CZ123293A3

CZ123293A3 - 2'-deoxy-2',2'-difluoro-(2,6,8-substituted)purinenucleoside derivative, pharmaceutical preparation containing thereof and an intermediate for its preparation

Info

Publication number: CZ123293A3
Application number: CZ931232A
Authority: CZ
Inventors: Larry Wayne Hertel; Cora Sue Grossman; Julian Stanley Kroin; Gerald Burr Grindey
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1992-06-22
Filing date: 1993-06-21
Publication date: 1994-03-16
Also published as: BR9302433A; HUT64553A; JPH0656877A; NO932287D0; CN1084178A; AU4134793A; HU9301821D0; EP0576227A2; CA2098876A1; IL106073A0; NO932287L; EP0576227A3; MX9303709A; FI932868A0; PL299412A1; FI932868A7; FI932868L; KR940005656A

Description

Oblast techniky

Vynález se týká substituovaných purinovych nukleosidu s antivirovou a antirakovi novou účinnosti a způsobu jejich použiti a meziproduktů pro jejich přípravu.

Dosavadní stav techniky

Jakkoliv se dříve léčení rakoviny považovalo za nemožné, dosáhlo se velkých pokroků při léčeni tohoto dříve osudového onemocnění. Klinicky se běžně nyní používají léčiva, která přispívají ke zvýšené míře přežíváni. Nejběžnějšími protinádorovými činidly jsou methotrexát, doxorubicin a alkaloidy vinca jako takové, vincristin a pufinové nukleosidy. Deoxydif1uorpurinové nukleosidy, které mají protinádorovou účinnost, popsal Hertel a kol. v publikaci Nucieotides and Nuclesides (Nukleotidy a nukleosidy), 8, str. 951 až 955, 1989 a dále jsou popsány v evropském patentovém spise číslo 329348; 339161; 1δ4365 a 211354.

Je také známo, že protivirová činidla jsou ve skupině nukleosidů. Například 9-(2-hydroxyethoxymethyi)cuanin je mocným protivirovým činidlem proti viru herpes, zatímco deoxydif1uorpuri nové nukleosidy máji mocnou protivirovou účinnost (evropský patentový spis číslo 345751; 122707 a 339161 a americký patentový spis číslo 4 526988; 4 965374 a 4 692434].

Výzkum pokračuje ve vývoji účinných sloučenin s větší bezpečností pro ošetřované jedince.

Podstata vynálezu

Podstatou vvnálezu je sloučenina obecného

kde znamená

R-j a R^ na sobe skupinu, :ezavi siky levou skupinu, halogenalky!ovou lkoxyskupinu, aminoskupinu, atom halogenu, atom voaiku, hydroxyskupinu, kyanoskupinu, thioskupinu, thioaikyi ovou skupinu, hydrazidoskupinu, karboxemidoskupinu. tm oami doskupi nu, suifonamidoskupinu, sulfinamidcskupinu, alkyiaminoskupinu. thiosminoskupinu, hydroxyaminoskupinu, a1kyiamino skupí nu, dialkylaminoskupinu, O(aryi), O(substitucvsný aryi), N(arvi), nebo N(substituovaný aryi) r- - ·· sku t o rr, nycrcxye r.upi nu . amino skup i nu halogenu, alkoxyskupinu, neb s i ky1ami noskuthi celkvi cvcu a jejich farmaceuticky vhodné s;

vrazem .ikyl samotným ne v kombinaci

L S i mini aiifaticka uhlovodíková skupina s přímým, s cyklickým nebo s rozvětveným řetězcem s 1 až 7 atomy uhiíku a především s 1 až 4 atomy uhlíku, jako je například skupina methylová, ethylová, n-propylová, isoprcpyicvé, n-butylová, terč.-butylové, isobutylová a sek.-butylová skupina. Výrazem aryi samotným nebo v kombinaci se míní karbocykiická nebo heterocyklická skupina, jako je skupina fenylová, naftyiová a thienylová skupina a jejich substituované deriváty. Výrazem aromatický samotným nebo v kombinaci se míní benzenovitá struktura obsahující (4n + 2)it de i oka 1 izované elektrony. Výrazem substituovaný samotným nebo v kombinaci se míní substituce jednou nebo několika skupinami ze souboru zahrnujícího atom haiogenu, kyanoskupinu, karbcaikoxyskupinu, toiuoylovou skupinu, nitroskupinu, alkoxyskupinu, alkylovou skupinu, aminoskupinu a dialky1aminoskupinu. Výrazem atom halogenu samotným nebo v kombinaci se míní atom chloru, jodu, fluoru a bromu. Výrazem aikoxy samotným nebo v kombinaci se míní skupina obecného vzorce AO, kde znamená A alkylový podíl. Výrazem thioaikyi samotným nebo v kom binaci se mini skupina obecného vzorce ES, kde znamená B alkylovou skupinu nebo atom vodíku.

Výrazem protivirové účinné množství se zde vždy mini vhodné'množství sloučeniny obecného vzorce I, které je schopné přecházet nebo inhibovat přítomnosti virových infekci savců. Výrazem citlivý neoplasm se míní abc· normál ní růst tkáně savců schopný ošetřeni sloučeninou obecného vzorce I. Výrazem farmaceuticky účinné množství se zde vždy míní vhodné množství slou4 čeniny obecného vzorce I pro ošetřováni savců trpících stavy způsobenými nádory a virovými infekcemi. Výrazem inertní rozpouštědlo” se zde vždy míní prostředí, ve kterém může reakce probíhat, které se však materiálně na reakci nijak nepodá i i. Výrazem aktivní složka samotná nebo v kombinaci se zde vždy míní sloučenina obecného vzorce I nebo její farmaceuticky vhodné sůl. Výrazem farmaceuticky vhodný” se zde vždy mini nosič, ředidlo nebo excipient, které jsou kompatibilní s ostatními složkami farmaceutického prostředku a nejsou pro recipient škodlivé. Výrazem jednotková dávkovači forma se zde vždy míní fyzikálně oddělené jednotky, vhodné jako jednotkové dávka pro ošetřované lidi nebo jiné živočichy, přičemž každá dávka obsahuje předem stanovené množství účinné látky, vypočtené pro dosaženi žádoucího terapeutického působeni, spoiu se farmaceuticky vhodným nosičem.

Vynález se také týká meziproduktů obecného vzorce II vhodných pro přípravu sloučenin podle vynálezu obecného vzorce I.

Sloučeniny obecného vzorce II, jakožto meziprodukty, se připravuji kopulací 2-deoxy-2,2-difluoruhlohydrátu, popsaného v americkém patentovém spise číslo 4 526988, majícího uvolňovanou skupinu na C-l, s nukleobézí. Uvolňovanou skupinou na 2-deoxy-2,2 difiuoruhlohydrátu, k usnadňování kopulace, je skupina zpravidla v organické chemii používaná a může být ze souboru zahrnujícího tuluensul fonát, ethansulfonát, isopropansulfonát, p-methoxybenzensuifonát, p-nitrobenzensuifonát, m-chlorbenzensulfonát a atom halogenu, přičemž výhodnou uvolňovanou skupinou je atom halogenu a nejvýhodnějši atom jodu.

Atom halogenu jakožto uvolňovaná skupina se snadno zavádí reakci 2-deoxy-2,2-difluoruhlohydrátu s aryi sulfonylhalogenidem nebo aryisulfonylanhydridem v přítomnosti ekvivalentního množství vhodného prcstředku vážícího kyselinu, jako ie například tríethyisrain. Tak se zavede aryisul feny iové uvolňované skupina co poleny C-l. Aryisulfonylové uvolňované skupina se pak nahradí atomem halogenu jakožto uvolňovanou skupinou například reakcí s tetrabuty1amoniumjodidem.

Je obecně žádoucí převádět volnou hydroxyskupinu 2-deoxy-2,2di fi uoruhl ohydrátu na chráněnou hydroxylovou skupinu (X) k před5 cnazeni reakce s nur.: eobéz i . Jakožto chrénicl skupiny přicházejí v uvahu v organické chemii obecně používané chránící skuríny.

Chemi c i	Ρ Γ £ V	idi a vol	i chrámci skupiny.	!’ - a r c. c p	účinně na
2-deoxy-2.2-di	fi uoruhi o	hydrát zavádějí a po	ukončeni	y i V q o c &
mohou	snadno	odstraní	t. Skupiny, chránící	hydroxysk	upinu jsou

v oboru známy a jsou popsány například v kapitole 3 publikace Prctective Groups in Organic Chemistry [Chráníc: skupiny v organické chemii;, bcOmi e Ed. , Pie num Press, New York, 1973 a v kapitole 2 publikace Protective Groups in Organic Synthesis (Chránící skupiny v organické synteze). Green. John J. Wiieay and Sons, New York, 1981. Jakožto výhodné skupiny se uvádějí příkladně skupina benzoylová, mcnosubstituevané benzoylová skupina a dísubstituovaná benzoylová skupina, skupina acetylová. pivslamidová, trifenylmethylethery vytvářející skupiny a silyiethery vytvářející skupiny, zvláště skupina terč.-butyidimethyisi iyiová, přičemž nejvýhodnějši je benzoylová skupina.

Pro vázáni chránící skupiny na hydroxylovou skupinu 2-deoxy2,2-difiuoruhlohydrátu se používají charakteristické reakční podmínky a závisející na povaze zvolené chránící skupiny. Vhodné reakční podmínky jsou popsány v americkém patentovém spise číslo 4 526988.

Při způsobu podle vynálezu používané nukieobáze pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu jsou obecně známé pracovníkům v organické chemii a není nutno popisovat jejich přípravu. Aminoskupiny, obsažené v některých nukleobázich, je však vhodné chránit před kopulaci nukieobáze s 2-deoxy-2,2-difiuoruhlohydrétem. Používané skupiny., chránící aminoskupinu, se s výhodou volí ze souboru zahrnujícího skupinu terč .-butoxykarbony1ovou, benzyloxykarbonyiovou, 4-methoxybenzyioxykarbonyiovou, 4nitrobenzyloxykarbonyiovou, skupinu formyicvcu a acetylovou.

Kromě toho je často vhodné převádět všechny keto kyslíkové atomy· na nukleobázi na chráněnou enolovou formu. Tím' získává nukieobáze aromatičtější charakter a podporuje se vázání nukieobáze a 2-deoxy-2,2-difiuoruhiohydrátu. Enciizsce se provádí nejvhodnět ji vytvářením sily!tvých chránících skupin.

Kopulační reakce 2-deoxy-2,2-difiuoruhiohydrátu a nukleováze se provádí při teplotě přibližně 20 až přibližně 200 'Oas výhodou v rozpouštědle, jako je například dimethylformamid, dimethylacetamid nebo hexamethylfosforamid. Pokud se kopulace provádí za zvýšenégho tlaku k předcházeni destilace nizkovroucich rozpouštědel, může se použít jakéhokoliv běžného, při reakci inertního roz pcuštědi a.

Alternativní způsob přípravy sloučenin obecného vzorce II, používaných při přípravě sloučenin podle vynalezu obecného’ vzorce I jakožto meziproduktů, popsal Hertel v publikaci Synthesis, Cytotoxicity and Metaboiism of the 2',2'-Dif1uoro Anaiogs of Deoxyadenosi ne (dFdA) and Decxyguancsine (dFdG) (Syntéza, cytotoxicita a metaboiism 2',2'-difiuoranaiogú deoxyadenosinu (dFdA) a deoxyguanosinu (dFdG)), Nucieosides & Nucleotides, 3 (5 & 6), str 951 až 955, 1989.

Polohy substituentů C-2, C.-6 a C-8 purinové nukleobáze se mohou modifikovat pracovníkům v oboru o sobě známými způsoby za získání meziproduktů obecného vzorce II, ze kterých se mohoi odstranit chránící skupiny za získání sloučenin obecného vzorce

I. Né:pří ki ad atcn: pozicích se může na jedné jebe na i’$k .dika těchto nukiecfilní substitucí * otok·- ný skáno žádaného na formu haloge nu odstranit nukiecfilní substituent se může modifikovat k produktu. Kyancvý substituent se může například vxiuuvau karbexamidu nebo redukovat na formu methyl aminu.

K získáni sloučenin obecného vzorce I se musí chránící skupiny odstranit.

Většina silylových chránících skupin se snadno odštěpuje působením vody nebo alkoholu. Odstraněni terč.-butyldimethylsi1y1ové chránící skupiny vyžaduje kyselé podmínky, například styk s plynným halogenovodikem.

Acylové chránící skupiny, se odstraní hydrolýzou se silnou nebo méně silnou zásadou, jako jsou například hydroxidy alkalických kovů, při teplotě přibližně odpovídající teplotě místnosti sž přibližně 100 '0. Pro každou chráněnou skupinu ie zapotřebí a— iespofi jednoho ekvivalentu zásady. Takové hydrol-yza se zpravidla provádí v rozpouštědlech, majících hydroxylové skupiny, zvláště v alkoholech. Reakce se však mohou provádět v jakémkoliv běžném rozpc usteo · e , jano jsou například polyoly včetně ethyl er.gi ykc· i u, ethery, napřikiac tetrahydrofursm, ketony, například aceton a methylethylketon a v jiných polárních rozpouštědlech, jako je například dimethylsul foxid.

Odštěpení scyicvych chrámcích skupin je možno porvsdět za použití jiných zásad, například methoxidu sodného, terč.-hutoxidu draselného, hydře:::;·:, hydroxylaminu, amen:sku. amidů alkalických kovu a sekundárních aminů, jako je například diethy!amin.

Acylové chránící skupiny se také mohou odstranit kyselými katalyzátory, jako- je methansulfonové kyselina. chlorovodíková nyseiina, zr ono vo zi ková z.yseima, sírová kyselina nebo kyselými ionexovými pryskyřicemi.

Je výhodné provádět takovou hyčroiyzu při poměrně vysoké teplotě, jako je teplota zpětného toku směsi, může se však použit i teploty okolí, zvláště při použití silných kyselin.

Odstranění etherových chránících skupin se provádí o sobě známými způsoby, například použitím ethanthiclu a chloridu hlinitého .

Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I mají jak hycrcxyiové skupiny tak aminoacylové nebo alkylové skupiny, a mohou se proto selektivně zbavovat chránících skupin nebo se takové skupiny mehou odstraňovat ;s selektivně nahrazovaznámých.

podmínek c sobě

Žádný z reakčních stupňů nevyžaduje neobvyklý nadbytek reakčních složek. Jak je běžné v organické syntéze, je vhodné používání mírného nadbytku reakčních složek v oberu 1,05 až 2 násobku.

Mohou být nutné modifikace shora uvedených způsobů k přizpůsobení reaktivním skupinám určitých substituentů. Takové modifikace jsou běžné pro pracovníky v oboru.

Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I objasňuje následný příkladný výčetx (a ) 2-de oxy-2·,2-di i’ 1 uor-D-r i buf ur snosy i - 1-β- (, 2-ami no-6chlorpuri n), ( b ,i 2-de oxy-2,2-di f 1 uor-D-r i buf ur sncsyl-1-β-ί. 2-amino-6me t hoxypur i n1,

(. c ) 2-deoxy-2,2-di f Ϊ uor-D-r i bufursnosv 1-1-ř-(2-smi no-68

	ethoxypuri n;,
(d)	2-de oxy-2,2-di f i uor-D-r i buf ur snos y1-1-β-(2—amino—6—
(' e )	dimethyiaminopurinj. 2-cecxv^-2,2-di f1uor-D-r i bufursnosyi -1-β-(2-ami no-ό-
( f )	σιε thy i smi nopuri n), 2-deoxy-2,2-di fiuor-D-ri bufursnosy 1-l-β-(2-amino-6-
(g)	jodpuri n), 2-deoxy-2,2-di f1uor-D-ribufursnosyi -l-β-(2-aminc-6-
(h)	kyanopurin), 2—de oxv—2,2—difiuor—D—r i bufur anos y i — 1 — β—(2—aminc—6—
(i )	thiopurin.! , 2—deoxy-2,2 —di f iuor—D—r ibufuranosy 1-1 — β—(2—amino—6—
(j)	karboxamidopurin), 2-decxy-2,2-difluor-D-ríbufuranosyi-1-β-(2-hydroxyadencsin ) ,
(k)	2-de oxy-2,2-di f i uor-D-r i bufursnosyi-1-β-(2-f1uoracenos i n),
(i )	2-deoxy-2,2-di fIuor-D-ribufuranosy1-Ι-β-purin,
(m)	2—deoxy—2,2—di f i uo r — D—r ibufur snos y i — 1—β—(2—smi nopur zni,
(n)	2-de oxy-2,2-di f 1 uor-D-r i buf ur anosy i - l-β-( 2-ami no-6-
( 0 )	methylpuri n), 2-deoxy-2,2-di fIuor-D-ri bufuranosy1-l-β-(2-amino-ó-
(p)	chior-i-deazapurin), 2-de oxy-2,2—di fiuor-D-ri bufursnos v i-I-£-(6-chíor-7-
(g)	deszspurin), 2-deoxy-2,2-di fiuor-D-ri bufuranosy1-l-β-(2,6-
(r)	dichior-3-deszapurin), 2—deoxy-2,2-di f i uor-D-r i buf uran osy i - l- β- ( 6-arní no-3-
(S)	deazapur i n) , 2-deoxy-2,2-di f i uor-D-ri bufuranosy1-l-β-(2,6ch!or- . purin), jich farmaceuticky vhodné soli. Vybodnvmi sloučeninami podle vynálezu obecného vzorce I jsou

sloučeniny (Ά) až (f'V a jejich farmceuticky vhodné soli

? τ' Η ί pin,

J akk o 1 i v jsou s 1 o uč eni ny o be c ně ne ut r á i n i , ma jí určité sl o kiny obecného vzorce I dostatek jak kyselých ťak zásditých skuoakze mohou reagovat s černými anorganickými a organickým

zásadami = s četnvmi anoroanickvmi a orosnickvmi kvselinami za vzniku farmaceuticky vhodných soii. Jakožto kvseiinv běžně používané pro přípravu adičních soli s 'Kyselinami, ss uvádějí kyseliny anorganické, jako jsou například kyselina chlorovodíkové, bromovodíková, jodovodiková, sírová a fosforečná kyselina a oresnické kyseliny, jako jsou například kyselina p-toiuensulfo nové, methsnsuifoncvá, šťavenová. p-bromfeny1 sulfonová, karboxylové. iantaromaceuticky vhodných solí se pak příkladně uvádějí, sulfát, pvrosmfst. nycrogensui fát. sulfit. hydrogensul f it, fosfát, monohyrogenfosfat. chlorid. bromid, jodid. acetát. propionát. dekanoát. kapryiát, oxauát, malonát, sukcinát, suberát, sebakát, fumarát, maleat, ou— i η — 1,4—m o at, hexm—1,6—c i o át, benzoát, ch 1 o r be nz o á t. methylbenzoát. dinitrobenzoát, hydroxybenzoát, methoxybenzoét, ftaiát, sulfonát, xyi ensul fonát, fenylacetát, fenyiprepicriát, fenylbutyrát, citrát, iaktát, hydrexybutyrát, glykolét, tartrát. methansuifonát, propansulfonát, nafta!en-l-suifonát, nsfťaien-2sulfonát a mandě lét. Výhodnými jsou farmaceuticky vhodné ediční soli připravené za použiti minerálních kyselin, jako je například kyselina chlorovodíková a brcmovodíková a organických kyselin, jako je kyselina maleinová a methansuifonová kyselina.

Zásadité adični soli jsou odvezeny od anorganických zásad, jako jsou příkladně amoniak nebo hydroxidy, uhličitany a hydrogenuhiičitany alkalických kovů a kovů alkalických zemin. Takovými užitečnými zasadami pro přípravu soii sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu jsou například hydroxid sodný, draselný nebo amonný, uhličitan draselný nebo sodný, hydrogenuhličitan sodný nebo- draselný, hydroxid vápenatý nebo uhličitan vápenatý. Obzvláště vhodnými jsou draselné a sodné soli.

Sloučeniny podle vynálezu obecného· vzorce I a meziprodukty pro jejich přípravu obecného vzorce II mohou existovat v různých anomernich formách. Vynález však neni omezen na nějakou určitou anomeřňi formu. nýbrž zahrnuje všechny jednotlivé ar.omery a jejich směsi. Výhodnými jsou β-anomery.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou existovat také ve formě různých solvátu s ethane lem as jako solvatu s v o dou. s m e t h a n o lem dimethylformamióem. Mohou se připravovat také směsi rekových soivétů. Zdrojem takového solvátu může být rozpouštědlo použité pro krystalizsci, rozpouštědlo, použité při přípravě nebo krystalizací nebo přidáni takového rozpouštědle. Tyto soivátv rovněž patří do rozsahu vynálezu.

Farmaceuticky vhodné soli sloučenin podle vynálezu obecného vzorce I se připravuji reakci ekvimc1 srního množství nebo nadbytku kyseliny nebe zásady ee siiučenincu obecného vzorce I ve vhodném inertním rozpouštědle nebo v rozpouštědle v podstatě inertním nebo ve směsích takových rozpouštědel. Vcibe ϊ 'siecne so.

avu soli se používá spíše suspenzi ne:

a pro pr:

roztoků určitých reakčních činidel. Soli se připravují reakci při teplotě přibližně -10 až přibližně 100 ^!C, s výhodou přibližně při teplotě místnosti a rozpouštědlo se pak odstraní o sobě známým způsobem.

Následující příklady praktického provedeni vynález blíže objasňuji., nijak jej však neomezují.

Příklady proveděni vyná1ezu

Přiklad 1

2-Deoxy-2,2-di f 1 uo r—D-r i bo f urane syl-l-{3-( 2-ami no-6-ch l o r pur i n

Do suspenze 2—amino—6—chlorpuri nu (307 mmol, 52 g) v domet— hyiacetsmidu (2 litry) se při teplotě O C v prostředí dusíku vnese práškevitv hydroxid draselný (368 mmol, 20,6 g). Směs se míchá po dobu 30 minut za získání rozteku. Přidá se 2-deoxv-2,2diťiuor-D-ribcfuranosyi-3,5-dibenzoyi-l-a-jodid (307 mmol. 150 g} v dimethy1acetamidu (400 mi:. Reakční směs se nechá ohřát na teplo tu.mistnosti a mícha se v prostředí dusíku. Do reakční směsi oe. p.=k přidá solar.ka a směs se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje postupně solankou, IN kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší se síranem sečným a odpaří se ve vakuu, čímž se získá, surový pr o dukt.

Surový produkt se čisti chromatografií na silikagelu, čími

se získá.	3 : i	p ku	σ a n	c-rae r	2 - d e
3-, 5 - d i t e	nzoyi-1	-( 2-	ami ne-	-6-oh	iorp
se p - a n	cmer 2-	čeex	y-2 , 2	— d ί f i	u o r —
< 2 - a m i n o	-6-chlo	rpztr		) me	zipr
výtěžku	24 % te	2 ri e
	mezi pro	důlkt	u se	cdst	raní
v methan	clu o	u tr p:	otě O	-	s. a
	roztok	s s	ne ch	a ohř	at
	. Re zto	k s e	pak	pr opi	s c h u
získá 2 -	e e o- x y - z	/ *j ií	i. _ \_i	r-D-r	ί Ž’ O f
rin, kte	r y s e	čist	i pro-	myti m	n e
me thy i _e n	o h 1 o r i d	k o	dstr a	něni	ben z
-ti NM? <	300 MK	. CD	.OD),	A 3	, 30
3'-H),	6.27 (dd, 1H, 1'	-H) .	8 , 3
Příklad	2
2-Deexy-	2,2-di ř	1 uor	-D~r i	bo f ur	anes
2-	Deoxy-2	, 2-d	i f iuor-D-rihc f
r i n (0,	5 ranč i ,	1 60	, 5 mg	ι , pr	eduk
ncmeru β	ku a 3	: 1	, se	smísí	s m
sodným (,	1 mmc i,	54	mg ) .	?c z f o	k se
v prostř	edí dus	iku	po dobu dv	z u h
ř ením se	ve for	mě c-	i 7 o	z í s k 3.	2-d
l-β-(2-a	mi no—6-	me th	c xypu	Γ i Π	a o d
t oerr af i i	HPLC v	e vý	tě i ku	75,3	mg
FD-MS m/e 317 =	M
iH NM? (	300 MHz	CD	-OD) ,	6 3	. 8 8
OMe ) , 4 .	5 8 ( m ,	1K ,	2 -H)	, 6 , 1	7 ( d
Příklad	3
2-Decxy-	2.2-dif	1 u c- r	-D-r i	be f ur	a n o- s
	Deoxy-2	, 2-d	i f)uor-D-r	i bc í
rin ( 3 ,	11 mmo·:	, 1 .	0 g ! .	pro d	ukt
ethane- i u	<1OO mi) a	e t h o-	>: i d u	~ S n

c-xy-2,2-d i f 1 uc r - D-r i bc· f ur anos y 1 urinového) meziproduktu. Izoluje D-r i bc- f uranový i -3 , 5-dibenzoyi -1edukt (47.22 g? krystalizací ve chránící ekupinv suspendováním syceným směs; vodným amoniakem, ns tepiotu místnosti a míchá se je dusíkem s odpaří se, čímž se ursnesy i - l-β - { 2-s.mzno-6-ehi crpupoiérnim rozpouštědlem, jako je eátevých vedlejších produktů.

(m,. 3H. 4‘-K, 5’-H), 4,5-5 (m, 1H, 1 (s, 1H, 8-H).

yl -i-β-( 2-amí nc-6-methc-xypur in uranosyl-l-β-<2-smi no-6-chiorptt podle příkladu 1, s poměrem aethanoiem (25 mi) a s methexidem pak vaří pc-d zpětným chladičem odin, načež se přidá voda. Odpa — e cxv-2,2-difiuo'r — D—r ibcfursnosyi — děli se reverzní fézcvcu chroma(48 % teorie).

(m, ΞΗ. 4-H. 5'-H). 4,03 (s. 3H, d, 1H. · -H). 8,05 -s. 1H. 8-H).

yl -l-β-( 2-aminc-6-ethoxypurin ursnes y1~1-β-(2-smi no-6-chi er pupo d i e přikladu 1 se vnese do ého- <6,22 mmol, 423 mg). Roztok se pak vaří pod zpětným chladičem v prostředí dusíku po dobu dvou hodin, načež se přidá voda. Odpařením se ve formě pevné látky získá 2-deoxy—2,2—di f í uor-D-ribofuranosyi —1 — β —(2—amino — 6—e thoxypur i n a izoluje se si i i kape iovou chromatografií ve výtěžku 805 mq (78 % teorie). FD-KS m/e 331 = M

Ana 1 yz a pro C ·, - H r F; N O ₄

vypočte		C 4 3	5 1	u	4 ,	56	N 21,14
n a i e 2 e n	c é	C 43	, 40	H	4 ,	62	N 20,88
^:H NMR	{ 300	MHz ,	CD;OD)	, 6	1	,42	(t, 3H, 6-OCH.	_;CH,	), 3,89 (m, 3H
4 ' -H . 5	' — u > i * i ,	4 . 5	4 (m.	SH,	O	-H,	6-OCH.CH_;), 6,	, 18	(dd, IH, 1'-H)
8,06 (s	, ÍH,	e-H)

Příklad 4

2-Deoxy-2,2-di f i uor-D-ribofuranosyi -l-j3-(2-ami no-6-di me thy i ami nopur i n

2-Deoxy-2,2-difi uor-D-ribofuranosyi-l-β-(2-amino-6-chl orpurin (0,5 mmol, 160,5 mg), produkt podle přikladu 1, se vnese do methanolu (25 mi) a dimethylaminu (2,5 mi 40% rozteku ve vodě). Roztok se mícha při teplotě místnostni po dobu dvou hodin. Odpařením rozpouštědla ve vakuu se ziská 2-deoxy-2,2-dif1uor-D-ribofuranosyi — 1 —β —( 2-air.ino-ó-dimethyi ami nopur i n a izoluje se siiikageiovou chromatografi i ve výtěžku 165 mg (100 % teorie).

FD-MS m/e 330 = M ^:H NMR (300 MHz, CD_;OD), 6 2,66 (s, 6H, 6-N(CH_:)_;), 3,86 (m, 3H,

4'-H, 5'-H), 4,53 (m, ÍH, 3-H), 6,13 (dd, 1H, l'-H). 7,91 (s,

1H, 8-H).

Přiklad 5

2-Deoxy-2,2-di f1uor-D-ri bofuranosyi -1-?-(2-smi no-6-methylamino-

pur i n		..
2—Deoxy—2,	2 ^-	d i f i u o	r ^—	r	i bo f	uran;	syi-1-β—(2-a	mi ne	-6-chi	orpu-
r i n (.0,2 mmo i ,	64	, 3 mg)	. pr	0	dukt	pod 1	e přikladu 1		vnes	e d c
ethanolu (10 ml)	5	me thy	• ami	n	U ( 1	, 0 ml	40% roztoku	ve	vodě )	Roz-
tok se míchá při	h	e p 1 o t ě	mis		n o s t	ni po	dobu dvou a	piú	ii o d i n	. Od-

pařením rozpouštědlo ve vakuu se získá 2-decxy-2 bofuranosy1-1-p-(. 2-aminc-6-raethyiaminopurjn a izo

ΤΊ- τ - geiovou chromatografií ve výtěžku 48,7 mg (77 % teorie).

FD-MS m/e 316 = M )H NMR (300 MHz, CD--OD), & 3,03 (s. 3H. 6-NHCH_?), 3.88 (m, 3H, 4'-H, 5‘-H), 4,58 (m, 1H, 3'-H), 6,12 (dd, 1H, 7,93 (s,

1H, S-H).

Příklad 6

2-Deoxy-2, 2-di 2-Deoxyrin (3,1 mmol dovodíkové kys míchá při této a neutralizuje ného a odpaří 2-deoxy-2,2-di f 1 uo r—D—r i bo f ur ano s v i — 1 — p —: 2 — smi no — 6· — i z dour i n )

2,2-di f1uor-D-ribofuranosyl -l-p-(2-ami no-6-chlorpu1.0 q > , nr odukt podle př í k 1 ad ti 1 , se vn ese do j o — eliny (10 ml,. 47 až 51%) o teplotě 10 C. Roztok se teplotě po dobu dvou hodin. Roztok se zředí jedem se studeným koncentrovaným roztokem hydroxidu amonse. Směs se rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Žádaný fiuor-D-ribofuranosyl-l-p-(2-amino-6-jodpurin se izoluje z vakuu ve organické vvtělku 1 vr s !; vy vy s tiš er í m o i 82 síranem sodným . F' —MS m/e 413

2H NMR (300 MHz. 3'-H). 6,17 (do

CD, OD). <5 1H, 1 -H)

3,90 (m, 8.30 (s.

3H, 4 -H. 5 1H. S-H).

odpařením ve M

4.5^ ííi. 1H

Při klad 7

2-Decxy-2,2-diflucr-D-ribofuranosyl-1-p-(2-amino-6-kyanopuri n )

Do s mě s i kvs n i o u mě dnéh o ( 1 mmo 3 , 8 9,5 mg 1 v pyr i dm v ¹ 5 m i ) se vnese 2-deoxy-2,2-di f1uor-D-r i bo fur snosy i-1-p-(2-ami no-6-j odpurin (0,25 mmol. 164 mg o 63% čistotě^!. produkt podle přikladu 6. Směs se zahříváním udržuje na teplotě 130 až 135 '0 po dobu lOmir.ut a odpaří se k suchu. Získaný Černý zbytek se extrahuje dpaři ve

tcnitri 1em (	3 x	5. ml ) . Spojené ext	rekty	se o d ρ
skaný zbytek	se	extrahuje horkým	i S Q prO	pěno i em
né extrakty	s e	'•cpe.ř: ve vekuu ξ	z í s k*á	se pevná
Deoxy-2,2-di	f 1 ’: -	• r-D-r i bc fůranosy 1 - 1	-8-(2-	= m i n o - 6 -

purin) se získá si 1 ikage1 ovou chromatografií ve výtěžku 20 mg (26 % teorie). FD-MS m/e 312 = M

NMR (300 MHz, CD_;OD), 6 3.90 (m,

3'-H), 6,27 (dd, IH, l'-H), 6,48 (s,

3H, 4'-H, 5 -H), 4,57 (m, IH IH, 8-H).

Příklad 8 í-Peoxy-2,2-di f1uor-D-ri bo furanosyl-l-β-(2-ami no-6-karboxami dopurin) rm

2-Deoxy-2,2-di f1uor-D-ribofuranosyl-l-β-(2-amino-6-kyanoputo,15 mmol, 47,0 mg), produkt pcdie přikladu 7, se vnese do methanolu (2,5 mi) a vody (2,5 mi) a ochladí se na

Jotu -10 ^;C

Hodnota pH roztoku se nastaví na 8,5 koncentrovaným roztokem hydroxidu amonného. Přidá se peroxid 30¾ roztok) a reakční směs se nechá ohřát Po dvou hodinách se přidá peroxid vodíku (0,02 mi a reakce se nechá probíhat po dobu další jedné hodiny. 2-Deoxy-2,2-dif1uor-Dribofuranosyl-l-β-(2-amino-6-karboxamidopurin) se získá odpařením rozpouštědla. FD-MS m/e 331 = M+l iH NMR (300 MHz, CD;OD), 5 3,90 (m, 3H, 4'-H, 5'-H), 4,57 (m, IH 3'-H), 6,28 (dd, IH, i‘-H), 8,38 (s, IH, 8-H).

vodíku (0,24 mmol, 0,02 mi, na teplotu místnosti.

Příklad 9

2-Deoxy-2,2-di f i uor-P-ri bofuranosyl-l-β-(2-hydroxyadenos i n)

Ro ztek 2-de oxy-2,2-di f i uor-D-ribo furanosyl-1-(2,6-di ami nopurin)u (2 mmol, 604 mg), dusitanu sodného (12 mmol, 828 mg) a vody (15 ml) se ohřeje na teplotu 60 ^rC a zpracovává se ledovou kyselinou octovou (1 mi). Po 5 minutách se roztok ochladí na teplotu místnosti. 2-Deoxy-2,2-di f i uor-D-r ibo furanosyl-l-β-(2-hydroxyadenosin) se čisti vedením přes HP20 pryskyřici za eluování

methanolem i	a p £. k V 0	dou. Vodr.	á vrs	tvs	s e	odpaří ve vakuu.
FD-MS m/e 303 = M
-H NMR (300	MHz, CP	iOP), 6	3,70	(m,	3H,	4'-Η, 5'-H) , 4,44 (m
3'-H), 5,93	( G 0 , 1H	, 1'-H),	7,86	(s,	IH,	8-H) .

1H

RHHiga

2-Deoxy-2,2-dif i uo-r-D-ribofursnosyi-l-β-(2-f 1 uorsdencsi n)

Do roztoku 2-de oxy-2,2-di f i uor-D-r i bof ursnosy 1-3 , 5-diber.zoyi-1-(2,6-diaminopurin)u (2 mmoi, 1,02 g,. ve směsi fluorovodíku a pyridinu (17 ml za poměru 60 : 40) se při teplotě -30 'C přidá tero·-butvinitrit '2,3 mmol, 0.33 mi). Směs s? míchá minut, viije ridem. Oros hvdrooenuhii ·„ U -· .

vody a oddělí se extrakci metný 1enchlose promyje vedou a nasyceným roztokem nu sooné no a ounar i se ve se c·: iec:v li cká vrsdva 'akuu. Čistěním siliksgeiovou chromatografií se ziská 2-deoxy-2.2-difluor-D-ribefuranosyl-3,5-dibenzoyi-l-(2-fIuoradenosin) (500 mg,

Tento meziprodukt (2 mmol. 1,03 g) se rozpustí v (50 mi) a zpracovává se i ithiumaluminiumhydridem (1 mmol, 38 mg). Získané směs se míchá v prostředí dusíku po dobu dvou hodin. Přidá se 1 ithiumeluminiumhydrid (4x1 mmol) do směsi v průběhu 48 hodin. Reakce ss ukončí přidáním vody po kapkách a reakční směs se vlije do vody (100 mi). Produkt se extrahuje do ethylacetátu, promyje se solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se ve vakuu. Přidáním methylenchloridu se získá 2-deoxy2,2-difiuor-D-riboíuranosyi-1-p-(2-fiuoradenosin) ve výtěžku 425 mg (70 % teorie) ve formě pevné látky, která se oddělí filtraci. FD-MS m/e 305 = M, FD—FAB m/e 306,08176 = Μ + 1 (vypočteno

306,08137) •;H NMR (300 MHz, CDjOD), 5 3,88 (m, 3H, 4 -Η, 5'-H), 4,56 (m, 1H 3'-H), 6,18 (dd, 1H. l'-H), 8,08 (s, 1H, 8-H).

% teorie) .

tetrahydrofuranu

V podstatě stejným způsobem jako podle příkladu 1 za použití vhodné nukieobéze se získají sloučeniny podle přikladu 11 až 14.

Přiklad 11 ’

2-Deoxy-2,2-di fluor-D-ri bo fůranosy1-1-β-puri n

FD-MS	m/e 2^3	= M	+ 1
-H NMR	i 3.00' MHz ,	OD ;	OD) , 6	Q O 3	t ^m .	3H, 4 -F.	5 ' -H)	4,57 (τη . 1 H
3'-H),	6,47 (d d,	1H,	1-H),	8 , 80	{ s ,	1H, 8-H).	3,97	(s, 1H, 2-H).

9,11 (S, 1H, 6-H)

Příklad 12

2-Deoxy-2,2-dí f iuor-D-ri bo fursnosyi-l-β-l2-ami nopuri n)

FD-MS m/e 287 = M 'H NMR (300 MHz. CD-OD), 5 3,84 (m, 3H, 4'-F, 5’-H), 4,52 (m, 1H,

3'—K), 6,22 <čd, 1H, 1'-Η}, 8,30 (s, 1H, 8—H), 8,97 (s, 1H, 2-H),

8,56 (5, 1H, 6-H)

Příklad 13

2-Deoxy-2,2-di f1uor-D-ribo fursnosy1-l-β-(2-ami no-6-methylpuri n) FD-MS m/e 301 = M

2H NMR (300 MHz, CD;OD), d2,O5 (s, 3H, 6-Me), 6 3,88 (m, 3H, 4'-H,

5'-H), 4,58 (m, 1H, 3'-H), 6,22 (dd, 1H, l'-H), 8,23 (s, 1H,

8-H) .

Příklad 14

2-Deoxy-2,2-di fluor-D-ribofuranosyi-l-β-(6-chlor-7-deazapuri n) FD-MS m/e 514 =M+ 1

Příklad 15

2-Deoxy-2,2-di fluor-D-ri bofursnosyi-l-β-(7-deazasdenosi n)

2-Deoxy-2,2-di f1uor-D-ribofuranosyi-l-β-(6-chi or-7-deazapurin) (3,54 g, 6,89 mmol), produkt podle příkladu 14, se zpracové roztokem nasycený amoniak/methano1. Roztok se zahříváním udržuje na teplotě 80 ‘C po· dobu 48 hodin, přidá se voda a směs se odpaří, čímž se získá 2-deoxy-2,2-difiuor-D-ribofuranosyl-l-p-(7-deazaadenosint) ’ ve formě pevné látky izolací s i 3 i kage i ovou chrematografií ve výtěžku 1,54 g (76 % teorie) Analýza pro C ·. ; H _; ; F. N ₄ O ? . 0.5 H.O

H 4,44 H 4,50 vypočteno :

44,75 4 4,87

FD-MS m/e 287 = Μ + 1

18,93 18 , 86

Př í kled 16

2-Deoxy-2,2-dif i uc-r-D-r i bo f uranosyl- l-β-( 2 .. 6-chi orpuri n :·

Do rozteku 2,6-dichlorpuri nu (15 ir.mc· 1 2 84 c ’> ve 15Q mi bezvodého tetrahydrofuranu se přidá trifenvifosfin (16,8 mmol, η·,τπ ? ; z ? o C ) . ? Z ^r:· Γ Π ~

Z C Q C ) S Č i τ bj v Ί <a ? n -d V ~ Vj o v y t έ ή· ( ]_ β Ρ.

P-ribcfuranosyi-3,5-dibenzcáz <15 mmol, 5,57 g) . P.ozzok se michá nři teplotě mistne sni v orostředí dusíku přes noc , čímž se získá j a.ko i t o me z ipr o dukt 2 — d e o xy - 2 , 2-di f 1 uc-r—D-r i bo f ur s n o s v 1 — 3 , 5-di — benzoyi-l-β-(2,6-chicrpurin) (ve výtěžku 3.78 g, 46 % teorie).

meziproduktu se odstraní chránící skupiny přidáním diisopropylaminu v methanolu. 2-Decxy-2,2-diflucr-D-ribcfuranosyl-l-S-(2,6chiorpurin) se izoluje reverzní fázovou chromatografií HPLC.

^:H NMR (300 MHz, CD?OD), <5 3,93 (m, 3H, 4'-F, 5'-H), 4,60 (m, IH, 3^--H), 6,34 (dd, IH, 1'-H), 8,54 (s, IH, 8-H).

Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I se mohou podávat nejrůznějšími cestami včetně orální, rektální, transdermáini, subkutánní, ínnravenozni, i noramuskuiérní s inurasasáiní cesty.

Vynález se také tyká farmaceutických prostředků, obsahujících sloučeninu podle vynálezu obecného vzorce I nebo její farmaceuticky vhodnou sůl spolu s farmaceuticky vhodným nosičem, ředidlem nebo excipientem. Sloučeniny obecného vzorce I se s výhodou před podáním zpracovávají na farmaceutické prostředky.

Na účinnou látku v takových farmaceutických prostředcích připadá hmotnostně 0,1 až 99,9 %.

Farmaceutické prostředky se připravují o sobě známým způsobem za použiti snadno dostupných složek. Pro výrobu farmaceutického prostředku se účinná látka s výhodou misí s nosičem nebo se ředí nosičem nebo se uzavírá do -nosiče, kterv může mít formu kapdidiem, může to být pevný, polopevný nebo kapa iný.mater iá1 , který působí jako pojidlo, excipient nebo prostředí pro účinnou látku. Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou miz proto formu tablet, t>i 1 u 1 ek . prášků, kos o čtve reč ku. sáčků, elixíru, susretii, sle, sáčku, papíru nebo jiného cd

Pr.Vi je nosič současně řssuspensí, emulzi, rozxoku, sirupu, aerosol kapalně prostředí), mastí, obsahujících na 10 % účinné látky, měkkých sterilních vstři kováte iných

Jakožto příklady vhodných (jakožto pevné nebo i klad až hmotnostně tvrdých želstinových kapsli, čípků, stoků a sterilních balených prásků.

uvádějí iaktčza, dextróza, sacharózs, scrbi i-; o· v stíná a k a o i a , z o s £ o· r e c n s n v a ρ e n a t v , s; latina, křemičitan vápenatý, mikrckrystaiická celulóza, poiyvinylpyrrol iden, celulóza, vodný sirup, methyl celulóza, methyihyóroxyben.zoáz a prc-cylhvcroxybenzoát . mastek. stearát hořečnatv a minerální olej. Framaceutické prostředky- mohou přídavně obsahovat mazadla, smáčedla, emuigační a suspenzační činidla, konzervační činidla, sladidla nebo chuťové přísady.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu se mohou formulovat prodlouženě nebo odložené uvolňovaly účinnou nemocnému. rostředky se s výhodou formulují v jednotkové dávkovači formě, přičemž každá dávka obsahuje přibližně 0,1 až přibližně 3000 mg, zpravidla přibližně 1 až přibližně 500 mg účinné látky obecného vzorce I. Skutečnou velikost podávané dávky vždy stanovuje lékař se zřetelem na okolnosti, jako jsou ošetřovaný stav, druh podávané sloučeniny, cesta podáno, věk, hmotnost a odezva jednotlivého ošetřovaného jedince a závažnost symptomů, a proto shora uvedené jako nějaké omezení.

Následující formulační příklady objasňují vynález, jej však neomezuji.

tak, aby rychle, látku po podání msnm škrobv dávkv nejsou mí něnv nijak

Příklad farmaceutického prostředku 1

Tvrdé želatinové kapsle se účinná látka’ škrob, sušený stearát hořečnatý celkem

Uvedené složky se smis; a připravují z následujících složek Množství (mg/kapsle)

250

200

60 mg plní se do tvrdých žeiatincvých

- 19 kapsli v množství 460 ma.

Příklad farmaceutického prostředku 2

Tablety se připravuji z následujících složek:

Množství (mc/tablefa) / X» ” y“. *»« —. t X» *· «· «“«

V v X Γ. . i O. i c. u Ti. c.

celulóza, mikrckrystaiická oxid křemičitý, subiimovany kyselina stearová celkem

Uvedené složky se smis: hmotnosti 665 mg.

a siisuoi se

50 400 , O

10.0 5 , O

665, O mg tablety vždy o

Přiklad farmaceutického prostředku 3

Aerosolový roztok se připravuje z následujících složek:

Množství (mg) úí i nná 1atka 0.2 5 ethano i 29,75 hnací prostředek 22 (chiordifluormetnan) 70,00 ceikem 100,00 mg

Účinné, látka se smísí s ethanolem. Směs se vnese do části hnacího prostředku 22, ochladí se na teplotu -30 ^:C a převede se do plnicího zařízení. Požadované množství se pak vnese do obalu z nerezavějící oceii a zředí se zbytkem hnacího prostředku. Nádobka se pak vybaví ventilem.

Přiklad farmaceutického prostředku 4

Tablety, obsahující vždy 60 mg účinné látky, se připravují z následujících složek:

Množství (mg) úč i nná 1átka 60,O škrob 45.0 ——

- 2 0 celulóza, mikrokrysta i ická

po 1 y vi ny i pyr r o 1 i don (10% roztek ve	v ode ) 4,0
natriumkarbcxymethyiováný škrob	4,5
stearát hořečnatý	0,5
mastek	1,0
celkem	150,0
Účinná látka, škrob a oelul:	za sž vedou sítem Nc.45 mesh
U.S.' (průměr ok 355 mikrometrů; a	důkladně se promisi. Se ziska-
ným práškem se smísí roztok polyvi	.nyipyrroiidonu a směs se vede
sítem Nc . 14 mesh U.S. (průměr ok 3	L40C mikrometrů). Takte získané
rr ** p — 11 ’ a s z, c ' ·, ě ' -!-··> ή · o rt s r\ 4- a C. Q ' C*	a vedou sítem No.13 mesh U.S.
(průměr ok 1000 mikrometrů). N«	střiumka r bo zyme thy i o van ý škrob,
stearát hořečnatý a mastek se védo	'u sítem No. 60 mesh U.S. (prů-
měr ok 250 mikrometrů), přidají se	do granulí, promisi se a směs
se lisuje na tablety vždy o hmotnos	ti 150 mg.
Příklad farmaceutického prostředku	5
Kapsle, obsahující vždy SO mg	účinné látky, se připravuji
z následujících složek:	Mr.ožství (mg/kaps 1 e )
uč i ΓίπΗ i atka	SO, 0
škrob	59,0
mikrokrystalické celulóza	59.0
stearát hořečnatý	2,0
celkem	200,0
Účinná látka, celulóza, škrob	a stearát hořečnaté se smísí .

vedou se sítem No.45 mesh U.S. (průměr ok 355 mikrometrů) s plni se se dc tvrdých želatinových kapsli v množství vždy 200 mg.

Fřiklad farmaceutického prostředku 6

Šípky, obsahující vždy 225 mg	účinné látky, se připravují
z následulicích složek:

x o u. · u. Ί. U - i i i ic. ς O >- r. r.

Ml ·ζ ·'. λ ( ( iTlQ ) 77 z

aaszK-Wm glyceričy nasycených mastných kyselin de 2000,0

Účinná látka se vece sítem No.60 mesh U.S. (průměr ok 250 mikrometrů,) a suspenduje se v glyceričech nasycených mastných kyselin, předem roztavených za použiti minimálně nuzného tepla. Směs se lije do formy na čípky o nominální kapacitě 2,0 g a nechá se ochladit.

zříklad farmaceutického prostředku 7

Suspenze, obsahující vždy 50 mg účinné látky v 5,0 připravuje z následujících složek: účinná látka natriumkarboxymethyicelulóza sirup roztok benzoové kyseliny chuťová přísada barvivo čištěná voda do

50,00 mg 50,00 mg 1,25 mg 0,10 ml

g.v.

5,0 mi

Účinné látka se vede sítem No. 45 mesh U.S. (průměr ok 355 mikrometrů a smísí se s natriumkarbcxymethyicelulózou a se sirupem za získání hladké pasty. Přidá se za míchání roztek kyseliny benzoové, chuťové přísady a barviva, smisených s trochou vody. Pak se přidá dostatečné množství vody k dosažení požadovaného objemu.

Fříkiad farmaceutického crcstředku 8

Farmaceutický prostředek pro inťravenczn: vuje z následujících složek:

podání se připraičinná látka sotonická solanka

250,00 mg 1000,00 mg

Roztok shora· uvedených složek se podává i nťravenozně ostí 1 ml za minutu případně ošetřovaným jedincům..

ráV V Π S i 6 6 ·? Γ mů v případě s t ý k á opus c b u oset ř o v á η í c i t i iý z h n e o ρ 1 a s podáváním savcům kteří rakové ošetřen, potřebuji, farmaceuticky účinného množství sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I.

Sloučeniny obecného vzorce I a jejich farmaceuticky vhodné soli jsou překvapivě výhodné pro ošetřováni živočichů trpících chorobnými stavy způsobenými nádory. Takové ošetření podie vynalezu zahrnuje jak případné léčebné tak případné pro fy1 aktické cokclnosfi, jako jsou například určitá podávaná sloučenina, cesta podáni a ošetřovaný stav. Sloučeniny jsou účinné při podáni orálním, topickým nebo parenteráiním. Topickcu denní dávkou je 1 mg/m· až přibližné 1OGO mg/m- sloučeniny obecného vzorce I. Účinnost, representativních podávaných sloučenin podle vynálezu se dokládá zkouškami běžnými pro pracovníky v oboru pro možné používání slcučnin obecného vzorce I jakožto pevných ných nebo nepevných protinádorcvých drog. Například se takových zkoušek používá pro doložení protinádcrové účinnosti obchodně dostupných protinádorcvých drog, jako například alkaloidů vinca. Takové zkoušky popsal Miller a kol., J. Med. Chem. 20, číslo 3, str. 409, (1977): Sweeney a kol.,

2886, (1973) a Grindey, Cancer Cells 2, str

Cancer Research, 33, str.

3 i 1990). Re prs.vni sloučeniny podie vynálezu obecného vzorce I jsou cytotcxické. jelikož inhibují růst rychle se vyvíjejících buněk lidské 1 e uke m i e (CCRF—C2M buněk). V tabulce I i s o u uve c. e n v v v s i e c k v zkoušení některých sloučenin obecného vzorce I. V tabulce I ve sloupci 1 jsou representativní sloučeniny a ve sloupci 2 jsou uvedeny hodnoty IC;.-. (koncentrace, potřebná k 50% inhibici růstu) v pg/ml. Sloučeniny, mající hodnotu IC;; menší než 20 pg/mi se používají za aktivní.

Tabulka I

Sloučenina IC; (u/ml

a) 2-decxy-2,2-di f1uor-D-ribufursnosyi-1-6(2-amino-6-chlorpurin), (přiklad 1) 0,007 (b) 2-deoxy-2,2-difiuor-D-ribufuranosyi-1-β(2-aminc-6-methoxypurinj, (příklad 2) ' 0.037 ( c ) 2-dec :<y-2 , 2-d. i f 1 nor -D-r i buf ur anosyi-1-β(2-amino-ó-ethixypurin), (příklad 3) 0.200 (d) 2-de cxy-2,2-čifiuor-D-ribufurenosyi-l-p( 2-amine-6-dimethyi amine·purin ) , (přiklad 4) ve) 2-deoxy-2,2-di fluor-D-r ibufuranosyi-1-β( 2-ami no-6-methy i ami nopur i n ) , přiklad 5)

(. f ) 2-deoxy-2,2-di fi uor-D-r i buf uranosyi -i-β(2-amino-6-jodpurin), (přiklad 6) (o ' 2-d e c-xy-2,2-di f1uor-D-ri bufuranes y i-1 - β(2-amino-ó-kyanopurin), (příklad 7) (h) 2-deoxy-2,2-di£1ucr-P-ribufuranosyi-1-β(2-amino-ó-thiopurin). (příklad 8’ (i ) 2-óeoxy-2,2-di f1uor-D-ri bufuranosyi-1-β(2-hydroxyadenosin.) , (příklad 9) 0,700 (i) 2-deoxy-2,2-difiuor-D-ri bufuranosyi-1-β(2-f1uoradenosin), (příklad 10) (k) 2-deoxy-2, 2-difiucr-D-ribufuranosyi-1-βpurin, (příklad 11) (e) 2-áeoxy-2,2-di f1uor-D-ribufuranosyi-1-β(2-amino-6-methylpurin) , příklad 13)

4.600

0,054

O , 093

2,500

4,300

0,094

1, 300

2.600

Pr o da i š i do loženi ného vzorce I ošetřov zkoušejí sloučeniny pod systémem odpoví dajícím HCI lidského karcinome schopnosti slouč t citlivé neopi e přikladu 3 a HCI lidskému získali v roce

e ni n po dle vyná1	ezu obec-
asmy v případě	savcú se
5 na savcích s	nádorovým
karcinome. Tento	xenoroub
1987 Dr. Peter	a Janet

Kcughton, v dětské nemocnici sv. Judy, (St Jude Chiiderns Hcspital ) , Memphis, TN . Nádor je mírně diferencovaným adenokarcinc-ma (British Journal of Cancer, 37, str. 213 až 223, 1987). První pasáž nádoru se ukládá v kapalném dusíku ze použití o sobě známých způsobů. Nádory se udržují y řadové pasáži Nu/Nu CD-I myši (Charles River Laboratories, Fortage, MI).

Studie zkoušky účinnosti sloučenin ' obecného vzorce I proti nádorům HCI lidského karcinome se iniciuji odstraněním nádoru z pasáže zvířat a rozřezáním na 1 až 3 mm čtverečkové fragmenty za použiti sterilního způsobu. Vzorky nádoru se zkouši na sterilitu za použití jak antibiotického prostředí 1 tak mozko srdeční infuze (Pifce. Detroit, MI); Kousky nádoru se implantují subku-

- 25 14 dni ο č k i 5 d.

05 0.5 1.3.5.7.9 92 0 / 8 dni odklad

Vynalez se rovněž tyká způsobu ošetřováni virových infekci v případě savců, při kterém s? savcům, kteří takevé ošetřeni potřebují . podává antivirově účinné množstvi sioufenitv obecného· vzorce 1 .

Sloučeniny obecného vzorce I a jejich farmaceuticky vhodné soli jsou účinné při ošetřovaní virových infekci běžným způsobem sobenýcvh nezrůznějšími viry a především infekci virem rodu Herpes. Typické virosy, proti kterým jsou sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I použitelné, zahrnuji všechny A a 3 kmeny chřipky, para-chřipky. respirační synoytiálni viry, různé Echo a vaccinis viry, meales, Semiiki Forest a retroviry, viry hepatitis B, lidský Cytomegaiovirus a virus lidské nedostatečnosti imunity a eitologické činidlo pro získaný syndrom imunní nedostatečnosti (AIDS).

Sloučeniny obecného vzorce I se používají pro potírání virových infekcí o sobě známým způsobem pro ošetřováni takových chorobných stavů. Antivirovou účinnost sloučenin podle vynálezu obecného vzorce I potvrdily zkoušky in vitro dále popsané pro ilGSEV Cvtomeca 1 ivirus

.ativními sloučeninami podle vynálezu.

Zkouška lidského Cytomega 1oviru

Buňky WI-38 (ze sbírky American Type Culture Cciiection,

CCL-35) se očkují na destičku se 24 důlky do prostředí ME (GIBCO), doplněného 10% zárodečným hovězím šerem a systémem penicil1 in/streptomycín. Destičky se inkubují při teplotě 37 ^;C v 5% oxidu uhličitémve zvihčovaném inkubátoru po dobu tří dnů. Do každého důlku se vnese· didský Cytomeca1ovirus (HCMV) kmen AD169 (ze sbírky American Type Culture Cciiection) (40 destičky vytvářejících jednotek ve 100 ul prostředí) a virus se nechává absorbovat buňkami po· dobu dvou hodin při teplotě místnosti. Sloučenina podle příkladu 5 se rozpustí ve 100% dimethvisuifoxidu v koncentraci

- 27 z LTK-CAT-ne· cc se. j po ochy pTHBV po čvcuu bá-'^v« íé£/.ci ! ii ΐ, - ir: rescticr.'“) s Kí eRowevvm fisainentem £. cc 1: DNA poiymerasy I.

Buňky a transfekce

KepG2 buňky < lidsky heretcblastcma

ATCC KB 3065') se vym prostředím sestávajícím z prostředí HAKLE (Grand Island Biclogical Company (GIBCO( Bethesda' Research Laboratories (BRL! Life TechnoIοσί es, Irc. , Gathersburσ, MD) , ccpi ně — něm pyruvátem sodným, 10 % jednotkami/mi peniciiiinu a 100 no rír ‘ <

μσ/mi streptomycinu. HeplOA buňky jsou odvezeny cg HepG2 buněk. HspG21 buňky se očkuji do 60 mm kultivačních misek dc růstového prostředí a po přibližně 50% slinuti ss transfektuji s pTH3Vneo za použití způsobů srážení fosforečnanem vápenatým, jak popsal F.L. Graham a Van der Eb, Virology , 52, str. 456 až 467, 1973. Po čtyřech hodinách posttransfekce se buňky zpracovávají 10 % dimethylsulfoxidu a 20 % glukózy po dobu 5 minut, načež se ponechají po dobu 24 hodin. Transfektovaně buňky se pasažuji a reočkuji v přítomnosti růstového prostředí o· os ahuj í o i ho £00 ug/ml geneticinu. Buňky se moniterudí se zřetelem na výskyt buněk odolných geneticinu. Stanoví se buňky odc-lné geneticinu a o sobě známým způsobem se pasažuji v růstovém prostřed;! obsahujícím geneticin. Tato buněčné řada se označuje jako HeplOA.

Ošetření drogou a analýza Southern Bict

Buňky HeplOA se očkují dc 96 dálkové mikrotitrové destičky v hustotě přibližné 50000 buněk na důlek, nechají se růst do slinutí a udržují se v tomto stavu po dobu ab\^T se od viru’Hep-ati tis B odvozené hladiny HBV PNA stabilizovaly (M.A. Sells a kol., J..Virol. 62, str. 2536 až 2644, 1937 s B.E. Korba a ko'i . , Antivire! Res., 15, str. 217 až 223, 1991).'V této chvíli se buňky ošetřují 2'deoxy-2'-fiucrsrabinc-5-jocuridinem (FIAU) a sloučeninou podle příkladu 5 po dobu 10 dni za denní výměny pro· středí obsahuj i čího čerstvou drogu. FI.AU se

PCR potřeby.

se provádí na vzorcích supernatantu za použití vhodných primerů ke zvětšení fragment; 477 páru bází z determinantu a povrchově antigenového genu HSV subtypu asw. Po e1ektroforese auarosovym gelem se DNA převádí ne nylonovou membránu (Opt ibl ot - , IBI, Hew

1?75 Ί ze neužiti IX . . ; χ .. - v C C ·O Τ't ·- i - τη • * J λ»' 4. * « «Μ u* W.’ ·. — >» u· *. * u- — u

Haven, CT) kapilárním působením (Scuthe = 0,15 M chloridů sodného, 0,015 M oitra pel ně v= vakuu po· dobu 2 oistickěhc. zpracováni ‘ or i mi no } :,Feonberg a vo ge 1 sta i η , 1932;.

teplotě 4 2 ^; C z = -už i*i 50¾. N N-dim--hy 11 or mami du, 6X se lankové natriumfosfátethyl er.diami ntetrsootové kyseliny (SSPZ), 1,0 % natřiumdodecyisul fátu (SDS) a 50 ug/ml lososového sperma DNA (IX SSPB — 0, IS M chlorid, sodnv, 10 r.M dihvdrogennatriumíosíát, hodnota pH 7,4, 1 mmol ethylendiamintetracotové kyseliny (ZDTA)j. Hybridizované skvrny se promyjí tímto způsobem: dvakrát 2X SSC/0,1 % SDS při teplotě místnosti po dobu j * d Γ; £ h q d Σ. 11 v 16 cn c u 0 1 X 5 S O ^z' Co 1. 5 D — t? »73 : * x no 5 ~ γ ·« * ~ mu = hodriomi ss ·:.??.«i :ιγι®tričky. Výsledky hcdriscsní js.o svedeny v e ~ r*, 11 *: r» λ y \ 7 *T Ξ. 3? 12 i k s. I V

Prccsr.xcvs inhibice desciíek icři sos c i í i ke vsne uQ/mi k<ncsr.xrsci Slc.čer.ina 0.1 1,0 10,0 100,0 o i 5 př í k i sdu 5 5 ť . 9 51 c * a 5 c o

F ϊ Λ U 1 f'· - 5 c. r. Ci

Ze s h o r 5 ¹2 v ^a d ^& n y ~ h ~ · ·* ~~ ” *7 v * v v sloučeniny podle příkladu 5. potřebná k inhibioo HBV DNA replikace o 50 % je 5.4 u/rni a měrně než 0.1 ;.·'mi .

Průmyslová využitelnost :e konceoitrsoe elAU

- t . S-5’;r3‘.;t;::v5.r;ych ? pur i nm;k v;n:vych a protivirovýoh činí

Claims

Η A Τ Ξ N Τ O

1. Der i váz 2'-deoxy-2',2' rinnukieosicu obecného vzorce

VE NÁROKY či f i uor-(2,6,8-subs ti tucváného)puI (I) : r*>

kde zněměna

P. n a s obě nezávisle aikyiovo skupí nu. alkoxyskupinu, amino v:d i ku, hydroxyskupinu. kyan a 1kylovo u skupinu, hydrazidos

u skupinu, haiogenaikyiovcu skupinu, atom haiogenu, atom oskupinu. thioskupinu, thiokupinu, karboxsmideskupinu, skupinu, sulfi námidoskupinu, kupí nu. hydr oxyami no· skupí nu kylaminoskupinu, O(aryi), ), nebo N(substituovany aryi) aminoskupinu, monoa1kyi smikoxyskupinu, nebo thioaikythio smidoskupinu. sujfonamido sikyleminoskupinu, t h i o a m:nos monoa 1 kyl ami noskupi nu . dis.1

O(substituovaný aryi), Nl.srvi R= atom vodíku, hydroxyskupinu, noskupinu. atom haiogenu, si iovou skupinu, eho farmaceuticky vhodná sul.

•r·»

2. Derivát 2’-deoxy-22 rinnukieosidu podle nároku 1 zahrnuj í čího (a) 2-deoxy-2,2-dif1uor-D-r chlorpuri n), (b) 2-deoxy-2,2-difiuor-D-r

-di f1uor-(2,6,8-substituoveného)pucbeonéhc vzorce I, volená ze soubor’·.

bufuranosy!-l-β-(2-ami no-6bufur snosy i- 2-amino-6methoxypurin), (c) 2-deoxy-2.2-di f i uor-D-ri bufuranosyi-1-β-(2-ami no-6ethoxypurin), l d) 2-de oxy-2,2-di f1uor-D-r i bufuranosyi-l-β-(2-ami no-6di me thy i ami nopuri n), 'e) 2-deoxy-2,2-di f1uor-D-ri bufuranosy1-l-β-(2-ami no-όπιο thy i amincpurin), (f) 2-deoxy-2,2-di fi uor-D-ri bufur anosyi-l-β-(2-amino-6jodpurin), (g ) 2-deoxy-2, 2-di f i ucr-D-r i buf ur snosy 1 - l-β - (. 2-smi nc-6kyanopuri n), (h') 2-deoxy~2,2-di f i uór-D-r i buf uranosy 1 -1-β-( 2-ami no-6— thi opurin), (i) 2-deoxy-2.2-di f i ucr-D-r i bufur anosv1-l-β-( 2-amino-6k a r b o x a m i d c p v r i n ; .

{j) 2-deoxy-2,2-di f1uor-D-ri bufuranosyi-l-β-(2-hydroxyadenosin ) ' h : 2-de oxy -2.2-di ř i u ?r-P-r i buf ur a .oc sy} - 1 - β- ( 2-ami no-6• h i opurin > , ( i } 2 - c ? c z v ^_ 2 , 2—d f z u o r—L' — r i b u i u r a n o s y i — 1 — β — ( 2—amino—c— k a r b o x a m i d o ρ u r i n ;

í j j 2-de oxy-2 , 2-di f i ucr-D-r i buf ursr.osy 1 -1-S- < 2-hydr oxy a den o a i n ) , (k) 2-deoxy-2,2-di f iuor-D-ri bufursnosyi-l-β-i2-fi uoradencsi n) ur) 2-de oxy - 2.2-d.i f i uc r -D-r i bufur ano s y1-1- 6- <, 2- ami n.c-6methy i pur i n), ' n 2-de oxy — 2,2—di f i uo r — D—r i bu f ur an z s v i — i — 5 — i 6 — o h i or — o — če sz spur i z’.

(o) 2-de oxy-2.2—difiuor—D—ribufursnosvi — i — β—< 2 6 — dichior-3-deazspurin), (p) 2-decxy-2,2-dif1uor-D-ri bufursnosyi-l-β-(6-amino-3deazapur i n), (σ) 2-deoxy-2,2-di fi uor-D-ri bufursnosy1-l-β-(2,6-chiorpuri n). a její farmaceuticky vhodnou sól.