CS275657B6 - MURINE LYMPHOCYTE HYBRIDOMA Bra 23/9/a - Google Patents

Description

1 CS 275657 Βδ

Vynález sa týká myšieho lymfocytárneho hybridómu Bra 23/9/a t.j. hybridnej kultú-ry buniek jednobunkového (monoklonálneho) póvodu, získanej buňkovou fúziou myšej mye-lómovej bunkovej linie Sp2/0 a slezinových lymfoidných buniek syngénnych experimentál-nych zvierat, imunizovaných íudskou non-T, non-B ALL leukemickou buňkovou líniou. Hyb-ridóm produkuje in vitro aj in vivo myšiu monoklonálnu protilátku triedy IgG2a, rozpoz-návajúcu íudský HLA antigén I. triedy (nepolymorfnú determinantu).

Povodně sa protilátky proti natigénom buňkového povrchu získávali konvenčnou imu-nizáciou pokusných zvierat, při čom vznikala heterogénna zmes protllátok rázných trieda podtried ako aj imunochemických špecificít. Skrižené reaktivity takýchto preparátovspravidla nie je možné odstránií vysýtením in vitro, ktoré je okrem toho neštandardnýmpostupom, vyžadujúcim značné množstvá vysycujúcich buniek.

Uvedené nevýhody, čo sa týká protilátek proti HLA antigénom (antigénom MHC komple-xu I. triedy), odstraňuje riešenie podlá vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom, žebol získaný myší lymfoeytárny hybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku triedy IgG2g,proti HLA antigénu I. triedy (nepolymorfnej determinante). Tento hybridóm je uloženýv zbierke hybridómov a buňkových kultúr Oddelenia molekulárnej imunologie Ústavu expe-rimentálnej onkológie SAV, ul.Čsl. armády 21, 812 32 Bratislava, pod označením Bra 23//9/a.

Uvedený hybridóm bol získaný sposobom známým z odbornej literatury (Kohler,G.,Milstein,C.: Nátuře 256 /1975/, 495), klonováním buniek, získaných somatickou hybridi-záciou myšej myelómovej bunkovej linie Sp2/0 a slezinových lymfoidných buniek syngénne-ho zvierata (inbredný chov BALB/c), imunizovaného opakovanými intraperitoneálnymi dáv-kami (2.10? buniek/dávka) bunkovej suspenznej humánnej non-T, non-B ALL leukemickejbunkovej linie; subklon Bra 23/9/a s vysokou produkciou protilátky bol získaný opakova-ným klonováním limitujúcim riedením. Výhoda získaného unikátneho hybridómu podlá vynálezu spočívá predovšetkým v pro-dukcii monoklonálnej protilátky, rozpoznávájúcej Íudský HLA antigén I. triedy a Speci-ficky imunoprecipitujúcej glykopeptidické retazce gp 44, p 12, čo..má experimentálně la-boratorně využitie v transplantačnej imunologii a onkológii. Příklad 8 7 10 slezinových buniek imunizovanej myšky inbredného chovu BALB/c sa fúzuje s 6.10'Sp2/0 myelómových buniek v přítomnosti 45%ného polyetylénglykolu (PEG), klonuje limitu-júcim riedením na vrstvě syngénnych myších thymocytov (2.105 buniek/mikrokultúra) v se-lekčnom médiu hypoxantin-aminopterín-tymidin (HAT).

Subklon Bra 23/9/a s vysokou produkciou monoklonálnych protilátok, selektovanýchna základe špecifickej reaktivity s panelom ludských leukemických/lymfónových buňkovýchlinii a hematopoetickými buňkami zdravých darcov, sa získal opakovaným klonováním tech-nikou limitujúceho riedenia v mikroplatniach,'v kultivačnom médiu s obsahom 10% fetál-neho telacieho séra, až do vzniku stabilnej monoklonálnej bunkovej kultúry, produkujú-cej monoklonálnu protilátku danej špcificity.

Produkcia monoklonálnej protilátky danej špecificity vo vysokej koncentrácii sauskutoční tak, že sa inokuluje 5.106 hybridómových buniek do peritoneálnej dutiny syn-génnych myší, premedikovaných intraperitoneálnym podáním tetrametylpentadekánu. Mono-

Claims (1)

1. CS 275657 B6 2 klonálna protilátka, přítomná v supernatante bunkovej kultúry resp, v ascitickej teku-tině ziskanej z inokulováných myšiek, Specificky rozpoznává íudský HLA antigén I. triedy (nepolymorfnú determinantu) a Specificky imunoprecipituje glykopeptidické retazcegp (44, pl2). Buňky hybridómu rastů ako suspenzná kultúra buniek s morfológickou myších myeló-mových buniek. Základným kultivaéným médiom je RPMI 1640 s 10% fetálnym telacím sérem.Hybridóm je kultivovaný při teplote 37 °C v 0,5% pxide uhličitom. Zo zmrazených ampulováných vzoriek povodného hybridómu (v tekutom dusíku) je možné nové kultivovanie hybridómu s produkciou monoklonálnej protilátky s póvodnou špecificitou. Myši lymfocytárny hybridóm Bra 23/9/a a ním produkovaná monoklonálna protilátkamóžu byt technologicky připravované a komerně využívané v diagnostickom fenotypovaníbuniek nádorov, v diagnostike imunocytochemickými metodami niektorých typov novotva-rov, vo vyhodnocovaní metastatického potenciálu nádorových buniek, v Studiu in vitroindukovanej expresie membránových antigénov, v imunochemickej purifikácii HLA antigé-nov I. treidy. PATENTOVÉ NÁROKY Myší lymfocytárny hybridóm Bra 23/9/a,triedy IgG2a proti ludskému HLA antigénu I produkujúci monoklonálnu protilátku pod-triedy - nepolymorfnej determinante.