CS231146B1 - Sposob výroby subcelulárnej parenterálnej látky proti neonatálnej kolienteritide a kolihnačke teliat a prasiat - Google Patents

Abstract

Vynález sa týká nového sposobu izolacie pilusového tělového antigénu k 99 bakterii Bscherichia coli. Uvedený izolovaný antigen K 99 slúži buS k imunizáoii telných kráv a najnovšie prašných prasnic osve, alebo ako doplnok k iným vakoínam proti črevným zápalom a hnačkám. Nachádza použitie v živočišné;} velkovýrobo, kde podstatné prispieva k zniženiu úhýnu novorodencov.

Description

(54) Sposob výroby subcelulárnej parenterálnej látky proti neonatálnej kolienteritide a kolihnačke teliat a prasiat

Vynález sa týká nového sposobu izolacie pilusového tělového antigénu k 99 bakterii Bscherichia coli. Uvedený izolovaný antigen K 99 slúži buS k imunizáoii telných kráv a najnovšie prašných prasnic osve, alebo ako doplnok k iným vakoínam proti črevným zápalom a hnačkám.

Nachádza použitie v živočišné;} velkovýrobo, kde podstatné prispieva k zniženiu úhýnu novorodencov.

231 146 (Π) (Bl) (51) Int Cl.

C 12 P 1/04

231 146

231 148

Vynález sa týká spósobu účinnéj subcelulárnej pařenaterálnej látky proti neonatálnej koliemteritlde a kolihnačke teliat a prasiat, podávanéj matkám $ týidnov před pórodom injekčme do svalu alebo podkožně»

Koliemteritída a kolihnačka teliat a prasiat je vážným problémom velkechovw* Jej příčinou sú enteropatogénne baktérie Escherichia colx, nesúce na povrchu svojho těla aj pilusový antigén K 99, ktorý umožňuje ich adherenciu na črevnú stenu novorodoných teliat a najmovšie aj prasiat & tým sposobuje enteritldu, ktorej následkem sú úporná hnačky a hynutie zvierat do desiatich dni po maroděni· Jej zdolánie je velmi náročné a zdíhavá, zriedka úšpešmá, Doteraz najúčinnejšxm spósobom jej likvidácie jo imunizácia novorodoných teliat a prasiat autochtonnou psrorálnou vakeínou, obsahujúcou umrtvená baktérie Escherichia colx, s palašovým amtigánom £ 99, alebo imunizácia tejných kráv a prašných prasnic před pórodom pareoterálnou vakcinou obsahujúcou buď umrtvená baktérie E. coli £ 99⁺, alebo izolovaný antigén £ 99» Perorálna vakclna má viacero nevýhod» Vyžaduje neustále dopíňanie vakcíny novými kmeňmi, podávanie velkých kvánt vakcíny denne manuálně, čo stažuje prácu vo velkochove» Paremterálna celulárna, alebo subceluláma vakcína imunizuje telmú krávu, alebo prasnú prasaicu a následná *· 2 ·**

231 148 po napiti kol astra sa přenesu protilátky z matky na novo rod enca. Doteraz vyrábané parenterálne subcelulárne vakcíny sá připravovaná náročnými* viacstupňovými chemickými izoláoiami, vyžadujúcimi nákladná zařiadenia a komplikovaný postup·

Uvedená nedostatky v podstatné! miere odstraňuje spósob ·· výroby subcelulárnej pereterálnej látky proti neonatálnej kolienteritíde a kolihnačke teliat a prasiat podlá vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom, ie sa pilusový antigén K 99 z povrchu těla baktérií Escherichia coll separuje homegenizáciou a izoluje izoelektrickou autofokusáciou do takej koncentrácie, ie vykazuje jasná percipitačnú líniu pri diíázii v agare voči antiséru anti K 99 až do riodenia'1 : 128.

Výhodou uvedeného spósobu výroby antigénu K 99 je jedno·» duchost, energetická nenáročnost· vyláčeaie trvalej obsluhy aparatáry a potřeby akýchkelvek chemikálií, protože separácia prebieha jedino v apyrogénnej sterilně j deštil ovanej vodě·

Příklad

Enteropatogénne baktérie Escherichia celí K 99*» nesúce pilusový antigén K 99 sa po bežnej kultivácii, zaručujúcej produkciu uvedeného antigénu odstredia a bakteriu bez supernaiao&u sa resuspenduje v 4 °C chladnej sterilněj destilovánoj vodě pomocou homogenizára 5 10 min pri 3 000 1/min a teplote 4 °C. Tah nastane odseparovanie pilusov obsahujúcich antigén K 99· Potom sa homegenát odstředí pri 70 000 m,e~² po dobu 20 min a pri teplote á °G· Supernatant, ktoréftn vodivost sa upraví na hodnoty do 800/uS přidáním sterilněj destilované j vody, alebe dalším přidáním antigénu K 99, sa apikuje do

231 146 horizontálněj izoelektrofokusačnej velkokapacitněj aparatury s mechanicky stabilizovaným delesým roztokám· Do aparatury sa aplikuje jednosmoniý elektrický prúd maximálně 3 VA a roztok fokusuje pri teplote 4 °C kým prúd neklesne pod 3 mA pri napálí 1 000 V· Po fo kasaci i sa zmeria vo všetkých priehradkách aparatury pB· Pilusový antigén K 99 fokusuje k pB

9,5 až 10,8 automaticky· Z priehradok s pffi v tomto rozmedzí sa zhromažďuje fimhriálny pilusový antigén S 99· Jeho pH sa uprav! na 7 až 7,5 a koncentrácia sa uprav! tak, aby vykazoval. pri sledován! precipitáoie v agar© jasnú precipitačnú liniu voči aatiséru anti K 99 až do riedenia 1 s 128· Po dosiahnut! tejto koncentrácie sa k roztoku antigénu přidá vhodné adjuvamř, např· olejové a podává sa pareuterálne injekčne v dávke 2 až 3 ml podkožně alebo intramnskuláme matkám asi 6 týždnov před parodom· Táto dávka a doba postačujú k tomu, aby sa u matiek vytvořili protilátky voči K 99 antigénu a po napit! kolestra sa preniesli do čriev novorodencov. Tieto protilátky zabra&ujú patogánnym baktériám B. co li K 99* adherovat sa na črevnú stenu a tým sposob o vat kolienteritídu a kolihnačku.

Vynález mdže nájst? široké praktické využitio v živočíšnej velkovýroba·

Claims (1)

1. PREDMET YYIÍLEIS

   231 148

   Spdsob výroby subcelaXár&cj pareuteráinej látky proti ueoua&álnej koii«n£erit£<Ie a kolihnačke teliat a praaiat vyznačujúci sa tým, ke sa pilasový asttigém K 99 i povrchu těla baktérii Escheriehia ooli separuje hemogenizúciou a izoluje izoolektrioko» autecfekusácioa do takej koncentrácie, ke vykazuje jasnú predpitačnú liniu pri diiúsii v agare voči m&isúra auti K 99 až do riedeuia 1 : 128;