CS275657B6 - Myší lymfocytárny hybridám Bra 23/9 - Google Patents

Abstract

Riešenie sa týká myšieho lymfocytárneho hydridómu Bra 23/9/a produkujúceho monoklonálnu protilátku podtriedy IgG„ proti HLA antigénu 1. triedy - nepoly-3 morfnej determinante, ktorý je uložený v zbierke hybridómov a buňkových kultur Oddelenia molekulárnej imunologie Ústavu experimentálněj onkológie SAV, ul. Csl. armády 21, 812 32 Bratislava. Monoklonálna protilátka Bra 23/9/a je vhodná na imunofenotypovanie nádorových buniek, na spresnenie imunocytochemickej diagnostiky niektorých nádorov, sledovanie expresie transplantačných antigénov na normálnych a nádorových buňkách, v laboratórnej technike transplantačnej imunologie, v biochemickej izolácii HLA antigénov 1. triedy.

Description

Vynález sa týká myšieho lymfocytárneho hybridómu Bra Z~5l9/a t.j. hybridnej kultúry buniek jednobunkového (monoklonálneho) povedu, získanej buňkovou fúziou myšej myelómovej bunkovej linie Sp2/0 a slezinových lymfoidných buniek syngénnych experimentálnych zvierat, imunizovaných íudskou non-T, non-B ALL leukemickou buňkovou líniou. Hybridóm produkuje in vitro aj in vivo myšiu monoklonálnu protilátku triedy IgG_2a, rozpoznávajúcu ludský HLA antigén I. triedy (nepolymorfnú determinantu).

Povodně sa protilátky proti natigénom buňkového povrchu získávali konvenčnou imunizáciou pokusných zvierat, při čom vznikala heterogénna zmes protilátok rózných tried a podtried ako aj imunochemických špecificít. Skrížené reaktivity takýchto preparátov spravidla nie je možné odstránit vysýtením in vitro, ktoré je okrem toho neštandardným postupom, vyžadujúcim značné množstvá vysycujúcich buniek.

Uvedené nevýhody, čo sa týká protilátok proti HLA antigénom (antigénom MHC komplexu I. triedy), odstraňuje riešenie podía vynálezu, kterého podstata spočívá v tom, že bol získaný myší lymfocytárny hybridom produkujúci monoklonálnu protilátku triedy IgG_2a, proti HLA antigénu I. triedy (nepolymorfnej determinante). Tento hybridom je uložený v zbierke hybridómov a buňkových kultúr Oddelenia molekulárnej imunologie Ústavu experimentálnej onkológie SAV, ul.Čsl. armády 21, 812 32 Bratislava, pod označením Bra 23/ /9/a.

Uvedený hybridom bol získaný spósobom známým z odbornej literatury (Kóhler,G., Milstein,C.: Nature 256 /1975/, 495), klonováním buniek, získaných somatickou hybridizáciou myšej myelómovej bunkovej linie Sp2/0 a slezinových lymfoidných buniek syngénneho zvierata (inbredný chov BALB/c), imunizovaného opakovanými intraperitoneálnymi dávkami (2.10^ buniek/dávka) bunkovej suspenznej humánnej non-T, non-B ALL leukemickej bunkovej linie; subklon Bra 23/9/a s vysokou produkciou protilátky bol získaný opakovaným klonováním limitujúcim riedenim.

Výhoda získaného unikátneho hybridómu podía vynálezu spočívá predovšetkým v produkci! monoklonálnej protilátky, rozpoznávájúcej ludský HLA antigén I. triedy a Specificky imunoprecipitujúcej glykopeptidické retazce gp 44, p 12, Č0;umá experimentálně laboratorně využitie v transplantačnej imunologii a onkológii.

Příklad

7 slezinových buniek imunizovanej myšky inbredného chovu BALB/c sa fúzuje s 6.10' Sp2/0 myelómových buniek v přítomnosti 45%ného polyetylénglykolu (PEG), klonuje limitujúcim riedenim na vrstvě syngénnych myších thymocytov (2.10⁵ buniek/mikrokultúra) v selekčnom médiu hypoxantin-aminopterín-tymidín (HAT).

Subklon Bra 23/9/a s vysokou produkciou monoklonálnych protilátok, selektovaných na základe špecifickej reaktivity s panelom íudských leukemických/lymfónových buňkových linií a hematopoetickými buňkami zdravých darcov, sa získal opakovaným klonováním technikou limitujúceho riedenia v mikroplatniach,'v kultivačnom médiu s obsahom 10% fetálneho telacieho séra, až do vzniku stabilnej monoklonálnej bunkovej kultúry, produkujúcej monoklonálnu protilátku danej špcificity.

Produkcia monoklonálnej protilátky danej specificity vo vysokej koneentrácii sa uskutoční tak, že sa inokuluje 5.10⁶ hybridómových buniek do peritoneálnej dutiny syngénnych myši, premedikovaných intraperitoneálnym podáním tetrametylpentadekánu. Mono

CS 275657 B6 2 klonálna protilátka, přítomná v supernatante bunkovej kultúry resp, v ascitickej teku- ξ tine získanej z inokulováných myšiek, Specificky rozpoznává ludský HLA antigén I. trie- ϊ dy (nepolymorfnú determinantu) a Specificky imunoprecipituje glykopeptidické retazce j gp (44, pl2). í

Buňky hybridómu rastů ako suspenzná kultúra buniek s morfologickou myších myelo- ξ mových buniek. Základným kultivašným médiom je RPMI 1640 s 10% fetálnym telacím sérem. ) Hybridóm je kultivovaný při teplote 37 °C v 0,5% pxide uhličitom. Zo zmrazených ampulo- ·; váných vzoriek póvodného hybridómu (v tekutom dusíku) je možné nové kultivovanie hybridómu s produkciou monoklonálnej protilátky s póvodnou špecificitou. i

Myší lymfocytámy hybridóm Bra 23/9/a a ním produkovaná monoklonálna protilátka s móžu byt technologicky připravované a komerně využívané v diagnostickom fenotypovaní i buniek nádorov, v diagnostike imunocytochemickými metodami niektorých typov novotva- j rov, vo vyhodnocovaní metastatického potenciálu nádorových buniek, v Studiu in vitro * indukovanej expresie membránových antigénov, v imunochemickej purifikácii HLA antigé- « nov I. treidy. ;

Claims (1)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   Myší lymfocytámy hybridóm Bra 23/9/a, produkujúci monoklonálnu protilátku podtriedy IgG2_a proti ludskému HLA antigénu I. triedy - nepolymorfnej determinante.