CS270542B1 - Myái lymfocytárny hybridóm VU CF2 - Google Patents

Abstract

Riešerjie sa týká myšieho lymfocytárneho hybridómu, produkujúceho protilátku κ podtriedy IgG 1 proti lehkému retezcu t. hemeglutínlnu virusu chřipky A. Hybridóm je uložený v zbierke hybridomov Virologickóho ústavu SAV v Bratislavě pod ozne- * čenlm VU CF2.

Description

Vynález ea týká myšieho lymfocytárneho hybridómu, tj. hybridného jadnobunkového organizmu, zostrojsného buňkovou fúziou myšej myelomovej linie Sp2/0 a myšej slezinovej buňky, produkujúceho protilátky proti Xahkému retazcu (HA ) hemaglutininu virusu chřipky A subtypu H3.

Protilátky voči protslnom virusu chřipky sa doteraz pripravujú tak, že virus resp. jeho izolované proteiny sa opakované injikujú ako antigén pokusným zvieratám, najčastejiie králikom, myšiam, alebo fretkám. Sérum takto imunizovaných zvierat, ódobraté po určité j době posobenia antigénu, slúži ako zdroj protilátek, používaných predovšetkým pre kvantitativnu alebo kvalitatlvnu analýzu antigénu - virusu chřipky - vo výzkume a v imunodiagnostickej praxi.

Tento postup, nazývaný konvenčnou imunizáciou, má niekolko nevýhod. V sére imunizovaných zvierat sa nachádza heterogénna zmes protilátek, kterých spektrum je v každom Jednotlivom organizme rožne a neopakovatelné. Organizmus spravidla vytvoří okrem protilátok voči žiadanému antigénu i protilátky voči nečistotám antigénového preparátu, ktoré je potřebné zo, sér odstraňovat vysycovaním. Výrobné Šarže konvenčných sér sa preto dajú tažko Standardizovat a bývajú v širokom rozmedzí kvality. Pře výrobu každej šarže třeba připravit čistý imunizačný antigén a clalšie antigény na vysýtenie balastných protilátek proti nečistotám.

Uvedené nedostatky vyššie zelenaného a doslal používaného postupu sa odstránia, ak je k dispozicii hybridóm, produkujúci monoklonálnu protilátku proti Xahkému retazcu hemaglutininu virusu chřipky A subtypu H3, uložený v zbierke hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě, Mlýnská dolina 1, pod označením VU CF2.

Uvedený hybridóm bol získaný sposobom známým z odbornej literatúry ^Kohler. G., Milstein. C.: Continuous cultures of fused cello secreting antibody of predefined specificity. Nature 256. (1975Ú, 496: Gerhard. W.: Fusion of cells in suspension and outgrowth of hybrids in conditioned medium. In: Monoclonal antibodies. Hybrids: A New Dimension in Biological Analyses, R. H. Ksnnet, T. 3. McKeam, K. B. Bschtol, eds., New York, Plenum Press (1980), 370.) klonováním súboru hybridných buniek po fúzii myšej myelómovéj linie Sp2/0 a buniek, získaných zo áleziny myší kmeňa BALB/c, imunizovaných Xahkýa retazcom hemaglutininu (HA )'virusu chřipky A/Dunedin/4/73 (H3N2).

Výhodou hybridómu podXa vynálezu je, že produkuje homogénnu protilátku, tzv. monoklonálnu protilátku, ktorá je schopná Specificky reagovat s homaglutininom chřipkového virusu typu A subtypu H3. Hybridou VU CF2 možno kultivovat in vitro v médiách vhodných prs živočišná buňky, alebo in vivo v paritoneálnej dutina myši kmeňa BALB/c. Z konzerv, uchovaných v kvapalnom dusíku, možno zahájit produkciu protilátky bez ďalšej imunizácie antigénom.

Přiklad

Pra účel pomnoženia hybrldómových buniek in vivo sa aplikovalo 5xl0⁴ buniek do peritoneálnej dutiny myši. Pre lepšie uchytenie aplikovaných buniek bola myš 15 dní před přenosem buniek hybridómu premedikovaná parafinovým olejom (0,5 ml intraperitoneálne). Po 20 dňoch rastu hybridómu v peritoneálnej dutině bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobratá. Celkom sa získalo 7 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 7 mg/ml imunoglobulinu. Ascitická tekutina, obsahujúca produkt hybridómu VU CF2, vykazovala špacifickú vazbu k virusem chřipky typu A subtypu H3, ale nie voči iným subtypom, k izolovanému hemaglutininu subtypu H3 a k izolovanému Xahkému retazcu (HA ) hemaglutininu subtypu H3 v radioimunologickom teste. Viazala sa na lehký retazec (HA ) hemaglutininu v radioimunoprecipitačnom teste.

In vitro rastů buňky hybridómu ako polosuspsnzná kultúra. Majů tvar (gul'atý) a veř

CS 270 542 Bl kost charakteristické pre myelómové buňky, obsahujú fúzované buňkové jadrá, eú aneuploidné. Buňky hybridómu VU CF 2 majú ultraštruktúrny obraz typických myelómových buniek, kde prevažujúcou organelou eú volné a na membrány viazané polyribozómy. Základným kultivačným médiom je Oulbeccova modifikécia Eaglovho minimálneho eeenciálneho média (Dulbecco, R. a Freeman. G., Virology 8 (1959), 396). Toto médium, označované ako DMEM, je pre kultiváciu hybridómu doplněné gentamycínom a inaktivovaným prekoloetrálnym eérom (10%, Bioveta, Ivanovice na Hané). Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C - jeho středná generačná doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulin podtriedy igGl.

Hybridóm VU CF 2 ea mGže priemyeelne využívat ako zdroj protilátky proti hemaglutinínu virusu chřipky A subtypu H3 v metodách analytických, preparativnych alebo diagnostických a to:

X 1) pri kvantitativném a kvalitatívnom vyhodnocovaní přítomnosti hemaglutininu virusu chřipky A subtypu H3 vo vyšetrovanom materiál! (napr. klinické vzorky).

, 2) pri vyhodnocovaní epidemiologickej eituácie,

3) pri purifikácii hemaglutininu vírueu chřipky A eubtypu H3,

4) ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 1) pre přípravu eér specifických pre uvedené podtriedu.

Claims (1)

1. PREDMET VY N Á LEZU

   Myči lymfocytárny hybridóm VU CF2, produkujúci monoklonálnu igG 1 proti Xahkému retazcu hemaglutininu vírueu chřipky A eubtypu protilátku podtriedy H3.