CS252037B1 - Bivalentná inaktivovaná oňkovacia látka proti červienke a infekčněj aírofickej rinitíde ošípaných - Google Patents

Abstract

Riešenie sa týká přípravy inaktivovanej cčkovacej látky, ktorú je možné použh' pre špecifickú profylaxiu červienky ošípaných a pre vytvorenie vysokého titra specifických aglutinačných sérových a kolostrálnych protilátek u prasnic proti bordetelovým antigénom, které cestou kolostrálneho transferu vytvárajú u ciciakov stav pasívnej chránenosti v rannom postnatálnom období. Bivalentná vakcína obsahuje 40 obj. % bakterínu Erysipelothrix insidiosa a 60 obj. % bakterínu Bordetelia bronchiseptica. Zmesný bakterín je naadsorbovaný na gél hydroxidu hlinitého do výsledného obsahu hliníka 6 až 10 g/I. Bivalentná vakcína nahradzuje v plnom rozsahu v imunoprofylaxii chovných ošípaných doteraz vyrábané a používané dve monovalentné vakcíny. Nachádza použitie v živočíšnej velkovýrobě, kde prispieva k lepšej ekonomickej efektivnosti pri výrobě bravčového masa tým, že minimalizuje počet vakcinačných zákrokov proti uvedeným infekčným ochoreniiam, znižuje aplikačnú dávku a počet stresových záťaží pri vakcinácii zvierat. Realizáciou výroby dojde u výrobců k zníženiu výrobných nákladov.

Description

(54) Bivalentná inaktivovaná oňkovacia látka proti červienke a infekčněj aírofickej rinitíde ošípaných

Riešenie sa týká přípravy inaktivovanej cčkovacej látky, ktorú je možné použh' pre špecifickú profylaxiu červienky ošípaných a pre vytvorenie vysokého titra specifických aglutinačných sérových a kolostrálnych protilátek u prasnic proti bordetelovým antigénom, které cestou kolostrálneho transferu vytvárajú u ciciakov stav pasívnej chránenosti v rannom postnatálnom období. Bivalentná vakcína obsahuje 40 obj. % bakterínu Erysipelothrix insidiosa a 60 obj. % bakterínu Bordetelia bronchiseptica. Zmesný bakterín je naadsorbovaný na gél hydroxidu hlinitého do výsledného obsahu hliníka 6 až 10 g/I. Bivalentná vakcína nahradzuje v plnom rozsahu v imunoprofylaxii chovných ošípaných doteraz vyrábané a používané dve monovalentné vakcíny.

Nachádza použitie v živočíšnej velkovýrobě, kde prispieva k lepšej ekonomickej efektivnosti pri výrobě bravčového masa tým, že minimalizuje počet vakcinačných zákrokov proti uvedeným infekčným ochoreniiam, znižuje aplikačnú dávku a počet stresových záťaží pri vakcinácii zvierat. Realizáciou výroby dojde u výrobců k zníženiu výrobných nákladov.

232037

Vynález sa týká bivalentnej inaktivovanej očkovacej látky z bakteriálnych zárodkov druhu Erysipelothrix insidiosa a Bordetella bronchiseptica, ktorú je možné použiť pre účely špecifickej profylaxie červienky osípaných a pre vytvorenie vysokého titra specifických aglutinujúcich sérových a kolostrálnych protilátok u prasnic proti bordetelovým antigénom, ktoré cestou kolostrálneho transferu vytvárajú u ciciakov v rannom postnatálnom období pasivný imunitný stav proti infekčnej atrofickej rinitíde.

V súčasnosti sa k imunoprofylaxii červienky ošípaných používá purifikovaná červienková adsorbátová vakcína, technologicky připravovaná podfa československého patentu čisto 148 091, ktorá vytvára vysoký stupeň špecifickej chránenosti bez vedfajšich alergizujúcich účinkov u očkovancov. Vakcína je aplikovaná v dávke 2 ml dvakrát ročně s tým, že u vysokogravidných pranic musí byť podaná najneskor 14 dní před očakávaným pórodom.

K imunoprofylaxii infekčnej atrofickej rinitídy ošípaných sa v súčasnosti používá inaktivovaná adsorbátová vakcína technologicky připravovaná podfa čs. autorského osvedčenia číslo 209 351. Vakcína sa aplikuje prasniciam v druhej polovici gravidity vždy s odstupom 14 dní dávkami 10 ml. Druhá dávka musí byť podaná najneskoršie 14 dni před očakávaným porodem. Pri dodržaní uvedeného imunizačného postupu dochádza u prasnic popři tvorbě sérových protilátok k syntéze a produkcii specifických sekretorických protilátok, ktoré sú akumulované v kolostre. Poporodný transfer imúnneho kolostra z prasnice na ciciaka zabezpečuje o novorodencov pasivné vytvorenie stavu špecifickej chránenosti v najkritickejšom období z hladiska etiopatogenézy tohoto infekčného ochorenia.

V súčasnosti realizovaná imunizačná schéma proti uvedeným infekčným ochoreniam je prevádzkovo-technicky a časové velmi náročná. Představuje velké zaťaženie pre pracovníkov veterinárnej služby a ošetrovate1'ov zvierat, hlavně v podmienkach velkochovov, pri vysokom stupni mechanizácie a malom počte pracovníkův. Opakovanými vakcinačnými zákrokmi sú zvieratá vystavené stresovým záfažiam, čo má za následok zníženie ich úžitkovosti. Možné zjednodušenie imunizačnej schémy znamená zníženie vakcinačných zákrokov, technologická úsporu biopreparátov, čosu a námahy vynaloženej na ich realizáciu. Toto je možné dosiahnuť technologickou přípravou a zaradováním do imunizačnej schémy bivalentnú vakcínu.

Podlá námi uskutočnených pokusov bolo dokázané, že jednotlivé inaktivované adsorbátové antigény připravené z mikroorganizmov Erysipelothrix insidiosa ia Bordetella bronchiseptica v presne stanovenom pomere posohia po parenterálnej aplikácii ošípaných vzájomne imunostimulačne. Tento poměr je přísné specifický, nakoíko pri experimentálnom ověřovaní iných pomerov nebol vzájomný imunostimulačný účinok dosiahnutý.

Podstatou riešenia je teda inaktivovaná očkovacia látka, ktorá obsahuje 40 obj. % bakterínu Erysipelothrix insidiosa pri výslednej koncentrácii inaktivovaných mikroorganizmov 1 až 4 x 10^1(J bakteriálnych tiel v 1 ml a 60 obj. % bakterínu Bordetella bronchiseptica pri výslednej koncentrácii inaktivovaných mikroorganizmov 1 až 4 x x 10¹⁰ bakteriálnych tiel v 1 ml.

Ďalej sme dokázali, že technologickým využitím experimentálně ověřeného imunostimulačného efektu pri uvedených dvoch druhoch mikroorganizmov je možné připravit bivalentnú vakcínu, ktorá má kvalitativně vyššie parametre ako jednotlivé monovakcíny. Praktickým dosledkom uvedenej skutočnosti je, že podstatné nižšia dávka 5 mililitrov bivalentnej vakcíny je schopná vyvolat u očkovaných ošípaných vyšší stupeň špecifickej schránenosti, ako sú schopné jednotlivé monovakcíny. Dávky týchto monovakcín sú uvedené na straně 1 odstavca 2 a 3. Vyšší stupeň špecifickej chránenosti proti infekčnej atrofickej rinitíde dokumentuje skutočnosť, že priemerný titer aglutinačných protilátok dosahuje hodnoty 1 : 640 pri monovakcíne. Pri použití námi pripravenej bivalentnej vakcíny bol dosiahnutý titer sérových aglutinačných protilátok 1 : : 640 až 1: 1 280 a kolostrálnych protilátok 1 : 1 280 až 1 : 2 560.

Přínos tohoto vynálezu spočívá v tom, že sa nahradzujú dve monovalentné vakcíny s potřebou vždy dvojitej aplikácie, vcelku štyri podania jednou bivalentnou vakcínou s dvojrázovou aplikáciou. Tým dojde k podstatnému zníženiu imunoprofylaktických zákrokov v kategorii chovných ošípaných a k zníženiu aplikačnej dávky bivalentnej vakcíny celkove na 5 ml, za dosiahnutie vyššej špecifickej chránenosti ošípaných proti uvedeným infekčným ochoreniam. Popři uvedených výhodách sa využitie tohoto vynálezu prejaví v znížení výrobných nákladov v oblasti obalového a adjustačného materiálu o 60 až 70 °/o.

Příklad

Bakteriálna mas-a z jednodlivých druhov mikroorganizmov je technologicky připravovaná samostatné.

1.

Submerzná kultivácia mikroorganizmu Erysipelothrix insidiosa

K sterilnému sójovému živnému médiu (představuje roztok aminokyselin získaný enzymatickou hydrolýzou delipidizovanej sójovej múky, ktorý obsahuje 350 mg % celkového dusíka, 150 mg % amínodusíka a 0,4 g/100 ml chloridu sodného], ktoré je vy252037 temperované na 37 °C sa za aseptických podmienok přidá 1 obj. % albumínovej frakcie (albumínová frakcia krvného séra, alebo plazmy ošípaných), 1,2 obj. % 40 %-ného roztoku glukózy a 0,2 obj. % vodného roztoku polyoxyetylén sorbitan monooleátu (Tween 80). Takto připravené produkčně médium inokulujeme subkultúrou v množstve obj. °/o. Subkultúra musí obsahovat v 1 ml až 7 χ 10⁸ živých mikroorganizmov. Kultivácia prebieha pri 36 °C za stálého miešania pri 170 až 360 ot/min a aerácia sterilným vzduchom 3 až 4 1/min privádzaným na povrch média nepřetržíte po celú dobu kultivácie. pH je udržiavané na hodnotu 7,8. Kultivuje sa až do poklesu priepustnosti na 12 až 8 % (meranej na spektrofotometr! proti referenčnej vzorke pri 575 nm), najdlhšie však 15 hodin. Po ukončení kultivácie sa bakteriálna kultúra inaktivuje 5 %-ným vodným roztokom formalínu v pomere 100 mililitrov na 1 liter kultúry. Po inaktivácii sa bakteriálna masa koncentruje prietokovou centrifugáciou tak, aby výsledná koncentrácia mikroorganizmov bola 1 až 4 x χ 10¹⁰ v 1 ml.

2.

Submerzná kultivácia mikroorganizmu Bordetella bronchiseptica

K sterilnému sójovému živnému médiu (představuje roztok aminokyselin získaný enzymatickou hydrolýzou delipidizovanej sójovej múky, ktorý obsahuje 350 mg % celkového dusíku, 150 mg % amínodusíka a 0,4 g/100 ml chloridu sodného) sa za aseptických podmienok přidá 0 8 % hmot. přípravku Bacto CasamiiiO' acids (firemný názov pre zmes aminokyselin získaných kyslou hydrolýzou kazeinu, obsahujúceho 10 obj. % celkového dusíka, 14 obj. % chloridu sodného, 15 obj. % popola a 2 obj. % oxidu fosforičitého), 0,08 % hmot. přípravku Yeast extract (firemný názov pre vodný roztok čerstvých autolyzovaných kvasnic) a 0,01 obj. % albumínovej frakcie (albumínoivá frakcia krvného séra alebo plazmy ošípaných). Do' takto připraveného produkčného média sa inokuluje subkultúra v množstve .1.0 obj. %.

Subkultúra musí obsahovat v 1 ml 2 až χ 10⁷ živých mikroorganizmov. Kultivácia prebieha pri 36 až 37 °G za stálého miešania pri 170 ot/min a přívode sterilného vzduchu 7 1/min nepřetržíte počas celej kultivácie. pH je udržiavané na hodnotě 7,6. Pri poklese priepustnosti na 50 % (meranej na Spekole proti referenčnej vzorke pri 575 nm) sa kultivácia ukončí. DÍžka kultivácie je 20 až 36 hodin. Po ukončení kultivácie sa bakteriálna kultúra inaktivuje 5 %-ným vodným roztokom formalínu v pomere 4 % k objemu kultúry. Následné je bakteriálna masa koncentrovaná prietokovou centrifugáciou tak, aby výsledná koncentrácia mikroorganizmov bola 1 až 4 χ 10¹⁽⁾ v 1 ml.

Inaktivované koncentrované bakteriálně masy sú následné egalizované v pomere 40 percent objemových bakterínu mikroorganizmu Erysipelothrix insidiosa a 60 % objemových bakterínu mikroorganizmu Bordetella bronchiseptica. Takto připravený zmesný bakterín je naadsorbovaný na gél hydroxidu hlinitého do výsledného obsahu hliníka max. 8 g/1^-1.

Bivalentná inaktivovaná vakcína je vyhovujúca, ak je prostá bakteriálnej a pliesňovej kontaminácie. Je neškodná, ak po podkožnej aplikácii 0,5 ml bivalentnej vakcíny neuhynie v pozorovacej době 7 dní od podania ani jedna zo súboru očkovaných myší.

Imunogénna hodnota vakcíny je testovaná na ošípaných tak, že skupině ošípaných je podkožně podaná dávka 2 x 5 ml bivalentnej vakcíny v odstupe 14 dní. Za 14 dní až 21 dní po revakcinácii je u imunizovanej skupiny testovaný imunitný stav voči červienke ošípaných formou vnútrokožnej infekcie s kožno-vlrulentnými kmeňmi Erysipelothrix insidiosa. Voči antigénnej zložke mikroorganizmu Bordetella bronchiseptica sú imunizované ošípané testované sérologicky, stanovením výšky titra specifických aglutinujúcich protilátek.

Vakcína má dobrú imunogénnu hodnotu, ak po vnútrokožnej infekcii za 48 až 72 hodin neochorie ani jedna z imunizovaných ošípaných kožnou formou červienky, ani nedojde k celkovej termickej reakcii nad 40 °C a vyvolá titer specifických aglutinujúcich protilátek voči antigénom Bordetella bronchiseptica v rozsáhlí 1 : 640 až 1: 1 280 v sére a 1 : 1 280 až 1:2 560 v kolostre.

Claims (2)

1. PREDMET

   1. Bivalentná inaktivovaná očkovacia látka proti červienke a infekčnej atrofickej rinitíde ošípaných, vyznačujúca sa tým, že obsahuje 40 obj. % bakterínu Erysipelothrix insidiosa pri výslednej koncentrácii inaktivovaných mikroorganizmov 1 až 4 χ 10¹⁰ bakteriálnych tiel v 1 ml a 60 obj. bakterínu Bordetella bronchiseptica pri výslednej

   YNÁLEZU koncentrácii inaktivovaných mikroorganizmov 1 až 4 χ 1O¹⁰ bakteriálnych tiel v 1 ml.
2. 2. Bivalentná inaktivovaná očkovacia látka podta bodu 1, vyznačujúca sa tým, že zmesný bakterín je naadsorbovaný na gél hydroxidu hlinitého do výsledného obsahu hliníka 6 až 10 g/1, s výhodou 8 g/1.