CS240345B1 - Sposob izolácie antibiotika tylozínu - Google Patents

Abstract

Vynález rieši sposob izolácie antibiotika tylozínu z filtrátu fermentačnej pódy po skončení kultivácie produkčného kmeňa Streptomyces fradiae, alebo z iných vodných roztokov tylozínu, ktorý sa vyznačuje tým, že sa filtrát fermentačnej pódy, alebo iný vodný roztok tylozínu extrahuje butylacetátom, ktorý obsahuje 1 až 30 % obj. vo· vodě obmedzene rozpustného iného organického rozpúšťadla, s výhodou butanolu, z ktorého sa tylozín vyzráža ako sol', napr. acetonovým roztokom kyseliny vínnej. Získaný tylozín-tertarát sa priamo móže použit na přípravu liečebných prípravkov, alebo sa prevedie známými postupmi na tylozín-bázu, ktorá sa používá na přípravu injekci!.

Description

Vynález rieši sposob izolácie antibiotika tylozínu z filtrátu fermentačnej půdy, po skončení kultivácie produkčného kmeňa Streptomyces fradiae, alebo z iných vodných roztokov tylozínu.

Tylozín je makrolidové antibiotikum, sumárneho vzorca C45H77NO17. Má slabo bázický charakter, vo vodě je málo rozpustný, dobré rozpustný jie v polárných a semipolárnych organických rozpúšťadlách a nerozpustný v nepolárných rozpúšťadlách, a ko je hexán, či petroléter. Vodné roztoky tylozínu sú stále v rozmedzí pH 5,5 a 8,5. Kyslou hydrolýzou sa tylozín rozkládá na biologicky obdobné účinný dezmykozín.

S kyselinami tvoří tylozín soli dobré rozpustné vo vodě a v polárných organických rozpúšťadlách.

Tylozín je antibiotikum používané vo veterinárnej praxi, najma na potlačenie infekcií vyvolaných gram-pozitívnymi baktériami a mykoplazmózami (Ose E. E.: J. Am. Vet. A. 137, 421—423, 1980). Samotný tylozín sa využívá obzvlášť pri liečbe dyzentérií a pneumónií hospodářských zvierat (Curtíns R, A.: Canad. Vet. J. 3, 285—288, 1962; Doornebal H.: Canad. J. Comp. Med. Sci. 29, 179—182, 1965; Schovánek V.: Veterinářství 25, 505—507, 1975). Široko sú využívané aj kombinácie tylozínu s inými antibakteriálne posobiacimi látkami, ako sú sulfonamidy (Ose E. E.: Vet. Med. Smáli Anim. Clin. 68, 539—543, 1975; Reichel, F.: Biol. Chem. Výž. Zvířat 10, 343—350, 1974), furazolidínom (US 3, 690, 869), colistinom (Ger. offen 2, 327, 392), ako aj s inertnými přísadami ako síranom sodným (US 3, 932, 995 j, polyoxyetylénestermi (Brit. 1, 219, 785), alebo s močovinou (Ger. offen 1, 812, 471). Na přípravu liečebných prípravkov sa využívá buď tylozín vo formě bázy, alebo vo formě solí, ako je tartarát, chlorid, fosfát alebo síran (Bruszewski W.: Now. Wet. 6, 349—352, 1972). V krmných zmesiach sa tiež využívá technický tylozín, připravený vysušením fermentačnej pody (Dvořák, J., Straková, J^, Ševčík, B.: Biol. Chem. Vet. 18, 77—78, 1982).

Doposíal' sa tylozín izoloval z fermentačnej pody tak, že sa odfiltrovalo mycélium, filtrát sa extrahoval chloroformem a po oddestilovaní chloroformu za zníženého tlaku sa z olejovitého zvyšku tylozín vyzrážal hexánom, alebo petroléterom (US 3, 178, 341). Takto připravený tylozín bolo nutné před dalším použitím rekryštalizovať, alebo previesť na sol’, ako například tartarát, z ktorého sa připravila báza čistého tylozínu (Hamill R. L.: Antib. and Chemother. 11, 328—334, 1961). Preparát tylozínu o obsahu 40 % účinnej látky je možné připravit vysolením tylozínu z deproteinizovaného filtrátu fermentačnej pody, alebo extrakciou tylozínu alkoholmi z vysprayovanej fermentačnej půdy, napr. 90 % propanolom (Aut. osv. č. 197 600). Tylozín podobnej čistoty je možné získat tiež azeotropickým oddestilovaním vody z filtrátu fermentačnej pody například s n-hexylaíkoholom (Ger. offen 2, 054, 085). Tylozín vo formě tylozín tartarátu je možné připravit o vysokej čistotě extrakciou tylozínu z filtrátu fermentačnej pody extrakciou do butylacetátu (AO č. 231 279). Nevýhodou tohoto postupu je nutnost volit viacnásobnú extrakciu filtrátu, nakolko pri jednostupňovej extrakci! butylacetátom sa tylozín vyextrahuje s malým výťažkom. Pri extrakcii Ί 000 ml filtrátu fermentačnej pody 200 ml butylacetátu pri pH 9,0 a teplote 25 °C sa vyextrahuje do organické] fázy len cca 53 % tylozínu. S vyšším výťažkom možno tylozín vyextrahovat zmesou chloroform-etylacetát, ale vzhíadom na toxicitu chloroformu je využitelnost tejto metody v priemyselnom meradle značné obmedzená.

Bolo zistené, že tylozín je možné získat vo vysokej čistotě a výtažku z filtrátu fermentačnej pody, alebo z iných vodných roztokov, ako je napr. vodný roztok technického tylozín-fosfátu, sposobom podía vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom, že sa filtrát fermentačnej pody, alebo iný vodný roztok tylozínu extrahuje butylacetátom, ktorý obsahuje 1 až 30% obj. vo vodě obmedzene rozpustného alkoholu, akým je například amylalkohol, izoamylalkohol, izobutylalkohol, benzylalkohol (s výhodou 10 % obj. butanolu) alebo ketonu, ako je napr. metylizobutylkeíón, metyletylketón a pod. Výhodou tohto postupu je, že stačí jednostupňová extrakcia tylozínu týmto postupom, aby sa tylozín vyextrahoval vo vysokom výtažku. Pri extrakcii 1 000 ml filtrátu fermentačnej pody 180 ml butylacetátu a 20 ml benzylalkoholu pri pH — 9,0 a teplota 20 °C sa vyextrahuje do organické} fázy 91 % tylozínu.

Takto získané extrakty tylozínu na rozdiel od chloroformových extraktov možno priamo zrážať acetonovým roztokom kyseliny, napr. 1 % hmot. obj. roztokom kyseliny vínnej, čím sa získá dobré kryštalizujúca sol — tylozín tartarát. Tento sa može buď priamo využit na přípravu liečebných prípravkov, alebo sa prevedie běžnými postupmi na tylozín — bázu. Výhodou tohto postupu je, že tylozín sa získá vo vysokom výtažku a čistotě z filtrátu fermentačnej pody za použitia netoxických a fahko sa regenerujúcich rozpúšťadiel.

Nasledujúci příklad prevedenia spĎsob podía vynálezu len dokládá, ale nijako neobmedzuje.

K 500 ml filtrátu fermentačnej pody o účinnosti 7 630 jug/ml sa přidá 100 ml butylacetátu a 25 ml butanolu. Zmes sa za intenzívneho miešania upraví roztokom hydroxidu sodného na pH — 9,0 a nechá sa 15 minút miešať. Po tomto čase sa organická vrstva oddělí, čím sa získá 125 ml organickej fázy s účinnosťou 27 750 ,ug/ml čo je 91 pere. výťažnosť extrakcie. Získaný organický extrakt potom po kvapkách přidáváme do 300 ml acetonu, v ktorom bolo rozpuštěné 3,5 g kyseliny vínnej. Po hodině intenzívneho miešania po přidaní celého množstva organického extraktu sa vylúčený tylozín tartarát odfiltruje, premyje 30 ml acetonu a vysuší volné na vzduchu pri laboratórnej teplote, čím sa získá 4,1 g tylozín tartarátu o účinnosti 850 m. j./mg, čo je 86% výťažnosť, počítané na filtrát fermentačnej půdy.

Claims (1)

1. Sposob izolácie antibiotika tylozínu z filtrátu fermentačnej pódy po skončení kultivácie produkčného kmeňa Streptomyces fradiae, alebo z iných vodných roztokov tylozínu, vyznačený tým, že sa filtrát fermentačnej půdy, alebo iný vodný roztok tylozínu extrahuje butylacetátom, ktorý obsahuje

   VYNALEZU

   1 až 30 % obj. vo vodě obmedzene rozpustného organického rozpúštadla, s výhodou butanolu a z extraktu sa tylozín vyzráža ako sol' acetonovým roztokom kyseliny, s výhodou 1 % hmot. obj. roztokom kyseliny vínnej v acetone.