CS211785B1 - Spósob přípravy (U-* 14C) glukózo-6-fosfátu - Google Patents
Spósob přípravy (U-* 14C) glukózo-6-fosfátu Download PDFInfo
- Publication number
- CS211785B1 CS211785B1 CS268680A CS268680A CS211785B1 CS 211785 B1 CS211785 B1 CS 211785B1 CS 268680 A CS268680 A CS 268680A CS 268680 A CS268680 A CS 268680A CS 211785 B1 CS211785 B1 CS 211785B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- phosphate
- glucose
- preparation
- alpha
- green
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 7
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 title description 9
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 8
- 229940045189 glucose-6-phosphate Drugs 0.000 title 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 9
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 102000009569 Phosphoglucomutase Human genes 0.000 claims description 4
- 108091000115 phosphomannomutase Proteins 0.000 claims description 4
- 241000195628 Chlorophyta Species 0.000 claims description 3
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 claims description 3
- RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1O RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- 240000000260 Typha latifolia Species 0.000 claims 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 4
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010073135 Phosphorylases Proteins 0.000 description 3
- 102000009097 Phosphorylases Human genes 0.000 description 3
- HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 229950010772 glucose-1-phosphate Drugs 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 2
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- IGBWEXLCOAPIOB-BAOOBMCLSA-N (3s,4r,5r)-1,3,4,5,6-pentahydroxyhexan-2-one;phosphoric acid Chemical class OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO IGBWEXLCOAPIOB-BAOOBMCLSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010055629 Glucosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000000340 Glucosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- RNBGYGVWRKECFJ-ZXXMMSQZSA-N alpha-D-fructofuranose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@](O)(COP(O)(O)=O)O[C@@H]1COP(O)(O)=O RNBGYGVWRKECFJ-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940025237 fructose 1,6-diphosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález rieši sposob přípravy /U- C/ glukozo-6-fosfátu účinkom enzýmu fosfoglukomutázy /oí -D-glukózo-1 , 6d ifo sf á t :©(-D-glukó zo-1 -f osf át fosfotransferáza, EC 2.7.5.1/ na^-D-glukopyranozylfosfát /U-^C/ o vysokej mólovej aktivitě, připravený účinkom enzýmu fosforylázy na vodorozpustný polysacharid typu alfa£l 4/6/]glukánu podía /A.O. Č. 194 587/ izolovaný z rádioaktívného biochemického materiálu, s výhodou zo zelených a modrozelených rias, v procese komplexného spracovania radioaktivněj biomasy /Čs. pat. 121 808pričom produkt enzymovej reakcie sa separuje z reakčnej zmesi chromatograficky, o výtažku až 23 % pre glukozo-614. , , *,
-fosfát. Z biochemických metod přípravy glukozo-6-f osf átu /U- C/ je uvádzaný postup využívájúci D-glukózu a enzym hexokinázu /EC 2.7.1.1/, pričom reakcia prebieha za přítomnosti
ATP. Aj ked výtažok v tejto reakcii je vysoký, nevýhodou je, že aa spracováva D-glukóza a nie východzí zdroj D-glukózy, vodorozpustný alfa/l 4/6/J glukán /U-^C/. Táto nevýhoda je riešená postupom podía vynálezu, kedy východzou látkou přípravy je priamo vodorozpustný polysacharid, připravený v rámci komplexného spracovania rádioaktívnej biomasy /Cs. pat. Č. 1 21 808/,
Podstata vynálezu spočívá v tom, že na vetvený polysacharid typu alfa /1 *> 4/ glukánu s větvením alfa/1—>6/ vazbami, izolovaný z rádioaktívného biologického materiálu, s výhodou so zelených,resp. modrozelených rias, v procese komplexného spracovania rádioaktívnej biomasy, sa posobí enzýmom fosforylázou /alfa-1,4-glukán ortofosfát glukozyltransferáza, EC 2.4.1.1/ v přítomnosti pufrového roztoku fosfátu o pH 6 až 7 /A.O. č. 194 587/, pričom na získaný alfa-D-glukopyranozylfosfát /U-^C/ sa posobí pufrovaným roztokom fosfoglukomutázy v přítomnosti cysteinu, síranu horečnatého a glukózo-1,6-difosfátu /pH 7,5 až 8,0/ a získaný glukózo-6-fosfát /U-^C/ sa oddělí jednoducho chromatografiou na papieri. Uvedeným postupem možno získat gLukózo-6-fosfát /O-^C/ o vysokej mólovej aktivitě a výtažku až 95 Z, vzhladom na alfa-D-glu14 kopyranozylfosfát /U- C/.
1785
4
Výhodou navrhovaného spósobu prípravy /U- C/ glukozo-6-fosfátu je, že:
- celý postup prípravy je velmi jednoduchý v technickom převedení
- poskytuje ďalšiu možnost využitia vodorozpustného glukánu /U-^C/, izolovaného z rádioaktívneho biologického materiálu
- všetky enzýmy potřebné k prevedeniu naznačených postupov sú komerčně dostupné, připadne pripravitelné v laboratórnych podmienkach.
Příklad 1
K 0,1 ml 1Z roztoku vodorozpustného polysacharidů /U-^C/ zo zelených rias o celkovej aktivitě 47 kBq sa přidal 1 ml 0,2 M fosfátového pufru o pH 6,0 a 1 ml fosforylázy zo zemiakov /A.O. 194 588/ a reakčná zmes sa inkubovala pri 35 °C po dobu 4 hodin. Po přeběhnutí reakcie sa nastavilo pH reakčnej zmesi na hodnotu 7,5 pomocou 0,5 M fosfát, pufru /pH 8,0/ a přidal sa cystein na výslednú konc. 50 mM, síran horečnatý na 6 raM konc. a glukózo-1,6-difosfát na 0,1 raM konc. a 10 fosfoglukomutázy /z kvasíniek, 0,34 U/ a reakčná zmes sa inkubovala ďalšie 2 hodiny pri 35 °C. Po ukončení reakcie sa reakčná zmes naniesla na papier Whatraan 1 a separácia glukózo-6-fosfátu sa previedla v systéme kyselina izomaslová-čpavok-voda /66:1:33/ po dobu 100 hodin. Výťažok glukózo-6-fosfátu /U- C/ 7,2 kBq, to je 95 % na množstvo vytvořeného alfá-D-glukopyranozylfosfátu /7,44 kBq/,
Příklad 2
Tak ako je uvedené v příklade 1, s tým rozdielom, že po ukončení reakcie sa zvyškový alfa-D-glukopyranozylf09fát /U~ C/ rozloží prídavkom HC1 na výslednú koncentráciu 0,1 N k reakčnej zraesi, tá sa povarí po dobu 3 minút a kyselina chlorovodíková sa odpaří na vákuovej odparke. Chromatografická separácia sa prevedie tak, ako je uvedené v příklade 1.
G l'ukózo-6-f osf át je dóležitá biochemikália, ktorá v znacenom stave ako /U-^C/ rádíocheraikália sa móže použit k štúdiu enzymových procesov prebiehajúcich ín vitro, ako aj k histochemíckým Štúdiara a sledovaniu priebehu glykolýzy v buňkách. Možno ho považovat aj za dóležitú východziu látku k chemickým syntézám v oblasti chemie cukrov.
T a b u Ϊ k a 1
Hodnoty chromatografických pohyblivostí niektorých fosfátov D-glukózy a D-fruktózy, vztahované na glukózo-6-fosfát v systéme kyselina izomaselná-čpavok-voda /66:1:33/.
Glukozo-6-fosfát 1,0
Fruktozo-6-fosfát 1,31
Fruktózo-1,6-difo8fát 0,51 íC-D-g lukopyr ano zy lf o sf á t 1,11
Claims (2)
- PREDMET VYNALEZU14 Spósob prípravy /11- C/ glukozo-6-f osf átu z rad ioaktívneho biologického materiálu, s výhodou větveného vodorozpustného alfa/Ί ** 4/6/.7g lukánu zo zelených alebo modrozelených rias, vyznačujúci sa tým, že na roztok získaného a 1 f a -D-g lu ko pyr ano zy 1 f o s f á tu /U-^C/ sa pósobí pufrovaným roztokom fosfoglukomutázy pri pH 7,5 až 8,0 v přítomnosti cysteinu, glukozo-1,6-difosfátu a horečnatých solí a vzniknutý produkt sa izoluje chromatograficky na papieri.Severografia, n. p.. závod 7, Most
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS268680A CS211785B1 (sk) | 1980-04-17 | 1980-04-17 | Spósob přípravy (U-* 14C) glukózo-6-fosfátu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS268680A CS211785B1 (sk) | 1980-04-17 | 1980-04-17 | Spósob přípravy (U-* 14C) glukózo-6-fosfátu |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS211785B1 true CS211785B1 (sk) | 1982-02-26 |
Family
ID=5364675
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS268680A CS211785B1 (sk) | 1980-04-17 | 1980-04-17 | Spósob přípravy (U-* 14C) glukózo-6-fosfátu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS211785B1 (sk) |
-
1980
- 1980-04-17 CS CS268680A patent/CS211785B1/sk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Umezawa et al. | Phosphorylative inactivation of aminoglycosidic antibiotics by Escherichia coli carrying R factor | |
| Strange et al. | An unidentified amino-sugar present in cell walls and spores of various bacteria | |
| SU1630617A3 (ru) | Способ получени фруктозилдисахаридов | |
| Thiem et al. | Chemoenzymatic syntheses of sialyloligosaccharides with immobilized sialidase | |
| Evers et al. | Synthesis of 2-deoxy-α-D-arabino-hexopyranosyl phosphate and 2-deoxy-maltooligosaccharides with phosphorylase | |
| EP0096547B1 (en) | Process for preparing uridine diphosphate-n-acetylgalactosamine | |
| Biely et al. | Lysis of Saccharomyces cerevisiae with 2-deoxy-2-fluoro-D-glucose, an inhibitor of the cell wall glucan synthesis | |
| JPH0630599B2 (ja) | フルクトース―１，６―二リン酸の製造法 | |
| Naundorf et al. | Substrate specificity of native dTDP-D-glucose-4, 6-dehydratase: chemo-enzymatic syntheses of artificial and naturally occurring deoxy sugars | |
| Lacey Jr et al. | Aminoacyl transer: Chemical conversion of an aminoacyl adenylate to an imidazolide | |
| Slein | [20] Synthesis of mannose-6-phosphate by hexokinase | |
| Pontis et al. | Measurement of UDP‐Enzyme Systems | |
| CS211785B1 (sk) | Spósob přípravy (U-* 14C) glukózo-6-fosfátu | |
| Düffels et al. | Chemoenzymatic synthesis of L-galactosylated dimeric sialyl Lewis X structures employing α-1, 3-fucosyltransferase V | |
| Albert et al. | Simultaneous detection of different glycosidase activities by 19F NMR spectroscopy | |
| US5750389A (en) | Purified saccharose-synthase, process for its production and its use | |
| EP0704536B1 (de) | Verfahren zur Isolierung und Reinigung von nukleotidaktivierten Zuckern aus biologischen Quellen | |
| US20020045222A1 (en) | Compositions and methods for saccharide synthesis | |
| JP3105306B2 (ja) | 糖質又は複合糖質の製造方法 | |
| DE3626915A1 (de) | Verfahren zur enzymatischen synthese eines n-acetylneuraminsaeure-haltigen trisaccharids | |
| KATAGIRI et al. | ON THE TRANSGLYCOSIDATION RELATING TO RIBOFLAVIN BY ESCHERICHIA COLI II. FORMATION OF RIBOFLAVIN COMPOUNDS OF OLIGOSACCHARIDES | |
| EP0005867B2 (en) | An alpha-amylase assay, a reagent composition and a reagent system therefor | |
| US5866378A (en) | Process for the synthesis of nucleotide-6-deoxy-D-xylo-4-hexuloses | |
| CS211784B1 (sk) | Spósob přípravy (U-* * 14C) fruktózo-6-fosfátu | |
| CS211786B1 (cs) | Spdsob přípravy (U-14C) fruktózo-1,6-difosfátu |