CS251533B1

CS251533B1 - Microorganism strain Aspergillus tamarii CCM F-780

Info

Publication number: CS251533B1
Application number: CS855510A
Authority: CS
Inventors: Jozef Dobias; Julius Brtko; Jaroslav Sadlon; Stefan Balint
Original assignee: Jozef Dobias; Julius Brtko; Jaroslav Sadlon; Stefan Balint
Priority date: 1985-07-26
Filing date: 1985-07-26
Publication date: 1987-07-16
Also published as: CS551085A1

Abstract

Riešenie sa 'týká nového 'kmeňa Aspergillus tamarii CCM F-780, ktorý produkuje kyselinu ikójovú vo zvýšenom výťažku. Podstata šlachtenia a získania nového 'kmeňa spočívá v tom, že na suspenziu spor Aspergillus tamarii o koncentrácii 106/ml v dimetyisulfoxide sa působí χ-lúčmi pri laboratorně) teplote po dobu 25 až 35 minut, pričom sa izolujú získané muitanty štandardnými selekčnými metódami.The solution concerns a new strain of Aspergillus tamarii CCM F-780, which produces ikojic acid in increased yield. The essence of breeding and obtaining a new strain is that a suspension of Aspergillus tamarii spores with a concentration of 106/ml in dimethylsulfoxide is treated with χ-rays at laboratory temperature for 25 to 35 minutes, while the obtained mutants are isolated by standard selection methods.

Description

Vynález sa týká nového kmeňa Aspergillus tamarii mutant III, ktorý produkuje kyselinu kójovú vo zivýšeňom výtažku,The present invention relates to a novel strain of Aspergillus tamarii mutant III, which produces kojic acid in an extract,

Kmeň Aspergillus tamarii sa popisuje alko producent kyseliny kójovej už dávnejšie, avšak bez udania množstva produkoivamej kyseliny [Korzyhski, T., Kotwszyk — Gindifer, Z. Kurylojwicz, W.: Antibiotics, PWN — — Polish Scientific Pulblishers, Warszawa, (1967)].The Aspergillus tamarii strain has been described by an alcoholic producer of kojic acid for a long time, but without indicating the amount of productive acid [Korzyhski, T., Kotwszyk - Gindifer, Z. .

Podfa literárnej rešerše kmeň Aspergillus tamarii sa na priemyslovú výrobu kyseliny kójovej nepoužívá. Katalogy kultur húh (Cataloque of Cultures, Univerzita Karlova, Praha 1976, č. 664 Aspergillus tamarii Kita; ATCC Cataloque of Fungi) Yeasts, 16-th edition, 1984 čísla 1 005, 10 836, 12 699, 16 865, 20 054, 26 950, 26 951 Aspergillus 'tamarii Kita) uvádzajú druh Aspergillus tamarii bez vlastnosti produkovat kyselinu kójovú. U nás nie sú k dispozícii vysokoiprodukčné kmene húb, ktoré sú schopné vybvárať kyselinu kójovú.According to a literature search, the Aspergillus tamarii strain is not used for industrial production of cubic acid. Catalogs of the cultures of húhu (Cataloque of Cultures, Charles University, Prague 1976, No. 664 Aspergillus tamarii Kita; ATCC Cataloque of Fungi) Yeasts, 16-th edition, 1984 issues 1 005, 10 836, 12 699, 16 865, 20 054, 26,950, 26,951 Aspergillus' tamarii Kita) disclose a species of Aspergillus tamarii without the ability to produce kojic acid. We do not have high-producing strains of fungi that are capable of picking up kojic acid.

Uvedené nedostatky doteraz známých kmeňov odstraňuje vynález, ktorý je nový kmeň mikroorganizmu Aspergillus tamarii mutant III uložený v Československej zbierke mikroorganizmov Univerzity J. E. Purkyně v Brňe, Třída Obránců míru 10, pod označením CCM F-780. Nový kmeň sa získal tak, že na suspenziu spor Aspergillus tamarii o koncentrácii 10⁶/ml v 10 %-nom dimetylsulf oxide sa .působilo χ-lúčmi po dobu 25 až 35 minut, suspeinzia spor sa rozliala na sladinkový agar a nechala vysporulovat pri teplote 25 až 30 °C, z vysporulovanej ikultúry sa připravila suspenzia spór, ktorá sa rledila 1:1 000, rozliala na sladinkový agar, 'kde vyrástli kolonie kultury mikroorganizmu, ktoré sa hodnotili fermentačnými skúškami z hladislka produkcie kyseliny kójovej a z nich bol vybraný kmeň Aspergillus tamarii mutant III.These deficiencies of the previously known strains are overcome by the invention which is a new strain of the microorganism Aspergillus tamarii mutant III deposited in the Czechoslovak Collection of Microorganisms of the University of JE Purkyně in Brno, Class Defender of Peace 10 under the designation CCM F-780. A new strain was obtained by treating the suspension of 10 ⁶ / ml Aspergillus tamarii spores in 10% dimethylsulfoxide by χ-rays for 25 to 35 minutes, spilling the suspeinzia spores onto a sweetening agar and allowing it to sporulate at temperature. 25 to 30 ° C, a spore suspension was prepared from the spore culture, which was diluted 1: 1000, spilled onto malt agar, where microorganism culture colonies were grown, which were evaluated by fermentation tests for the production of kojic acid and the Aspergillus strain selected therefrom. mutant III.

Hlavnou výhodou nového kmeňa je zvýšená produktivita, ktorá dosahuje hodnoty 33 kg kyseliny kójovej na 100 'kg cukru. Póvodný kmeň Aspergillus tamarii mal maximálnu produkeiu kyseliny kójovej 15 až 18 Ikg na 100 kg cukru. Tento kmeň na Sabouraudovej pode za 3 dni vytvára kolonie o priemere 2,6 cm, vrchná strana je biela so silnou sporuláclou v střede kolonie. Spodná strana je slabo oranžová. Slpóry sú tmavohnedej farby 7 až 8 μιη v priemere, vezikulum výrazné gulaté v priemere 44 až 48 ,um.The main advantage of the new strain is the increased productivity, which reaches 33 kg of kojic acid per 100 kg of sugar. The original Aspergillus tamarii strain had a maximum kojic acid production of 15-18 kg / 100 kg of sugar. This strain on the Sabouraud pod in 3 days forms colonies with a diameter of 2.6 cm, the top side is white with a strong sporulate in the middle of the colony. The underside is faintly orange. The spores are dark brown in color from 7 to 8 μιη in diameter, the vesicle is distinctly round in diameter from 44 to 48 µm.

Nový kmeň Aspergillus tamarii mhtant III dohře rastie na Sabouraudovej agarovej pode. Za 3 dinl vytvára kolonie o priemere 3 cm, 'vrchná strana je biela v střede slabo aporuluje. Spodná strana je oranžovohnedá a hladká. Na sladinkovom agare vytvára za 3 dni kolonie o priemere 4 cm bez sporulácie, vrchná strana je biela, spodná strana je radiálně zvrásnená a oranžověj farby. Sporúlácia na sladikovom agare sa objavuje po 5 dňoch kultivácie. Spory sú tmavohnedej farby, 7 až 8 μΐη v priemere, vezikulum výrazné gulaté p priemere 46 až 50 /xm. Životnost spór je díhodobá pri skladovaní v suspenzli s aktívnym uhlím, v parafínovém oleji, alebo v lyofilizovanom stave aj nie kolik o rokov.The new Aspergillus tamarii mhtant III strain grows on Sabouraud's agar pod. For 3 dinl, it forms colonies with a diameter of 3 cm, the top side is white in the center slightly faint. The underside is orange-brown and smooth. On malt agar it forms colonies with a diameter of 4 cm without sporulation in 3 days, the top side is white, the bottom side is radially creased and orange in color. Sporulation on malt agar occurs after 5 days of cultivation. The spores are dark brown in color, 7 to 8 μ vη in diameter, the vesicle is a distinct spherical p with a diameter of 46 to 50 µm. The spores have a long life span of up to several years when stored in activated carbon suspension, in paraffin oil, or in lyophilized state.

Příklad 1'Example 1 '

Na susipenziu spór Aspergillus tamarii o koncentrácii 10⁶/ml v 10 %-nom dimetylsulfoxide sa působí χ-lúčmi zo zdroja ⁶⁰CO po dobu 25 až 35 minut. Suspenzia spór sa potom rozleje na sladinkový agar a nechá vysporulovaf v termostate pri teplote 25 až 30 °C. Z vysporulovanej kultury sa připraví suspenzia spór v 0,9 %-nom chloride sodnom, ktorá sa riedi 1 : 1 000 a rozleje na sladinkový agar, kde za 3 až 4 dní vyrastú kolonie kultury mikroorganizmu, ktoré sa hodinotia fermentačnými skúškami na produkeiu kyseliny kójovej a z nich sa vybral kmeň AspergilHus tamarii mutant III.Spore suspension of 10 ⁶ / ml Aspergillus tamarii in 10% dimethylsulfoxide is treated with χ-rays from a ⁶⁰ CO source for 25-35 minutes. The spore suspension is then poured onto the wort agar and allowed to spore in a thermostate at 25-30 ° C. A spore suspension in 0.9% sodium chloride is prepared from the sporulated culture, diluted 1: 1000 and poured onto a sweetening agar, where colonies of a microorganism culture are grown in 3-4 days, which are evaluated by fermentation tests for the production of kojic acid. and AspergilHus tamarii mutant III was selected.

Příklad 2Example 2

Připraví sa kultivačně médium, na 1 liter sa použije 100 g glukózy, 0,16 g dihydrofosforečnann draselného, 0,07 g chloridu sodného, 0,02 g tetrahydrátu síranu manganatého, 1 g močoviny, 1 g chloridu amonného, 0,01 g heptahydrátu síranu zinočnatého a 0,01 g heptahyídrátu síranu železnatého. Sterilné kultivačně médium o pH 5,0 až 6,5 v 5 1 fermentačnom tanku sa zaočkuje s 10 % obj. 48 hodinového vegetatívneho inOkula Aspergillus tamarii mutant III a kultivuje pri teplote 30 °C, pri obvodové,j rýchlosti 3,1 ms^_1 a vzdušnění 3 VVM po dobu 7 až 8 dní. V priebehu fermentácie sa vytvára v médiu 33 g/1 kyseliny kójovej.Culture medium is prepared, using 100 g of glucose, 0.16 g of potassium dihydrogen phosphate, 0.07 g of sodium chloride, 0.02 g of manganese sulfate tetrahydrate, 1 g of urea, 1 g of ammonium chloride, 0.01 g of heptahydrate per liter. zinc sulfate and 0.01 g of ferrous sulfate heptahydrate. A sterile culture medium of pH 5.0 to 6.5 in a 5 L fermentation tank is seeded with 10% v / v. 48 hour vegetative inoculum of the mutant Aspergillus tamarii III and incubated at 30 ° C, the circumferential, speed of 3.1 m with j ¹ and the three VVM aeration for 7 to 8 days. During fermentation, 33 g / l of kojic acid is formed in the medium.

P r í k 1 a d 3EXAMPLE 1 a d 3

Izolovaný kmeň má tú vlastnost, že jeho mycélium po oddělení od fermentačnej tekutiny je možné použít niekorkokrát za sebou na fermeotačnú přípravu kyseliny kójovej. Připraví sa roztok 130 g glukózy v 1 1 0,1 M fosfátového tlmivého roztoku o pH 6,0. Sterilný roztok v 5 1 fermentačnom tanku sa zmiešal s mycéliom, ktoré sa získalo separováním od fermentačného média po skončené) fermentácii popísanej v příklade 2. Podmienky fermentácie sú také isté ako v příklade 2. Po 5 až 6’ dňoch kultivácie sa v médiu vytvára 19 až 21 g/1 kyseliny kójovej.The isolated strain has the property that its mycelium after separation from the fermentation fluid can be used several times in succession for the fermeotation preparation of kojic acid. A solution of 130 g glucose in 1 L of 0.1 M phosphate buffer pH 6.0 was prepared. The sterile solution in a 5 L fermentation tank was mixed with the mycelium obtained by separation from the fermentation medium after the end of the fermentation described in Example 2. The fermentation conditions are the same as in Example 2. After 5 to 6 days of cultivation, the medium is formed. up to 21 g / l of kojic acid.

Kmeň Aspergillus tamarii mutant III může sa využit pri fermentačnej výrobě kyseliny kójovej, ktorá slúži ako surovina pre chemický, potravinářsky a farmaceutický priemysel.The Aspergillus tamarii mutant III strain can be used in the fermentative production of kojic acid, which serves as a raw material for the chemical, food and pharmaceutical industries.

Claims

; R Ε D Μ Ε Τ INVENTION

Aspergillus tamarii strain CCM F-780 producing icic acid