CS271292B1 - Mouse lymphocyte hybridoma vu 440/2 - Google Patents
Mouse lymphocyte hybridoma vu 440/2 Download PDFInfo
- Publication number
- CS271292B1 CS271292B1 CS888156A CS815688A CS271292B1 CS 271292 B1 CS271292 B1 CS 271292B1 CS 888156 A CS888156 A CS 888156A CS 815688 A CS815688 A CS 815688A CS 271292 B1 CS271292 B1 CS 271292B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hybridoma
- type
- herpes simplex
- monoclonal antibody
- simplex virus
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims abstract description 17
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims description 3
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims description 12
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 abstract description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 abstract description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 230000003322 aneuploid effect Effects 0.000 description 1
- 208000036878 aneuploidy Diseases 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Vynález sa týká nového hybridómu, tj. hybridného jednobunkového organizmu, zostroJeného fúziou myšej myelómovej buňky Sp2/0 a myšej slezinovej lymfoidnej buňky, produkujúcej protilátku voči virusu Herpes simplex typ 2.
U virusu Herpes simplex rozoznávame dva antigénne odlišné typy Herpes simplex typ i a typ 2. Doteraz sa protilátky (antiséra) voči virusu Herpes simplex typ 2 připravovali imunizáciou pokusných zvierat, najčastejšle králikov, purifikovaným alebo nepurifikovaným vírusom resp. niektorým izolováným proteínom (Forghani B., Schmidt N., Lennette E. H.: Solid phase rádioimmunoassay for identification of herpesvirus hominis types i and 2 from clinical materiál. Appl. Microbiol. 28, (1974) 661 - 667* Dreesman G. R., Watson D. 0., Courtney R. □ ., Adam E., Melnick □. □ .: Detection of herpesvirus type-specific antibody by microsolid-phase rádioimmunometric assay; Intervirology 12, (1979) 115 - 119). Sérum takto imunizovaných zvierat, odobrané po viacerých dávkách antigénu, slúžllo ako zdroj protilátok tzv. typovošpecifických, ktoré sa využívali na dókaz antigénu virus Herpes simplex typ 2 v základnom výskume a v immunodiagnostlekej praxi. Vzhladom na to, že virusy Herpes simplex typ 1 a 2 obsahujú nielen typovošpecifické, ale aj typovo spoločné antigénne determinanty, takto připravené antiséra voči virusu Herpes simplex obsahujú vysoké hladiny typovospoločných protilátok, ktoré stažujú resp. úplné znemožnujú správné určenie typu infikujúceho virusu pri diagnostickom testovaní. Typovospoločné protilátky sa obvykle odstraňujú zo sér vysycovaním s vírusom Herpes simplex typ 1, Čo je procedúra velmi náročná na materiál a naviac len v malom počte prípadov úspěšná. Výrobné šarže konvenčných typovošpecifických antisér sa dajú fcažko Standardizovat a bývajú v širokom rozmedzí kvality. V poslednom čase sa s úspechom používajú na typizáciu virusu Herpes simplex typ 2 monoklonálne protilátky tzv. typovošpecifické, ktoré sú schopné detegovat infekciu vírusom Herpes simplex typ 2 v klinickom materiále.
Uvedené nevýhody doteraz používaných postupov sa nevyskytnú, ak je к dispozici! hybridómova buňková línia produkujúca typovošpecifickú monoklonálnu protilátku voči virusu Herpes simplex typ 2, ktorá Je uložená v zbierke hybridomóv Virologického ústavu SAV, Mlýnská dolina 1, Bratislava pod označením VU 440/2.
Uvedený hybridóm bol získaný spoaobom známým z odbornej literatúry (Kohler, G., Milstein, C.: Continuous cultures of fused cella secreting antibody of predefíned specificity. Nature,256, (1975), 495«, Gerhard W.: Fusion of cells in suspension and outgrowth of hybrida in conditioned medium. Monoclonal antibodies: A new dimension in Biological analyses. Kennett R. H a spol·, eds. New York, plenům press (1980), 370. Hybridné buňky získané po fúzii myších myelómovych Sp2/0 buniek a buniek získaných zo sleziny myši BALB/c imunizované] extraktom buniek infikovaných vírusom Herpes simplex typ 2, boli klonované a po otestovaní bol vybraný klon VU 440/2.
Výhodou hybridonu je, že produkuje homogennu protilátku, tzv. monoklonálnu protilátku, ktorá je schopná Specificky reagovat s vírusom Herpes simplex typ 2. Hybridóm VU 440/2 možno kultivovat in vitro v médiach vhodnýoh pre živočišné buňky alebo in vivo v peritonealnej dutině myši kmena BALB/c. Z konzerv zmrazených buniek uchovaných v kvapalnom dusíku, možno začat' produkciu protilátky bez óalŠej imunizácle zvierala antigenom.
příklad:
Za úČelom získania vačšeho množstva monoklonálnej protilátky VU 440/2 kultiváciou hybridomóvych buniek in vivo, 5x10^ buniek sa aplikovalo do peritoneálnej dutiny myši.
Pre lepšie uchytenie buniek bola myš 15 dni před aplikaclou buniek premedikovaná parafínovým olejom (0,5 ml intraperitoneálne na 1 myš). Po 10 dňoch rastu hybridómu v peritoneálnej dutině, bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobraná. Týmto postupem možno priemerne získat asi 7 ml ascitickej tekutiny obsahujúcej 8 mg/ml protilátky. Ascitická tekutina obsahujúca produkt hybridómu VU 440/2 vykazovala špecifickú vazbu к virusu Herpes simplex typ 2 v radioimunoanalytickom teste (RIA), v imunoenzymatlekej analýze (ELISA) a v lmunofluorescencnom teste (IF).
Buňky hybridómu VU 440/2 rastu in vitro ako polosuspenzná kultúra, Majů gulatý tvar a velkost charakteristická pre myelómove buňky. Obsahu)ú fúzované buňkové jadrá, sú aneuploidne, Buňky hybridómu VU 440/2 majú ultraátruktúrny obraz typických myelómovych bunlek, kde prevaŽujúcou organelou sú volné a na membránu viazané polyribozómy. Základným kultivačným médiom je Dulbeccova modifikácia Eagleovho minimálneho esenciálneho média (Dulbecco, R,, Freeman, G., Virology £/1959/, 396), Toto médium, označované ako DMEM, je pre kultivaciu hybridómu doplněné gentamycínom a inaktivovaným prekolostrálnyn telecím sérom (10%, Bioveta, Ivanovice na Hané), Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C v atmosféře 5% CO^» Oeho generačná doba Je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka Je monoklonálny imunoglobulin podtriedy IgG 1.
Hybridóm VÚ 440/2 može byť využívaný ako zdroj protilátky voči virusu Herpes simplex typ 2, ktorá sa dá použit na kvalitativny dókaz přítomnosti virusu Herpes simplex typ 2 vo vySetrovanom materiále, na kvantitativné stanovenie množstva infikujúceho virusu pri vyhodnocovaní epidemiologickej situácie a ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 1) pre přípravu antisér specifických pre uvedené podtriedu.
Claims (1)
- Myáí lymfocytárny hybridóm VU 440/2, produkujúci monoklonálnu protilátku podtriedy IgG 1 voči virusu Herpes simplex typ 2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888156A CS271292B1 (en) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Mouse lymphocyte hybridoma vu 440/2 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS888156A CS271292B1 (en) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Mouse lymphocyte hybridoma vu 440/2 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS815688A1 CS815688A1 (en) | 1989-11-14 |
| CS271292B1 true CS271292B1 (en) | 1990-09-12 |
Family
ID=5431764
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS888156A CS271292B1 (en) | 1988-12-09 | 1988-12-09 | Mouse lymphocyte hybridoma vu 440/2 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS271292B1 (sk) |
-
1988
- 1988-12-09 CS CS888156A patent/CS271292B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS815688A1 (en) | 1989-11-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pereira et al. | Type-common and type-specific monoclonal antibody to herpes simplex virus type 1 | |
| Brown et al. | Indirect 125I-labeled protein A assay for monoclonal antibodies to cell surface antigens | |
| Douillard et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay for screening monoclonal antibody production: use of intact cells as antigen | |
| US20100055675A1 (en) | Method for detecting measles virus, membrane assay test device, and membrane assay test kit | |
| Yeargan et al. | Rapid subtyping of equine herpesvirus 1 with monoclonal antibodies | |
| EP0179152B1 (en) | Diagnostic system for the detection of cytomegalovirus | |
| EP0162533A2 (en) | The detection of human cytomegalovirus specific IgM | |
| EP2145899A1 (en) | RS virus detecting kit using anti-RS virus monoclonal antibody, immuno-chromatographic test device, and new anti-RS virus monoclonal antibody | |
| AU735981B2 (en) | Peptide reagent for the detection of human cytomegalovirus (CMV) | |
| US4752582A (en) | Monoclonal antibodies to human glycophorin A and cell lines for the production thereof | |
| US6183754B1 (en) | Anticytomegalovirus monoclonal antibodies and processes for the in vitro diagnosis of infections by human cytomegaloviruses and a protein-kinase inducible by cytomegaloviruses and recognizable by aforesaid monoclonal antibodies | |
| Porta et al. | Serotype specificity of monoclonal antibodies to cucumber mosaic virus | |
| Kennel et al. | Distribution of viral glycoprotein gp 69/71 on cell surfaces of producer and nonproducer cells | |
| CS271292B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridoma vu 440/2 | |
| US5130232A (en) | Monoclonal antibody immunoassay kit for avian reticuloendotheliosis virus | |
| Kao et al. | Monoclonal antibodies for the rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infection by immunofluorescence | |
| CS271293B1 (en) | Mouse lymphocyte hybridoma vu t51/3 | |
| CS270194B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridem VÚ 499/1 | |
| CS270192B1 (sk) | Myší lymfooytámy hybridám VÚ T96/4 | |
| Dawson et al. | Monoclonal antibodies to hepatitis A virus | |
| CS270195B1 (sk) | Myší lymfocytárny hybridóm VÚ 809/5 | |
| CS270193B1 (cs) | Myší lymfocytárny hybridům VÚ 303/4 | |
| Nielsen et al. | A biotin—avidin-amplified inhibition enzyme immunoassay for detection of CMV antibodies in human serum | |
| CS270538B1 (cs) | Myši lymfocytárny hybridóm VÚ 159/1-9 | |
| CS270537B1 (cs) | Myši lymfoeytárny hybridóm VÚ 144/1-2 |