CS252037B1 - Bivalentná inaktivovaná oňkovacia látka proti červienke a infekčněj aírofickej rinitíde ošípaných - Google Patents

Description

252037

Vynález sa týká bivalentnej inaktivovane]očkovacej látky z bakteriálnych zárodkovdruhu Erysipelothrix insidiosa a Bordetellabronchiseptica, ktorú je možné použit preúčely specifické] profylaxie červienky oší-paných a pre vytvorenie vysokého titra spe-cifických aglutinujúcich sérových a kolo-strálnych protilátok u prasnic proti borde-telovým antigénom, ktoré cestou kolostrál-neho transferu vytvárajú u ciciakov v ran-nom postnatálnom období pasivný imunit-ný stav proti infekčně] atroficke] rinitíde. V súčasnosti sa k imunoprofylaxii červien-ky ošípaných používá purifikovaná červien-ková adsorbátová vakcína, technologickypřipravovaná podlá československého paten-tu číslo' 148 091, ktorá vytvára vysoký stu-peň specifické] chránenosti bez vedlajšíchalergizujúcich účinkov u očkovancov. Vak-cína Je aplikovaná v dávke 2 ml dvakrátročně s tým, že u vysokogravidných pranicmusí byť podaná najneskor 14 dní před oča-kávaným pórodom. K imunoprofylaxii infekčně] atroficke] ri-nitídy ošípaných sa v súčasnosti používá in-aktivovaná adsorbátová vakcína technolo-gicky připravovaná pudla čs. autorskéhoosvedčenia číslo 209 351. Vakcína sa apli-kuje prasniciam v druhé] polovici gravidi-ty vždy s odstupom 14 dní dávkami 10 ml.Druhá dávka musí byť podaná najneskoršie14 dní před očakávaným pórodom. Pri do-držaní uvedeného imunizačného postupu do-chádza u prasnic popři tvorbě sérových pro-tilátok k syntéze a produkcii specifickýchsekretorických protilátok, ktoré sú akumu-lované v kolostre. Poporodný transfer imún-neho kolostra z prasnice na ciciaka zabez-pečuje o novorodencov pasivné vytvoreniestavu špecifickej chránenosti v najkritickej-šom období z hladiska etiopatogenézy toho-to infekčného ochorenia. V súčasnosti realizovaná imunizačná sché-ma proti uvedeným infekčným ochoreniamje prevádzkovo-technicky a časové velmi ná-ročná. Představuje vel'ké zaťaženie pre pra-covníkov veterinárně] služby a ošetřovate-lův zvierat, hlavně v podmienkach vel'ko-chovov, pri vysokom stupni mechanizácie amalom počte pracovníkův. Opakovanými vak-cinačnými zákrokmi sú zvieratá vystavenéstresovým záfažiam, čo má za následok zní-ženie ich úžitkovosti. Možné zjednodušenieimunizačnej schémy znamená zníženie vak-cinačných zákrokov, technologická úsporubiopreparátov, čosu a námahy vynaložené]na ich realizáciu. Toto je možné dosiahnuťtechnologickou přípravou a zaradováním doimunizačne] schémy bivalentnú vakcínu.

Podlá námi uskutočnených pokusov bolodokázané, že jednotlivé inaktivované adsor-bátové antigény připravené z mikroorganiz-mov Erysipelothrix insidiosa ia Bordetellabronchiseptica v presne stanovenom pomě-re posobia po parenterálnej aplikácii ošípa-ných vzájomne imunostimulačne. Tento po-měr je přísné Specifický, nakolko pri expe- rimentálnom ověřovaní iných pomerov ne-bol vzájomný imunostimulačný účinok do-siahnutý.

Podstatou riešeňia je teda inaktivovanáočkovacia látka, ktorá obsahuje 40 obj. %bakterínu Erysipelothrix insidiosa pri vý-sledné] koncentrácii inaktivovaných mikro-organizmov 1 až 4 x 101(J bakteriálnych tielv 1 ml a 60 obj. % bakterínu Bordetellabronchiseptica pri výsledné] koncentráciiinaktivovaných mikroorganizmov 1 až 4 xx 1010 bakteriálnych tiel v 1 ml. Ďalej sme dokázali, že technologickýmvyužitím experimentálně ověřeného imuno-stimulačného efektu pri uvedených dvochdruhoch mikroorganizmov je možné připra-vit bivalentnú vakcínu, ktorá má kvalitativ-ně vyššie parametre ako jednotlivé mono-vakcíny. Praktickým dosledkom uvedenejskutočnosti je, že podstatné nižšia dávka 5mililitrov bivalentnej vakcíny je schopná vy-volat u očkovaných ošípaných vyšší stupeňšpecifickej schránenosti, ako sú schopnéjednotlivé monuvakcíny. Dávky týchto mo-novakcín sú uvedené na straně 1 odstavca2 a 3. Vyšší stupeň špecifickej chránenostiproti infekčnej atrofickej rinitíde dokumen-tuje skutočnosť, že priemerný titer agluti-načných protilátok dosahuje hodnoty 1 : 640pri monovakcíne. Pri použití námi priprave-nej bivalentnej vakcíny bol dosiahnutý ti-ter sérových aglutinačných protilátok 1 :: 640 až 1: 1 280 a kolostrálnych protilátok1 : 1 280 až 1 : 2 560. Přínos tohoto vynálezu spočívá v tom, žesa nahradzujú dve monovalentné vakcíny spotřebou vždy dvojitej aplikácie, vcelku šty-ri podania jednou bivalentnou vakcínou sdvojrázovou aplikáciou. Tým dojde k pod-statnému zníženiu imunoprofylaktických zá-krokov v kategorii chovných ošípaných a kzníženiu aplikačnej dávky bivalentnej vak-cíny celkove na 5 ml, za dosiahnutie vyššejšpecifickej chránenosti ošípaných proti u-vedeným infekčným ochoreniam. Popři uve-dených výhodách sa využitie tohoto vynále-zu prejaví v znížení výrobných nákladov voblasti obalového a adjustačného materiáluo 60 až 70 °/o. Příklad

Bakteriálna masa z jednodlivých druhov mik-roorganizmov je technologicky připravovanásamostatné. 1.

Submerzná kultivácia mikroorganizmu Ery-sipelothrix insidiosa K sterilnému sójovému živnému médiu(představuje roztok aminokyselin získanýenzymatickou hydrolýzou delipidizovanej só-jovej múky, ktorý obsahuje 350 mg % cel-kového dusíka, 150 mg % amínodusíka a0,4 g/100 ml chloridu sodného], ktoré je vy-

Claims (2)

1. 252037 temperované na 37 °C sa za aseptických pod-mienok přidá 1 obj. % albumínovej frakcie(albumínová frakcia krvného séra, aleboplazmy ošípaných), 1,2 obj. % 40 %-néhoroztoku glukózy a 0,2 obj. % vodného roz-toku polyoxyetylén sorbitan monooleátu(Tween 80). Takto připravené produkčněmédium inokulujeme subkultúrou v nmožstve 2 obj. °/o. Subkultúra musí obsahovat v 1 ml 3 až 7 x 108 živých mikroorganizmov. Kul-tivácia prebieha při 36 °C za stálého mieša-nia pri 170 až 360 ot/min a aerácia steril-ným vzduchom 3 až 4 1/min privádzaným napovrch média nepřetržíte po celú dobu kul-tivácie. pH je udržiavané na hodnotu 7,8.Kultivuje sa až do poklesu priepustnosti na12 až 8 % (meranej na spektrofotometr! pro-ti referenčnej vzorke pri 575 nm), najdlhšievšak 15 hodin. Po ukončení kultivácie sabakteriálna kultúra inaktivuje 5 %-nýmvodným roztokom formalínu v pomere 100mililitrov na 1 liter kultúry. Po inaktiváciisa bakteriálna masa koncentruje prietoko-vou centrifugáciou tak, aby výsledná kon-centrácia mikroorganizmov bola 1 až 4 xx 1010 v 1 ml. 2. Submerzná kultivácia mikroorganizmu Bor-detella bronchiseptica K sterilnému sójovému živnému médiu(představuje roztok aminokyselin získanýenzymatickou hydrolýzou delipidizovanejsójovej múky, ktorý obsahuje 350 mg % cel-kového dusíku, 150 mg % amínodusíka a0,4 g/100 ml chloridu sodného) sa za asep-tických podmienok přidá 0 8 % hmot. pří-pravku Bacto Casamino, acids (firemný ná-zov pre zmes aminokyselin získaných kys-lou hydrolýzou kazeinu, obsahujúceho 10obj. % celkového dusíka, 14 obj. % chlori-du sodného·, 15 obj. % popola a 2 obj. %oxidu fosforičitého), 0,08 % hmot. příprav-ku Yeast extract (firemný názov pre vodnýroztok čerstvých autolyzovaných kvasnic)a 0,01 obj. % albumínovej frakcie (albunri-nová frakcia krvného séra alebo plazmy oší-paných). Do· takto připraveného produkčné-ho média sa inokuluje subkultúra v množ-stve .1.0 obj. %. Subkultúra musí obsahovat v 1 ml 2 až 5 x 107 živých mikroorganizmov. Kultiváciaprebieha pri 36 až 37 °G za stálého mieša-nia pri 170 ot/min a přívode sterilného vzdu-chu 7 1/min nepřetržíte počas celej kultivá-cie. pH je udržiavané na hodnotě 7,6. Pripoklese priepustnosti na 50 % (meranej naSpekole proti referenčnej vzorke pri 575nm) sa kultivácia ukončí. DÍžka kultivácieje 20 až 36 hodin. Po ukončení kultiváciesa bakteriálna kultúra inaktivuje 5 %-nýmvodným roztokom formalínu v pomere 4 %k objemu kultúry. Následné je bakteriálnamasa koncentrovaná prietokovou centrifu-gáciou tak, aby výsledná koncentrácia mik-roorganizmov bola 1 až 4 x 101() v 1 ml. Inaktivované koncentrované bakteriálněmasy sú následné egalizované v pomere 40percent objemových bakterínu mikroorga-nizmu Erysipelothrix insidiosa a 60 % obje-mových bakterínu mikroorganizmu Borde-tella bronchiseptica. Takto připravený zmes-ný bakterín je naadsorbovaný na gél hydro-xidu hlinitého do výsledného obsahu hliní-ka max. 8 g/1’1. Bivalentná inaktivovaná vakcína je vyho-vujúca, ak je prostá bakteriálnej a pliesňo-vej kontaminácie. Je neškodná, ak po pod-kožnej aplikácii 0,5 ml bivalentnej vakcínyneuhynie v pozorovacej době 7 dní od poda-nia ani jedna zo súboru očkovaných myší. Imunogénna hodnota vakcíny je testova-ná na ošípaných tak, že skupině ošípanýchje podkožně podaná dávka 2 x 5 ml biva-lentnej vakcíny v odstupe 14 dní. Za 14 dníaž 21 dní po revakcinácii je u imunizova-nej skupiny testovaný imunitný stav vočičervienke ošípaných formou vnútrokožnejinfekcie s kožno-vlrulentnými kmeňmi Ery-sipelothrix insidiosa. Voči antigénnej zložkemikroorganizmu Bordetella bronchisepticasú imunizované ošípané testované sérologic-ky, stanovením výšky titra specifických ag-lutinujúcich protilátek. Vakcína má dobrú imunogénnu hodnotu,ak po vnútrokožnej infekcii za 48 až 72 ho-din neochorie ani jedna z imunizovanýchošípaných kožnou formou červienky, ani ne-dojde k celkovej termickej reakcii nad 40 °Ca vyvolá titer špecifických aglutinujúcichprotilátok voči antigénom Bordetella bron-chiseptica v rozsahu 1 : 641) až 1: 1 280 vsére a 1 : 1 280 až 1:2 560 v kolostre. PREDMET

   1. Bivalentná inaktivovaná očkovacia lát-ka proti červienke a infekčnej atrofickej ri-nitíde ošípaných, vyznačujúca sa tým, že ob-sahuje 40 obj. % bakterínu Erysipelothrixinsidiosa pri výslednej koncentrácii inakti-vovaných mikroorganizmov 1 až 4 x 1010bakteriálnych tiel v 1 ml a 60 obj. bakterí-nu Bordetella bronchiseptica pri výslednej YNÁLEZU koncentrácii inaktivovaných mikroorganiz-mov 1 až 4 x 1O10 bakteriálnych tiel v 1 ml.
2. 2. Bivalentná inaktivovaná očkovacia lát-ka podlá bodu 1, vyznačujúca sa tým, žezmesný bakterín je naadsorbovaný na gélhydroxidu hlinitého do výsledného obsahuhliníka 6 až 10 g/i, s výhodou 8 g/1.