CS257830B1 - Spósob prlpravy imobilizovanej exopolygalakturonázy - Google Patents

Abstract

Očelom riešenia je spósob přípravy imobilizovanej exopolygalakturonázy. Podstata sp6- sobu spočiva v tom, že sa enzým zakotví pri pH 4,2 až 6,4 a teplote medzi 5 až 30 °C na polyetyléntereftalát. Imobilizovaná exopolygalakturonáza má využitie pri úplnej degradácii pektínových látok napr. v konzervárenskom a vinárskom priemysle a pri priprave kyseliny D-galakturónovej.

Description

Vynález sa týká spósobu pripravy imobil.izovaného pektolytického enzýmu exopolygalakturonázy , ktorá specificky katalyzuje postupné stiepenie koncových alfa-1, 4-glykozidických vázieb kyseliny pektovej a oligogalakturónových kyselin po monomérnych jednotkách.

Exopolygalakturonázu imobilizovali dosial len kovalentným viazaním na nerozpustný nosič na báze polyakrylamidu po jeho aktivácii vodorozpustnými karbodiimidmi (Collection Czech/

Chem. Commun. 50, (1985) v tlaČi). Nevýhodou uvedeného postupu založeného na kovelentnej imobilizácii je operačná zložitosť súvisiaca s aktiváciou nosiča, tiež nevýhodné hydrodynamické vlastnosti biogélu, ktoré sa prejavujú pri kolónovej aplikácii imobilizovaného enzýmu. Ďalším nedostatkom je ťažká dostupnost a poměrně vysoká cena nosiča i aktivačného činidla.

Uvedené nedostatky sa odstraňujú postupom podlá vynálezu, ktorého podstatou je, že sa enzým zakotví pri pH 4,2 až 6,4 a teplote 5 až 30 °C na polyetyléntereftalát, ktorý sa připraví z etylénglykolu a kyseliny tereftalovej postupom, ktorý zaručuje vysokoprevládajúcu hydrofóbnu adsorbciu enzýmu na nosič (Chem. Prum. 26, 598 (1976).

Základný spósob pripravy imobilizovanej exopolygalakturonázy spočívá v operačnej jednoduchosti postupu a stálého zakotvenia, čo pri dodržiavaní optimálnych podmienok enzýmovej reakcie, umožňuje používat imobilizovaný enzým opakované, alebo v dlhodobých kont.inuálnych procesoch. Ďalšou výhodou preparátu připraveného podlá postupu je, že sa spósob jeho účinku na polymérne substráty oproti účinku volného enzýmu nemení.

Východzie reaktanty pre přípravu imobilizovanej exopolygalakturonázy sú lahko dostupné, nakolko exopolygalakturonáza je přítomná v komerčných preparátoch pektináz, vyrábaných pre použitie v potravinárskom priemysle. Použitý nosič polyetyléntereftalát je čsl. výroby a je cenove přístupný.

Rovnako vlastná imobilizácia je velmi jednoduchá, lahko preveditelná a technicky nenáročná. Spočívá v reakcii rozpustného enzýmu s nosičom v prostředí tlmivého roztoku o pH 4,2 až 6,4, obvykle sa používá teploty 5 až 30 °C, nižšia teplota nežiadúcim sposobom ovplyvňuje rýchlost reakcie, vyššia naopak móže spósobit deaktiváciu enzýmu. Reakčná doba sa riadi predovšetkým žiadúcim stupňom konverzie, teplotou a množstvom enzýmu. Obvykle sa pohybuje od 4 do 16 hodin. Po skončení reakcie sa imobilizovaný enzým oddělí od supernatantu dekantáciou, filtráciou cez fritu, alebo odstředěním, premyje tlmivým roztokom a uchovává v suspenzii pri 4 °C.

Spósob pripravy podlá vynálezu je vysvětlený na nasledujúcich príkladoch.

Příklad 1

Exopolygalakturonáza přítomná v dostupných technických preparátoch pektináz, resp. z nich a vyšších rastlín izolovaná lubovolným postupom napr. gólovou a ionovýmennou chromatografiou Biochim. Biophys. Acta 422, 349 (1976); Collection Czech. Chem. Commun 42, 3 214 (1977) Biologia 36, 197 (1981) , bola imobilizovaná na polyetyléntereftalát podlá nasledujúceho postupu: Κ 1 g polyetyléntereftalátu premytému 0,1 mol.l octanovým tlmivým roztokom o pH 4,8 suspendovanom v 10 ml toho istého tlmivého toztoku sa přidá 10 mg preparátu exopolygalakturonázy. Po 4 hodinách miešania pri laboratórnej teplote sa gél oddělí vhodným spósobom.

Příklad .2

Polyetyléntereftalát suspendovaný vo vodě, alebo v tlmivých roztokoch o pH 4,2 až 6,4 sa naplní do kolony, cez ktorú sa filtruje roztok obsahujúci exopolygalakturonázu v tlmivom roztoku o pH zodpovedajúcom ekvilibračnému roztoku dovtedy, kým afluent nevykazuje enzýmovú aktivitu. Kolona sa potom premyje tlmivým octanovým roztokom pH 4,8.

Schopnosť imobilizovaného enzýmu katalyzovať zmienenú degradáciu pektínových látok je závislá na obsahu exopolygalakturonázy, tiež na obsahu kontaminujúcich látok vo východzom enzýmovom preparáte a tvoří okolo 30 % kapacity naadsorbovaného enzýmu. Aktivita imobilizovanej exopolygalakturonázy pripravenej podlá příkladu 1 a 2, pri štiepení glykozidických vSzieb pektanu sodného vykazovala 40 až 44 % kativity rozpustnej formy.

Imobilizovaná exopolygalakturonáza má využitie všade tam, kde ide o úplnú degradáciu pektínových látok, napr. v konzervárenskom a vinárskom priemysle, dalej sa dá využiť ku príprave kyseliny D-galakturónovej.

Claims (1)

1. PREDMET VYNALEZU

   Spósob přípravy imoblizovanej exopolygalakturonázy vyznačený tým, že sa enzým zakotví pri pH 4,2 až 6,4 a teplote medzi 5 až 30 °C na polyetyléntereftalát.