CS231145B1 - Sposob výroby subcelulárnej parenterálnej látky proti neonatálnej kolienteritíde a kolihnačke prasiat - Google Patents

Abstract

Vynález sa týká nového sposobu izolácie pilusového tělového antigénu K 88 enteropatogénnych baktérii Bscherichis. coli. Uvedený izolovaný antigén slúži bud k imunizácii prašných prasnic osve, alebo ako doplnok k iným vakcinam proti črevným zápalom a hnačkám noyorodencov. Pre nízké výrobně náklady a jednoduchá manipuláciu nachadza široké použitie v živočišnéj velkovýrobě, kde podstatné prispieva k znižovaniu úhynu ciciakov.

Description

Vynález sa týká sposobu výroby účinnej subcelulárnej perenterálhej látky proti neonatálnéj kolienteritíde a kolihnačke prasiat, podávanej prašným prasniciam 6 týždňov přeď porodom injekána ďo svalu, alebo podkožia·

Kolienteritida a kolihnačka novoroděných prasiat je vážným problémem velkochovov ©šípaných. Jej zdolánie běžnými terapeutickými přípravkami je velmi náročné, zdíhavé á len xriedka úspěšné;. Doteraz najúčinnejším sposobom jej likvidácie je imunizácia novoroděných pr asiat autúchtonnou perorálnou vakcínou, obsáhujúcou umrtvené baktérie Escherichia coli, obsahujúce pilusový antigém K 88, připadne enterotoxín. Iným sposobom je imunizácia matiek přeď pórodom parenterálnou cestou celulámou, alebo subcelulámou vakcínou,, obsahujúcou budí celé umrtvené enteropatogénne baktérie Escherichia coli, alebo izolovaný pilusový antigénK 88, či kombináciou oboch. Perorálna vakcína má viacero nevýhod· Vyžaduje neustálo zaraďovanie nových a nových kmeňov do výroby a denné manuálně podávánie vakcíny ciciakom, ktorých je niekoíko tisíc a tak značme sVažuje prácu vo výkrme. Pareuterálne, celulárne, alebo subcelulárne vakcíny imunizujú matku a ciciak po marodění sa s mledzivom dostává protilátky proti am&igénu K 88. Doteraz vyráběné pareuterálne

231 143 vakcíny boli připravované velmi náročnými a drahými apésobmi, vyžadujúcimi ni ekolko stupňové izolácie kyselinou octovou, alebo síranem amonným a nákladné zariadenia· ak® ultracentxúfúgy, chromatograf i cké kolony a pod.

Uvedené nedostatky v podstatnej miere odstraňuje sposob výroby subcelulámej parenterálnej látky proti neonatálnej kolienteritide a kolihnačke pr asiat padla vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom, ie sa pilusový antigén K 88 z povrchu těla enteropatagénnych baktérii Escherichia coli separuje homagenizáciou a Izoluje izoelektrickou autofokusáciou do takej, koncentrácie, že vykazuje jasnu přecipitačnú líniu pri difúzii v agare voči antiséru anti K 88 až do riedenia I : 128*

Výhodou vynálezu sá nízké výrobně náklady, jednoduchá manipulácia pri imunizácii zvierat, ktorá je jednorázová a vyžaduje iba imunizáciu matky· Vlastný sposob izolácie antigenu je jednoduchý, vylučuje trvalá obsluhu aparatury a potřeby akýchkolvek chemikálií, preto že separácia prebieha jedine v apyrogénnej sterilnej destilovanej vodě·

Příklad

Enteropatogéhne baktérie Escherichia coli £ 88⁺, nesúce pilusový antigén £ 88 sa po bežnej kultivácii, zaručujúcej produkcie uvedeného antigénu odstředí a a bakteriu bez supernatantu sa resuspenduje v 4 °C chladnej sterilnej destilovanej vodě pomocou homogenizóra 5 až 10 min pri 3 000 1/min a teploto 4 °C· Tak nastane odseparavanie pilusav obsahujúcich antigén £ 88. Potom sa homogenát odstředí pri 70 000 m»s~² po dobu 20 min a pri teploto 4 °C> Supernatant, ktorého vodivost sa

231 143

- 3 — upraví na hodnoty do 800^uS přidáním sterilnej destilovanej vody» alebo dalším přidáním antigénu K 88, sa aplikuje do horizontálněj izoelektrofokusačnej velkokapacitnej aparatúry s mechanicky stabilizovaným deleným roztokom* Do aparatúry sa aplikuje jednosměrný elektrický prúd maximálně 3 VA a roztok fokusuje pri teplote 4 °C kým prúd neklesne pod 3 mA pri napatí 1 000 V· Po fokusacil sa zmeria vo všetkých priehrádkách aparatúry pH. Pilusový antigéa K 88 fokusuje k pBL

4,2 až 5,0 automaticky· Z priehradok s pHv tomto: rozmedzí sa zhromažďuje fimbriálny pilusový antigén K 88· Jého pH sa upraví na 7 až 7,5 a koncentrácia sa upraví tak, aby vykazovali pri sledovaní precipitácie v agare jasnú precipitaěnú líniu voči anti séru anti £ 88 až. do riedenia 1 : 128· Po dosiahnutí tejto koncentrácia sa k roztoku antigénu přidá vhodné adjuvans, napr· olejové a podává sa parenterálne injekčne v dávke 2 až 3 ml podkožně alebo int rámu skul áme prašným prasniciam asi 6 týždňov před porodom. Táto dávka a doba postačujú k tomu» aby sa u mat lek vytvořili protilátky voči £ 88 antigénu a po napití mleďziva sa preniesli do ěriev movorodencov· Tieto protilátky zabranujú enteropatogénnym baktériám Escherichia coli £ 88* adherovať sa na črevnn stenu a tým sposobovať kolienteritídu a kolihnačku.

Vynález može nájsť široké praktické využitie v živočišnéj výrobě vo velkochovech ©šípaných, kde podstatné prispieva k zniževaniu úhynu novorodencov z titulu kollenteritíd a kolihnačiek·

Claims (1)

1. Sposob výroby sufcceluláme j paren&erálnej JLátky proti neonatálnej kolleateritíde a kolihaačke praeiat vyznačujúci sa tým* že sa pilusový aafcigén K 88 z povrchu těla entero— patogénnych baktérii Escherichia coli separuje homogeniatáciou a izoluje izeelektrickou autoďokusáciou de takej koncentrácie, že vykazuje jasnu precipitačmi líniu pri difúadi v agare veči aatiséru auti K 88 až de riedenia 1 : 128·