CS230983B1 - Sposob izolácie termolabilného enterotoxínu bakterií Bschericbia coli - Google Patents

Abstract

Vynález sa týká nového sposobu izolácie •'termolabilného enterotoxínu baktérií Eschtrichia coli, vhodného pre velkokapacitní! výrobu. Uvedený izolovaný enterotoxín slúži bud k imunizáoii prašných prasnic, alebo telných kráv osve alebo ako doplnok k iným,vakcínam proti Sxevným zápalom a hnačkóm novorodencov. Naohádza použiti® v živočíšnej velkovýrobě a prispieva k podstatnému znižovaniu úhynu novorodencov.

Description

Vynález sa týká spósobu izolácie a výroby terraolabilného enterotoxínu baktérií Escherichia coli, ktorý slúži buď k imunizacii prašných prasnic, alebo telných krav osve, alebo ako doplnok k iným vakcínam prot i črevným zápal om a hnačkám.

Kolienteritidu akolihnačky novorodených teliat a prasiat spósobujú enteropatogenně baktérie Escherichia coli, ktoré sa adherujú na črevnú stenu postihnutých zvierat a potom vylučováním enterotoxínov spósobujú črevný zápal a hnačky, v dósledku ktorých novorodenci často hynú. Zdolanie tohoto črevného zápalu je velmi vážným problémom* Najúspešnejším postupom je imunizácia zvierat antigénom adherencie, ktorý zabraňuje baktériám přilnut’ ku črevnej stene a tým aplikovat? v potrebnom množstve svoje toxíny a tak spósobovať onemecnenie. Napriek zníženiu adherencie však v niéktorých prípadoch baktérie pasážujúce črevným traktom stačia vylúčiť také množstvá entero toxínu, že k ochoreniu dojde. Tým sa vytvára sitttácia, keď vedla imunizácie voči antigénom adherencie je potřebná zviera?tá imunizovat’ aj voči enterotoxínu* Izelácia enterotoxínov v priemyselnom měřítku je však velmi zložitá, pretože vyžaduje niekolkostupňové chemické izolačně postupy a nákladné zariadenia*

230 983

Uvedené nedostatky v podstatnej miere odstraňuje uvedený sposob izolácie termolabilného enterotoxínu baktérií Escherichia coli podlá vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom, že sa enterotoxín z rozbitých bakteriálnych tiel po ich odstředění izoluje izoelektrickou auto!okusáciou do takej koncentrácie, že vykazuje jasnú přecipitačnú líniu v agare voči antiséru anti Ent až do riedenia 1 i 64·

Výhodou uvedeného spósobu výroby termolabilného entero toxínu je jednoduchost, energetická nenáročnost*,, vylúčenie trvalej obsluhy aparatúry a potřeby chemikálií, pretože separácia prebieha jedine v apyrogénnej sterilnej destilovanej vod··

Příklad·

Baktérie Escherichia coli, produkujúce tělový termolahilný enteratoxín sa po bežnej kultivácii, zabezpecujúcej vysoký obsah tohoto enterotoxínu v telách baktérií odstredia a bakterín bez supematantu sa resuspenduje v 2 % roztoku nátríumlaurylsulíátu, čiže nátriumdodecylsulíátru v sterilnej destilovanej vodě pri teplote 4 °C pomocou homogenizátora po dobu 5 až 10 min pri 3 000 1/min a teplote 4 °C· Tým sposobom nastane rozbitie baktérií· Potom sa homegenát odstředí pri 100 000 m.s”² pri teplote 4 °C po dobu jednej hodiny a supematant, ktorého vodivost sa upraví na hodnoty do SOO^uS přidáním sterilnej destilovanej vody, alebo přidáním ďalšieho substrátu následnou homogenizáciou ďalšieho bakterínu v tom istom roztoku, sa aplikuje do horizontálnej izoelektroíokusačnej velkokapacitnej aparatúry s mechanicky stabilizovaným deleným roztokom· Do aparatúry sa aplikuje

230 983 jednosměrný elektrický prúd maximálně 3 VA a roztok fokusuje pri teplote 4 °C kým neklesne pod 3 mA pri napatí 1. 000 V.

Po fokusácii sa zmeria vo všetkých priehradkách aparatúry pH. Termolabilný enterotoxín fokusuje automaticky k pH 6· - 7. V tomto rozmedzí interferuje len minimum iných hielkovín, ktoré majú izoelektrické pí vačšinou okolo pH 5,5. Z priehradok s pH v rozmedzí 6 až 7 sa zhromažďuje termolabilný enterotoxín· » Jeho koncentrácia sa upraví tak, aby vykazoval difúziou v agare zretelnú přecipitačnú líniu voči antiséru Ent alebo v

cholerovému antiséru aj pri riedení 1 : 64. Po dosiaBnutí tejto koncentrácie sa k roztoku termolabilného enterotoxínu buď přidá vhodné adjuvans, například olejové a podává sa ako samostatná imunizačná vakcína parenterálne, subkutánne alebo intramuskuláme injekčne v dávke 2 ml asi 6 týždňov před pórodom prašnéj prasnici, či telnej krave, alebo sa používá ako přídavek k vytvorenia komplexněj imunizačnej vakcíny společné například s K 88 alebo K 99 antigénom.

Vynález može nájsť široké uplatnenie pri priemyselnej výrobě imunizačných vakcia a v živočíšnej velkovýrobě.

Claims (1)

1. Spósob izolácie termolabilného enterotoxínu baktérií Escherichia coJLi vyznačujúci sa tým, že sa enterotoxín z rozbitých bakteriálnych tiel po ich odstředěni izoluje izoelektrickou autoíokusáciou do takej kancentrácie, že vykazuje jasnu precipitačnú líniu v agare voči antisóru anti Ent, alebo cholerovému antiséru až do riedenia 1 : 64·