CS209974B1 - Spósob výroby kyseliny digalakturónovej enzýmovou hydrolýzou - Google Patents

Abstract

Vynález sa týká spósobu přípravy kyseliny digalakturónovej enzýmovou hydrolýzou. Podstata vynálezu spočívá v tom, že sa na zmes oligogalakturónových kyselin pósobí enzýmom endo-D-galakturonázou při teplote 30 až 40 °C, pH 4,2 až 5, pričom kyseliny galakturonová sa oddělí chromatograf i cky a efluent sa odpaří alebo vysuší mrazovou sublimáciou. Význam vynálezu spočívá v tom, že kyselina digalakturónová je dóležitá látka z hladiska teoretického štúdia enzýmov a pektínových látok a pre charakterizáciu v priemysle používaných pektolytických enzýmov.

Description

Vynález sa týká spósobu přípravy kyseliny digalakturonovej enzýmovou hydrolýzou.

Kyselina digfllalcturonová sa doteraz priemyselne nevyrábe. Bola připravená v niekol’kých laboratóriách cestou chemickéj hydrolýzy (Hatanaka C., Ozawa J. J. Agr. Chem. Soc. Japan Vol. 40 str. 96,0.966); Rexová-Benková L.,Chem. Zvěsti 24 0-970) str. 59; van Hondenhoven F., Wittp D., Visser J. Carbohyd. Res. str. 233 (1974)). Všetky poísané postupy sú viacstupňové a značné sa odlišujú heterogenitou získaného produktu. Spoločným rysom týchto postupov je, že vedú k malým výťažkom kyseliny digalakturonovej popři vysokom výťažku vyšších oligogalakturonových kyselin. Získanie kyseliny digalakturonovej v čistom stave zo zmeei oligogalakturonových kyselin má mnohé nevýhody ako je pracnoeť, časová náročnost a viacstupňové izolácie,.

Tieto nedostatky odstraňuje spósob výroby kyseliny digalakturonovej enzýmovou hydrolýzou, ktorého podstata spočívá v tom, že sa na zmes oligogalakturonových kyselin pósobí enzýmom endo-D-galakturonanázou pri teplote 30 až 40 °C a pH 4,2 až 5» pričom kyselina digalakturonová sa oddělí chromatograficky na koloně a efluent sa odpaří alebo vysuší mrazovou aublimáciou.

Výhodou tohto postupu je, že endo-D-galskturonáza sa nemusí izolovat v čistom stave. Na enzýmovú hydrolýzu sa móže použit endo-D-galakturonanáza z komerČných preparátov pektolytických enzýmov (Pectinase, Rohament, Pectinex, Ultra, Pekticín, Leozym a i.) bežne používaných v konzervárskom priemysle. Jedinou požiadavkou na použitý enzýmový preparát je nízký obsah exo-D-galakturonenázy. Ďalšou velkou přednostou uvedeného spósobu je, že hydro lýza prebíehe formou jednostupňovej reakcie a pře priebeh reakcie nie je potřebný 3alší substrát alebo koenzým.

Kyselina digalakturónová je látka čóležitá z hlediska teoretického štúdia enzýmov a pektínových látok a pre charakterizáciu v priemysle používanýeh pektolytických enzýmov.

Příklad 1

500 mg oligogalakturonových kyselin sa za miešania rozpustí v 70 ml octenového tlmivého roztoku (pH = 4,6) a 20 mg enzýmového preparátu (Leozym, endo-D-galakturonanáza) sa rozpustí v 30 ml octanového tlmivého roztoku. Po přefiltrovaní roztoku enzýmu sa obidva roztoky spoje. Enzýmová hydrolýza prebieha pri 40 °C za miešania alebo trepania 10 až 12 hodin. Enzýmom katalyzovaná reakcia po kontrole chromatografiou aa ukončí 20 minútovým varom. Po ochladení sa roztok přefiltruje a zahustí vákuovým odpařováním při 40 °C.

2,5 ml zahuštěného hydrolyzátu sa naneaie na stípec molekulového šita (Sephadex G-10) a efluent s kyselinou digalakturonovou sa odpaří, alebo vysuší mrazovou sublimáciou.

Výťažok kyseliny digalakturonovej je až 80 %.

Příklad 2

Postupovalo sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že enzýmový preparát (8 mg Rohament) rozpustil v octanovom tlmivom roztoku o pH 4,8 a enzýmová hydrolýza prebiehala pri teplote 30 °C počas 4 až 6 hodin. Výťažok kyseliny digalakturonovej bol až 70 %.

Význam vynálezu spočívá v použití kyseliny digalakturonovej na testovanie róznych

209 974 enzymatických preparátov používaných v konzervárskom, kožiarskom a textilnom priemysíe.

Claims (1)

1. Spůsob výroby kyseliny digalakturónovej enzýmovou hydrolýzou vyznačujúci sa tým, že sa na zmes oligogalakturónových kyselin pbsobí enzýmom endo-D-galakturonanázou pri teplote 30 až 40 °C a pH 4,2 až 5, pričom kyselina digalakturonová sa oddělí chromatograficky na koloně a efluent sa odpaří alebo vysuší mrazovou sublimáciou.