CN1844366A - 一株吉兰泰嗜盐杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株吉兰泰嗜盐杆菌及其应用。该吉兰泰嗜盐杆菌是吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense) AC3 CGMCC No.1594，其16S rRNA的编码基因具有序列表中序列1所示的核苷酸序列。该菌株可以产生耐高浓度盐的脂肪酶，其生长细胞或细胞悬液或制备的脂肪酶可以在NaCl浓度1.0－5.0M范围内催化脂类物质的水解与合成，该菌株产生的脂肪酶可在高的盐离子浓度条件下及在有机溶剂相中催化甘油三酯及其他油酯的水解与合成。

Description

一株吉兰泰嗜盐杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株吉兰泰嗜盐杆菌及其应用，特别涉及该株吉兰泰嗜盐杆菌在生产脂肪酶中的应用。
背景技术
脂肪酶(lipase，EC 3.1.1.3)在自然界中广泛分布，催化脂肪酸和甘油合成甘油三酯及其逆反应。脂肪酶是一种十分重要的工业用酶，广泛应用于食品、化妆品、皮革、纸张、洗涤用品的加工与制造。脂肪酶催化非水溶性甘油三酯的水解及合成，催化反应是发生在油水界面的非均相催化，反应速率除受酶本身的催化能力的限制外，还与底物与酶的接触界面大小有关。
在脂肪酶应用的众多领域中，经常会出现具有较高盐浓度的催化条件，如环保领域或食品加工领域。普通脂肪酶在高盐浓度条件下活性降低或完全失活，使其应用受到限制。
目前还缺少能够耐受高的盐浓度的脂肪酶。极端嗜盐古菌是极端微生物研究的一个重要分支，广泛分布于盐湖，盐矿，晒盐池和腌制食品等一些天然或人工的高盐环境。极端嗜盐古菌对NaCl的需求不低于1.5M，最适生长盐浓度一般为3.0-4.5M，为了对抗胞外高盐浓度所产生的渗透压，其胞内积累了接近饱和浓度的KCl。在长期的演化过程中，由极端嗜盐古菌产生的酶在高浓度的KCl或NaCl溶液中相当稳定。同普通蛋白相比，极端嗜盐酶具有较高比例的酸性氨基酸残基，而且疏水氨基酸的比例明显减低，这反映了在高盐浓度情况下疏水作用增强，降低疏水氨基酸的比例，则有利于防止蛋白质被过分的压缩，从而维持蛋白质在高盐浓度条件下的活性和溶解性。与有机溶剂相似，溶液中的盐也能有效减低水的活度。例如饱和NaCl溶液中水的活度是0.75，相当于60％N，N-二甲基甲酰胺中水的活度。
发明内容
本发明的一个目的是提供一株可产生高盐脂肪酶的吉兰泰嗜盐杆菌。
可产生高盐脂肪酶的吉兰泰嗜盐杆菌是吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacteriumjilantaiense)AC3，已于2006年1月23日，在北京保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，其保藏号为CGMCC No.1594。
吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3CGMCC No.1594分离自吉兰泰盐湖(位于阿拉善左旗吉兰泰镇境内，距巴彦浩特镇北102公里)的盐水沉积物。
吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3CGMCC No.1594，其16SrDNA具有序列表中序列1中的核苷酸序列。该菌株的生长对NaCl浓度的需求不低于1.5M，可在盐浓度为2.5-5.0mol/L范围内生长，最适NaCl浓度为3.0-4.5M。该菌株可以产生耐高浓度盐的脂肪酶，其生长细胞或细胞悬液或制备的脂肪酶可以在NaCl浓度1.0-5.0M范围内催化脂类物质的水解与合成，如吐温系列化合物的水解与合成；此外，与有机溶剂相似，溶液中的盐也具有有效减低水的活度的作用，该菌株及其脂肪酶也具有在有机溶剂中的活性和稳定性，可用于有机溶剂中的脂类物质的水解与合成的催化反应。
本发明的另一个目的是提供一种可在高盐条件下催化脂类物质的水解与合成的脂肪酶。
本发明所提供的脂肪酶，是发酵吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacteriumjilantaiense)AC3CGMCC No.1594得到的代谢产物。
所述吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594能在以糖醇化合物为唯一碳源和能源的无机盐培养基中生长并产生脂肪酶，如CM培养基(酪蛋白氨基酸(Casamino acid，Difco)7.5g，酵母抽提物(Oxoid)10.0g，MgSO4·7H2O20.0g，柠檬酸三钠3.0g，KCl 2.0g，FeSO4·7H2O 0.05g，NaCl 200g，蒸馏水1000ml，用1M NaOH调pH至7.0-7.4，固体培养基中加入15g琼脂)，牛奶盐培养基(脱脂牛奶150mL，无机盐溶液(MgSO4·7H2O 3g，NaCl 60g，KNO3 0.6g，0.5mg柠檬酸铁)30mL，琼脂溶液(Casamino acid 1.5g，甘油3g，琼脂4.5g)120ml)或在以部分糖醇的衍生物，如：丙氨酸、丙酮酸、醋酸钾、柠檬酸盐、丙二酸盐、葡萄糖、果糖、木糖、半乳糖、甘露糖、蔗糖、麦芽糖为唯一碳源的无机盐基础培养基(该无机盐基础培养基的配方为：MgSO4·7H2O 20.0g，柠檬酸三钠3.0g，KCl2.0g，FeSO4·7H2O 0.05g，NaCl 200g，蒸馏水1000ml，用1M NaOH调pH至7.0-7.4，固体培养基中加入15g琼脂)。
上述脂肪酶可高的盐离子浓度条件下(如Na+浓度为1.0-5.0mol/L)及有机溶剂相中催化脂类化合物的分解与合成反应，如脂肪酸碳链长度在4-18的饱和及不饱和的甘油三酯及其混合物，如三丁酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、软脂酸甘油脂、橄榄油、棕榈油。含有酯键的表面活性剂如吐温20、吐温40、吐温60、吐温80，以及脂肪酸4-硝基苯酯类化合物(丁酸4-硝基苯酯、棕榈酸4-硝基苯酯、月桂酸4-硝基苯酯化合物)也可以作为该脂肪酶的催化底物。
本发明的脂肪酶除具有高盐浓度条件下的稳定性和活性，还具有在有机溶剂中的活性和稳定性，可用于有机溶剂中的催化反应，可在高的盐离子浓度条件下及在有机溶剂相中催化甘油三酯及其他油酯的水解与合成。
附图说明
图1为吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594在不同NaCl浓度条件下的生长曲线。
图2为吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594产生的高盐脂肪酶在不同NaCl浓度条件下催化活性曲线。
图3为吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3C GMCC No.1594产生的高盐脂肪酶在不同温度下的催化活性曲线。
图4为吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594产生的高盐脂肪酶活力与加入的诱导底物橄榄油百分比含量的关系曲线。
具体实施方式
实施例中的方法如无特别说明，均为常规方法。
实施例1、吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594的分离及鉴定
1、吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594的获得及其生物学特征
经过培养实验表明，该菌具有以下特征：(1)菌落特征：在牛奶盐平板上(脱脂牛奶150mL，无机盐溶液(MgSO4·7H2O 3g，NaCl 60g，KNO3 0.6g，0.5mg柠檬酸铁)30mL，琼脂溶液(Casamino acid 1.5g，甘油3g，琼脂4.5g)120ml)培养7天的菌落呈圆形，菌落直径为0.5-2.1mm，表面光滑，边缘整齐，凸起，桂红色。(2)吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594菌株严格好氧生长；生长的适宜pH范围6-9，最适生长pH范围7.5-8.5；生长温度范围35-45℃，最适温度40℃；细胞为短杆状；革兰氏染色阴性；细胞大小为0.5μm×1.5μm。(3)吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCCNo.1594能水解淀粉，接触酶阳性，氧化酶阳性，不产生荧光色素，水解淀粉和酪素，可液化明胶，能利用丙酸钾、丙酮酸、醋酸钾、柠檬酸盐、丙二酸盐、葡萄糖、果糖、木糖、半乳糖、甘露糖、蔗糖、麦芽糖，不能利用乳糖和山梨糖。
2、吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594的16S rRNA基因的PCR扩增和序列测定
吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594接种于CM液体培养基，将生长至对数晚期的发酵液离心(12000转/分钟，5分钟)去除上清液，用20％的NaCl溶液洗2-3遍；用1mL 20％NaCl溶液将菌体打匀，加入2mL10％SDS，8mL无菌水及蛋白酶K至终浓度为50-100μg/mL；55℃保温1-2小时处理；加入等体积Tris饱和酚，轻轻摇匀5分钟，离心(12000转/分钟，5分钟)，用宽口吸头吸取上清液，然后依次酚-氯仿-异戊醇(25∶24∶1)和氯仿-异戊醇(24∶1，体积比)处理一遍。2倍体积冰乙醇沉淀，70％冰乙醇溶液浸泡5分钟。晾干后溶于TE溶液中作为模板。用于16S rRNA基因扩增的PCR反应的正向引物为5’-TTCCGGTTGATCCTGCC-3’和反向引物为5’-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’分别对应于大肠杆菌的16S rRNA基因的7-23和1425-1541碱基。PCR产物的测序由北京诺赛基因组研究中心(Chinese national human genome center-SinoGenoMax Beijing，China)完成，采用ABI BigDye3.1测序试剂盒(Applied Biosystems)和DNA自动测序仪(model ABI3730；Applied Biosystems)。PCR反应体系(50μL)为：10×buffer 5μL、25mmol/L MgCl2 4μL、10mmol/L dNTPs 1μL、30pmol/L引物各1μL、ddH2O 38μL、Taq DNA酶0.4μL(2.5U)。PCR反应条件为：先95℃ 4min，再95℃ 1min，45℃ 1min，72℃ 1min，30个循环；最后72℃ 10min，4℃保存。16S rRNA基因序列长度为1402bp，与菌株Halobacteriumjilantaiense NG4TrRNA gene(登录号为DQ256409)序列的相似性为99％。其16SrRNA基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示。
3、吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594的分类地位
参照《Bergey’s Mannual of Systematic Bacteriology》，2nd ed，vol1，pp301-305的内容，根据其上述形态特征和生理生化特征，以及其16S rRNA基因序列在GenBank中的搜索结果，鉴定该菌AC3(CGMCC No.1594)为吉兰泰嗜盐杆菌，拉丁文名称为Halobacterium jilantaiense。该吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacteriumjilantaiense)AC3菌株，已于2006年1月23日，在北京保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，其保藏号为CGMCC No.1594。
实施例2、吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594在不同NaCl浓度条件下的生长情况及其产生的脂肪酶的底物范围
1、吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594在不同NaCl浓度条件下的生长情况
将吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594分别接种于含有0.75g/100ml的酪蛋白氨基酸(Casamino acid，Difco)、1g/100ml酵母抽提物(Yeast extract，Oxoid)、0.3g/100ml(0.068M)三水合柠檬酸三钠、七水合硫酸镁2.0g/100ml(0.081M)、氯化钾0.2g/100ml(0.0268M)、七水合硫酸亚铁0.05g/100ml(0.00018M)、氯化钠浓度分别为6g/100ml(1.03M)、8g/100ml(1.36M)、10g/100ml(1.7M)、12g/100ml(2.05M)、14g/100ml(2.40M)、16g/100ml(2.74M)、18g/100ml(3.08M)、20g/100ml(3.42M)、22g/100ml(3.76M)、24g/100ml(4.11M)、26g/100ml(4.45M)、28g/100ml(4.80M)、30g/100ml(5.13M)和蒸馏水1000ml的液体培养基(用1M NaOH调pH至7.0-7.4)中，在40℃培养3天后，观察菌株生长情况，检测菌液吸光值，结果如图1所示，表明该菌株可在盐浓度为2.5-5.0M范围内生长，最适盐浓度为3.0-4.5M。
2、吉兰泰嗜盐杆菌AC3 CGMCC No.1594脂肪酶作用的底物范围
吉兰泰嗜盐杆菌AC3 CGMCC No.1594分别接种于含有1mmol/L碳链长度为4-18的饱和或不饱和甘油三酯(三丁酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、软脂酸甘油脂、橄榄油、棕榈油)、1.0g/100mL吐温20、1.0g/100mL吐温40、1.0g/100mL吐温60、1.0g/100mL吐温80、或1.0g/100mL橄榄油的CM固体培养基，37℃光照培养5-7天，观察菌落周围的透明圈或晕圈，结果表明在碳链长度为4-18的饱和或不饱和甘油三酯，橄榄油，吐温20、吐温40、吐温60、吐温80等底物周围产生晕圈，说明它们可作为该脂肪酶作用的底物。通过用紫外分光光度计检测在410nm处由于对硝基苯酚棕榈酸酯(p-NPP)在脂肪酶的水解作用下分解产生的对硝基苯酚浓度的增加，计算出脂肪酶的活力。具体步骤：向反应体系(0.05g/100ml p-NPP、pH7.0的5mmol/L醋酸钠-醋酸缓冲液、1％(体积浓度)Triton X-100、5％(体积浓度，)异丙醇)中加入1mL酶液(0.10g脂肪酶溶解于1mL pH6.8的Tris-HCL缓冲液)，37℃开始反应5分钟，对硝基苯酚的摩尔消光系数＝12.75mmol-1cm-1。可根据测定每分钟产生的对硝基苯酚的量，计算出该脂肪酶活力。实验表明，该脂肪酶对丁酸4-硝基苯酯、棕榈酸4-硝基苯酯、月桂酸4-硝基苯酯化合物等脂肪酸4-硝基苯酯类化合物也有水解作用。
实施例3、吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594产生的脂肪酶的纯化及酶活力的测定：
1、吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594产生的脂肪酶的纯化
将吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594在下述CM液体培养基中培养：Casamino acid(Difco)7.5g，Yeast extract(Oxoid)10.0g，MgSO4·7H2O 20.0g，Trisodium citrate 3.0g，KCl 2.0g，FeSO4·7H2O 0.05g，NaCl 200g，蒸馏水1000ml，用1M NaOH调pH至7.0-7.4，121摄氏度高温灭菌30分钟。培养温度40℃，光照通气(装液量为摇瓶体积的1/5，35mm旋转半径、200转/分)5-7天。将培养后的菌液在8,000-12,000转/分离心5-10分钟，向上清液中加入20-30％体积的丙酮，8,000-12,000转/分离心5-10分钟，收集到的沉淀在冰浴中溶于预冷的0.02mol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.0)中，8,000-12,000转/分离心5-10分钟除去杂质沉淀，得到粗酶液。在冰浴中，将研磨细的硫酸铵边搅拌边慢慢加入粗酶液中，4℃放置12小时，在10,000转/分离心15分钟，收集饱和度为20-75％硫酸铵沉淀的蛋白质，用0.02mol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.0)溶解并以无离子水透析除去硫酸铵。DEAE-纤维素(DE52)离子交换层析，用0.02mol/LTris-HCl缓冲液(pH7.0)平衡。将透析过的酶液上柱，上柱流速30ml/小时，先用起始缓冲液(0.01Mol/L pH7.4PB液)洗脱，再用0-1.0mol/L氯化钠溶液梯度洗脱，流速为30ml/小时，将活力峰合并后浓缩。用0.02mol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.0)平衡Sephadex G-100，将经DEAE-纤维素(DE52)离子交换柱纯化浓缩后的酶液，进行Sephadex G-100层析，用0.02mol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.0)洗脱，洗脱液流速为18ml/小时，合并酶活力峰后在20℃浓缩干燥后得到脂肪酶粉。结果表明在该实验条件下，脂肪酶粉的产量为35mg/L培养基。
2、酶活力的测定
精确称取0.100克步骤1中纯化的脂肪酶酶粉，加少量水调匀成糊状，再加水定容至10mL，制成稀释100倍的酶液进行酶活力测定。脂肪酶的酶活性测定采用下述滴定法和分光光度计法：
(1)滴定法
脂肪酶的1个酶活力单位定义为在37℃、pH为7.0的条件下脂肪酶水解甘油三酯时，每分钟产生1μmol脂肪酸的酶量。
测定原理为：脂肪酶活性测定反应时间较短(3-15分钟)时，可以认为脂肪酶催化的反应是每分子甘油三酯生成一分子脂肪酸和一分子甘油二酯。以橄榄油为底物，水解所放出的脂肪酸，可以用标准的碱溶液滴定，在底物完全过量情况下，用滴定值表示酶活力。按照下述方法测定脂肪酶的活力：取100mL锥形瓶，每瓶加5mLpH为7.0的0.025mol/L磷酸盐缓冲液和4mL聚乙烯醇橄榄油乳化液，置37℃(酶解温度)水浴中预热100mL锥形瓶，然后加入1mL酶液，从开始加入酶液精确计时，保温15分钟，立即加入无水乙醇15mL终止酶反应。加酚酞指示剂三滴，用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液滴至微红色，并同时做空白对照，对照样品中的乙醇在酶液前加入，不需保温。每个样品做三个平行，取平均值。结果表明，步骤1中纯化的脂肪酶粉的比活力为55U/mg。
(2)分光光度计法
1个单位(U)的酶活力定义为在37℃、pH为7.0的条件下每分钟转化1μmol的p-NPP所需的酶量。
测定原理为：用紫外分光光度计检测410nm处由于对硝基苯酚棕榈酸酯(p-NPP)在脂肪酶的水解作用下分解产生的对硝基苯酚浓度的增加，计算出脂肪酶的活力。反应体系包括0.05％(0.05g/100ml)p-NPP，pH为7.0的5mmol/L醋酸钠-醋酸缓冲液，1％(体积浓度)Triton X-100，5％(体积浓度)异丙醇；50mMTris-HCL缓冲液(pH6.8)，1mL酶液。对硝基苯酚的摩尔消光系数＝12.75mmol-1cm-1。结果表明，步骤1中纯化的脂肪酶粉的比活力为54.3U/mg。
以滴定法为主，以分光光度计法为辅作为验证。结果表明采用两种方法所测得脂肪酶活力值非常接近
实施例4、吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594产生的脂肪酶的特性
1、在不同浓度NaCl条件下的催化活性
将实施例3步骤1中纯化的脂肪酶粉采用实施例3步骤2中的分光光度计方法在含0mol/L、0.5mol/L、1.0mol/L、1.5mol/L、2.0mol/L、2.5mol/L、3.0mol/L、3.5mol/L、4.0mol/L、4.5mol/L、5.0mol/L NaCl的反应体系中测定酶活力，结果如图2所示，表明吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCCNo.1594产生的脂肪酶的在1.0mol/L-5.0mol/L的NaCl范围内具有催化活性，最适盐浓度范围是3.0mol/L-5.0mol/L。
2、在不同温度条件下的催化活性
将实施例3步骤1中纯化的脂肪酶粉采用实施例3步骤2中的分光光度计方法在28℃、30.6℃、32.1℃、32.5℃、33.6℃、34.3℃、35℃、36℃、37℃、38.5℃、40℃、42℃、45℃、50℃条件下测定酶活力，结果如图3所示，表明吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594产生的脂肪酶的在28℃-50℃范围内具有催化活性，最适温度范围是37℃-42℃。
实施例5、吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594在CM液体培养基中对橄榄油的水解作用
将在CM液体培养基中培养至OD600＝0.2的吉兰泰嗜盐杆菌AC3 CGMCC No.1594菌株培养液按1％(体积比)的接入量接种于添加体积百分浓度分别为0％、0.50％、1.00％、1.50％、2.00％、2.50％、3.00％、4.00％、5.00％、6.00％橄榄油的CM液体培养基中，在37℃，180r/min的摇床上振荡培养，72小时取样测定菌体生长、采用实施例3步骤2中的分光光度计方法测定发酵液中的脂肪酶酶活性与橄榄油的加入量的关系。结果表明，橄榄油对脂肪酶起着明显的诱导作用，不同橄榄油浓度下脂肪酶活性结果如图4所示，表明培养基中加入1.00％-4.00％的橄榄油，产生的脂肪酶酶活较高。
                               序列表
<160>1
<210>1
<211>1402
<212>DNA
<213>吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)
<400>1
atcgatttag ccatgctagt tgtgcgggtt tagacccgca gcggaaagct cagtaacacg      60
tggccaagct accctgtgga cgggaataat ctcgggaaac tgaggctaat tcccaataac     120
gcttcacccc tggaatgggt gaagccggaa acgttccgac gccacaggat gcggctgcgg     180
tcgattaggt agacggtggg gtaacggccc accgtgccta taatcggtac gggttgtgag     240
agcaagagcc cggagacgga atctgagaca agattccggg ccctacgggg cgcagcaggc     300
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aaactgtcta gcttgggacc ggaagacctg aggggtacgt ctggggtagg agtgaaatcc     600
tgtaatcctg gacggaccgc cggtggcgaa agcgcctcag gagaacggat ccgacagtga     660
gggacgaaag ctagggtctc gaaccggatt agatacccgg gtagtcctag ctgtaaacga     720
tgtccgctag gtggtggcgc aggctacgag cctgcgctgt gccgtaggga agccgagaag     780
cggaccgcct gggaagtacg tctgcaagga tgaaacttaa aggaattggc gggggagcac     840
tacaaccgga ggagcctgcg gtttaattgg actcaacgcc ggacatctca ccggtcccga     900
cagtagtaat gacggtcagg ttgacgactt tacccgacgc tactgagagg aggtgcatgg     960
ccgccgtcag ctcgtaccgt gaggcgtcct gttaagtcag gcaacgagcg agacccacac    1020
ttctagttgc cagcaacacc cctgcggtgg ttgggtacac taggaggact gccattgcta    1080
aaatggagga aggaatgggc aacggtaggt cagtatgccc cgaatggacc gggcaacacg    1140
cgggctacaa tggctatgac agtgggatgc aacgccgaga ggcgacgcta atctccaaac    1200
gtagtcgtag ttcggattgc gggctgaaac ccgcccgcat gaagctggat tcggtagtaa    1260
tcgcgtgtca gaagcgcgcg gtgaatacgt ccctgctcct tgcacacacc gcccgtcaaa    1320
gcacccgagt ggggtccgga tgaggccgtc atgcgacggt cgaatctggg ctccgcaagg    1380
gggcttaagt cgtaacaaga gc                                             1402

Claims (10)

1、吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594。
2、根据权利要求1所述的吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594，其特征在于：所述吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacteriumjilantaiense)AC3 CGMCC No.1594的16S rDNA具有序列表中序列1中的核苷酸序列。
3、一种脂肪酶，是发酵吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3CGMCC No.1594得到的。
4、根据权利要求3所述的脂肪酶，其特征在于：所述吉兰泰嗜盐杆菌(Halobacterium jilantaiense)AC3 CGMCC No.1594的发酵培养基为以丙氨酸、丙酮酸、醋酸钾、柠檬酸盐、丙二酸盐、葡萄糖、果糖、木糖、半乳糖、甘露糖、蔗糖或麦芽糖为唯一碳源的无机盐基础培养基、CM培养基或牛奶盐培养基；
所述CM培养基的组成为Casamino acid 7.5g，酵母抽提物10.0g，MgSO4·7H2O20.0g，柠檬酸三钠3.0g，KCl 2.0g，FeSO4·7H2O 0.05g，NaCl 200g，蒸馏水1000ml，pH7.5-8.5，固体培养基中加入15g琼脂；
所述牛奶盐培养基的组成为脱脂牛奶150mL，无机盐溶液30mL，含有1.5gCasamino acid和3g甘油的水溶液120ml，固体培养基中加入4.5g琼脂，pH7.5-8.5；所述无机盐溶液的组成为MgSO4·7H2O 3g，NaCl 60g，KNO3 0.6g，0.5mg柠檬酸铁，30mL水。
5、根据权利要求4所述的脂肪酶，其特征在于：所述无机盐基础培养基的组成为：MgSO4·7H2O 20.0g，柠檬酸三钠3.0g，KCl 2.0g，FeSO4·7H2O 0.05g，NaCl200g，蒸馏水1000ml，pH7.5-8.5，固体培养基中加入15g琼脂。
6、权利要求3、4或5所述的脂肪酶在脂类化合物分解或合成中的应用。
7、根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述脂肪酶在高盐条件下催化脂类化合物的分解或合成。
8、根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述高盐条件为Na+浓度为1.0-5.0mol/L。
9、根据权利要求6、7或8所述的应用，其特征在于：所述脂类化合物为甘油三酯、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80或脂肪酸4-硝基苯酯类化合物。
10、根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述甘油三酯为三丁酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、软脂酸甘油脂、橄榄油或棕榈油；所述脂肪酸4-硝基苯酯类化合物为丁酸4-硝基苯酯、棕榈酸4-硝基苯酯或月桂酸4-硝基苯酯化合物。
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