫酸化的β-O-甲基纤维二糖二糖或β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐，即mCBS.Na。

诸如mCBS的化合物可以阻断NET的毒性作用，因此可用作治疗急性胰腺炎患者。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供了一种改善NET在急性胰腺炎中的细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程中)和急性胰腺炎发生后的治疗。

C.缺血-再灌注损伤

缺血再灌注损伤(包括与移植相关的缺血再灌注损伤)和药物介导的组织损伤导致无菌炎症，该过程在没有微生物的情况下发生。

缺血是对组织血液供应的限制，导致细胞代谢所需的氧气短缺。在长期缺血(60分钟或更长时间)中，次黄嘌呤形成为ATP代谢的分解产物。由于较高的氧气利用率，黄嘌呤脱氢酶被转化为黄嘌呤氧化酶。这种氧化导致分子氧被转化为高反应性的超氧化物和羟基自由基。黄嘌呤氧化酶还产生尿酸，它既可以充当氧化剂，也可以充当反应性物种(如过氧化物)的清除剂。在再灌注过程中产生的过量一氧化氮会与超氧化物反应，从而产生有效的反应物种过氧亚硝酸盐。这些自由基和活性氧会攻击细胞膜的脂质、蛋白质和糖胺聚糖，从而造成进一步的损害。它们还可以通过氧化还原信号启动特定的生物学过程。

再灌注损伤是指部分由于受损组织的炎症反应引起的损害。由新返回的血液携带到该区域的白细胞释放出许多炎症因子，例如白细胞介素以及自由基，以响应组织损伤。恢复的血流会重新引入细胞内的氧气，从而破坏细胞蛋白、DNA和质膜。对细胞膜的损害反过来又会导致释放更多的自由基。这种反应性物质间接地在氧化还原信号传导中起作用以开启细胞凋亡。白细胞还会在小毛细血管中积聚，阻塞它们并导致更多的局部缺血。

再灌注损伤在脑缺血级联中也起作用，其与中风和脑外伤有关。反复发作的缺血和再灌注损伤也被认为是导致慢性伤口如褥疮和糖尿病性足溃疡的形成和愈合的因素。持续的压力限制了血液供应并引起局部缺血，并且在再灌注期间发炎。随着该过程的重复，最终会损伤组织，足以引起伤口。

NET水平在具有肝、肾、肺和脑损伤的动物缺血再灌注模型中升高，表明NET在调节无菌炎症中的重要作用。

NET不仅通过直接毒性或促炎作用介导肝脏，而且介导急性肾损伤或缺血性中风。NET形成和活性的抑制提出了组织损伤的治疗策略。

患有缺血再灌注损伤(包括与移植相关的缺血再灌注损伤)和药物介导的组织损伤的患者的血液中存在增加的NET水平。NET被认为是缺血/再灌注和药物介导的组织损伤病理学的重要介质。

在本发明的第二、第三、第四方面的实施例中，提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来治疗(预防性或治疗性地)受试者的NET相关IRI和/或药物介导的组织损伤的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS的化合物可以阻断NETs的毒性作用，因此可用作缺血/再灌注和药物介导的组织损伤患者的治疗。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供了一种改善NET在缺血/再灌注和药物介导的组织损伤中的细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程中)和缺血/再灌注和药物介导的组织损伤发生后的治疗。

D.凝血与血栓形成

凝血是血液形成凝块的生物学过程。精确的调节机制可防止导致出血(出血)或阻塞性凝血(血栓形成)风险增加的异常凝血。

患有凝血和/或血栓形成的患者的血液中存在的NET水平可能增加。NET被认为是凝血和/或血栓形成病理学的重要介体。

在本发明的第二、第三方面的实施例中，提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来治疗受试者的凝血和/或血栓形成的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS的化合物可以阻断NET的毒性作用，因此可用作治疗凝血和/或血栓形成患者。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供了一种改善NET在凝血和/或血栓形成中的细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程中)和凝血或血栓形成发生后的治疗。

E.自身免疫/炎性疾病

本发明涵盖了多种自身免疫和/或炎性疾病的治疗，例如多发性硬化症、脊椎关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、反应性关节炎、肠病性关节炎、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、肠易激病、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、家族性地中海热、肌萎缩性侧索硬化症、干燥综合征、早期关节炎、病毒性关节炎或牛皮癣。这些疾病的诊断和治疗在文献中有充分记载。

患有自身免疫性疾病和/或炎性疾病的患者血液中存在的NET水平升高。NET被认为是自身免疫和/或炎症疾病病理学的重要介体。

在本发明的第二、第三方面的实施例中，提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来治疗受试者自身免疫和/或炎性疾病的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS的化合物可以阻断NETs的毒性作用，因此可用作治疗自身免疫和/或炎性疾病患者。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供一种改善NET在自身免疫和/或炎症疾病中的细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程中)和自身免疫和/或炎症疾病发生后的治疗。

F.急性呼吸窘迫综合征

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，也称为呼吸窘迫综合征(RDS)或成人呼吸窘迫综合征(与IRDS相反)是对多种形式的肺损伤的严重反应。这是导致通透性肺水肿增加的最重要疾病。

ARDS是由多种直接和间接侵入引起的，其特征是肺实质发生炎症，导致气体交换受损，并伴随全身性释放炎症介体，从而引起炎症、低氧血症并经常导致多器官衰竭。这种情况危及生命，并且通常是致命的，通常需要机械通风并需要进入重症监护室。较轻的形式称为急性肺损伤(ALI)，包括与输血相关的急性肺损伤(TRALI)。

ARDS可在受伤或急性疾病发作的24至48小时内发生。在这种情况下，患者通常会出现呼吸短促、呼吸急促以及与潜在原因(例如休克)有关的症状。长期疾病也可以引发疾病，例如疟疾。然后，ARDS可能在感染的特别急性病例发作后的某个时间发生。

患有ARDS的患者血液中存在的NET水平可能升高。NET被认为是ARDS病理学的重要介体。

在本发明的第二、第三或第四方面的一实施例中，提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来治疗(预防性或治疗性地)受试者中NET相关的急性呼吸窘迫综合征的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS的化合物可阻断NETs的毒性作用，因此可用作治疗ARDS患者。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供一种改善ARDS中NET细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程中)和发生ARDS后的治疗。

G.心血管疾病

心血管疾病是指涉及心脏或血管(动脉和静脉)的疾病类别。尽管该术语从技术上讲是指影响心血管系统的任何疾病，但通常用于指代与动脉粥样硬化(动脉疾病)相关的疾病。这些情况具有相似的原因、机制和治疗方法。

心血管疾病的治疗取决于每个患者的疾病的具体形式，但是有效的治疗总是包括上述预防性生活方式的改变。降压药、阿司匹林和他汀类降胆固醇药等药物可能会有帮助。在某些情况下，可能需要进行手术或血管成形术才能重新打开、修复或更换受损的血管。

各种形式的心血管疾病包括动脉瘤、心绞痛、心律不齐、动脉粥样硬化、心肌病、脑血管疾病、先天性心脏病、充血性心力衰竭、心肌炎、瓣膜疾病、冠状动脉疾病、扩张型心肌病、舒张功能障碍、心内膜炎、高血压、肥厚型心肌病、硝基动脉瓣脱垂、心肌梗塞和静脉血栓栓塞。

患有NET相关心血管疾病的患者血液中存在的NET水平升高，这被认为是NET相关心血管疾病病理学的重要介体。

在本发明的第二、第三或第四方面的一实施例中，提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来治疗(预防性或治疗性地)受试者的NET相关心血管疾病的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS的化合物可以阻断NET的毒性作用，因此可用作NET相关心血管疾病患者的治疗。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供一种改善NET蛋白在NET相关心血管疾病中的细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程中)和NET相关心血管疾病发生后的治疗。

H.纤维化

患有纤维化的患者的血液中存在增加的NET水平。NET被认为是纤维化病理学的重要介体。

在本发明的第二或第三方面的一实施例中，提供了一种改善受试者中由NET诱导的细胞毒性引起的纤维化的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS之类的化合物可阻断NET的毒性作用，因此可用作治疗纤维化患者。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供一种改善NET在受试者纤维化中的细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程中)和纤维化发生后的治疗。

I.糖尿病

患有糖尿病的患者血液中存在的NET水平可能升高。NET被认为是糖尿病病理的重要介体。

本发明提供了治疗糖尿病中NET相关并发症(例如炎症和伤口愈合延迟)的方法。该方法包括向诊断为1型、1.5型或2型糖尿病的受试者施用治疗有效量的至少一种本发明化合物。

在本发明的第二或第三方面的一实施例中，提供了一种改善受试者糖尿病的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS的化合物可阻断NET的毒性作用，因此可用作糖尿病患者的治疗。

在某些实施例中，涉及NET的糖尿病的症状是炎症。炎症的减少可以通过体格检查以及炎症标志物存在的减少来监测。

在某些实施例中，提供了一种治疗糖尿病的方法，它包括给予治疗有效量的用于治疗糖尿病的药物和至少一种本发明的化合物。用于治疗糖尿病的药物可以是胰岛素或选自以下双胍类药物的另一种药物：二甲双胍(葡萄糖)、二甲双胍液体药物(Riomet)、二甲双胍缓释剂(Glucophage XR、Fortamet、Glumetza)、磺酰脲类、格列美脲(Amaryl)、格列本脲(Diabeta、Micronase)、格列吡嗪(Glucotrol、Glucotrol XL)、微粉化的格列本脲(Glynase)、Meglitinides、Repaglinide(Prandin)、D-苯丙氨酸衍生物、那格列奈(Starlix)、噻唑烷二酮、吡格列酮(TZDs)、吡格列酮(Actos)、DPP-4抑制剂、西他列汀(Januvia)、沙格列汀(Onglyza)、利那列汀(Tradjenta)、α-葡萄糖苷酶、阿卡波糖(前糖)、米格列醇(糖基)、胆汁酸螯合剂、考来维仑(Welchol)、吡格列酮和二甲双胍(ActoplusMet)、格列本脲和二甲双胍(Glucovance)、格列吡嗪和二甲双胍(Metaglip)、西格列汀和二甲双胍(Janumet)、沙格列汀和二甲双胍(kombiglyze)、瑞格列奈和二甲双胍(Prandimet)和吡格列酮和格列美脲(Duetact)。

因此，本发明的化合物和包括所述化合物的治疗或药物组合物提供了一种用于改善受试者糖尿病中NET的细胞毒活性的手段。因此，本发明提供了对受试者糖尿病的治疗，包括预治疗(在医疗过程中)和发生糖尿病后的治疗。

J.化学疗法、放射疗法和细胞因子治疗的毒性

各种形式的癌症疗法，包括化学疗法、放射疗法和细胞因子，与癌症患者的毒性有关，有时是严重的。如果毒性至少部分是由NET的行为引起的，本发明试图使用本发明的药物组合物降低这种毒性，从而减轻或减轻患者的不适，以及允许更高剂量的治疗。

患有各种形式的癌症疗法，包括化学疗法、放射疗法和细胞因子疗法的副作用的患者，其血液中存在的NET水平可能增加。NET被认为是这些副作用的重要介体。

在本发明的第二或第三方面的一实施例中，提供了一种通过抑制NET的细胞毒活性来改善受试者中各种形式的癌症疗法(包括化学疗法、放射疗法和细胞因子疗法)的副作用的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS之类的化合物可以阻断NET的毒性作用，因此可用作治疗各种形式的癌症疗法，包括化学疗法、放射疗法和细胞因子疗法的副作用。

在本发明的一个高度优选的形式中，用于治疗接受此类治疗的患者的各种形式的癌症疗法，包括化学疗法、放射疗法和细胞因子疗法的副作用的化合物是化合物β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐或其药学上可接受的盐。例如，该方法中使用的化合物是β-O-甲基纤维二糖硫酸盐钠。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供了一种用于在各种形式的癌症治疗的副作用中改善NETs的细胞毒活性的手段，包括化学疗法、放射疗法和细胞因子疗法，包括预治疗(在医疗过程中)和发生疗法后的治疗。

K.伤口愈合

还提供了用于伤口愈合的方法。如本文所用，“伤口愈合”是指皮肤(或另一器官组织)在受伤后自我修复的复杂过程。伤口愈合的经典模型分为三个或四个连续但重叠的阶段：(1)止血，当凝块停止出血时；(2)炎症；(3)增殖；(4)重塑。皮肤受到伤害后，会在精心编排的级联中发生一系列复杂的生化事件，以修复损伤。在炎症阶段，细菌和细胞碎片被白细胞吞噬并从伤口中清除。血小板衍生的生长因子(储存在血小板的α颗粒中)被释放到伤口中，从而导致细胞在增生期迁移和分裂。增殖期的特征在于血管生成、胶原蛋白沉积、肉芽组织形成、上皮形成和伤口收缩。通过排泄胶原和纤连蛋白，形成新的血管，成纤维细胞生长并形成新的临时细胞外基质(ECM)。同时，发生表皮的再上皮化，其中上皮细胞增殖并在伤口床上方“爬行”，为新组织提供覆盖。

患有伤口愈合困难的患者的血液中存在的NET水平可能增加。NET被认为是伤口愈合病理学的重要介体。

在本发明的第二或第三方面的一实施例中，提供了一种改善受试者在伤口愈合过程中引起的NET诱导的细胞毒性的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS之类的化合物可阻断NET的毒性作用，因此可用作治疗患有伤口愈合困难的患者。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供了一种用于改善NET在治疗受试者伤口中的细胞毒活性的手段。

L.中枢神经系统疾病

患有中枢神经系统疾病的患者血液中存在的NET水平可能升高。NET被认为是中枢神经系统疾病病理学的重要介体。例如，亨廷顿氏病是一种常染色体显性神经退行性疾病，由多聚谷氨酰胺重复扩增引起，导致亨廷顿蛋白中多聚谷氨酰胺轨迹扩大。

在本发明的第二或第三方面的一实施例中，提供了一种改善受试者的NET诱导的中枢神经系统疾病的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

诸如mCBS的化合物可以阻断NET的毒性作用，因此可用作治疗中枢神经系统疾病。

因此，本发明的化合物和包含所述化合物的治疗或药物组合物提供了一种改善NET在受试者中枢神经系统疾病中的细胞毒活性的手段，包括预处理(在医疗过程中)和中枢神经系统疾病发生后的治疗。

3.治疗和药物形式

在本发明的第五方面，提供了用于治疗NET相关并发症的治疗或药物组合物，其包括至少一种聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其在其治疗或药学上可接受的盐在其还原末端被小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性。优选地，组合物包括治疗或药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。治疗剂或药物中的化合物可以是中性游离碱形式或盐形式。优选地，所述化合物为β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐。

如本文所用，术语“药学上可接受的”或“治疗有效的”是指在合理的医学判断范围内适用于与人和动物的组织接触而无过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症的情况，且具有合理的获益/风险比的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

制备可给药组合物的方法对本领域技术人员而言是显而易见的，并且在例如Remington's Pharmaceutical Science,15th ed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.中有更详细的描述，其全部内容通过引用结合于此。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”或“药学上可接受的稀释剂”或“治疗上可接受的载体”或“治疗上可接受的赋形剂”或“治疗上可接受的稀释剂”指材料、组合物或媒介物，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、制造助剂(例如润滑剂、滑石镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌或硬脂酸)或溶剂封装材料，涉及将化合物从一个器官或身体的一部分运载或运输到另一器官或身体的一部分。每种载体、稀释剂和赋形剂在与制剂的其他成分相容并且对患者无害的意义上必须是“可接受的”。它是一种在生物学上或其他方面都不有害的材料，即该材料可与活性剂一起施用于个体，而不会引起不可接受的生物学效应或与其中所含组合物的任何一种或多种组分以有害方式相互作用。可以用作药学上可接受的载体，稀释剂和赋形剂的材料的一些实例包括但不限于：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素和醋酸纤维素；(4)黄芪粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)润滑剂，例如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠和滑石粉；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(九)花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油、大豆油等油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇(PEG)；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格的解答；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯，聚碳酸酯和/或聚酐；(22)填充剂，例如多肽和氨基酸；(23)血清成分，例如血清白蛋白、HDL和LDL；(22)C2-C12醇，例如乙醇；(23)药物制剂中使用的其他无毒相容性物质。在制剂中也可以存在润湿剂、粘合剂、填充剂、润滑剂、着色剂、崩解剂、脱模剂、涂层剂、甜味剂、调味剂、加香剂、防腐剂、水、盐溶液、醇、抗氧化剂、聚乙二醇、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。诸如“赋形剂”、“载体”、“稀释剂”和“药学上可接受的载体”之类的术语在本文中可互换使用。

治疗或药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的实例是去离子水或蒸馏水；生理盐水；植物油，例如花生油、红花油、橄榄油、棉籽油、玉米油、芝麻油，例如花生油、红花油、橄榄油、棉籽油、玉米油、芝麻油、花生油或椰子油；硅油，包括聚硅氧烷，例如甲基聚硅氧烷、苯基聚硅氧烷和甲基苯基聚氧杂环丁烷；挥发性有机硅；矿物油，例如液体石蜡、软石蜡或角鲨烷；纤维素衍生物，例如甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或羟丙基甲基纤维素；低级链烷醇，例如乙醇或异丙醇；低级芳烷醇；低级聚亚烷基二醇或低级亚烷基二醇，例如聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇、丙二醇、1，3-丁二醇或甘油；脂肪酸酯，例如棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯或油酸乙酯；聚乙烯基吡啶酮；琼脂；角叉菜胶；黄著胶或阿拉伯树胶和凡士林。通常，一种或多种载体将占组合物重量的10％至99.9％。

本文所述的组合物可以以其本领域确定的使用水平另外包含药物组合物中常规发现的其他辅助组分。因此，例如，该组合物可以包含另外的相容的药学活性物质，例如止痒药、收敛剂、局部麻醉药或消炎药。然而，当添加此类材料时，不应不适当地干扰本文所述的组合物的组分的生物活性。

如以下详细描述的，本文所述的治疗或药学上可接受的组合物可以被特别地配制为以固体或液体形式施用，包括适于以下用途的那些：(1)口服给药，例如滴水(水性或非水性溶液或悬浮液)、锭剂、糖衣丸、胶囊、丸剂、片剂(例如，针对颊、舌下和全身吸收的目标)、大丸剂、散剂、颗粒剂、糊剂，用于舌头；(2)肠胃外给药，例如通过皮下、肌肉内、静脉内或硬膜外注射，例如无菌溶液或混悬液或缓释制剂；(3)直接注射到需要治疗的器官中，例如通过实质内(进入大脑)、鞘内、心室内或肝内给药；(4)局部用途，例如以霜剂、洗剂、凝胶、软膏或控释贴剂或喷雾剂施用于皮肤；(5)适于通过吸入例如鼻内吸入或口服吸入施用的气雾剂形式，(6)阴道内或直肠内，例如子宫托、乳膏、栓剂或泡沫；(7)舌下；(八)眼药水；(9)透皮的；(10)透粘膜的；或(11)经鼻。

在一个实施例中，本发明的组合物通过注射给药，例如通过肠胃外注射(例如通过皮下、肌肉内或静脉内注射)或局部到达组织和器官，例如通过实质内(进入脑内)、鞘内、心室内或肝内施用。

适用于注射的药物组合物包括无菌水溶液(水溶性时)或分散液以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉剂。理想地，该组合物在生产和储存条件下是稳定的，并且可以包含防腐剂以使该组合物抵抗诸如细菌和真菌的微生物的污染作用。

无菌注射溶液可通过将需要量的本发明药物组合物掺入合适的溶剂中，根据需要与上面列举的一种或多种成分组合，然后过滤灭菌来制备。举例来说，可以将单剂量溶解在1ml等渗NaCl溶液中，然后添加到1000ml液体中或在建议的输注部位注射(例如，参见"Remington's Pharmaceutical Sciences"15th Edition,1035-1038和1570-1580页)。

在可注射溶液的情况下，载体可以是溶剂或分散介质，其包含，例如，水、林格氏溶液、等渗盐水、磷酸盐缓冲盐水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇(例如1,2丙二醇)和液体聚乙二醇等)，其合适的混合物以及植物油。

可以例如通过使用诸如卵磷脂的包衣，通过在分散的情况下维持所需的粒径以及使用表面活性剂来维持适当的流动性。可以通过包括各种抗菌剂和/或抗真菌剂来防止微生物的作用。合适的试剂是本领域技术人员众所周知的，并且包括，例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、苯甲醇、抗坏血酸、硫代金属硫醇等。在许多情况下，可能优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨糖醇、氯化钠。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。

在第二实施例中，本发明的组合物例如与惰性稀释剂或可吸收的可食用载体一起口服施用。对于口服治疗性给药，药物组合物可以与赋形剂结合并以可摄取片剂、颊片剂、锭剂、胶囊剂、酏剂、悬浮剂、糖浆剂、糯米纸囊剂等形式使用。

口服使用的合适的载体、稀释剂、赋形剂和佐剂的一些实例包括花生油、液体石蜡、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、藻酸钠、阿拉伯胶、黄著胶、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、明胶和卵磷脂。另外，这些口服制剂可包含合适的调味剂和着色剂。

当以胶囊形式使用时，胶囊可以用延迟崩解的化合物如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯包衣。片剂、锭剂、丸剂、胶囊剂等也可以包含以下成分：粘合剂，例如黄著胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，如磷酸二钙；另外的崩解剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂，例如硬脂酸镁；和甜味剂，例如蔗糖、乳糖或糖精，或调味剂，例如薄荷、冬青油或樱桃调味剂。

当剂量单位形式是胶囊时，除上述类型的材料外，它还可以包含液体载体。各种其他材料可以作为涂层存在或以其他方式改变剂量单位的物理形式。例如，片剂、丸剂或胶囊剂可以用虫胶、糖或两者包衣。

用于口服的液体形式(例如糖浆剂或酏剂)除上述试剂外，还可包含：液体载体、甜味剂(例如蔗糖)，防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、染料和调味剂(如樱桃或橙子香精)。合适的液体载体包括水、油(例如橄榄油、花生油、芝麻油、向日葵油、红花油、花生油、椰子油)、液体石蜡、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、乙醇、丙醇、异丙醇、甘油、脂肪醇、甘油三酸酯或其混合物。

用于口服的悬浮液可以进一步包含分散剂和/或悬浮剂。合适的悬浮剂包括羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、海藻酸钠或乙酰醇。合适的分散剂包括卵磷脂、脂肪酸如硬脂酸的聚氧乙烯酯、聚氧乙烯山梨糖醇单或二油酸酯、-硬脂酸酯或-月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单-或二油酸酯、-硬脂酸酯或-月桂酸酯等。口服给药的乳剂可进一步包含一种或多种乳化剂。合适的乳化剂包括上面举例说明的分散剂或天然树胶，例如瓜尔豆胶、阿拉伯树胶或黄著胶。

在第三示例性实施例中，本发明的组合物以气雾剂形式或通过雾化直接施用于受试者的气道。为了用作气雾剂，可以将本发明的药学上可接受的组合物的溶液或悬浮液与合适的推进剂，例如烃推进剂如丙烷、丁烷或异丁烷，与常规助剂一起包装在加压气雾剂容器中。这样的组合物也可以以非加压形式例如在喷雾器或雾化器中施用。

用于递送至呼吸道的气雾剂是本领域已知的：参见，例如Adjei,A.and Garren,J.Pharm.Res.,1:565-569(1990)；Zanen,P.and Lamm,J-W.J.Int.J.Pharm.,114:111-115(1995)；Gonda,I."Aerosols for delivery of therapeutic an diagnostic agents tothe respiratory tract,"in Critical Reviews in Therapeutic Drug CarrierSystems,6:273-313(1990)；Anderson et al.,Am.Rev.Respir.Dis.,140:1317-1324(1989)).

在第四示例性实施例中，组合物可以脂质体的形式施用。脂质体通常衍生自磷脂或其他脂质物质，并由分散在水性介质中的单层或多层水合液晶形成。可以使用能够形成脂质体的任何无毒的、生理上可接受的和可代谢的脂质。脂质体形式的组合物可以包含稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂质是天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)。形成脂质体的方法是本领域已知的，并且与该具体参考有关：Prescott,Ed.,Methods in CellBiology,Volume XIV,Academic Press,New York,N.Y.(1976),p.33et seq.，将其内容通过引用并入本文。

另外，可以将根据本文所述的任何方面、实施例或实例的本发明的治疗或药学上可接受的组合物掺入缓释制剂和制剂中。这样的治疗或药物组合物可进一步包括合适的缓冲剂以最小化酸水解。合适的缓冲剂是本领域技术人员众所周知的，包括但不限于磷酸盐、柠檬酸盐、碳酸盐及其混合物。

本发明的化合物也可以“前药”形式给药。前药是化合物的无活性形式，其在体内转化为活性形式。合适的前药包括化合物活性形式的酯、膦酸酯等。

另外，可以将本发明的组合物植入患者体内或使用药物递送系统注射。涂覆的输送装置也可以是有用的。参见，例如，Urquhart,et al.(1984),Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.24:199-236；Lewis,ed."Controlled Release ofPesticides and Pharmaceuticals"(Plenum Press,New York,1981)；美国专利号3,773,919；美国专利号6,747,014和美国专利号35 3,270,960。

在某些实施例中，使用例如在伤口的治疗过程中使用的装置或绷带递送组合物。

本文公开的药物组合物对任何特定受试者的治疗有效量将取决于多种因素，包括：药物组合物的毒性和治疗功效；疾病的严重程度；患者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；给药时间；给药途径；组合物的螯合速率；治疗的持续时间；与治疗结合或同时使用的药物，以及医学上众所周知的其他相关因素。

毒性和治疗功效可通过细胞培养或实验动物中的标准药学程序确定，例如，用于确定LD₅₀(对50％的人口致死的剂量)和ED₅₀(对50％的人口有效的治疗剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，可以表示为LD₅₀/ED₅₀之比。具有大治疗指数的组合物是优选的。

从本文所述的细胞培养测定法和动物模型获得的数据可用于配制用于人类的治疗有效剂量范围。这类化合物的剂量优选在循环浓度的范围内，该循环浓度包括几乎没有或没有毒性的ED₅₀。剂量可以在此范围内变化，这取决于所采用的剂型和所采用的给药途径。

可与载体材料组合以产生剂型的本文所述的本发明化合物的量通常为产生治疗作用的化合物的量。通常，在百分之一百中，该量为化合物的约0.1％至99％，优选为约5％至约70％，最优选为10％至约30％。

剂量可以由医生确定，并根据需要进行调整以适合所观察到的治疗效果。通过说明的方式，仅可以施用组合物，从而以1μg/kg至150mg/kg、1μg/kg至100mg/kg、1μg/kg至50mg/kg、1μg/kg至20mg/kg、1μg/kg至10mg/kg、1μg/kg至1mg/kg、100μg/kg至100mg/kg、100μg/kg至50mg/kg、100μg/kg至20mg/kg、100μg/kg至10mg/kg、100μg/kg至1mg/kg、1mg/kg至100mg/kg、1mg/kg至50mg/kg、1mg/kg至20mg/kg、1mg/kg至10mg/kg、10mg/kg至100mg/kg、10mg/kg至50mg/kg、或10mg/kg至20mg/kg的剂量给予药学上可接受的组合物。应当理解，此处给出的范围包括所有中间范围，例如，1mg/kg至10mg/kg的范围包括1mg/kg至2mg/kg、1mg/kg至3mg/kg,1mg/kg至4mg/kg、1mg/kg至5mg/kg、1mg/kg至6mg/kg、1mg/kg至7mg/kg、1mg/kg至8mg/kg、1mg/kg至9mg/kg、2mg/kg至10mg/kg、3mg/kg至10mg/kg、4mg/kg至10mg/kg、5mg/kg至10mg/kg、6mg/kg至10mg/kg、7mg/kg至10mg/kg、8mg/kg至10mg/kg、9mg/kg至10mg/kg等。还应理解，以上给出的中间范围也在本文所述的方法和组合物的范围内，例如，在1mg/kg至10mg/kg的范围内，剂量范围例如2mg/kg至8mg/kg、3mg/kg至7mg/kg、4mg/kg至6mg/kg等。

当本发明的化合物是mCBS或mCBS.Na时，剂量可以是10至800μg/mL。优选地，其在50至500μg/mL的范围内。当施用于人类受试者时，剂量更优选为10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790或800μg/mL。

在本发明的某些实施例中，有效剂量的改性的硫酸化纤维二糖苷化合物以单次给药的形式给出。在某些实例中，剂量是反复给予的。也就是说，治疗方案将根据疾病的严重程度和类型、患者的整体健康状况和年龄以及治疗医师要考虑的各种其他条件而有所不同。关于治疗的持续时间和频率，熟练的临床医生通常会监视受试者以确定治疗何时提供治疗益处，并确定是否增加或减少剂量、增加或减少给药频率、中止治疗、恢复治疗或对治疗方案进行其他更改。

根据本文描述的任何方面、实施例或实例的本发明的治疗剂或药学上可接受的组合物可以以单次推注施用或以多种剂量或治疗提供，并且还可以通过“连续”疗法来用途，其中在延长的时间段内连续提供少量的治疗组合物。

在治疗(包括连续疗法)中使用多次给药的情况下，治疗剂或药物组合物的给药方案可以根据每周的一次至一天而定，具体取决于几种临床因素例如受试者对用于治疗或药物组合物中的改性的硫酸纤维二糖苷化合物的敏感性。在这种方案中要施用的所需剂量可以一次单次给药，也可以分为亚剂量，例如2至4个亚剂量，并在一天中的适当间隔或一天或其他适当的时间表内进行给药。这样的亚剂量可以作为单位剂型施用。

在一些实施例中，施用是慢性的，例如在几周或几个月的时间内每天一次或多次剂量。给药时间表的示例是在1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月或更长时间内每天一次、每天两次、每天三次、或每天进行四次或更多次。

期望的剂量可以使用连续输注或通过控释制剂进行给药。在那种情况下，每个亚剂量中所含的药物组合物必须相应地较小，以达到每日总剂量。

剂量单位还可以配混用于在几天内递送，例如使用常规的持续释放制剂，其在几天内提供药物组合物的持续释放。缓释制剂在本领域中是众所周知的，并且对于在现场递送药剂特别有用，例如可以与本文所述的药剂一起使用。在该实施例中，剂量单位包含每日剂量的相应倍数。

4.组合方案

在某些示例性实施例中，根据本发明的第五方面，所鉴定的组合物还可以包含选自以下的第二活性剂、化合物或组合物：抗炎剂、抗生素剂、抗病毒剂、抗真菌剂和/或治疗受试者所遭受的一种或多种病症的任何其他形式的治疗或药物化合物中的一种或多种。根据该实施例，第二活性剂、化合物或组合物期望提供败血症、SIRS和IRI、或与败血症、SIRS和IRI有关的医学病症或疾病的辅助疗法。优选地，第二活性剂、化合物或组合物包含一种或多种抗炎剂。

通过组合方案可以实现治疗上的优势。在本发明的某些实施例中，所描述的方法可以进一步包括以下步骤：与本发明的治疗同时给予受试者第二活性剂，该第二活性剂是对败血症、SIRS和IRI、或与败血症、SIRS和IRI有关的医学病症或疾病的辅助治疗，当预防性递送时患者正患有或正处于患有或有患有败血症、SIRS和IRI、或与败血症、SIRS和IRI有关的医学病症或疾病的风险。

第二活性剂可包括但不限于抗炎剂、抗生素剂、抗病毒剂、抗真菌剂或不同于本发明化合物的其他形式的医学干预。

作为说明，当该方法或治疗涉及治疗或改善受试者中涉及NET介导的病理学的败血症或非败血症状态时，该方法还可以包括同时或伴随给予受试者不同于本发明化合物的第二抗炎剂、抗生素剂、抗病毒剂、抗真菌剂或其他形式的医学干预，它为涉及NET介导的病理学的医学病症提供辅助治疗。

在一个示例中，第二活性剂为败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI相关的医学病症或疾病提供辅助治疗或预防，例如败血症、SIRS或IRI、或者与涉及受试者中NET介导的病理的败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病。

在另一示例中，第二活性剂为涉及NET细胞毒性的医学病症提供辅助治疗或预防。

作为说明，当所述治疗方法涉及治疗或改善受试者中涉及NET介导的病理的败血症、SIRS或IRI相关的败血症或非败血症疾病状态时，该方法还可以包括同时或伴随向受试者施用不同于本发明化合物的第二抗炎药、抗生素、抗病毒药、抗真菌药或其他形式的医学干预措施，它为涉及NET介导的病理学的医学病症提供辅助治疗。

在一些示例中，施用的另外的药剂是抗炎药，例如类固醇、皮质类固醇、COX-2抑制剂、非甾体抗炎药(NSAID)、阿司匹林或其任何组合。更特别地，所施用的另外的药剂可以是选自以下的抗炎药：阿氯芬酸、丙酸氯米松、丙缩阿尔孕酮、α淀粉酶；阿西法尔；阿米那非、安非那克钠、盐酸阿米普利糖；阿那白滞素、阿尼罗酸、阿尼曲芬、阿扎丙宗；巴柳氮钠、苄达酸、贝诺沙芬、盐酸苯达明、菠萝蛋白酶、溴苯胺、布地奈德、卡洛芬、西洛洛芬、辛喷他宗、克罗普芬、丙酸氯倍他索、丁酸氯倍他松、氯吡酸、丙酸氯替卡松、醋酸甲米松、可托多松、地夫可特、地奈德、去氧肟酮、地塞米松二丙酸酯、双氯芬酸钾、双氯芬酸钠、双乙酸双氟松酯、双氟米酮钠、丁香醛、双氟泼尼、地弗他酮、二甲基亚砜、纤维虫素、内丹酮、恩莫单抗、依那康钠、依必利唑、依托度酸、依托非那酯、联苯乙酸、非那莫、芬布芬、芬氯芬酸、芬克洛拉、芬度柳、芬比龙、芬替扎克、夫拉扎酮、氟唑酸、氟苯那酸、氟米唑、醋酸氟尼酯、氟尼辛、氟尼辛葡甲胺、氟丁橡胶丁基、醋酸氟甲龙、氟喹酮、氟比洛芬、氟雷托芬、丙酸氟替卡松、呋喃洛芬、氟布芬、卤素、丙酸卤倍他索、醋酸卤丁酮、伊布芬尼克、布洛芬、布洛芬铝、布洛芬比考诺尔、伊洛达普、消炎痛、消炎痛钠、吲哚洛芬、吲哚、吲唑、醋酸异氟泼酮、伊索克酸、异烟酸、酮洛芬、盐酸洛美唑、洛莫昔康、洛替泼诺依他波酸酯、甲氯芬酸钠、甲氯芬那酸、丁酸美洛立松、甲芬那酸、美沙拉敏、梅赛拉宗、甲泼尼龙泼尼松、灭氟灵、萘丁美酮、萘普生、萘普生钠、萘普索、尼玛宗、奥沙拉嗪钠、奥古蛋白、奥帕诺辛、奥沙普嗪、羟苯丁酮、盐酸对苯二胺、戊聚糖多硫酸钠、苯丁那酮甘油酸钠、吡非尼酮、吡罗昔康、肉桂酸吡罗昔康、吡罗昔康油胺、吡罗芬、泼尼打、普利非隆、脯氨酸、丙草酮、丙唑、柠檬酸、普罗沙唑、利美索龙、氯马扎利、柳胆来司、沙那西丁、盐酸盐、撒盐、三氯化钠、司克拉宗、舒美沙星、舒多昔康、苏林达克、舒洛芬、塔耳他汀、他尼氟酯、滑石粉、替布非龙、替尼达普、替尼达普钠、替诺昔康、替昔康、苄叉异喹酮、四氢甲吲胺、提奥皮纳克、替考特洛新戊酸酯、托美汀、托美汀钠、三氯奈德、三氟甲酸酯、齐多美辛、糖皮质激素、佐美酸钠及其组合。

在一些示例中，所施用的另外的药剂是抗生素药剂，例如卡那霉素、放线菌素D、阿霉素、博来霉素、光神霉素、氨基糖苷、安沙霉素、羧苄青霉素、碳青霉烯、头孢菌素、糖肽、林可酰胺、大环内酯类、单菌胺类、青霉素、多肽、喹诺酮磺酰胺和/或四环素。

在一些示例中，所施用的另外的试剂是抗病毒剂，例如非核苷逆转录酶抑制剂、核苷逆转录酶抑制剂(例如核苷类似物)、蛋白酶抑制剂和/或核苷酸类似物逆转录酶抑制剂。

在一些示例中，所施用的另外的药剂是抗真菌剂，例如咪唑、三唑、噻唑、烯丙胺和/或棘皮菌素化合物。

在一些示例中，所施用的另外的药剂是治疗糖尿病的药剂。这类药物包括本领域已知用于治疗糖尿病和/或具有抗高血糖活性的药物，例如，二肽基肽酶4(DPP-4)的抑制剂(例如，阿格列汀、利那列汀、沙格列汀、西他列汀、维格列汀和黄连素)、双胍类(例如二甲双胍、丁二酸和苯乙双胍)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)调节剂，例如噻唑烷二酮(TZDs)(例如吡格列酮、瑞格列酮、罗格列酮和曲格列酮)、PPAR双重激动剂(例如阿格列扎、莫格他唑和Tesaglitazar)、磺酰脲类(例如，乙酰己酰胺、卡布丁酰胺、氯丙酰胺、格列齐特、甲苯磺丁酰胺、托拉酰胺、格列本脲、格列吡嗪、格洛酮、格列吡酰胺和格列美脲)、美格列脲(格列奈类药物)(例如那格列奈、瑞格列奈和米格列奈)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和类似物(例如Exendin-4、艾塞那肽、利拉鲁肽、阿必鲁泰)、胰岛素和胰岛素类似物(例如赖脯胰岛素、门冬胰岛素、甘精胰岛素、甘精胰岛素、地特胰岛素、吸入胰岛素和NPH胰岛素)、α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖)、胰岛淀粉样多肽类似物(例如普兰林肽)、钠依赖性葡萄糖共转运蛋白T2(SGLT T2)抑制剂(例如Dapgliflozin、Remogliflozin和Sergliflozin)和其他药物(例如苯氟雷司和托瑞司他)。

本领域技术人员将理解，根据本文所述的任何方面、实施例或示例的组合物可以作为用于治疗败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI相关的疾病或病症的联合疗法的一部分来施用。在联合疗法中，可以同时或以任何顺序依次施用各个药剂。当顺序施用时，可能优选通过相同途径施用组分。

在两种试剂分开施用的一些示例中，通常将确保在每次递送的时间之间不存在显著的时间段，使得两种试剂仍将能够发挥有利地组合的作用。在这种情况下，可以预期的是，通常会在彼此之间约12-24小时内，更优选在彼此之间约6-12小时内对这两种方式进行给药，最优选仅约12小时的延迟时间，在某些情况下，可能希望显著延长治疗时间，但是，在两次给药之间间隔几天(2、3、4、5、6、或7天)到几周(1、2、3、4、5、6、7或8周)。也可以想象将需要不止一次给药。

当本发明的组合物和第二活性剂以不同的组合物施用时，施用途径可以不同。例如，本发明的组合物通过本领域已知的任何适当途径施用，包括但不限于口服或肠胃外途径，包括静脉内、肌肉内、皮下、经皮、气道(气雾剂)、肺、鼻、直肠和局部(包括颊和舌下)给药，以及第二药物活性剂是通过不同的途径给药的，例如本领域通常用于施用所述药物活性剂的途径。在非限制性示例中，本发明的组合物可以通过注射给药，而第二活性剂可以口服给药。

5.药物的制造

在本发明的第六方面，提供了一种治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐在制备用于治疗涉及NET的医学病症、疾病或病痛的药物中的用途。

优选地，在本发明的这个方面，所选择的化合物是在还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷。更优选地，相对于在其还原端被硫酸化的相同聚阴离子，小的不带电荷的糖苷连接的取代基提高了聚阴离子的化学稳定性。特别地，当化合物是mCBS时，它是硫酸化的β-O-甲基纤维二糖苷二糖或β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐的钠盐，即mCBS.Na。

例如，在本发明的第六方面，提供了一种治疗或药学有效量的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防受试者的败血症、IRI、或与败血症、SIRS或IRI相关的医学病症或疾病的药物中的用途。优选地，改性的硫酸化纤维二糖苷是mCBS，或更特别地是其药学上可接受的盐，例如mCBS.Na。

在这种用途的又一实施例中，该药物用于中和NET，所述NET(i)对受试者的内皮细胞有细胞毒性，或(ii)导致受试者的内皮功能障碍，或(iii)通过活化受试者的血小板来引发凝血，或(iv)诱导受试者的红细胞脆性和导致的贫血。

在另一实施例中，制造的药物还可包含治疗或药学有效量的第二活性剂、化合物或组合物。根据该实施例，第二活性剂、化合物或组合物提供用于治疗涉及NET的医学病症、病痛或疾病的辅助疗法。期望地，第二活性剂、化合物或组合物提供用于治疗败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病辅助疗法。优选地，第二活性剂选自：抗炎剂、抗生素剂、抗病毒剂、抗真菌剂和/或治疗受试者所遭受的一种或多种病症的任何其他形式的治疗或药物化合物中的一种或多种。更优选地，第二活性剂、化合物或组合物包含一种或多种抗炎剂。

当在本发明的任何方法中使用改性的硫酸化纤维二糖苷化合物时，该化合物可以单剂量制剂的形式施用或配制以施用至需要其的受试者。在某些替代实施例中，将改性的硫酸化纤维二糖苷化合物以多剂量制剂的形式施用或配制以施用至需要其的受试者。

优选地，为了给予受试者，所述治疗或药物组合物以药学上可接受的组合物的形式提供。如果采用这种形式，(1)将组合物与一种或多种药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂和/或赋形剂一起药物配制，并且(2)组合物中的改性的硫酸化纤维二糖苷化合物可以以中性或盐形式配制。

示例

在以下非限制性示例中进一步描述了本发明，所述非限制性示例仅以举例说明的方式提供，并且不应解释为在整个说明书中限制了说明书的公开内容的一般性。

示例1：mCBS.Na的制备方法

如Jon K Fairweather et al.,2004,Aust.J.Chem.,57:197-205所述制备β-O-甲基纤维二糖苷。

如Katrin C Probst和Hans Peter Wessel,2001,J.Carbohydrate Chemistry,20(7&8):549-560所述制备β-O-甲基纤维二糖硫酸钠(mCBS)和β-O-甲基纤维二糖硫酸钠(mCBS.Na)化合物，将其通过引用整体并入本文。

根据以下示意图制备β-O-甲基纤维二糖苷硫酸盐(mCBS)。

步骤1：在室温下，向α-D-纤维二糖1(116g，338mmol)和冰醋酸(1.6L)的混合物中加入乙酰溴(300mL，500.0g，4065mmol，12.0当量)。将得到的奶油状混合物在60℃加热45-55分钟，直到反应混合物变成澄清溶液，表明反应完成。

小心地将热溶液倒入装有破裂的冰(4kg)的烧杯(10L)中。搅拌混合物直至白色固体沉淀(约10分钟)。加入另一份冷水(1L)，并继续搅拌10分钟。

用烧结漏斗过滤，并用冷水(700mL x 3)洗涤固体。将漏斗中的所得固体溶解在DCM(1L)中，并用DCM(300mL x 2)洗涤漏斗。合并的DCM层用盐水(1.5L)洗涤，并用DCM(0.5L)反萃取。最终的DCM层经Na₂SO₄干燥，过滤并在小于35℃下减压浓缩2小时以内得到目标溴化物2(172.5g，74.3％产率)，其直接用于以下糖基化。

步骤2：向过-O-乙酰化的纤维二硫代溴化物2(171g，250mmol)、无水DCM(800mL)、无水MeOH(800mL)、活化的3A分子筛(70g)的混合物中加入碳酸银(Ag₂CO₃，75g，275mmol，1.1当量)。将所得混合物在无光下搅拌16小时。通过二氧化硅塞纯化混合物，并用EtOAc洗脱。浓缩收集的级分，得到粗产物，为棕色固体，其直接用于下一步。化合物3的R_f＝0.28(EtOAc-己烷，1：1)。

步骤3：在室温下，向步骤2获得的粗产物和无水MeOH(1L)的混合物中加入一小片Na(1.72g，0.3当量，75mmol)。此后不久，白色固体开始从溶液中沉淀出来。将所得混合物搅拌过夜，以确保脱乙酰作用的完成。过滤最终的悬浮液，并用MeOH(300mL x 2)洗涤。收集白色固体，并在真空下干燥过夜，以获得最终的纤维二糖苷4(72.5g，81.4％)。

步骤4的合成和纯化步骤：

步骤4：将化合物4(84.0g，236mmol)、SO₃.TMA(367.4g，2.64mol，11.2当量)、无水DMF(3140mL)和无水DCE(767mL)的混合物在Ar下脱气3次，并在80-90℃加热2h。(反应监测：加热10分钟后，乳状混合物变成澄清溶液。30分钟后，溶液再次变浑浊。50分钟后，在烧瓶表面观察到聚集的固体。)冷却后，将所得混合物移至冷室(-5℃)中并沉降过夜，这使固体从溶剂中完全聚集。通过1H-NMR确认从化合物4完全转化为5。将溶液倒入下水道。过滤粗固体，并用DCM洗涤两次。将所得固体溶解在去离子水中，并直接进行离子交换柱[将DOWEX50Wx8的Na形式：3千克树脂(H⁺形式)预装在玻璃重力柱中，通过洗脱1M NaOH(-6L)进行再生并用去离子水(-12L)中和]。浓缩收集的馏分，得到最终的硫酸化纤维二糖苷6(232.1g，92.0％)，为玻璃状固体。

示例2到6：CBS、mCBS和MTS的比较

在以下研究中，本发明人检测了3种SPA，即纤维二糖过氧硫酸盐(CBS)、甲基β-纤维二糖过氧硫酸盐(mCBS)和麦芽三糖过氧硫酸盐(MTS)(图1中的结构)。下面列出了示例2至6中使用的方法。

以下示例(2–6)的方法和材料

肝素(猪粘膜-PM)购自Sigma-Aldrich。

人类受试者。所有与人类相关的研究都得到了ACT健康人类研究伦理委员会的批准。健康成人捐赠者被用作体外研究的红细胞和血小板的来源。同意入住堪培拉医院重症监护病房且APACHE II死亡率评分≥12的患者(Knaus,W.A.,Draper,E.A.,Wagner,D.P.&Zimmerman,J.E.APACHE II：疾病严重程度分类系统。Crit care med 13,818-829(1985))在抵达ICU和败血症的诊断中包括在我们的研究中。

基于以下标准诊断败血症(Mayr,F.B.,Yende,S.&Angus,D.C.Epidemiology ofsevere sepsis.Virulence 5,4-11(2014)；以及Bone,R.C.等。败血症和器官衰竭的定义以及败血症创新疗法的使用指南。ACCP/SCCM共识会议委员会。美国胸科医师学会/重症监护医学会。Chest 101,1644-1655(1992))。

a、至少符合以下两项：

i、呼吸急促>24bpm，或血气PCO2<32mm Hg

ii、白细胞计数(WCC)<4,000细胞/mm³或>12,000细胞/mm³

iii、心率(HR)>100bpm

iv、体温(发烧)>38.0℃或(体温过低)<36.0℃。

b、没有确定全身炎症反应综合征(SIRS)的其他原因

c、败血症的证据，包括阳性血培养、胸部X光或其他影像学上的肺炎迹象

d、终末器官功能障碍的证据：肾功能衰竭、肝功能障碍、格拉斯哥昏迷评分的变化(不可归因于其他原因)或血清乳酸升高

e、需要正性肌力支持的难治性低血压

动物。所有动物实验均经澳大利亚国立大学动物实验伦理委员会批准。无病原体雄性和雌性C57BL/6小鼠(6-8周龄)、雌性BALB/c小鼠(5-6周龄)和雄性Wistar大鼠(体重在250-350g之间)来自澳大利亚国立大学的澳大利亚表型组学设施。

细胞系和细胞培养条件。人微血管内皮细胞-1(HMEC-1)，携带O型血型，因此不会与人血清中的抗血型抗体发生反应，由ATCC提供，在补充有10％热灭活胎牛血清(FCS)、2mM/L谷氨酰胺、100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素、10ng/ml EGF和1μg/ml氢化可的松的MCDB 131培养基中培养。

组蛋白介导的细胞毒性测定。为了确定小牛胸腺组蛋白的细胞毒性(Sigma-Aldrich)，将不同浓度的组蛋白(100-800μg/ml)添加到96孔板中的HMEC-1或HUVEC(1x10⁶/ml)悬浮液中，并在37℃下孵育1小时。然后将细胞与碘化丙啶(PI；2.5μg/ml)(ThermoFisher Scientific)和Calcein-AM(0.04μM)(ThermoFisher Scientific)在37℃下孵育5分钟，检测置于冰上的活细胞，以及使用门控策略通过流式细胞术确定的死细胞和活细胞的百分比。在抑制试验中，在添加PI和钙黄绿素-AM之前，在不同浓度的化合物(12.5-400μg/ml)存在下，将HMEC-1与组蛋白(400μg/ml)在37℃下孵育1小时。然后根据下式确定每个化合物浓度下的HMEC-1细胞毒性：

然后使用Prism软件(Graphpad Software)基于最佳拟合线(非线性回归分析)确定每个聚阴离子的IC50值。在所有试验中，MTS(IC50 30μg/ml)都作为标准来补偿实验变化，在每个试验中将数据调整为IC50为30μg/ml的MTS。

脂质双层测定。如前所述(Rebbeck,R.T.et al.The beta(1a)subunit of theskeletal DHPR binds to skeletal RyR1 and activates the channel via its 35-residue C-terminal tail.Biophys J 100,922-930(2011).)制备的人工脂质双层分离对称的150mM或250mM KCl(pH～5.5)溶液。组蛋白(1μM，15.2μg/ml)单独添加到双层中，或在约20℃下与10μM CBS(3.5μg/ml)或10μM MTS(5.1μg/ml)孵育0.5-3小时后加入。添加组蛋白后连续记录电流，直到双层破裂或实验终止。

内皮细胞中的钙通量研究。将RPMI-1640培养基中的HMEC-1(2x 10⁷/ml)与Indo-1AM(5μM)(ThermoFisher)在37℃下孵育60分钟(Tellam,R.L.&Parish,C.R.The effect ofsulfated polysaccharides on the free intracellular calcium ion concentrationof lymphocytes.Biochim Biophys Acta 930,55-64(1987)；以及Weston,S.A.,Tellam,R.L.&Parish,C.R.Dextran sulfate induces changes in the free intracellularcalcium ion concentration of a subpopulation of immature thymocytes.ImmunolCell Biol 69,369-376(1991))。用补充有5％FCS的RPMI-1640培养基洗涤3次后，将细胞以4x10⁶/ml悬浮在补充有10mM HEPES的冰冷HEPES缓冲盐水(NaCl 8g/l，KCl 0.4g/l，CaCl₂0.2g/l，MgCl₂.6H₂O 0.2g/l，D-葡萄糖1.8g/l，pH 7.4)中。将细胞悬液置于冰上并在3小时内使用。使用流式细胞术监测细胞内Ca²⁺通量。在分析过程中，使用连接到热水浴的外部护套将细胞预平衡并保持在37℃。在排除细胞碎片和团块细胞后(基于FSC/SSC光散射)，在存在/不存在新化合物的情况下，在添加组蛋白之前监测基础Ca²⁺水平2分钟。在添加组蛋白后1、3和9分钟，以恒定流速(～300个事件/秒)测量Ca²⁺水平。Ca²⁺通量被确定为结合Ca²⁺的几何平均荧光强度(GMFI)与未结合Ca²⁺的Indo-1之比的增加。

体外红细胞显微术、聚集、脆性和变形性测定。组蛋白介导的人红细胞聚集及其对各种化合物的抑制通过流式细胞术检测，基于前向和侧向散射参数或红细胞自发荧光，如发明人先前报道的(Kordbacheh,F.,O'Meara,C.H.,Coupland,L.A.,Lelliott,P.M.&Parish,C.R.Extracellular histones induce erythrocyte fragility andanemia.Blood 130,2884-2888(2017))，以及如前所述(Yabas,M.et al.Mice deficientin the putative phospholipid flippase ATP11C exhibit altered erythrocyteshape,anemia,and reduced erythrocyte life span.J Biol Chem 289,19531-19537(2014))的扫描电子显微镜。类似地，在抑制剂存在或不存在的情况下，组蛋白诱导的红细胞脆性使用我们最近开发的纯粹压力测定法进行量化(Kordbacheh,F.,O'Meara,C.H.,Coupland,L.A.,Lelliott,P.M.&Parish,C.R.Extracellular histones induceerythrocyte fragility and anemia.Blood 130,2884-2888(2017))。最后，通过测量红细胞通过人造人脾的情况，评估了在组蛋白存在下红细胞变形能力的降低以及抑制剂对该过程的影响(Kordbacheh,F.,O'Meara,C.H.,Coupland,L.A.,Lelliott,P.M.&Parish,C.R.Extracellular histones induce erythrocyte fragility and anemia.Blood 130,2884-2888(2017)；以及Deplaine,G.et al.The sensing of poorly deformable redblood cells by the human spleen can be mimicked in vitro.Blood 117,e88-95(2011))。

体外血小板聚集和脱颗粒测定。对于聚集研究，从收集到柠檬酸钠真空采血管中的人全血中分离血小板，在室温下通过两步离心(200xg 20分钟，然后富含血小板的血浆800xg 15分钟)，将血小板沉淀重新悬浮在含有钙和镁的Hank平衡盐溶液中，并添加组蛋白，并在存在/不存在指定浓度的化合物的情况下孵育。在暴露于组蛋白15分钟后，使用血小板的特征log FSC与log SSC鉴定通过流式细胞术评估样品的血小板聚集程度，log FSC几何平均值的增加表明血小板聚集。

对于血小板活化测定，在具有Chrono-Lume试剂(Chrono-Log Corp)的Chrono-LogModel 700上使用发光模式监测在柠檬酸钠真空采血管中收集的全血的血小板脱粒。用搅拌棒原位将盐水(300μl)添加到预热的血液(420μl)中。然后添加Chromo-Lume试剂(100μl)并孵育2分钟，然后以所示浓度以180μl的总体积添加组蛋白±化合物。结果表示为ATP释放，计算为组蛋白+盐水对照的百分比。

体内组蛋白毒性测定。BALB/c雌性小鼠(5～6周龄)，比C57BL/6小鼠更容易发生组蛋白诱导的贫血，并且在这个年龄更容易静脉注射，在静脉注射磷酸盐缓冲盐水中的组蛋白(50mg/kg)前10分钟，以指示的浓度腹内注射测试化合物。在组蛋白注射后10分钟，用玻璃巴斯德吸管进行眶后出血，并将收集的血液加入酸性柠檬酸葡萄糖(ACD)，使用ADVIA2120i血液分析仪对10分钟的血液样本进行血小板和红细胞含量的血液学分析。还在组蛋白注射后10分钟收集脾脏，并使用血红蛋白测定试剂盒(Sigma-Aldrich)量化脾血红蛋白含量。在4小时血样的情况下，雄性C57/BL/6小鼠(6-8周龄)注射上述测试化合物和组蛋白，分离血浆并冷冻保存用于后续生化测试，堪培拉医院病理科确定肝脏(丙氨酸氨基转移酶，ALT)、肾脏(肌酐，Crea)和一般组织损伤(乳酸脱氢酶，LDH)的标志物。

鼠深静脉血栓形成(DVT)模型。使用的程序主要如前所述(Brill,A.etal.Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice.JThromb Haemost 10,136-144(2012))。简而言之，对8周大的雄性C57BL/6小鼠进行麻醉，进行剖腹手术，肠外化，然后与腹主动脉轻轻分离后，将肾静脉正下方的下腔静脉(IVC)结扎至约10％通畅，并结扎所有相关的IVC支流。然后关闭腹膜和皮肤，然后所有小鼠均通过尾静脉注射组蛋白(10mg/kg)或等量生理盐水，5分钟后静脉注射测试化合物(50mg/kg)或生理盐水。对小鼠进行监测48小时，之后将它们重新麻醉、重新打开，并去除在下腔静脉狭窄远端形成的任何血栓进行分析。假手术对照动物接受剖腹手术和90％的下腔静脉结扎，但是在下腔静脉闭塞后立即去除结扎。

用于败血症的大鼠盲肠结扎和穿刺(CLP)测定。如前所述，在雄性Wistar大鼠中进行了CLP测定(Hubbard,W.J.et al.Cecal ligation and puncture.Shock 24 Suppl 1,52-57(2005))。在CLP前5分钟和术后5、10和15小时腹内施用溶解在盐水中或仅等量体积的盐水中的测试化合物(50mg/kg)(对照组)，直到实验在20小时时停止。Sham-CLP大鼠经历了相同的程序，但是，盲肠没有结扎或穿刺，并且这些大鼠在与上述相同的时间接受盐水。在实验时间段(20小时)结束时或发病时需要伦理安乐死，将大鼠麻醉并通过心脏穿刺将血液收集到EDTA中，供堪培拉医院病理科随后分析肝(ALT)和肾(肌酐)功能。在盐水处理的对照CLP动物的血液样品中形成凝块的倾向(尽管存在EDTA)阻止了对所有动物的血浆样品的成功分析。

大鼠心脏缺血再灌注损伤模型。所使用的方法基于先前公布的程序的组合(Takada,Y.,Hashimoto,M.,Kasahara,J.,Aihara,K.&Fukunaga,K.Cytoprotectiveeffect of sodium orthovanadate on ischemia/reperfusion-induced injury in therat heart involves Akt activation and inhibition of fodrin breakdown andapoptosis.J Pharmacol Exp Ther 311,1249-1255(2004)；以及Hale,S.L.,Dae,M.W.&Kloner,R.A.Hypothermia during reperfusion limits'no-reflow'injury in a rabbitmodel of acute myocardial infarction.Cardiovasc Res 59,715-722(2003))。雄性Wistar大鼠用异氟烷麻醉，通过气管切开术插管并以1ml 150g^-1的潮气量和65次呼吸/min的呼吸频率通气。以～30％的FiO₂输送补充氧气。进行了左半开胸手术，以实现左心室的可视化。在再灌注30分钟之前，使用无创圈套器将左冠状动脉丛(LCA)闭塞30分钟。心肌充血证实了缺血。在释放圈套器用于再灌注阶段之前5分钟，将测试化合物(30mg/kg)或等量体积(200μl)盐水注入左心室腔(经抽吸确认)。

在再灌注(30分钟)结束时，将硫黄素S(1ml 200g^-1体重)缓慢注入左心室腔，以确定缺血区(IZ)内的微血管阻塞(MVO)区域。IZ区域是通过无创伤性圈套器的重新闭塞和将蓝色微球体注入左心室(Unisperse Blue,BASF)来确定的，使用CD-6800(Unisonics)声波器通过超声将其分布在溶液中。然后从胸腔切下心脏，在等渗盐水中冲洗，在无损伤圈套器的远端与心室线成直角切下2毫米的切片。该方法产生了4个心肌切片，在紫外光(MVO区域)和强光(IZ区域)下称重和拍照(Sony Handycam，蔡司60倍光学变焦)，然后在氯化四唑(TTC)中孵育，以确定坏死心肌的区域。平面测量法(Image J，免费软件)用于量化IZ、MVO和坏死的面积。

大鼠缺血再灌注组织瓣模型。所采用的程序主要基于先前描述的方法(Bone,R.C.et al.Definitions for sepsis and organ failure and guidelines for the useof innovative therapies in sepsis.The ACCP/SCCM Consensus ConferenceCommittee.American College of Chest Physicians/Society of Critical CareMedicine.Chest 101,1644-1655(1992))。简而言之，将雄性Wistar大鼠麻醉，局部脱毛，并切除3cm x 6cm的筋膜皮瓣，保留完整的血管蒂。夹住腹壁下动脉，在皮瓣下放置一块细橡胶板，防止氧气从下方组织扩散，然后将皮瓣重新缝合回原位。应用后10小时取下钳夹，使血液回流到皮瓣。在应用钳夹前5分钟和去除后5分钟腹内施用测试化合物(50mg/kg)或盐水。在72小时的总实验期间对大鼠进行监测，在此期间大鼠在术后24和48小时接受额外的腹内化合物或盐水。“对照无钳夹”大鼠在重新缝合之前切除了组织瓣并在下面放置了橡胶，然而，血管没有被夹住，它们在与其他大鼠相同的时间点接受盐水。在实验期结束时，皮瓣的存活率由黑色坏死或变红区域与粉红色存活区域的百分比确定。尽管使用了伊丽莎白项圈并使用镇痛剂作为沉淀剂，但仍有少数老鼠在反复自噬皮瓣时不得不过早地安乐死。

患者血清中DNA的定量。到达ICU时APACHE II评分>12的同意患者的血液从静脉通路收集到血清分离管中，将管以2300xg离心10分钟，收集血清并储存在-80℃。为了量化来自脓毒症患者的血清(5μl)，在96孔平底培养板中，在37℃下与95μl 5μM Sytox Green一起孵育10分钟。然后在荧光读板器(Tecan Infinite M200 Pro)中测量荧光强度，激发波长设置为504nm，发射波长设置为523nm。

败血症患者血清对内皮细胞的细胞毒性的检测和分析。为了在体外测量败血症患者血清对内皮细胞的细胞毒活性，将HMEC-1以2.5x 10⁴/孔的密度接种到96孔板中，并在37℃和5％CO₂中生长48小时，然后在存在/不存在DNase I(10μg/ml)、抗人组蛋白3和组蛋白4兔pAb(200μg/ml)(BioVision)或测试化合物(200μg/ml)的情况下添加50μl患者血清，并孵育3小时。然后将3H-胸苷(0.5μCi，MP Biomedical)加入到每个培养孔中，加入20μl HMEC-1培养基，再孵育24小时。在孵育期结束时，在收获和测量3H-胸苷掺入之前，将平板进行3次冷冻/解冻循环(-70℃30分钟，然后37±0.5℃30分钟)。使用Filtermate 196收集器(Packard Bioscience)，将细胞培养物收集到玻璃纤维过滤器(EasyTabTM-C自对准过滤器；Packard Bioscience)上。过滤器在80℃下干燥并置于Omnifilter板(Perkin Elmer)中，然后将20μl Microscint-O闪烁液(Perkin Elmer)添加到每个孔中，并用TopSeal-A粘合剂膜(Perkin Elmer)密封板。3H-胸苷掺入使用TopCount NXTTM MicroplateScintillation and Luminescence Counter(Packard Bioscience)测量。结果表示为未暴露于患者血清的HMEC-1增殖的百分比。

数据分析。Prism软件(Graphpad Software)用于执行统计测试并生成图表，所用测试的详细信息包含在图例中。

mCBS生物学效应的体外证据

以下示例2至6提供了mCBS在中和游离组蛋白和NET中的生物学效应的体外证据。

示例2：mCBS保护内皮细胞免受组蛋白毒性和红细胞免受组蛋白诱导的脆性和聚集

当测量组蛋白对内皮细胞的细胞毒性(图2a)或诱导红细胞(RBC)脆性(图2b)时，CBS、mCBS和MTS(统称为小聚阴离子或SPA)中的每一个都具有类似于肝素的组蛋白抑制活性，不像活性低得多的硫酸化单糖。

本示例研究了mCBS和MTS是否促进红细胞聚集并降低红细胞变形能力。基于流式细胞术FSC和SSC，组蛋白非常有效地聚集红细胞，这种作用被mCBS完全抑制(图3a)，扫描EM证实了这一结果(图3b)。本发明人还使用红细胞自发荧光来量化组蛋白诱导的聚集体中存在的红细胞数量。在高组蛋白浓度(400μg/ml)下，有约35个红细胞/聚集体，但mCBS和MTS以浓度依赖性方式阻止聚集，MTS比mCBS有效约2倍(图3c)。最后，暴露于不诱导红细胞聚集的组蛋白浓度的红细胞(<50μg/ml)(图3d)显示通过人工脾脏的通道显著减少，该测定测量红细胞变形性/刚性(Deplaine,G.et al.The sensing of poorly deformable red bloodcells by the human spleen can be mimicked in vitro.Blood 117,e88-95(2011))。然而，添加mCBS和MTS完全恢复了红细胞通过人工脾脏的能力(图3d)，表明SPA以及保护红细胞免受组蛋白介导的聚集和脆性，防止组蛋白诱导的刚性。

示例3：SPA抑制组蛋白对血小板的激活

已知组蛋白诱导血小板活化，因此，为了研究SPA抑制该过程的能力，将分离的、洗涤的人血小板与组蛋白一起温育，并通过流式细胞术测量血小板聚集。此外，在将全血暴露于组蛋白后，测量了由于血小板脱粒引起的ATP释放。血小板聚集和脱颗粒都依赖于组蛋白浓度(图4a、c)，两种检测之间血小板组蛋白敏感性的差异归因于ATP释放检测中血浆蛋白和红细胞的存在，这些检测也与组蛋白结合。CBS、mCBS和MTS完全抑制组蛋白诱导的血小板聚集，其中MTS最活跃(图4b)。作为阴性对照的未硫酸化CB是非抑制性的(图4b)。组蛋白诱导的ATP释放获得了类似的结果(图4d)。因此，CBS、mCBS和MTS可有效抑制组蛋白的血小板活化特性。

示例4：SPA可防止脂质双层破坏

我们接下来研究了组蛋白如何介导它们的细胞毒性以及因此SPA如何保护细胞免受组蛋白介导的损伤。已知组蛋白与脂质双层相互作用并破坏脂质双层(Kleine,T.J.,Lewis,P.N.&Lewis,S.A.Histone-induced damage of a mammalian epithelium:therole of protein and membrane structure.Am J Physiol273,C1925-1936(1997))并充当细胞穿透蛋白(Rosenbluh,J.et al.Translocation of histone proteins acrosslipid bilayers and Mycoplasma membranes.J Mol Biol345,387-400(2005))。因此，我们研究了组蛋白是否通过直接破坏脂质双层来介导它们的细胞毒性。为了检验这种可能性，制备了人工脂质双层，并通过双层中电流的变化检测它们对组蛋白破裂的敏感性。脂质双层的寿命有限，通常约为30到120分钟(Rebbeck,R.T.et al.The beta(1a)subunit ofthe skeletal DHPR binds to skeletal RyR1 and activates the channel via its35-residue C-terminal tail.Biophys J 100,922-930(2011))。在发明人的实验中，含有兰尼碱受体1(RyR1)离子通道蛋白的对照脂质双层具有46±4分钟的平均寿命，添加组蛋白(1μM)显著降低寿命至5.7±1.2分钟(图3a)。事实上，13/47双层(28％)在组蛋白添加后0.3-0.5分钟内破裂，而只有2/125对照双层(1.6％)在同一时间段内破裂，较高的组蛋白浓度(≥50μM)导致大多数双层快速破裂(未显示)。当存在CBS或MTS时，双层不太容易被组蛋白破裂，CBS和MTS的平均双层寿命分别显著增加至18±4分钟和36±5分钟(图5a)。此外，MTS的双层寿命与对照寿命没有显著差异。同样，与单独的组蛋白(28％)相比，快速双层破裂的发生率对于CBS降低到3/52双层(5.8％)，对于MTS降低到1/40双层(2.5％)。

较早的研究证明组蛋白可以诱导细胞中的非选择性Ca²⁺通道和质膜去极化。这些发现进一步支持了组蛋白直接与细胞表面磷脂相互作用并破坏膜完整性的概念。为了研究CBS、mCBS和MTS是否保护细胞免受组蛋白诱导的Ca²⁺通量的影响，HMEC-1加载了Ca²⁺敏感染料Indo-1，在存在或不存在CBS或MTS的情况下用组蛋白进行攻击，并通过流式细胞术测量Ca²⁺摄取(图5b)。组蛋白诱导细胞群中表现出高细胞内Ca²⁺水平的细胞增加了8倍以上，这种反应在添加组蛋白后1到3分钟趋于稳定。MTS的存在完全消除了Ca²⁺反应，CBS基本上抑制了反应(图5c)。发明人的共同发现表明，组蛋白通过直接破坏细胞的脂质双层来破坏细胞膜，其中CBS、mCBS和MTS SPA中和了组蛋白的这种不良特性。

示例5：CBS、mCBS和MTS对体内组蛋白相关病理的影响

发明人接下来评估了CBS、mCBS和MTS在体内抑制组蛋白介导的病理的能力。向小鼠静脉注射组蛋白会导致败血症样综合征，包括肝损伤、全身组织损伤和肾功能衰竭，如通过循环ALT、LDH和肌酐水平测量的。CBS、mCBS和MTS的施用以浓度依赖性方式保护动物免受这些组织特异性病理中的每一种，其中MTS是最有效的，CBS和mCBS具有同等活性，而未硫酸化的CB是无活性的(图6a)。全身性组蛋白还诱导血小板减少症和贫血，而mCBS和MTS治疗可预防这些症状(图6b)。为了检查CBS、mCBS和MTS是否影响组蛋白的局部血管效应，建立了一个组蛋白介导的DVT模型(Brill,A.et al.von Willebrand factor-mediated plateletadhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models.Blood 117,1400-1407(2011))，该模型显示这几乎完全被CBS和MTS抑制(图6c)，这与由CBS、mCBS和MTS抑制的游离组蛋白介导的全身和局部病理一致。

本发明人接下来检查了CBS、mCBS和MTS在败血症的大鼠盲肠结扎穿刺(CLP)模型中的功效。CBS治疗组没有死亡，与PBS对照组相比，这一效应非常显著，而MTS组仅发生了1例死亡，接近显著性(图7a)。重要的是，在未治疗组中检测到的高ALT和肌酐水平表明广泛的肝和肾损伤，在CBS治疗的动物中未见，但在MTS治疗组中仅部分降低(图7b)。这一发现有些矛盾，因为在体外和体内MTS始终是比mCBS/CBS更有效的无DNA细胞外组蛋白中和剂。

为了进一步研究这个悖论，测试了CBS和MTS在大鼠心脏缺血再灌注损伤(IRI)模型中的功效，之前的研究已经证明心脏IRI是高度依赖于NET的(Savchenko,A.S.etal.VWF-mediated leukocyte recruitment with chromatin decondensation by PAD4increases myocardial ischemia/reperfusion injury in mice.Blood 123,141-148,(2014)；and Ge,L.et al.Neutrophil extracellular traps in ischemia-reperfusioninjury-induced myocardial no-reflow:therapeutic potential of DNase-basedreperfusion strategy.Am J Physiol Heart Circ Physiol 308,H500-509,(2015))。值得注意的是，在该模型中，MTS完全无效，而CBS治疗显著减少了50％的缺血区微血管阻塞和心肌坏死面积(图7c)。这一意外发现在大鼠皮瓣IRI模型中得到了很大程度的证实，其中mCBS持续且显著地增加了皮瓣的活面积，而MTS治疗的结果变化很大(图7d)。

示例6：比较CBS、mCBS和MTS抑制败血症患者血清中NET的能力

基于以上讨论的体内功效数据，我们假设mCBS/CBS抑制由无DNA和NET相关组蛋白两者介导的病理，而MTS优先抑制无DNA组蛋白的破坏作用。使用来自败血症患者的血清获得了对这种解释的支持，我们发现，通过³H-胸苷掺入测量的HMEC-1增殖抑制(图8a、b)，其水平与其APACHE II评分高度相关(图9a)。这种相关性比APACHE II评分和循环DNA水平之间观察到的更强(图9b)。对来自患者5的高度抑制性血清的进一步分析表明，这种细胞毒活性对DNase I敏感，并且也被组蛋白3和4特异的多克隆抗体完全抑制(图9c)。这些数据与介导败血症患者血清抗增殖作用的NET一致。最后，发明人发现CBS显著超过了10种抑制性最强的败血症患者血清的抗增殖活性，而MTS则没有(图9d)。因此，这些结果与MTS是一种游离组蛋白抑制剂和mCBS/CBS抑制由无DNA和NET相关组蛋白介导的病理完全一致。

Claims

1.一种用于治疗或预防NET介导的疾病的化合物，其特征在于，所述化合物包含在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述NET介导的疾病选自但不限于以下：(a)针对感染的全身性炎症反应，例如败血症(包括细菌、病毒、真菌、寄生虫、病毒引起的败血症)，或针对非感染性诱因的全身性炎症反应，包括手术、创伤、出血、烧伤、急性胰腺炎和急性肾损伤；(b)由于动脉粥样硬化、血管自发性破裂、对血管的创伤性损伤以及包括与心脏和移植相关的IRI，导致的动脉阻塞后局部组织水平的缺氧；由于溺水、暴露于气体或心肺停止而导致呼吸停止后，以及包括疾病，例如急性呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺疾病和药物介导的组织损伤，导致的全身水平的缺氧；(c)止血或血管阻塞，例如心血管疾病或慢性心血管疾病，例如动脉粥样硬化、凝血和血栓形成(例如深静脉血栓形成)；(d)自身免疫性疾病状态和炎症性疾病状态，例如多发性硬化症、高炎症性疾病状态、系统性红斑狼疮、脊柱关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、反应性关节炎、肠病性关节炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病、肠易激病、类风湿关节炎、青少年类风湿关节炎、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、相关血管炎(AAV)(例如肉芽肿合并多血管炎、嗜酸性肉芽肿合并多血管炎和镜下性多血管炎)，特征为小血管的破坏和发炎、家族性地中海热、肌萎缩性侧索硬化、干燥综合征、早期关节炎、病毒性关节炎、牛皮癣、与年龄有关的器官纤维化、特发性肺纤维化、少年糖尿病(I型)、糖尿病(2型)、抗磷脂综合症以及各种中枢神经系统疾病，例如亨廷顿氏病。

3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述NET介导的疾病为败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI相关的医学病症或疾病。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其特征在于，在其还原末端用小的不带电荷的取代基改性的硫酸化纤维二糖苷具有以下一般结构：

其中，R1为小的不带电荷的糖苷连接的取代基；R2至R8均为小的不带电荷的O-连接的取代基或硫酸盐基团。

5.根据权利要求4所述的化合物，其特征在于，R1为O-或S-(C_1-6)烷基。

6.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于，R1为甲氧基或乙氧基。

7.根据权利要求4至6中任一项所述的化合物，其特征在于，R2至R8均为硫酸盐基团。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其特征在于，所述化合物为硫酸化的β-O-甲基纤维二糖苷二糖。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其特征在于，所述化合物为β-O-甲基纤维二糖苷硫酸钠。

10.一种治疗或预防NET介导的疾病的方法，其特征在于，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述NET介导的疾病选自但不限于以下：(a)针对感染的全身性炎症反应，例如败血症(包括细菌、病毒、真菌、寄生虫、病毒引起的败血症)，或针对非感染性诱因的全身性炎症反应，包括手术、创伤、出血、烧伤、急性胰腺炎和急性肾损伤；(b)由于动脉粥样硬化、血管自发性破裂、对血管的创伤性损伤以及包括与心脏和移植相关的IRI，导致的动脉阻塞后局部组织水平的缺氧；由于溺水、暴露于气体或心肺停止而导致呼吸停止后，以及包括疾病，例如急性呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺疾病和药物介导的组织损伤，导致的全身水平的缺氧；(c)止血或血管阻塞，例如心血管疾病或慢性心血管疾病，例如动脉粥样硬化、凝血和血栓形成(例如深静脉血栓形成)；(d)自身免疫性疾病状态和炎症性疾病状态，例如多发性硬化症、高炎症性疾病状态、系统性红斑狼疮、脊柱关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、反应性关节炎、肠病性关节炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病、肠易激病、类风湿关节炎、青少年类风湿关节炎、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、相关血管炎(AAV)(例如肉芽肿合并多血管炎、嗜酸性肉芽肿合并多血管炎和镜下性多血管炎)，特征为小血管的破坏和发炎、家族性地中海热、肌萎缩性侧索硬化、干燥综合征、早期关节炎、病毒性关节炎、牛皮癣、与年龄有关的器官纤维化、特发性肺纤维化、少年糖尿病(I型)、糖尿病(2型)、抗磷脂综合症以及各种中枢神经系统疾病，例如亨廷顿氏病。

12.一种治疗或预防受试者的败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病的方法，其特征在于，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病是由受试者的NET介导的病理引起和/或介导和/或涉及和/或与之相关，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐，以治疗或预防受试者的败血症、SIRS或IRI医学病症或疾病。

14.根据权利要求11至13中任一项所述的方法，其特征在于，医学病症或疾病是由受试者的NET的释放引起和/或介导和/或涉及和/或与之相关。

15.根据权利要求11至13中任一项所述的方法，其特征在于，改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷的治疗有效量足以减轻、最小化或抑制受试者的NET介导的病理。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，治疗有效量足以减轻、最小化或抑制NET，所述NET(i)对受试者的内皮细胞具有细胞毒性，或(ii)导致受试者的内皮功能障碍，或(iii)通过活化受试者的血小板来引发凝血，或(iv)诱导受试者的红细胞脆性和导致的贫血。

17.根据权利要求11至16中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括以单一剂量施用治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

18.根据权利要求11至16中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括以多剂量施用治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

19.根据权利要求11至16中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括同时或随附向受试者施用选自以下的第二活性剂：抗炎剂、抗生素剂、抗病毒剂、抗真菌剂或其它形式的医学干预措施，作为对所治疗的医学病症或疾病的辅助治疗。

20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述第二活性剂包括一种或多种抗炎剂。

21.根据权利要求11至20中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括在患有或怀疑患有败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病的受试者中治疗败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病。

22.根据权利要求11至21中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括在有患败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病的风险的受试者中预防败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病。

23.一种治疗组合物，其特征在于，所述治疗组合物至少包括在其还原末端用小不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

24.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物至少包括在其还原末端用小不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。

25.一种治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防受试者的败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病的药物中的用途。

26.根据权利要求25所述的用途，其特征在于，败血症、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病是由受试者的NET介导的病理引起和/或介导和/或涉及和/或与之相关。

27.根据权利要求25或26所述的用途，其特征在于，败血症、SIRS或IRI或医学病症或疾病是由受试者的NET的释放引起和/或介导和/或涉及和/或与之相关。

28.根据权利要求27所述的用途，其特征在于，败血症、SIRS或IRI或医学病症或疾病是由受试者的炎症或炎症反应后由NET的释放引起和/或介导和/或涉及和/或与之相关。

29.根据权利要求25至28中任一项所述的用途，其特征在于，NET对受试者的内皮细胞具有细胞毒性和/或导致受试者的内皮功能障碍。

30.根据权利要求24至28中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物减轻、最小化或抑制受试者的NET介导的病理。

31.根据权利要求30所述的用途，其特征在于，所述药物减轻、最小化或抑制针对受试者内皮细胞的NET介导的病理。

32.根据权利要求25至30中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物被配制用于以单剂量施用于受试者。

33.根据权利要求25至31中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物被配制用于以多剂量施用于受试者。

34.根据权利要求25至32中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物被配制用于同时或随附向受试者施用选自以下的第二活性剂：抗炎药、抗生素药、抗病毒药、抗真菌药或其他形式的医学干预措施，作为败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI相关的医学病症或疾病的辅助治疗。

35.根据权利要求34所述的方法，其特征在于，所述第二活性剂包括一种或多种抗炎剂。

36.根据权利要求25至35中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物用于在患有或怀疑患有败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病的受试者中治疗败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病。

37.根据权利要求25至35中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物用于在有患败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病的风险的受试者中预防败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病。

38.一种治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐在治疗或预防受试者的败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病的用途。

39.根据权利要求39所述的用途，其特征在于，败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病是由受试者的NET介导的病理引起和/或介导和/或涉及和/或与之相关。

40.根据权利要求38或39所述的用途，其特征在于，败血症、SIRS或IRI或医学病症或疾病是由受试者的NET的释放引起和/或介导和/或涉及和/或与之相关。

41.根据权利要求39所述的用途，其特征在于，败血症、SIRS或IRI或医学病症或疾病是由受试者的炎症或炎症反应后由NET的释放引起和/或介导和/或涉及和/或与之相关。

42.根据权利要求39至41中任一项所述的用途，其特征在于，NET(i)对受试者的内皮细胞具有细胞毒性，或(ii)导致受试者的内皮功能障碍，或(iii)通过活化受试者的血小板来引发凝血，或(iv)诱导受试者的红细胞脆性和导致的贫血。

43.根据权利要求38至42中任一项所述的用途，其特征在于，治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐足以减轻、最小化或抑制受试者的NET介导的病理，和/或所述用途减轻、最小化或抑制受试者的NET介导的病理。

44.根据权利要求43所述的用途，其特征在于，治疗有效量足以减轻、最小化或抑制针对受试者内皮细胞的NET介导的病理，和/或所述用途减轻、最小化或抑制抑制针对受试者内皮细胞的NET介导的病理。

45.根据权利要求38至44中任一项所述的用途，其特征在于，所述用途包括在治疗或预防受试者的败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病中使用单剂量的治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

46.根据权利要求38至44中任一项所述的用途，其特征在于，所述用途包括在治疗或预防受试者的败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病中使用多剂量的治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐。

47.根据权利要求38至46中任一项所述的用途，其特征在于，所述用途包括使用治疗有效量的在其还原末端用小的不带电荷的糖苷连接的取代基改性的聚阴离子硫酸化纤维二糖苷或其药学上可接受的盐和一定量的选自以下的第二活性剂：抗炎药、抗生素药、抗病毒药、抗真菌药或其他形式的医学干预措施，作为败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI相关的医学病症或疾病的辅助治疗。

48.根据权利要求47所述的方法，其特征在于，所述第二活性剂包括一种或多种抗炎剂。

49.根据权利要求38至48中任一项所述的用途，其特征在于，所述用途包括在患有或怀疑患有败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病的受试者中治疗败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病。

50.根据权利要求38至48中任一项所述的用途，其特征在于，所述用途包括在有患败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病的风险的受试者中预防败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病。

51.一种根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，或一种根据权利要求10至21中任一项所述的方法，或一种根据权利要求23所述的治疗组合物，或一种根据权利要求24所述的药物组合物，或一种根据权利要求25至50中任一项所述的用途，其特征在于，治疗包括改善败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病。

52.一种根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，或一种根据权利要求10至22中任一项所述的方法，或一种根据权利要求23所述的治疗组合物，或一种根据权利要求24所述的药物组合物，或一种根据权利要求25至50中任一项所述的用途，其特征在于，治疗包括抑制败血症、SIRS或IRI、或与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病。

53.一种根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，或一种根据权利要求10至21中任一项所述的方法，或一种根据权利要求23所述的治疗组合物，或一种根据权利要求24所述的药物组合物，或一种根据权利要求25至50中任一项所述的用途，其特征在于，与败血症、SIRS或IRI有关的医学病症或疾病为非败血症、-SIRS或-IRI疾病状态。