CZ144099A3 - Způsob přípravy methylidenmalonátových nanočástic, nanočástic případně obsahujících jednu nebo několik biologicky aktivních molekul - Google Patents
Způsob přípravy methylidenmalonátových nanočástic, nanočástic případně obsahujících jednu nebo několik biologicky aktivních molekul Download PDFInfo
- Publication number
- CZ144099A3 CZ144099A3 CZ991440A CZ144099A CZ144099A3 CZ 144099 A3 CZ144099 A3 CZ 144099A3 CZ 991440 A CZ991440 A CZ 991440A CZ 144099 A CZ144099 A CZ 144099A CZ 144099 A3 CZ144099 A3 CZ 144099A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- nanoparticles
- group
- formula
- polymer
- range
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
- A61K9/5138—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F22/00—Homopolymers and copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a carboxyl radical and containing at least one other carboxyl radical in the molecule; Salts, anhydrides, esters, amides, imides or nitriles thereof
- C08F22/10—Esters
- C08F22/12—Esters of phenols or saturated alcohols
- C08F22/14—Esters having no free carboxylic acid groups
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Processes Of Treating Macromolecular Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
- Polymerisation Methods In General (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Vynález se týká nového způsobu přípravy nanočástic vytvořených z polymerované methylidenmalonátové sloučeniny, kde tyto nanočástice případně obsahují jednu nebo více biologicky aktivních molekul, a dále se vynález týká farmaceutických kompozic obsahujících tyto nanočástice.
Dosavadní stav techniky
Pod pojmem nanočástice jsou v tomto textu chápány submikronové částice vykazující průměr menší nežli přibližně 500 nanometrů. Nanočástice vytvořené procesem polymerace v emulzi z akylkyanoakrylátu j sou popsány v patentu
EP 0 007 895. Postup použitý při přípravě těchto alkylkyanoakrylátových částic vychází z (aniontové) polymerace monomeru, která probíhá samovolně a ve vodném prostředí. Postup přípravy nanočástic tvořených methylidenmalonátovým polymerem, který používá stejného principu (aniontové emulzní polymerace) je popsán zejména v publikaci F. Lescureho a kol., Pharn. Res., 1994, 11,
1270-1276. Tyto monomery, jejichž příprava je popsána v patentu EP 0 283 364, vykazují strukturu blízkou struktuře kyanoakrylátů, ale s tím, že funkční nitrilová skupina v posledně jmenovaném případě je nahrazena esterem nebo ester-esterem. Obdobně jako kyanoakryláty, tyto látky polymeruj i za studená ve vodném médiu a mohou být biodegradovatelné.
Takto získané methylidenmalonátové částice ovšem vykazuj í určité nevýhody.
Emulzní polymerace methylidenmalonátů ve formě nanočástic prováděná ve vodné fázi a při slabě kyselé hodnotě pH vede ve skutečnosti ke tvorbě oligomerů, zejména potom oligomerů typu trimeru nebo tetrameru, které jsou vysoce biodegradovatelné. Tyto molekulární částice jsou částečně rozpustné ve vodě, takže vytvoření disperze těchto nanočástic ve vodném médiu vede k jejich rozpouštění a k rychlé ztrátě struktury částic (viz. publikace P. Breton a kol., Eur. J. Pharm. Biopharm., 1996, 42, 95-103). Pokud je biologicky aktivní molekula připojena k methylidenmalonátovým nanočásticím, může být tato molekula následně po aplikaci a před vlastním přivedením na místo působení aktivní látky velmi rychle uvolněna v důsledku naředění v oběhovém systému, které způsobuje rychlé rozpouštění oligomerů vytvářejících matrici částic.
Některé experimenty ukázaly, že polymerace prováděná při alkalické hodnotě pH znemožnila tvorbu polymerů s vyššími molekulovými hmotnostmi při udržení velikosti nanočástic. Tyto typy syntézních procesů jsou ovšem charakterizovány:
- nemožností získat polymery, jejichž molekulová hmotnost je nižší nežli 10 000, zvláště potom nižší nežli
000 a které vytvářejí jednotlivé nanočástice, bez současné tvorby agregátů a bez významné přítomnosti oligomerních částic
- nemožností vytvořit polymery, jejichž molekulová hmotnost je větší nežli 20 000, zvláště potom výrazně větší, při vyšších hodnotách pH (vyšších nežli 7), bez nežádoucího vytváření agregátů, které znemožňují intravaskulární aplikaci těchto přípravků.
Pod pojmem molekulová hmotnost je v tomto textu chápána hmotnostní průměr molekulové hmotnosti (nebo průměrná molekulová hmotnost), která je definována vztahem:
O
Mw = Σ ni . Mi / Σ ni . Mi, zatímco symbol Mp vyjadřuje molekulovou hmotnost kvantitativně nejvíce zastoupených komponent.
Ve zbývající části popisu je molekulová hmotnost vyjádřena s pomocí polystyrénových ekvivalentů (Ep).
Tento způsob přípravy proto není vhodný v případě, kdy je potřebné získat methylidenmalonátové nanočástice vytvořené z:
- polymerů, jejichž průměrná molekulová hmotnost se pohybuje v rozmezí od přibližně 5 000 do přibližně 10 000 a která se ve výhodném provedení pohybuje přibližně kolem 8 000,
- polymerů, jejichž průměrná molekulová hmotnost je vyšší nežli 20 000 bez vytváření agregátů.
Podstata vynálezu
Tento vynález se tedy týká přípravy methylidenmalonátových nanočástic, jejichž průměr je menší než 500 nm a ve výhodném provedení se pohybuje v rozmezí od 100 nm do 500 nm, kde tyto nanočástice jsou vytvářeny z homogenních molekulových částic, jejichž hmotnosti se pohybuj i v širokém rozsahu (molekulová hmotnost Mw se pohybuje v rozmezí od 2 000 do 80 000). Princip této přípravy spočívá v rozpuštění monomeru v aprotické organické « · • · fázi, která je mísitelná s vodou, ale která za podmínek přípravy nanočástic vytváří s vodným polymeračním médiem ne-rozpouštědlovou směs vytvořeného polymeru.
Pod pojmem aprotická organická fáze nebo aprotické organické rozpouštědlo je v tomto textu chápána organická fáze nebo rozpouštědlo bez labilního protonu, která je schopná iniciovat anion.
Způsob přípravy v provedení podle vynálezu přináší četné výhody:
- umožňuje vytvoření více homogenní disperze monomeru v polymeračním médiu,
- umožňuje použití nechlorovaných rozpouštědel, která se snadno vypařují, neboř jsou těkavá,
- brání vytváření polymerních agregátů,
- umožňuje dosažení vysokých výtěžků polymerace
- umožňuje při tvorbě nanočástic, jejichž průměr je nižší než 500 nm, vytváření polymerů vyznačujících se homogenní molekulovou hmotností pohybuj ící se v širokém rozsahu (například molekulové hmotnosti Mw pohybující se v rozmezí od přibližně 2 000 do 100 000, ve výhodném provedení v rozmezí od přibližně 2 000 do 80 000).
Tento způsob přípravy dále umožňuje použití disperzních činidel, jako například neionogenních povrchově aktivních látek nebo polymerů chránících koloidní strukturu, což vede ke vzniku částic vykazujících flexibilní povrchové vlastnosti.
Konečně molekulové hmotnosti oligomerů/polymerů, které tvoří nanočástice v provedení podle vynálezu mohou být velmi dobře ovlivňovány nastavením následuj ících podmínek • · • · • · · ·
přípravy:
- koncentrace monomeru v organické fázi,
- hodnoty pH a molarity polymeračniho média,
- charakteru a koncentrace disperzního činidla,
- objemového poměru vodné fáze (polymeračniho média) vůči organické fázi,
- způsobu přivedení organické směsi do vodné fáze.
První aspekt vynálezu se tedy týká způsobu přípravy nanočástic vytvořených ze statistického polymeru přinejmenším jedné sloučeniny charakterizované obecným vzorcem (I)
O
II /C-OR, h2c=c^ (I) ve kterém :
-A představuje skupinu nebo skupinu
R-^ a R2, které jsou identické nebo rozdílné, představuj i lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující od jednoho do šesti uhlíkových atomů;
n je rovno 1, 2, 3, 4 nebo 5;
jehož podstata spočívá v tom, že tento monomer (monomery) je • · · · · · · · · · · « ·· · · · · · · · ·« · • · · « · · « · · (jsou) před polymerací rozpuštěn v aprotickém organickém rozpouštědle mísitelném s vodou, které spolu s polymeračním médiem vytváří nerozpouštějící směs vzniklého polymeru.
Ve výhodném provedení se vynález dále týká způsobu přípravy nanočástic vytvořených z polymeru sloučeniny charakterizované obecným vzorcem (I)
II .C— OR, x (I)
H,C=C^ ve kterém :
-A představuje skupinu nebo skupinu (CH2)n—C—0R2; Ii o jsou identické nebo rozdílné, nebo rozvětvenou alkylovou skupinu a R2, které představují lineární obsahující od jednoho do šesti uhlíkových atomů;
n je roven 1, 2, 3, 4 nebo 5 ; jehož podstata spočívá v tom, že tento monomer je před polymerací rozpuštěn v aprotickém organickém rozpouštědle mísitelném s vodou, které spolu s polymeračním médiem vytváří ne-rozpouštědlovou směs vzniklého polymeru.
« · · · · · · · · · • · · · ···· · · · ·
V · « · · · · · · · · · · · · · • · · · · · · ·
Podle jednoho z aspektů způsobu provedení podle vynálezu je možné připravit nanočástice, jejichž průměr je menší než 500 nm, přičemž ve výhodném provedení se tento průměr pohybuje v rozmezí od 100 nm do 500 nm a jejichž průměrná molekulová hmotnost (Mw) se pohybuje v rozmezí od přibližně 1 000 do 100 000, ve výhodném provedení v rozmezí od přibližně 1 000 do 80 000, ve zvlášť výhodném provedení v rozmezí od přibližně 2 000 do 80 000, podle zejména výhodného provedení v rozmezí od přibližně 8 000 do 80 000.
Způsob v provedení podle vynálezu se zejména skládá z kroků spočívajících v:
- přípravě roztoku přinejmenším jedné sloučeniny obecného vzorce (I) v aprotickém organickém rozpouštědle, které je mísitelné s vodou,
- přidání této organické fáze do vodného polymeračního média při hodnotě pH pohybující se v rozmezí od 4,5 do 10, kde toto přidání je provedeno za míchání,
- získání nanočástic vytvořených po homogenizaci této směsi a odpaření organického rozpouštědla za vakua.
Toto vodné polymerační médium může být rovněž přidáno k organické fázi, která obsahuje předem rozpuštěný monomer, takže podle dalšího aspektu se postup podle vynálezu skládá z kroků spočívajících v:
- přípravě roztoku přinejmenším jedné sloučeniny obecného vzorce (I) v aprotickém organickém rozpouštědle, které je nerozpustné ve vodě,
- přidání vodného polymeračního média k této organické fázi, kde toto přidání je provedeno za míchání a při hodnotě pH pohybující se v rozmezí od 4,5 do 10,
- získání nanočástic vytvořených po homogenizaci této směsi a odpaření organického rozpouštědla za vakua.
Jak je ilustrováno v dalším na příkladech, hodnota pH polymeračního média je volena jako funkce molekulové hmotnosti polymeru, který má být připraven.
Ve výhodném provedení je směs organické fáze a vodného média homogenizována s pomocí kontinuálního míchání prováděného po dobu přibližně 30 minut a poté může být tato příprava případně dokončena s pomocí destilované vody.
Polymer vytváří v polymeračním médiu sraženiny a může být oddělen například procesem filtrace. Takto získaná suspenze nanočástic může být poté podrobena kondicionaci a lyofilizaci.
Aprotické organické rozpouštědlo použité pro vytvoření disperze monomeru (monomerů) musí být představováno rozpouštědlem tohoto monomeru (monomerů), které by rovněž mělo být mísitelné s vodou. Toto rozpouštědlo je ve výhodném provedení vybráno ze skupiny zahrnující aceton, acetonitril, dioxan a tetrahydrofuran, přičemž ve zvlášť výhodném provedeni je zvolen aceton.
Výhodné provedení podle vynálezu se vyznačuje následujícími aspekty:
- koncentrace monomeru (monomerů) obecného vzorce (I) v organickém rozpouštědle se pohybuje v rozmezí od 30 mg/ml do 150 mg/ml;
- molarita polymeračního média se pohybuje v rozmezí od 1/30 M do 1/3 M;
- objemový poměr vodné fáze vůči organické fázi se pohybuje v rozmezí od 3/1 do 20/1, ve výhodném provedení v rozmezí od 3/1 do 15/1.
• ·
Ve výhodném provedení toto polymerační médium obsahuje jedno nebo více povrchově aktivních činidel nebo činidel pro ochranu koloidní struktury.
Těmito povrchově aktivními činidly mohou například být ionogenní nebo neionogenní povrchově aktivní činidla. Ve výhodném provedení jsou použita neionogenní povrchově aktivní činidla, která jsou vybrána ze skupiny zahrnující kopolymery polyoxyethylenu a polyoxypropylenu, poloxamery a polysorbáty. Jako činidla pro ochranu koloidní struktury jsou ve výhodném provedení použity polysacharidové deriváty, jako například dextrany, deriváty celulózy rozpustné ve vodě, polyethylenglykoly nebo póly(vinylalkohol).
Sloučenina, která je podrobena polymeraci za vzniku nanočástic podle vynálezu, je ve výhodném provedení představována sloučeninou obecného vzorce (I), kde A představuje skupinu
II (ch2)
2’ ve které :
η = 1, a
Rj a R2 shodně představují ethylovou skupinu.
Podle dalšího aspektu je sloučenina, která je podrobena polymeraci za vzniku nanočástic podle vynálezu, ve výhodném provedení představována sloučeninou podle vzorce (I), kde A představuje skupinu • · • · • · · ·
II o
a a R2 představují shodně propylovou skupinu.
Ve výhodném provedení může být směs sloučenin obecného vzorce (I), kde A představuje výše definovanou skupinu
nebo skupinu
rovněž být podrobena statistické polymeraci.
Podle druhého aspektu se vynález týká nanočástic vytvořených ze statistického polymeru přinejmenším jedné methylidenmalonátové sloučeniny obecného vzorce (I), jejichž průměr je menší než 500 nm, přičemž ve výhodném provedení se tento průměr pohybuje v rozmezí od 100 nm do 500 nm a jejichž průměrná molekulová hmotnost (Mw) se pohybuje v rozmezí od přibližně 1 000 do 100 000, ve výhodném provedeni v rozmezí od přibližně 1 000 do 80 000, ve zvlášť výhodném provedení v rozmezí od přibližně 2 000 do 80 000, případně v rozmezí od přibližně 8 000 do 80 000, kde tyto nanočástice mohou být získány způsobem podle vynálezu.
Ve výhodném provedení tyto nanočástice, které mohou být získány tímto způsobem, jsou vytvářeny z polymeru sloučeniny obecného vzorce (I), přičemž vykazují průměr menší než 500 nm, ve výhodném provedení průměr pohybující se v rozmezí od 100 nm do 500 nm a průměrnou molekulovou hmotnost Mw pohybující se v rozmezí od přibližně 1 000 do 80 000, ve výhodném provedení v rozmezí od přibližně 2 000 do 80 000, ve zvlášť výhodném provedení v rozmezí od přibližně 8 000 do 80 000.
Ve výhodném provedení se tento vynález týká nanočástic vytvářených ze statistického polymeru přinejmenším jedné sloučeniny obecného vzorce (I), které vykazují průměr menši než 500 nm, ve výhodném provedení průměr pohybující se v rozmezí od 100 nm do 500 nm, a průměrnou molekulovou hmotnost (Mw) pohybující se v rozmezí od přibližně 8 000 do 100 000, ve výhodném provedení v rozmezí od přibližně 8 000 do 80 000.
Ve výhodném provedení se vynález týká nanočástic vytvářených z polymeru sloučeniny obecného vzorce (I), které vykazují průměr menší než 500 nm, ve výhodném provedení průměr pohybující se v rozmezí od 100 nm do 500 nm a průměrnou molekulovou hmotnost (Mw) pohybující se v rozmezí od přibližně 8 000 do 80 000.
Ve výhodném provedení jsou tyto nanočástice vytvářeny ze sloučeniny obecného vzorce (I), kde A představuje skupinu —C—Ό—(CH2)n—C—0R2 ;
II H o
ve které :
η = 1 a R1 a R2 shodně představují ethylovou skupinu.
Podle dalšího výhodného aspektu jsou tyto nanočástice • · « · · · · ···· « ·· · · · · · · · · · · ·· · · · · · · · vytvářeny ze sloučeniny podle vzorce (I), kde A představuje skupinu
a R-l a R-2 představují shodně propylovou skupinu.
Ve výhodném provedení mohou být tyto nanočástice vytvářeny ze statistického polymeru směsi sloučenin obecného vzorce (I), kde A představuje výše definovanou skupinu
II o
nebo skupinu
0
Podle dalšího aspektu vynálezu tyto nanočástice obsahují ve své polymerní struktuře jednu nebo více biologicky aktivních molekul, jako například molekul zmíněných výše.
Ve výhodném provedení podle vynálezu může organická fáze (pokud je představována biologicky aktivní molekulou, která je nerozpustná ve vodě) nebo polymerační médium obsahovat jednu nebo více biologicky aktivních molekul.
Pod pojmem biologicky aktivní molekula je nelimitujícím způsobem chápána jakákoli molekula nebo makromolekula, která in vitro nebo in vivo vykazuje profylaktickou nebo léčebnou biologickou aktivitu, jako
například protiinfekční činidlo, ve výhodném provedení antiseptické činidlo, antibiotické, antivirové, antiparasitické nebo antimitotické činidlo, ve výhodném provedení antirakovinné činidlo.
Těmito antibiotickými nebo antiseptickými činidly, která mohou být použita v provedení podle vynálezu, mohou například být rifampicin nebo colistin.
Jako antivirová činidla mohou být nelimitujícím způsobem uvedeny didanosin, ribavirin, zidovudin, acyclovir, ganciclovir, foscarnet, vidarabin a zalcitabin.
Jako antirakovinné činidlo může být například použita cis-plastin, 5-fluoruracil nebo taxol. Dalším protinádorovým činidlem použitelným ve výhodném provedení je kreatinfosfát, jehož aktivita je popsána v patentu EP 0 614 366.
Vynález se rovněž týká farmaceutických prostředků obsahujících tyto nanočástice, které obsahují jednu nebo více biologicky aktivních molekul ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičovým materiálem.
Tyto prostředky podle vynálezu mohou být představovány kompozicemi, které mohou být aplikovány například orálním, sublinguálním, subkutánním, intramuskulárním, intravenozním, transdermálním, lokálním, rektálním, inhalačním nebo nazálním způsobem.
Ve výhodném provedení jsou jako formy aplikace zvoleny orální formy, jako například tablety, želatinové kapsle, práškovité přípravky, granule a orálně aplikované roztoky nebo suspenze, sublinguální a bukální formy aplikace, stejně • •toto · · · to · to · • ·· to · ···· · ·· to ·· ·«·«· · · j ako subkutánní , irrtramuskulární , intravenozní , intranazální nebo intraokulární a rektální formy aplikace.
Příklady provedení vynálezu
Vynález bude v dalším ilustrován s pomocí konkrétních příkladů, které jsou pouze ilustrativní a nijak neomezují rozsah předmětného vynálezu, přičemž v rámci těchto příkladů byla příprava částic provedena při teplotě okolí (přibližně 21 °C). Stanovení velikosti nebo průměru nanočástic bylo provedeno s pomocí laserového difúzního počítacího zařízení (Coulter Electronic lne., USA). Molekulová hmotnost polymerů byla stanovena s pomocí techniky gelové permeační chromatografie.
Příklad 1
Podle tohoto příkladu bylo 500 miligramů 1-ethoxykarbony1-1-ethoxykarbonylmethylenoxykarbonylethenu (Laboratories UPSA/CARPIBEM, Francie), u kterého již byla po dobu tří hodin a při tlaku 25 mbar (2 500 Pa) prováděna desorpce SO2, rozpuštěno v 5,55 mililitru acetonu. Tento roztok byl poté postupně a za míchání prováděného s pomocí magnetického míchadla smíchán s 50 mililitry vodného média, jehož pH bylo s pomocí pufru nastaveno na hodnotu 8 (Na2HPO4/KH2PO4, 1/15 M) a který obsahoval 500 miligramů dextranu 70 (FLUKA CHEMIE, Švýcarsko). Prakticky okamžitá polymerace vedla k vytvoření zákalu v této směsi, která vykazovala Tyndallův jev charakteristický pro koloidní roztoky. Míchání bylo udržováno po dobu 30 minut po úplném přivedení této organické fáze. Poté bylo k této směsi nanočástic přidáno 50 mililitrů destilované vody obsahující 2,5 gramů glukosy nebo trehalosy a směs byla podrobena *··· «·· ··«· • ·· · · ···· · · · · • · ····· · odpařování ve vakuu, aby tak byl odstraněn aceton a snížena velikost objemu této vodné suspenze na 50 mililitrů. Po filtraci provedené s pomocí filtračního papíru (průměr pórů v rozmezí od 5 μπι do 15 μιη) byl výsledný přípravek podroben lyofilizaci. Měřením provedeným s pomocí techniky laserové difúze bylo zjištěno, že částice obsažené ve filtrátu vykazovaly průměr 288 nm. Průměrná molekulová hmotnost (Mw) methylidenmalonátu tvořícího polymerní matrici těchto částic byla technikou gelové permeační chromatografie stanovena na 67 000.
Příklad 2
Studie změny pH
Při provádění tohoto experimentu byla použita stejná technika popsaná výše v příkladu 1, pouze se změnou hodnoty pH u fosfátového pufru. Získané výsledky jsou ukázány v dalším v tabulce 1, kde symbol Mp vyjadřuje molekulovou hmotnost hlavní zastoupené látky a symbol Mw představuje průměrnou molekulovou hmotnost polymeru.
TABULKA 1
| pH polymeračního média | ||||||||
| 4,5 | 5,0 | 5,5 | 6,0 | 6,5 | 7,0 | 7,5 | 8,0 | |
| velikost (nm) | 280 | 344 | 424 | 423 | 361 | 382 | 313 | 288 |
| směrodat. odchylka +/- nm | 9 | 9 | 7 | 6 | 9 | 7 | 2 | 3 |
| charakteristiky polymeru (Ep) | ||||||||
| Mp | 662 | 655 | 655 | 19700 | 31500 | 36900 | 40300 | 59300 |
| Mw | 2080 | 4740 | 11140 | 17600 | 28900 | 39000 | 53200 | 67200 |
Zjištěné výsledky ukázaly, že průměrná molekulová hmotnost polymerů, které tvoří nanočástice se pravidelně zvyšovala s rostoucí hodnotou pH polymeračního média.
Profil získaný s pomocí techniky gelové permeační chromatografie a ukázaný na obr. 1 representuje distribuci molekulových hmotností polymeru připraveného při hodnotě pH 5,5 (koncentrace 90 mg/ml). V tomto případě byl pozorován široký pík označený vztahovou značkou 1, který odpovídal látce vyznačující se vysokou průměrnou molekulovou hmotností (Mw) a dále úzký pík označený vztahovou značkou 2, který odpovídá méně zastoupeným oligomerům (hlavním trimerům a tetramerům).
Tečkované čáry vymezuj i analyzovatelnou část chromatografického záznamu. Pík označený vztahovou značkou F odpovídá toluenu, který byl použit jako vnitřní standard a negativní pík odpovídá stopovému množství vody.
Příklad 3
Studie změny koncentrace monomeru
Tento experiment byl prováděn v souladu s technikou popsanou výše v příkladu 1, pouze se změnou koncentrace monomeru v acetonu. Získané výsledky jsou ukázány v dalším v tabulce 2.
TABULKA 2
| koncentrace monomeru v organické fázi (mg/ml) | |||
| 30 | 60 | 90 | |
| velikost (nm) | 213 | 239 | 288 |
| směrodat. odchylka +/- nm | 2 | 4 | 3 |
| charakteristiky polymeru | (Ep) | ||
| Mp | 31500 | 39600 | 59300 |
| Mw | 44700 | 63000 | 67200 |
Zjištěné výsledky ukázaly, že molekulová hmotnost hlavní zastoupené látky (Mp), stejně jako průměrná molekulová hmotnost (Mw) polymerů, které tvoři nanočástice, se pravidelně zvyšuje s rostoucí koncentrací monomeru v organické fázi.
Příklad 4
Tento experiment byl proveden podle postupu uvedeného ···· · · · ···· • ·· · · ···· · · · · • · ····· · · v příkladech 1 až 3, pouze s nahrazením činidla pro ochranu koloidní struktury (dextran 70) neionogenním povrchově aktivním činidlem (Pluronic F68 - BASF Corporation, USA).
Zjištěné výsledky jsou uvedeny v dalším v tabulce 3.
TABULKA 3
| pH polymeračního média obsahuj íciho 0,5% látky Pluronic F 68 | ||||||||
| 4,5 | 5,0 | 5,5 | 6,0 | 6,5 | 7,0 | 7,5 | 8,0 | |
| velikost (nm) | 87 | 80 | 95 | 117 | 122 | 121 | 146 | 153 |
| směrodat. odchylka +/- nm | 1 | 2 | 2 | 5 | 9 | 1 | 3 | 1 |
| charakteristiky polymeru (Ep)* | ||||||||
| Mp | 656 | 13300 | 14800 | 25600 | 38600 | 43700 | 45300 | 77800 |
| Mw | 5520 | 9740 | 12300 | 23600 | 33000 | 51600 | 70900 | 88900 |
* koncentrace monomeru v acetonu = 90 mg/ml
Zjištěné výsledky ukázaly pro stejnou hodnotu pH:
- zvýšení molekulové hmotnosti hlavní zastoupené látky (Mp) a průměrné molekulové hmotnosti (Mw) polymerů tvořících nanoěástice v přítomnosti povrchově aktivního činidla oproti činidlu pro ochranu koloidní struktury,
- snížení velikosti stejných nanočástic v přítomnosti povrchově aktivního činidla oproti činidlu pro ochranu koloidní struktury.
Příklad 5
Studie molarity polymeračního média.
Stejným způsobem jako je uvedeno v příkladu 1 bylo 500 miligramů monomeru rozpuštěno v 16,6 mililitru acetonu a potom byl tento podíl zaveden do fosfátového pufru (Na2HP04/KH2P04), jehož molarita se zvyšovala a který dále obsahoval 0,5% látky Pluronic F 68.
Zjištěné výsledky jsou uvedeny v dalším v tabulce 4:
TABULKA 4
| molarita | velikost nanočástic (nm) | směrodatná odchylka (nm) | Mp (Ep) | Mw (Ep) |
| 0,033 M | 127 | 2 | 15200 | 12500 |
| 0,066 M | 123 | 1 | 14600 | 12400 |
| 0,133 M | 124 | 1 | 653 | 9790 |
| 0,267 M | 179 | 3 | 660 | 8690 |
Zjištěné výsledky ukázaly pokles průměrné molekulové hmotnosti (Mw) polymerů tvořících nanočástice v míře, která závisí na vzrůstu molarity média.
Příklad 6
Nanočástice byly připraveny stejným způsobem jako je uvedeno v příkladech 1 až 3, přičemž tyto částice byly potom porovnány s nanočásticemi získanými podle postupu popsaného v publikaci Lescure a kol., Pharm. Res. 1994, 11, 1270 - 1276. N rámci této přípravy bylo 100 miligramů monomeru ···« · · · · · · · • · · · · · · · · · ·· · • · · · · · · · · přivedeno za míchání do 10 mililitrů fosfátového pufru (^2ΗΡ04/ΚΗ2Ρ04, 1/15 Μ), jehož hodnota pH se pohybovala v rozmezí od 5 do 8.
Zjištěné výsledky jsou uvedeny v dalším v tabulce 5, přičemž oligomery jsou definovány jako jakékoli molekulární látky, jejichž molekulová hmotnost je menší nebo rovna 920.
TABULKA 5
| Způsob podle Lescure a kol., 1994 | pH polymeračního média obsahujícího 1% dextranu 70 | ||||||
| 5,5 | 6,0 | 6,5 | 7,0 | 7,5 | 8,0 | ||
| velikost (nm) | 260 | 296 | 337 | 335 | 271 | 322 | |
| směrodat. odchylka +/- nm | 5 | 5 | 10 | 4 | 6 | 6 | |
| Mp | 666 | 660 | 675 | 685 | 15572 | 13000 | |
| Mw | 1719 | 2421 | 5335 | 6041* ** | 6759* | 7594* | |
| % oligomerů | 43 | 53 | 27 | 38 | 18 | 13 | |
| výtěžek získaných nanočástic % ± 5 | 87 | 79,5 | 71,5 | 59,5 | 21 | 23 | |
| Způsob podle vynálezu * * | velikost (nm) | 424 | 423 | 361 | 382 | 313 | 288 |
| směrodat. odchylka +/- nm | 7 | 6 | 9 | 7 | 2 | 3 | |
| Mp | 655 | 19659 | 31508 | 36290 | 40278 | 59300 | |
| Mw | 11138 | 17569 | 28918 | 38997 | 53181 | 67201 | |
| % oligomerů | 19 | 14 | 8 | 4 | 3 | 2 | |
| výtěžek získaných nanočástic % ± 5 | 82,5 | 73 | 84,5 | 91 | 85 | 86,5 |
* přítomnost agregátů ** koncentrace monomeru v acetonu = 90 mg/ml
0 0 · 0 0 0
00 0 0 0000
Získané výsledky ukázaly, že pro jakékoli experimentální podmínky identického pH:
- průměrná molekulová hmotnost (Mw) polymerů tvořících nanočástice připravené v souladu s postupem podle Lescureho a kol., je nižší nežli molekulová hmotnost polymeru získaného postupem podle vynálezu,
- obsahy oligomerů (trimerů-tetramerů) tvořících polymery jsou výrazně nižší v případě nanočástic připravených postupem v provedení podle vynálezu,
- výtěžky polymerace ve formě nanočástic jsou vyšší pro způsob podle vynálezu ve srovnání s postupem podle Lescureho a kol., (tvorba agregátů vedla v případě postupu podle Lescureho a kol., k nízkým výtěžkům při alkalickém pH).
Profil získaný technikou gelové permeační chromatografie a ukázaný na obr. 2 representuje distribuci molekulových hmotností polymerů připravených při pH = 7,5 postupem podle vynálezu (záznam A) a postupem podle Lescureho a kol., (záznam B). Nehledě na pík 3, který na záznamu A odpovídal toluenu, byl pozorován jednoduchý pík 1 odpovídající hlavní látce (Mp = 40 278), zatímco na záznamu B byla zjištěna přítomnost významného píku 2, který rovněž odpovídal oligomerům (trimerům a tetramerům).
Příklad 7
Podle tohoto příkladu bylo 50 mililitrů vodného média, jehož pH bylo s pomocí pufru nastaveno na hodnotu 5; 6,5 nebo 8 (Na2HPO4/KH2POa, 1/15 M) a který obsahoval 0,5% látky Pluronic F 68 - BASF Corporation, USA), postupně za míchání magnetickým míchadlem přidáno do 5,55 mililitrů roztoku obsahujícího 500 miligramů 1-ethoxykarbonyl-1-ethoxy23 • · · · ··· · · · * • · · · · · ··· ft · · · ·· ····· · · karbonylmethylenoxykarbonylethenový monomeru (LABORATORIES UPSA/CARPIBEM, Francie), ze kterého již byl po dobu 3 hodin při tlaku 25 mbar (2 500 Pa) desorbován S0£, v 5,55 mililitru acetonu. Toto míchání bylo udržováno po dobu 16 hodin pro testy prováděné při hodnotě pH 5 a 6,5 nebo po dobu 30 minut pro test prováděný při hodnotě pH 8 po úplném přivedení této organické fáze. Poté bylo k této suspenzi nanočástic přidáno 50 mililitrů destilované vody obsahující 2,5 gramu glukosy nebo trehalosy (látky chránící koloidní strukturu nebo látky působící jako kryoprotektory) a směs byla podrobena odpařování ve vakuu, aby tak byl odstraněn aceton a snížena velikost objemu této vodné suspenze na 50 mililitrů. Po filtraci provedené s pomocí filtračního papíru (průměr pórů v rozmezí od 5 pm do 15 pm) byl výsledný přípravek podroben lyofilizaci. Průměr částic obsažených ve filtrátu byl měřen s pomocí techniky laserové difúze. Průměrná molekulová hmotnost (Mw) methylidenmalonátu tvořícího polymerní matrici těchto částic byla vyhodnocena technikou gelové permeační chromatografie.
Získané výsledky jsou uvedeny v tabulce 6, přičemž Mp představuje molekulovou hmotnost hlavní zastoupené látky a Mw představuje průměrnou molekulovou hmotnost polymeru.
Dosažený výtěžek byl určen na základě poměru množství monomeru přivedeného do reakčního média a množství polymeru tvořícího nanočástice.
• · • ··· • * • · • · · 3 · · ·
3· ·· • · • C ··
TABULKA 6
| hodnota pH polymeračního média | |||
| 5,0 | 6,5 | 8,0 | |
| velikost (nm) | 848 | 394 | 754 |
| směrodat. odchylka +/- nm | 36 | 32 | 34 |
| charakteristiky polymeru (Ep) | |||
| Mp | 312 | 24300 | 26500 |
| Mw | 6450 | 20100 | 20100 |
| výtěžek | |||
| % | 59 | 57 | 30 |
| směrodat. odchylka | 5,1 | 4,6 | 4,2 |
Příklad 8
Použití různých rozpouštědel
Tento experiment byl prováděn stejnou technikou jako je uvedeno výše v příkladu 1, ale s použitím acetonu, acetonitrilu nebo tetrahydrofuranu (THF) jako látek pro rozpuštění monomeru.
Získané výsledky jsou uvedeny v tabulce 7.
• ·
TABULKA 7
| rozpouštědlo | velikost částic (nm) | výtěžek (%) | Mw |
| aceton | 253 | 74 | 54100 |
| acetonitril | 197 | 69 | 31700 |
| THF | 191 | 70 | 30300 |
Příklad 9
Studie objemového poměru voda/rozpouštědlo
Tento experiment byl prováděn stejnou technikou jako je uvedeno výše v příkladu 1, ale s měnícím se objemovým poměrem voda/rozpouštědlo.
Získané výsledky jsou uvedeny v tabulce 8.
TABULKA 8
| Objemový poměr voda/rozpouštědlo | |||
| 4,5/1 | 9/1 | 18/1 | |
| velikost (nm) | 241 | 288 | 334 |
| výtěžek (%) | 74 | 74 | 85 |
| charakteristiky polymeru | |||
| Mp | 62100 | 59300 | 33100 |
| Mw | 42000 | 67200 | 24600 |
• · • · · · • ·
Příklad 10
Provedení postupu přípravy při pH = 10
Tyto testy byly provedeny ve vodném médiu při pH = 10 a v přítomnosti bud povrchově aktivního činidla nebo činidla pro ochranu koloidní struktury, přičemž byl bud sledován postup podle příkladu 1 nebo postup podle příkladu 7.
(1) test 1
Podle tohoto postupu bylo použito 100 miligramů 1-ethoxykarbonyl-1-ethoxykarbonylmethylenoxykarbony1ethenového monomeru, který byl rozpuštěn v 1 mililitru acetonu.
Tento roztok byl poté postupně a za míchání magnetickým míchadlem přidán do 10 mililitrů vodného média, jehož hodnota pH činila 10 a který obsahoval 100 miligramů látky dextran 70.
Polymerace byla okamžitá. Toto míchání bylo udržováno po dobu 30 minut po úplném přivedení celého objemu organické fáze. Poté bylo k této suspenzi nanočástic přidáno 10 mililitrů destilované vody a směs byla podrobena odpařování ve vakuu, aby tak byl odstraněn aceton. Toto médium bylo poté podrobeno centrifugaci (v = 10 000 otáček/minutu, 10 minut při teplotě 4 °C).
(2) test 2
Experimentální protokol byl identický s protokolem z příkladu 1, přičemž ale látka dextran 70 byla nahrazena
látkou Pluronic F 68.
(3) test 3
Podle tohoto provedení bylo použito 10 mililitrů vodného média, jehož hodnota pH činila 10 a který obsahoval 100 miligramů látky dextran 70, přičemž tento podíl byl postupně a za míchání prováděného s pomocí magnetického míchadla přidán do organické fáze, která se skládala ze 100 miligramů monomeru v 1 mililitru acetonu. Polymerace byla okamžitá. Toto míchání bylo udržováno po dobu 30 minut po úplném přivedení celého objemu vodné fáze. Poté bylo k této suspenzi nanočástic přidáno 10 mililitrů destilované vody a směs byla podrobena odpařování ve vakuu, aby tak byl odstraněn aceton. Toto médium bylo poté podrobeno centrifugaci (v = 10 000 otáčet/minutu, 10 minut při teplotě 4 °C) .
(4) test 4
Experimentální protokol byl identický s protokolem z příkladu 3, přičemž ale látka dextran 70 byla nahrazena látkou Pluronic F 68. Po centrifugaci byly nanočástice obsažené v sedlině analyzovány s pomocí stericky vylučovací chromatografie, aby tak byla určen hmotnostní průměr molekulové hmotnosti (Mw).
Získané výsledky jsou uvedeny v tabulce 9.
• · · ·
TABULKA 9
| Mw | Velikost částic (nm) | |
| test 1 | 8800 | 240 |
| test 2 | 6900 | 245 |
| test 3 | 1400 | 316 |
| test 4 | 1850 | 333 |
Příklad 11
Tento experiment byl proveden stejnou polymerační technikou, jako bylo uvedeno v příkladu 1, ovšem s použitím 1, l-propoxykarbonylethenu (Laboratoires UPSA/CARPIBEM, Francie) dále označovaného jako MM 3.3, který byl použit samotný nebo ve směsi s 1-ethoxykarbonyl-lethoxykarbonylmethylenoxykarbonylethenovým monomerem (Laboratoires UPSA/CARPIBEM, Francie) dále označovaným jako MM 2.1.2. Zjištěné výsledky jsou ukázány v dalším v tabulce 10, přičemž Mp představuje molekulovou hmotnost hlavních zastoupených látek a Mw představuje průměrnou molekulovou hmotnost polymeru.
• · · · 0 · · · • 9 · · · · · · · · · 0 · • 0 000 « 0 0 0 0 0 000 0 0 0 00 00··· · ·
TABULKA 10
| poměr MM 3.3/MM 2.1.2 | ||||
| 100/0 | 75/25 | 50/50 | 25/75 | |
| velikost (nm) | 123 | 223 | 298 | 155 |
| výtěžek (%) | 77 | 73 | 80 | 78 |
| charakteristiky polymeru | ||||
| Mp | 44764 | 92090 | 37467 | 21727 |
| Mw | 44122 | 89793 | 37467 | 21727 |
Příklad 12
Příprava nanočástic obsahujících rifampicin
Podle tohoto provedení bylo použito 5 miligramů rifampicinové báze (Sigma), která byla rozpuštěna v 1 mililitru acetonu, do kterého bylo přidáno 90 miligramů 1-ethoxykarbonyl-1-ethoxykarbonylmethylenoxykarbony1ethenového monomeru (Laboratoires UPSA/CARPIBEM, Francie), ze kterého byl předtím po dobu 3 hodin a při tlaku 25 mbar (2 500 Pa) desorbován SC>2. S pomocí skleněné pipety byl tento roztok postupně za konstantního míchání (750 ot/min) přidán k 9 mililitrům vodného média, jehož pH bylo s pomocí fosfátového pufru (Na2HPO4/KH2PO4, 0,066M) nastaveno na hodnotu 6,0 a který obsahoval 90 miligramů látky dextran 70 (1% hmotnostní). Po 18 hodinách polymerace při teplotě 20 °C bylo za míchání přidáno k suspenzi nanočástic 9 mililitrů destilované vody obsahující 5% D-glukosy a tato směs byla poté podrobena odpařování prováděného za vakua
s pomocí zařízení Rotavapor (20 °C, 25 mbar (2 500 Pa)), aby tak byl odstraněn aceton a redukován objem této vodné suspenze na 9 mililitrů. Takto vzniklý přípravek byl poté podroben lyofilizaci, přičemž zmrazení bylo provedeno při teplotě -30 °C a sublimace při teplotě +20 °C po dobu 36 hodin a při tlaku 0,05 mbar (5 Pa).
Velikost nanočástic a koncentrace rifampicinu byly měřeny před a následně po lyofilizaci. Tato velikost byla měřena technikou laserové difúze. Stanovení rifampicinu bylo provedeno s pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografické kolony připojené ke spektrofotometru. Mobilní fáze byla tvořena směsí methanol/0,05 M octan amonný (65:35), hodnota pH byla nastavena na 7,3, průtoková rychlost byla pevně nastavena na 1 ml/min a hodnota absorpce byla odečítána při vlnové délce 254 nm. Obsah rifampicinu, který nebyl vázán na tyto nanočástice byl měřen v supernatantu získanému po ultracentrifugaci suspenze nanočástic (80 000 gramů, hodina při teplotě 4 °C). Množství rifampicinu vázaného k těmto nanočásticim odpovídalo podílu přítomnému v sedlině, která byla rozpuštěna v THF před uskutečněním přímého stanovení rifampicinu.
V tomto případě byly získány následující výsledky:
- velikost nanočástic obsahujících rifampicin:
266 ± 63 nm před lyofilizaci a 282 ± 54 nm následně po lyofilizaci,
- procentuální podíl navázaného rifampicinu:
8,5 ± 0,5% před a po lyofilizaci.
Příklad 13
Příprava nanočástic obsahujících kolistin • · • · · · ·· a · · · · ·
Tento experiment byl proveden stejným způsobem jako v příkladu 12, ovšem s tím, že aktivní látka byla rozpustná ve vodě a byla inkorporována do polymeračního média při koncentraci 0,5 mg/ml před přidáním organické fáze.
Velikost nanočástic obsahujících kolistin, která byla měřena technikou laserové difúze, činila 282 ± 65 nm po odpaření a 283 ± 26 nm po konzervaci prováděné po dobu 4 dnů při teplotě +4 °C. S pomocí gelové difúzní techniky (viz publikace S. P. Gotoff a kol., Antimicrob. Agents Chemother, 1962, 107-113) byla v supernatantu získaném po centrifugaci suspenze nanočástic (80 000 gramů, 1 hodina při teplotě 4 °C) zjištěna koncentrace kolistinu 15 pg/ml, přičemž velikost podílu, který nebyl vázán na tyto nanoěástice potom činila 3% celkového množství přidaného kolistinu.
Příklad 14
Příprava nanočástic obsahujících azidothymidin (AZT) (Sigma Aldrich Chimie, Francie)
Podle tohoto příkladu bylo 240 miligramů 1-ethoxykarbony1-1-ethoxykarbonylmethylenoxykarbony1ethenového monomeru (Laboratories UPSA/CARPIBEM, Francie), u kterého již byla po dobu tří hodin a při tlaku 25 mbar (2 500 Pa) prováděna desorpce SC^, rozpuštěno ve 2,5 mililitru acetonu. S pomocí pipety byl poté tento roztok postupně za konstantního míchání přidán k 22,5 mililitru vodného média, jehož pH bylo s pomocí fosfátového pufru (Na2HP04/KH2P04, 0,066M) nastaveno na hodnotu 8,0 a který obsahoval 225 miligramů látky dextran 70 (1% hmotnostní) a dále ve vodě rozpustnou aktivní látku o koncentraci 0,53 mg/ml. Po 18 hodinách polymerace prováděné při teplotě 20 °C bylo za míchání přidáno k suspenzi nanočástic 22,5 ···· · · · «··· • · · · · · ··· 4 · · · • · · · · · · · mililitru demineralizované vody obsahující 5% D-glukosy a tato směs byla poté podrobena odpařování prováděného za vakua s pomocí zařízení Rotavapor (20 ”C, 25 mbar (2 500 Pa)), aby tak byl odstraněn aceton a redukován objem této vodné suspenze na 39,0 mililitrů. Takto vzniklý přípravek byl poté podroben lyofilizaci, přičemž zmrazení bylo provedeno při teplotě -30 °C a sublimace při teplotě +20 °C po dobu 36 hodin a při tlaku 0,05 mbar (5 Pa).
Velikost nanočástic obsahujících AZT byla před lyofilizaci stanovena s pomocí techniky laserové difúze na 255 ± 63 nm. Obsah AZT v supernatantu po centrifugaci suspenze nanočástic (12 000 ot/min, 1 hodina při teplotě 4 °C) byl určen technikou UV-spektrofotometrie při vlnové délce 266 nm. Tímto způsobem byla získána koncentrace 98 pg/ml: velikost podílu, který nebyl vázán na tyto nanočástice, potom tedy činila 31,9% celkového množství přidaného AZT. Podíl AZT, který byl vázán na tyto nanočástice, tedy činil 68,1%.
Příklad 15
Příprava nanočástic obsahujících kreatinfosfát (Boehringer Mannheim)
Zapouzdření kreatinfosfátu bylo provedeno v souladu s technikou uvedenou v příkladu 14. Velikost nanočástic obsahujících kreatinfosfát, která byla měřena technikou laserové difúze, činila 275 ± 260 nm před lyofilizaci. Stanovení kreatinfosfátu bylo provedeno s pomocí techniky vysokoúčinné kapalinové chromatografie, přičemž tato kolona byla spojena se spektrofotometrem. Mobilní fáze byla tvořena fosfátovým pufrem (KH2PO4, 0,05 Μ), jehož hodnota pH byla nastavena na 3,3. Průtoková rychlost byla pevně nastavena na 2 mililitry/minutu a hodnota absorpce byla odečítána při »··· · · · ···· • · · · · ···· · ·· · « · ····· · · vlnové délce 200 nm.
Obsah kreatinfosfátu, který nebyl vázán na tyto nanočástice byl měřen v supernatantu získanému po centrifugaci suspenze nanočástic (12 000 gramů, 1 hodina při teplotě 4 °C). Zjištěná koncentrace kreatinfosfátu v supernatantu činila 463 gg/ml: velikost podílu, který nebyl vázán na tyto nanočástice, potom tedy činila 81% celkového množství přidaného kreatinfosfátu. Podíl kreatinfosfátu, který byl vázán na tyto nanočástice, tedy činil 19%.
Příklad 16
Příprava nanočástic obsahujících 5-fluorouracil (5-FU)
Zapouzdření 5-FU (Sigma Aldrich Chimie, Francie) bylo provedeno stejnou technikou jako je uvedeno v příkladu 14. Velikost nanočástic obsahujících 5-FU, která byla měřena technikou laserové difúze, činila 516 ± 88 nm před lyofilizací. S pomocí techniky UV-spektrofotometrie pracující při vlnové délce 266 nm byl obsah 5-FU v supernatantu získanému po centrifugaci suspenze nanočástic (12 000 gramů, 1 hodina při teplotě 4 °C) stanoven na 70 pg/ml: velikost podílu, který nebyl vázán na tyto nanočástice, potom tedy činila 23,3% celkového množství přidaného 5-FU. Podíl 5-FU vázaný na tyto nanočástice tedy činil 76,7%.
Claims (23)
1. Způsob přípravy nanočástic vyznačující se tím, že tyto nanočástice jsou vytvořeny ze statistického polymeru přinejmenším jedné sloučeniny odpovídající obecnému vzorci (I)
H,C=C0
II
C—OR, (I) ve kterém :
-A představuje skupinu nebo skupinu
Rl a R2, které jsou identické nebo rozdílné, představují lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující od jednoho do šesti uhlíkových atomů;
n je roven 1, 2, 3, 4 nebo 5; kde tento monomer (monomery) je (jsou) před polymerací rozpuštěn v aprotickém organickém rozpouštědle mísitelném s vodou, které spolu s polymeračním médiem vytváří nerozpouštějící směs vzniklého polymeru.
2. Způsob podle nároku 1 vyznačující se tím, že je použit pro přípravu nanočástic vytvořených z polymeru sloučeniny odpovídající obecnému vzorci (I)
II ^C—OR H,C=C^
A (I) kde -A představuje skupinu nebo skupinu
Rl a R2, které jsou identické nebo rozdílné, představuj i lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující od jednoho do šesti uhlíkových atomů;
n je roven 1, 2, 3, 4 nebo 5; kde tento monomer (monomery) je (jsou) před polymeraci rozpuštěn v aprotickém organickém rozpouštědle mísitelném s vodou, které spolu s polymeračním médiem vytváří nerozpouštějíci směs vzniklého polymeru.
3. Způsob podle jednoho z nároků 1 nebo 2 vyznačující se tím, že je použit pro přípravu nanočástic, jejichž průměr je menší než 500 nm, přičemž ve výhodném provedení se tento průměr pohybuje v rozmezí od 100 nm do 500 nm, a jejichž průměrná molekulová hmotnost (Mw) se pohybuje v rozmezí od přibližně 1 000 do 100 000, ve výhodném provedení v rozmezí od přibližně 1 000 do 80 000, ve zvlášť výhodném provedení v rozmezí od přibližně 2 000 do 80 000, případně v rozmezí od přibližně 8 000 do 80 000.
4. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 3 vyznačující se tím, že se skládá z kroků spočívajících v:
- přípravě roztoku přinejmenším jedné sloučeniny odpovídající obecnému vzorci (I) v aprotickém organickém rozpouštědle, které je mísitelné s vodou,
- přidání vodného polymeračního média do této organické fáze, kde toto přidání je provedeno za míchání a při hodnotě pH pohybující se v rozmezí od 4,5 do 10,
- získání nanočástic vytvořených po homogenizaci této směsi a odpaření organického rozpouštědla za vakua.
5. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 3 vyznačující se tím, že se skládá z kroků spočívajících v:
- přípravě roztoku přinejmenším jedné sloučeniny odpovídající obecnému vzorci (I) v aprotickém organickém rozpouštědle, které je mísitelné s vodou,
- přidání vodného polymeračního média do této organické fáze, kde toto přidání je provedeno za míchání a při hodnotě pH pohybující se v rozmezí od 4,5 do 10,
- získání nanočástic vytvořených po homogenizaci této směsi a odpaření organického rozpouštědla za vakua.
6. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 5 vyznačující se tím, že toto aprotické organické rozpouštědlo je vybráno ze skupiny obsahující aceton, acetonitril, dioxan a tetrahydrofuran.
7. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 6 vyznačující se tím, že koncentrace sloučeniny (sloučenin) obecného vzorce (I) v organickém rozpouštědle se pohybuje v rozmezí od 30 mg/ml do 150 mg/ml.
8. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 7 vyznačující se tím, že molarita polymeračního média se pohybuje v řádu od 1/30 M do 1/3 M.
9. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 8 vyznačující se tím, že toto polymerační médium obsahuje jedno nebo více povrchově aktivních činidel nebo činidel pro ochranu koloidní struktury.
10. Způsob podle nároku 9 vyznačující se tím, že těmito povrchově aktivními činidly jsou neionogenní povrchově aktivní činidla vybraná ze skupiny obsahuj ící kopolymery polyoxyethylenu a polyoxypropylenu, poloxamery a polysorbáty.
11. Způsob podle nároku 9 nebo 10 vyznačující se tím, že tato činidla pro ochranu koloidní struktury jsou vybrána ze skupiny obsahující dextrany, deriváty celulózy rozpustné ve vodě, polyethylenglykoly a póly(vinylalkohol).
12. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 11 vyznačující se tím, že tato organická fáze nebo toto polymerační médium obsahuje jednu nebo více biologicky aktivních molekul.
13. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 vyznačující se tím, že sloučenina podrobená polymeraci je představována sloučeninou odpovídající vzorci (I), kde
9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 99 9 · · · · ·· · · · 9 9 9 9
A představuje skupinu
O O η = 1 a symboly a R2 shodně představuj i ethylovou skupinu.
14. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 vyznačující se tím, že sloučenina podrobená polymeraci je představována sloučeninou odpovídající vzorci (I), kde
A představuje skupinu v 2 0 a R^ a R2 představuj i shodně propyl.
15. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 12 vyznačující se tím, že směs sloučenin odpovídajících vzorci (I), kde A představuje skupinu nebo skupinu
0 0 jak je definováno podle nároku 1, se podrobí statistické polymeraci ···· ··· ···· • ·· · · ···· · ·· · • · ····· · ·
16. Nanočástice vyznačující se tím, že jsou vytvořeny ze statistického polymeru přinejmenším jedné methylidenmalonátové sloučeniny odpovídající obecnému vzorci (I) kde nebo
H,C=C.
-A představuje skupinu skupinu
II
II ,C—OR, ‘A (CH2) (I)
R-. a Ro, které jsou identické nebo rozdílné, představuj i lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující od jednoho do šesti uhlíkových atomů;
n je roven 1, 2, 3, 4 nebo 5, kde tyto nanočástice vykazují průměr menší než 500 nm, přičemž ve výhodném provedení se tento průměr pohybuje v rozmezí od 100 nm do 500 nm a dále vykazují průměrnou molekulovou hmotnost (Mw), která se pohybuje v rozmezí od přibližně 1 000 do 100 000, ve výhodném provedení v rozmezí od přibližně 1 000 do 80 000, ve zvlášť výhodném provedení v rozmezí od přibližně 2 000 do 80 000, případně v rozmezí od přibližně 8 000 do 80 000, kde tyto nanočástice mohou být připraveny způsobem podle kteréhokoli z nároků 1 až 15.
17. Nanočástice vyznačující se tím, že jsou vytvořeny z polymeru methylidenmalonátové sloučeniny odpovídající vzorci (I)
H,C=C.
II .C—OR, (I) kde -A představuje skupinu nebo skupinu
2’
Rl a R2, které jsou identické nebo rozdílné, představuj i lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující od jednoho do šesti uhlíkových atomů;
n je roven 1, 2, 3, 4 nebo 5, kde tyto nanočástice vykazují průměr menší než 500 nm, přičemž ve výhodném provedení se tento průměr pohybuje v rozmezí od 100 nm do 500 nm a dále vykazují průměrnou molekulovou hmotnost (Mw), která se pohybuje v rozmezí od přibližně 1 000 do 80 000, ve výhodném provedení v rozmezí od přibližně 2 000 do 80 000, ve zvlášť výhodném provedení v rozmezí od přibližně 8 000 do 80 000, kde tyto nanočástice mohou být připraveny způsobem podle kteréhokoli z nároků 1 až 15.
• · • · · · • ·
18. Nanočástice vyznačující se tím, že jsou vytvořeny ze statistického polymeru přinejmenším jedné sloučeniny odpovídající vzorci (I)
II /C-OR,
H,C=C%
A (i) kde -A představuje skupinu _Ό 2 0 nebo skupinu
Ó 0 a R2, které jsou identické nebo rozdílné, představují lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující od jednoho do šesti uhlíkových atomů;
n je roven 1, 2, 3, 4 nebo 5, kde tyto nanočástice vykazují průměr menší než 500 nm, přičemž ve výhodném provedení se tento průměr pohybuje v rozmezí od 100 nm do 500 nm a dále vykazují průměrnou molekulovou hmotnost (Mw), která se pohybuje v rozmezí od přibližně 8 000 do 100 000, ve výhodném provedení v rozmezí od přibližně 8 000 do 80 000.
19. Nanočástice vyznačující se tím, že jsou vytvořeny z polymeru sloučeniny odpovídající vzorci (I) • · • · · · • · o
^C—OR,
HX=C^
A (I) kde -A představuje skupinu —C—or2
II o
nebo skupinu
R^ a R2, které jsou identické nebo rozdílné, představují lineární nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující od jednoho do šesti uhlíkových atomů;
n je roven 1, 2, 3, 4 nebo 5, kde tyto nanočástice vykazují průměr menší než 500 nm, přičemž ve výhodném provedení se tento průměr pohybuje v rozmezí od 100 nm do 500 nm a dále vykazují průměrnou molekulovou hmotnost (Mw), která se pohybuje v rozmezí od přibližně 8 000 do 80 000.
20. Nanočástice podle jednoho z nároků 18 nebo 19 vyznačující se tím, že jsou vytvořeny z polymeru sloučeniny odpovídající vzorci (I) kde -A představuje skupinu —C—0— (CH2) —C—0R2 ;
ii ii
0 o a R-l a R2 představují shodně ethylovou skupinu.
• · · · ··· ··· • · · · · · · · · · · · ·· ft···· ·
21. Nanočástice podle jednoho z nároků 18 nebo 19 vyznačující se tím, že jsou vytvořeny z polymeru sloučeniny odpovídající vzorci (I) kde -A představuje skupinu —c—°r2 II o a a R2 představuji shodně propylovou skupinu
22. Nanočástice podle kteréhokoli z nároků 16 až 21 vyznačující se tím, že obsahují jednu nebo více biologicky aktivních molekul.
23. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje nanočástice podle nároku 22 jako aktivní látku ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičovým materiálem.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9613039A FR2755136B1 (fr) | 1996-10-25 | 1996-10-25 | Procede de preparation de nanoparticules de methylidene malonate, nanoparticules contenant eventuellement une ou plusieurs molecules biologiquement actives et compositions pharmaceutiques les contenant |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ144099A3 true CZ144099A3 (cs) | 1999-09-15 |
Family
ID=9497032
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ991440A CZ144099A3 (cs) | 1996-10-25 | 1997-10-24 | Způsob přípravy methylidenmalonátových nanočástic, nanočástic případně obsahujících jednu nebo několik biologicky aktivních molekul |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6211273B1 (cs) |
| EP (1) | EP0934059B1 (cs) |
| JP (1) | JP2001504530A (cs) |
| KR (1) | KR20000052813A (cs) |
| CN (1) | CN1237903A (cs) |
| AR (1) | AR009127A1 (cs) |
| AT (1) | ATE245171T1 (cs) |
| AU (1) | AU736097B2 (cs) |
| BR (1) | BR9712372A (cs) |
| CA (1) | CA2269783C (cs) |
| CZ (1) | CZ144099A3 (cs) |
| DE (1) | DE69723571T2 (cs) |
| FR (1) | FR2755136B1 (cs) |
| HU (1) | HUP9904359A3 (cs) |
| IL (1) | IL129355A0 (cs) |
| NO (1) | NO991942L (cs) |
| NZ (1) | NZ335094A (cs) |
| PL (1) | PL332957A1 (cs) |
| RU (1) | RU2214421C2 (cs) |
| SK (1) | SK55599A3 (cs) |
| TW (1) | TW503109B (cs) |
| WO (1) | WO1998018455A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA979550B (cs) |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2774096B1 (fr) * | 1998-01-29 | 2000-04-07 | Virsol | Nouveaux copolymeres tensioactifs a base de methylidene malonate |
| FR2778100B1 (fr) * | 1998-04-29 | 2001-05-04 | Virsol | Nouvelles microspheres a base de poly(methylidene malonate), leur procede de preparation et compositions pharmaceutiques les contenant |
| FR2789314B1 (fr) * | 1999-02-09 | 2001-04-27 | Virsol | Materiau de suture de plaies a base de methylidene malonate |
| GB2381792B (en) * | 2000-04-12 | 2004-08-04 | Dainippon Ink & Chemicals | Antifouling coating composituion |
| JP4611561B2 (ja) * | 2000-04-12 | 2011-01-12 | Ｄｉｃ株式会社 | 新規なビニル系樹脂およびその製造方法 |
| FR2812551B1 (fr) * | 2000-08-07 | 2003-03-28 | Virsol | Forme pharmaceutique comprenant un materiau support a base de methylidene malonate et un facteur de regulation cellulaire |
| WO2002030399A2 (en) * | 2000-10-11 | 2002-04-18 | Johns Hopkins University | Polymer controlled delivery of a therapeutic agent |
| KR100457824B1 (ko) * | 2001-08-10 | 2004-11-18 | 한국화학연구원 | 용액 열분해법에 의한 나노 크기 2가 금속 산화물 분말의제조 |
| JP3961312B2 (ja) | 2002-02-26 | 2007-08-22 | 株式会社デンソー | 内燃機関の制御装置 |
| US8697120B2 (en) * | 2006-05-01 | 2014-04-15 | Johns Hopkins University | Method and use of nano-scale devices for reduction of tissue injury in ischemic and reperfusion injury |
| EP2123262A1 (en) * | 2008-05-20 | 2009-11-25 | Consorzio per il Centro di Biomedica Moleculare Scrl | Polyelectrolyte-encapsulated gold nanoparticles capable of crossing blood-brain barrier |
| RU2390016C2 (ru) * | 2008-06-16 | 2010-05-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Иркутский государственный университет путей сообщения (ИрГУПС (ИрИИТ)) | Способ определения рифампицина |
| US8106234B2 (en) * | 2009-05-07 | 2012-01-31 | OptMed, Inc | Methylidene malonate process |
| US8975435B2 (en) | 2009-05-07 | 2015-03-10 | Optmed, Inc. | Methylidene malonate process |
| JP2014503474A (ja) | 2010-10-20 | 2014-02-13 | バイオフオーミツクス・インコーポレイテツド | エネルギー移動手段の存在下での急速回収を用いたメチレンマロナートの合成 |
| US9279022B1 (en) | 2014-09-08 | 2016-03-08 | Sirrus, Inc. | Solution polymers including one or more 1,1-disubstituted alkene compounds, solution polymerization methods, and polymer compositions |
| US10414839B2 (en) | 2010-10-20 | 2019-09-17 | Sirrus, Inc. | Polymers including a methylene beta-ketoester and products formed therefrom |
| US9249265B1 (en) | 2014-09-08 | 2016-02-02 | Sirrus, Inc. | Emulsion polymers including one or more 1,1-disubstituted alkene compounds, emulsion methods, and polymer compositions |
| US9828324B2 (en) | 2010-10-20 | 2017-11-28 | Sirrus, Inc. | Methylene beta-diketone monomers, methods for making methylene beta-diketone monomers, polymerizable compositions and products formed therefrom |
| EP2768917B1 (en) | 2011-10-19 | 2018-12-05 | Sirrus, Inc. | Multifunctional monomers and methods for making them |
| JP6345644B2 (ja) | 2012-03-30 | 2018-06-20 | シラス・インコーポレイテッド | インク配合物およびコーティング配合物ならびにこれらを作製するための重合性の系 |
| CA2869108A1 (en) | 2012-03-30 | 2013-10-03 | Bioformix Inc. | Methods for activating polymerizable compositions, polymerizable systems, and products formed thereby |
| US10913875B2 (en) | 2012-03-30 | 2021-02-09 | Sirrus, Inc. | Composite and laminate articles and polymerizable systems for producing the same |
| WO2013181600A2 (en) | 2012-06-01 | 2013-12-05 | Bioformix Inc. | Optical material and articles formed therefrom |
| CN105008438B (zh) | 2012-11-16 | 2019-10-22 | 拜奥福米克斯公司 | 塑料粘结体系及方法 |
| WO2014085570A1 (en) | 2012-11-30 | 2014-06-05 | Bioformix, Inc. | Composite compositions for electronics applications |
| WO2014110388A1 (en) | 2013-01-11 | 2014-07-17 | Bioformix Inc. | Method to obtain methylene malonate via bis(hydroxymethyl) malonate pathway |
| US9315597B2 (en) | 2014-09-08 | 2016-04-19 | Sirrus, Inc. | Compositions containing 1,1-disubstituted alkene compounds for preparing polymers having enhanced glass transition temperatures |
| US9416091B1 (en) | 2015-02-04 | 2016-08-16 | Sirrus, Inc. | Catalytic transesterification of ester compounds with groups reactive under transesterification conditions |
| US10501400B2 (en) | 2015-02-04 | 2019-12-10 | Sirrus, Inc. | Heterogeneous catalytic transesterification of ester compounds with groups reactive under transesterification conditions |
| US9334430B1 (en) | 2015-05-29 | 2016-05-10 | Sirrus, Inc. | Encapsulated polymerization initiators, polymerization systems and methods using the same |
| US9217098B1 (en) | 2015-06-01 | 2015-12-22 | Sirrus, Inc. | Electroinitiated polymerization of compositions having a 1,1-disubstituted alkene compound |
| WO2016205605A1 (en) * | 2015-06-19 | 2016-12-22 | Sirrus, Inc. | Compositions containing 1,1-disubstituted alkene compounds for preparing polymers having enhanced glass transition temperatures |
| US9518001B1 (en) | 2016-05-13 | 2016-12-13 | Sirrus, Inc. | High purity 1,1-dicarbonyl substituted-1-alkenes and methods for their preparation |
| US10196481B2 (en) | 2016-06-03 | 2019-02-05 | Sirrus, Inc. | Polymer and other compounds functionalized with terminal 1,1-disubstituted alkene monomer(s) and methods thereof |
| US9567475B1 (en) | 2016-06-03 | 2017-02-14 | Sirrus, Inc. | Coatings containing polyester macromers containing 1,1-dicarbonyl-substituted 1 alkenes |
| US9617377B1 (en) | 2016-06-03 | 2017-04-11 | Sirrus, Inc. | Polyester macromers containing 1,1-dicarbonyl-substituted 1 alkenes |
| US10428177B2 (en) | 2016-06-03 | 2019-10-01 | Sirrus, Inc. | Water absorbing or water soluble polymers, intermediate compounds, and methods thereof |
| JP7663319B2 (ja) | 2017-06-02 | 2025-04-16 | アルケマ フランス | 硬化性組成物及びその使用 |
| WO2020123579A1 (en) * | 2018-12-11 | 2020-06-18 | Sirrus, Inc. | Polymerization of 1,1-dicarbonyl 1-alkenes |
| KR20220038111A (ko) | 2019-07-19 | 2022-03-25 | 아르끄마 프랑스 | 비-감작성 경화된 제품을 얻는 데 유용한 경화 가능한 조성물 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4329332A (en) * | 1978-07-19 | 1982-05-11 | Patrick Couvreur | Biodegradable submicroscopic particles containing a biologically active substance and compositions containing them |
| FR2611705B1 (fr) * | 1987-03-05 | 1989-07-13 | Union Pharma Scient Appl | Procede de preparation de monesters ou diesters de l'acide endoethano-9, 10 dihydro-9, 10 anthracene bicarboxylique-11, 11, nouveaux monesters ou diesters ainsi prepares et utilisation de ceux-ci pour la preparation de methylenemalonates symetriques ou asymetriques |
| FR2722411B1 (fr) * | 1994-07-18 | 1996-10-04 | Union Pharma Scient Appl | Immunonanoparticules revetues d'anticorps monoclonaux anti-beta2 microglobuline et leur utilisation pour la prophylaxie et/ou le traitement de pathologies dues a une infection par le virus hiv |
-
1996
- 1996-10-25 FR FR9613039A patent/FR2755136B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-10-24 PL PL97332957A patent/PL332957A1/xx unknown
- 1997-10-24 DE DE69723571T patent/DE69723571T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-10-24 AU AU49509/97A patent/AU736097B2/en not_active Ceased
- 1997-10-24 CZ CZ991440A patent/CZ144099A3/cs unknown
- 1997-10-24 CN CN97199824A patent/CN1237903A/zh active Pending
- 1997-10-24 CA CA002269783A patent/CA2269783C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-10-24 WO PCT/FR1997/001907 patent/WO1998018455A1/fr not_active Ceased
- 1997-10-24 KR KR1019990703636A patent/KR20000052813A/ko not_active Ceased
- 1997-10-24 AR ARP970104915A patent/AR009127A1/es unknown
- 1997-10-24 BR BR9712372-2A patent/BR9712372A/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-10-24 EP EP97912248A patent/EP0934059B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1997-10-24 RU RU99110736/04A patent/RU2214421C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-10-24 TW TW086115768A patent/TW503109B/zh not_active IP Right Cessation
- 1997-10-24 SK SK555-99A patent/SK55599A3/sk unknown
- 1997-10-24 JP JP52010798A patent/JP2001504530A/ja not_active Ceased
- 1997-10-24 ZA ZA9709550A patent/ZA979550B/xx unknown
- 1997-10-24 AT AT97912248T patent/ATE245171T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-10-24 US US09/284,455 patent/US6211273B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-10-24 HU HU9904359A patent/HUP9904359A3/hu unknown
- 1997-10-24 IL IL12935597A patent/IL129355A0/xx unknown
-
1999
- 1999-04-23 NZ NZ335094A patent/NZ335094A/en unknown
- 1999-04-23 NO NO991942A patent/NO991942L/no not_active Application Discontinuation
-
2001
- 2001-01-29 US US09/770,303 patent/US6420468B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6420468B2 (en) | 2002-07-16 |
| EP0934059B1 (fr) | 2003-07-16 |
| NO991942D0 (no) | 1999-04-23 |
| CN1237903A (zh) | 1999-12-08 |
| CA2269783A1 (en) | 1998-05-07 |
| BR9712372A (pt) | 2000-01-25 |
| ZA979550B (en) | 1998-05-12 |
| DE69723571D1 (de) | 2003-08-21 |
| HUP9904359A2 (hu) | 2000-05-28 |
| IL129355A0 (en) | 2000-02-17 |
| KR20000052813A (ko) | 2000-08-25 |
| EP0934059A1 (fr) | 1999-08-11 |
| ATE245171T1 (de) | 2003-08-15 |
| RU2214421C2 (ru) | 2003-10-20 |
| US20010006989A1 (en) | 2001-07-05 |
| TW503109B (en) | 2002-09-21 |
| SK55599A3 (en) | 2000-03-13 |
| AU736097B2 (en) | 2001-07-26 |
| AR009127A1 (es) | 2000-03-08 |
| HUP9904359A3 (en) | 2000-11-28 |
| PL332957A1 (en) | 1999-10-25 |
| NZ335094A (en) | 2001-05-25 |
| CA2269783C (en) | 2005-01-11 |
| FR2755136A1 (fr) | 1998-04-30 |
| NO991942L (no) | 1999-06-23 |
| AU4950997A (en) | 1998-05-22 |
| DE69723571T2 (de) | 2004-06-03 |
| JP2001504530A (ja) | 2001-04-03 |
| WO1998018455A1 (fr) | 1998-05-07 |
| FR2755136B1 (fr) | 1999-01-22 |
| US6211273B1 (en) | 2001-04-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU736097B2 (en) | Method for preparing malonate methylidene nanoparticles, nanoparticles optionally containing one or several biologically active molecules | |
| Sang et al. | Comparison of three water-soluble polyphosphate tripolyphosphate, phytic acid, and sodium hexametaphosphate as crosslinking agents in chitosan nanoparticle formulation | |
| Peniche et al. | Chitosan: an attractive biocompatible polymer for microencapsulation | |
| Fresta et al. | Pefloxacine mesilate-and ofloxacin-loaded polyethylcyanoacrylate nanoparticles: characterization of the colloidal drug carrier formulation | |
| CN1835792A (zh) | 含水两相体系的可注射水凝胶微球 | |
| Verma et al. | Release kinetics from bio-polymeric nanoparticles encapsulating protein synthesis inhibitor-cycloheximide, for possible therapeutic applications | |
| US20120003321A1 (en) | Crosslinked Dextran Composite Magnetic Microparticles and Preparation Process and Using Method Thereof | |
| CA1329549C (fr) | Microparticules contenant un principe actif contre la malaria | |
| Sivakumar et al. | Synthesis, characterization, and in vitro release of ibuprofen from poly (MMA‐HEMA) copolymeric core–shell hydrogel microspheres for biomedical applications | |
| EP1369110A1 (en) | Production of nanoparticles from methyl vinyl ether copolymer and maleic anhydride for the administration of hydrophilic pharmaceuticals, more particularly of puric and pyrimidinic bases | |
| EP0877033A1 (en) | A process for the preparation of highly monodispersed polymeric hydrophilic nanoparticles | |
| Cerón et al. | Study of stability, kinetic parameters and release of lysozyme immobilized on chitosan microspheres by crosslinking and covalent attachment for cotton fabric functionalization | |
| Ma et al. | An improved interfacial coacervation technique to fabricate biodegradable nanocapsules of an aqueous peptide solution from polylactide and its block copolymers with poly (ethylene glycol) | |
| Fustier et al. | PEG-PLA nanocapsules containing a nanobiotechnological complex of polyhemoglobin-tyrosinase for the depletion of tyrosine in melanoma: preparation and in vitro characterisation | |
| Leiske et al. | Mission ImPOxable–or the unknown utilization of non-toxic poly (2-oxazoline) s as cryoprotectants and surfactants at the same time | |
| CN112316199A (zh) | 一种改性羧甲基壳聚糖微球及其制备方法和应用 | |
| Selvaraj et al. | Chitosan loaded microspheres as an ocular delivery system for acyclovir | |
| CN1203119C (zh) | 一种离子交联壳聚糖微球的制备方法 | |
| Mbela et al. | Development of poly (dialkyl methylidenemalonate) nanoparticles as drug carriers | |
| MXPA99003827A (en) | Method for preparing malonate methylidene nanoparticles, nanoparticles optionally containing one or several biologically active molecules | |
| Blagojevic et al. | Long‐Lasting Cross‐Linked PLGA‐Inspired Nanoparticles from One‐Pot Nanopolymerization of Precisely Sequenced Short Oligolactoglycolic Acid Dimethacrylates | |
| EP0209121B1 (de) | Pharmazeutische Zubereitung mit kontrollierter und verzögerter Wirkstofffreigabe und Verfahren zu deren Herstellung | |
| Perez-Pacheco et al. | Chitosan-TPP microcapsules for controlled drug release | |
| CN120459312A (zh) | 一种靶向性植物多肽载药颗粒及其制备方法 | |
| HK1033542A (en) | Method for preparing malonate methylidene nanoparticles, nanoparticles optionally containing one or several biologically active molecules |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |