CS158391A3 - Factor precursor releasing pig growth-hormone - Google Patents
Factor precursor releasing pig growth-hormone Download PDFInfo
- Publication number
- CS158391A3 CS158391A3 CS911583A CS158391A CS158391A3 CS 158391 A3 CS158391 A3 CS 158391A3 CS 911583 A CS911583 A CS 911583A CS 158391 A CS158391 A CS 158391A CS 158391 A3 CS158391 A3 CS 158391A3
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- leu
- gln
- arg
- ser
- ala
- Prior art date
Links
- 239000002243 precursor Substances 0.000 title description 32
- 101000868144 Sus scrofa Somatotropin Proteins 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 38
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 35
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 34
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 29
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 11
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 9
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 9
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims description 9
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 8
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 4
- 150000001734 carboxylic acid salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- -1 salt salts Chemical class 0.000 claims description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 108091028026 C-DNA Proteins 0.000 claims 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 20
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 description 6
- 102100022831 Somatoliberin Human genes 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical group Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 1
- 101100061188 Drosophila melanogaster dila gene Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 101000825742 Homo sapiens Somatoliberin Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 244000297179 Syringa vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000004338 Syringa vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- KFGRVLINLVVMJA-MITYVQBRSA-N chembl440262 Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 KFGRVLINLVVMJA-MITYVQBRSA-N 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 108010091798 leucylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 108010056001 somatotropin releasing hormone (1-29) Proteins 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
1 - 1 - 7i/
Prekursor faktoru, který uvolňuje růsto.
Oblast techniky
Vynález se týká prekursoru faktoru, který uvolňuje růsto-vý hormon vepře a také DNA, která je kódem pro tuto látku.
Dosavadní, stav techniky
Faktor, uvolňující růstový hormon, tj. GRF je možno užítke stimulaci produkce růstového hormonu u člověka i u jinýchživočichů. GRF vepře, tj. pGRF má zvláštní význam ve veterinár-ním lékařství. Řetězec aminokyselin této látky byl publikovánnapříklad v Bohlen a další, Biochem. Biophys, Res. Commun. 116 : 726, 1983. Avšak kódový řetězec DNA pro tuto přírodnílátku byl až dosud neznámý. Vynález se tedy týká až dosud ne-známých látek peptidové povahy, a to zejména dvou forem pre-kursoru pGRF a samotného GRF. Vynález se rovněž týká DNA,která je kódem pro sloučeniny polypeptidového typu i pro úpl-ný pGRF.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je DNA, která obsahuje řetězec DNA,který je kódovým řetězcem pro faktor, uvolňující růstový hor-mon vepře. Podstatou vynálezu jsou rovněž dvě formy prekurso-ru tohoto růstového hormonu a signální řetězec uvedeného fak-toru. Podstatou vynálezu jsou rovněž dvě formy prekursoru pGRFa současně signální řetězec pGRF, vázaný na obě formy prekur-soru pGRF.
Polypeptid, který tvoří podstatu vynálezu, je možno vy-jádřit obecným vzorcem
iť.l.>ti' '.iti:•'-''I ·<>>;<>ví··;/.·>·.ϋ· λ.'-·.-;.; - 2 - A-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-B-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp-Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-S er-1le-Leu-Ala-Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH; kde A znamená atom vodíku nebo skupinu H-Met-Leu-leu-Trp-Val--Phe-Phe-Leu-Val-Thr-Leu-Thr-Leu-Ser-Ser-Gly-Ser-Leu-Ser--Ser-Leu-Pro-Ser-Gln-Pro-Leu-Arg-Met-Pro-Arg, S znamená Asn nebo Ser, jakož i adiční soli těchto sloučenin s kyselinami nebo karbo-xylovými kyselinami, přijatelné z farmaceutického hlediska. V případě, že A znamená atom vodíku, představuje sloučeninaprekursor pGRF. Klonováním kódového řetězce pGRF bylo nyní ne-očekávaně zjištěno, že existují/alespoň dvě allely genu propCRF. Tyto allely se liší kodony, které jsou kódem pro amino-kyseliny v poloze 9 úplného pGRF. jedna z allel je kódem proasparagin v této poloze a druhá pro šeřin. Rozdíl v těchto -allelách je vyjádřen ve vzorci symbolem B. g
Dalším polypeptidem podle vynálezu je Asn -forma úplnéhopGRF podle vynálezu, kterou je možno vyjádřit vzorcem H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Asn-Tyr-Arg-Lys-Val-
Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-
Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-
Ala-Arg-Val-Arg-Leu-A kde A je hydroxyskupina nebo aminoskupina.
DilA podle vynálezu zahrnuje řetězce, která jsou kódem pro dvě formy úplného pGRF, dvě formy jeho prekursoru a pro signální řetězec pGRF. Výhodný řetězec, který je kódem pro9
Asn -formu úplnéhopGRF, je možno vyjádřit vzorem
TATGCAGATGCCATCTTCACCAACAGCTACCGGAAGGTGCTGGGCCA ---------+---------+---------+---------+-------
ATACGTCTACGGTAGAAGTGGTTGACGATGGCCTTCCACGACCCGGT
GCTCTCTGCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGG —+---------+---------+---------+---------+----
CGAGAGACGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCC
GGGAGAGAAACCAGGAGCAAGGA -----------+------- CCCTCTCTTTGGTCCTCGTTCCT . kódem pro jinou formu úplného pGRF, který se liší zbytkem šeřinu v poloze ?, je řetězec DMA, který je možno vy-jádřit následujícím vzorcem
TATGCAGATGCCATCTTCACCAACAACTACCGGAAGGTGCTGGGCCA ---------+---------+---------+---------+-------
ATACGTCTACGGTAGAAGTGGTTGTTGATGGCCTTCCACGACCCGGT
GCTCTCTGCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGG __+---------+---------+---------+---------+_---
CGAGAGACGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCC
GGGAGAGAAACCAGGAGCAAGGA -----+---------+------- CCCTCTCTTTGGTCCTCGTTCCT . Výhodným řetězcem DUA, který je kódem pro Asn9-formuprekursoru pGRF je řetězec vzorce
TATGCAGATGCCATCTTCACCAACAACTACCGGAAGGTGCTGGGCCA ---------+---------+---------+---------+-------
ATACGTCTACGGTAGAAGTGGTTGTTGATGGCCTTCCACGACCCGGT
GCTCTCTGCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGG —+---------+---------+---------+---------+----
CGAGAGACGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCC
GGGAGAGAAACCAGGAGCAAGGAGCAAGGGTACGGCTTGGCCGTCAG -----+---------+---------+---------+---------+_
CCCTCTCTTTGGTCCTCGTTCCTCGTTCCCATGCCGAACCGGCAGTC GTGGACAGCATGTGGGCAGACCAAAAGCAGATGGCATTGGAGAGCAT— — — — — - — — - — - — —— — ——
CACCTGTCGTACACCCGTCTGGTTTTCGTCTACCGTAACCTCTCGTA
CCTGGCGACCCTGCTGCAGGAGCACAGGAATTCCCAAGGATGA ---------+---------+---------+---------+--- GGACCGCTGGGACGACGTCCTCGTGTCCTTAAGGGTTCCTACT . >1 U iJ 1 ( » ΐ V 1 ) > % ' 9 Kódem pro Ser -formu prekursoru je s výhodou řetězecDUA, který je možno vyjádřit vzorcem
TATGCAGATGCCATCTTCACCAACAGCTACCGGAAGGTGCTGGGCCA ---------+---------+---------+---------+-------
ATACGTCTACGGTAGAAGTGGTTGTCGATGGCCTTCCACGACCCGGT GCTCTCTGCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGG—h-— -----—)-- ___ 1 --
CGAGAGACGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCC
GGGAGAGAAACCAGGAGCAAGGAGCAAGGGTACGGCTTGGCCGTCAG -----+---------+---------+---------+—------+-
CCCTCTCTTTGGTCCTCGTTCCTCGTTCCCATGCCGAACCGGCAGTC
GTGGACAGCATGTGGGCAGACCAAAAGCAGATGGCATTGGAGAGCAT --------+---------+---------+---------+--------
CACCTGTCGTACACCCGTCTGGTTTTCGTCTACCGTAACCTCTCGTA
CCTGGCGACCCTGCTGCAGGAGCACAGGAATTCCCAAGGATGA ---------+---------+---------+---------+--- GGACCGCTGGGACGACGTCCTCGTGTCCTTAAGGGTTCCTACT . Kódem pro Asn - formu prekursoru pCRF, před nímž je vá-zán řetězec pro signální peotid je DIIA, kterou je možno vyjá-dřit následujícím vzorcem
ATGCTGCTCTGGGTGTTCTTCCTCGTCACCCT ---------+_--------+-—
TACGACGAGACCCACAAGAAGGAGCAGTGGGA
CACCCTCAGCAGCGGCTCCCTCAGCTCCCTGCCCTCCCAGCCCCTCAGGATGCCGC -------+--------+--------+-------·-+— -----+------+—
GTGGGAGTCGTCGCCGAGGGAGTCGAGGGACGGGAGGGTCGGGGAGTCCTACGGCG
GGTATGCAGATGCCATCTTCACCAACAACTACCGGAAGGTGCTGGGCCAGCTCTCT — — — +— — — — — — - ψ- —
CCATACGTCTACGGTAGAAGTGGTTGTTGATGGCCTTCCACGACCCGGTCGAGAGA
GCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGGGGGAGAGAAACCAGGA -+---------+---------+---------+---------+---------+-—
CGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCCCCCTCTCTTTGGTCCT
GCAAGGAGCAAGGGTACGGCTTGGCCGTCAGGTGGACAGCATGTGGGCAGACCAAA -----+---------+--------+---------+---------+---------+
CGTTCCTCGTTCCCATGCCGAACCGGCAGTCCACCTGTCGTACACCCGTCTGGTTT
AGCAGATGGCATTGGAGAGCATCCTGGCGACCCTGCTGCAGGAGCACAGGAATTCC ---------—h--------------
TCGTCTACCGTAACCTCTCGTAGGACCGCTGGGACGACGTCCTCGTGTCCTTAAGG CAAGGATGA---- GTTČCIACT . - 5 - * 9 Kódem pro Ser -formu prekursoru pCRF a jeho signálnířetězec je s výhodou DNA, kterou je možno vyjádřit vzorcem
ATGCTGCTCTGGGTGTTCTTCCTCGTCACCCT ---------+---------+---------+--
TACGACGAGACCCACAAGAAGGAGCAGTGGGA
CACCCTCAGCAGCGGCTCCCTCAGCTCCCTGCCCTCCCAGCCCCTCAGGATGCCGC
GTGGGAGTCGTCGCCGAGGGAGTCGAGGGACGGGAGGGTCGGGGAGTCCTACGGCG
GGTATGCAGATGCCATCTTCACCAGCAACTACCGGAAGGTGCTGGGCCAGCTCTCT --+---------+--.--.-----+--.-------.+---------+----------+--
CCATACGTCTACGGTAGAAGTGGTCGTTGATGGCCTTCCACGACCCGGTCGAGAGA
GCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGGGGGAGAGAAACCAGGA -------+---------+---------+---------+---------+--------
CGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCCCCCTCTCTTTGGTCCT
GCAAGGAGCAAGGGTACGGCTTGGCCGTCAGGTGGACAGCATGTGGGCAGACCAAA __+---------+---------+---------+---------+---------+---
CGTTCCTCGTTCCCATGCCGAACCGGCAGTCCACCTGTCGTACÁCCCGTCTGGTTT
AGCAGATGGCATTGGAGAGCATCCTGGCGACCCTGCTGCAGGAGCACAGGAATTCC ------+---------+---------+---------+--------·-+---------
TCGTCTACCGTAACCTCTCGTAGGACCGCTGGGACGACGTCCTCGTGTCCTTAAGG
CAAGGATGA +-------- GTTCCTACT . I;
Podstatu vynálezu tvoří rovněž farmaceutické prostředky,jojicnz ucinnuu složku tvoří Asn-forma. nebo Ser -forma pre-kursoru. Vynález tedy poskytuje možnost vyvolat uvolněnírůstového hormonu tak, že se podává polypeptid, jímž je kte-rákoliv forma prekursoru pCRF. Tohoto postupu je možno užítu člověka a různých jiných živočichů, například vepřů, skutu,ovcí, kuřat a ryb. S výhodou se prostředek užije u vepřů.
Podstata vynálezu bude dále podrobněji popsána. Pruvětší jasnost a porozumění smyslu vynálezu bude nyní vy-světleno několik používaných termínů a zkratek. CRF - polypeptid, který má účinnost fakturu, schopného uvolnitrůstový hormon. GRF(1-29)NH2 - minimální část CRF, která je nezbytná k dosa-žení plného účinku. 'ί.'.''.iL',\ό\λΧ.^?ιΙι\ΐ;’.· ν.ν’λ':< ύί:^.ί^»Ί2^ ί. ;».?ι -. j ;·. ;; ,/.S.'i':· í/.v/>..vj/Z i' ·.'. I/J/í/ívCi i ViiiíF.Vř--'^/v Á1 H - atom vodíku, vyskytující se zejména na aminoterminálnímzakončení polypeptidů a bílkovin.
Vysoká exprese v E. coli - produkce analogu CRF, pro nějž jekódem klonovaný gen v množství, že produkt tohoto genuje možno prokázat barvením modří Coomassie.
Izolovaný řetězec DUA - jakýkoliv řetězec DUA, jakkoliv kon-struovaný nebo syntetizovaný, který se v něčem odlišujeod přírodního umístění v DNA genomu. Může jít o izolova-nou DUA v jakékoliv formě s výjimkou přírodního stavu.Například je možno DUA uložit do plasmidu nebo fágu jakovektoru nebo zařadit do genomu původního organismu nebojakéhokoliv jiného organismu ke zvýšení počtu kopií genu. Úplný--pGRF - pCRF (1-44) H-Tyr-Ala-Asp-Ala-
Ile-Phe-Thr-Asn-B-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-
Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-
Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-OH, kde 8 znamená Asn nebo Ser. pDRF prekursor - pCRF (1-76): H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-B-Tyr-Arg-Lys-Val-
Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-
Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-
Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp-
Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala-
Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH; kde znamená Asn nebo Ser.
Vynález poskytuje izolovanou DNA s řetězci, které jsoukódem pro dvě formy faktoru, schopného uvolnit úplný růstovýhormon, pro dvě formy prekursoru tohoto faktoru a pro jehosignální řetězec, který je na prekursor.vázán. Vynález rovněžposkytuje uvedené polypeptidové sloučeniny.
Pro dva polypeptidy podle vynálezu jsou kódem dvě od-lišné allely genu pCRF. Přesto že řetězec aminokyselin úpl-ného pGRF byl již dříve osvětlen ve svrchu uvedené publikaci3ohlena a dalších, jsou podstatou vynálezu dvě formy až dosudneznámého prekursoru pGRF. Tytu prekursory je možno vyjádřitobecným vzorcem H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-B-Tyr-Arg-Lys-Val-
Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-
Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-
Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp-
Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala-
Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH r· jí a
kde D znamená Asn nebo Ser.
Vynález rovněž poskytuje adiční soli těchto sloučenin skyselinami, přijatelné z farmaceutického hlediska. PrekursorpGRF je zvláště užitečnou sloučeninou vzhledem k tomu, že vy-plňuje mezeru ve sloučeninách s vysokou účinností tohoto typu,které je možno získat ve velkém množství z E. culi. Tyto látkymají dostatečnou velikost, čímž současně odpadá vážný probléms jejich degradací, který téměř vylučuje expresi úplnéno GRFv E. coli, jak bylo popsáno v publikaci Kirschner a další, 3. Giotecn., 12 : 247, 243, 19S9.
Specifickými sloučeninami typu uvedeného prekursoru pGRFjsou následující látky: ji £ - 8 - ÝviíJ.iít ·, jktó·: #> H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-
Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-
Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-
Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp-
Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala-
Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH; jaxož i adiční soli této látky s kyselinami nebo karboxylo-vými kyselinami, přijatelné z farmaceutického hlediska, a H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Asn-Tyr-Arg-Lys-Val-
Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-
Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-
Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp-
Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala-
Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH; jakož i adiční soli této látky s kyselinami nebo karboxylový-mi kyselinami, přijatelné z farmaceutického hlediska.
Dalšími polypeptidy podle vynálezu jsou prekursory pGRFse signálním peptidem na jeho aminoterminálním zakončení.
Tyto látky lze vyjádřit obecným vzorcem H-Met-Leu-Leu-Trp-Val-Phe-Phe-Leu-Val-Thr-Leu-Thr-Leu-
Ser-Ser-Gly-Ser-Leu-Ser-Ser-Leu-Pro-Ser-Gln-Pro-Leu-
Arg-Met-Pro-Arg-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-B-
Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-
Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-
Gln-Glu-Gin-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gin-Val-
Asp-Ser-Met-Trp-Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ála-Leu-Glu-
Ser-Ile-Leu-Ala-Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-
Gln-Gly-OH; 9 kde Q znamená Asn nebo Ser.
Tyto sloučeniny jsou zvláště použitelné v případě, žebyly produkovány v buňkách savců. Signální peptid způsobujesekreci polypeptidového produktu. Jakmile dojde k jeho odště-pení, je produkt již produkován. Specifické prekursory pCRFs obsahem signálního peptidu je možno vyjádřit vzorci H-Met-Leu-Leu-Trp-Val-Phe-Phe-Leu-Val-Thr-Leu-Thr-Leu-
Ser-Ser-Gly-Ser-Leu-Ser-Ser-Leu-Pro-Ser-Gln-Pro-Leu-
Arg-Met-Pro-Arg-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Asn-
Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ála-Arg-Lys-Leu-
Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-
Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-
Asp-Ser-Met-Trp-Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-
Ser-Ile-Leu-Ala-Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-
Gln-Gly-OH a H-Met-Leu-Leu-Trp-Val-Phe-Phe-Leu-Val-Thr-Leu-Thr-Leu-
Ser-Ser-Gly-Ser-Leu-Ser-Ser-Leu-Pro-Ser-Gln-Pro-Leu-
Arg-Met-Pro-Arg-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Asn-
Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-
Leu-Gln-Ašp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-
Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-
Asp-Ser-Met-Trp-Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-
Ser-Ile-Leu-Ala-Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-
Gln-Gly-OH. Všechny peptidové sloučeniny podle vynálezu je možno zís-kat známými chemickými postupy včetně syntézy na pevné fázinebo rekombinantním postupem. Cbě tyto metody jsou popsány vUS patentovém spisu č. 4 617 149. Rekombinantní postup je vhod-ný v případě, že se požaduje vysoký výtěžek. Obecný postup prokonstrukci jakéhokoliv požadovaného řetězce DNA lze nalézt vpublikaci Broun a další, Metnods in Enzymology 60:109, 1979. 10 Řetězec DNA je možno syntetizovat pomocí automatickéhozařízení, jako je například ABS (Applied Biosystems, 850 Lin-coln Centre Drive, Foster City, CA 94404) 380B. Řetězec DNAje možno vytvořit také pomocí polymerázy, jak bylo popsáno vUS patentových spisech č. 4 800 159 a 4 683 202 a v evropskémpatentovém spisu č. 258 071 z 2. března 1987.
Pro řetězec aminokyselin polypeptidu podle vynálezu mo-hou být kódem různé řetězce DNA, protože pro většinu aminoky-selin je kódem více než jeden triplet baží. Vzhledem k tomu,že i tyto řetězce jsou kódem pro tentýž řetězec aminokyselin,jsou rovněž zahrnuty do rozsahu vynálezu.
Odborníkům je zřejmé, že počátek translace polypeptidův E. coli je přes methioninový zbytek. Polypeptidy podle vy- ·nálezu, které neobsahují signální peptid pGRF na svém amino-terminálním zakončení nemusí vždy začínat methioninovým zbyt-kem. Znamená to, že uvedené látky je možno vyrobit několikazpůsoby. Po expresi polypeptidu je signální řetězec s obsahemmethioninu nebo methionin a další: aminokyseliny odstraněnyznámým způsobem, například podle US patentových spisů č. -4 745 069 a 4 782 139, podle evropského patentového spisuč. 199 081 nebo podle publikací Villa a další, Eur. 0. Biochem.171:137, 1988 a Geli a další, Gene 80:129, 1989.
Osou známé i další způsoby výroby. Uvedené látky jsouprodukovány také eukaryotickými buňkami při použití vektorů,odvozených od SV40. Exprese v eukaryotických buňkách je možnodosáhnout přes řetězec cDNA prekursoru pGRF. Takový postupje popsán v US patentovém spisu č. 4 775 624. Další možnépostupy pro dosažení exprese jsou popsány v publikaci0. Sambrook, E. F. Fritsch a T. Maniatis, Molecular Cloning, A Laboratory Manual 16.3-17.44 (1989). Exprese genu v Saccha-romyces cerevisiae byla podrobně popsána v 1 Current Prutocolsin Molecular Biology, F. M. Ausubel, R. Brent, R.E. Kingston,0.0; Moore, 0. G. Seidman, O.A. Smith a K. Struhl 1989. 222*2i25h222fi22iI22Í2
SE - 11 - Řetězec DUA podle vynálezu je kódem pro polypeptidovésloučeniny a pro úplný pGRF. Řetězec aminokyselin jedné for-my pGRF je znám, avšak kódový řetězec DUA až dosud nebyl znám.
Vynález zahrnuje také netoxické adiční soli uvedenýchlátek s kyselinami a karboxylovými kyselinami, přijatelné zfarmaceutického hlediska.
Pod tímto pojmem se rozumí adiční soli s organickýmii anorganickými kyselinami, jako jsou kyselina chlorovodíková,fluorovodíková, sírová, sulfonová, vinná, fumarová, bromovodí-ková, glykolová, ci-tronová, maleinová, fosforčená, jantarová,octová, dusičná, benzoová, askorbová, p-toluensulfonová, ben-zensulfonová, naftalensulfonová, propionová a podobně. S výho-dou jde o sůl s kyselinou chlorovodíkovou, octovou nebo janta-rovou. Tyto soli je možno získat obvyklým způsobem.
Solemi s karboxylovými kyselinami mohou být napříkladaminy, amonné soli, kvarterní amoniové soli, soli s alkalický-mi kovy a kovy alakalických zemin, jako jsou soli vápenaté,hořečnaté, sodné, draselné, lithné a podobně.
Podstatou vynálezu jsou také farmaceutické prostředky,které obsahují jako svou účinnou složku některou z uvedenýchpolypeptidových sloučenin nebo jejich adiční soli s kyselina-mi a soli s karboxylovými kyselinami, přičemž uvedené polypep-tidy lze vyjádřit obecným vzorcem H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-A-Tyr-Arg-Lys-Val-
Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-
Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-
Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp-
Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala-
Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH; kde A znamená Asn nebo Ser, jakož i farmaceutický pevný nebo kapalný nosič. - 12 -
Vynález tedy umožňuje uvolnění růstového hormonu tak,že se podá účinné množství polypeptidové sloučeniny, kterouje možno vyjádřit obecným vzorcem H-Tyr-Ala-Asp-AIa-Ile-Phe-Thr-Asn-A-Tyr-Arg-Lys-Val-
Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile- Mět-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-
Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp-
Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala-
Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH kde A znamená Asn nebo Ser, spolu s farmaceutickým nosičem, podat je možno také adiční do-li s kyselinou nebo soli s karboxylovou kyselinou, přijatelnéz farmaceutického hlediska.
Prekursor podle vynálezu se podává po dobu, po kterouse vyžaduje uvolnění růstového hormonu. Dávka závisí na hmot-nosti subjektu a na cestě podání. Výhodná dávka u vepřů je vrozmezí 0,3 až 12 mg denně. Při podávání polypeptidů podle vynálezu parenterálnějsou výhodnou injekční formou sterilní vodné roztoky nebodisperze a sterilní prásky, z nichž je možno připravit tytosterilní injekční roztoky nebo disperze. Nosičem může býtrozpouštědlo nebo disperzní prostředí, které obsahuje napří-klad vodu, ethanol, polyol, například glycerol, propylenglyko 1,kapalný polyethylenglykol a podobně, užít je možno také směsitěchto látek nebo rostlinné oleje. Sypnost je možno zajistitnapříklad použitím povlaku jako lecithinu, čímž je možno udržetpožadovanou velkost částic v případě disperze, současně je takémožno užít smáčedla. Proti napadení mikroorganismy je možno užítrůzné antibakt-eriální a antifungální látky, jako paraben, chlor-butanol, fenol, kyselinu sorbovou a podobně. V řadě případů jevhodná, aby roztoky byly isotonické a pak se přidávají napříkladcukry, chlorid sodný a podobně. Prodlouženého vstřebávání in-jekční lékové formy je možno dosáhnout vhodnými látkami, napří-klad přidáním monostearátu hliníku a želatiny. 13 .Sterilní injekční roztoky je možno připravit ve vhodnémmnožství příslušného rozpouštědla za případné přítomnostirůzných dalších složek, tak jak byly svrchu uvedeny. V přípa-dě, že má být dosaženo účinnější distribuce, je možno účinnoulátku zabudovat do systému se zpomaleným uvolňováním nebo scílenou distribucí, jako jsou polymerní matrice, liposomy amikrokuličky. Účinné látky je možno podávat mechanicky, pomo^cí usmotických čerpadel nebo pomocí jiného systému, který za-jištuje kontinuální nebo občasné uvolňování. Protože je farma-ceutické podávání peptidových látek teprve na svém počátku,je možno předpokládat velké pokroky v této technologii a jepravděpodobné, že pak bude vhodné podávat sloučeniny podle vy-nálezu dalšími novými způsoby.
Je zvláště výhodné zpracovat sloučeniny podle vynálezuna formy, které obsahují dávku pro jednotlivě podání. Každáz těchto jednotek pak obsahuje předem stanovené množstvíúčinné látky, vypočítané tak, aby dávka vyvolala ve spojenís farmaceutickým nosičem požadovaný léčebný účinek. Specific-ká léková forma je závislá zejména na vlastnostech určité po-užité látky a na požadovaném léčebném účinku.
Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následující-mi příklady, které nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu. Příklady provedení vynálezu Příklad 1
Exprese prekursoru pGRF v E. coli
Zkonstruuje se plasmid a exprese polypeptidu se dosáhnepodle US patentového spisu č. 4 828 988. Postup se modifikujetak, že se kódový řetězec pro lidský GRF, popsaný v uvedenémpatentovém spisu nahradí kódovým řetězcem pro pGRF. Vhodnýmkódovým řetězcem je řetězec vzorce í Hiťíc - 14 -
TATGCAGATGCCATCTTCACCAACAACTACCGGAAGGTGCTGGGCCA ---------+---------+---------+---------+-------
ATACGTCTACGGTAGAAGTGGTTGTTGATGGCCTTCCACGACCCGGT
GCTCTCTGCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGG —+---------+---------+---------+---------+----
CGAGAGACGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCC GGGAGAGAAACCAGGAGCAAGGAGCAAGGGTACGGCTTGGCCGTCAG--- h--- ----H --------------1—
CCCTCTCTTTGGTCCTCGTTCCTCGTTCCCATGCCGAACCGGCAGTC s
GTGGACAGCATGTGGGCAGACCAAAAGCAGATGGCATTGGAGAGCAT --------+---------+---------+---------+--------
CACCTGTCGTACACCCGTCTGGTTTTCGTCTACCGTAACCTCTCGTA
CCTGGCGACCCTGCTGCAGGAGCACAGGAATTCCCAAGGATGA --------—j ------H-------·-- GGACCGCTGGGACGACGTCCTCGTGTCCTTAAGGGTTCCTACT .
, Q
Tento řetězec DUA je kódem pro Asn -formu prekursorupCRF. Ser -forma se získá tak, že se kód pro devátou amino-kyselinu změní z AAC na AGC. Příklad 2
Čištění prekursoru pGRF Připraví se sloupec s obsahem kationtoměniče při použi-tí prostředku S Sepharose (Pharmacia, 300 Centennial Ave.,Piscataway, 113 08354). Sloupec obsahuje 1 litr uvedené prysky-řice na 50 g prekursoru. Materiál s obsahem prekursoru sepřidává do sloupce rychlostí 0,1 litru/cm2 za hodinu a pakse sloupec promyje dvěma objemy 0,1 M chloridu sodného vesměsi 0,05 N kyseliny octové se 7 M močoviny. , Pak se poly-peptid vymývá při použití lineárního gradientu v rozmezí0,25 až 1,6 M chloridu sodného v téže směsi kyseliny octovéa močoviny, užijí se tři objemy sloupce a odebírají se frakceo ob jemu .0,1· ob jemu sloupce. Frakce s obsahem polypeptidu seidentifikují; podle své vodivosti, O.D.27Ó, HPLC a elektro-forézou na polyakrylamidovém gelu. Příslušné frakce se spojí.
Ke spojeným frakcím se pak přidá stejný objem směsi ky-seliny octové a močoviny. Tento materiál se pak nanesena )$· 15
sloupec s obsahem prostředku S Sepharose ve směsi kyselinyoctové a močoviny, sloupec pojme 50 g bílkoviny na 1 litrpryskyřice. Rychlost průtoku je 0,02 litru/cm za hodinu.Frakce prekursoru se vymývají při použití lineárního gradien-tu 0,25 až 1,2 M chloridu sodného ve směsi kyseliny octové amočoviny. Odebírají se frakce s objemem 0,1 objemu sloupce.Frakce se analyzují stejně jako svrchu a frakce s obsahemprekursoru se spojí. Připraví se sloupec s obsahem prostředku Sephadex G-15(Pharmacia) v 0,02 M glycinu o pH 2,5, objem sloupce je pěti-násobkem objemu spojených frakcí. Odeberou se frakce s op-tickou hustotou 0.0.276·
Pak se připraví sloupec s obsahem pryskyřice SP20SS(Sephabeads, Mitsubishi Chemical, Tokyo) v 10¾ acetonitrilus 0,02 M glycinu o pH 2,5. Spojené frakce s obsahem prekurso-ru se upraví na 10 % v acetonitrilu a materiál se nanáší nasloupec rychlostí 1,5 až 2 objemy sloupoc za hodinu. Slou-pec se promyje dvěma objemy sloupce acetonitrilu s glycinovýmpufrem, pak se prekursor vymývá gradientem, který se vytvořísmísením tří objemů sloupce 10¾ acetonitrilu s 0,02 M glycinuse třemi objemy sloupce 50¾ acetonitrilu a 0,02 M glycinu.Odebírají se frakce s objemem 0,1 objemu sloupce a zkoumajíse na přítomnost prekursoru pGRF.
Materiál s obsahem prekursoru se pak chromatografuje nasloupci s náplní prostředku ,Sephadex G-15 v rovnovážném stavuv 0,5 M kyseliny octové filizuje se pro přštípoužití
Izoluje se materiál s O.D.276 a ly°-
Claims (15)
- - 16 - -ý/rPATENTOVÉ NÁROKY1. DNA, -v—y—z it~a č""u j í e í—s-ě—ΐ~ 1 nnhuj^*· izolovaný řetězec DNA, který je kódem pro polypept\dobecného vzorce A-Tyr-Ala-Asp^-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-B-Tyr-Arg-Lys-Val-X^ Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile- Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly- Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp-1 Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala- Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH; kde A znamená atom vodíku nebo řetězec H-Met-Leu-Leu-Trp-Val--Phe-Phe-Leu-Val-Thr-Leu-Thr-Leu-Ser-Ser-Gly-Ser-Leu--Ser-Gln-Pro-Leu-Arg-Het-Pro-Arg a B znamená Asn-nebo Ser.
- 2. DNA podle nároku 1, /v y z n -a- č u j—f—g-i—s—ar ±_-í—m-,--ř-ef obsahuj^Zízolovaný řetězec DNA, který je kódem pro polypeptid s řetězcem H-Tyr-Ala-Aáp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val- Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile- Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly- Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp- Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala- Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH.
- 3. DNA podle nároku 1, y z-n □ ě u j -í—cí" s-e Λ—í—m—, Ž43l obsahuj^izulovaný řetězec DNA, který je kódem pro polypeptid s řetězcem ...................................................... ~ i',; i ; - 17 - S H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Asn-Tyr-Arg-Lys-Val- Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile- Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly- . i; Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp-Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala-Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH. f /ΪΥίΑγϊ <Xs
- 4. DNA podle nároku 3, v y z n o ň ί i í ,c ΐ—s—e*t í-m—;-žo jde o-ONA-y následující^ řetězení": TATGCAGATGCCATCTTCACCAACAACTACCGGAAGGTGCTGGGCCA ---------+---------+----------+---------+------- ATACGTCTACGGTAGAAGTGGTTGTTGATGGCCTTCCACGACCCGGT GCTCTCTGCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGG —+---------+---------+---------+---------+---- CGAGAGACGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCC GGGAGAGAAACCAGGAGCAAGGAGCAAGGGTACGGCTTGGCCGTCAG — ___+---------+---------+-------__+----- CCCTCTCTTTGGTCCTCGTTCCTCGTTCCCATGCCGAACCGGCAGTC GTGGACAGCATGTGGGCAGACCAAAAGCAGATGGCATTGGAGAGCAT --------+---------+---------+--------_+___----- CACCTGTCGTACACCCGTCTGGTTTTCGTCTACCGTAACCTCTCGTA CCTGGCGACCCTGCTGCAGGAGCACAGGAATTCCCAAGGATGA ---------+--------+_.--------+---------+--- GGACCGCTGGGACGÁCGTCCTCGTGTCCTTAAGGGTTCCTACT . ~7 /
- 5. DNA podle nároku 2, -v y z n d č" u j í u í—5—crt- í ifl—ϊ—že jde—cr-βΝΑ a následujícími retěz&eflí: í/is^iV.úv·. - 10 - TATGCAGATGCCATCTTCACCAACAGCTACCGGAAGGTGCTGGGCCA ---------+---------+---------+---------+------- ATACGTCTACGGTAGAAGTGGTTGTCGATGGCCTTCCACGACCCGGT GCTCTCTGCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGG --+---------+---------+---------+---------+---- CGAGAGACGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCC GGGAGAGAAACCAGGAGCAAGGAGCAAGGGTACGGCTTGGCCGTCAG -----+---------+——---+---------+---------+_ CCCTCTCTTTGGTCCTCGTTCCTCGTTCCCATGCCGAACCGGCAGTC GTGGACAGCATGTGGGCAGACCAAAAGCAGATGGCATTGGAGAGCAT --------+---------+---------+---------+-------- CACCTGTCGTACACCCGTCTGGTTTTCGTCTACCGTAACCTCTCGTA CCTGGCGACCCTGCTGCAGGAGCACAGGAATTCCCAAGGATGA---------+---------4— GGACCGCTGGGACGACGTCCTCGTGTCCTTAAGGGTTCCTACT .
- 6. ONA podle nároku 1, v ,y. .z-n a č u j-j c i—s—e , „ IgA1 τ-·ι· m , 2o- obsahuj^ řetězec izolované ONA, který je kódem pro polypeptid vzorce- H-Met-Leu-Leu-Trp-Val-Phe-Phe-Leu-Val-Thr-LeurThr-Leu- Ser-Ser-Gly-Ser-Leu-Ser-Ser-Leu-Pro-Ser-Gln-Pro-Leu- Arg-Met-Pro-Arg-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Asn- Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu- Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn- Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val- Asp-Ser-Met-Trp-Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu- Ser-Ile-Leu-Ala-Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser- Gln-Gly-OH.
- 7. DNA podle nároku 1, -v—y—z—ň—a—ě—u—j—í—c—í—s—<7í -m ;-ž-e- obsahujt izolovanou DUA, která je kódem pro polypeptid vzorce - 19 - H-Met-Leu-Leu-Trp-Val-Phe-Phe-Leu-Val-Thr-Leu-Thr-Leu- Ser-Ser-Gly-Ser-Leu-Ser-Ser-Leu-Pro-Ser-Gln-Pro-Leu- Arg-Met-Pro-Arg-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser- Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu- Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn- Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val- Asp-Ser-Met-Trp-Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu- Ser-Ile-Leu-Ala-Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser- Gln-Gly-OH. fyyQfóx.' Γ<-0. DNA podle nároku 6, .v. y.ž-n.~-a· č jj j í c—í—s—e- t—í- fT~—žr~ jdo o DNA—s--řotoz-eť!fíi ATGCTGCTCTGGGTGTTCTTCCTCGTCACCCT ---------+---------+---------+-- TACGACGAGACCCACAAGAAGGAGCAGTGGGA CACCCTCAGCAGCGGCTCCCTCAGCTCCCTGCCCTCCCAGCCCCTCAGGATGCCGC ------—(----------1---------+-- — -4— ----—h-- GTGGGAGTCGTCGCCGAGGGAGTCGAGGGACGGGAGGGTCGGGGAGTCCTACGGCG GGTATGCAGATGCCATCTTCACCAACAACTACCGGAAGGTGCTGGGCCAGCTCTCT -------+---------+---------+---------+---------+-------- CCATACGTCTACGGTAGAAGTGGTTGTTGATGGCCTTCCACGACCCGGTCGAGAGA GCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGGGGGAGAGAAACCAGGA -+------:---+—--------+---—----+---------+---------+—-- CGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCCCCCTCTCTTTGGTCCT GCAAGGAGCAAGGGTACGGCTTGGCCGTCAGGTGGACAGCATGTGGGCAGACCAAA -----+---------+---------+---------------—+---------+ CGTTCCTCGTTCCCATGCCGAACCGGCAGTCCACCTGTCGTACACCCGTCTGGTTT AGCAGATGGCATTGGAGAGCATCCTGGCGACCCTGCTGCAGGAGCACAGGAATTCC ---------+---------+---------+---------+---------+------ TCGTCTACCGTAACCTCTCGTAGGACCGCTGGGACGACGTCCTCGTGTCCTTAAGG CAAGGATGA ---+----- GTTCCTACT . - 20 -
- 9. DNA podle nároku 7, -v—y z4i a č u jí"ffl 'i žc jde q izolovaný řetězec DNA ATGCTGCTCTGGGTGTTCTTCCTCGTCACCCT ---------+---------+---------+-- TACGACGAGACCCACAAGAAGGAGCAGTGGGA CACCCTCAGČÁGCGGCTCCCTCAGCTCCCTGCCCTCCCAGCCCCTCAGGATGCCGC -------+--------------------- GTGGGAGTCGTCGCCGAGGGAGTCGAGGGACGGGAGGGTCGGGGAGTCCTACGGCG GGTATGCAGATGCCATCTTCACCAGCAACTACCGGAAGGTGCTGGGCCAGCTCTCT —+----------+---------+---------+---------+----------+— GCATACGTCTACGGTAGAAGTGGTCGTTGATGGCCTTCCACGACCCGGTCGAGAGA GCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGGGGGAGAGAAACCAGGA -------+---------4-------___4----------+-—----- CGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCCCCCTCTCTTTGGTCCT GCAAGGAGCAAGGGTACGGCTTGGCCGTCAGGTGGACAGCATGTGGGCAGACCAAA•—+———+————+——-——+————+————+—CGTTCCTCGTTCCCATGCCGAACCGGCAGTCCACCTGTCGTACACCCGTCTGGTTT AGCAGATGGCATTGGAGAGCATCCTGGCGACCCTGCTGCAGGAGCACAGGAATTCC------+---------+---------+---------+--------— TCGTCTACCGTAACCTCTCGTAGGACCGCTGGGACGACGTCCTCGTGTCCTTAAGG CAAGGATGA +-------- GTTCCTACT . 10 · 011Λ, v y 7r~n o č u j i u i—g-c i t izolovaný řetězec DNA TATGCAGATGCCATCTTCACCAACAACTACCGGAAGGTGCTGGGCCA--------— ATACGTCTACGGTAGAAGTGGTTGTTGATGGCCTTCCACGACCCGGT GCTCTCTGCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGG —+---------+---------+---------+---------+---- CGAGAGACGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCC GGGAGAGAAACCAGGAGCAAGGA ------ CCCTCTCTTTGGTCCTCGTTCCT .1. DNA, v-y z- n a ž u j í c í—s-e—nuj$ izolovaný řetězec DNA - 21 - TATGCAGATGCCATCTTCACCAACAGCTACCGGAAGGTGCTGGGCCA ATACGTCTACGGTAGAAGTGGTTGACGATGGCCTTCCACGACCCGGT GCTCTCTGCCCGAAAGCTCCTCCAGGACATCATGAGCAGGCAGCAGG --+---------+---------+---------+---------+---- CGAGAGACGGGCTTTCGAGGAGGTCCTGTAGTACTCGTCCGTCGTCC GGGAGAGAAACCAGGAGCAAGGA CCCTCTCTTTGGTCCTCGTTCCT .
- 12. Polypeptid obecného vzorce A-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-B-Tyr-Arg-Lys-Val- Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile- Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly- Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp- Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala- Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OHkde A znamená atom vodíku nebo,řetězec H-líet-Leu-Leu-Trp-Val--Phe-Phe-Leu-Val-Thr-Leu-Thr-Leu-Ser-Ser-Gly-Ser-leu--Ser-Gln-Pro-Leu-Arg-Met-Pro-Arg a 0 znamená Asn nebo Ser, jakož i adiční soli těchto látek s kyselinami nebo soli, skarboxylovými kyselinami, přijatelná z farmaceutického hlediska
- 13. Polypeptid podle nároku 12, »-y 7 u j -i- c í s—e—t- í-ťti—;-že jdu"T£ sloučeninft. H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Asn-Tyr-Arg-Lys-Val- Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile- Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly- Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp- Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala- Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH; ‘f, í- 22 jakož i o adiční soli této látky s kyselinami nebo soli skarboxylovými kyselinami, přijatelné 2 farmaceutického hlediska
- 14. Polypeptid podle nároku 12, -v- y z -n ^á-č—u---j 1 c-f~ s—€—t- í m- ,-žu -jde-σ H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val- Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile- Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly- Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp- Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala- Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser~Gln-Gly-OH; jakož i o adiční soli s kyselinami nebo o soli karboxylové ky-seliny, přijatelné z farmaceutického hlediska.
- 15. Polypeptid podle nároku 12, —vyzná č· u-j--í c í.. . «—e—t—í-ffl—5—že-jde o· H-Met-Leu-Leu-Trp-Val-Phe-Phe-Leu-Val-Thr-Leu-Thr-Leu-Ser-Ser-Gly-Ser-Leu-Ser-Ser-Leu-Pro-Ser-Gln-Pro-Leu-Arg-Met-Pro-Arg-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Asn-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp-Ala-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala-Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH; jakož i o adiční soli této látky s kyselinami nebo o solikarboxylové kyseliny, přijatelné 2 farmaceutického hlediska.
- 16. Způsob vyvolání uvolnění růstového hormonu u ži-vočichů, vyznačující se tím, že se těmtoživočichům podá účinné množství polypeptidu vzorce - 23 - H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-A-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Arg-Gln-Val-Asp-Ser-Met-Trp-A1a-Asp-Gln-Lys-Gln-Met-Ala-Leu-Glu-Ser-Ile-Leu-Ala-Thr-Leu-Leu-Gln-Glu-His-Arg-Asn-Ser-Gln-Gly-OH kde A znamená Asn nebo Ser, nebo farmaceuticky přijatelná adiční sůl této látky nebosůl karboxylové kyseliny, přijatelná z farmaceutickéhohlediska.
- 17. Způsob podle nároku 16, vyznačujícíse tím, že A znamená Aeo.
- 13. Způsob podle nároku 16, vyznačujícíse tím, že A znamená Ser. H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Asn-Tyr-Arg-Lys-Val- Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile- Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly- Ala-Arg-Val-Arg-Leu-A; kde A znamená hydroxyskupinu nebo aminoskupinu.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US53015090A | 1990-05-29 | 1990-05-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS158391A3 true CS158391A3 (en) | 1992-01-15 |
Family
ID=24112624
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS911583A CS158391A3 (en) | 1990-05-29 | 1991-05-27 | Factor precursor releasing pig growth-hormone |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0459747A1 (cs) |
| JP (1) | JPH0568559A (cs) |
| KR (1) | KR910020178A (cs) |
| AU (1) | AU639107B2 (cs) |
| CA (1) | CA2043049A1 (cs) |
| CS (1) | CS158391A3 (cs) |
| HU (1) | HUT58799A (cs) |
| IE (1) | IE911816A1 (cs) |
| IL (1) | IL98210A0 (cs) |
| NZ (1) | NZ238233A (cs) |
| ZA (1) | ZA913876B (cs) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CS111292A3 (en) * | 1991-04-19 | 1992-11-18 | Lilly Co Eli | Dna compound encoding factor releasing growth-hormone of cattle and apharmaceutical composition containing said compound |
| CA2297375A1 (en) * | 1997-07-24 | 1999-02-04 | Valentis, Inc. | Ghrh expression system and methods of use |
| KR100358937B1 (ko) * | 1998-04-23 | 2003-03-17 | 주식회사 엘지생명과학 | 성장호르몬 분비자극 활성을 가지는 수용성지모 추출물 및 그로부터 분리한 성장호르몬 분비촉진 인자 |
| NZ566267A (en) | 2003-05-01 | 2009-04-30 | Merial Ltd | Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use |
| US7468273B2 (en) | 2003-05-01 | 2008-12-23 | Meial Limited | Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use |
| CN100404679C (zh) * | 2005-09-23 | 2008-07-23 | 张永亮 | GRF（1-32）与SS-HBsAg融合基因组合及其构建成的表达系统和药物制剂 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0108387B1 (en) * | 1982-11-04 | 1990-05-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Preparation of recombinant growth releasing factors |
| US4728609A (en) * | 1983-01-10 | 1988-03-01 | Hoffmann-La-Roche Inc. | Recombinant growth hormone releasing factor |
| US4610976A (en) * | 1983-08-29 | 1986-09-09 | The Salk Institute For Biological Studies | Porcine GRF |
| EP0212531A1 (en) * | 1985-08-12 | 1987-03-04 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Bovine growth hormone releasing factor derivative |
-
1991
- 1991-05-22 NZ NZ238233A patent/NZ238233A/en unknown
- 1991-05-22 ZA ZA913876A patent/ZA913876B/xx unknown
- 1991-05-22 CA CA002043049A patent/CA2043049A1/en not_active Abandoned
- 1991-05-22 IL IL98210A patent/IL98210A0/xx unknown
- 1991-05-24 JP JP3120153A patent/JPH0568559A/ja not_active Withdrawn
- 1991-05-27 CS CS911583A patent/CS158391A3/cs unknown
- 1991-05-27 KR KR1019910008644A patent/KR910020178A/ko not_active Ceased
- 1991-05-28 EP EP91304796A patent/EP0459747A1/en not_active Ceased
- 1991-05-28 HU HU911783A patent/HUT58799A/hu unknown
- 1991-05-28 AU AU78003/91A patent/AU639107B2/en not_active Ceased
- 1991-05-28 IE IE181691A patent/IE911816A1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR910020178A (ko) | 1991-12-19 |
| JPH0568559A (ja) | 1993-03-23 |
| HUT58799A (en) | 1992-03-30 |
| IL98210A0 (en) | 1992-06-21 |
| AU7800391A (en) | 1991-12-05 |
| CA2043049A1 (en) | 1991-11-30 |
| EP0459747A1 (en) | 1991-12-04 |
| NZ238233A (en) | 1992-12-23 |
| HU911783D0 (en) | 1991-12-30 |
| IE911816A1 (en) | 1991-12-04 |
| ZA913876B (en) | 1993-01-27 |
| AU639107B2 (en) | 1993-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7229964B2 (en) | Insulin derivatives | |
| US20090099065A1 (en) | Acylated Single Chain Insulin | |
| US6025467A (en) | Parathyroid hormone derivatives and their use | |
| US20090069215A1 (en) | Acylated Single Chain Insulin | |
| JP2009525052A5 (cs) | ||
| PT88546B (pt) | Processo para a preparacao de analogos do factor de crescimento humano tipo insulina com ligacao reduzida a protiinas do soro | |
| WO1993020203A2 (en) | Stability-enhanced variants of parathyroid hormone | |
| HUT53936A (en) | Process for producing carrier proteins for insulin-like growth factors | |
| TW200529868A (en) | N-terminally monopegylated human growth hormone conjugates, process for their preparation, and methods of use thereof | |
| US5416073A (en) | Growth hormone-releasing peptides and method of treating animals, therewith | |
| US7371844B2 (en) | Nucleic acids encoding parathyroid hormone (PTH) derivatives | |
| CS158391A3 (en) | Factor precursor releasing pig growth-hormone | |
| ES2316354T3 (es) | Derivados polipeptidos de la hormona paratiroidea (pth). | |
| JP2009545320A (ja) | 副甲状腺ホルモン（ｐｔｈ）のポリペプチド誘導体 | |
| AU625787B2 (en) | Stabilized, potent grf analogs | |
| AU660665B2 (en) | Precursor form of bovine growth hormone releasing factor and related DNA compounds | |
| WO2020165457A1 (en) | Cortistatin or an analogue thereof as a pharmaceutically active agent in latent form | |
| KR970009159B1 (ko) | 돼지 성장호르몬 동족체를 암호화하는 디엔에이 | |
| KR100233804B1 (ko) | 초활성 grf 유사체 | |
| NZ227770A (en) | Growth hormone releasing factor (grf) peptide containing a cysteic acid residue in position 3 or 25 | |
| DE19508672A1 (de) | Neue cyclische Parathormonfragmente, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel | |
| RU2119800C1 (ru) | Аналог пептида фактора гормона роста (фгр), способ стимулирования секреции гормона роста и композиция для стимулирования секреции | |
| Sami et al. | Overproduction of a gastrointestinal hormone, secretin, in Escherichia coli cells and its chemical characterization. |