CN1205231C - 一种具有抗肿瘤活性的水溶性杂多糖及其制备方法和用途 - Google Patents
一种具有抗肿瘤活性的水溶性杂多糖及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1205231C CN1205231C CN 03118416 CN03118416A CN1205231C CN 1205231 C CN1205231 C CN 1205231C CN 03118416 CN03118416 CN 03118416 CN 03118416 A CN03118416 A CN 03118416A CN 1205231 C CN1205231 C CN 1205231C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- poria cocos
- water
- soluble
- heteropolysaccharide
- mycelium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 title claims abstract description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 244000197580 Poria cocos Species 0.000 claims abstract description 34
- 235000008599 Poria cocos Nutrition 0.000 claims abstract description 34
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 23
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 23
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims abstract description 10
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 230000036737 immune function Effects 0.000 claims abstract description 5
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 6
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 claims description 6
- 238000000944 Soxhlet extraction Methods 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 claims description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 claims 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 claims 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims 1
- 229910000360 iron(III) sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 claims 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 claims 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 claims 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 claims 1
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 abstract description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000006268 Sarcoma 180 Diseases 0.000 abstract description 4
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N alpha-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 abstract description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 abstract description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 abstract description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 abstract description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229920002444 Exopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- -1 Polysaccharide Monosaccharide Chemical class 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 241001619461 Poria <basidiomycete fungus> Species 0.000 description 1
- 241000576755 Sclerotia Species 0.000 description 1
- 241001558929 Sclerotium <basidiomycota> Species 0.000 description 1
- 230000002790 anti-mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 231100000324 minimal toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了具有抗肿瘤活性的人工培养菌种的茯苓菌丝体水溶性杂多糖及其制备方法和用途。用玉米浆为主要成分配制成培养基，由茯苓菌种深层发酵培养出茯苓菌丝体。分别用生理盐水和热水从菌丝体中提取水溶性杂多糖。所得该杂多糖主要由α-D-葡萄糖、甘露糖、半乳糖和蛋白质组成。体内活性实验表明，该水溶性杂多糖对植入小鼠体内的Sarcoma 180肿瘤的生长具有明显的抑制作用，而且无毒副作用。体外活性实验表明，该类多糖对人体急性白血病毒细胞(HL-60)的增殖有显著的抑制效果，而且不会破坏正常猴肾细胞的增殖。上述水溶性杂多糖可用作抗肿瘤药物或提高机体免疫功能的保健品。
Description
技术领域
本发明涉及具有抗肿瘤活性的水溶性杂多糖及其制备方法和用途。属于天然高分子领域，也属于分子生物学领域。
背景技术
七十年代，由于细胞膜的化学功能、免疫物质和新药等研究方面取得的进展，以及多种糖蛋白、糖脂等复合多糖的发现，已确信多糖具有许多方面的生物活性。Chihara(J.Immunol.Immunopharmacol.，IV，85，1983)的研究认为多糖类化合物的活性不是象在化疗中那样直接杀死细胞，而是存在一种间接的抗肿瘤活性，即由免疫系统传递的活性，主要是对免疫系统的特定非特异性或特异性功能的激发，因此毒性极小。茯苓是我国的传统中药，具有利尿、渗湿、补脾、安神等功能。近年来，茯苓的研究主要集中在其主要成分茯苓多糖上，它和它的衍生物具有抗诱变、抗肿瘤(Yakugaku Zasshi，106，206，1986)和免疫(Phytother.Res.，9，448，1995)等活性。Narui等人(Carbohydr.Res.87，161，1980)报道从茯苓菌核中提取的多糖具有明显的抗肿瘤活性。然而，由于茯苓人工栽培周期长，而且很难保存及运输，使得由菌核制得的茯苓多糖难以推广。
发明内容
本发明所要解决的问题是提供一种具有抗肿瘤活性的水溶性杂多糖及其制备方法和用途，这种杂多糖以容易获得的人工培育的茯苓菌种为原料，其制法简单，易以工业化生产。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：一种具有抗肿瘤活性的水溶性杂多糖(ac-PCM2)，由下法制得：采用人工培育的茯苓菌种(Poria cocos；中国科学院微生物所菌种保藏中心提供，编号5.78)在含玉米浆的液体培养基中深层发酵培养出茯苓菌丝体，将茯苓菌丝体依次用乙酸乙酯、丙酮进行索氏提取去除脂肪；然后浸泡在生理盐水中，离心，离心后所得沉淀用105～120℃的热水在0.12～0.20MPa下浸泡提取，离心，收集提取液；提取液浓缩后，用H2O2脱色，用Sevag法除去游离的蛋白质直至紫外检测无280nm的蛋白质吸收峰，然后逆向流水透析，最后冷冻干燥得水溶性杂多糖纯品。
上述水溶性杂多糖主要由α-D-葡萄糖、甘露糖、半乳糖和蛋白质组成。其中含蛋白质18.1％，多糖81.9％(多糖中α-D-葡萄糖占51.4％、半乳糖占29.7％、甘露糖占19.1％、岩藻糖占0.8％)，重均分子量为17.0×104。以上均为重量百分比。
本发明还提供了上述水溶性杂多糖的制备方法，采用人工培育的茯苓菌种(Poria cocos；中国科学院微生物所菌种保藏中心提供，编号5.78)在含玉米浆的液体培养基中深层发酵培养出茯苓菌丝体，将茯苓菌丝体依次用乙酸乙酯、丙酮进行索氏提取去除脂肪；然后浸泡在生理盐水中，离心，离心后所得沉淀用105～120℃的热水在0.12～0.20MPa下浸泡提取，离心，收集提取液。提取液浓缩后，用20％～30％(重量百分比)H2O2脱色，用Sevag法除去游离的蛋白质直至紫外检测无280nm的蛋白质吸收峰，然后透析、冷冻干燥得所需水溶性杂多糖(ac-PCM2)纯品。
上述培养基的基本组成为1L蒸馏水含玉米浆5～15mL、D-葡萄糖20～30g、酵母膏3～3.5g、KH2PO4 0.8～1.2g，CaCl2·2H2O 0.04～0.08g，MnCl2·4H2O 3～7mg、MgSO4·7H2O 0.3～0.7g、ZnCl2 2～6mg、Fe2(SO4)3 3～7mg、维生素B1 0.08～0.12mg、蒸馏水1L。
上述茯苓菌丝体索氏提取去除脂肪时间在4～8小时，其在生理盐水中的提取时间在8～12小时；透析时间在5～10天。
上述水溶性杂多糖在制备抗肿瘤药物或提高机体免疫功能的保健品中的用途。
用红外光谱、核磁共振、气相色谱、蛋白质分析仪、粘度计及光散射仪确定了上述水溶性杂多糖化学组成和二级结构。
该水溶性杂多糖对植入小鼠体内的Sarcoma 180肿瘤抑制率的结果其抗肿瘤活性明显高于其它杂多糖，且无毒副作用，可用作保健品，作为抗肿瘤天然药物也具有应用前景。
与已有技术相比较，本发明的创新如下：所提供的茯苓菌丝体水溶性杂多糖为一种结构清楚的全新物质，它具有明显的抗肿瘤活性，且无毒副作用。这种茯苓菌丝体杂多糖可望成为有开发前景的抗肿瘤药物或提高机体免疫功能的保健品。该多糖的制备方法是培养基中采用廉价的玉米浆为主要原料，利用生物工程发酵技术培养茯苓菌丝体，并从中分离出具有抗肿瘤活性的多糖。它比用麸皮为主要原料的培养基得到的菌丝体多糖具有更显著的抗肿瘤活性。不同培养基得到的菌丝体多糖其化学组成、蛋白质含量和分子量均不同，因此影响到生物活性的不同。本发明制法简单，易以工业化生产。
具体实施方式
以下结合具体的实例对本发明的技术方案作进一步说明：
实施例
茯苓菌种为中国科学院微生物所菌种保藏中心提供，编号5.78(公众可随时购买)。首先在斜面培养基中培养菌种。培养用的试管以及棉塞先在121℃消毒灭菌30分钟(空消)，再装入培养基在121℃消毒灭菌30分钟，斜放冷却使其凝固成斜面，然后在无菌室接种。斜面培养在恒温28℃下进行，为期7天。液体培养基配方如下：1L蒸馏水中含玉米浆(10mL)，D-葡萄糖(25g)，酵母膏(3.2g)，KH2PO4(1.0g)，CaCl2·2H2O(0.06g)，MnCl2·4H2O(5mg)，MgSO4·7H2O(0.5g)，ZnCl2(4mg)，Fe2(SO4)3(5mg)，维生素B1(0.1mg)。培养用的摇瓶(250mL)和棉塞事先在121℃消毒灭菌30分钟，装入液体培养基后再在121℃消毒灭菌30分钟，冷却后在无菌室接种。静置一天后将摇瓶置于摇床上，于25±1℃条件下震荡培养12天。所得菌丝体为浅黄色，且有一种淡香味。
将茯苓菌丝体从培养基中过滤分离后，经冷冻干燥得到的粉末依次用乙酸乙酯、丙酮进行索氏提取各8小时。然后用9g/L氯化钠水溶液提取三次：浸泡在9g/L氯化钠水溶液中过夜，离心，收集上清液(ac-PCM1)。残渣用热水于高压120℃下提取三次，每次半小时，离心，收集上清液(ac-PCM2)。提取液浓缩后，均用30％(重量百分比)H2O2脱色，用Sevag法除去游离的蛋白质，反复进行9次直至紫外检测无280nm处的吸收峰，然后分别用清水和二次蒸馏水透析5天和3天，浓缩，最后冷冻干燥得多糖纯品。茯苓菌丝体培养液过滤，浓缩后用30％H2O2脱色，用Sevag法除去游离的蛋白质，反复进行9次直至紫外检测无280nm处的吸收峰，然后分别用清水和二次蒸馏水透析5天和3天，浓缩，最后冷冻干燥得胞外多糖(ac-PCM0)。所得多糖均为浅黄色粉状固体。
对照组液体培养基配方为：1L蒸馏水中含麸皮(200g)的提取液，D-葡萄糖(25g)，酵母膏(3.2g)，KH2PO4(1.0g)，CaCl2·2H2O(0.06g)，MnCl2·4H2O(5mg)，MgSO4·7H2O(0.5g)，ZnCl2(4mg)，Fe2(SO4)3(5mg)，维生素B1(0.1mg)。菌丝体培养方法和茯苓菌丝体水溶性杂多糖提取方法同ac-PCM0和ac-PCM1上。所得多糖为浅黄色固体粉末分别命名为：ab-PCM0和ab-PCM1。
这些多糖的组成、蛋白质含量、分子量以及产率列于附表1，多糖样品经香港中文大学生物系对植入Sarcoma 180肿瘤小鼠进行体内腹腔注射试验，得出抗肿瘤活性结果列于附表2。由此表明由含玉米浆培养基培养的菌丝体多糖ac-PCM2具有明显的抗肿瘤活性。同时对本发明的水溶性杂多糖进行人体急性白血病毒细胞(HL-60)的抗增殖实验结果表明其对增殖有显著的抑制效果，而不会破坏正常猴肾细胞的增殖。该多糖可用于制备抗肿瘤药物和提高机体免疫功能的保健品。
附表1.茯苓菌丝体多糖单糖组成、蛋白质含量、产率和分子量
多糖中单糖含量(％)
蛋白质 产率 Mw×10-4
样品
(％) (％) (gmol-1)
岩藻糖 阿拉伯糖 木糖 甘露糖 半乳糖 葡萄糖
ac-PCM0 1.4 1.0 - 43.0 27.4 27.2 25.5 10.1
ac-PCM1 4.5 - + 15.8 23.9 53.4 42.9 1.7 12.5
ac-PCM2 0.8 - - 19.1 29.7 51.4 18.1 1.7 17.0
ab-PCM0 - 8.3 10.0 19.4 11.5 50.6 11.6 7.7
ab-PCM1 - 3.8 2.5 10.0 26.3 49.9 - 1.5 5.2
-：未检测到；+：痕量
附表2.茯苓菌丝体多糖的抗肿瘤活性
剂量
样品 抑制率(％) 完全抑制
(mg/kg×days)
ac-PCM0 20×10 - 0/7
实
ac-PCM1 20×10 12.7 1/7
例
ac-PCM2 20×10 42.3* 0/7
比
ab-PCM0 20×10 8.33 0/8
较
ab-PCM1 20×10 4.17 0/8
组
-对小鼠体内的Sarcoma 180肿瘤的生长没有明显的抑制作用
*p＜0.01
Claims (6)
1.一种具有抗肿瘤活性的水溶性杂多糖，由下法制得：采用中国科学院微生物所菌种保藏中心提供的、编号5.78的人工培育的茯苓菌种(Poria cocos)在含玉米浆的液体培养基中深层发酵培养出茯苓菌丝体，将茯苓菌丝体依次用乙酸乙酯、丙酮进行索氏提取去除脂肪；然后浸泡在生理盐水中，离心，离心后所得沉淀用105～120℃的热水在0.12～0.20MPa下浸泡提取，离心，收集提取液；提取液浓缩后，用H2O2脱色，用Sevag法除去游离的蛋白质直至紫外检测无280nm的蛋白质吸收峰，然后透析、冷冻干燥得水溶性杂多糖纯品。
2.权利要求1所述水溶性杂多糖的制备方法，其特征在于：采用中国科学院微生物所菌种保藏中心提供的、编号5.78的人工培育的茯苓菌种(Poria cocos)在含玉米浆的液体培养基中深层发酵培养出茯苓菌丝体，将茯苓菌丝体依次用乙酸乙酯、丙酮进行索氏提取去除脂肪；然后浸泡在生理盐水中，离心，离心后所得沉淀用105～120℃的热水在0.12～0.20MPa下浸泡提取，离心，收集提取液；提取液浓缩后，用20wt％～30wt％H2O2脱色，用Sevag法除去游离的蛋白质直至紫外检测无280nm的蛋白质吸收峰，然后透析、冷冻干燥得多糖纯品。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述培养基的基本组成为1L蒸馏水含玉米浆5～15mL、D-葡萄糖20～30g、酵母膏3～3.5g、KH2PO4 0.8～1.2g、CaCl2·2H2O 0.04～0.08g、MnCl2·4H2O 3～7mg、MgSO4·7H2O 0.3～0.7g、ZnCl2 2～6mg、Fe2(SO4)3 3～7mg、维生素B1 0.08～0.12mg。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：上述茯苓菌丝体索氏提取去除脂肪时间在4～8小时，其在生理盐水中的提取时间在8～12小时；透析时间在5～10天。
5.权利要求1所述的水溶性杂多糖在制备抗肿瘤药物中的用途。
6.权利要求1所述的水溶性杂多糖在制备提高机体免疫功能的保健品中的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 03118416 CN1205231C (zh) | 2003-01-06 | 2003-01-06 | 一种具有抗肿瘤活性的水溶性杂多糖及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 03118416 CN1205231C (zh) | 2003-01-06 | 2003-01-06 | 一种具有抗肿瘤活性的水溶性杂多糖及其制备方法和用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1425694A CN1425694A (zh) | 2003-06-25 |
| CN1205231C true CN1205231C (zh) | 2005-06-08 |
Family
ID=4790759
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 03118416 Expired - Fee Related CN1205231C (zh) | 2003-01-06 | 2003-01-06 | 一种具有抗肿瘤活性的水溶性杂多糖及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1205231C (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1308350C (zh) * | 2004-07-28 | 2007-04-04 | 武汉大学 | 一种具有抗肿瘤活性的茯苓菌丝体胞外多糖的制备方法 |
| CN105237649B (zh) * | 2014-07-11 | 2018-01-16 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 一种茯苓多糖、其制备方法及用途 |
| CN105585638B (zh) * | 2014-10-22 | 2017-12-15 | 北京中安佐际生物科技有限公司 | 茯苓多糖活性组分和成分、其制备方法及用途 |
| CN105061627A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-11-18 | 桂林茗兴生物科技有限公司 | 茯苓多糖的提取方法 |
-
2003
- 2003-01-06 CN CN 03118416 patent/CN1205231C/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1425694A (zh) | 2003-06-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101467903B1 (ko) | 흑미의 담자균류균사 발효 및 생물전환공정을 통해 생산된 면역증강제 | |
| US10835552B2 (en) | Method for preparing linseed polysaccharide having antiviral activity and immunological activity, and use of the linseed polysaccharide | |
| CN1416349A (zh) | 来自菌类的生理活性物质eem－s、其制造方法和药物 | |
| CN115947876B (zh) | β-D-半乳葡聚糖及其制备和用途 | |
| CN104672339A (zh) | 一种蝉花菌素及其制备和用途 | |
| JPH01228480A (ja) | 食用担子菌菌糸体培養抽出物の製造方法 | |
| KR100871399B1 (ko) | 면역 활성 증강용 동충하초 액체배양물로부터 얻어지는균체내 다당체와 균체외 다당체 및 그 생산 최적 배양조건 | |
| CN1205231C (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的水溶性杂多糖及其制备方法和用途 | |
| CN115820436A (zh) | 一种提高灵芝菌丝体多糖的方法 | |
| EP1002541B1 (en) | Oral drugs for amelioration of aids symptoms | |
| CN1205230C (zh) | 一种水溶性杂多糖及其制备方法和用途 | |
| RU2192873C1 (ru) | Препарат, влияющий на тканевой обмен, и применение штамма гриба pleurotus 1137 для его получения | |
| KR101434741B1 (ko) | 페실로마이세스 바리오티 바라이어티 브른네오러스 ｇｐｐ１１０１ｂ 균주 및 이를 이용한 제제 | |
| CN1228449C (zh) | 灵芝菌丝体抗肿瘤水溶性杂多糖及其制备方法和用途 | |
| CN118909839A (zh) | 生产葡半乳聚糖的中华根瘤菌及其应用 | |
| KR100706132B1 (ko) | 펠리누스 린테우스 균사체 배양용 배지 조성물 | |
| JPH11302191A (ja) | ハタケシメジ抽出物を活性成分とする免疫賦活剤及び抗腫瘍剤 | |
| CN1308350C (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的茯苓菌丝体胞外多糖的制备方法 | |
| EP0890648B1 (en) | Non-toxic lipopolysaccharide and its preparation | |
| CN116694485B (zh) | 一种胶孢炭疽菌及其胞外多糖作为植物免疫诱抗剂的应用 | |
| CN121472350B (zh) | 金黄杆菌属细菌gs-7与赤芝yj0724制备富含甘露半乳聚糖结构灵芝多糖方法及其应用 | |
| Sasidhara et al. | SCREENING OF MUSHROOMS FOR POLYSACCHARIDES (BRIEF REPORT) | |
| CN1332847A (zh) | 含有香菇菌丝体提取物的lak活性筛选材料以及使用该提取物的lak活性筛选方法 | |
| CN120272552A (zh) | 一种发酵地皮菜多糖、制备方法及其应用 | |
| Kaewnunta et al. | Research advances in fungal polysaccharides: production |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |