CS258203B1 - Spósob izolácie zvieracieho albuminu - Google Patents

Abstract

Riešinie možno použiť v imunologicko-biologickej výrobě veterinárnych liečebných prípravkov. Očelom je zavedenie do výroby novej technologie spósobu izolácie zvieracieho albuminu, pri ktorej je zachovaná nativita bielkoviny a dosahovaná vyššia výtažnosť oproti súčasnému stavu poznania. Uvedený izolačný postup představuje iba jeden operačný stupeň a může byť vykonaný pri izbovej teplote. Zjednodušenie izolačného postupu sa dosahuje tým, že krvná plazma, resp. sérum sa stabilizuje N-acetyl-DL-tryptofánom a Na-kaprylátom, pH sa upraví na hodnotu 6,0 až 6,1 a přidá sa 96 % etanol v množstve 12 až 18 objemových percent. Nasledujúcim zahriatím roztoku pri 45 až 55 °C a úpravou hodnoty pH na 5,0 až 5,1 vzniklý precipitát sa odstráni a supernatant představuje albumin minimálně o 95 % elektroforetickej čistotě.

Description

Vynález sa týká spósobu izolácie zvieracieho albuminu.

Doteraz v priemyselnom měřítku zvierací albumin z plazmy alebo séra sa izoloval bud vysolovaním vhodnými solami alebo frakciou organických rozpúšťadiel najma etanolom (Cohn E. J. et al.: J. Amer. Chem. Soc., 68, 459 (1946); Nitschmann H. et al.: Helv. Chim. Acta,

37, 866 (1954)). Nevýhodou uvedených technologických postupov je dlhý technologický cyklus, energetická náročnost a náročné technologické zariadenia. Známe sú tiež tepelno-denaturačné metody izolácie albuminu (Hoch H., Chanutin: Arch. of Biochem. and Biophys., 51, 27, 1954; Lundblad J. I.: Vox sang., 5 122, 1971; Schneider W. et al.: Folia haematol., 104, 116,

1977).

Avšak nevýhoda týchto je v tom, že balastné bielkoviny sú denaturované pri vysokých teplotách (+70 °C), čo má nepriaznivý vplyv na nativitu a výtažnosť albuminu. Taktiež izolácia albuminu pri výrobě Plazbionu vychádza zo supernatantu po oddělení imunoglobulínov, využívá taktiež poměrně vysokú denaturačnú teplotu (60 °C) a dlhú dobu denaturácie balastných bielkovín (dve hodiny) a napokon dosahuje poměrně nízku elektroforetickú čistotu (max.

%) a výťažnosť konečného výrobku.

Vynález rieši izoláciu albuminu zo zvieracej plazmy, resp. séra jednostupftovým technologickým úkonom, pri ktorom dochádza k denaturácii všetkých plazmatických bielkovín mimo albuminu. Přednost uvedeného postupu oproti doteraz používaným je v tom, že mimo skrátenia výrobného cyklu a nižšej denaturačnej teploty sa dosahuje výťažnosť cca o 30 % vyššia.

Podstata izolácie zvieracieho albuminu spočívá v tom, že ku krvnej plazme, resp. séru sa přidá 0,04 M Na-kaprylátu a 0,04 M N-acetyl-DL-tryptofánu. Po dfikladnej homogenizácii sa hodnota pH upraví 1 M kyselinou octovou na hodnotu 6,0 až 6,1. Za stálého miešania sa po kvapkách přidává 96% etanol do koncentrácie 12 až 18 objemových percent. Potom sa roztok za stálého miešania zahrieva pri teplote 45 až 55 ^UC po dobu 10 minút. Nato pH zmesi sa upraví na hodnotu 5,0 až 5,1 a schladí na teplotu +18 až +20 °C. Vzniklý preoipitát sa odstředí a supernatant sa filtruje a lyofilizuje.

Přiklad č. 1

K 3 800 ml hovSdzej plazmy bol přidaný stabilizátor do výslednéj koncentrácie 0,04 M Na-kaprylátu a 0,04 M N-acetyl-Dl-tryptofánu a pH upravené 1 M kyselinou octovou na pH 6,0.

K zmesi za stálého miešania bol přidaný 96% etanol v množstve 720 ml a roztok bol zohrievaný pri teplote 45 °C po dobu 10 minút. Potom pH roztoku bolo upravené 1 M kyselinou octovou na hodnotu 5,1 a následné roztok bol schladený na teplotu 18 °C. Vzniklý preoipitát bol separovaný na centrifúge. Supernatant bol filtrovaný a lyofilizovaný. Váha lyofilizovaného produktu 72 g, elektrorofetická čistota 95,8.

Příklad č. 2

K 3 800 ml hovSdzej plazmy bol přidaný stabilizátor do výslednéj koncentrácie 0,04 M Na-kaprylátu a 0,04 M N-acetyl-Dl-tryptofánu a pH upravené 1 M kyselinou octovou na 6,1.

£ zmesi za stálého miešania bol přidaný 96% etanol v množstve 480 ml a roztok bol zohrievaný pri teplote 55 °C po dobu 10 minút. Potom pH roztoku bolo upravené 1M kyselinou octovou na hodnotu 5,1 a následné roztok bol oohladený na teplotu 20 °C. Vzniklý preoipitát bol separovaný na centrifúge. Supernatant bol filtrovaný a lyofilizovaný. Váha lyofilizovaného produktu 68 g, elektroforetioká čistota 96,1.

Claims (1)

1. Spůsob izolácie zvieraoieho albuminu, vyznačujúci sa tým, že zvieracia plazma alebo sérum sa stabilizuje 0,04 M Na-kaprylátom a 0,04 M N-acetyl-DL-tryptofánom, upraví sa pH na 6,0 až 6,1, přidává sa 96% etanol do 12 až 18 % objemových, roztok sa zahrieva na teplotu 45 až 55 °C po dobu 10 minút, potom sa upraví pH na hodnotu 5,0 až 5,1, ochladí sa na teplotu +18 až +20 °C, vzniklý precipitát sa odstředí a supernatant sa filtruje a lyofilizuje.