CZ20003353A3

CZ20003353A3 - Farmaceutické sloučeniny pro zobrazování poruch angiogeneze

Info

Publication number: CZ20003353A3
Application number: CZ20003353A
Authority: CZ
Inventors: Miland Rajopadhye; D. Scott Edwards; Thomas D. Harris; Stuart J. Heminway; Shuang Liu; Prahlad R. Singh
Original assignee: Dupont Pharmaceuticals Company
Priority date: 1999-03-29
Filing date: 1999-03-29
Publication date: 2001-03-14

Abstract

Řešením je sloučenina zahrnující směrující část a chelatotvomé činidlo, kde zmíněná směrující část spojená s chelatotvomým činidlem je peptid nebo peptidomimetikum vážící se na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena, a v této sloučenině jsou mezi směrující částí a chelatotvomým činidlem 0 až 1 spojujíc! skupiny

Description

Farmaceutické sloučeniny pro zobrazování poruch angiogeneze

Oblast techniky

Vynález popisuje nové farmaceutické látky použitelné k diagnostice a léčbě nádorových onemocnění, způsoby zobrazování nádorů v organizmu pacienta a způsoby léčby rakoviny u pacientů. Vynález rovněž popisuje nové farmaceutické sloučeniny použitelné k monitorování terapeutické angiogeneze a k destrukci nové vaskulatury. Farmaceutické sloučeniny podle vynálezu zahrnují část zodpovědnou za směrování (namíření) do místa působení (dále v textu směrující část nebo směrující skupina), která se váže na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena, terapeuticky účinný radioizotop nebo část použitelnou k diagnostickému zobrazení a, je-li to žádoucí, skupinu spojující výše zmíněné části. Terapeuticky účinný radioizotop emituje částice nebo elektrony schopné působit cytotoxicky. Část pro diagnostické zobrazení je radioizotop emitující pozitrony nebo gama záření, kontrastní látka pro magnetickou rezonanci, kontrastní látka pro rentgenové záření nebo kontrastní látka pro ultrazvuk .

Dosavadní stav techniky

Ve Spojených Státech i v celém světe je rakovina jedním z hlavních zdravotních problémů. Předpokládá se, že v roce 1998 bude ve Spojených Státech diagnostikováno více než 1 milion nových případů invazivních nádorových onemocnění. Převládajícími formami tohoto onemocnění jsou pevné nádory plic, prsu, prostaty, tlustého střeva a rekta. Rakovina je obvykle diagnostikována kombinací testů prováděných in vitro a využitím zobrazovacích metod. Mezi tyto zobrazovací metody patří rentgenová počítačová tomografie (rentgenová CT), magnetická rezonance (MRI), vyšetření ultrazvukem a scintigra1 • « « · • ·· · • · ♦ · · • · · · fíe radionuklidů. K zesílení obrazu získaného rentgenovou CT, MRI nebo vyšetřením ultrazvukem je pacientovi obvykle aplikována nějaká kontrastní látka. U scintigrafie radionuklidů je nezbytné podání radiofarmaka schopného lokalizace v nádorech.

V závislosti na druhu a rozsahu onemocnění, je při léčbě rakoviny obvykle používáno ozařování externím zdrojem záření a chemoterapie, a to buď v kombinaci nebo samostatně.

V současnosti je dostupné velké množství chemoterapeutických látek, ale všechny tyto látky postrádají specifitu vůči nádorům (ve srovnání se zdravou tkání) a důsledkem této skutečnosti je výskyt nežádoucích vedlejších účinků. Účinnost léčby těmito postupy je rovněž limitována, čehož dokladem je vysoká mortalita pacientů trpících různými typy nádorových onemocnění, zvláště pak pacientů postižených převládajícím typem nádorů, což jsou pevné nádory. Je tudíž zapotřebí vyvinout efektivnější a specifičtější způsoby léčby.

I přes množství dostupných rozličných zobrazovacích metod pro diagnózu rakoviny existuje potřeba zlepšení těchto metod. Zvláště žádoucí je vyvinout metody, kterými lze lépe odlišit rakovinu od jiných patologických stavů nebo benigních fyziologických abnormalit. Jedním ze způsobů, jak dosáhnout tohoto požadovaného zlepšení, by byla aplikace metalofarmaka (farmaceutické sloučeniny obsahující atom kovu), který je specificky lokalizován do nádoru tím, že se váže na nějaký receptor exprimovaný pouze v nádorech nebo exprimovaný v nádorech v daleko větší míře než v jiných tkáních. Lokalizace metalofarmaka může být následně detekována buď, v případě určitých radiofarmak, detekcí emitovaného záření nebo, v případě kontrastních látek pro magnetickou rezonanci, sledováním vlivu těchto látek na rychlost relaxace molekul vody v jejich bezprostřední blízkosti.

Tento přístup využívající metalofarmak specifických pro nějaký nádor může být rovněž využit při léčbě rakoviny tím, že metalofarmakon obsahuje radioizotop emitující nějaké částice. Radioaktivní rozpad daného izotopu v místě nádoru má za pak následek vznik ionizujícího záření s intenzitou vykazující toxický vliv na nádorové buňky. Specifičnost tohoto přístupu minimalizuje množství zdravé tkáně, která je vystavena působení cytotoxické látky, a může tudíž poskytnout účinnější léčbu s menším množstvím nežádoucích vedlejších účinků.

Dřívější snahy o dosažení těchto požadovaných zlepšení při diagnostice a léčbě rakoviny se soustředily na využití radioaktivně značených monoklonálních protilátek, fragmentů protilátek a jiných proteinů nebo polypeptidu (tj. sloučenin o molekulových hmotnostech vyšších než 10000 daltonů), které se vážou na povrchové receptory nádorových buněk. Specifičnost těchto radiofarmak je často velmi vysoká, nicméně i zde existuje několik nevýhod. Za prvé, vzhledem k jejich vysoké molekulové hmotnosti, jsou obvykle odstraňovány z krevního řečiště velmi pomalu, čehož důsledkem je vyšší pozadí (v krvi) na obrazech. Vzhledem k jejich vysoké molekulové hmotnosti, tyto látky rovněž obtížně pronikají z krevního řečiště k místu nádoru a poté pouze pomalu difundují mimocévním prostorem k povrchu nádorových buněk. To má za následek skutečnost, že k receptorům pronikne pouze velmi omezené množství radiofarmaka a tudíž je dosaženo velmi nízké intenzity signálu při zobrazování nebo nedostatečného cytotoxického účinku při léčbě.

Alternativní přístupy pro diagnostiku (zobrazování) a léčbu rakoviny zahrnují použití malých molekul, jako například peptidů, které se vážou na povrchové receptory nádorových buněk. K diagnostickému zobrazování nádorů exprimujících receptor pro somatostatin je ve mnoha zemích klinicky

používán peptid (vážící se na receptor pro somatostatin) značený radioizotopem ^X11ln (¹¹¹In-DTAP-D-Phe¹-okteotid; Baker a další, Life Sci., 49: 1583 až 1591, 1991; a Krenning a další, Eur. J. Nucl. Med., 20: 716 až 731, 1993). Za účelem léčby zmíněných typů rakoviny byly testovány vyšší dávky tohoto radiofarmaka (Krenning a další, Digestion, 57: 57 až 61, 1996). Několik skupin zkoumá možnost použití analog ¹¹¹In-DTAP-D-Phe¹-okteotidu značeného Tc-99m pro diagnostické zobrazování a analog značených Re-186 pro léčbu (Flanagan a další, Patentová přihláška US 5556939; Lyle a další, Patentová přihláška US 5382654; a Albert a další, Patentová přihláška US 5650134).

Angiogeneže je proces, při kterém se vytvářejí nové cévy z existujících kapilár nebo post-kapilárních žilek. Tento proces je důležitou součástí nejrůznějších fyziologických procesů včetně ovulace, embryogeneze, hojení ran a tvorby kolaterální vaskulatury srdce. Tento proces hraje rovněž klíčovou úlohu u velkého počtu patologických stavů jako například při růstu nádorů a metastáz, diabetické retinopatii a degeneraci makuly. Zmíněný proces je zahájen aktivací existujících endotheliálních buněk cév jako reakce na působení množství cytokinů a růstových faktorů. Cytokiny nebo angiogenní faktory uvolňované nádory stimulují endotheliální buňky cév prostřednictvím interakcí se specifickými povrchovými receptory buněk pro tyto faktory. Takto aktivované endotheliální buňky sekretují enzymy degradující bazální membránu cév. Endotheliální buňky následně proliferují a pronikají do tkáně nádoru. Dochází k diferenciaci těchto buněk za tvorby dutin, což je v podstatě nové větvení existujících cév. Takto vzniklé cévy následně přivádějí k nádorům živiny, čímž umožňují jejich další růst a vytvářejí cestu pro proces tvorby metastáz.

«· «· · * · ·· • · · · ♦ · «· · · • · · · » * · ·. · , * • ¢4 9 9 · * · · · · ···· ·· · · · «« «· ·» ««· »*

Za fyziologických podmínek je proliferace endotheliálních buněk proces velmi pomalý, ale tento je na krátké období urychlen v průběhu embryogeneze, ovulace nebo hojení poranění. Toto dočasné zrychlení metabolizmu buněk je řízeno kombinací množství stimulačních a inhibičních růstových fak-. torů. Při patologické angiogenezi je tato přirozená rovnováha porušena, což má za následek zvýšenou proliferaci endotheliálních buněk. Mezi dosud identifikované faktory stimulující angiogenezi patří bazický růstový faktor fibroblastů (bFGF), angiogenin, TGF-alfa, TGF-beta a růstový faktor vaskulárního endothelia (VEGF). Naproti tomu interferonalfa, interferon-beta a thrombospondin jsou příkladem faktorů inhibujících angiogenezi.

Proliferace a migrace endotheliálních buněk v extracelulární matrix jsou zprostředkovány interakcí s velkým počtem adhezívních molekul buněk (Folkman J., Nátuře Medicine, 1:27 až 31, 1995). Integriny jsou různorodou skupinou heterodimerních povrchových buněčných receptorů, jejichž prostřednictvím interagují endotheliální buňky s extracelulární matrix, s jinými typy buněk a vzájemně mezi sebou. Integrin α_νβ₃ je receptorem pro širokou škálu proteinů extracelulární matrix s exponovanou tripeptidovou sekvencí Arg-Gly-Asp. Tento integrin zprostředkovává adhezi mezi buňkami a ligandy zmíněného integrinů, kterými jsou (mezi jinými) vitronektin, fibronektin a fibrinogen. Integrin a_vPa je na normálních cévách exprimován v minimální míře, ale u člověka je jeho exprese podstatně zvýšena na buňkách cév uvnitř nej různějších nádorů. Receptory α_νβ3 zprostředkovávají interakce endotheliálních buněk a extracelulární matrix a usnadňují migraci buněk ve směru angiogenního signálu, tj . směrem k populaci nádorových buněk. Angiogeneze indukovaná bFGF a TNF-alfa je závislá na expresi integrinů α_νβ₃, zatímco angiogeneze indukovaná VEGF závisí na integrinů α_νβ₅ (Cheresh a další, Science, 270:1500 až 1502, 1995). Dalším důležitým mechanismem, jehož prostřednictvím stimuluje VEGF angiogenezi, je indukce exprese integrinů αιβι a α₂βι na povrchu endotheliálních buněk (Senger a další, Proč. Nati. Acad..Sci. USA, 94:13612 až 13617, 1997).

Angiógenní faktory interagují s povrchovými receptory endotheliálních buněk jakými jsou například tyrosin-kinázové receptory EGFR, FGFR, PDGFR, Flk-l/KDR, Tek, Tie, neuropilin-1, endoglin, endosialin a Axl. Receptory Flk-l/KDR, neuropilin-1 a Flt-1 rozpoznávají VEGF a tyto interakce hrají klíčovou úlohu při angiogenezi indukované VEGF. Subpopulace tyrosin-kinázových receptorů Tie je rovněž exprimována především při procesu tvorby cév.

Vzhledem k důležitosti angiogeneze pro růst nádorů a proces metastazování je vyvíjeno množství chemoterapeutických přístupů, které s tímto procesem interferují nebo tento proces blokují. Jeden z těchto přístupů zahrnuje využití anti-angiogenních proteinů jakými jsou například angiostatin nebo endostatin. Angiostatin je fragment plasminogenu o velikosti 38 kDa, u kterého bylo na živočišných modelech prokázáno,· že je silným inhibitorem proliferace endotheliálních buněk (0'Reilly a další, Cell, 79:315 až 328, 1994). Endostatin je 20 kDa C-koncový fragment kolagenu XVIII, u něhož byly rovněž prokázány silné inhibiční vlastnosti (0'Reilly a další, Cell, 88:277 až 285, 1997).

Na živočišných modelech bylo prokázáno, že systemická terapie endostatinem působí protinádorově. Humánní klinické studie zmíněných dvou chemoterapeutických látek biologického původů byly nicméně, vzhledem k nedostatku těchto chemoterapeutik, zrušeny.

Jiným přístupem při anti-angiogenní terapii je použití směrujících částí (targeting moiety) interagujících s povrchovými receptory endotheliálních buněk exprimovanými v angiogenní vaskulatuře, ke kterým jsou připojeny chemoterapeutické látky. Na myším modelu popisují Burrows a Thorpe (Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 90:8996 až 9000, 1993) použití konjugátu protilátka-imunotoxin k odstranění nádorů prostřednictvím destrukce vaskulatury v těchto nádorech. Použitá protilátka byla připravena proti velkému histokompatibilnímu komplexu II. třídy endotheliálních buněk a následně byla konjugována s cytotoxickou látkou, deglykosylovaným řetězcem A ricinu. Stejná skupina (Clin. Cancer Res., 1:1623 až 1634, 1995) zkoumala použití protilátek namířených proti endoglinu, povrchovému receptoru endotheliálních buněk, a konjugovaných s deglykosylovaným řetězcem A ricinu. Oba zmíněné konjugáty vykazovaly na myších modelech výraznou protinádorovou aktivitu. Pro rutinní použití v humánní medicíně mají oba tyto konjugáty nicméně řadu nedostatků. Jako u většiny protilátek nebo jiných, velkých cizorodých proteinů, i zde existuje nezanedbatelné riziko imunologické toxicity, která může omezit nebo zabránit aplikaci lidem. I když směrování do vaskulatury může zvýšit lokální koncentraci připojených chemoterapeutických látek, tyto látky musí, aby se projevil jejich cytotoxický účinek, být z protilátky odštěpeny a proniknout dovnitř buňky nějakým transportním mechanismem nebo difúzí.

Je tudíž žádoucí poskytnout anti-angiogenní sloučeniny a látky pro zobrazování nádorů nebo nové vaskulatury, které nevykazují nevýhody spojené se špatnou difúzí a transportem, možnou imunologickou toxicitou, omezenou dostupností a/nebo nedostatkem specifity.

Roste rovněž zájem o terapeutickou angiogenezi za účelem zlepšení průtoku krve v ischemických nebo nedostatečně prokrvených místech organizmu. Několik výzkumných pracovišť používá pro vytváření nové vaskulatury v končetinách nebo srdci lokální aplikaci růstových faktorů. Při této aplikaci

4

jsou nej častěji používány růstové faktory VEGF a bFGF. Mezi publikace z posledních let patří: Takeshita a další, J.

Clin. Invest., 93:662 až 670, 1994; a Schaper W. a Schaper J., Collateral Circulation:Heart, Brain, Kidney, Limbs, Kluwer Academie Publishers, Boston, 1993. Hlavními aplikacemi zkoumanými v počtu laboratoří jsou aplikace vedoucí ke zlepšení průtoku krve srdcem a zlepšení průtoku krve v periferních cévách končetin. Henry T. a další (J. Amer. College Cardiology, 31:65A, 1998) například popisuje použití rekombinantního lidského VEGF pro zlepšení krevního zásobení srdce u lidí. Pacientům byly aplikovány infuze rhVEGF a zlepšení krevního zásobení srdce bylo sledováno metodou nukleární perfuze 30 a 60 dní po infuzi. Přibližně 50% pacientů vykazovalo při diagnostice nukleární perfuzí zlepšení, zatímco angiografií bylo prokázáno vytváření nových kolaterálních cév u 5/7 pacientů.

Je tudíž žádoucí objevit způsob diagnostiky zlepšení krevního zásobení srdce, který by byl zaměřen na nově vytvořené kolateralní cévy, a ne, jako v případě diagnostiky nukleární perfuzí, pouze důsledkem vzniku nových kolaterálních cév.

Podstata vynálezu

Vynález popisuje anti-angiogenní farmaceutické sloučeniny obsahující směrující část, která se váže na receptor exprimovaný v nově vytvořené vaskulatuře nádoru, iont radioaktivního kovu, který emituje ionizující záření jako například částice beta, částice alfa a Augerovy nebo Coster-Kronigovy elektrony, a, je-li to žádoucí, skupinu spojující výše zmíněné části. Část vážící se na receptor směruje použitý radioizotop do nově vytvořené vaskulatury nádoru. Radioizotop emituje beta nebo alfa částice o intenzitě působící cytotoxicky a vedoucí k destrukci buněk. Vzhledem ke schopnosti «9 «· « * «99» 9*9 » « 99 9 9 záření pronikat tkání není nutné, aby cytotoxická látka difundovala nebo byla transportována dovnitř buňky, kde teprve může působit cytotoxicky.

Vynález dále popisuje farmaceutické sloučeniny pro léčbu revmatické arthritidy. Tyto farmaceutické sloučeniny obsahují směrující část, která se váže na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena, radioizotop emitující záření s cytotoxickými účinky (tj. částice beta, částice alfa a Augerovy nebo Coster-Kronigovy elektrony) a, je-li to žádoucí, skupinu spojující výše zmíněné části. U revmatické arthritidy je vrůstání cévnaté tkáně zánětlivého původu (panus) způsobeno nadměrnou produkcí angiogenních faktorů prostřednictvím infiltrovaných makrofágů, buněk imunitního systému nebo buněk zánětu. Radiofarmaka podle vynálezu emitující cytotoxické záření mohou být tedy použita ke zničení nově vytvořené vaskulatury a tím k léčbě tohoto onemocnění.

Vynález dále popisuje látky pro zobrazování (diagnostiku) nádorů, kde tyto látky zahrnují směrující část, která se váže na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena, část použitelnou k diagnostickému zobrazení, jako například radioizotop emitující pozitrony nebo gama záření, kontrastní látku pro magnetickou rezonanci, kontrastní látku pro rentgenové záření nebo kontrastní látku pro ultrazvuk, a, je-li to žádoucí, skupinu spojující výše zmíněné části.

Vynález dále popisuje látky pro monitorování (zobrazování) průběhu a výsledků terapeutické angiogeneze. Tyto látky obsahují směrující část, která se váže na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena, část použitelnou k diagnostickému zobrazení a, je-li to žádoucí, skupinu spojující výše zmíněné části. Sloučeniny podle vynálezu pro diagnostické zobrazování mohou být intravenózně aplikovány pravidelně po aplikaci růstových faktorů a diagnostické zobrazování postižených míst (srdce nebo končetin) bude prove9 * 99 * * • 9 9 * 9 * 9 • 9 99 9 * · 9 9 9 * 9 «9 99 ·« 99 9 děno s využitím standardních postupů. Takto bude sledován průběh a výsledky terapeutické angiogeneze (tj. zobrazována tvorba nových cév).

Vynález dále popisuje sloučeniny použitelné pro přípravu farmaceutických přípravků podle vynálezu. Tyto sloučeniny obsahují peptidovou nebo peptidomimetickou směrující část (označována Q), která se váže na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena, chelátor kovů nebo část vážící kovy (označována C_h) a, je-li to žádoucí, skupinu spojující výše zmíněné části (označována L_n) . Tyto sloučeniny mohou obsahovat jednu nebo více chránících skupin připojených k chelátoru kovů nebo části vážící kovy. Zmíněné chránící skupiny zlepšují stabilitu při dlouhodobém skladování a jsou odstraněny těsně před nebo v průběhu syntézy radiofarmaka. Sloučeniny podle vynálezu mohou také obsahovat peptidovou nebo peptidomimetickou směrující část, která se váže na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena (Q), nějakou povrchově aktivní látku (označována Sf) a, je-li to žádoucí, spojující skupinu (L_n) .

Farmaceutické sloučeniny podle vynálezu mohou být použity k diagnostickým a/nebo terapeutickým účelům. Diagnostická radiofarmaka podle vynálezu jsou farmaceutické sloučeniny obsahující diagnosticky využitelný radionuklid (tj. iont radioaktivního kovu emitující diagnosticky detekovatelné pozitrony nebo gama záření). Terapeutická radiofarmaka podle vynálezu jsou farmaceutické sloučeniny obsahující terapeuticky využitelný radionuklid, iont radioaktivního kovu emitující částice beta, částice alfa a Augerovy nebo CosterKronigovy elektrony.

Sloučeniny obsahující iont radioaktivního kovu emitující pozitrony nebo gama záření jsou použitelné pro zobrazování nádorů scintigrafií gama záření nebo pozitronovou emisní tomografií. Sloučeniny obsahující iont radioaktivního kovu «A * ♦ * φ ·· · · A * • · H A A ·

emitující pozitrony nebo gama záření jsou rovněž použitelné pro diagnostiku terapeutické angiogeneze scintigrafií gama záření nebo pozitronovou emisní tomografií. Farmaceutické sloučeniny obsahující iont radioaktivního kovu emitující částice jsou použitelné k léčbě rakoviny tím, že do nádorů vnášejí cytotoxickou dávku záření. Farmaceutické sloučeniny obsahující iont radioaktivního kovu emitující částice jsou rovněž použitelné k léčbě revmatické arthritidy tím, že ničí nově vytvořenou vaskulaturu. Sloučeniny obsahující iont paramagnetického kovu jsou použitelné jako diagnostické kontrastní látky pro nukleární magnetickou rezonanci. Sloučeniny obsahující jeden nebo více atomů absorbujících rentgenové záření nebo těžkých” atomů s atomovým číslem vyšším než 20 jsou použitelné jako diagnostické kontrastní látky pro rentgenové záření. Sloučeniny obsahující mikrobubliny biokompatibilního plynu, nějaký kapalný nosič a mikročástice povrchově aktivní látky jsou použitelné jako kontrastní látky pro ultrazvuk.

(1) První výhodné provedení vynálezu popisuje novou sloučeninu obsahující: směrující část a nějaké chelatotvorné činidlo, kde zmíněná směrující část spojená s chelatotvorným činidlem je peptid nebo peptidomimetikum vážící se na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena, a v této sloučenině jsou mezi směrující částí a chelatotvorným činidlem 0 až 1 spojující skupiny.

(2) Ve výhodném provedení vynálezu je zmíněnou směrující částí nějaký peptid nebo peptidomimetikum a zmíněný receptor je vybrán ze skupiny zahrnující: EGFR, FGFR, PDGFR, Flk1/KDR, Plt-1, Tek, Tře, neuropilin-1, endoglin, endosialin, Axl, a_vp3, οίνβδ, α₅βι, α₄βι, αιβχ a αίβ2 a mezi směrující částí a chelatotvorným činidlem je umístěna spojující skupina.

4

« · * · 4 ♦ «4	• * « • · ♦ 4 4 4 4	44 4 4 4 4 4 4 4 4
» 4	U «*4	«4 44

(3) Ve výhodnějším provedení vynálezu je zmíněným receptorem integrin α_νβ₃ a daná sloučenina je popsaná vzorcem:

(Q)d-L_n-C_h nebo (Q)_d-L_n- (C_h)_dkde Q je peptid nezávisle vybraný ze skupiny:

R¹-R² ,/^L\ t² R³

-R^q /^R\

Fr /

-M'

R^c

M* /

-R⁵

K je nějaká L-aminokyselina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: arginin, citrulin, N-methylarginin, lysin, homolysin, 2-aminoethylcystein, δ-Ν2-imidazolinylornithin, δ-N-benzylkarbamoylornithin a kyselinu β-2-benzimidazolylacetyl-l, 2-diaminopropanovou;

K' je nějaká D-aminokyselina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: arginin, citrulin, N-methylarginin, lysin, homolysin, 2-aminoethylcystein, δ-Ν-2-imidazolinylornithin, δ-N-benzylkarbamoylornithin a kyselinu β-2-benzimidazolylacetyl-l, 2-diaminopropanovou;

L je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, L-alanin a D-alanin;

M je kyselina L-asparágová;

M' je kyselina D-asparágová;

R¹ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, L-valin, D-valin, alanin, leucin, isoleucin, norleucin, kyselinu 2-aminobutanovou, kyselinu 2aminohexanovou, tyrosin, fenylalanin, thienylalanin, fenylglycin, cyklohexylalanin, homofenylalanin, 1-naftylalanin, lysin, serin, ornithin, kyselinu 1, 2-diaminobutanovou, kyselinu 1, 2-diaminopropanovou, cystein, penicilamin a methionin;

·♦ ·» ·» · # * ♦ * * » ♦ ·

R² je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, valin, alanin, leucin, isoleucin, norleucin, kyselinu 2-aminobutanovou, kyselinu 2aminohexanovou, tyrosin, L-fenylalanin, D-fenylalanin, thienylalanin, fenylglycin, bifenylglycin, cyklohexylalanin, homofenylalanin, L-l-naftylalanin, D-l-naftylalanin, lysin, serin, ornithin, kyselinu 1, 2-diaminobutanovou, kyselinu 1, 2-diaminopropanovou, cystein, penicilamin, methionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

R³ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, D-valin, D-alanin, D-leucin, Disoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, kyselinu D-2-aminohexanovou, D-tyrosin, D-fenylalanin, Dthienylalanin, D-fenylglycin, D-cyklohexylalanin, Dhomofenylalanin, D-l-naftylalanin, D-lysin, D-serin, Dornithin, kyselinu D-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu D-l, 2diaminopropanovou, D-cystein, D-penicilamin a D-methionin;

R⁴ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, D-valin, D-alanin, D-leucin, Disoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, kyselinu D-2-aminohexanovou, D-tyrosin, D-fenylalanin, Dthienylalanin, D-fenylglycin, D-cyklohexylalanin, Dhomofenylalanin, D-l-naftylalanin, D-lysin, D-serin, Dornithin, kyselinu D-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu D-l, 2diaminopropanovou, D-cystein, D-penicilamin, D-methionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

R⁵ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k Ln₍, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, L-valin, L-alanin, L-leucin, Lisoleucin, L-norleucin, kyselinu L-2-aminobutanovou, kyseli13 • B BB ·* ♦

Β Β · Β · ♦ · · nu L-2-aminohexanovou, L-tyrosin, L-fenylalanin, Lthienylalanin, L-fenylglycin, L-cyklohexylalanin, Lhomofenylalanin, L-l-naftylalanin, L-lysin, L-serin, Lornithin, kyselinu L-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu L-l, 2diaminopropanovou, L-cystein, L-penicilamin, L-methionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

za předpokladu, že v každém Q je jeden z R¹, R², R³, R⁴nebo R⁵ substituován vazbou k Ln, a dále za předpokladu, že jestliže R² je kyselina 2-aminothiazol-4-octová/ pak K je Nmethylarginin, dále za předpokladu, že jestliže R⁴ je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K a K jsou Nmethylarginin a dále za předpokladu, že jestliže R⁵ je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K je N-methylarginin;

d je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 a 10;

L_n je spojující skupina popsaná vzorcem:

(CR⁶R⁷)g- (W)h- (CR^6aR^7a)g-- (Z)_k- (W)_h-- (CR⁸R⁹)g- (W)_h--(CR^8aR^9a) g' , za předpokladu, že g+h+g^z+k+h^z+g^zz+h^zz+g^z'' se nerovná hule;

W je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: O, S, NH, NHC(=O), C(=O)NH, C(=O), C(=O)O, OC(=O), NHC(=S)NH, NHC(=O)NH, S0₂, (OCH₂CH₂)_S, (CH₂CH₂O)_S', (OCH₂CH₂CH₂)_s~, (CH₂CH₂CH₂O) _t a (aa)_t-;

aa je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená aminokyselina;

Z je vybrané ze skupiny zahrnující: aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, C₃-io cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰ a 5 až 10ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁰;

R⁶, R^6a, R⁷, R^7a, R⁸, R^8a, R⁹ a R^9a jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, =0,

9 :

99 * 9

9 99

9 · 9 9

9 99 9

9 9 9 9 9

9 9 · *

9 9 9 ··

999

9

COOH, SO₃H, PO₃H, Ci až C₅ alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, benzyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰ a Ci až C5 alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 3 R¹⁰, NHC^OR¹¹, C(=O)NHR¹¹, NHC (=0) NHR¹¹, NHR¹¹, R¹¹ a vazbu k Ch;

R¹⁰ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Ch, COOR¹¹, OH, NHR¹¹, SO3H, PO₃H, aryl substituovaný O až 1 R¹¹, Cx až C5 alkyl substituovaný O až 1 R¹², Ci až C5 alkyloxy sloučeninu substituovanou O až 1 R¹² a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹¹;

R¹¹ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, aryl substituovaný 0 až 1 R¹², 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 1 R¹², C3_io cykloalkyl substituovaný 0 až 1 R¹², polyalkylenglykol substituovaný 0 až 1 R¹², karbohydrát substituovaný 0 až 1 R¹², cyklodextrin substituovaný 0 až 1 R¹², aminokyselinu substituovanou 0 až 1 R¹², polykarboxyalkyl substituovaný 0 až 1 R¹², polyazaalkyl substituovaný 0 až 1 R¹², peptid substituovaný 0 až 1 R¹², kde zmíněný peptid obsahuje 2 až 10 aminokyselin a vazbu k Ch;

R¹² je vazba k Ch;

k je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2; h je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2; h' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; h'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6,

7, 8, 9 a 10;

g' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

6, 7, 8, 9 a 10;

g'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 a 10;

• · « Β ♦»♦··· * ''· Β · ’• ««ΒΒΒΒ *Β

Β ·ΒΒ·ΒΒΒ . Β

Β Β β · · · * 'Β ·. .

«Β Β» ·· «ΒΒ ,ΒΑ · g' ' ' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6,7,8,9310;

s je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6,

7, 8, 9 a 10;

s' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

6, 7, 8,9a 10;

s'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

6, 7, 8, 9 a 10;

t je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6,

7, 8, 9 a 10;

ť je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

6, 7, 8, 9 a 10;

Ch je část vážící kov popsaná vzorcem vybraným ze skupiny:

A¹, A², A³, A⁴, A⁵, A⁶, A⁷ a A⁸ jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: N, NR¹³, NR¹³R¹⁴, S, SH, S(Pg), O, OH, PR¹³, PR¹³R¹⁴, P(O)R¹⁵R¹⁶ a vazbu k L_n;

E je nějaká vazba, CH nebo spojující skupina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: Ci až Cio alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, C₃-io cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, hetero16 ·· 44 * ·· · • 44 4 4 4 4· 4444 # 4 44 4 4 4 444

4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4

444< 4 · 4 · · 4 «4 44 44 444 Μ 44« cyklo-Cx-xo alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, kde zmíněnou heterocyklickou skupinou je 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O, C₆_₁₀ aryl-Cx_₁₀ alkyl- substituovaný 0 až 3 R¹⁷, Či-χο alkyl-C6-io aryl- substituovaný 0 až 3 R¹⁷ a 5 až 10ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁷;

R¹³ a R¹⁴ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Ln, atom vodíku, Cx až C10 alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, Cx.lo cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, heterocyklo-Cx-χο alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, kde zmíněnou heterocyklickou skupinou je 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O, C6-lo aryl-Cx_x0 alkylsubstituovaný 0 až 3 R¹⁷, Cx.lo alkyl-C₆-xo aryl- substituovaný 0 až 3 R¹⁷, 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a 0 a substituované 0 až 3 R¹⁷a elektron za předpokladu, že jestliže buď R¹³ nebo R¹⁴ je elektron, pak druhý z této dvojice je rovněž elektron;

nebo R¹³ a R¹⁴ společně vytvářejí =C (R²⁰) (R²¹) ;

R¹⁵ a R¹⁶ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Ln, -OH, Οχ až C10 alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, Ο3.χ₀ cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, heterocyklo-Cx-χο alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, kde zmíněnou heterocyklickou skupinou je 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O, C6-xo aryl-Οχ.10 alkyl- substituovaný 0 až 3 R¹⁷, Οχ.χο alkyl-C6.xo aryl- substituovaný 0 až 3 R¹⁷ a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁷;

· 9 9 9 9 · 9 9

999» 9999 «99

9« 99 9 9 9 99 « 99 999 9 9 99 9

9999 99 9 9 9

99 99 999 99 9

R¹⁷ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Ln, =0, F, Cl, Br, I, -CF3, -CN, -CO2R¹⁸, -C(=O)R¹⁸, -C (=0) N (R¹⁸) 2, -CHO, -CH2OR¹⁸, -OC(=O)R¹⁸, OC (=0) 0R^18a, -OR¹⁸, -OC(=O)N(R¹⁸)2, -NR¹⁹C (=0) R¹⁸, NR¹⁹C (=0) 0R^18a, -NR¹⁹C(=O)N(R¹⁸)2, -NR¹⁹SO2N (R¹⁸) 2, -NR¹⁹SO2R^18a, SO3H, -SO₂R^18a, -SR¹⁸, -S(=O)R^18a, -SO2N(R¹⁸)2, -N(R¹⁸)2, NHC ( = S) NHR¹⁸, =NOR¹⁸, N02, -C (=0) NHOR¹⁸, -C (=0) NHNR¹⁸R^18a, OCH₂CO₂H, 2-(1-morfolino) ethoxy, C3.-C5 alkyl, C₂-C₄ alkenyl, C₃-C₆ cykloalkyl, C₃-C₆ cykloalkylmetyl, C₂-C₆ alkyloxyalkyl, aryl substituovaný 0 až 2 R¹⁸ a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a 0;

R¹⁸, R^18a a R¹⁹ jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k L_n, H, C!-C₆ alkyl, fenyl, benzyl, Ci~C₆ alkyloxy, halid, nitro, kyano a trifluormethyl;

Pg je chránící skupina thiolu;

R²⁰ a R²¹ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující:

H, Ca. až C10 alkyl, -CN, -CO₂R²⁵, -C(=O)R²⁵, -C (=0) N (R²⁵) 2, C2Cao 1-alken substituovaný 0 až 3 R²³, C2-Ca₀ 1-alkin substituovaný 0' až 3 R²³, aryl substituovaný 0 až 3 R²³, nesaturovaný 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a 0 a substituovaný 0 až 3 R²³ a nesaturovaný C₃.₁₀ karbocyklus substituovaný 0 až 3 R²³;

alternativně vytvářejí R²⁰ a R²¹ spolu s divalentním uhlíkovým radikálem, ke kterému jsou připojeny, strukturu:

n

R²² a R²³ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, R²⁴, C1-C10 alkyl substituovaný 0 až. 3 R²⁴, C₂-Ci₀ alkenyl

substituovaný 0 až 3 R²⁴, C2-C10 alkinyl substituovaný 0 až 3 R²⁴, aryl substituovaný 0 až 3 R²⁴, 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituovaný 0 až 3 R²⁴ a C3_i₀karbocyklus substituovaný 0 až 3 R²⁴;

alternativně vytvářejí R²² a R²³ kondenzovaný aromatický nebo 5 až 10-ti členný heterocyklický kruhový systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O;

a a b označují pozice možného výskytu dvojných vazeb a n je 0 nebo 1;

R²⁴ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: =0, F, Cl, Br, I, -CF3, -CN, -CO2R²⁵, C(=O)R²⁵, -C(=O)N(R²⁵)2, -N(R²⁵)3⁺, -CH2OR²⁵, -OC(=O)R²⁵, OC(=O)OR^25a, -OR²⁵, -OC(=O)N(R²⁵)2, -NR²⁶C (=0) R²⁵, NR²⁶C (=0) OR^25a, -NR²⁶C(=O)N(R²⁵)2, -NR²⁶SO2N(R²⁵)2, -NR²⁶SO2R^25a, SO3H, -SO₂R^25a, -SR²⁵, -S(=O)R^25a, -SO2N(R²⁵)2, -N(R²⁵)₂, =NOR²⁵,

-C (=0) NHOR²⁵, -OCH₂CO₂H a 2-(1-morfolino)ethoxy; a

R²⁵, R^25a a R²⁶ jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: atom vodíku a C_x až C₅ alkyl;

a nějakou její farmaceuticky přijatelnou sůl.

(4) V ještě výhodnějším provedení popisuje vynález sloučeninu, kde:

L je glycin;

R¹ je nějaká aminokyselina volitelně substituovaná vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: L-valin, D-valin, alanin, leucin, isoleucin, norleucin, kyselinu 2-aminobutanovou, tyrosin, fenylalanin, fenylglycin, cyklohexylalanin, homofenylalanin, lysin, ornithin, kyselinu 1, 2-diaminobutanovou a kyselinu 1, 2-diaminopropanovou;

ΦΦ ·· Φ ·· • Φ Φ · · · ΦΦ ΦΦΦ • ΦΦΦ ΦΦ Φ Φ · • Φ Φ Φ φ Φ Φ · Φ Φ ·

ΦΦΦΦ ♦· * ΦΦ

ΦΦ ΦΦ ΦΦ ΦΦΦ φφ φ

R² je nějaká aminokyselina volitelně substituovaná vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: valin, alanin, leucin, isoleucin, norleucin, kyselinu 2-aminobutanovou, tyrosin, L-fenylalanin, Dfenylalanin, thienylalanin, fenylglycin, bifenylglycin, cyklohexylalanin, homofenylalanin, L-l-naftylalanin, D-lnaftylalanin, lysin, ornithin, kyselinu 1, 2diaminobutanovou, kyselinu 1, 2-diaminopropanovou a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

R³ je nějaká aminokyselina volitelně substituovaná vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: D-valin, D-alanin, D-leucin, Disoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, Dtyrosin, D-fenylalanin, D-fenylglycin, D-cyklohexylalanin, D-homofenylalanin, D-lysin, D-serin, D-ornithin, kyselinu D1, 2-diaminobutanovou a kyselinu D-l, 2-diaminopropanovou;

R⁴ je nějaká aminokyselina volitelně substituovaná vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: D-valin, D-alanin, D-leucin, Disoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, Dtyrosin, D-fenylalanin, D-thienylalanin, D-fenylglycin, Dcyklohexylalanin, D-homofenylalanin, D-l-naftylalanin, Dlysin, D-ornithin, kyselinu D-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu D-l, 2-diaminopropanovou a kyselinu 2-aminothiazol-4octovou;

R⁵ je nějaká aminokyselina volitelně substituovaná vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: L-valin, L-alanin, L-leucin, Lisoleucin, L-norleucin, kyselinu L-2-aminobutanovou, Ltyrosin, L-fenylalanin, L-thienylalanin, L-fenylglycin, Lcyklohexylalanin, L-homofenylalanin, L-l-naftylalanin, Llysin, L-ornithin, kyselinu L-l, 2-diaminobutanovou, kyseli20 «9 99 «9 9 99

99 · 9 999 9 9 9

9 99 9 9 9 9 9 nu L-l, 2-diaminopropanovou a kyselinu 2-aminothiazol-4octovou;

d je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2 a 3;

W je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: O, NH, NHC(=O), C(=O)NH, C(=O), C(=O)O, OC(=O)’, NHC(=S)NH, NHC(=O)NH, S0₂, (OCH₂CH₂)_a, (CH₂CH₂O)_S-, (OCH₂CH₂CH₂)_a~ a (CH₂CH₂CH₂O) _t;

Z je vybrané ze skupiny zahrnující: aryl substituovaný 0 až 1 R¹⁰, C₃.io cykloalkyl substituovaný 0 až 1 R¹⁰ a 5 až 10ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 1 R¹⁰;

R⁶, R^6a, R⁷, R^7a, R⁸, R^8a, R⁹ a R^9a jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, =0, COOH, SO3H, Cx až C5 alkyl substituovaný 0 až 1 R¹⁰, aryl substituovaný 0 až 1 R¹⁰, benzyl substituovaný 0 až 1 R¹⁰ a Cx až C₅ alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 1 R¹⁰, NHC(=0)R¹¹, C(=O)NHR^1X, NHC(=O)NHR¹¹, NHR¹¹, R¹¹ a vazbu k C_h;

R¹⁰ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: COOR¹¹, OH, NHR¹¹, SO₃H, aryl substituovaný 0 až 1 R¹¹, 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N,

S a 0 a substituované 0 až 1 R¹¹, Cx až C5 alkyl substituovaný 0 až 1 R¹², Cx až C₅ alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 1 R¹² a vazbu k C_h;

R¹¹ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, aryl substituovaný 0 až 1 R¹², 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 1 R¹², polyalkylenglykol substituovaný 0 až 1 R¹², karbohydrát substituovaný 0 až 1 R¹², cyklodextrin substituovaný 0 až 1 R¹², aminokyselinu substituovanou 0 až 1 R¹² a vazbu k Ch;

*9 4«	9» 4	99
• 9 · ·	9 · ··	9 · 9
9 · 99	9 9 9	9 9
• · · 9	9 9 999	9 9 9

k je číslo vybrané z následujících: 0 nebo 1; h je číslo vybrané z následujících: 0 nebo 1; h' je číslo vybrané z následujících: 0 nebo 1; s je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; s' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; s'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; t je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5;

A¹, A², A³, A⁴, A⁵, A⁶, A⁷ a A⁸ jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: NR¹³,

NR¹³R¹⁴, S, SH, S(Pg), OH a vazbu k L_n;

E je nějaká vazba, CH nebo spojující skupina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: Ci až Cio alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, C₃-io cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷ a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁷;

R¹³ a R¹⁴ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k L_n/ atom vodíku, C_x až C_i0 alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁷a elektron za předpokladu, že jestliže buď R¹³ nebo R¹⁴ je elektron, pak druhý z této dvojice je rovněž elektron;

alternativně R¹³ a R¹⁴ společně vytvářejí =C (R²⁰) (R²¹) ;

R¹⁷ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Ln, =0, F, Cl, Br, I, -CF3, -CN, -CO2R¹⁸, -C(=O)R¹⁸, -C(=O)N(R¹⁸)2, -CH₂OR¹⁸, -OC(=O)R¹⁸, OC(=O)OR^18a, -OR¹⁸, -OC(=O)N(R¹⁸)2, -NR¹⁹C (=0) R¹⁸, NR¹⁹C (=0) OR^18a, -NR¹⁹C(=O)N(R¹⁸)2, -NR¹⁹SO2N(R¹⁸)2, NR¹⁹SO2R^18a, SO3H, -SO2R^18a, -S(=O)R^18a, -SO2N(R¹⁸)2, -N(R¹⁸)2, -NHC (=S) NHR¹⁸, =N0R¹⁸, -C (=0) NHNR¹⁸R^18a, -OCH2CO₂H a 2-(1-morfolino) ethoxy;

9«	99		99	9		99
• 9	9 9	9	•	9 9	9	9 ·
• ·	99	9	9	9	9	9

• 9 • 9	9 · • 9	9	9 99	9 999	9	9 9 9 ·

R¹⁸, R^18a a R¹⁹ jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k L_n, H a Ci-C₆ alkyl;

r2o _{a R}2i j_gou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující:

H, Cx až C₅ alkyl, -CO₂R²⁵, C2-C5 1-alken substituovaný 0 až 3 R²³, C2-C₅ 1-alkin substituovaný 0 až 3 R²³, aryl substituovaný 0 až 3 R²³ a nesaturovaný 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituovaný 0 až 3 R²³;

r22 _{a r}23 j_sou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H a R²⁴;

R²⁴ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: -CO2R²⁵, -C (=0) N (R²⁵) 2/-CH₂OR²⁵, OC(=O)R²⁵, -OR²⁵, -SO3H, -N(R²⁵)2 a -OCH₂CO₂H; a

R²⁵ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: atom vodíku a Ci až C₃ alkyl.

(5) V ještě výhodnějším provedení popisuje vynález sloučeninu, kde:

Q je peptid vybraný ze skupiny:

• 9	99	99 9	99
9	9	• 9	9 9	99	9 9	9
9	•	99	9 9	9	9 9
•
•	•	• ·	9 9	9	9 9
99		>·	99	999	99	9

R¹ je L-valin, D-valin, D-lysin volitelně substituovaný na ε aminoskupině vazbou k L_n nebo L-lysin volitelně substituovaný na ε aminoskupině vazbou k L_n;

R² je L-fenylalanin, D-fenylalanin, D-l-naftylalanin, kyselina 2-aminothiazol-4-octová, L-lysin volitelně substituovaný na ε aminoskupině vazbou k L_n nebo tyrosin volitelně substituovaný na hydroxy skupině vazbou k L_n;

R³ je D-valin, D-fenylalanin nebo L-lysin volitelně substituovaný na ε aminoskupině vazbou k L_n;

R⁴ je D-fenylalanin, D-tyrosin substituovaný na hydroxy skupině vazbou k L_n nebo L-lysin volitelně substituovaný na ε aminoskupině vazbou k L_n;

za předpokladu, že v každém Q je jeden z R¹ nebo R² substituován vazbou k L_n, a dále za předpokladu, že jestliže R²je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K je Nmethylarginin;

d j e 1 nebo 2;

W je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: NHC(=O), C(=O)NH, C(=0), (CH₂CH₂O)_S' a (CH₂CH₂CH₂O) _t ;

R⁶, R^6a, R⁷, R^7a, R⁸, R^8a, R⁹ a R^9a jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, NHC(=O)R^1:1 a vazbu k Ch;

k je 0 ;

h'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2 a 3; g je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5;

• «

I je číslo vybrané z následujících: 0,

5;

s' je 1 nebo 2; t je 1 nebo 2;

C_h je A¹ ,ή²—E~ή⁴— E-y\^—E—A⁷ l

A^Ď

R.

• Α φ ΦΦ • · · · 9 9 • A 9 9 · 9 9 A

1, 2, 3, 4a

A¹ je vybrané ze skupiny zahrnující: OH a vazbu k L_n; A², A⁴ a A⁶ jsou N;

A³, A⁵ a A⁸ jsou OH;

A⁷ je vazba k L_n nebo NH-vazba k L_n;

E je nějaký C₂ alkyl substituovaný 0 až 1 R¹⁷;

R¹⁷ je =0;

alternativně, Ch je y'

E-A²

A¹ je NH₂ nebo N=C(R²⁰) (R²¹) ;

E je nějaké vazba;

A² je NHR¹³;

R¹³ je heterocyklus substituovaný R¹⁷, kde tento heterocyklus je buď pyridin nebo pyrimidin;

R¹⁷ buď vazba k L_n, C(=0)NHR¹⁸ nebo C(=0)R¹⁸;

R¹⁸ je vazba k L_n;

R²⁴ je zvolené ze skupiny zahrnující: -CO2R²⁵, -OR²⁵, SO3H a -N(R²⁵)₂;

R²⁵ v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: atom vodík a methyl;

• · · · · • · 4 4 4 tt a5 alternativně, C_h je _χΑ

A¹, A², A³ a A⁴ jsou N;

A⁵, A⁶ a A⁸ jsou OH;

A⁷ je vazba k L_n;

E je C₂ alkyl substituovaný 0 až 1 R¹⁷; a

R¹⁷ je =0.

(6) V jiném, ještě výhodnějším provedení, popisuje vynález sloučeninu vybranou ze skupiny zahrnující:

(a) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-3aminopropyl)-Val};

(b) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr((N-[2- [ [[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-18amino-14-aza-4,7,10-oxy-15-oxo-oktadekanoyl)-3-aminopropyl)Val} ;

(c) [2-[[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono] methyl]benzensulfonová kyselina]-Glu(cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl)Val-Arg-Gly-Asp})-cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl)-Val-Arg-GlyAsp} ;

(d) cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys([2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])};

(e) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys([2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])};

• · · · • · ·· ’ · · 1 » · · ι ♦ · ·· (f) [2-[[ [5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina] -Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}) cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe};

(g) [2-[[ [5-[karbonyl]-2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová kyselina] -Phe-Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-DPhe})-cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe};

(h) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Nal-Lys ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina] ) } ;

(i) [2- [ [ [5- [karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová kyselina] -Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal}) cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal};

(j ) cyklo{Arg-Gly-Asp-Lys ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])-DVal};

(k) [2- [ [ [5- [karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová kyselina]-Glu(cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp})cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp};

(l) {cyklo (Arg-D-Val-D-Tyr (N- [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina] -3aminopropyl)-D-Asp-Gly};

(m) cyklo{D-Lys( [2- [ [ [5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina] ) -DPhe-D-Asp-Gly-Arg};

(n) [2- [ [ [5- [karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová kyselina]-Glu(cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-GlyArg})-cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg};

(o) cyklo{D-Phe-D-Lys( [2 - [ [ [5-[karbonyl] - 2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina] )-DAsp-Gly-Arg};

(p) cyklo{N-Me-Arg-Gly-Asp-ATA-D-Lys-([2- [[ [5[karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina] ) } ;

(q) cyklo{Cit-Gly-Asp-D-Phe-Lys ( [2- [ [ [5- [carbonyl] -227 pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])};

(r) 2-(1,4,7,10-tetraaza-4,7,10-tris(karboxymethyl)-1cyklododecyl)acetyl-Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe})cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe};

(s) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(DTPA)};

(t) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys}₂ (DTPA) ;

(u) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr(N-DTPA-3-aminopropyl)-Val};

(v) cyklo{0rn(d-N-2-imidazolinyl)-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2[[[5-[carbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val};

(w) cyklo{Lys-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2-[[[5-[carbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-3aminopropyl)-Val};

(x) cyklo{Cys(2-aminoethyl)-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2- [ [ [5[carbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val};

(y) cyklo{HomoLys-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2-[[[5-[carbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-3aminopropyl)-Val};

(z) cyklo{0rn(d-N-benzylkarbamoyl)-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2[[[5-[carbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val};

(aa) cyklo{Dap(b-(benzimidazolylacetyl))-Gly-Asp-DTyr (N- [2-[[[5-[carbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val};

(bb) cyklo{Orn(d-N-2-imidazolinyl)-Gly-Asp-D-Phe-Lys (N[2-[[[5-[carbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina])};

(cc) cyklo{0rn(d-N-benzylkarbamoyl)-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N[2-[[[5-[carbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina])};

(dd) cyklo{Lys-D-Val-D-Tyr(N-[2-[[[5-[carbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-328 • 4 9 4 4 449 Λ 449 • 9 99 · 9 4 9 9 4

9 4 9 4 4 9 .4 . 9 4 4 · • · 9 · · · · « 9 9 *· 9· 99 999 99 999 aminopropyl)-D-Asp-Gly};

(ee) cyklo{Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-D-Val-D-Tyr (N-[2[[[5-[carbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl] benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-D-Asp-Gly}; a (ff) cyklo{Orn(d-N-2-imidazolinyl)-D-Val-D-Tyr(N-[2[[[5-[carbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl] benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-D-Asp-Gly} ;

nebo jejich farmaceuticky přijatelnou sůl.

(7) V jiném, ještě výhodnějším provedení, popisuje vynález soupravu (kit) obsahující nějakou sloučeninu podle vynálezu.

(8) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, zmíněná souprava podle vynálezu dále obsahuje jeden nebo více pomocných ligandů a nějakou redukující látku.

(9) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, jsou zmíněnými pomocnými ligandy tricin a TPPTS.

(10) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je zmíněnou redukující látkou cín (II).

(11) Ve druhém výhodném provedení vynález popisuje nový diagnostický nebo terapeutický metalofarmakon obsahující: nějaký kov, chelatotvorné činidlo schopné chelatovat daný kov a směrující část, kde tato směrující část, navázaná na zmíněné chelatotvorné činidlo, je peptid nebo peptidomimetikum a váže se na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena. V této sloučenině jsou směrující část a chelatotvorné činidlo spojeny 0 až 1 spojující skupinou.

(12) V jiném výhodném provedení vynálezu je zmíněným metalof armakem diagnostický radiofarmakon, zmíněným kovem je radioizotop vybraný ze skupiny: ^99mTc, ⁹⁵Tc, ^ulIn, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Ga a ⁶⁸Ga; směrující částí je nějaký peptid nebo peptidomimetikum a zmíněný receptor je vybrán ze skupiny zahrnující:

EGFR, FGFR, PDGFR, Flk-l/KDR, Flt-1, Tek, Tie, neuropilin-1,

9 9» · 9 • 9 · · 9 9 • 9 99 99

9 9 · 9 •9 «9 9 9 • ,9-. · ·· endoglin, endosialin, Axl, α_νβ₃, α_νβ₅ζ α₅βΐζ α₄β_1ζ αιβ_χ a α₂β₂, a mezi směrující částí a chelatotvorným činidlem je umístěna spojující skupina.

(13) V jiném výhodném provedení vynálezu je zmíněnou směrující částí nějaký cyklický pentapeptid a receptorem je α_νβ₃.

(14) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je zmíněným radioizotopem ^99tnTc nebo ⁹⁵Tc, a radiofarmakon dále obsahuje nějaký první pomocný ligand a nějaký druhý pomocný ligand schopné tento radiofarmakon stabilizovat.

(15) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je zmíněným radioizotopem ^99mTc.

(16) V jiném výhodném provedení vynálezu je zmíněný radiofarmakon vybrán ze skupiny zahrnující:

^99tnTc (tricin) (TPPTS) (cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Tyr(N-[[5[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido]-3-aminopropyl)-Val));

⁹⁹”Tc (tricin) (TPPMS) (cyklo (Arg-D-Val-D-Tyr (N- [ [5[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido]-3-aminopropyl)-D-AspGly));

^99mTc (tricin) (TPPDS) (cyklo(Arg-D-Val-D-Tyr(N-[[5[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido]-3-aminopropyl)-D-AspGly));

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo (Arg-D-Val-D-Tyr (N-[ [5[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido]-3-aminopropyl)-D-AspGly));

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N-[[5[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido])));

^99mTc (tricin) (TPPTS) ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-PheGlu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe})-cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-DPhe});

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Nal-Lys ( [2- [ [ [5[karbonyl] -2-pyridinyl)hydrazono]methyl]-benzensulfonová ky30

A 9 » , • · selina]) }) ;

^99mTc (tricin) (TPPTS) ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp~D-Nal})-cyklo{Lys-Arg-Gly~Asp-DNal});

⁹⁹ⁱⁿTc (tricin) (TPPTS) (cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Tyr ( (N- [ [5[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido]-18-amino-14-aza-4,7,10oxy-15-oxo-oktadekoyl)-3-aminopropyl)-Val));

^99mTc (tricin) (TPPTS) (N- [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl]diazenido]-Glu(O-cyklo(Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe))-0cyklo(Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe));

^99n,Tc (tricin) (TPPTS) (N- [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl]diazenido]-Glu(O-cyklo(D-Tyr(3-aminopropyl)-ValArg-Gly-Asp))-O-cyklo(D-Tyr(3-aminopropyl)-Val-Arg-GlyAsp));

^99raTc (tricin)(TPPTS)(cyklo (Arg-Gly-Asp-Lys (N-[ [5[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido])-D-Val));

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo{D-Lys ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl)hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])-DPhe-D-Asp-Gly-Arg});

^99mTc (tricin) (TPPTS) ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]Glu(cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg})-cyklo{D-Lys-D-Phe-DAsp-Gly-Arg});

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo{D-Phe-D-Lys ( [2- [ [ [5[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina] )-D-Asp-Gly-Arg});

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo (N-Me-Arg-Gly-Asp-ATA-D-Lys-(N[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido] )));

^99tnTc (tricin) (TPPTS) (cyklo{cit-Gly-Asp-D-Phe-Lys ( [2- [ [ [5[carbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])}); a ^99mTc (tricin) (1,2,4-triazol) (cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Tyr(N31 • · · 4 ·· 4 · · • 4 4 4 4 · 4 · « · 4 · ·· »4 » ' 4 · • · 4 * 4 » · · ·· «4 44 ··· I» 44 t[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido]-3-aminopropyl)-Val) ) .

(17) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je zmíněným radioizotopem ^1:L1In.

(18) V jiném výhodném provedení vynálezu je zmíněný radiofarmakon vybrán ze skupiny zahrnující:

(DOTA-^11:lIn) -Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}) cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe};

cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (DTPA-^11:LIn)) ; a cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) ₂ (DTPA-^luIn) .

(19) V jiném výhodném provedení vynálezu je zmíněným metalofarmakem terapeutický radiofarmakon, zmíněným kovem je radioizotop vybraný ze skupiny: ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu, ¹⁴⁹Pm, ⁹⁰Y, ²¹²Bi, ¹⁰³Pd, ¹⁰⁹Pd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁴⁰La, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁶⁵Dy, ¹⁶⁶Dy, ⁶⁷Cu, ¹⁰⁵Rh, ^1:L1Ag, and ¹⁹²Ir; směrující částí je nějaký peptid nebo peptidomimetikum a zmíněný receptor je vybrán ze skupiny zahrnující: EGFR, FGFR, PDGFR, Flk-1/KDR, Flt-1, Tek, Tie, neuropilin-1, endoglin, endosialin, Axl, α_νβ3, α_νβ₅, α₅βι, α₄β_1ζ οίχβι a α₂β2, a mezi směrující částí a chelatotvorným činidlem je umístěna spojující skupina .

(20) V jiném výhodném provedení vynálezu je zmíněnou směrující částí nějaký cyklický pentapeptid a receptorem je «νβ3 · (21) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je zmíněným radioizotopem ¹⁵³Sm.

(22) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je radiofarmakon vybrán ze skupiny zahrnující:

• * * · · · • · · .» * 4 9 ·

Β · « 4 cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (DTPA-¹⁵³Sm) ) ;

cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)₂ (DTPA-¹⁵³Sm) ; a cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Tyr (N-DTPA (¹⁵³Sm) -3-aminopropyl) Val) .

(23) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je zmíněným radioizotopem ¹⁷⁷Lu.

(24) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je radiofarmakon vybrán ze skupiny zahrnující:

cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (DTPA-¹⁷⁷Lu) ) ;

(DOTA-¹⁷⁷Lu) -Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}) -cyklo{LysArg-Gly-Asp-D-Phe};

cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) ₂ (DTPA-¹⁷⁷Lu) ; a cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Tyr (N-DTPA (¹⁷⁷Lu) -3-aminopropyl) Val) .

(25) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je zmíněným radioizotopem ⁹⁰Y.

(26) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu se jedná o radiofarmakon:

(DOTA-⁹⁰Y) -Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe} ) -cyklo{LysArg-Gly-Asp-D-Phe};

(27) V jiném výhodném provedení vynálezu je zmíněným metalofarmakem kontrastní látka pro MRI, zmíněným kovem je iont paramagnetického kovu vybraný ze skupiny: Gd(III), Dy(III), Fe(III) a Mn(II); směrující částí je nějaký peptid nebo peptidomimetikum a zmíněný receptor je vybrán ze skupiny zahrnující: EGFR, FGFR, PDGFR, Flk-l/KDR, Flt-1, Tek,

Tie, neuropilin-1, endoglin, endosialin, Axl, α_νβ₃, α_νβ₅, • · 9 4 ·« » 9 9 • 99« «999 ♦ * 9 • 9*9 9 9 9 9 9

99 9 9 * 9 « »9 9

999 « «4 9 « 9

9 9 9 «9 4 9 9 . . 9 9 9 α₅βι, α₄βι, «ιβι a α₂β₂, a mezi směrující částí a chelatotvorným činidlem je umístěna spojující skupina.

(28) V jiném výhodném provedení vynálezu je zmíněnou směrující částí nějaký cyklický pentapeptid a receptorem je «νβ3 · (29) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je zmíněným iontem kovu Gd(III).

(30) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je zmíněnou kontrastní látkou:

cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Tyr (N-DTPA(Gd(III) ) -3-aminopropyl) Val) .

(31) V jiném výhodném provedení vynálezu je zmíněným metalofarmakem kontrastní látka pro rentgenové záření, zmíněný kov je vybrán ze skupiny: Re, Srn, Ho, Lu, Pm, Y, Bi, Pd, Gd,

La, Au, Au, Yb, Dy, Cu, Rh, Ag a Ir; směrující částí je nějaký cyklický pentapeptid, zmíněným receptorem je α_νβ₃, a mezi směrující částí a chelatotvorným činidlem je umístěna spojující skupina.

(32) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový způsob léčby revmatické arthritidy pacienta, kde tento způsob zahrnuje: podání terapeutického radiofarmaka podle vynálezu schopného lokalizace v nově vytvořené vaskulatuře organizmu pacienta, a to injekčně nebo infúzí.

(33) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový způsob léčby rakoviny u pacienta, kde tento způsob zahrnuje: podání terapeutického radiofarmaka podle vynálezu pacientovi, a to injekčně nebo infúzí.

·» »* «* · ·* · ♦ · * · ··· .4 φ «φ * Φ ·· · · · ... * · · « · * » * · · 9 · * · * » · φ φ · φ · «-φ φ • » · * Φ» ΦΦΦ φφ ΦΦΦ (34) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový způsob diagnostického zobrazování angiogeneze v organizmu pacienta, kde tento způsob zahrnuje: (1) podání diagnostického radiofarmaka podle vynálezu, kontrastní látky pro MRI podle vynálezu nebo kontrastní látky pro rentgenové záření podle vynálezu pacientovi, a to injekčně nebo infuzí;

(2) zobrazení místa v organizmu pacienta, kde dochází k vytváření nových krevních cév.

(35) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový způsob diagnostického zobrazování rakoviny v organizmu pacienta, kde tento způsob zahrnuje: (1) podání diagnostického radiofarmaka podle vynálezu pacientovi, a to injekčně nebo infuzí; (2) monitorování organizmu pacienta pomocí planární nebo SPÉCT scintigrafie záření gama nebo pozitronové emisní tomografie.

(36) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový způsob diagnostického zobrazování rakoviny v organizmu pacienta, kde tento způsob zahrnuje: (1) podání kontrastní látky pro MRI podle vynálezu; a (2) monitorování organizmu pacienta s využitím magnetické rezonance.

(37) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový způsob diagnostického zobrazování rakoviny v organizmu pacienta, kde tento způsob zahrnuje: (1) podání kontrastní látky pro rentgenové záření podle vynálezu; a (2) monitorování organizmu pacienta pomocí rentgenové počítačové tomografie.

(38) Ve třetím výhodném provedení vynález popisuje novou sloučeninu použitelnou v přípravku pro kontrastní zobrazová35 « · ·

• · ní ultrazvukem a obsahující: směrující část a nějakou povrchově aktivní látku, kde zmíněná směrující část spojená s povrchově aktivní látkou je peptid nebo peptidomimetikum vážící se na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena, a v této sloučenině jsou mezi směrující částí a povrchově aktivní látkou 0 až 1 spojující skupiny.

(39) Ve výhodném provedení vynálezu je zmíněnou směrující částí nějaký peptid nebo peptidomimetikum a zmíněný receptor je vybrán ze skupiny zahrnující: EGFR, FGFR, PDGFR, Flk-l/KDR, Flt-1, Tek, Tie, neuropilin-1, endoglin, endosialin, Axl, α_νβ₃, α_νβ₅, α₅βι, α₄βι, οίχβι a α₂β2 a mezi směrující částí a povrchově aktivní látkou je umístěna spojující skupina .

(40) Ve výhodnějším provedení vynálezu je zmíněným receptorem integrin α_νβ₃ a daná sloučenina je popsaná vzorcem:

(Q)d-hn-Sf kde Q je cyklický pentapeptid nezávisle vybraný ze skupiny:

L-M'

R³-R

K je nějaká D-aminokyselina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: arginin, citrulin, N-methylarginin, lysin, homolysin, 2-aminoethylcystein, • · ·· ·* · «4 • 9·· ···· · · <

49«· «4 · · · « ·· · * · » · « » · • · « · · · · ft · • · « · · · · * · · · · δ-Ν-2-imidazolinylornithin, δ-N-benzylkarbamoylornithin a kyselinu β-2-benzimidazolylacetyl-l, 2-diaminopropanovou;

M je kyselina L-asparágová;

M je kyselina D-asparágová;

R² je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, valin, alanin, leucin, isoleucin, norleucin, kyselinu 2-aminobutanovou, kyselinu 2aminohexanovou, tyrosin, L-fenylalanin, D-fenylalanin, thienylalanin, fenylglycin, bifenylglycin, cyklohexylalanin, homof enylalanin, L-l-naftylalanin, D-l-naftylalanin, lysin, serin, ornithin, kyselinu 1, 2-diaminobutanovou, kyselinu 1, 2-diaminopropanovou, cystein, penicilamin, methionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

R³ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, D-valin, D-alanin, D-leucin, Disoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, kyselinu D-2-aminohexanovou, D-tyrosin, D-fenylalanin, Dthienylalanin, D-fenylglycin, D-cyklohexylalanin, Dhomofenylalanin, D-l-naftylalanin, D-lysin, D-serin, D37 ·« · * «· « «· ♦ 4 · · 4 4 · 4 ♦ · «

4*·· * 4 · 44 · 4 4 4 4 4 9 ·4 4 ♦ 44 4 · » 9 · 4

4 * · 4 · 4·4 4 9 4 ornithin, kyselinu D-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu D-l, 2diaminopropanovou, D-cystein, D-penicilamin a D-methionin;

R⁵ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, L-valin, L-alanin, L-leucin, Lisoleucin, L-norleucin, kyselinu L-2-aminobutanovou, kyselinu L-2-aminohexanovou, L-tyrosin, L-fenylalanin, Lthienylalanin, L-fenylglycin, L-cyklohexylalanin, Lhomofenylalanin, L-l-naftylalanin, L-lysin, L-serin, Lornithin, kyselinu L-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu L-l, 2diaminopropanovou, L-cystein, L-penicilamin, L-methionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

za předpokladu, že v každém Q je jeden z R¹, R², R³, R⁴ a R⁵ substituován vazbou k L_n, a dále za předpokladu, že jestliže R² je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K je Nmethylarginin, dále za předpokladu, že jestliže R⁴ je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K a K jsou Nmethylarginin a dále za předpokladu, že jestliže R⁵ je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K' je N-methylarginin;

d je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 a 10;

Sf je povrchově aktivní látka, která je buď lipidové povahy nebo sloučenina popsaná vzorcem:

A⁹'

E^UA¹⁰

A⁹ je vybrané ze skupiny zahrnují: OH a OR²⁷;

A¹⁰ je OR²⁷;

R²⁷ je C(=O)Ci_₂₀ alkyl;

E¹ je Ci-io alkenyl substituovaný 1 až 3 R²⁸;

R²⁸ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: R³⁰, -PO3H-R³⁰, =0, -CO2R²⁹, -C(=O)R²⁹, C(=O)N(R²⁹)2, -CH₂OR²⁹, -OR²⁹, -N(R²⁹)₂, Οχ až C₅ alkyl a C₂ až C₄ alkenyl;

R²⁹ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: R³⁰, H, C_x až C₆ alkyl, fenyl, benzyl a trifluormethyl;

R³⁰ je vazba k L_n;

L_n je spojující skupina popsaná vzorcem:

(CR⁶R⁷)g- (W)h- (CR^6aR^7a)g-- (Z)_k- (W)_h-- (CR⁸R⁹)g~- (W)h~(CR^8aR^9a)g---,

W je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: O, S, NH, NHC(=O), C(=O)NH, C{=0), C(=0)0, 0C(=0), NHC(=S)NH, NHC(=0)NH, S0₂, (OCH₂CH₂) ₂₀-₂₀₀, (CH₂CH₂O) 20-200 z (OCH₂CH₂CH₂) 20-200 z (CH₂CH₂CH₂O) 20-200 ^a (aa) ť;

aa je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená aminokyselina;

Z je vybrané ze skupiny zahrnující: aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, C3-10 cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰ a 5 až 10ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁰;

R⁶, R^6a, R⁷, R^7a, R⁸, R^8a, R⁹ a R^9a jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, =0, COOH, SO₃H, PO₃H, Ci až C₅ alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, benzyl substituovaný 0 až 3 • 4 4« *· * «♦' • 4 4 4 · * 44 ♦ ·

4 44 4 a 4 · « « 4 « · 4 4 4 4 « φ 4 • 44 · 4 4 4 4 4

4 4 4 4 4 4 44 . . ·. 4 4 .·

R¹⁰ a Ci až C5 alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 3 R¹⁰, NHC(=O)R^1:l, C(=O)NHR^X1, NHC^ONHR¹¹, NHR¹¹, R¹¹ a vazbu k Sf;

R¹⁰ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Sf, COOR¹¹, OH, NHR¹¹, SO3H, PO₃H, aryl substituovaný 0 až 3 R¹¹, Cx až C5 alkyl substituovaný 0 až 1 R¹², Ci až C5 alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 1 R¹² a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹¹;

R¹¹ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, aryl substituovaný 0 až 1 R¹², 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 1 R¹², C₃_io cykloalkyl substituovaný 0 až 1 R¹², aminokyselinu substituovanou 0 až 1 R¹² a vazbu k Sf,·

R¹² je vazba k Sf,· k je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2; h je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2; h' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; h'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6,

7, 8, 9 a 10;

g' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

6, 7, 8, 9 a 10;

g' ' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

6, 7, 8, 9 a 10;

g'' ' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

6, 7, 8, 9a 10;

ť je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

6, 7, 8, 9 a 10;

a nějakou její farmaceuticky přijatelnou sůl.

,x^Lx _Kx^RX

K R

XX

M' • * · · 9 9 9 9 · » · • »99 · « 9 9 9

99 9 · 9 9 · · '4 9· • 99 9 9 9 9 9 «

99 ·* 999 . ..f»,··. 9 (41) V jiném, ještě výhodnějším provedení vynálezu, je zmíněná sloučenina popsaná vzorcem:

Q-L_n-Sf kde Q je cyklický pentapeptid nezávisle vybraný ze skupiny:

R*-R* R^a——R⁴ L-M'

M je kyselina L-asparágová;

M je kyselina D-asparágová;

·♦ ·* ·· · ·· • · · ♦ * · · · . · · « • 999 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 · ♦ » · 9 · 9 · 9 · « • · 9 9 9 9 9 9.9 9

R⁵ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, L-valin, L-alanin, L-leucin, Lisoleucin, L-norleucin, kyselinu L-2-aminobutanovou, kyseli42

·*	« ·> ·	4 4
• ··	• ·	9	9 9
9 4 ·	9 9	9
• 9	4 9	9 99	4 9 ·

nu L-2-aminohexanovou, L-tyrosin, L-f enylalanin, Lthienylalanin, L-fenylglycin, L-cyklohexylalanin, Lhomofenylalanin, L-l-naftylalanin, L-lysin, L-serin, Lornithin, kyselinu L-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu L-l, 2diaminopropanovou, L-cystein, L-penicilamin, L-methionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

za předpokladu, že v každém Q je jeden z R¹, R², R³, R⁴ a R⁵ substituován vazbou k L_n, a dále za předpokladu, že jestliže R² je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K je Nmethylarginin, dále za předpokladu, že jestliže R⁴ je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K a K jsou Nmethylarginin a dále za předpokladu, že jestliže R⁵ je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K je N-methylarginin;

E^UA¹⁰ :A⁹

A⁹ je OR²⁷;

A¹⁰ je OR²⁷;

R²⁷ je Ο(=θ)θ!.ι₅ alkyl;

E¹ je Ci-4 alkylen substituovaný 1 až 3 R²⁸;

R²⁸ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: R³⁰, -PO3H-R³⁰, =0, -CO2R²⁹, -C(=O)R²⁹, CH2OR²⁹, -OR²⁹ a Οχ až C5 alkyl;

R²⁹ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: R³⁰, Η, Οχ až C₆ alkyl, fenyl a benzyl;

R³⁰ je vazba k L_n;

L_n je spojující skupina popsaná vzorcem:

(CR⁶R⁷)g- (W)h- (CR^6aR^7a)g-- (Z)_k- (W)_h- (CR⁸R⁹)g~- (W)h— (CR^8aR^9a)g---,

W je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: 0, S, NH, NHC(=0), C(=O)NH, C(=0),

C(=0)0, 0C(=0), NHC(=S)NH, NHC(=O)NH, S0₂, (OCH₂CH₂) _2O-₂oo, (CH₂CH₂O) 2Q-200, (OCH₂CH₂CH₂) 20-200, (CH₂CH₂CH₂O) _2O-_2Oo a (aa)_t-;

aa je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená aminokyselina;

Z je vybrané ze skupiny zahrnující: aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, C₃-₁₀ cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰ a 5 až 10ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁰;

R⁶, R^6a, R⁷, R^7a, R⁸, R^8a, R⁹ a R^9a jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, =0, Ci až C5 alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰ a Cx až C₅ alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 3 R¹⁰ a vazbu k S_f;

R¹⁰ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Sf, COOR¹¹, OH, NHR¹¹, Οχ až C5 alkyl substituovaný 0 až 1 R¹² a Cx až C₅ alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 1 R¹²;

R¹¹ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, aryl substituovaný 0 až 1 R¹², C₃.₁₀cykloalkyl substituovaný 0 až 1 R¹², aminokyselinu substituovanou 0 až 1 R¹² a vazbu k Sf,· . R¹² je vazba k Sf;

k je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2; h je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2; h' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; h' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g''' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a

5;

s je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; s' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5;

4 • 44 4 4 4 44 * 4 4 • · ·4 · · · · · s'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; t je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2,3,4a 5; ť je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; a nějakou její farmaceuticky přijatelnou sůl.

(42) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynálezu, je sloučenina vybraná ze skupiny:

1-(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolamino)-12(cyk1o(Arg-G1y-Asp-D-Phe-Lys)-dodekan-1,12 -dion;

1-(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolamino)-12( (o-amino-PEG₃₄o₀-a-karbonyl) -cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) ) dodekan-1,12-dion;

1-(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolamino)-12( (o-amino-PEG₃4o₀-a-karbonyl) -Glu- (cyklo (Arg-Gly-Asp-D-PheLys))₂)-dodekan-1,12-dion.

(43) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový přípravek kontrastní látky pro ultrazvuk, kde tento přípravek obsahuje:

(a) sloučeninu zahrnující: nějaký cyklický pentapeptid vážící integrin α_νβ₃, povrchově aktivní látku a spojující skupinu mezi zmíněným cyklickým pentapeptidem a povrchově aktivní látkou;

(b) nosič přijatelný pro parenterální aplikaci; a (c) echogenní plyn.

(44) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynálezu, zmíněný přípravek kontrastní látky pro ultrazvuk dále zahrnuje: kyselinu 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidovou,

1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidylcholin a N(methoxypolyethylenglykol 5000 karbamoyl)-1,2-dipalmitoylsn-glycero-3-fosfatidylethanolamin.

·· ·· · ··

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • · · · · · · · « • · « · 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 99 9 9 ,... 9 (45) V jiném výhodném provedení vynálezu je zmíněným echogenních plynem C₂.₅ perfluorkarbon.

(46) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje způsob diagnostického zobrazování rakoviny v organizmu pacienta, kde tento způsob zahrnuje: (1) podání přípravku kontrastní látky pro ultrazvuk podle vynálezu pacientovi, a to buď injekčně nebo infuzí; a (2) monitorování organizmu pacienta sonograficky.

(47) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový způsob diagnostického zobrazování nově vytvořených cév v organizmu pacienta, kde tento způsob zahrnuje: (1) podání přípravku kontrastní látky pro ultrazvuk podle vynálezu pacientovi, a to buď injekčně nebo infuzí; a (2) zobrazení místa v organizmu pacienta, kde dochází k vytváření nových cév.

(48) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový přípravek terapeutického radiofarmaka zahrnující:

(a) terapeutický radiofarmakon podle vynálezu; a (b) nosič přijatelný pro parenterální aplikaci.

(49) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový přípravek diagnostického radiofarmaka zahrnující:

(a) nějaký diagnostický radiofarmakon, kontrastní látku podle vynálezu pro MRI nebo kontrastní látku podle vynálezu pro rentgenové záření; a (b) nosič přijatelný pro parenterální aplikaci.

(50) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový přípravek terapeutického radiofarmaka zahrnující: radioaktivně značenou směrující část, kde zmíněnou směrující ·· «· ·· * »· « · · · · · · · ··· ······ 9 .44

9 4 4 9 9 4 9 4 4 4

4 4 4 4 4 4 · · ·· * · « ·* ·· » částí je nějaká sloučenina Q a radioaktivní značkou je nějaký terapeuticky používaný izotop vybraný ze skupiny zahrnující: ³⁵S, ³²P, ¹²⁵I, ¹³²I a ²¹¹At.

(51) V jiném, ještě výhodnějším, provedení vynález popisuje nový přípravek terapeutického radiofarmaka zahrnující: radioaktivně značenou směrující částí, kde zmíněnou směrující částí je nějaká sloučenina Q a radioaktivní značkou je nějaký terapeuticky používaný izotop, a to izotop ¹³¹I.

Další výhodná provedení vynálezu popisují diagnostické soupravy pro přípravu radiofarmak využitelných pro diagnostické zobrazováni rakoviny nebo tvorby nových cév. Tyto diagnostické soupravy podle vynálezu zahrnují jednu nebo více ampulek obsahujících sterilní, nepyrogenní směsi obsahující předdefinované množství nějaké sloučeniny podle vynálezu a volitelně další složky jako například jeden nebo dva pomocné ligandy, redukční činidla, transferové ligandy, pufry, látky usnadňující lyofilizaci, stabilizátory, solubilizátory a bakteriostatika. Přídavek jedné nebo více volitelných složek do přípravku velmi často usnadňuje syntézu koncovým uživatelem, usnadňuje výrobu soupravy, prodlužuje dobu použitelnosti soupravy nebo zvyšuje stabilitu a prodlužuje životnost daného radiofarmaka. Přidání jednoho nebo více pomocných ligandů je nezbytné u diagnostických souprav zahrnující činidla obsahující hydrazin nebo hydrazon. Celý přípravek nebo pouze jeho část mohou být v jedné nebo více ampulkách a to nezávisle ve formě sterilního roztoku nebo lyofilizované pevné látky.

Definice

Sloučeniny popsané ve vynálezu mohou obsahovat asymetrická centra. Není-li řečeno jinak, do rozsahu vynálezu spa47

	99	9·	99	9		99
•	•	9 9	• 9	• 9	•	9 9
•	9	99	• ·	9	9	9
•
•	9 99	9 · 99	9 9 99	9 9 99	•	9 • 9 - 9

dají všechny chirální, diastereoizomerní a racemické formy zmíněných sloučenin. Sloučeniny podle vynálezu mohou rovněž obsahovat mnoho geometrických izomerů olefinů, dvojných vazeb C=N a podobně, a veškeré tyto stabilní izomery taktéž spadají do rozsahu vynálezu. Je zřejmé, že sloučeniny podle vynálezu obsahují asymetricky substituované uhlíkové atomy a mohou být tedy izolovány jako opticky aktivní nebo racemické formy. Příprava opticky aktivních forem sloučenin je v současnosti známa a zahrnuje například oddělení jednotlivých racemických forem nebo syntézu z opticky aktivního výchozího materiálu. Je známo, že existují dva odlišné izomery (cis a trans) peptidové vazby. Oba tyto izomery mohou být rovněž přítomny ve sloučeninách podle vynálezu a všechny tyto stabilní izomery taktéž spadají do rozsahu vynálezu. D- a L-izomery jednotlivých aminokyselin jsou v této přihlášce popsány za použití ustálených třípísmenných zkratek aminokyselin, jak je naznačeno v následujícím příkladu: D-Leu nebo L-Leu.

Existuje-li možnost výskytu více než jedné varianty jakéhokoliv substituentu nebo jakéhokoliv vzorce, při každém takovém výskytu je definice tohoto substituentu (nebo vzorce) nezávislá na jeho definici v každém jiném případu. Je-li například znázorněno, že nějaká skupina je substituována 0 až 2 R⁵², pak zmíněná skupina může být volitelně substituována až dvěma R⁵² a v každém jednotlivém případu je R⁵² nezávisle vybrán z definovaného seznamu všech možných R⁵². Příkladem rovněž může být případ skupiny -N(R⁵³)₂, kde každý ze dvou substituentů R⁵³ na dusíku je nezávisle vybrán z definovaného seznamu všech možných R⁵³. Kombinace substituentů a/nebo proměnných jsou povoleny pouze tehdy, jestliže tyto kombinace umožňují vytvoření stabilní sloučeniny. Je-li vazba k nějakému substituentu znázorněna tak, že kříží vazbu ·· ·· φφ φφφφ · · φ φ φφ φ φ • φ φ · φ · φ φφφφ φ φ

Φ£ ΦΦ ΦΦ

Φ ΦΦ

ΦΦ Φ Φ Φ

Φ Φ Φ

Φ φ Φ Φ

Φ Φ Φ

ΦΦΦ ΦΦ Φ spojující dva atomy v kruhu, pak tento substituent může být navázán na jakýkoliv atom tvořící tento kruh.

Termíny farmaceutická látka, farmaceutická sloučenina” jsou označovány sloučeniny podle vynálezu, které mohou být přeměněny na metalofarmakon podle vynálezu. Tato reakční činidla mohou být využita přímo při přípravě metalofarmaka podle vynálezu nebo mohou být součástí nějaké soupravy podle vynálezu.

Termín vazebná látka označuje metalofarmakon podle vynálezu, který má afinitu k receptorů pro vitronektin a je schopen se na tento receptor vázat. Vazebné látky podle vynálezu mají ve výhodném provedení Ki < 1000 nM.

Termín metalofarmakon používaný v této přihlášce označuje nějakou farmaceuticky přijatelnou sloučeninu obsahující kov, kde tato sloučenina je použitelná k diagnostickému zobrazování, diagnostickému zobrazování magnetickou nukleární rezonancí, diagnostickému kontrastnímu zobrazování nebo diagnostickému zobrazování rentgenovým zářením. Zmíněný kov je nepostradatelný pro vznik detekovatelného signálu při diagnostických aplikacích a je zdrojem cytotoxického záření při radioterapeutických aplikacích. Termínem radiofarmakon se rozumí metalofarmakon, ve kterém je zmíněným kovem nějaký radioizotop.

Termín stabilní sloučenina nebo stabilní struktura používaný v této přihlášce označuje sloučeninu, která může být z reakční směsi vyizolována do použitelného stupně čistoty a upravena do formy účinné farmaceutické látky.

Termín substituovaný používaný v této přihlášce označuje skutečnost, že jeden nebo více atomů vodíku na příslušném atomu nebo skupině je nahrazeno nějakou skupinou z předloženého seznamu, a to za předpokladu, že není překročena maximální vaznost daného atomu nebo skupiny, a že výsledkem takové substituce je stabilní sloučenina. Je-li sub49 ·

stituentem keto skupina (tj . =0), pak jsou na příslušném atomu nahrazeny dva vodíky.

Termín vazba používaný v této přihlášce označuje nějakou jednoduchou nebo dvojnou vazbu.

Termín sůl používaný v této přihlášce je definován ve smyslu CRC Handbook of Chemistry and Physics, 65. vydání,

CRC Press, Boča Raton, Fla, 1984, jako jakákoliv látka schopná vytvářet jiné než vodíkové nebo hydroxylové ionty. Termín farmaceuticky přijatelné soli označuje deriváty sloučenin podle vynálezu modifikované tak, že vytvářejí kyselé nebo zásadité soli. Příkladem farmaceuticky přijatelných solí jsou (výčet není limitující) soli bazických zbytků, jako například aminů, a anorganických nebo organických kyselin; anorganické nebo organické soli kyselých zbytků, jako například karboxylových kyselin; a podobně.

Termín farmaceuticky přijatelný používaný v této přihlášce označuje sloučeniny, materiály, přípravky a/nebo dávkovači formy, které jsou podle lékařského úsudku vhodné pro použití, při němž dochází ke kontaktu výše zmíněných s lidskými nebo živočišnými tkáněmi, a to bez nadměrné toxicity, podráždění, alergické reakce nebo jiných problémů nebo komplikací a při zajištění přijatelného poměru užitek/ riziko.

Termín farmaceuticky přijatelné soli označuje deriváty sloučenin podle vynálezu, kde mateřská sloučenina je modifikována tak, že existuje ve formě kyselé nebo bazické soli. Příkladem farmaceuticky přijatelných solí jsou (výčet není limitující) soli bazických zbytků, jako například aminů, a anorganických nebo organických kyselin; anorganické nebo organické soli kyselých zbytků, jako například karboxylových kyselin; a podobně. Příkladem farmaceuticky přijatelných solí jsou běžně používané netoxické soli nebo kvartérní amoniové soli mateřské sloučeniny a netoxických anorganických ne50

bo organických kyselin. Příkladem takových netoxických solí jsou soli odvozené od anorganických kyselin jako například kyseliny chlorovodíkové, chromovodíkové, sírové, amodosírové, fosforečné, dusičné a podobně; a soli připravené z organických kyselin jako například kyseliny octové, propanové, butandiové, glykolové, stearové, mléčné, vinné, citrónové, askorbové, pamoové, maleinové, hydroxymaleinové, fenyloctové, glutamové, benzoové, salicylové, sulfanilové, 2acetoxybenzoové, fumarové, toluensulfonové, methansulfonové, ethandisulfonové, oxalové, 2-hydroxyethansulfonové a podobně .

Farmaceuticky přijatelné soli podle vynálezu mohou být z mateřské sloučeniny, která obsahuje nějakou bazickou nebo kyselou část, syntetizovány tradičními postupy. Tyto soli mohou být obecně připraveny reakcí zmíněných sloučenin ve formě volných bází nebo kyselin se stechiometrickým množstvím odpovídající báze nebo kyseliny ve vodě nebo nějakém organickém rozpouštědle nebo ve směsi vody a organického rozpouštědla; ve výhodném provedení jsou využívána nevodná média jako například ether, ethylacetát, ethanol, izopropanol nebo acetonitril. Seznamy vhodných solí mohou být nalezeny v publikaci Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. vydání, Mack Publishing Co., Easton, PA 18042, strana 1418, 1985, která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Termín, alkyl používaný v této přihlášce označuje jak rozvětvené, tak nerozvětvené nasycené alifatické uhlovodíkové skupiny o definovaném počtu uhlíkových atomů. Ci-io alkyl zahrnuje Ci, C₂, C₃, C₄, C₅, C_Sí C₇, C₈, C₉ a C₁₀ alkylové skupiny. Příkladem alkylů jsou (výčet není limitující) methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, s-butyl, t-butyl, npentyl a s-pentyl. Termín halogenalkyl používaný v této přihlášce označuje jak rozvětvené, tak nerozvětvené nasycené

• · · · · ♦ ·

4·· · · • · · 4 4 · · · · · · ·

4 44 ·· · alifatické uhlovodíkové skupiny o definovaném počtu uhlíkových atomů, substituované 1 nebo více halogeny (například C_VF_W, kde v=laž3aw=laž (2v+l)). Příkladem halogenalkylů jsou (výčet není limitující) trifluormethyl, trichlormethyl, pentafluorethyl pentachlorethyl. Termín alkyloxy používaný v této přihlášce označuje alkylovou skupinu jak je definována výše s označeným počtem atomů uhlíku spojených prostřednictvím kyslíkového můstku. Ci_i₀ alkyloxy zahrnuje C_lř C₂, C₃, C₄, C₅, C₆, C₇, C₈, C₉ a C₁₀ alkyloxy skupiny. Příkladem alkyloxy sloučenin jsou (výčet není limitující) methyloxy, ethyloxy, n-propyloxy, i-propyloxy, nbutyloxy, s-butyloxy, t-butyloxy, n-pentyloxy a s-pentyloxy skupiny. Termín cykloalkyl používaný v této přihlášce označuje nasycené cyklické skupiny, jako například cyklobutyl, cyklopropyl nebo cyklopentyl. C₃.₇ cykloalkyl zahrnuje C₃, C₄, C₅, Cg a C₇ cykloalkylové skupiny. Termín alkenyl používaný v této přihlášce označuje jak rozvětvené, tak nerozvětvené uhlovodíkové řetězce s jednou nebo více nenasyce nými vazbami mezi dvěma atomy uhlíku v místech, kde je výskyt takové vazby možný. Příkladem jsou například ethenyl nebo propenyl. C₂-io alkenyl zahrnuje C₂, C₃, C_4/ C₅, C₆, C₇, C₈, C₉ a Cio alkenylové skupiny. Termín alkinyl používaný v této přihlášce označuje jak rozvětvené, tak nerozvětvené uhlovodíkové řetězce s jednou nebo více trojnými vazbami me zi dvěma atomy uhlíku v místech, kde je výskyt takové vazby možný. Příkladem jsou například ethinyl nebo propinyl. C₂.₁₀alkinyl zahrnuje C₂, C₃, C₄, C₅, C₆, C₇, C₈, C₉ a C₁₀ alkinylové skupiny.

Termín karbocyklus nebo karbocyklický zbytek používaný v této přihlášce označuje jakoukoliv stabilní 3, 4, 5, 6 nebo 7-člennou monocyklickou nebo bicyklickou sloučeninu nebo 7, 8, 9, 10, 11, 12 nebo 13-člennou bicyklickou nebo tricyklickou sloučeninu, přičemž každá z těchto sloučenin • · · · ···· * · • · «· · · · · · • · · * · » · · ·· · • ·· · · · · · · • · ·· ·· ·· · ·· může být nasycená, částečně nenasycená nebo aromatické povahy. Příkladem takových karbocyklů jsou (výčet není limitující) cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, adamantyl, cyklooktyl, [3.3.0]bicyklooktan, [4.3.0]bicyklononan, [4.4.0]bicyklodekan, [2.2.0]bicyklooktan, fluorenyl, fenyl, naftyl, indanyl, adamantyl a tetrahydrogennaftyl.

Termín alkylaryl používaný v této přihlášce označuje jakoukoliv arylovou skupinu nesoucí alkylovou skupinou o délce řetězce 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 nebo 10 uhlíkových atomů. Termín arylalkyl používaný v této přihlášce označuje jakoukoliv alkylovou skupinu o délce řetězce 1, 2, 3, 4,

5, 6, 7, 8, 9 nebo 10 uhlíkových atomů nesoucí arylovou skupinu. Termín arylalkylaryl používaný v této přihlášce označuje jakoukoliv arylovou skupinu nesoucí alkylovou skupinu o délce řetězce 1 až 10 uhlíkových atomů nesoucí arylovou skupinu. Termín heterocykloalkyl používaný v této přihlášce označuje jakoukoliv alkylovou skupinu o délce řetězce 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 nebo 10 uhlíkových atomů nesoucí nějaký heterocyklus.

Termín heterocyklus nebo heterocyklický systém používaný v této přihlášce označuje jakýkoliv stabilní 5, 6 nebo 7-členný monocyklický nebo bicyklický nebo 7, 8, 9, 10členný bicyklický heterocyklický kruh, přičemž každá z těchto sloučenin může být nasycená, částečně nenasycená nebo nenasycená (aromatické povahy) a je tvořena uhlíkovými atomy a 1, 2, 3 nebo 4 heteroatomy nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující N, NH, O a S. Tento termín rovněž označuje jakoukoliv bicyklickou skupinu, ve které je jakýkoliv z výše uvedených heterocyklických kruhů spojen s benzenovým jádrem. Heteroatomy dusíku a síry mohou být oxidovány. Heterocyklický kruh může být k další skupině připojen jakýmkoliv heteroatomem nebo atomem uhlíku za předpokladu, že vznikne

stabilní struktura. Atom dusíku v heterocyklu může být ve formě kvartérní soli. Je-li celkový počet atomů S a 0 v heterocyklu vyšší než 1, pak ve výhodném provedení tyto atomy spolu nesousedí. Ve výhodném provedení není celkový počet atomů S a 0 v heterocyklu vyšší než 1. Termín aromatický heterocyklický systém nebo heteroaryl používaný v této přihlášce označuje jakýkoliv stabilní 5, 6 nebo 7členný monocyklický nebo bicyklický nebo 7, 8, 9, 10-členný bicyklický heterocyklický aromatický kruh tvořený uhlíkovými atomy a 1, 2, 3 nebo 4 heteroatomy nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující N, NH, 0 a S. Je třeba zdůraznit, že celkový počet atomů síry nebo kyslíku není v aromatickém heterocyklu vyšší než 1.

Příkladem heterocyklů jsou (výčet není limitující): akridinyl, azocinyl, benzimidazolyl, benzofuranyl, benzothiofuranyl, benzothiofenyl, benzoxazolyl, benzthiazolyl, benztriazolyl, benztetrazolyl, benzisoxazolyl, benzisothiazolyl, benzimidazolinyl, karbazolyl, 4aH-karbazolyl, karbolinyl, chromanyl, chromenyl, cinnolinyl, dekahydrochinolinyl, 2H,6H-1,5,2-dithiazinyl, dihydrofuro[2,3-b] tetrahydrofuran, furanyl, furazanyl, imidazolidinyl, imidazolinyl, imidazolyl, 1H-indazolyl, indolenyl, indolinyl, indolizinyl, indolyl, 3H-indolyl, isobenzofuranyl, isochromanyl, isoindazolyl, isoindolinyl, isoindolyl, isochinolinyl, isothiazolyl, isoxazolyl, methylendioxyfenyl, morfolinyl, naftyridinyl, oktahydroisochinolinyl, oxadiazolyl, 1,2,3-oxadiazolyl,

1,2,4-oxadiazolyl, 1,2,5-oxadiazolyl, 1,3,4-oxadiazolyl, oxazolidinyl, oxazolyl, oxazolidinyl, pyrimidinyl, fenantridinyl, fenantrolinyl, fenazinyl, fenothiazinyl, fenoxythiinyl, fenoxazinyl, ftalazinyl, piperazinyl, piperidinyl, piperidonyl, 4-piperidonyl, piperonyl, pteridinyl, purinyl, pyranyl, pyrazinyl, pyrazolidinyl, pyrazolinyl, pyrazolyl, pyridazinyl, pyridooxazol, pyridoimidazol, pyridothiazol, • · ·« · · • ♦ · · · • · ·· · pyridinyl, pyridyl, pyrimidinyl, pyrolidinyl, pyrolinyl, 2Hpyrolyl, pyrolyl, chinazolinyl, chinolinyl, 4H-chinolizinyl, chinoxalinyl, chinuklidinyl, tetrahydrofuranyl, tertahydroisochinolinyl, tertahydrochinolinyl, tetrazolyl, 6H-1,2,5thiadiazinyl, 1,2,3-thiadiazolyl, 1,2,4-thiadiazolyl, 1,2,5thiadiazolyl, 1,3,4-thiadiazolyl, thianthrenyl, thiazolyl, thienyl, thienothiazolyl, thienooxazolyl, thienoimidazolyl, thiofenyl, triazinyl, 1,2,3-triazolyl, 1,2,4-triazolyl,

1,2,5-triazolyl, 1,3,4-triazolyl a xanthenyl. Ve výhodném provedení jsou používány (výčet není limitující): pyridinyl, furanyl, thienyl, pyrolyl, pyrazolyl, pyrolidinyl, imidazolyl, indolyl, benzimidazolyl, ΙΗ-indazolyl, oxazolidinyl, benzotriazolyl, benzisoxazolyl, oxindolyl, benzoxazolinyl a isationyl. Mezi tyto heterocykly rovněž patří kondenzované kruhy a spiro-sloučeniny obsahující například některý z výše uvedených heterocyklů.

Termín polyalkylenglykol označuje polyethylenglykol, polypropylenglykol nebo polybutylenglykol o molekulové hmotnosti nižší než přibližně 5000 a zakončený buď hydroxylovou skupinou nebo alkyletherem.

Termín karbohydrát označuje polyhydroxy aldehyd, keton, alkohol nebo kyselinu, nebo jejich deriváty, včetně polymerů těchto sloučenin, kde je vazba mezi monomery typu acetalu.

Termín cyklodextrin označuje nějaký cyklický oligosacharid. Příkladem cyklodextrinů jsou (výčet není limitující) a-cyklodextrin, hydroxyethyl-a-cyklodextrin, hydroxypropyla-cyklodextrin, β-cyklodextrin, hydroxypropyl-βcyklodextrin, karboxymethyl-β-cyklodextrin, dihydroxypropylβ-cyklodextrin, hydroxyethyl-β-cyklodextrin, 2,6-di-Omethyl-β-cyklodextrin, sulfatovaný β-cyklodextrin, γcyklodextrin, hydroxypropyl-Y-cyklodextrin, dihydroxypropyl55 ·· ♦· 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 99 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 · • · · · · · · · · • · · · · 9 99 9 9 9 9 γ-cyklodextrin, hydroxyethyl-Y-cyklodextrin a sulfatovaný γcyklodextrin.

Termín polykarboxyalkyl používaný v této přihlášce označuje alkylovou skupinu o počtu uhlíkových atomů v rozmezí 2 až 100 s množstvím karboxylových substituentů. Termín polyazaalkyl používaný v této přihlášce označuje rozvětvenou nebo nerozvětvenou alkylovou skupinu o počtu uhlíkových atomů v rozmezí 2 až 100, kde tento uhlovodíkový řetězec je přerušen nebo substituován větším počtem aminoskupin.

Termín redukující látka, redukční činidlo označuje nějakou sloučeninu reagující s radionuklidem, který je obvykle získáván ve formě relativně nereaktivní sloučeniny ve vysokém oxidačním stavu, tak, že snižuje oxidační stav daného radionuklidu předáváním elektronu (elektronů), čímž ho činí více reaktivním. Příkladem redukčních činidel použitelných při přípravě radiofarmak nebo diagnostických souprav využitelných při přípravě výše zmíněných radiofarmak jsou (výčet není limitující) chlorid cínatý, fluorid cínatý, kyselina formamidinsulfinová, kyselina askorbová, cystein, fosfiny a měďné nebo železnaté soli. Další redukční činidla jsou popsána v přihlášce PCT 94/22496, Brodack a další, která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Termín transferový ligand označuje nějaký ligand vytvářející s iontem kovu přechodný komplex, který je natolik stabilní, aby bránil průběhu nežádoucích vedlejších reakcí, ale který je natolik labilní, aby mohl být přeměněn na metalofarmakon. Vznik tohoto přechodného komplexu je upřednostňován kineticky, zatímco vznik metalofarmaka je upřednostňován termodynamicky. Příkladem transferových ligandů použitelných při přípravě radiofarmak nebo diagnostických souprav využitelných při přípravě výše zmíněných radiofarmak jsou ·· 4 4 4» 4 4 4 • 4 4 · · 4·· 4 4 4

4 44 4 4 4 · 4 (výčet není limitující) glukonát, glukoheptonát, manitol, glukarát, kyselina Ν,Ν,Ν , N-ethylendiamintetraoctová, pyrofosfát a methylendifosfonát. Obecně lze říci, že transferové ligandy obsahují jako donorové atomy 0 nebo N.

Termín donorový atom označuje atom, který je chemickou vazbou přímo připojen k atomu kovu.

Termín pomocné ligandy nebo ko-ligandy označuje ligandy, které jsou do radiofarmaka začleněny v průběhu syntézy. Jejich úkolem je, spolu s chelatotvorným činidlem nebo jednotkou vážící kov, vyplnit koordinační sféru daného radionuklidu. U radiofarmak s binárním systémem ligandů obsahuje koordinační sféra daného radionuklidu jedno nebo více chelatotvorných činidel nebo jednotek vážících kov (z jedné nebo více sloučenin podle vynálezu) a jeden nebo více pomocných ligandů a to za předpokladu, že celkově jsou přítomny dva typy ligandů, chelatotvorných činidel a jednotek vážících kov. Například radiofarmakon obsahující jedno chelatotvorné činidlo nebo jednotku vážící kov z jedné sloučeniny podle vynálezu a dva stejné pomocné ligandy nebo ko-ligandy je považován za radiofarmakon s binárním systémem ligandů. Rovněž tak radiofarmakon obsahující dvě chelatotvorná činidla nebo dvě jednotky vážící kov z jedné nebo dvou sloučenin podle vynálezu je považován za radiofarmakon s binárním systémem ligandů. U radiofarmak s ternárním systémem ligandů obsahuje koordinační sféra daného radionuklidu jedno nebo více chelatotvorných činidel nebo jednotek vážících kov (z jedné nebo více sloučenin podle vynálezu) a jeden nebo více pomocných ligandů rozdílných typů a to za předpokladu, že celkově jsou · přítomny tři typy ligandů, chelatotvorných činidel a jednotek vážících kov. Například radiofarmakon obsahující jedno chelatotvorné činidlo nebo jednotku vážící kov z jedné sloučeniny podle vynálezu a dva odlišné pomocné ligandy nebo ko57

99 99 9 99

9 9 9 9 999 9 9

99 999 99 ligandy je považován za radiofarmakon s ternárním systémem ligandů.

Pomocné ligandy nebo ko-ligandy použitelné pro přípravu radiofarmak nebo diagnostických souprav využitelných při přípravě takových radiofarmak obsahují jeden nebo více donorových atomů kyslíku, dusíku, uhlíku, síry, fosforu, arsenu, selenu a teluru. Ligandem může být transferový ligand použitý při syntéze radiofarmaka a tento může rovněž sloužit jako pomocný ligand nebo ko-ligand v jiném metalofarmaku. Je-li daný ligand označován jako transferový ligand nebo pomocný ligand (ko-ligand) závisí na tom, zda-li tento ligand zůstane v koordinační sféře radionuklidu v daném radiofarmaku. To je determinováno koordinační chemií daného radionuklidu a chelatotvorného činidla nebo jednotky vážící kov dané sloučeniny nebo sloučenin.

Termín chelatotvorné činidlo, chelátor kovů nebo jednotka vážící kov označuje část nebo skupinu na sloučenině, kde tato část nebo skupina váže iont kovu, a to prostřednictvím chemické vazby jednoho nebo více donorových atomů.

Termín vazebné místo označuje místo in vitro nebo in vivo, které váže nějakou biologicky aktivní molekulu.

Termín diagnostická souprava nebo souprava označuje sadu složek (označovanou farmaceutický přípravek) v jedné nebo více ampulkách, kde tyto složky jsou koncovým uživatelem v klinickém nebo lékárenském zařízení použity k přípravě diagnostického radiofarmaka. Souprava obsahuje všechny složky nezbytné k syntéze a použití diagnostického radiofarmaka s výjimkou složek, které jsou koncovému uživateli běžně dostupné. Takovými složkami jsou například voda nebo fyziologický roztok pro injekce, roztok radionuklidu, zařízení sloužící k zahřátí soupravy v průběhu syntézy radiofarmaka, a je-li to žádoucí vybavení nezbytné k aplikaci radiofarmaka

do organizmu pacienta, jako například stříkačky, a stínící materiál a diagnostické zařízení.

Terapeutická radiofarmaka, přípravky s kontrastní látkou pro rentgenové záření, přípravky s kontrastní látkou pro ultrazvuk a metalofarmaka s kontrastní látkou pro magnetickou rezonanci jsou koncovému uživateli dodávány v konečné podobě obvykle jako přípravek v jedné ampulce, a to ve formě lyofilizované pevné látky nebo vodného roztoku. V závislosti na dodávané formě pak koncový uživatel rozpustí lyofilizát ve vodě nebo fyziologickém roztoku a odebere příslušnou dávku pro aplikaci pacientovi nebo jednoduše odebere příslušnou dávku z vodného roztoku.

Termín látka usnadňující lyofilizací označuje nějakou složku, která má příhodné fyzikální vlastnosti pro proces lyofilizace, jako je například teplota skelného přechodu. Tato složka je přidána k přípravku za účelem zlepšení fyzikálních vlastností směsi všech složek tohoto přípravku při lyofilizaci.

Termín stabilizátor označuje nějakou složku přidávanou do metalofarmaka nebo diagnostické soupravy za účelem stabilizace daného metalofarmaka nebo za účelem prodloužení životnosti diagnostické soupravy. Jako stabilizátory mohou sloužit antioxidanty, redukční činidla nebo vychytávače radikálů, a tyto stabilizátory mohou vylepšovat stabilitu například tím, že přednostně reagují s látkami, které degradují nějaké jiné složky soupravy nebo metalofarmakonu.

Termín solubilizátor označuje nějakou složku, která zlepšuje rozpustnost jedné nebo více komponent v médiu používaném pro formulaci přípravku.

Termín bakteriostatikum označuje nějakou složku, která inhibuje růst baktérií v přípravku, a to buď v průběhu skladování před vlastním použitím přípravku nebo poté, co je diagnostická souprava použita k syntéze radiofarmaka.

• 9 99 • t » 9

9 99

9 9 9

99

4 99

9 99 « 9

9 9 4 4

4 4 9 4

9 499 9 9

Termín aminokyselina používaný v této přihlášce označuje nějakou organickou sloučeninu nesoucí jak bazickou aminoskupinu, tak kyselou karboxylovou skupinu. Tento termín zahrnuje přirozeně se vyskytující aminokyseliny (například L-aminokyseliny) , modifikované nebo neobvyklé aminokyseliny (například D-aminokyseliny), a rovněž aminokyseliny, které se přirozeně vyskytují ve volné formě nebo ve formě konjugátů, ale obvykle nejsou součástí proteinů. Tento termín rovněž zahrnuje modifikované nebo neobvyklé aminokyseliny, jako například aminokyseliny popsané v publikaci Roberts a Vellaccio, The Peptides, 5:342 až 429, 1983, která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu. Příkladem přirozeně se vyskytujících aminokyselin jsou (výčet není limitující) alanin, arginin, asparagin, kyselina asparagová, cystein, kyselina glutamová, glutamin, glycin, histidin, isoleucin, leucin, lysin, methionin, fenylalanin, prolin, serin, threonin, tryptofan, tyrosin a valin. Příkladem přirozeně se vyskytujících neproteinových aminokyselin jsou (výčet není limitující) kyselina argininjantarová, citrulin, kyselina cysteinsulfinová, 3,4dihydroxyfenylalanin, homocystein, homoserin, ornitin, 3monojodtyrosin, 3,5-dijodtyrosin, 3,5,5'-trijodtyrosin a 3,3',5,5'-tetrajodtyrosin. Příkladem modifikovaných nebo neobvyklých aminokyselin, které mohou být použity při praktickém využití vynálezu, jsou (výčet není limitující) Daminokyseliny, hydroxylysin, 4-hydroxyprolin, aminokyseliny chráněné skupinou N-Cbz, kyselina 2,4-diaminobutanová, homoarginin, norleucin, kyselina N-methylaminobutanová, naftylalanin, fenylglycin, β-fenylprolin, terc-leucin, 4aminocyklohexylalanin, N-methyl-norleucin, 3,4dehydroprolin, Ν,Ν-dimethylaminoglycin, N-methylaminoglycin, kyselina 4-aminopiperidin-4-karboxylová, kyselina 6aminokapronová, kyselina trans-4-(aminomethyl)60 cyklohexankarboxylová, kyseliny 2-, 3- a 4 -(aminomethyl)benzoové, kyselina 1-aminocyklopropankarboxylová a kyselina 2-benzyl-5-aminopentanová.

Termín peptid používaný v této přihlášce označuje nějakou lineární sloučeninu složenou ze dvou nebo více aminokyselin (tak jak jsou definovány v této přihlášce) spojených peptidovou vazbou. Termín peptid používaný v této přihlášce označuje část, která má molekulovou hmotnost nižší než 10000 Da, výhodněji pak nižší než 5000 Da a ještě výhodněji nižší než 2500 Da. Termín peptid rovněž označuje sloučeniny obsahující jak peptidovou, tak nepeptidovou část, jako například pseudopeptid nebo peptidomimetikum nebo jiné složky neaminokyselinové povahy. Sloučeniny obsahující jak peptidovou tak nepeptidovou část mohou být rovněž označovány jako peptidové analogy.

Termín pseudopeptid nebo peptidomimetikum označuje nějakou sloučeninu, která mimikuje strukturu nějakého aminokyselinového zbytku nebo peptidu například tím, že namísto peptidové vazby jsou peptidomimetikum a nějaká aminokyselina spojeny jiným způsobem (pseudopeptidovou vazbou), a/nebo že je použit neaminokyselinový substituent a/nebo nějaká modifikovaná aminokyselina. Termín pseudopeptidová část nebo pseudopeptidový zbytek označuje část pseudopeptidu nebo peptidomimetika nacházející se v nějakém peptidu.

Termín peptidová vazba označuje kovalentní amidovou vazbu vytvořenou mezi karboxylovou skupinou jedné aminokyseliny a aminoskupinou druhé aminokyseliny, přičemž při vytvoření této vazby je uvolněna molekula vody.

·· ·· • · * 4 4 4

4 4 4 4 4 · 4 4 4 4 4

4 4 4 4 4 • 4 4 4 4 4

Termín peptidové vazby označuje izostery peptidové vazby, které mohou být použity namísto klasické amidové vazby. Tyto substituované vazby nebo vazby ekvivalentní vazbě amidové jsou tvořeny kombinací atomů, které obvykle nenacházíme v peptidech nebo proteinech, a které napodobují prostorové uspořádání amidové vazby, a které by měly stabilizovat molekulu vůči enzymatické degradaci.

V přihlášce jsou použity následující zkratky:

Acm	acetamidomethyl
b-Ala, beta-Ala nebo bAla	kyselina 3-aminopropanová
ATA	kyselina 2-aminothiazol-5-octová nebo skupina 2-aminothiazol-5-acetyl
Boc	t-butyloxykarbonyl
CBZ, Cbz nebo Z	karbobenzyloxy
Cit	citrulin
Dap	kyselina 2,3-diaminopropanová
DCC	dicyklohexylkarbodiimid
DIEA	diisopropylethylamin
DMAP	4-dimethylaminopyridin
EOE	ethoxyethyl
HBTU	2-(ΙΗ-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3tetramethyluronim hexafluorfosfát
hynic	skupina boc-hydrazinonikotinylová nebo kyselina 2-(((5-(karbonyl)-2pyridinyl)hydrazono)methyl)benzensulfonová
NMeArg nebo MeArg	a-N-methyl arginin
NMeAsp	kyselina a-N-methyl asparágová
NMM	N-methylmorfolin
OcHex	0-cyklohexyl
OBzl	0-benzoyl
oSu	O-sukcinimidyl
TBTU	2-(ΙΗ-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3tetramethyluronim tetrafluorborát
THF	tetrahydrofuranyl
THP	tet rahydropyraný1
Tos	tosyl
Tr	trityl

V přihlášce jsou použity následující tradiční třípísmenné zkratky aminokyselin; tradiční jednopísmenné zkratky aminokyselin nejsou v této přihlášce používány.

Ala	alanin
Arg	arginin
Asn	asparagin
Asp	kyselina asparágová
Cys	cystein
Glu	kyselina glutamová
Gin	glutamin
Gly	glycin
His	histidin
Ile	isoleucin
Leu	leucin
Lys	lysin
Met	methionin
Nle	norleucin
Orn	ornithin
Phe	fenylalanin
Phg	fenylglycin
Pro	prolin
Sar	sarkosin
Ser	serin
Thr	threonin
Trp	tryptofan
Tyr	tyrosin
Val	valin

Farmaceutické sloučeniny podle vynálezu obsahují směrující část, která se váže na nějaký receptor, jehož exprese je v nově vytvořené vaskulatuře nádoru zvýšena. Směrující části používané ke směrování na receptory VEGF, Flk-1/KRD, Flt-1 a neuropilin-1, zahrnují peptidy nebo peptidomimetika, které se k těmto receptorům vážou s vysokou afinitou. Byly například syntetizovány peptidy zahrnující oblast 23 aminokyselin z C-koncové domény VEGF, které kompetitivně inhibují vazbu VEGF na receptor pro VEGF (Soker a další, J. Biol. Chem., 272:31582 až 31588, 1997). Lineární peptidy o délce 11 až 23 aminokyselin, které se vážou na receptor pro bazický FGF (bFGFR) , jsou popsány v publikaci Cosic a další, Mol.

• · a · · · · · · * » · · 4 4 4 44 * · ·· and Cell. Biochem., 130:1 až 9, 1994. Upřednostňovaným lineárním peptidovým antagonistou bFGFR je peptid o délce 16 aminokyselin - Met-Trp-Tyr-Arg-Pro-Asp-Leu-Asp-Glu-Arg-LysGln-Gln-Lys-Arg-Glu. Gho a další (Cancer Research, 57:3733 až 3740, 1997) popisuje identifikaci krátkých peptidů, které se s vysokou afinitou vážou na receptor pro angiogenin exprimovaný na povrchu endotheliálních buněk. Výhodně používaným peptidem je Ala-Gln-Leu-Ala-Gly-Glu-Cys-Arg-Glu-Asn-ValCys-Met-Gly-Ile-Glu-Gly-Arg, v němž dva cysteinové zbytky vytvářejí intramolekulární disulfidovou vazbu. Yayon a další (Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 90:10643 až 10647, 1993) popisuje další lineární peptidové antagonisty FGFR, identifikované s využitím fágové peptidové knihovny s nahodilou sekvencí prezentovaných peptidů (random phage-displayed peptide library) . Vazba bFGF na receptor je s výhodou inhibována dvěma lineárními oktapeptidy - Ala-Pro-Ser-Gly-His-Tyr-LysGly a Lys-Arg-Thr-Gly-Gln-Tyr-Lys-Leu.

Směrující části používané ke směrování na integriny exprimované v nově vytvořené vaskulatuře nádorů obsahují peptidy nebo peptidomimetika, které vážou α_νβ₃, α_νβ₅, α₅βι, οίήβι, α_χβι a α₂β₂. Pierschbacher a Rouslahti (J. Biol. Chem., 262:17294 až 17298, 1987) popisují peptidy, které selektivně vážou OísPi a α_νβ₃. Přihláška US 5536814 popisuje peptidy, které s vysokou afinitou vážou integrin α₅βι· Burgess a Lim (J. Med. Chem., 39:4520 až 4526, 1996) popisují syntézu tří peptidů, které se s vysokou afinitou vážou na οί_νβ₃: cyklo [Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp] , cyklo [Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-DAsp] a lineární peptid Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp. Přihlášky US 5770565 a US 5776591 popisují peptidy, které se s vysokou afinitou vážou na α_νβ₃. Přihlášky US 5767071 a US 5780426 popisují cyklické peptidy, které mají aminokyselinový zbytek Arg umístěný mimo cyklus, a které se s vysokou afinitou vážou na integrin α_νβ₃. Srivatsa a další (Cardiovascular Res., • · ·· 9· 9 ··

9999 99 99 999

99 99 9 9 9 • 9 9 999 9 9 9 9 9

9 9 · 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 999 9 9 9

36:408 až 428, 1997) popisují cyklického peptidového antagonistu integrinu α_νβ₃ - cyklo[Ala-Arg-Gly-Asp-Mamb]. Tran a další (Bioorg. Med. Chem. Lett., 7:997 až 1002, 1997) popisuje cyklický peptid cyklo[Arg-Gly-Asp-Val-Gly-Ser-BTD-SerGly-Val-Ala], který se s vysokou afinitou váže na α_νβ₃. Arap a další (Science, 279:377 až 380, 1998) popisuje cyklické peptidy cyklo[Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys] a cyklo [Cys-Asn-Cys- Gly-Asp-Cys] , které se vážou na α_νβ₅ a α_νβ₃ · Corbett a další (Bioorg. Med. Chem. Lett., 7:1371 až 1376,

1997) popisuje sérii peptidomimetik selektivně vážících α_νβ₃. Haubner a další (Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 36:1374 až 1389, 1997) popisuje peptidové a peptidomimetické antagonisty integriťiu α_νβ₃ získané z peptidových knihoven.

Směrující části podle vynálezu mají ve výhodném provedení vazebnou afinitu k integrinu α_νβ₃ nižší než 1000 nM. Ve výhodnějším provedení vynálezu mají směrující části podle vynálezu vazebnou afinitu k integrinu α_νβ₃ nižší než 100 nM.

V ještě výhodnějším provedení vynálezu mají směrující části podle vynálezu vazebnou afinitu k integrinu α_νβ₃ nižší než 10 nM.

Kontrastní látky podle vynálezu pro ultrazvuk zahrnují množství různorodých směrujících částí rozpoznávajících nově vytvořenou vaskulaturu nádorů a připojených k nebo začleněných do mikrobubliny biokompatibilního plynu, kapalného nosiče a mikročástici nějaké povrchově aktivní látky, a dále volitelně obsahují spojující část (L_n) mezi směrujícími částmi a mikrobublinkami. V tomto kontextu termín kapalný nosič označuje vodný roztok a termín povrchově aktivní látka označuje jakýkoliv amfifilní materiál, který snižuje napětí na fázovém rozhraní. Seznam povrchově aktivních látek vhodných pro přípravu mikročástic povrchově aktivních látek je popsán v přihlášce EP0727225A2, která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vy65

nálezu. Termín mikročástice povrchově aktivní látky označuje nanočástice, lipozomy, vezikuly a podobně. Biokompatibilním plynem může být vzduch nebo nějaký fluorkarbon, jako například C₃-C_s perfluoralkan, například perfluorpropan, perfluorbutan nebo perfluorpentan. Tento biokompatibilní plyn je příčinou odlišné echogenicity a tudíž pozorovaného kontrastu při ultrazvukové diagnostice. Zmíněný plyn je zapouzdřen nebo uzavřen v mikročástici, ke které je připojena směrující část a to buď přímo, nebo volitelně spojující skupinou. Zmíněné připojení může být realizováno kovalentní vazbou, iontovou vazbou nebo van der Waalsovými silami. Specifickými příklady takových kontrastních látek jsou perfluorkarbony ohraničené vrstvou lipidů s připojenými peptidy nebo peptidomimetiky vážícími receptory exprimované na nově vytvořené vaskulatuře nádorů.

Zkratka S_f používaná v této přihlášce označuje nějakou povrchově aktivní látku, která je buď lipidem nebo sloučeninou popsanou vzorcem A¹-E-A², definovanou v předchozím textu. Tato povrchově aktivní látka je použita za účelem vytvoření vezikulu (například mikročástice) , který může obsahovat echogenní plyn. Přípravky obsahující kontrastní látky podle vynálezu pro ultrazvuk uzavřou (zapouzdří) po protřepání, promíchání (a podobně) ve vezikulu echogenní plyn takovým způsobem, že výsledný produkt může být využit jako kontrastní látka pro ultrazvuk.

Termín vezikul označuje kulovitou entitu, která je charakterizována prázdným vnitřním prostorem. Ve výhodném provedení jsou vezikuly připraveny s využitím lipidů, včetně nej různějších lipidů popsaných v této přihlášce. V každém jednotlivém vezikulu mohou být lipidy ve formě jedné vrstvy (monovrstvy) nebo dvojvrstvy a takových lipidových mono- nebo dvoj vrstev může být ve vezikulu jedna nebo více.

V případě, že je ve vezikulu více než jedna mono- nebo dvo j 66 ♦ · ·· · 9 · · · ·*

9 9 9 · 9 9 · ·

9 99 9 9 · · · • /9 9 9 · · 9 9 99 9 • 9 9 · 99 9 99 • 9 . 9 9 9 9 · 9 9 · · vrstva, jsou tyto obvykle kocentrické. Termín lipidové vezikuly používaný v této přihlášce zahrnuje entity obecně označované jako lipozomy, micely, bubliny, mikrobublinky, mikročástice a podobně. Lipidy mohou být tedy využity k vytvoření unilamelárního vezikulu (ohraničeného jednou monovrstvou nebo dvojvrstvou), oligolamelárního vezikulu (ohraničeného přibližně dvěma nebo přibližně třemi monovrstvami nebo dvojvrstvami) nebo multilamelárního vezikulu (ohraničeného více než přibližně třemi monovrstvami nebo dvojvrstvami). Prázdný vnitřní prostor vezikulu může být vyplněn nějakou kapalinou, včetně například vody, plynem, prekurzorem plynu a/nebo pevným nebo rozpuštěným materiálem, včetně například (je-li to žádoucí) nějakou biologicky aktivní látkou.

Termín vezikulární kompozice označuje nějakou kompozici, která je připravena s využitím lipidů, a která obsahuje vezikuly.

Termín vezikulární přípravek označuje kompozici, která obsahuje vezikuly a nějakou biologicky aktivní látku.

Termín mikročástice používaný v této přihlášce označuje ve výhodném provedení částice o velikosti nejvýše 10 mikrometrů. Lipozom, jak je definován v této přihlášce, může obsahovat jednu lipidovou vrstvu (lipidová monovrstva), dvě lipidové vrstvy (lipidová dvojvrstva) nebo více něž dvě lipidové vrstvy (lipidová multivrstva). Termín lipozomy obvykle označuje sférický klastr nebo agregát amfifilních sloučenin, včetně sloučenin lipidové povahy, obvykle ve formě jedné nebo více kocentrických vrstev, například dvojvrstev. Tyto entity mohou být rovněž označovány jako lipidové vezikuly.

Termín bubliny používaný v této přihlášce označuje vezikuly, které jsou obvykle charakterizovány existencí jedné nebo více membrán nebo stěn obklopujících vnitřní prázdný

9 «9 ·* 9 «9 • 99 9 9 · 9 9 « 9 9

999 9 « 9 9 9 prostor, který je vyplněn nějakým plynem nebo prekurzorem tohoto plynu. Příkladem bublin jsou lipozomy, micely a podobně .

Termín lipid označuje nějakou syntetickou nebo přirozeně se vyskytující amfifilní sloučeninu, která obsahuje část hydrofilní a část hydrofobní. Příkladem lipidů jsou mastné kyseliny, neutrální tuky, fosfatidy, glykolipidy, alifatické alkoholy a vosky, terpeny a steroidy.

Termín lipidová kompozice označuje kompozici, která obsahuje nějakou sloučeninu lipidové povahy. Příkladem lipidových kompozic jsou emulze, suspenze a vezikulární kompozice .

Termín lipidový přípravek označuje kompozici, která obsahuje nějakou sloučeninu lipidové povahy a nějakou biologicky aktivní látku.

Příkladem různých typů vhodných lipidů a zvláště vhodných lipidů jsou: fosfatidylcholiny jako například dioleoylfosfatidylcholin, dimyristoylfosfatidylcholin, dipalmitoylfosfatidylcholin (DPPC) a distearoylfosfatidylcholin; fosfatidylethanolaminy jako například dipalmitoylfosfatidylethanolamin (DPPE), dioleoylfosfatidylethanolamin a N-sukcinyldioleoylfosfatidylethanolamin; fosfatidylseriny; fosfatidylglyceroly; sfingolipidy; glykolipidy jako například gangliosid GM1; glukolipidy; sulfatidy; glykosfingolipidy; fosfatidové kyseliny jako například kyselina dipalmitoylfosfatidová; kyselina palmitová; kyselina stearová; kyselina arachidonová; kyselina laurová; kyselina myristová; kyselina lauroleová; kyselina fyseterová; kyselina myristoleová; kyselina palmitoleová; kyselina petroselenová; kyselina oleová; kyselina izolaurová; kyselina izomyristová; kyselina izopalmitová; kyselina izostearová; cholesterol a deriváty cholesterolu jako například cholesterol hemisukciát, cholesterol sulfát a cholesteryl-(4-trimethylamonio)-butanoát;

• 9 9 · · 9 9 9 · 9. .· 9

9999 99 9 9 9

9 9 9 9 9 999 9 9 estery mastných kyselin a polyoxyethylenů; polyoxyethylenové alkoholy; ethery polyoxyethylenových alkoholů; estery polyoxyethylováného sorbitanu a mastných kyselin; glycerol polyoxyethyl englykol oxystearát; glycerol polyoxyethylenglykol ricinoleát; ethoxylované steroly sojových bobů; ethoxylovaný ricínový olej ; polymery polyethoxylen-polyoxypropylenových mastných kyselin; polyoxyethylované stearáty; kyselina 12( ( (7'-dimethylaminokumarin-3-yl) -karbonyl) -methylamino) oktadekanová; kyselina N-[12-( ( (7'-dimethylaminokumarin-3yl) -karbonyl) -methylamino) -oktadekanoyl] -2-amino-palmitová;

1.2- dioleoyl-sn-glycerol; 1,2-dipalmitoyl-sn-3sukcinylglycerol; 1,3-dipalmitoyl-2-sukcinyl-glycerol; a 1hexadecyl-2-pálmitoyl-glycerofosfoethanolamin a palmitoylhomocystein; lauryltrimethylamonium bromid; cetyltrimethylamonium bromid; myristyltrimethylamonium bromid; alkyldimethylbenzylamonium chloridy jako například sloučeniny, kde alkylem je nějaký Ci₂, C₁₄ nebo C₁₆ alkyl; benzyldimethyldodecylamonium bromid; benzyldimethyldodecylamonium chlorid; benzyldimethylhexadecylamonium bromid; benzyldimethylhexadecylamonium chlorid; benzyldimethyltetradecylamonium bromid; benzyldimethyltetradecylamonium chlorid; cetyldimethylethylamonium bromid; cetyldimethylethylamonium chlorid; cetylpyridinium bromid; cetylpyridinium chlorid; N-[(1,2,3dioleoyloxy)-propyl]-Ν,Ν,Ν-trimethylamonium chlorid (DOTMA);

1.2- dioleoyloxy-3-(trimethylamonium)-propan (DOTAP); a 1,2dioleoyloxy-č- (4-trimethylamonium) -butanoyl-sn-glycerol (DOTB) .

Echogenním plynem může být jeden plyn nebo směs plynů jako například CF_4; C₂F₆, C₃F₈, cyklo-C₄F₈, C₄F₁₀, C₅F₁₂, cykloC5F10, cyklo-C₄F₇ (1-trif luoromethyl) , propan(2trifluoromethyl)-1,1,1,3,3,3-hexafluor a butan(2trifluoromethyl)-1,1,1,3,3,3,4,4,4-nonafluor. S výhodou jsou používány rovněž odpovídající nenasycené verze výše zmíně69 • ·

ných sloučenin, například C₂F₄, C₃F₆ a izomery C₄F₈. Použitelné jsou rovněž směsi těchto plynů, zvláště pak směsi perfluorkarbonů s jinými perfluorkarbony a směsi perfluorkarbonů s jinými inertními plyny jako například vzduchem, N₂, 0₂, He a podobně. Příklady výše zmíněných mohou být nalezeny v přihlášce US 5595723 (Quay), která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Kontrastní látky podle vynálezu pro rentgenové záření obsahují jednu nebo více směrujících částí rozpoznávajících nově vytvořenou vaskulaturu nádorů připojených k jedné nebo více částem absorbujícím rentgenové záření nebo jednomu nebo více těžkým atomům s atomovým číslem vyšším než 20, a dále volitelně obsahují spojující část (L_n) mezi směrujícími částmi a atomy absorbujícími rentgenové záření.

V kontrastních látkách pro rentgenové záření je často používaným těžkým atomem jod. Nedávno byly popsány kontrastní látky pro rentgenové záření obsahující cheláty kovů (Wallace R., přihláška US 5417959) a polycheláty s množství nejrůznějších atomů kovů (Love D., přihláška US 5679810). Ještě nověji byly jako kontrastní látky pro rentgenové záření popsány polyjaderné komplexy klastrů (přihlášky US 5804161,

PCT WO91/14460 a PCT WO92/17215) . Příkladem kontrastních látek pro rentgenové záření jsou neradioaktivní nebo přirozeně se vyskytující analogy výše zmíněných radionuklidů (například Re, Srn, Ho, Lu, Pm, Y, Bi, Pd, Gd, La, Au, Yb, Dy, Cu, Rh, Ag a Ir).

Kontrastní látky podle vynálezu pro MRI obsahují jednu nebo více směrujících částí rozpoznávajících nově vytořenou vaskulaturu nádorů připojených k jednomu nebo více iontům paramagnetického kovu, a dále volitelně obsahují spojující část (L_n) mezi směrujícími částmi a těmito ionty paramagnetického kovu. Ionty paramagnetických kovů jsou ve formě komplexů nebo částic oxidů těchto kovů. Přihlášky US 5412148 a

44 4» 4 ··

4 4 4 4 4 44 4 4 4

4 4 4 · 4 4 . 4 4

4444 44 4 4 4

44 44 444 44

US 5760191 popisují příklady chelatotvorných činidel iontů paramagnetických kovů pro použití v kontrastních látkách pro MRI. Přihlášky US 5801228 US 5567411 a US 5281704 popisují příklady polychelátorů využitelných pro komplexaci více než jednoho iontu paramagnetického kovu pro použití v kontrastních látkách pro MRI. Přihláška US 5520904 popisuje farmaceutický přípravek obsahující částice s ionty paramagnetických kovů použitelný jako kontrastní látka pro MRI.

Farmaceutické sloučeniny podle vynálezu jsou popsány vzorci (Q)d-Ln-(C_h-X) , (Q) _d-L_n- (Ch-X¹) d-, (Q) d-Ln-(Ch-X²) d-- a (Q) _d-L_n-(C_h-X³) , kde Q reprezentuje peptid nebo peptidomimetikum, které se váže na nějaký receptor exprimovaný v nově vytvořené vaskulatuře nádorů, d je číslo z intervalu 1 až 10, Ln reprezentuje spojující skupinu (použitou v případech, kdy je to žádoucí), Ch označuje nějaký chelátor kovu nebo skupinu vážící kovy, X reprezentuje nějaký radioizotop, X¹reprezentuje iont paramagnetického kovu, X² reprezentuje nerozpustné pevné částice obsahující iont paramagnetického kovu nebo těžký atom, d'' je číslo od 1 do 100 a X³ reprezentuje mikročástice povrchově aktivní látky naplněné echogenním plynem. Ve výhodném provedení obsahují farmaceutické sloučeniny podle vynálezu směrující části (Q), kterými jsou peptidy nebo peptidomimetika vážící se na receptory pro vitronektin ανβ₃ a α_νβ₅. Ve výhodnějším podle vynálezu obsahují farmaceutické sloučeniny podle vynálezu směrující části (Q), kterými jsou peptidy nebo peptidomimetika vážící se na receptor α_νβ₃. V nejvýhodnějším provedení vynálezu obsahují farmaceutické sloučeniny podle vynálezu směrující části (Q) vážící se na receptor α_νβ₃, kde tyto směrující části zahrnují jeden až deset cyklických pentapeptidů nebo peptidomimetik, které mohou být nezávisle připojeny k nějakému terapeutickému radioizotopu nebo části vhodné pro diagnostiku, a dále zahrnují (je-li to žádoucí) spojující část (L_n) mezi φ· ΦΦΦ ΦΦΦ směrujícími skupinami a terapeutickými radioizotopy nebo částmi vhodnými pro diagnostiku. Zmíněné cyklické pentapeptidy obsahují tripeptidovou sekvenci, která se váže na receptor α_νβ₃, a dále dvě aminokyseliny, z nichž jakákoliv může být připojena k L_n, Ch, X² nebo X³. Důsledkem interakce zmíněné tripeptidové rozpoznávací sekvence cyklické peptidové nebo peptidomimetické části s receptorem α_νβ₃ je lokalizace farmaceutického sloučeniny v nově vytvořené vaskulatuře nádorů, která exprimuje receptor α_νβ₃.

Farmaceutické sloučeniny podle vynálezu mohou být syntetizovány s využitím několika přístupů. Jeden z těchto přístupů zahrnuje syntézu peptidové nebo peptidomimetické směrující části (Q) a přímé připojení jedné nebo více těchto částí (Q) k jednomu nebo více chelatotvorným činidlům nebo částem vážícím kovy (Ch) , nebo k pevné částici obsahující iont paramagnetického kovu nebo těžký atom, nebo k mikročástici obsahující echogenní plyn. Jiný přístup zahrnuje připojení jedné nebo více směrujících částí (Q) ke spojující části (L_n) , která je následně připojena k jednomu nebo více chelatotvorným činidlům nebo částem vážícím kovy (Ch) , nebo k pevné částici obsahující iont paramagnetického kovu nebo těžký atom, nebo k mikročástici obsahující echogenní plyn. Jiný přístup, výhodný při syntéze sloučenin, kde d je 1, zahrnuje syntézu části Q-L_n tak, že při syntéze peptidu nebo peptidomimetika je použit nějaký aminokyselinový zbytek nebo mimetikum aminokyseliny s navázanou L_n. Takto připravená část Q-L_n je následně připojena k jednomu nebo více chelatotvorným činidlům nebo částem vážícím kovy (C_h) , nebo k pevné částici obsahující iont paramagnetického kovu nebo těžký atom, nebo k mikročástici obsahující echogenní plyn. Jiný přístup zahrnuje syntézu peptidů nebo peptidomimetika (Q) obsahujícího fragment spojující části (L_n) , a jeden nebo více takových fragmentů je pak připojeno k druhému

fragmentu spojující části, a následně je celá spojující část připojena k jednomu nebo více chelatotvorným činidlům nebo částem vážícím kovy (C_h) , nebo k pevné částici obsahující iont paramagnetického kovu nebo těžký atom, nebo k mikročástici obsahující echogenní plyn.

Peptidy nebo peptidomimetika (Q) , které můžou nést spojující skupinu (L_n) nebo fragment takové spojující skupiny, mohou být syntetizovány s využitím standardních metod odborníkům dobře známých. Ve výhodném provedení jsou používány následující metody (výčet není limitující).

Proces prodlužování peptidů nebo peptidomimetik obvykle zahrnuje odštěpení chránící skupiny z alfa-aminoskupiny Ckoncového zbytku a připojení další vhodně chráněné aminokyseliny prostřednictvím peptidové vazby s využitím popsaných metod. Proces odštěpování chránící skupiny a připojování další aminokyseliny je opakován tak dlouho, dokud není získána požadovaná sekvence. Pro připojování mohou být v jednotlivých krocích využívány jednotlivé aminokyseliny nebo fragmenty kondenzačních reakcí (dvě až několik aminokyselin) nebo kombinace obou procesů nebo může být použita metoda syntézy peptidů na pevné fázi, jak je původně popsána v publikaci Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85:2149 až 2154, 1963, která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Peptidy nebo peptidomimetika mohou být rovněž syntetizovány s využitím automatických syntetizérů. Další způsoby syntézy peptidů a peptidomimetik jsou popsány v následujících publikacích: Stewart a Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2. vydání, Pierce Chem. Co., Rockford, IL, 1984; Gross, Meienhofer, Udenfried, The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, svazky 1, 2, 3, 5 a 9, Academie Press, New York, 1980 až 1987; Bodanszky, Peptide Chemistry: A Practícal Textbook, Springer-Verlag, New York, 1988;

• · · · · · · ·· ·· ·· ·· ··· ·» a Bodanszky a další, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, New York, 1984, které jsou zde uvedeny záměnou za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Kondenzace dvou aminokyselinových derivátů, aminokyseliny a peptidu nebo peptidomimetika, dvou peptidových nebo peptidomimetických fragmentů nebo cyklizace peptidu nebo peptidomimetika mohou být prováděny s využitím standardních metod, jakými jsou například azidový způsob, postup využívající smíšeného anhydridů kyseliny uhličité (isobutyl chlorformiát), postup využívající karbodiimidů (dicyklohexylkarbodiimid, diisopropylkarbodiimid nebo karbodiimidy rozpustné ve vodě), postup využívající aktivních esterů (estery pnitrofenolu, imidoestery N-hydroxysukcinátu), postup využívající Woodwardova činidla K, postup využívající karbonyldi-. imidazol, postup využívající deriváty fosforu jako například BOP-C1 nebo oxidačně-redukční metoda. Účinnost některých z těchto metod (zvláště postup využívající karbodiimidů) může být zvýšena přídavkem 1-hydroxybenztriazolu. Tyto kondenzační reakce mohou být prováděny buď v roztoku (kapalná fáze) nebo na pevné fázi.

Aby nedocházelo k vytváření nežádoucích vazeb, musí být funkční skupiny aminokyselin nebo mimetik aminokyselin v průběhu kondenzačních reakcí chráněny. Seznam chránících skupin použitelných v těchto případech je uveden v publikacích Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1981 a The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, svazek 3, Academie Press, New York, 1981, které jsou zde uvedeny záměnou za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Alfa-karboxylová skupina C-koncového zbytku je obvykle chráněna nějakým esterem, jehož odštěpením je opět vytvořena volná karboxylové skupina. Mezi tyto chránící skupiny patří:

·« ·· ·· · ·· · • * w · »··· «··· ···· · · · · · · • · · · · · · · · · · · · ««· ·· · · · · ·· *· ·« ··· ·· .·..-···

1) alkyl estery jako například methyl nebo t-butyl, 2) aryl estery jako například benzyl nebo substituovaný benzyl nebo 3) estery, které mohou být štěpeny působením slabé báze nebo mírnými redukčními podmínkami; takovými estery jsou například estery trichlorethylu nebo fenacylu. V případě syntézy na pevné fázi je C-koncová aminokyselina připojena k nerozpustnému nosiči (obvykle polystyrenu). Tyto nerozpustné nosiče obsahují skupinu, která reakcí s karboxylovou skupinou vytváří vazbu, která je stabilní při prodlužování řetězce, ale může být snadno Štěpena později. Příkladem takových nosičů jsou: oximové pryskyřice (DeGrado a Kaiser, J.

Org. Chem., 45:1295 až 1300, 1980), chlormethylenové a brommethylenové pryskyřice, hydroxymethylenové pryskyřice a aminomethylenové pryskyřice. Mnohé z těchto pryskyřic jsou komerčně dostupné i s předem navázanou požadovanou aminokyselinou .

Alfa-aminová skupina každé aminokyseliny musí být chráněna. K tomuto účelu může být použita jakákoliv známá chránící skupina. Příkladem takových chránících skupin jsou chránící skupiny: 1) acylového typu jako například formyl, trifluoracetyl, ftalyl a p-toluensulfonyl; 2) typu aromatických karbamátů jako například benzyloxykarbonyl (CBz) a substituované benzyloxykarbonyly, 1-(p-bifenyl)-1methylethoxykarbonyl a 9-fluorenylmethyloxykarbonyl (Fmoc);

3) typu alifatických karbamátů jako například tercbutyloxykarbonyl (Boc), ethoxykarbonyl, diisopropylmethoxykarbonyl a alyloxykarbonyl; 4) typu karbamátů cyklických alkylů jako například cyklopentyloxykarbonyl a adamantyloxykarbonyl; 5) alkylového typu jako například trifenylmethyl nebo benzyl; 6) trialkylsilany jako například trimethylsilan; a 7) typy obsahující thiol jako například fenylthiokarbonyl a dithiasukcinolyl. Ve výhodném provedení jsou jako chránící skupiny alfa-aminu používány Boc nebo Fmoc. Množ75 • · ·· ·· · ·· • ř · 9 ···· · · · t « ·· · · · · » • 9 9 9 9 9 · · ·· 9

9 9 9 9 9 9 9 9

99 99 999 . * ství aminokyselin nebo mimetik aminokyselin vhodně chráněných pro peptidovou syntézu je komerčně dostupných.

Před navázáním další aminokyseliny je chránící skupina alfa-aminu odštěpena. Je-li jako chránící skupina použit Boc, toto štěpení se provádí kyselinou trifluoroctovou (buď samotnou nebo ve směsi s dichlormethanem) nebo HCI v dioxanu. Vzniklá amoniová sůl je před dalším kondenzačním krokem neutralizována zásaditými roztoky jako například vodnými pufry nebo terciárními aminy v dichlormethanu nebo dimethyl formamidu. Je-li jako chránící skupina použit Fmoc, je prováděno štěpení piperidinem nebo substituovanými piperidiny v dimethylformamidu. Mimo to může být rovněž použit jakýkoliv sekundární amin nebo vodný zásaditý roztok. Odstranění chránící skupiny je prováděno v teplotním rozmezí 0°C až pokojová teplota.

Jakákoliv aminokyselina nebo mimetikům aminokyseliny nesoucí na postranním řetězci nějakou funkční skupinu musí být během syntézy peptidu chráněna nějakou z výše uvedených chránících skupin. Odborníkům je zřejmé, že volba a použití vhodných chránících skupin pro funkční skupiny na postranních řetězcích aminokyselin bude záviset na dané aminokyselině nebo mimetiku aminokyseliny a výskytu dalších chránících skupin v peptidu nebo peptidomimetiku. Volba chránících skupin postranních řetězců je důležitá proto, že tyto chránící skupiny nesmějí být odštěpeny při štěpení chránících skupin alfa-aminu nebo při kondenzaci na alfa-aminovou skupinu.

Je-li například jako chránící skupina alfa-aminu použit Boc, pak je možné použít následující chránící skupiny postranních řetězců: pro arginin p-toluensulfonyl (tosyl) a nitro sloučeniny; pro lysin benzyloxykarbonyl, substituované benzyloxykarbonyly, tosyl nebo trifluoracetyl; pro kyselinu glutamovou a asparágovou estery benzylu nebo alkylu jako na76

·· ··	• · ♦		•
• · · ·	• · · ·	• ·	• ·
• · ··	• · ·	.;« : ’ *	•
		·. ·

• · · ·	• · · · ·	B>·	• · ·

příklad cyklopentyl; pro serin a threonin ethery benzylu; pro tyrosin substituované ethery benzylu nebo 2brombenzyloxykarbonyl; pro cystein p-methylbenzyl, pmethoxybenzyl, acetamidomethyl, benzyl nebo t-butylsulfonyl; a indolový kruh tryptofanu může být ponechán buď nechráněný nebo může být ochráněn formylovou skupinou.

Je-li jako chránící skupina alfa-aminu použit Boc, pak je obvykle možné použít chránící skupiny postranních řetězců na bázi terc-butylu. Pro lysin může být použit například Boc, pro serin, threonin a tyrosin ether terc-butylu a pro kyseliny glutamovou a asparágovou ester terc-butylu.

Po ukončení elongace peptidu nebo peptidomimetika nebo po ukončení elongace a cyklizace cyklického peptidu nebo peptidomimetika jsou všechny chránící skupiny odstraněny.

Při syntéze v kapalnéfázi jsou chránící skupiny odstraněny způsobem, který závisí na chemické podstatě zvolených chránících skupin. Tyto způsoby jsou odborníkům dobře známé.

Je-li k syntéze cyklického peptidu nebo peptidomimetika použit přístup syntézy na pevné fázi, pak by tento peptid nebo peptidomimetikum měly být z pryskyřice odštěpeny bez současného odštěpení chránících skupin postranních řetězců, protože tyto by mohly interferovat s procesem cyklizace. Bude- li tudíž cyklizace peptidu nebo peptidomimetika provedena v roztoku, pak musí být podmínky zvoleny tak, aby byly získány volná alfa-karboxylová skupina a alfa-amino skupina, ale současně nebyly odštěpeny zbylé chránící skupiny. Jinou možností je odštěpení peptidu nebo peptidomimetika z pryskyřice hydrazinolýzou a následná kondenzace azidovou metodou. Jiným vhodným způsobem je syntéza peptidu nebo peptidomimetika na oximové pryskyřici s následným intramolekulárním nukleofilním vytěsněním z pryskyřice, čímž je připraven cyklický peptid nebo peptidomimetikum (Osapay, Profit a Taylor, Tetrahedron Letters, 43:6021 až 6124, 1990). Při po77 • ·· • · 9 *

9 9 9 »*>9 9 9 užití oxímové pryskyřice je obvykle zvolena Boc strategie.

V tomto případě jsou chránící skupiny postranních řetězců s výhodou odstraňovány při 0°C působením bezvodého HF obsahujícího aditiva jako například dimethylsulfid, anisol, thioanisol nebo p-kresol. Odštěpení peptidu nebo peptidomimetika může být rovněž provedeno jinými kyselými reakčními činidly jako například směsí kyselin trifluormethansulfonové/trifluoroctové.

Nestandardní aminokyseliny používané v této přihlášce mohou být syntetizovány standardními postupy odborníkům dobře známými (The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, svazek 5, strany 342 až 449, Academie Press, New York,

1981) . Aminokyseliny s alkylem navázaným na aminovou skupinu mohou být připraveny postupy popsanými dříve (Cheung a další, Can. J. Chem., 55:strana 906, 1977; a Freidinger a další, J. Org. Chem., 48: strana 77, 1987), které jsou zde uvedeny záměnou za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Jiné postupy, které mohou být odborníky použity při syntéze peptidových a peptidomimetických směrujících skupin, jsou popsány v přihlášce PCT WO94/22910, která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Připojení spojující skupiny (L_n) k peptidům nebo peptidomimetikům (Q); chelatotvorných nebo vazebných částí (C_h) k peptidům nebo peptidomimetikům (Q) nebo spojujícím skupinám (L_n) ; a peptidů nebo peptidomimetik obsahujících část spojující skupiny ke druhé části této spojující skupiny tak, že je vytvořena skupina (Q)_d-L_n a následně k části Ch; může být uskutečněno standardními způsoby. Mezi tyto patří (výčet není limitující) amidace, esterifikace, alkylace a tvorba močovin a thiomočovin. Způsoby pro taková připojení jsou popsány v publikaci Brinkley M., Bioconjugate Chemistry, > * · • · 4 • ·»

3(1):1992, která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

K připojení peptidů nebo peptidomimetik (Q) k pevným částicím obsahujícím ionty paramagnetických kovů nebo těžkých kovů (X²) může odborník využít množství způsobů modifikace povrchu těchto částic. Obecným přístupem je připojení směrující části Q nebo kombinace (Q_d)L_n k nějaké vazebné skupině, které reaguje s nějakou složkou na povrchu zmíněné pevné částice. Takovými vazebnými skupinami může být jakýkoliv z množství silanů, které reagují s hydroxylovými skupinami na povrchu pevné částice (viz. přihláška USÁN 60/092360), nebo také polyfosfonáty, polykarboxyláty, polyfosfáty nebo jejich směsi, které je možné navázat na povrch zmíněné pevné částice, jak je popsáno v přihlášce US 5520904.

K připojení peptidů nebo peptidomimetik (Q) k mikročásticím povrchově aktivní látky (X³) může být využito množství reakčních schémat. Tyto jsou ilustrovány v následujícím text, kde S_f reprezentuje část povrchově aktivní látky vytvářející mikročástice.

Acylační reakce:

Sf-C(=O)-Y + Q-NH₂ nebo -------> S_f-C (=0)-NH-Q

Q-OH nebo S_f-C(=0)-O-Q

Y je odstupující skupina nebo aktivní ester

Reakce za vzniku disulfidu:

Sf-SH + Q-SH ---------> Sf-S-S-Q

Reakce za vzniku sulfonamidu:

S_f-S(=O)₂-Y + Q-NH₂ -------> S_f-S(=O)₂-NH-Q

Reduktivní amidace:

·

Sf-CHO + Q-NH₂ ---------> Sf-NH-Q

Substituenty S_f a Q mohou být v těchto reakčních schématech rovněž zaměněny.

Spojující skupina L_n může mít několik funkcí. Za prvé odděluje chelátor kovů nebo část vážící kov (Ch) , pevnou částici obsahující iont paramagnetického kovu nebo těžký atom (X²) nebo mikročástici povrchově aktivní látky (X³) a jeden nebo více peptidů nebo peptidomimetik (Q) , čímž je minimalizována možnost, že by části Ch~X, Ch-X¹, X² a X³ mohly interferovat s interakcí rozpoznávacích sekvencí Q s receptory exprimovanými na neovaskulatuře nádorů. Nezbytnost začlenění spojující skupiny do reakčního činidla je závislá na chemické podstatě podstatě částí Q, Ch-X, Ch-X¹, X²a X³. Nemohou-li být části Ch-X, Ch-X¹, X² a X³ připojeny ke Q bez podstatného snížení afinity této části ke zmíněným receptorům, pak je spojující skupina použita. Spojující skupina rovněž umožňuje připojení několika peptidů nebo peptidomimetik (Q) k jedné skupině, která je pak připojena k C_h-X, Ch-X¹, X² a X³.

Spojující skupina rovněž umožňuje začlenění modifikátoru farmakokinetických vlastností do farmaceutické sloučeniny podle vynálezu. Tento modifikátor farmakokinetických vlastností ovlivňuje distribuci injikované farmaceutické sloučeniny v organizmu způsobem, který je odlišný od interakce směrujících skupin (Q) s receptory exprimovanými v neovaskulatuře nádorů. Jako modifikátorů farmakokinetických vlastností může být využito množství nejrůznějších funkčních skupin včetně, výčet není limitující, karbohydrátů, polyalkenylglykolů, peptidů a jiných polyaminokyselin a cyklodextrinů. Tyto modifikátory mohou být využity ke zvýšení nebo naopak snížení hydrofility a/nebo ke zvýšení nebo ·· » 4 » 4 « · • « ·

• » snížení rychlosti clearence z krevního řečiště. Tyto modifikátory mohou být rovněž využity k určení způsobu eliminace dané farmaceutické sloučeniny z organizmu. Ve výhodném provedení jsou požívány modifikátory farmakokinetických vlastností, které přispívají ke středně rychlé nebo rychlé clearence z' krevního řečiště a ke zvýšení renální exkrece dané farmaceutické sloučeniny.

Chelátor kovů nebo jednotka vážící kov (Ch) jsou zvoleny tak, aby vytvářely stabilní komplexy s ionty kovů zvolenými pro příslušnou aplikaci. Chelatotvorná činidla nebo jednotky vážící kov u diagnostických radiofarmakonů jsou zvoleny tak, aby vytvářely stabilní komplexy s radioizotopy, které emitující diagnosticky využitelné záření gama nebo pozitrony. Takovými radioizotopy jsou například ^99mTc, ⁹⁵Tc, ⁶²Cu, ⁶⁰Cu, ⁶⁴Cu, ⁶¹ Ga, ⁶⁸Ga a ⁸⁶Y.

Chelátory izotopů technecia, mědi a galia jsou vybrány ze skupiny zahrnující diamindithioly, monoamindiamiddithioly, triamid-monothioly, monoamin-diamidmonothioly, diamindioximy a hydraziny. Tato chelatotvorná činidla jsou obvykle tetradentátní s donorovými atomy vybranými ze skupiny zahrnující dusík, síru a kyslík. Ve výhodném provedení obsahující farmaceutické sloučeniny chelatotvorná činidla, kde donorovými atomy jsou dusík ve formě aminu a síra ve formě thiolu, a kde vazebnými jednotkami jsou hydraziny. Atomy síry ve formě thiolu a hydraziny mohou nést chránící skupinu, která může být nahrazena buď přeď použitím farmaceutické látky k syntéze radiofarmaka nebo výhodněji in šitu při syntéze daného radiofarmaka.

Příklady chránících skupin pro thioly jsou uvedeny v publikaci Greene a Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991, která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu. Může být použita jakákoliv chránící skupina • · « · pro thioly v současnosti známá. Příkladem chránících skupin pro thioly jsou (výčet není limitující): acetamidomethyl, benzamidomethyl, 1-ethoxyethyl, benzoyl a trifenylmethyl.

Příkladem chránících skupin pro hydrazinové vazebné jednotky jsou hydrazony, kterými mohou být hydrazony aldehydů nebo ketonů se substituenty vybranými ze skupiny zahrnující vodík, alkyl, aryl a heterocyklus. Zvláště výhodné jsou hydrazony popsané v přihlášce USSN 08/476296 (dosud v řízení), která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Je-li hydrazinová vazebná jednotka navázána k radionuklidu kovu, pak je označována jako hydrazido nebo diazenido skupina a slouží jako bod připojení tohoto radionuklidu ke zbytku radiofarmaka. Diazenido skupina může být buď koncová (k radionuklidu je navázán pouze jeden atom v této skupině) nebo chelatotvorná. Aby bylo možné takovou diazenido skupinu označit jako chelatotvornou, musí být ke zmíněnému radionuklidu připojen ještě alespoň jeden atom této skupiny. Atomy účastnící se vazby na tento kov jsou označovány jako donorové atomy.

Chelátory pro ^11:LIn a ⁸⁶Y jsou zvoleny ze skupiny zahrnující cyklické a acyklické polyaminokarboxyláty jako například DTPA, DOTA, DO3A, 2-benzyl-DOTA, kyselinu alfa-(2fenethyl) 1,4,7,10-tertaazacyklododekan-1-acetát-4,7,10tris(methyloctovou), kyselinu 2-benzylcyklohexyldiethylentriaminpentaoctovou, 2-benzyl-6-methylDTPA a 6,6~-bÍs[N,N,N~,N~tetra(karboxymethyl)aminomethyl)-4-(3-amino-4methoxyfenyl) ]-2,2':6' , 2-terpyridin. Postupy syntézy chelátorů, které nejsou komerčně dostupné mohou být nalezeny v publikacích Brechbiel M. a Gansow O., J. Chem. Soc. Perkin Trans, 1:strana 1175, 1992; Brechbiel M. a Gansow O., Bioconjugate Chem., 2:strana 187, 1991; Deshpande S. a další,

• 4	• · 4
•	•	•	4	•	• 4	4
•	• 4		4	4	4	. . 4
•	4	•	•	»	4	«
	• 4			• 4	«44

J. Nucl. Med., 31:strana 473, 1990; Kruper J., přihláška US 5064956 a Toner J., přihláška US 4859777, které jsou zde uvedeny záměnou za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Koordinační sféra iontu kovu zahrnuje všechny ligandy a skupiny účastnící se vazby s tímto kovem. Koordinační číslo (počet donorových atomů) stabilního radionuklidu přechodného kovu je obvykle celé číslo větší nebo rovno 4 a menší nebo rovno 8. To znamená, že k tomuto kovu je navázáno 4 až 8 atomů a koordinační sféra tohoto kovu je úplná. Koordinační číslo požadované k vytvoření stabilního komplexu s radionuklidem je určeno identitou tohoto radionuklidu, jeho oxidačním stavem a typem donorových atomů. Jestliže chelatotvorné činidlo nebo jednotka vážící kov neposkytují všechny atomy nezbytné ke stabilizaci radionuklidu kovu tím, že by úplně zaplnily koordinační sféru tohoto kovu, pak je koordinační sféra doplněna donorovými atomy jiných ligandů označovaných jako pomocné ligandy nebo koligandy, které mohou být rovněž koncové nebo chelatotvorné.

Jako pomocné ligandy nebo koligandy může sloužit velké množství ligandů a jejich volba závisí na takových proměnných jako například snadnosti syntézy daného radiofarmaka, chemických a fyzikálních vlastnostech pomocného ligandů, rychlosti tvorby, výtěžku a počtu izomerních forem výsledných radiofarmak, možnosti aplikovat takový pomocný ligand nebo koligand do organizmu pacienta bez nežádoucích fyziologických reakcí a slučitelnosti zmíněného ligandů v přípravku ve formě lyofilizované látky. Náboj a lipofilnost použitého pomocného ligandů bude ovlivňovat náboj a lipofilnost daného radiofarmaka. Například použití 4,5-dihydroxy-l,3-benzen disulfonátu bude mít za následek vznik radiofarmaka se dvěma záporně nabitými skupinami navíc, protože sulfonátové skupiny budou za fyziologických podmínek záporně nabité. Použití • · « ·* · * • ··

N-alkyl substituovaných 3,4-hydroxypyridonů bude mít za následek vznik radiofarmak o různém stupni lipofility a to v závislosti na velikosti použitých alkylových substituentů.

Výhodně používaná radiofarmaka podle vynálezu obsahující technecium zahrnují hydrazidovou nebo diazenidovou jednotku vážící kov a nějaký pomocný ligand (A_Li) nebo nějakou jednotku vážící kov a dva typy pomocných ligandů (A_Li a A_Lž) nebo nějaký tetradentátní chelátor obsahující dva atomy dusíku a dva atomy síry. Pomocné ligandy A_Li obsahují dva nebo více tvrdých donorových atomů jako například kyslík nebo dusík ve formě aminu (sp³ hybridizovaný). Tyto donorové atomy obsazují v koordinační sféře daného radionuklidu alespoň dvě místa; pomocný ligand A_Li funguje v ternárním systému ligandů jako jeden ze tří ligandů. Příkladem pomocných ligandů A_Li jsou (výčet není limitující) ligandy se dvěma atomy kyslíku a funkcionalizované aminokarboxyláty. Velké množství těchto ligandů je dostupné komerčně.

Pomocné ligandy se dvěma atomy kyslíku zahrnují ligandy, které do koordinační vazby s daným iontem kovu vstupují prostřednictvím alespoň dvou donorových atomů kyslíku. Příkladem takových sloučenin (výčet není limitující) jsou: glukoheptanoát, glukonát, 2-hydroxyizobutyrát, laktát, tartarát, manitol, glukarát, maltol, koji-kyselina, kyselina 2,2bis(hydroxymethyl)propionová, 4,5-dihydroxy-l, 3benzendisulfonát nebo substituované nebo nesubstituované 1,2nebo 3,4-hydroxypyridony. (Názvy ligandů v těchto příkladech mohou označovat jak protonované tak neprotonované formy těchto ligandů).

Funkcionalizované aminokarboxyláty zahrnují ligandy, které jako donorové atomy obsahují kombinaci dusíku ve formě aminu a kyslíku. Příkladem takových sloučenin (výčet není limitující) jsou: kyselina iminodioctová, kyselina diaminopropanová, kyselina nitrilotrioctová, kyselina N,N'ethylendiamindioctová, kyselina Ν,Ν,Ν'84 • * · 4 4 4 · 4 · · · > 4 44 4 4 4 · · • * 4 *4* 4 · 4 4-4

444» 4» · 4» »( 4· ·· ·4· . . .,4.^ , . · ethylendiamintrioctová, kyselina hydroxyethylethylendiamintrioctová a N,N'-ethylendiamin bis-hydroxyfenylglycin. (Názvy ligandů v těchto příkladech mohou označovat jak protonované tak neprotonované formy těchto ligandů).

Řada funkcionalizovaných aminokarboxylátů je popsaná v přihlášce US 5350837 (Bridger a další), která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu. Použití těchto sloučenin usnadňuje tvorbu komplexů proteinů modifikovaných hydrazinem s techneciem. Zjistili jsme, že použití některých z těchto aminokarboxylátů má za následek zvýšení výtěžků radiofarmak podle vynálezu. Ve výhodném provedení jsou pomocné ligandy A_Li ve formě funkcionalizovaných aminokarboxylátů odvozeny od glycinu; nejvýhodnějším je tricin - (tris(hydroxymethyl)methylglycin).

V nejvýhodnějším provedení zahrnují radiofarmaka podle vynálezu obsahující technecium hydrazidovou nebo diazenidovou jednotku vážící kov a dva typy pomocných ligandů označovaných A_Li a A_L2 nebo chelatotvorné činidlo na bázi diamindithiolu. Druhý typ pomocných ligandů (A_L2) zahrnuje jeden nebo více donorových atomů vybraných ze skupiny: fosfor ve formě fosfinu, arsen ve formě arsanu, dusík ve formě iminu (hybridizace sp²) , síra (hybridizace sp²) a uhlík (hybridizace sp); tj. atomy, které mají charakter p-kyseliny. Ligandy AL2 mohou být ve formě monodentátní, bidentátní nebo tridentátní, kde dentátnost je definována počtem donorových atomů v příslušném ligandu. Jeden ze dvou donorových atomů v bidentátním ligandu a jeden ze tří donorových atomů v tridentátním ligandu musí být měkký donorový atom.

V přihláškách USSN 08/415908 a USSN 60/013360 a 08/646886, které jsou dosud v řízení, a které jsou zde uvedeny záměnou za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu, ♦ · • * ·* # « · « • · *· • * · * • « · · » » v * jsme popsali skutečnost, že radiofarmaka obsahující jeden nebo více pomocných ligandů nebo koligandů A_L2 jsou ve srovnání s radiofarmaky, které neobsahují jeden nebo více pomocných ligandů nebo koligandů A_L2, stabilnější. To znamená, že mají minimální počet izomerních forem, jejichž relativní poměry se během času podstatně nemění, a že po zředění zůstávají v podstatě nezměněné.

Ligandy A_L2, které obsahují donorové atomy ve formě fosfinů nebo arsanů, jsou trojnásobně substituované fosfiny, trojnásobně substituované arsany, čtyřnásobně substituované difosfiny a čtyřnásobně substituované diarsany. Ligandy A_L2, které obsahují dusík ve formě iminu, jsou nenasycené nebo aromatické 5-ti nebo 6-ti četné heterocykly zahrnující dusík. V ligandech, které zahrnují síru (hybridizace sp²) , jsou donorovými atomy thiokarbonyly obsahující část C=S. V ligandech, které zahrnují uhlík (hybridizace sp), jsou donorovými atomy isonitrily obsahující část CNR, kde R je organický radikál. Velké množství těchto ligandů je dostupné komerčně. Isonitrily mohou být syntetizovány postupy popsanými v přihláškách EP 0107734 a US 4988827, které jsou zde uvedeny záměnou za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Výhodně používanými pomocnými ligandy A_L2 jsou trojnásobně substituované fosfiny a nenasycené nebo aromatické 5ti nebo 6-ti četné heterocykly. Nejvýhodněji používanými pomocnými ligandy A_L2 jsou trojnásobně substituované fosfiny a nenasycené 5-ti četné heterocykly.

Pomocné ligandy A_L2 mohou být substituovány alkylem, arylem, alkyloxylem, heterocyklem, aralkylem, alkarylem a arylalkarylem a mohou, ale nemusí, nést funkční skupiny zahrnují heteroatomy jako například kyslík, dusík, fosfor nebo síru. Příkladem takových funkčních skupin jsou (výčet není limitující) : hydroxyl, karboxyl, karboxamid, nitro, ether, «« 99 99 9

9 · 9 9 9 9 9

9 99 ·· * . 9 9 9 ♦ · 9 · *

9 9 9 9 · 9 99 99 99 99» keton, amino, amonium, sulfonát, sulfonamid, fosfonát a fosfonamid. Tyto funkční skupiny mohou být zvoleny tak, aby u ligandů měnily lipofilnost a rozpustnost ve vodě, což může ovlivnit biologické vlastnosti radiofarmak jako například distribuci v necílových tkáních, buňkách a tekutinách, a mechanismus a rychlost eliminace z organizmu.

Chelatotvorná činidla nebo části vážící kov u terapeutických radiofarmak jsou zvolena tak, aby vytvářela stabilní komplexy s radioizotopy, které emitující částice alfa, částice beta a Augerovy nebo Coster-Kronigovy elektrony. Takovými radioizotopy jsou například: ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu, ¹⁴⁹Pm, ⁹⁰Y, ²¹²Bi, ¹⁰³Pd, ¹⁰⁹Pd, ¹⁵⁹Gd, ¹⁴⁰La, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, 169_Yb/ 175_Ybř 16Š_Dy, 166_Dy, 67^, 105_Rh, 111^^ _and 19_2;[r>

Chelátory izotopů rhenia, mědi, paladia, platiny, iridia, rhodia, stříbra a zlata jsou vybrány ze skupiny zahrnující diamindithioly, monoamin-monoamiddithioly, triamidmonothioly, monoamin-diamidmonothioly, diamindioximy a hydraziny. Chelátory izotopů ytria, bismutu a lanthanoidů vybrány ze skupiny zahrnující cyklické a acyklické polyaminokarboxyláty jako například DTPA, DOTA, D03A, 2-benzyl-DOTA, kyselinu alfa-(2-fenethyl) 1,4,7,10-tertaazacyklododekan-lacetát-4,7,10-tris(methyloctovou), kyselinu 2-benzylcyklohexyldiethylentriaminpentaoctovou, 2-benzyl-6-methylDTPA a 6,6'-bis [N,N,N,N~tetra (karboxymethyl) aminomethyl) -4' - (3-amino-4methoxyfenyl)]-2,2:6,2''-terpyridin.

Chelatotvorná činidla u kontrastních látek pro magnetickou rezonanci jsou zvolena tak, aby vytvářela stabilní komplexy s ionty paramagnetických kovů jako například Gd(III), Dy(III), Fe(III) a Mn(II), jsou vybrána ze skupiny zahrnující cyklické a acyklické polyaminokarboxyláty jako například DTPA, DOTA, D03A, 2-benzyl-DOTA, kyselinu alfa-(2fenethyl) 1,4,7,10-tertaazacyklododekan-l-acetát-4,7,1087 • · «· * tris(methyloctovou), kyselinu 2-benzylcyklohexyldiethylentriaminpentaoctovou, 2-benzyl-6-methylDTPA a 6,6''-bis [Ν,Ν,Ν' ,Ν^-*tetra(karboxymethyl)aminomethyl)-4-(3-amino-4methoxyfenyl)] -2,2: 6 ',2-terpyridin.

Radiofarmaka podle vynálezu obsahující technecium nebo rhenium a zahrnující hydrazidovou nebo diazenidovou jednotku vážící kov mohou být snadno připravena smícháním soli daného radionuklidu, farmaceutické látky podle vynálezu, pomocného ligandu A_L1, pomocného ligandu A_L2 a nějaké redukující látky ve vodném roztoku při teplotách v rozmezí 0 až 100°C. Radiofarmaka podle vynálezu obsahující technecium nebo rhenium a zahrnující tetradentátní chelátor se dvěma atomy dusíku a dvěma atomy síry mohou být snadno připravena smícháním soli daného radionuklidu, farmaceutické látky podle vynálezu a nějaké redukující látky ve vodném roztoku při teplotách v rozmezí 0 až 100°C.

Vyskytuje-li se ve farmaceutické látce podle vynálezu jednotka vážící kov ve formě hydrazonu, musí být tento před vytvořením komplexu s radionuklidem kovu nejprve převeden na hydrazin, který může (ale nemusí) být protonovaný. Přeměna hydrazonové skupiny na hydrazin může být provedena před vlastní reakcí s radionuklidem. V tomto případě nejsou radionuklid a pomocný ligand(-y) nebo koligand(-y) smíchány přímo s farmaceutickou látkou, ale s hydrolyzovanou formou této látky nesoucí chelatotvorné činidlo nebo jednotku vážící kov. Přeměna hydrazonové skupiny na hydrazin může být rovněž provedena v přítomnosti radionuklidu. V tomto případě je farmaceutická látka smíchána s příslušným radionuklidem a pomocným ligandem(-y) nebo koligandem(-y) a pH reakční směsi musí být neutrální nebo kyselé.

Radiofarmaka podle vynálezu zahrnující hydrazidovou nebo diazenidovou jednotku vážící kov mohou být alternativně při88 • ··

pravena nejprve smícháním soli daného radionuklidu, pomocného ligandu A_Li a nějaké redukující látky ve vodném roztoku při teplotách v rozmezí 0 až 100°C, čímž je vytvořen přechodný komplex radionuklidu s pomocným ligandem A_Li- Následně je přidána farmaceutická látka podle vynálezu a pomocný ligand A_L2 a reakce dále probíhá při teplotách v rozmezí 0 až 100°C.

Radiofarmaka podle vynálezu zahrnující hydrazidovou nebo diazenidovou jednotku vážící kov mohou být alternativně připravena nejprve smícháním soli daného radionuklidu, pomocného ligandu A_Li, farmaceutické látky podle vynálezu a nějaké redukující látky ve vodném roztoku při teplotách v rozmezí 0 až 100°C, čímž je vytvořen přechodný komplex radionuklidu. Následně je přidán pomocný ligand A_L2 a reakce dále probíhá při teplotách v rozmezí 0 až 100°C.

Radionuklidy technecia a rhenia jsou ve výhodném provedení ve formě technecistanu nebo rhenistanu s farmaceuticky přijatelným kationem. Ve výhodném provedení se jedná o technecistan sodný, který je získáván z komerčních generátorů Tc-99m. Množství technecistanu použité k přípravě radiofarmak podle vynálezu se může pohybovat v intervalu 0,1 mCi až 1 Ci, výhodněji pak v intervalu 1 až 200 mCi.

Množství farmaceutické látky podle vynálezu použité k přípravě radiofarmak podle vynálezu obsahujících technecium nebo rhenium se může pohybovat v intervalu 0,01 pg až 10 mg, výhodněji pak v intervalu 0,5 pg až 200 pg. Použité množství bude závislé na obsahu dalších reaktantů a identitě radiofarmak podle vynálezu, která budou připravována.

Množství použitých pomocných ligandů A_L1 se pohybuje v intervalu 0,1 mg až 1 g, výhodněji pak v intervalu 1 mg až 100 mg. Přesné množství pro příslušný radiofarmakon je funkcí identity tohoto radiofarmaka podle vynálezu, použitého postupu a množství a identit dalších reaktantů. Použití pří89

um nebo rhenium se může pohybovat v intervalu 0,01 pg až 10 mg, výhodněji pak v intervalu 0,5 pg až 200 pg. Použité množství bude závislé na obsahu dalších reaktantů a identitě radiofarmak podle vynálezu, která budou připravována.

Množství použitých pomocných ligandů A_Li se pohybuje v intervalu 0,1 mg až 1 g, výhodněji pak v intervalu 1 mg až 100 mg. Přesné množství pro příslušný radiofarmakon je funkcí identity tohoto radiofarmaka podle vynálezu, použitého postupu a množství a identit dalších reaktantů. Použití příliš velkého množství A_Li bude mít za následek tvorbu vedlejších produktů obsahujících A_Li značených techneciem bez biologicky aktivní molekuly nebo vedlejších produktů obsahujících biologicky aktivní molekuly značené techneciem spolu s pomocným ligandem A_Li, ale bez pomocného ligandu A_L2. Použití příliš malého množství A_Li bude mít za následek tvorbu jiných vedlejších produktů jako například vedlejších produktů obsahujících biologicky aktivní molekuly značené techneciem spolu s pomocným ligandem A_L2, ale bez pomocného ligandu A_Li nebo tvorbu redukovaného hydrolyzovaného technecia nebo technecia ve formě koloidu.

Množství použitých pomocných ligandů A_L2 se pohybuje v intervalu 0,001 mg až 1 g, výhodněji pak v intervalu 0,01 mg až 10 mg. Přesné množství pro příslušný radiofarmakon je funkcí identity tohoto radiofarmaka podle vynálezu, použitého postupu a množství a identit dalších reaktantů. Použití příliš velkého množství A_L2 bude mít za následek tvorbu vedlejších produktů obsahujících A_L2 značených techneciem bez biologicky aktivní molekuly nebo vedlejších produktů obsahujících biologicky aktivní molekuly značené techneciem spolu s pomocným ligandem A_L2, ale bez pomocného ligandu A_Li. Jestliže farmaceutická látka obsahuje jeden nebo více substituentů, které zahrnují měkké donorové atomy (jak jsou definovány výše), pak, aby bylo zamezeno interferenci těchto sub90 * A

• A A · · · · • A AA · ·

A » A A A * · • A A A A ·

A A A A · A · žívány cínaté soli. Množství použitého redukujícího činidla se může pohybovat v intervalu 0,001 až 10 mg, výhodněji pak v intervalu 0,005 mg až 1 mg.

Specifické složení radiofarmak podle vynálezu zahrnujících hydražidovou nebo diazenidovou jednotku vážící kov bude záviset na identitě použité farmaceutické látky podle vynálezu, identitě použitého pomocného ligandu A_L1, identitě použitého pomocného ligandu A_L2 a identitě použitého radionuklidu. Radiofarmaka obsahující hydrazidovou nebo diazenidovou jednotku vážící kov syntetizovaná z farmaceutických látek v koncentracích <100 pg/ml budou zahrnovat jednu hydrazidovou a jednu diazenidovou skupinu. Radiofarmaka syntetizovaná z farmaceutických látek v koncentracích >1 mg/ml budou zahrnovat dvě hydrazidové a dvě diazenidové skupiny ze dvou molekul použitých farmaceutických látek. Při většině aplikací může být injikováno pouze omezené množství biologicky aktivní molekuly, protože při vyšším aplikovaném množství dochází k výskytu nežádoucích vedlejších účinků jako například chemické toxicitě, interferenci s biologickými procesy nebo změněné biodistribuci použitého radiofarmaka. Radiofarmaka vyžadující vyšší koncentrace farmaceuticky aktivních látek zahrnujících biologicky aktivní molekulu budou tudíž muset být po syntéze zředěna nebo purifikována tak, aby nedocházelo k výskytu nežádoucích vedlejších účinků.

Identity a použitá množství pomocných ligandů A_L1 a A_L2budou určovat hodnoty proměnných y a z. Proměnné y a z mohou nezávisle nabývat celočíselných hodnot od 1 do 2. Kombinace hodnot y a z bude popisovat koordinační sféru technecia, která tvořena nejméně pěti a maximálně sedmi donorovými atomy. U monodentátních pomocných ligandů A_L2 může z být 1 nebo 2; u bidentátních nebo tridentátních pomocných ligandů A_L2je z rovno 1. Pro monodentátní ligandy je výhodné, jestliže y je rovno 1 nebo 2 a z je rovno 1. Pro bidentátní nebo tri91 dentátní ligandy je výhodné, jestliže y je rovno 1 a z je rovno 1.

Radiofarmaka podle vynálezu obsahující indium, měď, galium, stříbro, paladium, rhodium, zlato, platinu bismut, ytrium a nějaký lanthanoid mohou být snadno připravena smícháním soli daného radionuklidu a farmaceutické látky podle vynálezu ve vodném roztoku při teplotách v rozmezí 0 až 100°C. Tyto radionuklidy jsou obvykle získávány ve formě zředěných vodných roztoků v anorganických kyselinách jako například kyselině chlorovodíkové, dusičné nebo sírové. Tyto radionuklidy jsou smíchány s jedním až přibližně 1000 ekvivalenty farmaceutických látek podle vynálezu rozpuštěnými ve vodném roztoku. Za účelem udržení pH v intervalu 3 až 10 je obvykle použit nějaký pufr.

Metalofarmaka podle vynálezu obsahující gadolinium, železo nebo mangan mohou být snadno připravena smícháním soli iontu paramagnetického kovu a farmaceutické látky podle vynálezu ve vodném roztoku při teplotách v rozmezí 0 až 100°C. Tyto ionty paramagnetických kovů jsou obvykle získávány ve formě zředěných vodných roztoků v anorganických kyselinách jako například kyselině chlorovodíkové, dusičné nebo sírové. Tyto ionty paramagnetických kovů jsou smíchány s jedním až přibližně 1000 ekvivalenty farmaceutických látek podle vynálezu rozpuštěnými ve vodném roztoku. Za účelem udržení pH v intervalu 3 až 10 je obvykle použit nějaký pufr.

Celkový čas přípravy bude záviset na identitě použitého iontu kovu, identitách a množstvích dalších reaktantů a postupu použitého při přípravě. Příprava může být ukončena (výtěžek radiofarmaka vyšší než 80%) za méně než 1 minutu nebo může vyžadovat více času. Je-li nezbytné nebo žádoucí připravit metalofarmakon o vyšší čistotě, mohou být reakční produkty purifikovány s využitím jakéhokoliv z počtu postupů odborníkům známých. Takovými postupy jsou například kapali92 *9

9 · · ·· »9 • 9 9 I • 9 99

nová chromatografie, extrakce v pevné fázi, extrakce rozpouštědlem, dialýza nebo ultrafiltrace.

Mezi pufry použitelné při přípravě metalofarmak a v diagnostických soupravách pro přípravu radiofarmak patří (vyčet není limitující) fosfát, citrát, sulfosalicylát a acetát. Úplnější seznam je uveden v publikaci Pharmacopeia.

Mezi látky usnadňující lyofilizaci použitelné při přípravě diagnostických souprav pro přípravu radiofarmak patří (výčet není limitující) manitol, laktóza, sorbitol, dextran, Ficoll a polyvínylpyrrolidin (PVP).

Mezi stabilizátory použitelné při přípravě metalofarmak a v diagnostických soupravách pro přípravu radiofarmak patří (výčet není limitující) kyselina askorbová, cystein, monothioglycerol, hydrogensiřičitan sodný, disiřičitan sodný, kyselina gentisová a inositol.

Mezi solubilizátory použitelné při přípravě metalofarmak a v diagnostických soupravách pro přípravu radiofarmak patří (výčet není limitující) ethanol, glycerin, polyethylenglykol, propylenglykol, polyoxyethylen sorbitan monooleát, sorbitan monooleát, polysorbáty, blokové kopolymery póly (oxyethylen)póly(oxypropylen)póly(oxyethylen) (Pluronics) a lecitin. Ve výhodném provedení jsou používány polyethylenglykol a Pluronics.

Mezi bakteriostatika použitelná při přípravě metalofarmak a v diagnostických soupravách pro přípravu radiofarmak patří (výčet není limitující) benzyl alkohol, benzalkonium chlorid, chlorbutanol a methyl, propyl a butyl paraben.

Některá ze složek diagnostické soupravy může rovněž plnit více než jednu funkci. Redukční činidlo může rovněž sloužit jako stabilizátor, pufr jako transferový ligand, látka usnadňující stabilizaci jako transferový nebo pomocný ligand nebo koligand a podobně.

• ♦ 99

9 9 • 9 99

Diagnostická radiofarmaka jsou aplikována intravenózní injekcí a to obvykle ve fyziologickém roztoku a v dávce 1 až 100 mCi na 70 kg tělesné hmotnosti nebo výhodněji v dávce 5 až 50 mCi na 70 kg tělesné hmotnosti. Diagnostická detekce je prováděna známými způsoby.

Terapeutická radiofarmaka jsou aplikována intravenózní injekcí a to obvykle ve fyziologickém roztoku a v dávce 0,1 až 100 mCi na 70 kg tělesné hmotnosti nebo výhodněji v dávce 0,5 až 5 mCi na 70 kg tělesné hmotnosti.

Kontrastní látky podle vynálezu pro magnetickou rezonanci mohou být použity způsobem podobným pro jiné látky pro MRI, viz. například přihlášky US 5155215; US 5087440; Margerstadt a další, Magn. Reson. Med., 3:strana 808, 1986; Runge a další, Radiology, 166:strana 85, 1988; a Bousquet a další, Radiology, 166:strana 693, 1988. Obecně lze říci, že pacientům jsou intravenózně aplikovány sterilní vodné roztoky kontrastních látek v dávkách v rozmezí 0,01 až 1,0 mmol na kilogram tělesné hmotnosti.

Při použití jako kontrastní látka pro rentgenové záření by měla sloučenina podle vynálezu obsahovat nějaký těžký atom v koncentraci 1 mM až 5 M, výhodněji pak 0,1 M až 2 M. Dávky, aplikované intravenózní injekcí, se budou obvykle pohybovat v intervalu 0,5 mmol/kg až 1,5 mmol/kg, výhodněji pak 0,8 mmol/kg až 1,2 mmol/kg. Diagnostická detekce je prováděna známými způsoby, výhodně pak rentgenovou počítačovou tomografií.

Kontrastní látky podle vynálezu pro ultrazvuk jsou aplikovány intravenózní injekcí v množství 10 až 30 μΐ echogenního plynu na kilogram tělesné hmotnosti nebo infúzí rychlostí přibližně 3 μΐ/kg/min. Diagnostická detekce je prováděna známými sonografickými způsoby.

♦ 9 99

9 9 9

9 99 · ♦ ♦

9 9 9

99

Vynález bude dále popsán v oddíle Příklady provedení vynálezu. Tyto příklady vynález pouze dokreslují a neměly by být chápány jako omezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

V tomto oddílu jsou popsány reprezentativní materiál a způsoby, které mohou být využity při přípravě sloučenin podle vynálezu.

Manuální syntéza peptidů na pevné fázi byla prováděna ve 25 ml polypropylenových filtračních zkumavkách zakoupených od BioRad lne. nebo v 60 ml skleněných reakčních nádobkách zakoupených od společnosti Peptides International. Oximová pryskyřice (úroveň substituce - 0,96 mmol/g) byla připravena popsaným způsobem (DeGrando a Kaiser, J. Org. Chem., 45:1295, 1980) nebo byla zakoupena od společnosti Novabiochem (úroveň substituce = 0,62 mmol/g). Všechny chemikálie a rozpouštědla byly použity bez dalšího přečištění tak, jak byly dodány od společností citovaných v dalším textu. Aminokyseliny (chráněné Boc) a jiné aminokyseliny mohou být zakoupeny od společností Bachem lne., Bachem Biosciences lne. (Philadephia, PA), Advanced ChemTech (Louisville, KY), Peninsula Laboratories (Belmont, CA) nebo Sigma (St. Louis, MO). 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorfosfát (HBTU) a TBTU byly zakoupeny od společnosti Advanced ChemTech. N-methylmorfolin (NMM), m-kresol, kyselina D-2-aminobutanová (Abu), trimethylacetylchlorid, diisopropylethylamin (DIEA), 1,2,4-triazol, dihydrát chloridu cínatého a tris(3-sulfonátfenyl)fosfin ve formě trisodné soli (TPPTS) byly zakoupeny od Aldrich Chemical Company.

Bis(3-sulfonátfenyl)fenylfosfin ve formě disodné soli (TPPDS) byl připraven popsaným způsobem (Kuntz E., přihláška US 4248802). (3-sulfonátfenyl)difenylfosfin ve formě sodné soli (TPPMS) byl zakoupen od společnosti TCI America, ·· ·« 9· * ·· ···· ···· * · • ♦ ·· * · · .···'.···· « · · · · · · * '·.·· • · « · · * · · · ·· «· ·· ··· ··».··

Inc. Tricin byl získán od společnosti Research Organics, lne. Technecium-99m-pertechneát (^mTcO4') byl získán z generátoru Techenlite® ⁹⁹Mo/^99mTc společnosti DuPont Pharma. In-lll-chlorid (Indichlor®) byl získán od společnosti Amersham Medi-Physics, Inc. Sm-153-chlorid a lutecium-177chlorid byly získány z University of Missouri Research Reactor (MURR). Ytrium-90-chlorid byl získán od společnosti Pacific Northwest Research Laboratories. Dimethylformamid (DMF), ethyl acetát, chloroform (CHC13) , methanol (MeOH), pyridin a kyselina chlorovodíková (HCl) byly získány od společnosti Barker. Acetonitril, dichlormethan (DCM), kyselina octová (HOAc), kyselina trifluoroctová (TFA), ethyl ether, triethylamin, aceton a síran hořečnatý byly rovněž získány komerčně. Absolutní ethanol byl získán od společnosti Quantum Chemical Corporation.

Obecný postup syntézy peptidů na pevné fázi s využitím Boc-aminokyselin a oximové pryskyřice - příprava cyklických peptidů

Vhodně chráněné cyklické peptidy (popsané v Příkladech provedení vynálezu) byly připraveny manuální syntézou peptidů na pevné fázi za použití Boc-teabag chemie (pozn. reagencie uzavřeny v čajovém nálevkovém sáčku; Houghron,

1985) na p-nitrobenzofenon oximové pryskyřici (DeGrado,

1982; Scarr a Findeis, 1990). Čajové sáčky (5,0 x 5,0 cm) byly vyrobeny z polypropylenových filtrů (0,75 mesh,

Spectra Filters) a naplněny 0,5 g (nebo 1 g) oximové pryskyřice. Kondenzační reakce a odštěpování chránících skupin byly prováděny v polypropylenovém reaktoru za stálého třepání ve stolní třepačce. Při syntéze meziproduktu chráněný pentapeptid-pryskyřice byl nejprve na oximovou pryskyřici navázán Boc-Gly-OH (úroveň substituce = 0,69 mmol/g nebo 0,95 mmol/g). Navázání Boc-Gly-OH na oximovou pryskyřici

·· • •	• •	·« • · ··	··	« ·« •	B •	* · • . ·
• •	• •
•
«	*	• ·	•	•	•	•	• -
··		• ·		• ·	*··

bylo provedeno použitím pěti ekvivalentů této aminokyseliny, HBTU a diisopropylethylaminu (DIPEA) v DMF. Navázání první aminokyseliny trvalo obvykle 1 až 2 dny. Po důkladném promytí byly úrovně substituce stanovovány metodou s využitím kyseliny pikrové (Stewart a Martin). Nezreagované oximové skupiny na pryskyřici byly zablokovány roztokem DIPEA a trimethylacetyl chloridu v DMF. Chránící skupina Boc byla odstraněna pomocí 50% nebo 25% TFA v DCM (30 minut) . Kondenzační reakce s dalšími boc-aminokyselinami byly prováděny podobným způsobem (třepání přes noc, 1 až 2 dny) a výtěžky kondenzačních reakcí pro každou další přidanou aminokyselinu byly stanoveny metodou s využitím kyseliny pikrové.

Obecný postup syntézy peptidu na pevné fázi s využitím Fmoc-aminokyselin a HMPB-BHA pryskyřice - příprava cyklických peptidů

Vhodně chráněné lineární peptidové prekurzory cyklických peptidů (popsané v Příkladech provedení vynálezu) byly připraveny automatizovanou syntézou peptidů na pevné fázi za použití Fmoc-chemie a HMPB-BHA pryskyřice s využitím syntetizéru Advanced ChemTech, model 90. Syntéza meziproduktů chráněný pentapeptid-pryskyřice byla prováděna postupným navazováním (3 hodiny) Fmoc-aminokyselin na komerčně dostupnou pryskyřici Fmoc-Gly-HMPB-BHA (Novabiochem, obvykle 2 gramy, substituce 0,47 až 0,60 mmol/g) za použití 3 až 5 ekvivalentů jednotlivých aminokyselin, HBTU, HOBt a diisopropylethylaminu (DIPEA) v DMF. Chránící skupina Fmoc byla odstraněna pomocí 20% piperidinu v DMF (30 minut). Peptidy byly z pryskyřice HMPB-BHA odštěpeny působením 1% roztoku TFA/DCM a peptidy byly shromážděny v roztoku pyridinu v methanolu (1:10). Lineární chráněné peptidy byly izolová97 « ·

4 4 • 4

ny odstraněním rozpouštědel a reakčních činidel in vacuo a triturací surových peptidů v diethyl etheru.

Syntéza několika aminokyselin, které nejsou komerčně dostupné, je popsána v následujících odstavcích.

Syntéza Tfa-aminokyselin

Boc-HomoLys (Tfa) -OH a Boc-Cys(2-N-Tfa-aminoethyl)-OH byly připraveny reakcí Boc-HomoLys-OH respektive Boc-Cys(2aminoethyl)-OH s ethyl thioltrifluoracetátem ve vodném roztoku NaOH a purifikovány rekrystalizací z ethanolu.

Syntéza Boc-Orn(d-N-benzylkarbamoylu)

Do roztoku Boc-Orn (1 mmol) v DMF (30 ml) byl přidán benzylisokyanát (2,2 mmol) a diisopropylamin (3 mmol). Tato reakční směs byla následně míchána přes noc při pokojové teplotě. Těkavé složky byly odstraněny in vacuo a surový materiál byl purifikován na chromatografickém sloupci. Tímto postupem byl získán požadovaný produkt.

Syntéza Boc-Orn(d-N-l-Tos-2-imidazolinylu)

Roztok Boc-Orn (10 mmol), l-tosyl-2-methylthio-2imizolinu (12 mmol; který byl připraven reakcí komerčně dostupného 2-methylthio-2-imizolin hydrojodidu a anhydridů kyseliny p-toluensulfonové v methylen chloridu (0°C až pokojová teplota) v přítomnosti triethylaminu) a diisopropylaminu (12 mmol) byl míchán pod zpětných chladičem přes noc. Těkavé složky byly odstraněny a požadovaný produkt byl izolován chromatograficky.

·· ·· ·· • · · * ! !

• · ·· · ♦ • · * · · · i • · 9 · · · ·· ·· ·· ··* • ·'

Syntéza Dap (b-(l-Tos-2-benzimidazolylacetylu))

K roztoku kyseliny l-Tos-2-benzimidazolyloctové (10 mmol, připravené s využitím tosyl chloridu za popsaných standardních podmínek) a N-methylmorfolinu (10 mmol) v bezvodém DMF byl přidán izobutylchlorformiát (10 mmol). Roztok byl 5 až 10 minut míchán na ledové lázni a následně byl přidán stejný objem Boc-0rn-0H (10 mmol) a Nmethylmorfolinu (20 mmol) v bezvodém DMF. Reakční směs byla míchána přes noc při pokojové teplotě, těkavé složky byly odstraněny a požadovaný produkt byl izolován chromatograficky. (Jinou možností je použití Boc-Orn-OMe a izolovaný produkt je vystaven působení vodného roztoku LiOH, čímž je získán produkt ve formě kyseliny).

Používané metody analytické HPLC jsou popsány níže: HPLC metoda č. 1

Přístroj:	HP1050
Kolona:	Vydac C18 (4,6 x 250 mm)
Detektor:	Detektor s diodovou mřížkou 220nm/500ref
Průtoková rychlost:	1,0 ml/min
Teplota kolony:	50°C
Obj em vzorku:	15 μΐ
Mobilní fáze:	A: 0,1% TFA ve vodě
B: 0,1% TFA ve směsi ACN/voda (9:1)

Gradient A:	Čas (min)	%A	%B
0	80	20
20	0	100
30	0	100
31	80	20

Gradient B:	Čas (min)	%A	%B
0	98	2
16	63,2	36,8
18	0	100
28	0	100
30	98	2

Příklad 1

Syntéza cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-3aminopropyl)-Val}

Část A: Příprava cyklo{Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-D-Tyr(NCbz-3 -aminopropyl)-Val}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence BocAsp(OBzl)-D-Tyr(N-Cbz-aminopropyl)-Val-Arg(Tos)-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po pěti promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,7474 g, 0,55 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (15 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (55,0 pl, 0,961 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 50°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml). Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu. Výsledkem bylo 444,4 mg požadovaného produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₅₁H₆₃N₉0i₂S, 1025,43; změ· řená molekulová hmotnost, 1026,6 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. IA, R_t = 14,366 minut, čistota = 75%.

100

Část B: Příprava soli cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr(3aminopropyl)-Val} s kyselinou trifluoroctovou

Cyklo{Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-D-Tyr(N-Cbz-3-aminopropyl)Val} (0,150 g, 0,146 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C. K tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (0,5 ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -10°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -35°C a při této teplotě míchána 30 minut. Poté byla reakční směs ochlazena na -50°C a dále míchána 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1. Výsledkem bylo získání 29,7 mg (23%) požadovaného produktu ve formě lyofilizátu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro Ο₂₉Η₄₅Ν₉Ο₈, 647,3; změřená molekulová hmotnost, 648,5 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 10,432 minut, čistota = 91%.

101 • ··

A A AAA

Preparativní HPLC, metoda č. 1

Přístroj:	Rainin Rabbit; software Dynamax
Kolona:	Vydac C18 (21,2 mm x 25 cm)
Detektor:	Knauer VWM
Průtoková rychlost:	15 ml/min
Teplota kolony:	Pokojová teplota
Mobilní fáze:	A: 0,1% TFA ve vodě
B: 0,1% TFA ve směsi ACN/voda (9:1)

Gradient B:	Čas (min)	%A	%B
0	98	2
16	63,2	36,8
18	0	100
28	0	100
30	98	2

Část C: 'Příprava cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2-[[[5[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val}

Sůl cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr(3-aminopropyl)-Val} s kyselinou trifluoroctovou (0,020 g, 0,0228 mmol) byla rozpuštěna v DMF (1 ml). Byl přidán triethylamin (9,5 pl, 0,0648 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2- [ [ [5-[[(2,5-dioxo-l-pyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonové (0,0121 g, 0,0274 mmol). Reakční směs byla míchána 7 dní a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1 s výtěžkem 8,9 mg (37%) produktu ve formě lyofilizované pevné látky (sůl s TFA). HRMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C42H54N12O12S +H, 951,3783; změřená molekulová hmotnost, 951,3767. Analytická HPLC, metoda č. IB, R_t = 14,317 minut, čistota = 95%.

102 « *

Příklad 2

Syntéza cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr((N-[2-[[[5-[karbonyl] -2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-18amino-14-aza-4,7,10-oxy-15-oxo-oktadekoyl)-3-aminopropyl) Val}

Část A: Příprava kyseliny 3-(N-(3-(2-(2-(3-((tercbutyloxy)-karbonylamino)propyloxy)ethoxy)ethoxy)propyl) karbamoyl)-propanové

Do DMF (15 ml) byl přidán N-(3-(2-(2-(3aminopropyloxy)ethoxy)ethoxy)propyl)(terc-butyloxy) formamid (1,5 g, 4,68 mmol). K tomuto roztoku byl přidán pyridin (15 ml), anhydrid kyseliny jantarové (0,47 g, 4,68 mmol) a následně pak dimethylaminopyridin (62 ml, 0,468 pmol). Reakční směs byla míchána přes noc při 100°C. Reakční směs byla zakoncentrována ve vysokém vakuu a zbytek po odpaření byl rozpuštěn ve vodě, pomocí 1M HCl okyselen na pH 2,5 a extrahován ethylacetátem (3x). Spojené extrakty organické fáze byly vysušeny přídavkem MgSO₄ a zfiltrovány. Filtrát byl zakoncentrován in vacuo a získáno bylo 1,24 g produktu ve formě oleje (63%). Tento produkt byl použit bez další

103 • · 4 · 4 4 4 4 4.4.44

4 4* 444 ». 4 4 » 44 4 4 4 4 4 4 4 »4 44 *· ··· ·· ·4· purifikace. *Η NMR (CDC1₃) 3,67-3,45 (m, 11H) , 3,41-3,28 (m, 2H) , 3,21-3,09 (m, 2H) , 2,95-2,82 (m, 2H) , 2,80-2,35 (m,

3H) , 1,81-1,68 (m, 4H) , 1,50-1,35 (s, 9H); ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₁₉H₃₆N₂O₈, 420,2471; změřená molekulová hmotnost, 419,3 [M-H]-l.

Část B: Příprava sukcinimid esteru kyseliny 3-(N-(3-(2(2- (3- ( (terc-butyloxy) -karbonylamino)propyloxy) ethoxy) ethoxy) propyl)karbamoyl)-propanové

K roztoku kyseliny 3-(N-(3-(2-(2-(3-((terc-butyloxy)karbonylamino) propyloxy) ethoxy) ethoxy) propyl) karbamoyl) propanové (1,12 g, 2,66 mmol), N-hydroxysukcinimidu (0,40 g, 3,46 mmol) a'N,N-dimethylformamidu (40 ml) byl přidán 1(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid (0,67 g, 3,46 mmol) . Reakční směs byla míchána při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs byla zakoncentrována ve vysokém vakuu a zbytek po odpaření byl rozpuštěn v 0,lM HCI a extrahován ethylacetátem (3x) . Spojené extrakty organické fáze byly promyty vodou (2x), nasyceny chloridem sodným, vysušeny přídavkem MgSO₄ a zfiltrovány. Filtrát byl zakoncentrován in vacuo a získáno bylo 1,0 g produktu ve formě oleje (73%). Tento produkt byl použit bez další purifikace. ESMS:. Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₂₃H₃₉N₃Oi₀, 517,2635; změřená molekulová hmotnost, 518,2 (M+H]+l.

104 ·

Část C: Příprava cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr (3-(3-(N-(3-(2(2-(3-( (terc-butyloxy) -karbonylamino) propyloxy) ethoxy) ethoxy) propyl) karbamoyl) -propanamido)propyl) -Val}

nh-Boc

Sůl cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr (3-aminopropyl)-Val} s TFA (0,040 g, 0,0457 mmol) byla rozpuštěna v DMF (2 ml). Nejprve byl přidán triethylamin (19,1 μΐ, 0,137 mmol) a po 5 minutách míchání pak sukcinimid ester kyseliny 3-(N-(3-(2-(2(3-((terc-butyloxy)karbonylamino) propyloxy) ethoxy) ethoxy) propyl) karbamoyl) propanové (0,0284 g, 0,0548 mmol). Reakční směs byla míchána pod atmosférou dusíku po dobu 4 8 hodin a následně zakoncentrována ve vysokém vakuu do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu, získaný produkt byl zfiltrován, promyt ethylacetátem a vysušen ve vysokém vakuu. Surový produkt byl purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1 s výtěžkem 7,4 mg (14%) požadovaného produktu ve formě lyofilizované pevné látky. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro CígHvgNuOis, 1049, 58; změřená molekulová hmotnost, 1050,5 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 20,417 minut, čistota = 100%.

Část D: Příprava cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr (3-(3-(N-(3-(2(2- (3- (amino)propyloxy) ethoxy) ethoxy)propyl) karbamoyl) propanamido) propyl) -Val}

105

• · 9 9:	· · ·	9 ·
• · · 9	• 9 -9 9	•	9 9
• · ··	9 9 9	>	9
		9 9'	9 -

9« 99	9 9 9 9 9	9	9 9

Cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr (3- (3- (Ν- (3- (2- (2- (3- ( (tercbutyloxy) -karbonylami.no) propyloxy) ethoxy) ethoxy) propyl) karbamoyl)-propanamido) propyl)-Val} (6,0 mg, 0,00515 mmol) byl rozpuštěn v methylenchloridu (1 ml) a k tomuto roztoku byla přidána kyselina trifluoroctová (1 ml). Roztok byl míchán po dobu 2 hodin a následně zakoncentrován ve vysokém vakuu do formy oleje. Tento olej byl triturován v diethyletheru, získaný produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem a vysušen ve vysokém vakuu, čímž bylo získáno 6,0 mg (98%) požadovaného produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₄₃H₇iNuOi₃, 949, 52; změřená molekulová hmotnost, 950,6 [M+H)+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B,

R_t = 14,821 minut, čistota = 73%.

Část E: Příprava cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr((N-[2-[ [ [5[karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina] -18-amino-14-aza-4,7,10-oxy-15-oxo-oktadekoyl)-3aminopropyl)-Val}

Cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr (3- (3- (N- (3- (2- (2- (3(amino)propyloxy) ethoxy) ethoxy) propyl) karbamoyl)propanamido) propyl)-Val) (5,0 mg, 0,00424 mmol) byl rozpuštěn v dimethylformamidu (1 ml). Byl přidán triethylamin (1,8 μΐ, 0,0127 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2- [[[5-[[(2,5-dioxo-l-pyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2pyridinyl] hydrazono]methyl]-benzensulfonová (2,2 mg,

0,00509 mmol). Reakční směs byla míchána 24 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1 s výtěžkem 2,2 mg (38%) produktu ve formě lyofilizované pevné látky (sůl s TFA). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₅₆H₈oNi₄0₁₇S, 1252, 6; změřená molekulová hmotnost, 1253,7 (M+H⁺) . Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 17,328 minut, čistota = 100%.

106

Příklad 3

Syntéza [2-[[ [5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl] -benzensulfonová kyselina] Glu (cyklo{D-Tyr (3-aminopropyl) -Val-Arg-Gly-Asp}) -cyklo{DTyr(3-aminopropyl)-Val-Arg-Gly-Asp}

Část A: Příprava Boc-Glu(cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl)-Val Arg-Gly-Asp}) -cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl) -Val-Arg-Gly-Asp}

Cyklo{D-Tyr (3-aminopropyl) -Val-Arg-Gly-Asp} (0,040 g, 0,0457 mmol) byl rozpuštěn v dimethylformamidu (2 ml). Byl přidán triethylamin (19,1 μΐ, 0,137 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu 5 minut. Následně byl přidán BocGlu (OSu)-OSu (0,0101 g, 0,0229 mmol) a reakční směs byla míchána pod dusíkem po dobu 18 hodin. Reakční směs byla následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu, získaný produkt byl zfiltrován, promyt ethylacetátem a vysušen ve vysokém vakuu, čímž bylo získáno 38,0 mg (55%) požadovaného produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₆₈H₁₀₃Ni₉02o, 1505,76; změřená molekulová hmotnost, 1504,9 [M-H]-l. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 19,797 minut, čistota = 73%.

107

4 «4 44 4 4 * 4

44 4 4 444 4 4 44

4 ·· 44 4 »4 4

4 4 44 · 4 4 44 4 ·

4 4 · 4 4 4 4 4 4

44 44 444 4 4 ' 4 4

Část B: Příprava soli Glu(cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl)Val-Arg-Gly-Asp})-cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl)-Val-Arg-GlyAsp} s kyselinou TFA

Boc-Glu(cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl)-Val-Arg-Gly-Asp})cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl)-Val-Arg-Gly-Asp} (0,035 g,

0,0232 mmol) byl rozpuštěn v methylenchloridu (1 ml). Byla přidána kyselina trifluoroctová (1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 2 hodin, ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje a triturována etherem. Získaný produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem a vysušen ve vysokém vakuu, čímž bylo získáno 30,7 mg (76%) požadovaného produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro CsaHgsNxgOxg,

1405,71; změřená molekulová hmotnost, 1404,7 [M-H]-l. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 15,907 minut, čistota = 77%.

Část C: Příprava [2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]Glu(cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl)-Val-Arg-Gly-Asp})-cyklo{DTyr(3-aminopropyl)-Val-Arg-Gly-Asp}

K roztoku Glu(cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl)-Val-Arg-GlyAsp} )-cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl)-Val-Arg-Gly-Asp} (0,025 g, 0,0143 mmol) v dimethylfórmamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (6,0 μΐ, 0,0429 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu 5 minut. Byla přidána sodná sůl kyseliny 2-[ [ [5[[(2,5-dioxo-l-pyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonové (0,0076 g,

108

0,0172 mmol), reakční směs byla míchána po dobu 5 dní a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1 s výtěžkem 12,0 mg (43%) produktu ve formě lyofilizované pevné látky. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C76H104N22O22S, 1708,7; změřená molekulová hmotnost, 1710,1 (M+H⁺) . Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 17,218 minut, čistota = 94%.

Příklad 4

Syntéza cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys([2-[[[5-[karbonyl]2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])}

Část A: Příprava cyklo{Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-DTyr(Bzl)-Lys(Cbz)}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence BocAsp(OBzl)-D-Tyr(Bzl)-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,8711 g, 0,44 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (15 ml). Byla přidána ledová kyselina

109

44 » · ·

I «4» > 4 4

octová (47,1 μΐ, 0,823 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 60°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml). Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu. Výsledkem bylo 653,7 mg požadovaného produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C_5SH65N₉0i₂S, 1087,45; změřená molekulová hmotnost, 1088,7 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. 1A, R_t = 17,559 minut, čistota = 82%.

Část B: Příprava cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys}

Cyklo{Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-D-Tyr(Bzl)-Lys(Cbz)} (0,200 g, 0,184 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C. K tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (0,5 ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -10°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -50°C a při této teplotě míchána 1 hodinu. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1. Výsledkem bylo získání 15,2 mg (10%) požadovaného produktu ve formě lyofilizátu. HRMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₂₇H₄iN₉O₈ +H, 620,3156; změřená molekulová hmot110 nost, 620,3145. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 8,179 minut, čistota = 100%.

Část C: Příprava cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys([2-[[[5[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])}

Sůl cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys} s kyselinou trifluoroc tovou (0,010 g, 0,0118 mmol) byla rozpuštěna v DMF (1 ml). Byl přidán triethylamin (5,0 pl, 0,0354 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-[ [[5-[ [ (2,5-dioxo-lpyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová (0,0062 g, 0,0142 mmol). Reakční směs byla míchána 20 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1 s výtěžkem 6,2 mg (46%) produktu ve formě lyofilizované pevné látky. HRMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C40H50N12O12S +H, 923, 3470; změřená molekulová hmotnost, 923,3486. Analytická HPLC, metoda č. 1B,

R_t = 11,954 minut, čistota = 100%.

Příklad 5

Syntéza cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys([2-[[[5-[karbonyl]2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])}

111 • 9 99

9 9

9 99

Část A: Příprava cyklo{Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-D-PheLys(Cbz)}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence BocAsp(OBzl)-D-Phe-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,7053 g, 0,44 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (15 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (43,0 μΐ, 0,750 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 60°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml). Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu. Výsledkem bylo 510,3 mg požadovaného produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C^HsgNgOuS, 981,40; změřená molekulová hmotnost, 982,6 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. 1A, R_t = 15,574 minut, čistota = 89%.

Část B: Příprava cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys}

Cyklo{Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-D-Phe-Lys(Cbz) } (0,200 g, 0,204 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C. K. tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina trifluor112 • · A A A A A AA

A AA A A AAA A A A

AAAA AAA AA methansulfonová (0,5 ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -10°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -50°C a při této teplotě míchána 1 hodinu. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1. Výsledkem bylo získání 121,1 mg (71%) požadovaného produktu ve formě lyofilizátu. HRMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C27H41N9O7 +H, 604,3207; změřená molekulová hmotnost, 604,3206. Analytická HPLC, metoda č. IB, R_t = 11,197 minut, čistota = 100%.

Část C: Příprava cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys([2-[[[5[karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono]methyl] -benzensulfonová kyselina])}

Sůl cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys} s kyselinou trifluoroctovou (0,040 g, 0,0481 mmol) byla rozpuštěna v DMF (2 ml). Byl přidán triethylamin (20,1 μΐ, 0,144 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-[[ [5-[[(2,5-dioxo-lpyrolidinyl) oxy] karbonyl] -2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonové (0,0254 g, 0,0577 mmol). Reakční směs byla míchána 20 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1 s výtěžkem 38,2 mg (78%) produktu ve formě lyofilizované pevné látky. HRMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C40H50N12OHS +H, 907,3521; změřená molekulová hmotnost, 907,3534. Analytická HPLC, metoda č. IB,

R_t = 14,122 minut, čistota = 91%.

Příklad 6

Syntéza [2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}) -cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-DPhe}

113 ·♦

O NH NH O

OH

Část A

Příprava Boc-Glu(OSu)-Osu

NH-Boc

SuO.

,OSu

O

K roztoku Boc-GluOH (8,0 g, 32,25 mmol), Nhydroxysukcinimidu (8,94 g, 77,64 mmol) a DMF (120 ml) byl přidán 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid (14,88 g, 77,64 mmol). Reakční směs byla míchána při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs byla zakoncentrována ve vysokém vakuu a zbytek po odpaření byl rozpuštěn v O,1M HCI a extrahován ethylacetátem (3x). Spojené extrakty organické fáze byly promyty vodou, nasyceny hydrogenuhličitanem sodným, nasyceny chloridem sodným, vysušeny přídavkem MgSO₄ a zfiltrovány. Filtrát byl zakoncentrován in vacuo a purifikován HPLC s kolonou s obrácenou fázi (kolona Vydac C18, 18 až 90% gradient acetonitrilu obsahující 0,1% TFA, R_t = 9,413 minut) s výtěžkem 8,5 g (60%) požadovaného produktu ve formě bílého prášku. ¹H NMR (CDC1₃) : 2,98-2,70 (m, 11H) , 2,652,25 (m, 2H) , 1,55-1,40 (s, 9H); ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro Ci₈H₂₃N₃Oi₀, 441,1383; změřená molekulová hmotnost, 459,2 [M+NH₄]+1.

Část B: Příprava Boc-Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe})cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}

114 • Β ΒΒ ΒΒ Β 99 ·

ΒΒΒ· Β ΒΒΒ Β···

ΒΒΒΒ ΒΒΒ ΒΒΒ

Β Β Β ΒΒΒ Β Β Β Β Β Β • Β Β .· Β Β Β Β Β Β

ΒΒ ΒΒ ΒΒ ΒΒΒ ΒΒ ΒΒΒ

Κ roztoku cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe} (0,050 g, 0,0601 mmol) v dimethylformamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (25,1 μί, 0,183 mmol). Po 5 minutách míchání byl přidán Boc-Glu(OSu)-OSu (0,0133 g, 0,0301 mmol). Reakční směs byla míchána pod atmosférou dusíku po dobu 20 hodin, zakoncentrována ve vysokém vakuu do formy oleje a tento olej byl triturován v ethylacetátu. Získaný produkt byl zfiltrován, promyt ethylacetátem a vysušen ve vysokém vakuu s výtěžkem 43,7 mg (44%) požadovaného produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₆4H₉₅N₁₉O₁₈, 1417,71; změřená molekulová hmotnost, 1418,8 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B,

R_t = 19,524 minut, čistota = 73%.

Část C: Příprava soli Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe})cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe} s kyselinou trifluoroctovou

NH NH

X X

N ΝΗ,-TFA tfa-h₂n t H >

o o

N N ^H iu tca ^HΝΗ₂·ΤγΑ

O

K roztoku Boc-Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe})cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe} (0,040 g, 0,0243 mmol) v methylenchloridu (1 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (1 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 2 hodin, zakoncentrována ve vysokém vakuu do formy oleje a tento olej byl triturován v diethyletheru. Získaný produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem a vysušen ve vysokém vakuu s výtěžkem 39,9 mg (100%) požadovaného produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₅gH₈₇N₁₉0i₆, 1317,66; změřená molekulová hmotnost, 1318,9 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 15,410 minut, čistota = 73%.

115 • 4 «9 4« 4 44 • 944 9 4 ·4 9 4 4

99 444 44

44 444 4 4 44 4

Část D: Příprava [2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]Glu (cyklo {Lys -Arg-Gly-Asp-D-Phe}) - cyklo {Lys -Arg-Gly-Asp-DPhe}

K roztoku Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe})-cyklo{LysArg-Gly-Asp-D-Phe} (0,030 g, 0,0183 mmol) v dimethylformamidu (3 ml) byl přidán triethylamin (7,6 μΐ, 0,0549 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu 5 minut. Byla přidána sodná sůl kyseliny 2-[ [ [5-[[(2,5-dioxo-lpyrolidinyl) oxy] karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová (0,0096 g, 0,0220 mmol) a reakční směs byla míchána 18 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1 s výtěžkem 11,0 mg (32%) produktu ve formě lyofilizované pevné látky. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C72H96N22O20S, 1620,7; změřená molekulová hmotnost, 1620,1 (M-H⁺) . Analytická HPLC, metoda č. 1B,

R_t = 16,753 minut, čistota = 91%.

Příklad 7

Syntéza [2-[[[5-[karbonyl)-2pyridinyl] hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-PheGlu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}) -cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-

116 ·· ·· ·· · • · · · · · «· • · ·· · · · • · · 9 9 9 « _# • 9 9 · · _W , ** ·· ·· ··« ·'

Část A: Příprava Phe-Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe})cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}

Roztok Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe})-cyklo{Lys-ArgGly-Asp-D-Phe} (23,4 mg, 0,014 mmol) a triethylaminu (7,8 μΐ, 0,56 mmol) v DMF (2 ml) byl míchán po dobu 5 minut.

K tomuto roztoku byl přidán Boc-Phe-OSu (5,1 mg, 0,014 mmol) a reakční směs byla míchána přes noc pod atmosférou dusíku při pokojové teplotě. DMF byl odstraněn in vacuo a zbytek po odpaření byl rozpuštěn v TFA (1,5 ml) a methylenchloridu (1,5 ml) . Získaný roztok byl míchán po dobu 2 hodin a zakoncentrován in vacuo s výtěžkem 31 mg požadovaného produktu ve formě soli s TFA. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₆8H₉6N2o0₁₇, 1464,7; změřená molekulová hmotnost, 1465,6 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B,

R_t = 15,48 minut, čistota = 95%.

Část B: Příprava [2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl] -benzensulfonová kyselina] -PheGlu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}) -cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-DPhe}

K roztoku Phe-Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe})cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe) (0,030 g, 0,016 mmol) v dimethylformamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (9 μΐ, 0,064 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu 5 minut. Byla přidána sodná sůl kyseliny 2-[ [ [5-[[(2,5-dioxo-lpyrolidinyl)oxy]karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] 117 • · ·· · · · · · • · · · · · · · · · · • · ·· · · · · benzensulfonové (0,0099 g, 0,0220 mmol) a reakční směs byla míchána 18 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována. Zbytek po odpaření byl purifikován preparativní RPHPLC, metoda č. 1 s výtěžkem 7 mg (22%) produktu ve formě lyofilizované pevné látky (sůl s TFA). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₈iH₁₀₅N23O₂iS, 1767, 8; změřená molekulová hmotnost, 1768,8 (M-H⁺) . Analytická HPLC, metoda č. IB, R_t = 17,68 minut, čistota = 99%.

Příklad 8

Syntéza cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Nal-Lys([2-[[[5-[karbonyl]2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])}

Část A: Příprava cyklo[Arg(Mtr)-Gly-Asp(OtBu)-D-NalLys(Boc)}

Peptid Asp(OtBu)-D-Nal-Lys(Boc)-Arg(Mtr)-Gly byl připraven automatizovanou syntézou peptidů na pevné fázi s využitím Fmoc chemie. Do 100 ml baňky s kruhovým dnem by118 « · • · · · · · · · · · · • · · · . . -· ' - ·. ' · , ·

Ιο vpraveno HBTU (349 mg, 0,92 mmol) a DMF (10 ml). Tento roztok byl míchán při 60 °C po dobu 5 minut. K tomuto roztoku byl přidán Asp (OtBut)-D-Nal-Lys (Boc)-Arg (Mtr)-Gly (0,648 g) a Huningova báze (0,34 ml, 1,97 mmol) v DMF (10 ml) a získaná směs byla míchána pod dusíkem 4 hodiny při teplotě 60°C.' Rozpouštědlo bylo následně odstraněno in vacuo, a zbytek po odpaření byl triturován v ethylacetátu. Získaná pevná látky byla zfiltrována, promyta ethylacetátem (3x5 ml) a vysušena in vacuo s výtěžkem 520 mg (86%) požadovaného produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C50H71N9O12S, 1021,5; změřená molekulová hmotnost, 1022,5 [M+H]+1. Analytická HPLC, metoda č. IA, R_t = 15,91 minut, čistota = 99%.

Část B: Příprava soli cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Nal-Lys} s TFA

Roztok cyklo{Arg (Mtr)-Gly-Asp (OtBut)-D-Nal-Lys (Boc) } (500 mg, 0,49 mmol), TFA (7 ml), triisopropylsilanu (0,25 ml) a vody (0,25 ml) byl při pokojové teplotě míchán 18 hodin pod atmosférou dusíku. Rozpouštědla byla odstraněna in vacuo (přes 3 hodiny), zbytek po odpaření byl triturován v diethyletheru s výtěžkem 426 mg (98%) požadovaného produktu ve formě soli s TFA. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₃₁H4₃N9O₇, 653,3; změřená molekulová hmotnost, 654,3 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 13,30 minut, čistota = 97%.

119 • *

9· · · · · ♦ · * • ·· · 9 · · · · · · · • · · · 9 · 9 · · ·

9» · 9 9 9 · 9 « 9 · 9 9

Část C: Příprava cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Nal-Lys([2-[ [ [5[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl] -benzensulfonová kyselina])}

Sůl cyklo{Arg-Gly-Asp-D~Nal-Lys} s TFA (0,056 g, 0,064 mmol) byla rozpuštěna v DMF (2 ml). Byl přidán triethylamin (27 pl, 0,19 mmol) a po 5 minutách míchání byla přidána sodná sůl kyseliny 2-[ [ [5-[ [(2,5-dioxo-lpyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono] methyl]benzensulfonové (0,039 g, 0,089 mmol). Reakční směs byla míchána přes noc pod dusíkem a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1 s výtěžkem 49,3 mg (72%) produktu ve formě lyofilizované pevné látky (sůl s TFA). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C44H52N12OHS, 956,4; změřená molekulová hmotnost, 957,5 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 16,19 minut, čistota = 99%.

Příklad 9

Syntéza [2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal})-cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-

120

Část A: Příprava Boc-Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal})cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal}

K roztoku cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal} (0,052 g, 0,059 mmol) v dimethylformamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (25 μΐ) . Po 5 minutách míchání byl přidán Boc-Glu(OSu)-OSu (0,013 g, 0,029 mmol). Reakční směs byla míchána pod atmosférou dusíku po dobu 20 hodin, zakoncentrována ve vysokém vakuu do formy oleje a tento olej byl triturován v ethylacetátu. Získaný produkt byl zfiltrován, promyt ethylacetátem a vysušen ve vysokém vakuu s výtěžkem 35,2 mg požadovaného surového produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₇2H₉₉Ni₉Oi8, 1517,7; změřená molekulová hmotnost, 760,1 [M+2H]+2. Analytická HPLC, metoda č. 1B,

R_t = 21,07 minut, čistota = 65%.

Část B: Příprava Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal})cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal}

K roztoku Boc-Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal})cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal} (35,2 mg) v methylenchloridu (1,5 ml) byla přidána kyselina trifluoroctové (1,5 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 2 hodin, zakoncentrována ve vysokém vakuu do formy oleje a tento olej byl triturován v diethyletherú. Získaný produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem a vysušen ve vysokém vakuu s výtěžkem 34,9 mg požadovaného surového produktu ve formě soli s TFA. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₆7H₉iNi₉0i₆, 1417,69; změ121 • · • · · · * * · * · · · e · · · » · · • · · · ·· · · · • · · · · · · · · · »

9· ·· ·· ·«· «· . «·· řená molekulová hmotnost, 1418,7 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 19,1 minut, čistota = 62%.

Část C: Příprava [2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal}) -cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-DNal}'

K roztoku Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal})-cyklo{LysArg-Gly-Asp-D-Nal} (34,9 mg) v dimethylformamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (10 pl, 0,074 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu 5 minut. Byla přidána sodná sůl kyseliny 2[[[5-[ [ (2,5-dioxo-l-pyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová (15,2 mg,

0,0344 mmol) a reakční směs byla míchána 18 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní RP-HPLC, metoda č. 1 s výtěžkem 3 mg produktu ve formě soli s TFA. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₈₀H₁₀oN2202oS, 1720,7; změřená molekulová hmotnost, 1722,6 (M+H)+1. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 19,78 minut, čistota = 92%.

Příklad 10

Syntéza cyklo{Arg-Gly-Asp-Lys([2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])-DVal}

122 • · · · · · · 4 · • 4 4 · · · · · « « ·

Část A: Příprava cyklo{Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Lys(Cbz)D-Val}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence BocAsp(OBzl)-Lys(Z)-D-Val-Arg(Tos)-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promýtích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,3229 g, 0,44 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (10 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (33,3 μΐ, 0,582 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 65°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml). Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem,vysušena ve vysokém vakuu a purifikována preparativní HPLC, metoda č. 2, s výtěžkem 93,0 mg požadovaného produktu ve formě lyofilizované pevné látky. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C^HsgNgOnS, 933,41; změřená molekulová hmotnost, 934,5 [M+H]+l. Analytická· HPLC, metoda č. 1A, R_t = 14,078 minut, čistota = 85%.

Preparativní HPLC, metoda č. 2

Gradient	Čas (min)	%A	%B
0	80	20
20	0	100
30	0	100
31	80	20

123 · 44 4» 4 Λ»

44 4 4 »44 » 4 4 • 4 44 »44 4 · 4 · 4 4 · » 4 · · » 4

Část Β: Příprava cyklo{Arg-Gly-Asp-Lys-D-Val}

Cyklo{Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Lys(Cbz)-D-Val} (0,080 g, 0,0856 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C. K tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (0,5 ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě —10°C. Po přidání diethyietheru byla reakční směs ochlazena na -50°C a při této teplotě míchána 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt etherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1. Výsledkem bylo získání 44,2 mg (66%) požadovaného produktu ve formě lyofilizátu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₂₃H₄₁N₉O₇, 555, 31; změřená molekulová hmotnost, 556,3 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. IB, R_t = 8,959 minut, čistota = 92%.

Část C: Příprava cyklo{Arg-Gly-Asp-Lys([2-[[[5[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])-D-Val}

K roztoku cyklo{Arg-Gly-Asp-Lys-D-Val} (0,036 g, 0,0459 mmol) v dimethylformamidu (3 ml) byl přidán triethylamin (19,2 μΐ, 0,0138 mmol) a po 5 minutách míchání pak nejprve methylsulfoxid (0,7 ml) a následně sodná sůl kyseliny 2[ [ [5- [ [ (2,5-dioxo-l-pyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonové (0,0243 g, 0,0551 mmol). Reakční směs byla míchána 20 hodin a následně

124 • » ·· 9 9 9 99

99 9 9 9 99 9 -.9 . . ·

9 99 9 9 9 9 9 • 99 999 9 9 99 9

9999 99 9 99 >9 9 9 9 9 9 9 9 , _; 9-9 V· 9 ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1 s výtěžkem

13,9 mg (31%) produktu ve formě lyofilizované pevné látky. HRMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₃₆H₅₀Ni2OiiS +H, 859,3443; změřená molekulová hmotnost, 859,3503. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 13,479 minut, čistota = 92%.

Příklad 11

Syntéza [2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina)Glu(cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp})-cyklo{Lys-D-Val-Arg-GlyAsp}

Část A: Příprava Boc-Glu(cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp})cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp}

K roztoku cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp} (0,400 g, 0,51 mmol) v dimethylformamidu (7 ml) byl přidán triethylamin (0,21 ml, 1,53 mmol). Po 5 minutách míchání byl přidán BocGlu(OSu)-OSu (115 mg, 0,26 mmol). Reakční směs byla míchána pod atmosférou dusíku po dobu 20 hodin a zakoncentrována do formy oleje. Získaný produkt byl částečně purifikován preparativní RP-HPLC s výtěžkem 124 mg. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₅gH₉₅Ni9O₁₈, 1321,71; změřená molekulová hmotnost, 1322,6 [M+H]+l.

125 ·· « ·'

Část B: Příprava Glu(cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp}) cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp}

NH

JÍ

N NH.

H

K roztoku Boc-Glu(cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp})cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp} (0,124 g) v methylenchloridu (5 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (5 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 2 hodin, zakoncentrována ve vysokém vakuu do formy oleje a tento olej byl triturován v diethyletheru. Získaný produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem a vysušen ve vysokém vakuu s výtěžkem 16,2 mg požadovaného produktu (ve formě soli s TFA) po RP-HPLC.

ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C5iH₈₇Ni₉O₁₆,

1221,66; změřená molekulová hmotnost, 1222,6 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. IB, R_t = 11,43 minut, čistota = 93%.

Část C: Příprava [2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]Glu(cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp})-cyklo{Lys-D-Val-Arg-GlyAsp}

K roztoku Glu(cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp})-cyklo{Lys-DVal-Arg-Gly-Asp} (0,016 g, 0,01 mmol) v dimethylformamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (4,2 μΐ) a reakční směs byla míchána po dobu 5 minut. Byla přidána sodná sůl kyseliny 2[[[5-[[(2,5-dioxo-l-pyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonové (0,0063 g,

0,014 mmol) a reakční směs byla míchána 18 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní RP-HPLC, metoda č. 1, a získán

126 ·» ·· » » · ·· » ·· · » · · · · .

• · ·9 · · · · byl požadovaný produkt ve formě soli s TFA. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro CgJUgN^O^S, 1524,7; změřená molekulová hmotnost, 1525,7 (M+H)+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 13,20 minut, čistota = 99%.

Příklad 12

Syntéza {cyklo(Arg-D-Val-D-Tyr(N-[2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina)-3aminopropyl)-D-Asp-Gly}

Část A: Příprava cyklo{Arg(Tos)-D-Val-D-Tyr(N-Cbz-3aminopropyl)-D-Asp(OBzl)-Gly}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence BocArg(Tos)-D-Val-D-Tyr(N-Cbz-aminopropyl)-D-Asp(OBzl)-Glyoximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (50% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice neutralizována 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a přes noc vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,08 g, 0,36 mmol/g) byla následně rozsuspendována v Ν,Ν-dimethylformamidu (12 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (67 ml, 1,16 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 55°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (3 x 10 ml). Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla purifikována HPLC na obrácené fázi (kolona

127

·· • · · • ··

Vydac C18, 18 až 90% gradient acetonitrilu obsahující 0,1% TFA, R_t = 15,243 minut) s výtěžkem 101 mg požadovaného produktu ve formě bílého prášku (30%). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C44H₅₇N₉Oi2S, 935,3847; změřená molekulová hmotnost, 936,5 [M+H]+l.

Část B: Příprava cyklo{Arg-D-Val-D-Tyr(3-aminopropyl)-DAsp-Gly}

CF₃CO₂H h₂n

IH

N

Chráněný cyklický peptid cyklo{Arg(Tos)-D-Val-D-Tyr(NCbz-3-aminopropyl)-D-Asp(OBzl)-Gly} (90 mg, 0,0961 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,95 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C v lázni suchý led/aceton. K tomuto roztoku byla přidána kyselina trifluormethansulfonová (0,16 mmol) a následně anisol (190 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -16°C. Lázeň suchý led/aceton byla následně ochlazena na -35°C a byl přidán vychlazený ether (40 ml). Reakční směs byla míchána 30 minut při teplotě -35°C, poté ochlazena na -50°C a při této teplotě míchána dalších 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, rozpuštěn ve směsi voda/acetonitril (1/1), lyofilizován a purifikován HPLC na obrácené fázi (kolona Vydac C18, 1,8 až 90% gradient acetonitrilu obsahující 0,1% TFA,

R_t = 13,383 minut) s výtěžkem 17 mg uvedeného produktu (27%). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C29H45N9O8, 647,3391; změřená molekulová hmotnost, 648,2 [M+H]+l.

128 • · ·· ·· · ·· • « · · 9 9 · · 9 9 9 • · ·· 9 9 9 9 9

Část C: Příprava {cyklo(Arg-D-Val-D-Tyr(N-[2-[[[5[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina)-3-aminopropyl)-D-Asp-Gly}

K roztoku cyklo{Arg-D-Val-D-Tyr(3-aminopropyl)-D-AspGly} (14 mg, 0,0216 mmol) v N,N-dimethylformamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (15 ml, 0,108 mmol) a roztok byl míchán po dobu 10 minut při pokojové teplotě. Byla přidána sodná sůl kyseliny 2-[[[5-[[(2,5-dioxo-lpyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl)benzensulfonová (11 mg, 0,0260 mmol) a reakční směs byla míchána 18 hodin. Tato reakční směs byla zakoncentrována ve vysokém vakuu a zbytek po odpaření byl purifikován HPLC na obrácené fázi (kolona Vydac C18, 1,8 až 90% gradient acetonitrilu obsahující 0,1% TFA, R_t = 16,264 minut) s výtěžkem 10 mg požadovaného produktu ve formě bílého prášku (49%). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro Ο^Η^Ν^Ο^δ, 950,3705; změřená molekulová hmotnost, 951,3 [M+H]+l.

Příklad 13

Syntéza cyklo{D-Lys([2-[[[5-[karbonyl] -2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])-DPhe-D-Asp-Gly-Arg}

Část A: Příprava cyklo{D-Lys(Cbz)-D-Phe-D-Asp(OBzl)-GlyArg(Tos)}

129 ·· ·* ·· ♦ ·· • » · · ♦ · · · · « · ·« · · * *

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence BocArg(Tos)-D-Lys(Cbz)-D-Phe-D-Asp(OBzl)-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM - (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,93 g, 0,44 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (15 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (77 pl) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 60 °C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml) . Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem, vysušena ve vysokém vakuu a purifikována preparativní RP-HPLC (výtěžek = 252 mg). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₄₉H5₉N₉O_1:lS, 981,40; změřená molekulová hmotnost, 982,3 [M+H]+1. Analytická HPLC, metoda č. IA, R_t = 14,577 minut.

Část B: Příprava soli cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg} s TFA

Cyklo{D-Lys(Cbz)-D-Phe-D-Asp(OBzl)-Gly-Arg(Tos) } (0,152 g, 0,155 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (1,55 ml) a roztok byl ochlazen na -16°C. K tomuto roztoku byla při teplotě -16°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (1,86 ml). Následně byl přidán anisol (0,31 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při

130

·· • · ·	44 4 4 4 44	4 · 4 4 4
• · · • ·	4 4 4 44 444	9 -9··, 4 9 '' ' 4

teplotě -16°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -35°C a při této teplotě míchána 20 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt etherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1, s výtěžkem 69 mg (53%) požadovaného produktu ve formě lyofilizátu (sůl s TFA) . ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₂₇H₄iN₉O₇ +H, 604,3207; změřená molekulová hmotnost, 604,4. Analytická HPLC, metoda č. IB, R_t = 10,35 minut, čistota = 93%.

Část C: Příprava soli cyklo{D-Lys( [2-[ [ [5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])-DPhe-D-Asp-Gly-Arg} s TFA

Sůl cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg} s TFA (0,056 g, 0,0673 mmol) byla rozpuštěna v DMF (2 ml). Byl přidán triethylamin (28 μΐ, 0,2 02 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-[ [ [5-[ [ (2,5-dioxo-lpyrolidinyl) oxy] karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonové (0,029 g, 0,0673 mmol). Reakční směs byla míchána 70 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1, s výtěžkem 14 mg (78%) produktu ve formě lyofilizované pevné látky (sůl s TFA) . ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₄₀H₅oNi₂OiiS +H, 907,3521; změřená molekulová hmotnost, 907,3. Analytická HPLC, metoda č. IB, R_t = 14,17 minut, čistota =99%.

131

• · ··«

Příklad 14

Syntéza [2-[[ [5-[karbonyl]-2pyridinyl] hydrazono] methyl]-benzensulfonová kyselina]Glu (cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg}) -cyklo{D-Lys-D-Phe-DAsp-Gly-Arg}

Část A: Příprava Boc-Glu (cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-GlyArg}) -cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg}

K roztoku cyklo (D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg) (0,190 g, 0,228 mmol) v dimethylformamidu (5 ml) byl přidán triethylamin (95 μΐ, 0, 684 mmol) . Po 5 minutách míchání byl přidán Boc-Glu(OSu)-OSu (0,050 g, 0,114 mmol). Reakční směs byla míchána pod atmosférou dusíku po dobu 20 hodin, zakoncentrována ve vysokém vakuu do formy oleje a tento olej byl triturován v ethylacetátu. Získaný produkt byl zfiltrován, promyt ethylacetátem a vysušen ve vysokém vakuu s výtěžkem 172 mg požadovaného surového produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro CgíHgsNxgCha, 1417,71; změřená molekulová hmotnost, 1418,7 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č.

1B, R_t = 16,8 minut.

Část B: Příprava Glu(cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg}) cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg}

132

o

K roztoku surového Boc-Glu(cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-GlyArg})-cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg} (0,172 g) v methylenchloridu (4,5 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (4,5 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 2 hodin, ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje a tento olej byl triturován v diethyletheru. Získaný produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován RP-HPLC s výtěžkem 38 mg požadovaného produktu ve formě lyofilizované pevné látky (sůl s TFA). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₅₉H87N₁₉O₁₆, 1317,66; změřená molekulová hmotnost, 1318,9 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 13,06 minut, čistota = 93%.

133 • 9 44 ·· 9 44 • 9 · 9 9 9 99 9 9

4 44 4 4 4 9 4

9 9 9' · ' 9 9 9 4 4 4

4 4 · 4 4 9 4 9

99 ·9 9·· 99

Část C: Příprava [2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]Glu(cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg})-cyklo{D-Lys-D-Phe-DAsp-Gly-Arg}

K roztoku Glu(cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg})-cyklo{DLys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg} (0,025 g, 0,015 mmol) v dimethylformamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (6,3 μΐ, 0,045 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu 5 minut.

Byla přidána sodná sůl kyseliny 2-[[[5-[[(2,5-dioxo-lpyrolidinyl) oxy] karbonyl] -2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová (0,0092 g, 0,0210 mmol) a reakční směs byla míchána 18 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní RP-HPLC, metoda č. 1 s výtěžkem 12,5 mg produktu ve formě soli s TFA. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₇2H9₆N₂₂02oS, 1620, 7; změřená molekulová hmotnost, 1622,5 (M+H)+l. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 14,62 minut, čistota = 96%.

134

··	99 • · ··		·· •	9 9	·· * · '9 : '
•	• •	· •	• »
•
»	•	• ·	•	•	»	•
		··			···		• · ·

Příklad 15

Syntéza cyklo{D-Phe-D-Lys([2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])-DAsp-Gly-Arg}

Část A: Příprava cyklo{D-Phe-D-Lys(Cbz) -D-Asp(OBzl)-GlyArg(Tos)}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence BocArg(Tos)-D-Phe-D-Lys(Cbz)-D-Asp(OBzl)-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,5 g, 0,44 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (12 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (61 μΐ) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 60°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml). Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu s výtěžkem 370 mg požadovaného produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C^HsgNgOnS, 981,40; změřená molekulová hmotnost, 982,4 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č.

IA, R_t = 14,32 minut, čistota = 60%.

135

99	··	9· ·	99
•	•	9 ·	• ·	99	•	• «
•		99	• ·		9	•
•
•	•	• 9	9 9	•	9	•
·♦		··	9»	99 9	9»	*

Část B: Příprava soli cyklo{D-Phe-D-Lys-D-Asp-Gly-Arg} s TFA

Surový cyklo{D-Phe-D-Lys(Cbz)-D-Asp(OBzl)-Gly-Arg(Tos)} (0,146 g) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (1,5 ml) a roztok byl ochlazen na -16°C. K tomuto roztoku byla při teplotě -16°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (1,8 ml). Následně byl přidán anisol (0,3 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě 16°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -35°C a při této teplotě míchána 20 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1, s výtěžkem 100 mg požadovaného produktu ve formě lyofilizátu (sůl s TFA). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C27H41N9O7 +H, 604,3; změřená molekulová hmotnost, 604,3. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 10,25 minut, čistota = 90%.

Část C: Příprava cyklo{D-Phe-D-Lys([2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])-DAsp-Gly-Arg}

Sůl cyklo{D-Phe-D-Lys-D-Asp-Gly-Arg} š TFA (0,090 g, 0,108 mmol) byla rozpuštěna v DMF (2 ml). Byl přidán triethylamin (45 μΐ, 0,324 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-[[[5-[[(2,5-dioxo-lpyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]136

benzensulfonové (0,048 g, 0,108 mmol). Reakční směs byla míchána 70 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, metoda č. 1, s výtěžkem 10 mg produktu ve formě lyofilizované pevné látky (sůl s TFA). ESMS: Molekulová hmotnost' vypočítaná pro CíoHsoNiaOnS +H, 907,4; změřená molekulová hmotnost, 907,3. Analytická HPLC, metoda č. 1B,

R_t = 13,47 minut, čistota = 89%.

Příklad 16

Syntéza cyklo{N-Me-Arg-Gly-Asp-ATA-D-Lys-([2-[[ [5[karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina])} so₃H

Část A: Příprava cyklo {N-Me-Arg (Tos)-Gly-Asp (OBzl)-ATAD-Lys (Cbz)}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence BocAsp(OBzl)-ATA-D-Lys(Z)-N-Me-Arg(Tos)-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (50% TFA v CH₂C1₂). Po osmi promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a přes noc vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,24 g, 0,39 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (12 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (67 ml, 1,16 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 50°C. Poté byla pryskyřice zfil137 • · · · · · · · · · · • · ·· ··· · · ·· ·· ·· ··· ·· ··· trována a promyta DMF (3 x 10 ml) . Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla purifikována HPLC na obrácené fázi (kolona Vydac C18, 18 až 90 gradient acetonitrilu obsahující 0,1% TFA, R_t = 14,129 minut)' s výtěžkem 42 mg (9%) požadovaného produktu ve formě lyofilizované pevné látky. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro CigHsgNioOnSa, 988,3571; změřená molekulová hmotnost, 989,4 [M+H]+1.

Část B: Příprava cyklo{N-Me-Arg-Gly-Asp-ATA-D-Lys}

NH o\° -

Cyklo{N-Me-Arg (Tos) -Gly-Asp (OBzl) -ATA-D-Lys (Cbz) } (36 mg, 0,0364 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,364 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C v lázni suchý led/aceton. K tomuto roztoku byla přidána kyselina trifluormethansulfonová (0,437 mmol) a následně anisol (70 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě 10°C. Lázeň suchý led/aceton byla následně ochlazena na 35°C a byl přidán vychlazený ether (40 ml) . Reakční směs byla míchána 30 minut při teplotě -35°C, poté ochlazena na -50°C a při této teplotě míchána dalších 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, rozpuštěn ve směsi voda/acetonitril (1/1) a lyofilizován s výtěžkem 35 mg uvedeného produktu (100%). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C24H38N10O7S, 610,2646; změřená molekulová hmotnost, 611,4 [M+H]+1.

138 • · ·· · · · ·· · • · · · · · ·· · · ·· ···· ·· · 9 9 9..

• · · * · · « · · · 9 · • · · · · · · * · · ·· ·· ·· ·· 999 99 ···

Část C: Příprava cyklo{N-Me-Arg-Gly-Asp-ATA-D-Lys- ( [2[ [ [5- [karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová kyselina])}

K roztoku cyklo{N-Me-Arg-Gly-Asp-ATA-D-Lys} (31 mg, 0,051 mmol) v DMF (2 ml) byl přidán triethylamin (28 ml, 0,204 mmol) a reakční směs byla míchána při pokojové teplotě po dobu 10 minut. Byla přidána sodná sůl kyseliny 2[ [ [5- [ [ (2,5-dioxo-l-pyrolidinyl)oxy] karbonyl] -2pyridinyl] hydrazono] methyl]-benzensulfonové (27 mg, 0,0612 mmol), reakční směs byla míchána 18 hodin a poté zakoncentrována ve vysokém vakuu. Zbytek po odpaření byl purifikován HPLC na obrácené fázi (kolona Shandon HS-BDS, 3 až 10% gradient acetonitrilu, R_t = 13,735 minut) s výtěžkem 4 mg (8,8%) požadovaného produktu ve formě lyofilizované pevné látky. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C37H47N13O11S2, 913, 2959; změřená molekulová hmotnost, 914,5 [M+H]+1.

Příklad 17

Syntéza cyklo{Cit-Gly-Asp-D-Phe-Lys ( [2- [ [ [5- [karbonyl] 2-pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina] ) }

Část A: Příprava cyklo{Cit-Gly-Asp(OtBu)-D-Phe-Lys(Boc)} Peptid Asp (OtBu)-D-Phe-Lys (Boc)-Cit-Gly byl připraven automatizovanou syntézou peptidů na pevné fázi s využitím Fmoc chemie (viz. obecné metody). Do 100 ml baňky s kruhovým dnem bylo vpraveno HBTU (271 mg, 0,71 mmol) a

139 • · ·· · · · · · • · · · · «·· ·· · ···· · · · · ♦

DMF (10 ml). Tento roztok byl míchán při 60°C po dobu 5 minut. K tomuto roztoku byl přidán Asp(OtBu)-D-Phe-Lys(Boc)Cit-Gly (0,456 g) a Huningova báze (0,27 ml, 1,53 mmol) v DMF (10 ml) a získaná směs byla míchána pod dusíkem 4 hodiny při teplotě 60°C. Rozpouštědlo bylo následně odstraněno in vacuo a zbytek po odpaření byl triturován v ethylacetátu. Získaná pevná látka byla zfiltrována, promyta ethylacetátem (3 x 6 ml) a vysušena in vacuo s výtěžkem 305 mg (78%) požadovaného produktu. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₃6H56N₈O₁₀, 760, 4; změřená molekulová hmotnost, 761,4 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. IA, R_t = 11,8 minut, čistota = 99%.

Část B: Příprava soli cyklo{Cit-Gly-Asp(OtBu)-D-PheLys(Boc)} s TFA

Roztok cyklo{Cit-Gly-Asp(OtBu)-D-Phe-Lys(Boc)} (287 mg,

0,38 mmol), TFA (6 ml), triisopropylsilanu (0,25 ml) a vody (0,25 ml) byl při pokojové teplotě míchán 4 hodiny pod atmosférou dusíku. Rozpouštědla byla odstraněna in vacuo (přes 3 hodiny), zbytek po odpaření byl triturován v diethyletheru, zfiltrován a promyt diethyletherem s výtěžkem 315 mg požadovaného produktu ve formě soli s TFA. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C27H₄oN₈0₈, 604,3; změřená molekulová hmotnost, 605,4 [M+HJ+1. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 9,6 minut, čistota = 97%.

140 • ·· · ♦ · · · · ·

4· ·· 4· ··· ·· . ···

Část C: Příprava cyklo{Cit-Gly-Asp-D-Phe-Lys([2-[[[5(karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])}

Sůl cyklo{Cit-Gly-Asp-D-Phe-Lys} s TFA (0,044 g) byla rozpuštěna v DMF (2 ml). Byl přidán triethylamin (22 μΐ, 0,156 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2- [ [ [5- [ [ (2,5-dioxo-l-pyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonové (0,032 g, 0,073 mmol). Reakční směs byla míchána přes noc pod dusíkem a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována. Zbytek po odpaření byl purifikován preparativní RP-HPLC, metoda č. 1, s výtěžkem 37 mg (70%) produktu ve formě lyofilizované pevné látky (sůl s TFA). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₄oH₄₉NiiOi₂S, 907,3; změřená molekulová hmotnost, 908,4 [M+H]+l. Analytická HPLC, metoda č. IB, R_t = 14,15 minut, čistota = 99%.

Příklad 18A

Syntéza kyseliny tris(t-butyl)-l,4,7,10tetraazacyklododekan-1,4,7,10-tetraoctové t-Bu-O₂C-s r-\ <-co₂-t-Bu Ν N

HO N K 'tr' ^-CO₂-t-Bu O

Část A: Příprava fenylmethyl 2-(1,4,7,10-tetraaza4,7,10-tris(((terc-butyl)oxykarbonyl)methyl)cyklododecyl)acetátu t-Bu-O₂C-CO₂-t-Bu

Cb .0. Ν Ν'

TR t—/ ^v-CO₂-t-Bu O

Roztok terc-butyl(1,4,7,10-tetraaza-4,7-bis(((tercbutyl) oxykarbonyl) methyl) cyklododecyl) -acetátu (0,922 g,

141 • · ·* · · » • · · · · ♦ · · • · «· · · · ·· ·· ·« ··* 99 ·99

1,79 mmol), TEA (1,8 ml) a benzylbromacetátu (0,86 ml, 5,37 mmol) v bezvodém DMF (24 ml) byl po dobu 24 hodin míchán pod dusíkem při pokojové teplotě. DMF byl odstraněn ve vakuu a olej ovitý zbytek po odpaření byl rozpuštěn v EtOAc (300 ml). Tento roztok byl nejprve promyt vodou (2 x 50 ml) pak saturovaným NaCl (50 ml) , vysušen (MgSO₄) a zakoncentrován s výtěžkem 1,26 g uvedeného produktu ve formě amorfní pevné látky. MS: m/e 663,5 [M+H].

Část B: Příprava kyseliny 2-(1,4,7,10-tetraaza-4,7,10tris(((terc-butyl)oxykarbonyl)methyl)cyklododecyl)-octové

Produkt připravený v části A (165 mg, 0,25 mmol) byl po dobu 24 hodin hydrogenolyzován na 10% Pd na aktivním uhlí (50 mg) v EtOH (15 ml) při tlaku xxx60psi. Katalyzátor byl odstraněn filtrací a promyt EtOH. Filtráty byly zakoncentrovány s výtěžkem 134 mg (94%) uvedeného produktu ve formě amorfní pevné látky. MS: e/m 573,5 [M+H].

Příklad 18

Syntéza 2-(1,4,7,10-tetraaza-4,7,10-tris(karboxymethyl)1-cyklododecyl)acetyl-Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}) -

Část A: Příprava 2-(1,4,7,10-tetraaza-4,7,10-tris(tbutoxykarbonylmethyl) -1-cyklododecyl) acetyl-Glu(cyklo{LysArg-Gly-Asp-D-Phe}) -cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}

142

Β Β · Β · · • · · Β · Β * • 9 9 Β Β 9

Β · Β 9 · · ♦

Κ roztoku kyseliny tris(t-butyl)-l,4,7,10tetraazacyklododekan-1,4,7,10-tetraoctové (28 mg, 0,046 mmol) a Huningovy báze (14 μΐ) v DMF (2 ml) byl přidán HBTU (17 mg, 0,0456 mmol) a tato směs byla míchána po dobu 5 minut. K tomuto roztoku byl přidán Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-AspD-Phe})-cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe} (54,1 mg, 0,0326 mmol) v DMF (1 ml) a tato reakční směs byla míchána pod dusíkem 4 hodiny při pokojové teplotě. Rozpouštědlo bylo následně odstraněno in vacuo a zbytek po odpaření byl purifikován preparativní RP-HPLC s výtěžkem 18,3 mg produktu ve formě lyofilizované pevné látky (sůl s TFA). ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro 1872,0; změřená molekulová hmotnost, 937,2 [M+2H]+2. Analytická HPLC, metoda č. 1B,

R_t = 19,98 minut, čistota = 99%.

Část B: Příprava 2-(1,4,7,10-tetraaza-4,7,10tris (karboxymethyl) -1-cyklododecyl) acetyl-Glu(cyklo{LysArg-Gly-Asp-D-Phe}) -cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}

Roztok 2-(1,4,7,10-tetraaza-4,7,10-tris(tbutoxykarbonylmethyl) -1-cyklododecyl) acetyl-Glu(cyklo{LysArg-Gly-Asp-D-Phe} )-cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe} (18,30 mg, 8,71 mmol) v TFA (3 ml) byl při pokojové teplotě míchán 5 hodin pod atmosférou dusíku. Roztok byl zakoncentrován in vacuo a zbytek po odpaření byl purifikován preparativní RPHPLC s výtěžkem 8 mg (45%) produktu ve formě lyofilizované

143

·♦ 44	4 4 4	4 4 4
• · 4 ·	4 4 4 4	• 4 44 ,
4 4 44	4 4 4	4 4 4
4 4 4 4	4 4 4 4 4	4 4- 44«

pevné látky (sůl s TFA) . ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C75HH3N23O23Z 1703,8; změřená molekulová hmotnost, 853,0 [M+2H]+2. Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t - 13,13 minut, čistota = 99%.

Příklad 19

Syntéza cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (DTPA) }

K roztoku cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys} (0,050 g, 0,0601 mmol) v DMF (2 ml) byl přidán triethylamin (41,9 μΐ, 0,301 mmol) . Tento roztok byl po dobu 4 hodin po kapkách přidáván do roztoku dianhydridu kyseliny diethylentriaminopentanové (0,1074 g, 0,301 mmol) v DMF (2 ml) a methylsulfoxidu (2 ml) . Reakční směs byla míchána po dobu 16 hodin, zakoncentrována do formy oleje a purifikována preparativní HPLC, metoda č. 1, s výtěžkem 29,9 mg (46%) požadovaného produktu ve formě pevné látky. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₄iH₆2Ni20i₆, 978,4; změřená molekulová hmotnost, 977,5 [M-H⁺] . Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 11,916 minut, čistota = 100%.

144

Příklad 20

Syntéza cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys}₂ (DTPA)

Purifikací preparativní HPLC, metoda č. 1, oleje získaného v příkladu 19 bylo rovněž získáno 21,5 mg (21%) uvedeného produktu ve formě pevné lyofilizované látky. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₆₈H₁₀iN₂iO₂₂, 1563, 7; změřená molekulová hmotnost, 1562,8 [M-H⁺] . Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 15,135 minut, čistota = 93%.

Příklad 21

K roztoku cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr (3-aminopropyl) -Val} (0,050 g, 0,0571 mmol) v dimethylformamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (39,8 μΐ, 0,286 mmol). Tento roztok byl po dobu 4 hodin po kapkách přidáván do roztoku dianhydridu kyseliny diethylentriaminopentanové (0,1020 g, 0,286 mmol) v methylsulfoxidu (2 ml) . Reakční směs byla míchána po dobu 18 hodin, ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje a

145

9 • 9 • >

9

9 preparativní HPLC, metoda č. 1, s výtěžkem 41,9 mg (65%) požadovaného produktu ve formě pevné látky. ESMS: Molekulová hmotnost vypočítaná pro C₄₃H66Ni₂O₁₇, 1022,5; změřená mole kulová hmotnost, 1021,4 [M-H⁺] . Analytická HPLC, metoda č. 1B, R_t = 15,690 minut, čistota = 96%.

Příklad 22

Syntéza cyklo{Orn(d-N-2-imidazolinyl) -Gly-Asp-D-Tyr(N[2-[[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val}

Část A: Příprava cyklo{Orn(d-N-l-Tos-2-imidazolinyl)Gly-Asp-(OBzl)-D-Tyr(N-Cbz-3-aminopropyl) -Val)

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence Boc-Asp(OBzl)-D-Tyr(N-Cbz-aminopropyl)-Val-Orn(d-N-l-Tos-2imidazolinyl)-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byl pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut) . Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vy sokém vakuu. Tato pryskyřice (1,75 g, 0,55 mmol/g) byla ná sledně rozsuspendována v dimethylformamidu (15 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (55,0 μΐ, 0,961 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 50°C Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml) Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná

146 pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu za vzniku požadovaného produktu.

Část B: Příprava solicyklo{0rn(d-N-2-imidazolinyl)-GlyAsp-D-Tyr(3-aminopropyl)-Val} s TFA

Cyklo{Orn(d-N-l-Tos-2-imidazolinyl)-Gly-Asp-(OBzl)-DTyr(N-Cbz-3-aminopropyl)-Val} (0,146 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C. K tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (0,5 ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -10°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -35°C a při této teplotě míchána 30 minut. Reakční směs byla dále ochlazena na -50°C a míchána dalších 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC.

Část C: Příprava cyklofOrn(d-N-2-imidazolinyl)-Gly-AspD-Tyr(N-[2- [ [ [5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val}

Sůl cyklofOrn(d-N-2-imidazolinyl)-Gly-Asp-D-Tyr(3 aminopropyl)-Val} s TFA (0,0228 mmol) byla rozpuštěna v DMF (1 ml). Byl přidán triethylamin (0,0648 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-[[[5-[[(2,5-dioxo-lpyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová (0,0274 mmol). Reakční směs byla míchána 1 až 2 dny a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Purifikací preparativní HPLC tohoto oleje byl připraven požadovaný produkt.

Příklad 23

Syntéza cyklo{Lys-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-3aminopropyl)-Val}

147 ·· ·· ·· · ·· • · · · · · ·« · · · ···· · · · · · • 9 4 9 4 9 4 4 4 9 9

Část A: Příprava cyklo{Lys(Tfa)-Gly~Asp(OBzl)-D-Tyr(NCbz-3-aminopropyl)-Val}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence Boc-Asp(OBzl)-D-Tyr(N-Cbz-aminopropyl)-Val-Lys(Tfa)-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂). Po osmi promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,75 g, 0,55 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (15 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (55,0 μΐ, 0,961 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 50°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml). Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu za vzniku požadovaného produktu.

Část B: Příprava soli cyklo{Lys(Tfa)-Gly-Asp-D-Tyr(3aminopropyl)-Val} s TFA

Cyklo{Lys(Tfa)-Gly-Asp(OBzl)-D-Tyr(N-Cbz-3-aminopropyl) Val} (0,146 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C. K tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (0,5 ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -10°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs

148 ·· 44 4 ·· » • 4 4 · · ··· · 4 4 4·'

4 44 4 4 * 4 4 · • 4 4 4 4 · 4 4 44 4 4

4 4 4 4 4 4 4 4 4

44 4 4 444 44 4*#' ochlazena na -35°C a při této teplotě míchána 30 minut. Reakční směs byla dále ochlazena na -50°C a míchána dalších 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC.

Část C: Příprava cyklo{Lys-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2-[[[5[karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val}

Sůl cyklo{Lys(Tfa)-Gly-Asp-D-Tyr(3-aminopropyl)-Val} s TFA (0,0228 mmol) byla rozpuštěna v DMF (1 ml). Byl přidán triethylamin (0,0648 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-[[[5-[[(2,5-dioxo-lpyrolidinyl) oxy] karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová (0,0274 mmol). Reakční směs byla míchána 1 až 2 dny a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl vystaven působení 20% piperidinu v DMF a získaný surový materiál byl purifikován preparativní HPLC, čímž byl získán požadovaný produkt.

Příklad 24

Syntéza cyklo{Cys(2-aminoethyl)-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2- [ [ [5 [karbonyl] -2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val}

H₂hT

Část A: Příprava cyklo{Cys(2-N-Tfa-aminoethyl)-GlyAsp (OBzl)-D-Tyr(N-Cbz-3-aminopropyl)-Val}

149 «· ·· ·» » ·· · • · · » · » ·· 9 · ·· • · ·· · · « · · · ······· ···· · • · 4 · · · · · ·· ·· ·· · ·· ·· ·*·

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence Boc-Asp(OBzl) -D-Tyr (N-Cbz-aminopropyl) -Val-Cys (2-N-Tfaaminoethyl) -Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytí ch DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut) . Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,75 g, 0,55 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (15 ml) . Byla přidána ledová kyselina octová (55,0 μΐ, 0,961 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 50°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml) . Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu za vzniku požadovaného produktu.

Část B: Příprava soli cyklo{Cys(2-N-Tfa-aminoethyl)-Gly Asp-D-Tyr(3-aminopropyl)-Val} s TFA

Cyklo{Cys (2-N-Tfa-aminoethyl) -Gly-Asp (OBzl) -D-Tyr (N-Cbz 3-aminopropyl)-Val} (0,146 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C.

K tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (0,5 ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -10°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -35°C a při této teplotě míchána 30 minut. Reakční směs byla dále ochlazena na -50°C a míchána dalších 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purif ikován preparativní HPLC.

Část C: Příprava cyklo{Cys(2-aminoethyl)-Gly-Asp-DTyr(N- [2- [ [ [5- [karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl) -Val}

150 «φ φφ ·· * ·· φ φφφφ φφφφ φφφφ φ φ φφ φφφ φ φ φ φ φφ φφφ φ φ φφ φ φ φφφφ φφφ φφφ φφ φφ φφ φφφ φφ φφφ

Sůl cyklo{Cys(2-N-Tfa-aminoethyl)-Gly-Asp-D-Tyr(3aminopropyl)-Val} s TFA (0,0228 mmol) byla rozpuštěna v DMF (1 ml). Byl přidán triethylamin (9,5 μΐ, 0,0648 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-[[[5-[[(2,5dioxo-l-pyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonové (0,0121 g,

0,0274 mmol). Reakční směs byla míchána 1 až 2 dny a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl vystaven působení 20% piperidinu v DMF a získaný surový materiál byl purifikován preparativní HPLC, čímž byl získán požadovaný produkt.

Příklad 25

Syntéza cyklo{HomoLys-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2-[[ [5[karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová

Část A: Příprava cyklo{HomoLys(Tfa)-Gly-Asp(OBzl) -DTyr(N-Cbz-3-aminopropyl)-Val}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence Boc-Asp(OBzl)-D-Tyr(N-Cbz-aminopropyl)-Val-HomoLys(Tfa) -Glyoximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,75 g, 0,55 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dímethylformamidu (15 ml). Byla přidána ledová kyse151 lina octová (55,0 μΐ, 0,961 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 50°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml) . Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu za vzniku požadovaného produktu.

Část B: Příprava soli cyklo{HomoLys(Tfa)-Gly-Asp-DTyr(3-aminopropyl)-Val} s TFA

Cyklo{HomoLys (Tf a) -Gly-Asp (OBzl) -D-Tyr (N-Cbz-3aminopropyl)-Val} (0,146 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C.

K tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (0,5 ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -10°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -35°C a při této teplotě míchána 30 minut. Reakční směs byla dále ochlazena na -50°C a míchána dalších 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC.

Část C: Příprava cyklo{HomoLys-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2-[ [ [5[karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono]methyl] -benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val}

Sůl cyklo{HomoLys (Tfa) -Gly-Asp-D-Tyr (3-aminopropyl) -Val} s TFA (0,0228 mmol) byla rozpuštěna v DMF (1 ml). Byl přidán triethylamin (9,5 μΐ, 0,0648 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-t [ [5-[ [ (2,5-dioxo-lpyrolidinyl) oxy] karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová (0,0121 g, 0,0274 mmol). Reakční směs byla míchána 1 až 2 dny a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl vystaven působení 20%

152 • ·

piperidinu v DMF a získaný surový materiál byl purifikován preparativní HPLC, čímž byl získán požadovaný produkt.

Příklad 26

Syntéza cyklo{Orn (d-N-benzylkarbamoyl) -Gly-Asp-D-Tyr (N[2- [ [ [5- [karbonyl] -2-pyridinyl]hydrazono]methyl] benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val}

Část A: Příprava cyklo{Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-GlyAsp (OBzl) -D-Tyr (N-Cbz-3-aminopropyl) -Val}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence Boc-Asp(OBzl) -D-Tyr (N-Cbz-aminopropyl) -Val-Orn (d-Nbenzylkarbamoyl) -Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut) . Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,75 g, 0,55 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (15 ml) . Byla přidána ledová kyselina octová (55,0 μΐ, 0,961 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 50°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml) . Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu za vzniku požadovaného produktu.

153 • ♦ · · · · ♦· • · >· · ♦ · φ · · · · β · · · • · · · · · · «· *· · · ·· ·

Část Β: Příprava soli cyklo{Orn(d-N-benzylkarbamoyl)Gly-Asp-D-Tyr (3-aminopropyl)-Val} s TFA

Cyklo{Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-Gly-Asp(OBzl)-D-Tyr(NCbz-3-aminopropyl)-Val} (0,146 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C. K tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (0,5 ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -10°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -35°C a při této teplotě míchána 30 minut. Reakční směs byla dále ochlazena na -50°C a míchána dalších 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC.

Část C: Příprava cyklo{Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-Gly-AspD-Tyr(N-[2- [ [ [5- [karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl) -Val}

Sůl cyklo{Orn (d-N-benzylkarbamoyl)-Gly-Asp-D-Tyr(3aminopropyl)-Val} s TFA (0,0228 mmol) byla rozpuštěna v DMF (1 ml). Byl přidán triethylamin (9,5 μί, 0,0648 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-[[[5-[[(2,5dioxo-l-pyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2pyridinyl] hydrazono] methyl]-benzensulf onové (0,0121 g,

0,0274 mmol). Reakční směs byla míchána 1 až 2 dny a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje.

Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, čímž byl získán požadovaný produkt.

Příklad 27

Syntéza cyklo{Dap(b-(2-benzimidazolylacetyl))-Gly-Asp-DTyr (N- [2- [ [ [5- [karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulf onová kyselina] -3-aminopropyl) -Val}

154

benzimidazolylacetyl))-Gly-Asp(OBzl)-D-Tyr(N-Cbz-3aminopropyl)-Val}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence Boc-Asp(OBzl)-D-Tyr(N-Cbz-aminopropyl)-Val-Dap(b-(l-Tos-2benzimidazolylacetyl))-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH2CI2) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut) . Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,75 g, 0,55 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (15 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (55,0 μΐ, 0,961 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 50°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml). Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu za vzniku požadovaného produktu.

Část B: Příprava soli cyklo{Dap(b-(2benzimidazolylacetyl))-Gly-Asp-D-Tyr(3-aminopropyl)-Val} s TFA

Cyklo{Dap(b-(l-Tos-2-benzimidazolylacetyl))-GlyAsp (OBzl)-D-Tyr(N-Cbz-3-aminopropyl)-Val} (0,146 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C. K tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (0,5

155

« · · ·	• · «	• 4
• · · ·	• 4 4 4.	4 4 4
• · 4 4	4 4 4	. 4 4


• 4 4 4	4 4 . ·«·	44 4

ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -10°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -35°C a při této teplotě míchána 30 minut. Reakční směs byla dále ochlazena na -50°C a míchána dalších 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC.

Část C: Příprava cyklo{Dap(b-(2-benzimidazolylacetyl))Gly-Asp-D-Tyr(N-[2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-3aminopropyl)-Val}

Sůl cyklo{Dap(b-(2-benzimidazolylacetyl))-Gly-Asp-DTyr(3-aminopropyl)-Val} s TFA (0,0228 mmol) byla rozpuštěna v DMF (1 ml). Byl přidán triethylamin (9,5 μΐ, 0,0648 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-[[[5[[(2,5-dioxo-l-pyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonové (0,0121 g, 0,0274 mmol). Reakční směs byla míchána 1 až 2 dny a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován způsobem popsaným níže, čímž byl získán požadovaný produkt.

156

9 9 9 9 · · · * · · · • 9 9 9 . 9 9 . 9 . : 9 · · • 9 9 9 9 9 9 9 9' '9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 '.',·».·· . 99 99 9

Příklad 28

Syntéza cyklo{Orn(d-N-2-imidazolinyl)-Gly-Asp-D-PheLys(N-[2-[[[5-[karbonyl] -2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina])}

Část A: Příprava cyklofOrn(d-N-l-Tos-2-imidazolinyl)Gly-Asp(OBzl)-D-Phe-Lys(Cbz)}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence Boc-Asp(OBzl)-D-Phe-Lys(Z)-Orn(d-N-l-Tos-2-imidazolinyl)-Glyoximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,75 g, 0,55 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (15 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (55,0 μΐ, 0,961 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 50°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml). Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu za vzniku požadovaného produktu.

157 • · 9 9 9 9 9 ♦ · ·

9 9 9 #.·..· ·

9 9 9 9 ·

9 9 9 9...99 999

Část Β: Příprava cyklofOrn (d-N-2-imidazolinyl) -Gly-AspD-Phe-Lys}

CyklofOrn(d-N-l-Tos-2-imidazolinyl) -Gly-Asp (OBzl) -D-PheLys(Cbz)} (0,204 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°Č. K tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina trifluormethansulfonová (0,5 ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -10°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -50°C a při této teplotě míchána 1 hodinu. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletherem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC.

Část C: Příprava cyklo{Orn (d-N-2-imidazolinyl) -Gly-AspD-Phe-Lys(N-[2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina] ) }

Sůl cyklofOrn (d-N-2-imidazolinyl) -Gly-Asp-D-Phe-Lys} s TFA (0,0481 mmol) byla rozpuštěna v DMF (2 ml). Byl přidán triethylamin (20,1 μΐ, 0,144 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-[[ [5-[[ (2,5-dioxo-lpyrolidinyl) oxy] karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonové (0,0254 g, 0,0577 mmol). Reakční směs byla míchána 20 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, čímž byl získán požadovaný produkt.

Příklad 29

Syntéza cyklo{Orn (d-N-benzylkarbamoyl) -Gly-Asp-D-PheLys (N- [2- [ [ [5- [karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová kyselina])}

158 ·· ·· ·· ♦ ·· • · · · ···· · · · ···· ··· · ·

•.....4 9 · Λ 9 4 9 9 9 9

9 4 4 · * · · ·

4 4 4 ♦*......·.·.· ·* ·

Část A: Příprava cyklo{Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-GlyAsp (OBzl)-D-Phe-Lys(Cbz)}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence BocAsp(OBzl) -D-Phe-Lys (Z) -Orn(d-N-benzylkarbamoyl) -Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (25% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice vystavena působení 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut) . Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,75 g, 0,55 mmol/g) byla následně rozsuspendována v dimethylformamidu (15 ml) . Byla přidána ledová kyselina octová (55,0 μΐ, 0,961 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 50°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (2 x 10 ml). Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla filtrována, promyta ethylacetátem a vysušena ve vysokém vakuu za vzniku požadovaného produktu.

Část B: Příprava cyklo{Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-Gly-AspD-Phe-Lys}

Cyklo{Orn (d-N-benzylkarbamoyl) -Gly-Asp (OBzl) -D-PheLys(Cbz)} (0,204 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,6 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C. K tomuto roztoku byla při teplotě -10°C po kapkách přidávána kyselina

159

AA AA »A A A«

AAAA AAAA AA • 9 AA A»· A ·

A AA AA A A A AA A

AAAA AA A AA

AAAA AA AAA A A trifluormethansulfonová (0,5 ml). Následně byl přidán anisol (0,1 ml) a reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -10°C. Po přidání diethyletheru byla reakční směs ochlazena na -50°C a při této teplotě míchána 1 hodinu. Získaný surový produkt byl zfiltrován, promyt diethyletheřem, vysušen ve vysokém vakuu a purifikován preparativní HPLC.

Část C: Příprava cyklo(Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-Gly-AspD-Phe-Lys(N-[2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])}

Sůl cyklo{Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-Gly-Asp-D-Phe-Lys} s TFA (0,0481 mmol) byla rozpuštěna v DMF (2 ml). Byl přidán triethylamin (20,1 μΐ, 0,144 mmol) a po 5 minutách míchání pak sodná sůl kyseliny 2-[[ [5-[[(2,5-dioxo-lpyrolidinyl) oxy] karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonové (0,0254 g, 0,0577 mmol). Reakční směs byla míchána 20 hodin a následně ve vysokém vakuu zakoncentrována do formy oleje. Tento olej byl purifikován preparativní HPLC, čímž byl získán požadovaný produkt.

Příklad 30

Syntéza cyklo{Lys-D-Val-D-Tyr(N-[2-[[[5-[karbonyl] -2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-3aminopropyl)-D-Asp-Gly}

160

	• ·	·>·	• ·		' · ·
•	•	• ·	• 4	• I ·..	. ·	• 4
•	•	• ·	4 4		•	4
• •	•	• 4	4 4		4	4
	• «	• ·	4 4.	4-.4)4:/..	i- ··	4

Část A: Příprava cyklo{Lys(Tfa)-D-Val-D-Tyr(N-Cbz-3aminopropyl)-D-Asp(OBzl)-Gly}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence BocLys (Tfa) -D-Val-D-Tyr (N-Cbz-aminopropyl) -D-Asp (OBzl) -Glyoximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (50% TFA V CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice neutralizována 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a přes noc vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,0 g, 0,36 mmol/g) byla následně rozsuspendována v N,N-dimethylformamidu (12 ml) . Byla přidána ledová kyselina octová (67 ml, 1,16 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 55°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (3 x 10 ml) . Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla purifikována HPLC na obrácené fázi.

Část B: Příprava soli cyklo{Lys-D-Val-D-Tyr(3aminopropyl)-D-Asp-Gly} s TFA

Chráněný cyklický peptid cyklo(Lys(Tfa)-D-Val-D-Tyr(NCbz-3-aminopropyl)-D-Asp(OBzl)-Gly} (0,10 mmol) byl rozpuštěn v. kyselině trifluoroctové (0,95 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C v lázni suchý led/aceton. K tomuto roztoku byla přidána kyselina trifluormethansulfonová (0,12 mmol) a následně anisol (190 ml) . Reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -16°C. Lázeň suchý led/aceton byla následně ochlazena na -35°C a byl přidán vychlazený ether (40 ml). Reakční směs byla míchána 30 minut při teplotě -35°C, poté ochlazena na -50°C a při této teplotě míchána dalších 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, rozpuštěn ve směsi voda/acetonitril (l/l), lyofilizován a purifikován HPLC na obrácené fázi, čímž byl získán požadovaný produkt.

161 ·» ·· · ·· • · * · · · · · ♦ · · ···· · · · · · ···· » · · · · • · ·· . ··♦ ··

Část C; Příprava cyklo{Lys-D-Val-D-Tyr(N-[2-[[[5[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina)-3-aminopropyl)-D-Asp-Gly}

K roztoku cyklo{Lys(Tfa)-D-Val-D-Tyr(3-aminopropyl)-DAsp-Gly} (0,0216 mmol) v N,N-dimethylformamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (15 ml, 0,108 mmol) a roztok byl míchán po dobu 10 minut při pokojové teplotě. Byla přidána sodná sůl kyseliny 2-[ [ [5-[ [ (2,5-dioxo-lpyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonové (0,0260 mmol) a reakční směs byla míchána 18 hodin. Tato reakční směs byla zakoncentrována ve vysokém vakuu a zbytek po odpaření ve formě oleje byl vystaven působení 20% piperidinu v DMF a opět zakoncentrován in vacuo. Zbytek po odpaření byl purifikován HPLC na obrácené fázi, čímž byl získán požadovaný produkt.

Příklad 31

Syntéza cyklo{Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-D-Val-D-Tyr(N-[2 [[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-D-Asp-Gly}

Část A: Příprava cyklo{Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-D-Val-DTyr (Ν-Cbz-3-aminopropyl)-D-Asp(OBzl)-Gly}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence Boc-Orn(dN-benzylkarbamoyl)-D-Val-D-Tyr(N-Cbz-aminopropyl)-DAsp(OBzl)-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní

162

reakcí (50% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice neutralizována 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a přes noc vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,0 g, přibližně 0,36 mmol/g) byla následně rozsuspendována v N,Ndiméthylformamidu (12 ml) . Byla přidána ledová kyselina octová (67 ml, 1,16 mmol) a reakční směs byla po dobu 72 hodin zahřívána na teplotu 55°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (3 x 10 ml) . Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla purifikována HPLC na obrácené fázi.

Část B: ‘Příprava soli cyklo(Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-DVal-D-Tyr(3-aminopropyl)-D-Asp-Gly} s TFA

Chráněný cyklický peptid cyklo{Orn(d-N-benzylkarbamoyl)D-Val-D-Tyr (N-Cbz-3-aminopropyl) -D-Asp (OBzl) -Gly} (0,10 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,95 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C v lázni suchý led/aceton.

K tomuto roztoku byla přidána kyselina trifluormethansulfonová (0,12 mmol) a následně anisol (190 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě -16°C. Lázeň suchý led/aceton byla následně ochlazena na -35°C a byl přidán vychlazený ether (40 ml) . Reakční směs byla míchána 30 minut při teplotě -35°C, poté ochlazena na -50°C a při této teplotě míchána dalších 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, rozpuštěn ve směsi voda/acetonitril (1/1), lyofilizován a purifikován HPLC na obrácené fázi, čímž byl získán požadovaný produkt.

Část C: Příprava cyklo(Orn(d-N-benzylkarbamoyl)-D-Val-DTyr(N- [2- [ [ [5- [karbonyl] -2-pyridinyl]hydrazono]methyl] benzensulfonová kyselina) -3-aminopropyl) -D-Asp-Gly}

K roztoku cyklo{0rn(d-N-benzylkarbamoyl) -D-Val-D-Tyr (3aminopropyl)-D-Asp-Gly} (0,0216 mmol) v N,N163 ·· ·♦ . ··. ·'. ·· • 9 9 9 9 9 .99: :· · · · • 9 9 9 9 9 . · ·

9 9 9 9 9 9 9 9

99 99 999 99 dimethylformamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (15 ml,

0,108 mmol) a roztok byl míchán po dobu 10 minut při pokojové teplotě. Byla přidána sodná sůl kyseliny 2-[[[5[[(2,5-dioxo-l-pyrolidinyl)oxy]karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonové (0,0260 mmol) a reakční směs byla míchána 18 hodin. Tato reakční směs byla zakoncentrována ve vysokém vakuu a zbytek po odpaření byl purifikován HPLC na obrácené fázi, čímž byl získán požadovaný produkt.

Příklad 32

Syntéza cyklo{Orn(d-N-l-Tos-2-imidazolinyl)-D-Val-DTyr(N-[2-[[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-D-Asp-Gly}

Část A: Příprava cyklo{Orn(d-N-l-Tos-2-imidazolinyl)-DVal-D-Tyr(N-Cbz-3-aminopropyl)-D-Asp(OBzl)-Gly}

N-koncová chránící skupina peptidové sekvence Boc-0rn(dN-2-imidazolinyl)-D-Val-D-Tyr(N-Cbz-aminopropyl)-DAsp(OBzl)-Gly-oximová pryskyřice byla odstraněna standardní reakcí (50% TFA v CH₂C1₂) . Po osmi promytích DCM byla pryskyřice neutralizována 10% DIEA/DCM (2 x 10 minut). Pryskyřice byla následně promyta DCM (5x) a přes noc vysušena ve vysokém vakuu. Tato pryskyřice (1,0 g, přibližně 0,36 mmol/g) byla následně rozsuspendována v N,Ndimethylformamidu (12 ml). Byla přidána ledová kyselina octová (67 ml, 1,16 mmol) a reakční směs byléi po dobu 72 ho164

BB BB ·· B BB

din zahřívána na teplotu 55°C. Poté byla pryskyřice zfiltrována a promyta DMF (3 x 10 ml). Filtrát byl ve vysokém vakuu zakoncentrován do formy oleje. Tento olej byl triturován v ethylacetátu. Takto získaná pevná látka byla purifikována HPLC na obrácené fázi.

Část B: Příprava soli cyklo{0rn(d-N-2-imidazolinyl)-DVal-D-Tyr (3-aminopropyl)-D-Asp-Gly} s TFA

Chráněný cyklický peptid cyklo{0rn(d-N-l-Tos-2imidazolinyl) -D-Val-D-Tyr (N-Cbz-3-aminopropyl) -D-Asp (OBzl) Gly} (0,10 mmol) byl rozpuštěn v kyselině trifluoroctové (0,95 ml) a roztok byl ochlazen na -10°C v lázni suchý led/aceton. K tomuto roztoku byla přidána kyselina trifluormethansulfonová (0,12 mmol) a následně anisol (190 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 3 hodin při teplotě 16°C. Lázeň suchý led/aceton byla následně ochlazena na 35°C a byl přidán vychlazený ether (40 ml). Reakční směs byla míchána 30 minut při teplotě -35°C, poté ochlazena na -50°C a při této teplotě míchána dalších 30 minut. Získaný surový produkt byl zfiltrován, rozpuštěn ve směsi voda/acetonitril (l/l), lyofilizován a purifikován HPLC na obrácené fázi, čímž byl získán požadovaný produkt.

Část C: Příprava cyklo{Orn(d-N-2-imidazolinyl)-D-Val-DTyr (N- [2-[[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl] benzensulf onová kyselina)-3-aminopropyl)-D-Asp-Gly}

K roztoku cyklo{Orn(d-N-2-imidazolinyl)-D-Val-D-Tyr(3aminopropyl)-D-Asp-Gly} (0,0216 mmol) v N,Ndimethylformamidu (2 ml) byl přidán triethylamin (15 ml, 0,108 mmol) a roztok byl míchán po dobu 10 minut. Byla přidána sodná sůl kyseliny 2-[ [ [5-[ [(2,5-dioxo-lpyrolidinyl) oxy] karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono]methyl] benzensulfonové (0,0260 mmol) a reakční směs byla míchána 18 hodin. Tato reakční směs byla zakoncentrována ve vysokém

165 ·· ·· ** * ·· . I · · »··· »·· ► ’· · · ♦ · ζ » · ··· · · ·· J • · · · · · .. . ·· 9· 9 99 · · * na obrácené radiofarmak »· vakuu a zbytek po odpaření byl purifikován HPLC fázi, čímž byl získán požadovaný produkt.

Příklady radiofarmak

Následující postupy (A, B) popisují syntézu podle vynálezu popsané vzorcem ^99mTc (VnA)(tricin)(fosfin), kde (VnA) reprezentuje antagonistickou sloučeninu receptoru pro vitronektin, která je k Tc vázána prostřednictvím diazenidové (-N=N-) nebo hydrazidové (=N-NH~) skupiny. Vznik diazenidové nebo hydrazidové skupiny je důsledkem reakce hydrazinonikotinamidové skupiny, existující ve volného formě jako hydrazin nebo chráněné jako hydrazon, s Tc-99m. Dalšími dvěma ligandy v koordinační sféře Tc jsou tricin a fosfin.

Postup A

Syntéza komplexů Tc-99m a antagonistů receptoru pro vitronektin popsaných vzorcem ^99mTc (VnA) (tricin) (fosfin) s využitím redukujících sloučenin obsahujících cínaté ionty.

V· ampulce o objemu 10 ml bylo smícháno: 10 až 30 pg (0,2 až 0,4 ml) látky podle vynálezu rozpuštěné ve fyziologickém roztoku nebo 50% vodném roztoku ethanolu, 40 mg (0,4 ml) tricinu ve vodě, 1 až 7 mg (0,10 až 0,30 ml) fosfinu rozpuštěného ve vodě nebo ethanolu, 25 pg (25 μΐ) SnCl₂-2H₂O rozpuštěného v 0,1 M HCI, 0 až 0,25 ml ethanolu a 50 až 150 mCi 'TcO.ý ve fyziologickém roztoku. Tato směs byla po dobu 10 až 20 minut zahřívána na vodní lázni na teplotu 100°C a následně bylo 50 pl vzorku analyzováno HPLC, metoda č. 3. Jestliže to bylo nezbytné, byl celý komplex purifikován HPLC (nástřik 300 až 400 pl) a jednotlivé frakce byly sbírány do stíněných lahviček. Sebrané frakce byly odpařeny do sucha, rozpuštěny ve fyziologickém roztoku obsahujícím 0 až

166

5% objemových procent Tweenu 80, a opět analyzovány HPLC, metoda č. 3.

Postup B

Syntéza komplexů Tc-99m a antagonistú receptoru pro vitronektin popsaných vzorcem ^99mTc (VnA) (tricin) (TPPTS) bez využití redukujících sloučenin obsahujících cínaté ionty.

Do lyofilizační lahvičky obsahující 4,84 mg TPPTS, 6,3 mg tricinu, 40 mg manitolu a 0,25 mmol sukcinátového pufru, pH 4,8, bylo přidáno 0,2 až 0,4 ml (20 až 40 pg) látky podle vynálezu rozpuštěné ve fyziologickém roztoku nebo 50% vodném roztoku ethanolu, 50 až 100 mCi ^99raTcO₄' ve fyziologickém roztoku a další fyziologický roztok na výsledný objem 1,3 až 1,5 ml. Tato směs byla po dobu 10 až 15 minut zahřívána na vodní lázni na teplotu 100°C a následně bylo 50 μΐ vzorku analyzováno HPLC, metoda č. 3. Jestliže to bylo nezbytné, byl celý komplex purifikován HPLC (nástřik 300 až 400 μΐ) a jednotlivé frakce byly sbírány do stíněných lahviček. Sebrané frakce byly odpařeny do sucha, rozpuštěny ve fyziologickém roztoku obsahujícím 0 až 5% objemových procent Tweenu 80, a opět analyzovány HPLC, metoda č. 3.

Tabulka 1. Analytická data a výtěžky pro komplexy ^99mTc (VnA) (tricin) (fosfin)

Komplex	Sloučenina	Fosfin	Výtěžek	Retenční
z příkladu č.	z příkladu č.	(%)	čas (min)
33	1	TPPTS	88	8,2
34	2	TPPTS	96	19,5
35	3	TPPTS	91	33,7
36	4	TPPTS	92	21,8
37	5	TPPTS	65	25,1
38	6	TPPTS	91	41,7
39	7	TPPTS	89	20,4
40	8	TPPTS	93	16,4
41	9	TPPTS	90	13,4
42	10	TPPTS	93	12,9
43	12	TPPMS	94	23,5

167

44	12	TPPDS	93	18,1
45	12	TPPTS	93	13,6
46	13	TPPTS	93	11,2
47	14	TPPTS	79	11,0
48	15	TPPTS	94	11,2
49	16	TPPTS	81	9/2
50	17	TPPTS	97	10,4

Následující příklad popisuje syntézu radiofarmak podle vynálezu popsané vzorcem ^99mTc (VnA)(tricin)(L) , kde L = heterocyklus obsahující dusík ve formě iminu, a kde (VnA) reprezentuje antagonistickou sloučeninu receptoru pro vitronektin, která je k Tc vázána prostřednictvím diazenidové (N=N-) nebo hydrazidové (=N-NH-) skupiny. Dalšími dvěma ligandy v koordinační sféře Tc jsou tricin a heterocyklus obsahující dusík ve formě iminu.

Příklad 51

Syntéza komplexu Tc-99m a antagonistů receptoru pro vitronektin popsaného vzorcem ^99mTc (VnA) (tricin) (1,2,4-triazol) pg látky z příkladu 1 (0,30 ml, 50/50 EtOH/H₂O) , 40 mg tricinu (0,25 ml/H₂0) , 8 mg 1,2,4-triazolu (0,25 ml/H₂O) , 25 pg SnCl₂ (25 pl/0,1 M HCl), 0,50 ml vody a 0,20 ml 50±5 mCi ^99mTcO₄· bylo smícháno ve stíněné ampulce o objemu 10 ml a tato směs byla zahřívána po dobu 10 minut na 100°C. 50 pl obsahu ampulky bylo analyzováno HPLC postupem popsaným níže. Radiochemická čistota produktu eluovaného v retenčním čase 8,33 minut byla 88,1%.

Látky podle vynálezu obsahující buď DOTA (příklad 18), DTPA monoamid (příklady 19 a 20) nebo DTPA bisamid (příklad 21) vytvářejí velmi snadno komplexy s ionty kovů prvků 31, 39, 49 a 58 až 71. Následujíc příklady demonstrují syntézu komplexů se ¹⁵³Sm, ¹⁷⁷Lu a ⁹⁰Y (izotopy emitující beta částice, používané při radiofarmaceutické terapii) a ^ηιΙη (izo168

• 4 44	4 4 4	4 4
4 4 4 4	4 4 4 4	4 4 4
• 4 4 4	4 4 4	4 ·♦'
4 4 4 4	44 444	«4 4

top emitující záření gama, používané v radiofarmaceutických zobrazovacích přípravcích). V obou typech komplexů je iont kovu navázán k chelatotvorné části sloučeniny tvořené DOTA, DTPA monoamidem nebo DTPA bisamidem.

'Příklady 52 a 53

Syntéza komplexů antagonistů receptoru pro vitronektin obsahujících DOTA a Y-90 nebo Lu-177

Do čisté ampulky o objemu 10 ml bylo přidáno 0,5 ml látky z příkladu 18 (200 pg/mlv 0,25 M octanu amonném, pH 7,0) 0,05 až 0,1 ml roztoku kyseliny gentisové (sodná sůl, mg/ml v 0,25 M octanu amonném, pH 7,0), 0,3 ml 0,25 M octanu amonném (pH 7,0) a 0,05 ml roztoku ¹⁷⁷LuCl3 nebo ⁹⁰YCl3 (100 až 200 mCi/ml) v 0,05 M HCI. Takto připravená směs byla po dobu 35 minut zahřívána na 100°C. Po ochlazení na pokojovou teplotu byl vzorek tohoto roztoku analyzován radioHPLC a ITLC. Komplex z příkladu 53 byl analyzován hmotnostní spektroskopií (molekulová hmotnost vypočítaná pro C75H100N23O23LU, 1875,8; změřená molekulová hmotnost, 1877,6 [M+H⁺] ) , čímž byla potvrzena identita této sloučeniny.

Příklad 54

Syntéza komplexu antagonisty receptoru pro vitronektin obsahujícího ¹¹¹In DOTA

Do lékovky pro automatický dávkovač o objemu 300 μΐ stíněné vrstvou olova bylo vpraveno 50 μΐ kyseliny gentisové (10 mg/ml v 0,1 M octanu amonném, pH 6,75), následně pak 100 μΐ sloučeniny z příkladu 18 (200 pg/ml v 0,2 M octanu amonném, pH 5,0) a 50 μΐ roztoku ^1:L1InCl₃ (10 mCi/ml) v 0,04N HCI. Hodnota pH této reakční směsi byla přibližně 4,0. Tento roztok byl po dobu 25 minut zahříván na teplotu 100°C. Vzorek tohoto roztoku analyzován radio-HPLC a ITLC.

169 « · ·· • · ♦ ·

A · · · • · > » · • · · · • A · · : t

A· · A : : · • · • ·

Tabulka IA: Analytická data a výtěžky pro komplexy Y-90, In-111 a Lu-177 s antagonisty receptorů pro vitronektin kon j ugovanými s DOTA.

Komplex z příkladu č.	Sloučenina z příkladu č.	Izotop	Výtěžek (%)	Retenční čas při HPLC (min)
52	18	Y-90	96	16,5
53	18	Lu-177	96	16,5
54	18	In-111	95	16,5

Příklady 55 a 56

Syntéza komplexů antagonistů receptorů pro vitronektin obsahujících DTPA-monoamid nebo DTPA-bisamid a In-111

V ampulce o objemu 10 ml bylo smícháno 0,2 ml ^11:LInCl3 (1,7 mCi) v 0,1 M HCI, 0,2 ml 1,0 M octanu amonného, pH 6,9, a 0,1 ml sloučeniny podle vynálezu rozpuštěné ve vodě a tato směs byla ponechána reagovat 30 minut při pokojové teplotě. Získaná směs byla analyzována HPLC, metoda č. 3.

Tabulka 2: Analytická data a výtěžky pro komplexy ^luIn.

Komplex z příkladu č.	Sloučenina z příkladu č.	Výtěžek (%)	Retenční čas při HPLC (min)
55	19	86	11,1
56	20	96	18,8

Příklady 57 až 59

Syntéza komplexů antagonistů receptorů pro vitronektin obsahujících Sm-153

V ampulce o objemu 10 ml bylo smícháno 0,25 ml ¹⁵³SmCl₃(54 mCi/pmol Sm, 40 mCi/ml) v 0,1 M HCI a sloučenina podle vynálezu (50-ti násobný molární přebytek) rozpuštěná v 1,0 M octanu amonném. Reakce probíhala přibližně 30 minut při pokojové teplotě a reakční směs byla následně analyzována ITLC a HPLC (metoda č. 3). Jestliže to bylo nezbytné, byl celý komplex purifikován HPLC (nástřik 300 až 400 μΐ) a

170 • * . .:

jednotlivé frakce byly sbírány do stíněných lahviček. Sebrané frakce byly odpařeny do sucha, rozpuštěny ve fyziologickém roztoku a opět analyzovány HPLC, metoda č. 3.

Tabulka 3. Analytická data a výtěžky pro komplexy ¹⁵³Sm

'Komplex	Sloučenina	Výtěžek	Retenční čas
z příkladu č.	z příkladu č.	(%)	při HPLC (min)
57	19	91	11,7
58	20	84	13,1
59	21	96	16,9

Analog radiofarmaka podle příkladu 59 obsahující neradioaktivní (přirozeně se vyskytující) samarium byl připraven smícháním 3,3 mg (2,9 pmol) sloučeniny z příkladu 21 rozpuštěné ve 2 ml 1,0 M octanu amonného, pH 7,0, a 0,29 ml 0,01 M roztoku SmCl₃ v 0,1 M HCI. Reakce probíhala přibližně 5 hodin při pokojové teplotě a reakční produkt byl následně izolován HPLC, metoda 3. Těkavé látky byly odstraněny lyofilizací. Identita získaného komplexu byla potvrzena hmotnostní spektroskopií. (ΑΡΙ-ESMS: molekulová hmotnost vypočítaná pro C₄₃H₆4N₁₂Oi7Sm, 1172,9; změřená molekulová hmotnost, 1172,4 [M+2H⁺] ) . Byl připraven zásobní roztok tohoto komplexu ve vodě a koncentrace byla stanovena ICP analýzou. Tento roztok byl použit pro stanovení vazebné afinity zmíněného komplexu k receptorů pro vitronektin α_νβ₃

Struktury reprezentující radiofarmaka podle vynálezu obsahující In-111 (příklad 56), Y-90 (příklad 52) a Sm-153 (příklad 59) jsou znázorněny níže.

171 a a «« • · a ·

Příklady 60 až 62

Syntéza komplexů antagonistů receptoru pro vitronektin obsahujících Lu-177 χ 10⁹ mol sloučeniny podle vynálezu bylo rozpuštěno v 1,0 ml 0,lM octanového pufru, pH 6,8. Bylo přidáno 1 χ 10'⁹mol Lu-177 (40 μΐ, 3 mCi) rozpuštěného v 0,1 M HCl a reakce probíhala 30 až 45 minut při pokojové teplotě. Reakční směsi byly analyzovány HPLC, metoda č. 3.

172 «« «· I ·« 4 • · 4 · · 4 4 · 4 * β ·

4 44 4 · · 4 4 4 • «4 4 4 4 · 4 4 4.....4 · • 4 4 4 4 4 4 ·' 4 · •4 44 44 4·· 44 444

Tabulka 4. Analytická data a výtěžky pro komplexy ¹⁷⁷Lu

Komplex z příkladu č.	Sloučenina z příkladu č.	Výtěžek (%)	Retenční čas při HPLC (min)
60	19	98	11,0
61	20	98	15,6
62	21	98	11,7

Příklad 63

Komplex sloučeniny z příkladu 21 s gadoliniem byl připraven následujícím postupem. Ve 2 ml 1 M octanu amonného, pH 7,0, bylo rozpuštěno 3 až 3,5 mg zmíněné sloučeniny a k tomuto roztoku byl přidán jeden ekvivalent roztoku Gd(NO₃)₃ (0,02 M ve vodě). Reakční směs byla ponechána 3 až 5 hodin při pokojové teplotě a získaný produkt byl izolován HPLC, metoda č. 4. Frakce obsahující požadovaný komplex byly lyofilizovány a rozpuštěny v 1 ml H₂O s výslednou koncentrací 2 mM Gd (stanoveno ICP analýzou). Identita získaného komplexu byla potvrzena hmotnostní spektroskopií. (APIESMS: molekulová hmotnost vypočítaná pro C43H64Ni₂Oi₇Gd,

1176,9; změřená molekulová hmotnost, 1176,2 [M+2H⁺] ) .

Následují příklady popisují přípravu kontrastních látek podle vynálezu pro ultrazvuk, obsahujících směrující části pro neovaskuluturu nádorů, kde těmito směrujícími skupinami jsou antagonisté receptoru α_νβ₃.

173 • · «» • · · ·

• 4 4 • 4 • ·' - >

• to

Příklad 64

Část A: Syntéza sloučeniny 1-(1,2-dipalmitoyl-snglycero-3-fosfoethanolamino)-12-(cyklo(Arg-Gly-Asp-D-PheLys)-dodekan-1,12-dion

Roztok disukcinimidyl dodekan-1,12-dioátu (0,424 g, 1 mmol), 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolaminu (1,489 g, 1 mmol) a TFA soli cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) (0,831 g, 1 mmol) ve 25 ml chloroformu byl míchán po dobu 5 minut. Byly přidány uhličitan sodný (1 mmol) a síran sodný (1 mmol) a roztok byl 18 hodin míchán pod atmosférou dusíku při pokojové teplotě. DMF byl odstraněn in vacuo a surovým produkt byl purifikován, čímž byl získán produkt uvedený v záhlaví.

Část B: Formulace přípravku kontrastní látky

Syntetizovaný 1-(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3fosfoethanolamino) -12- (cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) dodekan-1,12-dion byl smíchán se třemi jinými lipidy - kyselinou 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidovou, 1,2dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidylcholinem a N(methoxypolyethylen glykol 5000 karbamoyl)-1,2-dipalmitoylsn-glycero-3-fosfatidylethanolaminem - v relativních množstvích 1:6:54:41 (hmotnostní procenta). Následně byl při pH 6 až 7 ve skleněné ampulce o objemu 2 ml připraven vodný

174 roztok této lipidové směsi (1 mg/ml), chloridu sodného (7 mg/ml), glycerolu (0,1 ml/ml) a propylenglykolu (0,1 ml/ml). Vzduch z ampulky byl vyčerpán, nahrazen perfluorpropanem a ampulka byla zatavena. Přípravek kontrastní látky pro ultrazvuk je zkompletován umístěním zatavené ampulky do amalgamátoru na 30 až 45 sekund, čímž dojde k vytvoření mléčně bílého roztoku.

Příklad 65

Část A: Syntéza (m-amino-PEG₃₄₀o-cť-karbonyl) -cyklo(ArgGly-Asp-D-Phe-Lys)

Do roztoku N-Boc-o-amino-PEG₃₄₀o-Oí-karboxylát sukcinimidyl esteru (1 mmol) a cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) (1 mmol) v DMF (25 ml) byl přidán triethylamin (3 mmol) . Tato reakční směs byla míchána pod dusíkem přes noc při pokojové teplotě a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo. Surový produkt byl rozpuštěn ve směsi 50% kyselina trifluoroctová/dichlorměthan a míchán po dobu 4 hodin. Těkavé složky byly odstraněny a triturací v diethyletheru byl izolován požadovaný produkt ve formě soli s TFA.

Část B: Příprava 1-(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3fosfoethanolamino) -12- ( (ů)-amino-PEG₃₄₀₀-a-karbonyl) cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys))-dodekan-1,12-dionu

175 * · · * φ 9 49 4.:94

9 4 4 9 9 · 4 9 • 4 4 4 9 9 9 9--94--9

Roztok disukcinimidyl dodekanoátu (1 mmol), 1,2dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolaminu (1 mmol) a TFA soli (o-amino-PEG₃₄₀₀-a-karbonyl) -cyklo(Arg-Gly-Asp-D-PheLys) (1 mmol) ve 25 ml chloroformu byl míchán po dobu 5 minut. Byly přidány uhličitan sodný (1 mmol) a síran sodný (1 mmol) a roztok byl 18 hodin míchán pod atmosférou dusíku při pokojové teplotě. DMF byl odstraněn in vacuo a surovým produkt byl purifikován, čímž byl získán produkt uvedený v záhlaví.

Část C: Formulace přípravku kontrastní látky

1- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolamino)-12( (cú-amino-PEG₃₄₀o-a-karbonyl) -cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) ) dodekan-1,12-dion byl smíchán se třemi jinými lipidy - kyselinou 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidovou, 1,2dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidylcholinem a N(methoxypolyethylen glykol 5000 karbamoyl)-1,2-dipalmitoylsn-glycero-3-fosfatidylethanolaminem - v relativních množstvích 1:6:54:41 (hmotnostní procenta). Následně byl při pH 6 až 7 ve skleněné ampulce o objemu 2 ml připraven vodný roztok této lipidové směsi (1 mg/ml), chloridu sodného (7 mg/ml), glycerolu (0,1 ml/ml) a propylenglykolu (0,1 ml/ml). Vzduch z ampulky byl vyčerpán, nahrazen perfluorpropanem a ampulka byla zatavena. Přípravek kontrastní látky pro ultrazvuk je zkompletován umístěním zatavené ampulky

176 • · *· · · · «· 9 « 9 9 9 · 9 < · » 9 9 9

9 ·· * · · · 9 φ

9 9 9*9-9- 9 9 « 9 9 •9 99 9· 999 99 999 do amalgamátoru na 30 až 45 sekund, čímž dojde k vytvoření mléčně bílého roztoku.

Příklad 66

Část A: Syntéza (cú-amino-PEG₃₄₀o-a-karbonyl) -Glu(cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys))₂

NH h₂n—4

Do roztoku N-Boc-a>-amino-PEG₃4₀o-C(-karboxylát sukcinimidyl esteru (1 mmol) a Glu-(cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys))₂ (1 mmol) v DMF (25 ml) byl přidán triethylamin (3 mmol) . Tato reakční směs byla míchána pod dusíkem přes noc při pokojové teplotě a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo. Surový produkt byl rozpuštěn ve směsi 50% kyselina trifluoroctová/dichlormethan a míchán po dobu 4 hodin. Těkavé složky byly odstraněny a triturací v diethyletheru byl izolován požadovaný produkt ve formě soli s TFA.

Část B: Příprava 1-(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3fosfoethanolamino) -12- ((o-amino-PEG₃₄₀o-Cť-karbonyl) -Glu(cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) )₂) -dodekan-1,12-dionu

177

NH

.0

HjN-C

Η

H₂N—

NH

Roztok disukcinimidyl dodekanoátu (1 mmol), 1,2dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolaminu (1 mmol) a TFA soli (ω-amino-PEG₃₄₀o-a-karbonyl) -Glu- (cyklo(Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys))₂ (1 mmol) ve 25 ml chloroformu byl míchán po dobu minut. Byly přidány uhličitan sodný (1 mmol) a síran sodný (1 mmol) a roztok byl 18 hodin míchán pod atmosférou dusíku při pokojové teplotě. DMF byl odstraněn in vacuo a surovým .produkt byl purifikován, čímž byl získán produkt uvedený v záhlaví.

Část C: Formulace přípravku kontrastní látky

1-(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolamino)-12( (o-amino-PEG₃₄oo-a-karbonyl) -Glu- (cyklo(Arg-Gly-Asp-D-PheLys))₂)-dodekan-1,12-dion byl smíchán se třemi jinými lipidy - kyselinou 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidovou, 1,2dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidylcholinem a N(methoxypolyethylen glykol 5000 karbamoyl)-1,2-dipalmitoylsn-glycero-3-fosfatidylethanolaminem - v relativních množstvích 1:6:54:41 (hmotnostní procenta). Následně byl při pH až 7 ve skleněné ampulce o objemu 2 ml připraven vodný

178 •9 99 ·* 9 9 9 • 9 · 9 * 9 9 9 9 «

9 99 » 9 « * 9 »99 9 · » 9 9 9 9 9

999« 99 9 9 9

9* 99 99 999 4 9 roztok této lipidové směsi (1 mg/ml), chloridu sodného (7 mg/ml), glycerolu (0,1 ml/ml) a propylenglykolu (0,1 ml/ml). Vzduch z ampulky byl vyčerpán, nahrazen perfluorpropanem a ampulka byla zatavena. Přípravek kontrastní látky pro ultrazvuk je zkompletován umístěním zatavené ampulky do amalgamátoru na 30 až 45 sekund, čímž dojde k vytvoření mléčně bílého roztoku.

Analytické metody

HPLC, metoda č. 3

Kolona: Zorbax Cl8, 25 cm x 4,6 mm nebo Vydac Cl8, 25 cm x 4,6 mm

Teplota: pokojová

Průtok: 1,0 ml/minuta

Fáze A: 10 mM fosforečnan sodný, pH 6

Fáze B: 100% acetonitril

Detektor: radiometrické čidlo jodidu sodného (Nal) nebo detektor beta záření

Gradient A (příklady 33, 51)

t (min)	0	20	30	31	40
%B	0	75	75	0	0

Gradient B (příklady 39, 40, 43, 44, 45, 46, 48, 50)

t (min)	0	20	30	31	35	36	40
%B	0	25	25	75	75	0	0

Gradient C (příklady 34, 35, 36, 37, 38, 42)

t (min)	0	40	41	46	47	55
%B	0	35	75	75	0	0

Gradient D (příkl	Lad 49)
t (min)	0	20	30	31	40
%B	0	25	25	0	0

Gradient E (příklady 55, 56)

t (min)	0	20	21	30	31	40
%B	0	20	50	50	0	0

179

Gradient F (příklady 57, 58)

t (min)	0	15	16	25	26	35
%B	0	20	75	75	. 0	0

Gradient G (přiklad 59

t (min)	0	20	21	30	31	40
%B	0	20	75	75	0	0

Gradient H (příklad 60, 61 a 62)

t (min)	0	15	16	21	22	40
%B	0	20	50	50	0	0

Gradient I (příklady 52, 53, 54)

t (min)	0	20	21	30	31	40
%B	5	20	60	60	5	5

Gradient J (příklad 41)

t (min)	0	20	30	31	40
%B	0	50	50	0	0

Gradient K (příklad 47

t (min)	0	20	21	30	31	40
%B	10	20	60	60	10	10

HPLC, metoda č. 4
Kolona:	Zorbax C18, 25 cm :
Průtok:	1,0 ml/minuta
Fáze A:	10 mM octan amonný
Fáze B:	100% methanol
Detekce	UV
Gradient

t (min)	0	23	26	27
%B	8	100	100	8

Metoda ITLC

Proužky ITLC-SG, Gelman (2 cm x 7,5 cm)

Systém rozpouštědel: 1:1 aceton:fyziologický roztok Detekce s využitím systému Bioscan 200

180 • # »· • · · · 4 4 49 4 4 4 « « 44 4 9 4 4 4 • · · 4 4 4 9 4 4 4 ' 9

9 9 4 4 4 4 4 4

9 9 4 4 9 944 · · . *

Průmyslová využitelnost

Farmaceutické sloučeniny podle vynálezu jsou použitelné ke zobrazování angiogenní vaskulatury nádorů a léčbu rakoviny v organizmu pacientů. Radiofarmaka podle vynálezu obsahující nějaký izotop emitující gama záření jsou použitelná při diagnostice patologických procesů, při kterých dochází ke tvorbě angiogenní vaskulatury, včetně rakoviny, diabetické retinopatie, degenerace makuly, restenózy cév po angioplastice a hojení poranění. Diagnostická využitelnost rovněž zahrnuje zobrazování nestability věnčitých tepen (například plaky nestabilních koronárních tepen). Radiofarmaka podle vynálezu obsahující nějaký izotop emitující beta záření, alfa záření nebo Augerovy elektrony jsou použitelná při léčbě patologických procesů, při kterých dochází ke tvorbě angiogenní vaskulatury tím, že do místa angiogenní vaskulatury vnášejí cytotoxickou dávku radiace. Léčba rakoviny je prováděna systemickou aplikací radiofarmak, jejíž důsledkem je přísun cytotoxické dávky radiace do nádorů.

Sloučeniny podle vynálezu obsahující jeden nebo více iontů paramagnetických kovů vybraných ze skupiny zahrnující gadolinium, dysprosium, železo a mangan jsou použitelné jako kontrastní látky pro nukleární magnetickou rezonanci (MRI) při zobrazování patologických procesů, při kterých dochází ke tvorbě angiogenní vaskulatury.

Sloučeniny podle vynálezu obsahující jeden nebo více atomů těžkých kovů s atomovým číslem vyšším než 20 jsou použitelné jako kontrastní látky pro rentgenové záření při zobrazování patologických procesů, při kterých dochází ke tvorbě angiogenní vaskulatury.

Sloučeniny podle vynálezu obsahující echogenní plyn v mikročásticích nějaké povrchově aktivní látky použitelné jako kontrastní látky pro sonografii při zobrazování pato181 • 9 99 · · • 9 * · * · · » · · 9 9 · • 9 ·* *· logických procesů, při kterých dochází ke tvorbě angiogenní vaskulatury.

Reprezentativní sloučeniny podle vynálezu byly testovány in vitro a in vivo při stanoveních a na modelech popsaných v dalším textu a v těchto experimentech bylo zjištěno, že jsou aktivní.

Stanovení využívající imobilizovaný receptor α_νβ3 z lidské placenty.

Podmínky stanovení byly vyvinuty a jejich využitelnost ověřena pomocí [1-125]vitronektinu. Při ověření použitelnosti stanovení byla uplatněna analýza Scatchardova formátu (n=3), při níž byly stanovovány počet receptorů (Bmax) a Kd (afinita). Stanovení je prováděno tak, že před vlastním určením IC50 jsou sloučeniny nejprve testovány při výsledných koncentracích 10 a 100 mM. Hodnota IC50 byla stanovována pro tři standardní (vitronektin, protilátku LM609 proti α_νβ₃a protilátku P1F6 proti α_νβ₅) a pět referentních peptidů. Stručně shrnuto, při tomto stanovení byly izolované receptory zmobilizovány na 96-ti jamkové destičce a inkubovány přes noc. Receptory byly izolovány z normální, čerstvé a neinfekční (bez HIV, hepatitidy B a C, syfilidy a HTLV) lidské placenty. Tkáň byla lyžována a nelyžované části tkáně byly odstraněny centrifugací. Lyzát byl zfiltrován a receptory byly izolovány afinitní chromatografii s využitím zmobilizované protilátky proti α_νβ₃ · Destičky byly následně 3x promyty promývacím pufrem. Byl přidán blokující pufr a destičky byly inkubovány 120 minut při pokojové teplotě. Během této doby byly testované sloučeniny a [I125]vitronektin předmíchány v zásobní destičce. Blokující pufr byl odstraněn a na destičku s zmobilizovanými recepto182 <· ·· 94 9 ·♦

9 9 9 4 9 49 4 9 • 4 ·· · · · * ·

4 4 4 4> 4 4 4 9 9'. '9.

4 9 9 9 4 9 9 4 ·« ·· 44 494 44..

ry byly napipetovány roztoky testovaných sloučenin. Reakce probíhala 60 minut při pokojové teplotě. Následně byl nenavázaný materiál odstraněn a jamky byly odděleny a aktivita stanovena měřením gama záření.

Stanovení využívající vazbu na jiné receptory

Experimenty využívající ke stanovení vazebné afinity farmaceutických látek podle vynálezu k receptorům VEGF, Flk-l/KDR a Flt-1 celé buňky jsou popsány v publikacích Ortega a další, Amer. J. Pathol., 151:1215 až 1224, 1997 a Dougher a další, Growth Factors, 14:257 až 268, 1997. In vitro stanovení použitelné k určení afinity farmaceutických látek podle vynálezu k receptoru bFGF je popsáno v publikaci Yayon a další, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 90:10643 až 10647, 1993. Gho a další (Cancer Research, 57:3733 až 3740, 1997) popisuje stanovení pro peptidy vážící receptor pro angiogenin. Segner a další (Proč. Nati.

Acad. Sci. USA, 94:13612 až 13617, 1997) popisuje stanovení použitelné pro antagonisty integrinů alBl a a2Bl. Přihláška US 5536814 popisuje stanovení použitelné pro sloučeniny, které se vážou na integrin a5Bl.

Zobrazování s využitím modelu Oncomouse®

V této studii jsou využívány myši c-Neu Oncomouse” a jako kontrola myši FVB. V narkóze navozené pentobarbitalem sodným bylo myším injekčně aplikováno přibližně 0,5 mCi radiofarmaka. Před touto aplikací bylo u každé myši Oncomouse® zaznamenáno umístění nádorů a jejich velikost stanovena pomocí kaliperu. Pokusná zvířata byla umístěna před objektiv kamery tak, aby bylo možné pozorovat zadní a přední část těla těchto živočichů. Na matrici 256 x 256 a při dvojnásobném zvětšení byly po dobu 2 hodin v 5-ti minutových intervalech snímány obrázky. Po ukončení experimentu byly

183 • A ·· ·· » • · · A · AAA . A :

• Φ AA t A A získané obrázky vyhodnoceny tím, že byla stanovena velikost nádoru a okolní oblasti na krku pod slinnými žlázami u krkavice.

Tento model může být rovněž použit pro určení účinnosti radiofarmak podle vynálezu, která obsahují nějaký izotop emitující alfa záření, beta záření nebo Augerovy elektrony. Radiofarmaka podle vynálezu jsou aplikována ve vhodných množstvích a jejich kumulace v nádorech může být kvantifikována buď neinvazivně, zobrazením těchto izotopů s využitím detekce současně produkovaného měřitelného gama záření, nebo vyříznutím nádorů a detekcí radioaktivity s využitím standardních metod. Terapeutický účinek radiofarmak podle vynálezu může být stanoven monitorováním rychlosti růstu nádorů u kontrolní skupiny myší a u myší, kterým jsou podávána radiofarmaka podle vynálezu.

Tento model může být rovněž použit pro posouzení vhodnosti použití sloučenin podle vynálezu obsahujících paramagnetické kovy jako kontrastních látek pro MRI. Po aplikaci vhodného množství paramagnetické sloučeniny podle vynálezu může být živočich umístěn do komerčně dostupného přístroje pro MRI a tak může být zobrazen nádor. Účinnost použitých kontrastních látek může být snadno stanovena srovnáním s obrazy získanými ze živočichů, kterým nebyla tato kontrastní látka aplikována.

Tento model může být rovněž použit pro posouzení vhodnosti použití sloučenin podle vynálezu obsahujících těžké kovy jako kontrastních látek pro rentgenové záření. Po aplikaci vhodného množství sloučeniny absorbující rentgenové záření může být živočich umístěn do komerčně dostupného přístroje pro detekci rentgenové záření a tak může být zobrazen nádor. Účinnost použitých kontrastních látek může být snadno stanovena srovnáním s obrazy získanými ze živočichů, kterým nebyla tato kontrastní látka aplikována.

184

» * · • · ·· • · ♦ • 9 9

99

Tento model může být rovněž použit pro posouzení vhodnosti použití sloučenin podle vynálezu zahrnujících mikročástice povrchově aktivní látky obsahující nějaký echogenní plyn jako kontrastních látek pro ultrazvuk. Po aplikaci vhodného množství echogenní sloučeniny mohou být nádory v těle živočicha zobrazeny s využitím ultrazvukové sondy umístěné v blízkosti nádorů. Účinnost použitých kontrastních látek může být snadno stanovena srovnáním s obrazy získanými ze živočichů, kterým nebyla tato kontrastní látka aplikována.

Králičí model využívající Matrigel

Tento model byl upraven na základě modelu používaného pro studium angiogeneze u myší. Matrigel (Becton & Dickinson, USA) je bazální membrána bohatá na laminin, kolagen IV, entaktin, HSPG a další růstové faktory. Po smíchání s růstovými faktory jako například bFGF (500 ng/ml) nebo VEGF (2 pg/ml) a následné subkutánní injekční aplikaci do oblasti břicha myší, tato látka ztuhne do formy gelu a v rozmezí 4 až 8 dnů stimuluje v místě aplikace angiogenezi. U použitého králičího modelu bylo králíkům New Zealand White (2,5 až 3,0 kg) injekčně aplikováno 2,0 ml matrigelu spolu s 1 pg bFGF a 4 pg VEGF. Po sedmi dnech byla injekčně aplikována radiofarmaka podle vynálezu a získány obrazy.

Tento model může být rovněž použit pro určení účinnosti radiofarmak podle vynálezu, která obsahují nějaký izotop emitující alfa záření, beta záření nebo Augerovy elektrony. Radiofarmaka podle vynálezu jsou aplikována ve vhodných množstvích a jejich kumulace místech angiogeneze může být kvantifikována buď neinvazivně, zobrazením těchto izotopů s využitím detekce současně produkovaného měřitelného gama záření, nebo vyříznutím oblastí angiogeneze a detekcí radioaktivity s využitím standardních metod. Terapeutický úči185 ·♦ ·♦ • · · • · ··

nek radiofarmak podle vynálezu může být stanoven monitorováním rychlosti rozšiřování oblastí angiogeneze u kontrolní skupiny králíků a u králíků, kterým jsou podávána radiofarmaka podle vynálezu.

Tento model může být rovněž použit pro posouzení vhodnosti použití sloučenin podle vynálezu obsahujících para-, magnetické kovy jako kontrastních látek pro MRI. Po aplikaci vhodného množství paramagnetické sloučeniny podle vynálezu může být živočich umístěn do komerčně dostupného přístroje pro MRI a tak mohou být zobrazeny oblasti angiogeneze. Účinnost použitých kontrastních látek může být snadno stanovena srovnáním s obrazy získanými ze živočichů, kterým nebyla tato kontrastní látka aplikována.

Tento model může být rovněž použit pro posouzení vhodnosti použití sloučenin podle vynálezu obsahujících těžké kovy jako kontrastních látek pro rentgenové záření. Po aplikaci vhodného množství sloučeniny absorbující rentgenové záření může být živočich umístěn do komerčně dostupného přístroje pro detekci rentgenové záření a tak mohou být zobrazeny oblasti angiogeneze. Účinnost použitých kontrastních látek může být snadno stanovena srovnáním s obrazy získanými ze živočichů, kterým nebyla tato kontrastní látka aplikována.

Tento model může být rovněž použit pro posouzení vhodnosti použití sloučenin podle vynálezu zahrnujících mikročástice povrchově aktivní látky obsahující nějaký echogenní plyn jako kontrastních látek pro ultrazvuk. Po aplikaci vhodného množství echogenní sloučeniny mohou být oblasti angiogeneze v těle živočicha zobrazeny s využitím ultrazvukové sondy umístěné v blízkosti nádorů. Účinnost použitých kontrastních látek může být snadno stanovena srovnáním s obrazy získanými ze živočichů, kterým nebyla tato kontrastní látka aplikována.

186 φφ φφ φφ φ φφ φ φφ φ · φφφ φ φφ φφφφ φφφ φφ • Φφ φ'φφ φ φ φφ φ φφφφ φφ · φφ φφ φφ φφ φφφ φφ φ

Psí model spontánní tvorby nádorů

Dospělým psům se spontánně vytvořenými nádory mléčných žláz byla aplikována směs xylazin (20 mg/kg)/atropin (1 ml/kg). Celkové anestezie bylo následně dosaženo intubací směsí ketamin (5 mg/kg)/diazepam (0,25 mg/kg). Narkóza byla udržována aplikací směsi ketamin (3 mg/kg) /xylazin (6 ^m9/^k9)· Bylo-li to žádoucí, bylo v průběhu experimentu dýchání udržováno pomocí endotracheální trubice (12 cyklů/minuta, 25 ml/kg). Do periferních cév byly zavedeny dva katetry 20G; jeden sloužil k infuzi sloučeniny podle vynálezu, zatímco druhým bylo odebírány vzorky krve. Srdeční frekvence a EKG byly monitorovány kardiotachometrem (Biotech, Grass Quincy, MA) spouštěným elektrokardiogramem generovaným končetinovými svody. Vzorky krve byly obvykle odebírány v 10 minutě (kontrola), po ukončení infuze (1 minuta) , v 15, 30, 60, 90 a 120 minutě. V těchto vzorcích byl stanovován celkový počet krvinek a radioaktivita. Dávka 300 pCi/kg radiofarmaka byla aplikována najednou intravenózně a poté následovalo propláchnutí fyziologickým roztokem. Měřené hodnoty byly zaznamenávány kontinuálně na detektoru (Grass, model 7E) s rychlostí posunu papíru 10 mm/minuta nebo 10 mm/sekunda.

Zobrazování laterálních částí těla pokusných živočichů bylo prováděno po dobu 2 hodin na matrici 256 x 256, bez zvětšení při frekvenci snímání jeden obrázek za pět minut. Kumulace sloučeniny podle vynálezu v oblasti zájmu byla stanovována umístěním známého zdroje záření (20 až 90 pCi) do detekční oblasti. Za účelem sledování zadržování sloučeniny podle vynálezu v nádoru byly rovněž pořízeny obrázky 24 hodin po aplikaci této sloučeniny. Kumulace sloučeniny podle vynálezu je stanovována jako poměr impulzů v oblasti zájmu a celkového počtu impulzů pozorované oblasti a vyná187

	··			··		·♦		•	··
•		*		•	•		•	o ·	• ·	• ·
•		«		··	•			•	• ·
•
•		•	•	•	•		•	•	• ·
	··			··				44 9	• ·	··

sobením známou hodnotou pCi. Výsledkem je hodnota μθί v oblasti zájmu.

Tento model může být rovněž použit pro určení účinnosti radiofarmak podle vynálezu, která obsahují nějaký izotop emitující alfa záření, beta záření nebo Augerovy elektrony. Radiofarmaka podle vynálezu jsou aplikována ve vhodných množstvích a jejich kumulace v nádorech může být kvantifikována buď neinvazivně, zobrazením těchto izotopů s využitím detekce současně produkovaného měřitelného gama záření, nebo vyříznutím nádorů a detekcí radioaktivity s využitím standardních metod. Terapeutický účinek radiofarmak podle vynálezu může být stanoven monitorováním rychlosti růstu nádorů v čase.

Tento model může být rovněž použit pro posouzení vhodnosti použití sloučenin podle vynálezu obsahujících paramagnetické kovy jako kontrastních látek pro MRI. Po aplikaci vhodného množství paramagnetické sloučeniny podle vynálezu může být živočich umístěn do komerčně dostupného přístroje pro MRI a tak může být zobrazen nádor. Účinnost použitých kontrastních látek může být snadno stanovena srovnáním s·obrazy získanými ze živočichů, kterým nebyla tato kontrastní látka aplikována.

Tento model může být rovněž použit pro posouzení vhodnosti použití sloučenin podle vynálezu zahrnujících mikro188 ·· ·· • » · · · 9 ·

9 99 9 9 • >····· • · · · 9 9 · 9 ·

9 9

9

9 částice povrchově aktivní látky obsahující nějaký echogenní plyn jako kontrastních látek pro ultrazvuk. Po aplikaci vhodného množství echogenní sloučeniny mohou být nádory v těle živočicha zobrazeny s využitím ultrazvukové sondy umístěné v blízkosti nádorů. Účinnost použitých kontrastních' látek může být snadno stanovena srovnáním s obrazy získanými ze živočichů, kterým nebyla tato kontrastní látka aplikována.

Je zřejmé, že s využitím výše uvedeným údajů, může být provedeno množství modifikací a obměn tohoto vynálezu. Je tudíž jasné, že provedení vynálezu, jak je definován připojenými patentovými nároky, se může lišit od provedení popsaných v této přihlášce.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1-(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolamino)-12( (o-amino-PEG₃₄oo-a-karbonyl) -Glu- (cyklo (Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys)) ₂) -dodekan-1,12-dion.

1- (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolamino)-12( (<ú-amino-PEG₃4oo-cí-karbonyl) -cyklo(Arg-Gly-Asp-D-PheLys))-dodekan-1,12-dion;

1-(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolamino)-12(cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)-dodekan-1,12-dion;

1. Sloučenina zahrnující směrující část a chelatotvorné činidlo vyznačující se tím, že zmíněná směrující část spojená s chelatotvorným činidlem je peptid nebo peptidomimetikum vážící se na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena, a v této sloučenině jsou mezi směrující částí a chelatotvorným činidlem 0 až 1 spojující skupiny.

2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])D-Asp-Gly-Arg});

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo (N-Me-Arg-Gly-Asp-ATA-D-Lys-(N[ [5-[karbonyl)-2-pyridinyl]diazenido] ) )) ;

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo{Cit-Gly-Asp-D-Phe-Lys ( [2- [ [ [5[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])}); a ^99mTc(tricin)(1,2,4-triazol)(cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Tyr(N[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido]-3-aminopropyl)Val)).

2. Sloučenina podle nároku lvyznačující se tím, že zmíněnou směrující částí je nějaký peptid nebo peptidomimetikum a zmíněný receptor je vybrán ze skupiny zahrnující: EGFR, FGFR, PDGFR, Flk-l/KDR, Flt-1, Tek, Tie, neuropilin-1, endoglin, endosialin, Axl, α_νβ3, «_νβ5ζ α₅βι, οί₄βΐζ οίχβι a α₂β2 a mezi směrující částí a chelatotvorným činidlem je umístěna spojující skupina.

Sloučenina podle nároku 2vyznačující se tím, že zmíněným receptorem je integrin α_νβ₃ a daná sloučenina popsaná vzorcem:

(Q)d-L_n-Ch nebo (QJd-Ln^- (Ch)ď;

kde Q je peptid nezávisle vybraný ze skupiny:

R¹-R² ,/^L\ /^R\. ^κ\ ΐ

L-M'

M'

R³ /

-R⁵

K je nějaká L-aminokyselina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: arginin, citrulin, N-methylarginin, lysin, homolysin, 2aminoethylcystein, δ-Ν-2-imidazolinylornithin, δ-Ν190 • · benzylkarbamoylornithin a kyselinu β-2benzimidazolylacetyl-1,2-diaminopropanovou;

K' je nějaká D-aminokyselina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: arginin, citrulin, N-methylarginin, lysin, homolysin, 2aminoethylcystein, δ-Ν-2-imidazolinylornithin, δ-Nbenzylkarbamoylornithin a kyselinu β-2benzimidazolylacetyl-1,2-diaminopropanovou;

M je kyselina L-asparágová;

M' je kyselina D-asparágová;

R¹ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, L-valin, D-valin, alanin, leucin, isoleucin, norleucin, kyselinu 2-aminobutanovou, kyselinu 2-aminohexanovou, tyrosin, fenylalanin, thienylalanin, fenylglycin, cyklohexylalanin, homofenylalanin, 1-naftylalanin, lysin, serin, ornithin, kyselinu 1,2diaminobutanovou, kyselinu 1,2-diaminopropanovou, cystein, penicilamin a methionin;

R² je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, valin, alanin, leucin, isoleucin, norleucin, kyselinu 2-aminobutanovou, kyselinu 2aminohexanovou, tyrosin, L-fenylalanin, D-fenylalanin, thienylalanin, fenylglycin, bifenylglycin, cyklohexylalanin, homofenylalanin, L-l-naftylalanin, D-l-naftylalanin, lysin, serin, ornithin, kyselinu 1,2-diaminobutanovou, kyselinu 1,2-diaminopropanovou, cystein, penicilamin, methionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

R³ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze

191 • · « • ·· • · « skupiny zahrnující: glycin, D-valin, D-alanin, D-leucin, D-isoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, kyselinu D-2-aminohexanovou, D-tyrosin, D-fenylalanin, Dthienylalanin, D-fenylglycin, D-cyklohexylalanin, Dhomofenylalanin, D-l-naftylalanin, D-lysin, D-serin, Dořnithin, kyselinu D-l,2-diaminobutanovou, kyselinu D1,2-diaminopropanovou, D-cystein, D-penicilamin a Dmethionin;

R⁴ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, D-valin, D-alanin, D-leucin, D-isoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, kyselinu D-2-aminohexanovou, D-tyrosin, D-fenylalanin, Dthienylalanin, D-fenylglycin, D-cyklohexylalanin, Dhomofenylalanin, D-l-naftylalanin, D-lysin, D-serin, Dornithin, kyselinu D-l,2-diaminobutanovou, kyselinu D1,2-diaminopropanovou, D-cystein, D-penicilamin, Dmethionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

R⁵ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k Ln, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, L-valin, L-alanin, L-leucin, L-isoleucin, L-norleucin, kyselinu L-2-aminobutanovou, kyselinu L-2-aminohexanovou, L-tyrosin, L-fenylalanin, Lthienylalanin, L-fenylglycin, L-cyklohexylalanin, Lhomofenylalanin, L-l-naftylalanin, L-lysin, L-serin, Lornithin, kyselinu L-l,2-diaminobutanovou, kyselinu L1,2-diaminopropanovou, L-cystein, L-penicilamin, Lmethionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou; za předpokladu, že v každém Q je jeden z R¹, R², R³, R⁴nebo R⁵ substituován vazbou k Ln, a dále za předpokladu, že jestliže R² je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K je N-methylarginin, dále za předpokladu, že jestliže R⁴je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K a K' jsou N192 • · methylarginin a dále za předpokladu, že jestliže R⁵ je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K je Nmethylarginin;

d je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6,

3 R¹⁰ a C3. až C5 alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 3 R¹⁰, NHC^OJR¹¹, C^OJNHR¹¹, NHC (=O)NHR¹³·, NHR¹¹, R¹¹ a vazbu k Sf;

R¹⁰ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Sfí COOR¹¹, OH, NHR¹¹, SO3H, PÓ₃H, aryl substituovaný 0 až 3 R¹¹, C₃ až C₅ alkyl substituovaný 0 až 1 R¹², Ci až C5 alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 1 R¹² a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹¹;

R¹¹ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, aryl substituovaný 0 až 1 R¹², 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 1 R¹², C3_io cykloalkyl substituovaný 0 až 1 R¹², aminokyselinu substituovanou 0 až 1 R¹² a vazbu k Sf;

R¹² je vazba k S_f;

k je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2;

h je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2;

h^z je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; h'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 a 10;

g' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 a 10;

g je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

4 4 4 4 4 4 4 4 .·.' 9

4 44 444 4 4 4 4 ·4

4 4 44 4 4 4 4 4

4 4 9 9 4 4 4 4 4

99 49 « · 44 9 94 4 lin, Axl, α_νβ₃, α_νβ₅, α₅βι, α₄βι, ο^β], a α₂β₂, a mezi směrující částí a chelatotvomým činidlem je umístěna spojující skupina.

4· 44 «· · (w) cyklo {Lys-Gly-Asp-D-Tyr (Ν- [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl]hydrazono]methyl] -benzensulfonová kyselina] - 3aminopropyl)-Val};

(x) cyklo{Cys (2-aminoethyl)-Gly-Asp-D-Tyr (N-[2-[[ [5[karbonyl] -2-pyridinyl]hydrazono]methyl] -benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val} ;

(y) cyklo{HomoLys-Gly-Asp-D-Tyr (N- [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina] -3aminopropyl)-Val};

(z) cyklo{Orn (d-N-benzylkarbamoyl) -Gly-Asp-D-Tyr(N- [2[ [ [5- [karbonyl] - 2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulf onová kyselina] -3-aminopropyl) -Val} ;

(aa) cykló{Dap (b- (2-benzimidazolylacetyl)) -Gly-Asp-DTyr (N- [2-[[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulf onová kyselina] -3-aminopropyl) -Val};

(bb) cyklo{Orn (d-N-2-imidazolinyl) -Gly-Asp-D-Phe-Lys (N[2- [ [ [5- [karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono]methyl] benzensulfonová kyselina])};

(cc) cyklo{Orn (d-N-benzylkarbamoyl) -Gly-Asp-D-Phe-Lys (N[2- [ [ [5- [karbonyl] - 2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová kyselina])};

(dd) cyklo{Lys-D-Val-D-Tyr (N-[2-[ [ [5-[karbonyl]-2pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina] -3aminopropyl)-D-Asp-Gly};

(ee) cyklo{Orn (d-N-benzylkarbamoyl)-D-Val-D-Tyr (N- [2[ [ [5- [karbonyl] - 2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-D-Asp-Gly}; a (ff) cyklo{0rn(d-N-2-imidazolinyl) -D-Val-D-Tyr(N- [2 - [ [ [5[karbonyl] -2-pyridinyl]hydrazono]methyl] -benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-D-Asp-Gly};

nebo jejich farmaceuticky přijatelnou sůl.

207

4 4 4 4 4 *

4 4 4 4 · 4 ·

4. Sloučenina podle nároku 3vyznačující se tím, že:

L je glycin;

R² je nějaká aminokyselina volitelně substituovaná vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: valin, alanin, leucin, isoleucin, norleucin, kyselinu 2-aminobutanovou, tyrosin, L198 • » • · ·· · * · · ·····»* · ·* ·· · * .··· . * fenylalanin, D-fenylalanin, thienylalanin, fenylglycin, bifenylglycin, cyklohexylalanin, homofenylalanin, L-lnaf tylalanin, D-l-naftylalanin, lysin, ornithin, kyselinu 1, 2-diaminobutanovou, kyselinu 1, 2-diaminopropanovou a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

R³ je nějaká aminokyselina volitelně substituovaná vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: D-valin, D-alanin, D-leucin, Disoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, Dtyrosin, D-fenylalanin, D-fenylglycin, Dcyklohexylalanin, D-homofenylalanin, D-lysin, D-serin, Dornithin, kyselinu D-l, 2-diaminobutanovou a kyselinu D1, 2-diaminopropanovou;

R⁴ je nějaká aminokyselina volitelně substituovaná vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: D-valin, D-alanin, D-leucin, Disoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, Dtyrosin, D-fenylalanin, D-thienylalanin, D-fenylglycin, D-cyklohexylalanin, D-homofenylalanin, D-l-naftylalanin, D-lysin, D-ornithin, kyselinu D-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu D-l, 2-diaminopropanovou a kyselinu 2aminothiazol-4-octovou;

R⁵ je nějaká aminokyselina volitelně substituovaná vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: L-valin, L-alanin, L-leucin, Lisoleucin, L-norleucin, kyselinu L-2-aminobutanovou, Ltyrosin, L-fenylalanin, L-thienylalanin, L-fenylglycin, L-cyklohexylalanin, L-homofenylalanin, L-l-naftylalanin, L-lysin, L-ornithin, kyselinu L-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu L-l, 2-diaminopropanovou a kyselinu 2aminothiazol-4-octovou;

d je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2 a 3;

W je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze

199 • «

I » · · k 9 9 a ·· ·♦ skupiny zahrnující: O, NH, NHC(=O), C(=O)NH, C{=0), C(=O)O, OC(=O), NHC(=S)NH, NHC(=O)NH, S0₂, (OCH₂CH₂)_S, (CH₂CH₂O)_s-, (OCH₂CH₂CH₂) _e-- a (CH₂CH₂CH₂O) _t;

Z je vybrané ze skupiny zahrnující: aryl substituovaný 0 až 1 R¹⁰, C3-10 cykloalkyl substituovaný 0 až 1 R¹⁰ a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 1 R¹⁰;

R⁶, R^6a, R⁷, R^7a, R⁸, R^8a, R⁹ a R^9a jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, =0, C00H, SO3H, Ci až C5 alkyl substituovaný 0 až 1 R¹⁰, aryl substituovaný 0 až 1 R¹⁰, benzyl substituovaný 0 až 1 R¹⁰a Ci až C5 alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 1 R¹⁰, NHC^OjR¹¹, C(=O)NHR¹¹, NHC (=0) NHR¹¹, NHR¹¹, R¹¹ a vazbu k C_h;

R¹⁰ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: COOR¹¹, OH, NHR¹¹, SO3H, aryl substituovaný 0 až 1 R¹¹, 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 1 R¹¹, Cx až C₅ alkyl substituovaný 0 až 1 R¹², Ci až C₅ alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 1 R¹² a vazbu k Ch;

k je číslo vybrané z následujících: 0 nebo 1;

h je číslo vybrané z následujících: 0 nebo 1;

h' je číslo vybrané z následujících: 0 nebo 1;

200 • « s je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; s' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; s'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; t je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5;

A¹, A², A³, A⁴, A⁵, A⁶, A⁷ a A⁸ jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: NR¹³, NR¹³R¹⁴, S, SH, S(Pg), OH a vazbu k L_n;

E je nějaká vazba, CH nebo spojující skupina v každém jednotlivém případu nezávislé zvolená ze skupiny zahrnující: C_x až Cio alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, C₃-io cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷ a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4’heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁷;

R¹³ a R¹⁴ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k L_n, atom vodíku, Cx až C₁₀ alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a 0 a substituované 0 až 3 R¹⁷ a elektron za předpokladu, že jestliže buď R¹³ nebo R¹⁴je elektron, pak druhý z této dvojice je rovněž elektron; alternativně R¹³ a R¹⁴ společně vytvářejí =C(R²⁰) (R²¹) ;

R¹⁷ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Ln, =0, F, Cl, Br, I, -CF3/ CN, -CO2R¹⁸, -C(=O)R¹⁸, -C(=O)N(R¹⁸)2, -CH₂OR¹⁸, -OC(=O)R¹⁸, -OC (=0) OŘ^18a, -OR¹⁸, -OC(=O)N(R¹⁸)2, -NR¹⁹C(=O)R¹⁸, NR¹⁹C (=0) OR^18a, -NR¹⁹C(=O)N(R¹⁸)2, -NR¹⁹SO2N(R¹⁸)2, NR¹⁹SO2R^18a, -SO3H, -SO₂R^18a, -S(=0)R^18a, -SO2N(R¹⁸)2, -N(R¹⁸)2/ NHC (=S)NHR¹⁸, =N0R¹⁸, -C (=O)NHNR¹⁸R^18a, -OCH2CO₂H a 2- (1morfolino)ethoxy;

R¹⁸, R^18a a R¹⁹ jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k L_n, H a Cx-C₆ alkyl;

201 ·· ·· • « · · • · ·· • · · · • · · · ·· ·· ·· · ♦ · ♦ ·

Λ-, ··

R²⁰ a R²¹ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, Ci až C5 alkyl, -CO2R²⁵, C2-C₅ 1-alken substituovaný 0 až 3 R²³, C₂-C₅ 1-alkin substituovaný 0 až 3 R²³, aryl substituovaný 0 až 3 R²³ a nesaturovaný 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a 0 a substituovaný 0 až 3 R²³; alternativně vytvářejí R²⁰ a R²¹ spolu s divalentním uhlíkovým radikálem, ke kterému jsou připojeny, strukturu:

R²² a R²³ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H a R²⁴;

R²⁴ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: -CO2R²⁵, -C (=0) N (R²⁵) 2,-CH₂OR²⁵, OC(=O)R²⁵, -OR²⁵, -SO3H, -N(R²⁵)2 a -OCH₂CO₂H; a R²⁵ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: atom vodíku a C_x až C₃ alkyl.

5. Sloučenina podle nároku 4vyznačující se t í m, ž e:

Q je peptid vybraný ze skupiny:

\ r \ r

R¹-R² L-M

202 ·· ·· ·· • · · · · · ·

6, 7, 8, 9 a 10;

ť je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6,

6, 7, 8, 9 a 10;

g''' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

6. Sloučenina podle nároku 3vyznačující se tím, že tato sloučenina je vybraná ze skupiny zahrnující:

(a) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr (N-[2-[ [ [5-[karbonyl]-2pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina] -3aminopropyl)-Val};

(b) cyklo {Arg-Gly-Asp-D-Tyr ( (N- [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina] -18amino-14-aza-4,7,10-oxy-15-oxo-oktadekanoyl) -3aminopropyl)-Val};

(c) [2 - [ [ [5- [karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] benzensulfonová kyselina]-Glu(cyklo{D-Tyr(3-aminopropyl)Val-Arg-Gly-Asp} ) -cyklo{D-Tyr (3-aminopropyl) -Val-Arg-GlyAsp} ;

(d) cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina] ) } ;

(e) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina] ) } ;

(f) [2-[[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono] methyl]benzensulfonová kyselina] -Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-DPhe})-cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe} ;

(g) [2-[[ [5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina] -Phe-Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-AspD-Phe})-cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe} ;

(h) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Nal-Lys ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina] ) } ;

(i) [2- [[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina] -Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D205

AA A« • A A A • AAA

A A A · A • A A A • A «·

AA

A A

A· ·

Nal})-cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal};

(j) cyklo{Arg-Gly-Asp-Lys([2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])-DVal};

(k) [2-[[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina]-Glu(cyklo{Lys-D-Val-Arg-GlyAsp} ) -cyklo{Lys-D-Val-Arg-Gly-Asp} ;

(l) {cyklo(Arg-D-Val-D-Tyr(N-[2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]-3aminopropyl)-D-Asp-Gly};

(m) cyklo{D-Lys([2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])-DPhe-D-Asp-Gly-Arg};

(n) [2-[[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina]-Glu(cyklo{D-Lys-D-Phe-D-AspGly-Arg})-cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg};

(o) cyklo{D-Phe-D-Lys([2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])-DAsp-Gly-Arg};

(p) cyklo{N-Me-Arg-Gly-Asp-ATA-D-Lys-([2-[[[5-[karbonyl]2-pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina] ) } ;

(q) cyklo{Cit-Gly-Asp-D-Phe-Lys([2-[[[5-[karbonyl]-2pyridinyl]hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina])};

(s) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(DTPA)};

(t) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys}₂ (DTPA) ;

(u) cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Tyr(N-DTPA-3-aminopropyl)-Val};

(v) cyklo{0rn(d-N-2-imidazolinyl)-Gly-Asp-D-Tyr(N-[2[[[5-[karbonyl]-2-pyridinyl]hydrazono]methyl]benzensulfonová kyselina]-3-aminopropyl)-Val};

206 • 4 44 44 • 4 4 4 9 * 4 • 4 44 4 4

6, 7, 8, 9 a 10;

194

A A · ·

A A A · • ♦ ··

AAAA

A· AA t je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 a 10;

ť je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9 a 10;

C_h je část vážící kov popsaná vzorcem vybraným ze skupiny:

E je nějaká vazba, CH nebo spojující skupina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: Ci až Cio alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, C3-io cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, heterocyklo-Ci-10 alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, kde zmíněnou heterocyklickou skupinou je 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O, C6-i₀ aryl-Cx-io alkyl- substituovaný 0 až 3 R¹⁷, Ci-i₀ alkyl-C₆-i₀ aryl- substituovaný 0 až 3 R¹⁷ a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze

195 <·· » ·

I »

6, 7, 8, 9 a 10;

s je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6,

6, 7, 8, 9 a 10;

g ' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

7, 8, 9 a 10;

219 • » 9 .

7. Souprava (kit) vyznačující se tím, že tato souprava zahrnuje sloučeninu podle nároku 3 nebo nějakou její farmaceuticky přijatelnou sůl a nějaký farmaceuticky přijatelný nosič.

7, 8, 9 a 10;

s' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 a 10;

s'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

7, 8, 9 a 10;

L_n je spojující skupina popsaná vzorcem:

(CR⁶R⁷)g- (W)h- (CR^6aR^7a)g- (Z)_k- (W)_h-- (CR⁸R⁹)g~- (W)h--(CR^8aR^9a)g---, za předpokladu, že g+h+g'+k+h'+g''+h''+g''' se nerovná nule;

W je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: O, S, NH, NHC(=O), C(=O)NH, C(=O), C(=O)O, OČ(=O), NHC(=S)NH, NHC(=O)NH, SO₂, (OCH₂CH₂)_S, (CH₂CH₂O)_s-, (OCH₂CH₂CH₂)_s--, (CH₂CH₂CH₂O) _t a (aa)_r; aa je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená aminokyselina;

Z je vybrané ze skupiny zahrnující: aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, C₃-io cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰ a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁰;

R⁶, R^6a, R⁷, R^7a, R⁸, R^8a, R⁹ a R^9a jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, =0, COOH, SO3H, PO3H, Ci až C5 alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, benzyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰ a Ci až C5 alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 3 R¹⁰, NHC(=0)R^1:L, C(=0)NHR¹¹, NHC (=0) NHR¹¹, NHR¹¹, R¹¹ a vazbu k C_h;

R¹⁰ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Ch, COOR¹¹, OH, NHR¹¹, SO3H, PO₃H, aryl substituovaný 0 až 3 R¹¹, C_x až C₅ alkyl substituovaný 0 až 1 R¹², Ci až C5 alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 1 R¹² a 5 až 10-ti členný heterocyklický

193 • · systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené že skupiny N, S a 0 a substituované 0 až 3 R¹¹;

R¹¹ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, aryl substituovaný 0 až 1 R¹², 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 1 R¹², C3.10 cykloalkyl substituovaný 0 až 1 R¹², polyalkylenglykoi substituovaný 0 až 1 R¹², karbohydrát substituovaný 0 až 1 R¹², cyklodextrin substituovaný 0 až 1 R¹², aminokyselinu substituovanou 0 až 1 R¹², polykarboxyalkyl substituovaný 0 až 1 R¹², polyazaalkyl substituovaný 0 až 1 R¹², peptid substituovaný 0 až 1 R¹², kde zmíněný peptid obsahuje 2 až 10 aminokyselin a vazbu k Ch;

R¹² je vazba k Ch;

k je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2;

h je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2;

h' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; h'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 a 10;

g' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 a 10;

g'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5,

8. Souprava (kit) podle nároku 7vyznačující se tím, že tato souprava dále zahrnuje jeden nebo více pomocných ligandů a nějakou redukující látku.

9 9 9 9 9 99 . - 9 9 9 9 alanin, fenylglycin, cyklohexylalanin, homofenylalanin, 1-naftylalanin, lysin, serin, ornithin, kyselinu 1, 2diaminobutanovou, kyselinu 1, 2-diaminopropanovou, cystein, penicilamin a methionin;

R³ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, D-valin, D-alanin, D-leucin, D-isoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, kyselinu D-2-aminohexanovou, D-tyrosin, D-fenylalanin, Dthienylalanin, D-fenylglycin, D-cyklohexylalanin, Dhomofenylalanin, D-l-naftylalanin, D-lysin, D-serin, Dornithin, kyselinu D-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu D1, 2-diaminopropanovou, D-cystein, D-penicilamin a Dmethionin;

R⁴ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, D-valin, D-alanin, D-leucin, D-isoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, kyselinu D-2-aminohexanovou, D-tyrosin, D-fenylalanin, Dthienylalanin, D-fenylglycin, D-cyklohexylalanin, Dhomofenylalanin, D-l-naftylalanin, D-lysin, D-serin, Dornithin, kyselinu D-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu D1, 2-diaminopropanovou, D-cystein, D-penicilamin, D221

A · • AA A · A AA A A A • A A· AAA AA

A AA AAA A · A A '' A methionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

R⁵ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k Ln/ v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, L-valin, L-alanin, L-leucin, L-isoleucin, L-norleucin, kyselinu L-2-aminobutanovou, kyselinu L-2-aminohexanovou, L-tyrosin, L-fenylalanin, Lthienylalanín, L-fenylglycin, L-cyklohexylalanin, Lhomofenylalanin, L-l-naftylalanin, L-lysin, L-serin, Lornithin, kyselinu L-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu L1, 2-diaminopropanovou, L-cystein, L-penicilamin, Lmethionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou; za předpokladu, že v každém Q je jeden z R¹, R², R³, R⁴ a R⁵ substituován vazbou k Ln, a dále za předpokladu, že jestliže R² je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K je N-methylarginin, dále za předpokladu, že jestliže R⁴ je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K a K' jsou Nmethylarginin a dále za předpokladu, že jestliže R⁵ je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K je Nmethylarginin;

S_f je povrchově aktivní látka, která je buď lipidové povahy nebo sloučenina popsaná vzorcem: £*-^10

A?

A⁹ je OR²⁷;

A¹⁰ je OR²⁷;

R²⁷ je C(=O)Ci-i₅ alkyl;

E¹ je Ci-4 alkylen substituovaný 1 až 3 R²⁸;

R²⁸ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: R³⁰, -PO3H-R³⁰, =0, -CO2R²⁹, -C(=O)R²⁹, -CH2OR²⁹, -OR²⁹ a Cx až C_s alkyl;

R²⁹ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: R³⁰, H, Ci až Cg alkyl, fenyl a benzyl ;

R³⁰ je vazba k L_n;

222

L_n je spojující skupina popsaná vzorcem:

(CR⁶R⁷)g- (W)h- (CR^6aR^7a)g-- (Z)_k- (W)_h-- (CR⁸R⁹)g^- (W)h~(CR^8aR^9a)g---,

W je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: O, S, NH, NHC(=O), C(=O)NH, C(=0), C(=0)0, 0C(=0), NHC(=S)NH, NHC(=O)NH, S0_2ř (OCH₂CH₂) _2o._2Oo, (CH₂CH₂O) 20-200/ (OCH₂CH₂CH₂) 20-200, (CH₂CH₂CH₂O) 20.200 a (aa)_t-; aa je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená aminokyselina;

Z je vybrané ze skupiny zahrnující: aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, C₃.₁₀ cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰ a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁰;

C3. až C₅ alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰ a C₃ až C₅ alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 3 R¹⁰ a vazbu k Sf;

R¹⁰ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Sf, COOR¹¹, OH, NHR¹¹, C3 až C₅alkyl substituovaný 0 až 1 R¹² a C₃ až C₅ alkyloxy sloučeninu substituovanou 0 až 1 R¹²;

R¹¹ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, aryl substituovaný 0 až 1 R¹², C₃._locykloalkyl substituovaný 0 až 1 R¹², aminokyselinu substituovanou 0 až 1 R¹² a vazbu k Sf;

R¹² je vazba k Sf;

k je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2;

h je číslo vybrané z následujících: 0, 1 a 2;

h' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; h'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5;

223

99 99 • 9 9 9 9 • · · 9 9 9 99 ♦ · 9 • · ·· 9 9 9 9 ’ ..r 99 9 9 9 9 9 9 9 ' ·· - .9

g'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g''' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; s je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; s' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; s'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; t je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; ť je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; a nějakou její farmaceuticky přijatelnou sůl.

9 9 99 a nějakou její farmaceuticky přijatelnou sůl.

9 9 9 9 9 9 9 9 skupina.

9 9 9 · 9 «9 9 9

9 9 9 9 9.9 9 > 4 » ♦ * 99 99 -9 9·'·'··· -99 «· (DOTA-⁹⁰Y) -Glu(cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}) -cyklofLysArg-Gly-Asp-D-Phe};

9 9 9 9 9 9 9 9 9' 9 9 9

9 99 9*9 9 9 99 9 9 • 999 99 9 99 9

99 99 99 999 99 *«· latotvorným činidlem je umístěna spojující skupina.

9 99 9 9 999 « » 9

9· *♦ 99 9 99

9 4 4 9 4 4 4 9 4 9 4

9. Souprava (kit) podle nároku 8vyznačuj ící se tím, že zmíněnými pomocnými ligandy jsou tricin a TPPTS.

9 4 4 · · * : ' ·· ·· ··'·-'·

R² je L-fenylalanin, D-fenylalanin, D-l-naftylalanin, kyselina 2-aminothiazol-4-octová, L-lysin volitelně substitúovaný na ε aminoskupině vazbou k L_n nebo tyrosin volitelně substituovaný na hydroxy skupině vazbou k L_n;

za předpokladu, že v každém Q je jeden z R¹ nebo R² substituován vazbou k L_n, a dále za předpokladu, že jestliže R² je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K je Nmethylarginin;

d j e 1 nebo 2;

W je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: NHC(=O), C(=O)NH, C(=0), (CH₂CH₂O)_S- a (CH₂CH₂CH₂O) _t ;

R⁶, R^6a, R⁷, R^7a, R⁸, R^8a, R⁹ a R^9a jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, NHC(=O)R¹¹ a vazbu k Ch;

k j e 0;

h'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2 a 3; g je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4a5; g'' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; g'' ' je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4 a 5; s' jel nebo 2;

t j e 1 nebo 2;

203

Ch je

A¹ je vybrané ze skupiny zahrnující: OH a vazbu k L_n;

A², A⁴ a A⁶ jsou N;

A³, A⁵ a A⁸ jsou OH;

A⁷ je vazba k L_n nebo NH-vazba k L_n;

E je nějaký C₂ alkyl substituovaný 0 až 1 R¹⁷;

R¹⁷ je =0;

Ε——λ2 alternativně, Ch je

A¹ je NH₂ nebo N=C(R²⁰) (R²¹) ;

E je nějaké vazba;

A² je NHR¹³;

R¹⁷ buď vazba k L_n, C(=O)NHR¹⁸ nebo C(=O)R¹⁸;

R¹⁸ je vazba k L_n;

R²⁴ je zvolené ze skupiny zahrnující: -CO2R²⁵, -OR²⁵, -SO3H a -N(R²⁵)₂;

alternativně, Ch je

E—A³ /^E

A⁷

A¹, A², A³ a A⁴ jsou N;

204 . · · · · · ·· · · ···· »»· ·· . · · · · · · · · · * ···. ·. · · · ·

.. ·· ·· ··· ··

A⁵, A⁶ a A⁸ jsou OH;

A⁷ je vazba k L_n;

E je C₂ alkyl substituovaný 0 až 1 R¹⁷; a R¹⁷ je =0.

9 9 44 · · • · · · · · ·

9 9 skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁷;

R¹³ a R¹⁴ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Ln, atom vodíku, C3 až C10 alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, Οχ.₁₀ cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, heterocyklo-Ci-i0 alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, kde zmíněnou heterocyklickou skupinou je 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O, C6-io aryl-Ci-io alkyl- substituovaný 0 až 3 R¹⁷, C!._1O alkyl-C₆-io aryl- substituovaný 0 až 3 R¹⁷, 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁷a elektron za předpokladu, že jestliže buď R¹³ nebo R¹⁴je elektron, pak druhý z této dvojice je rovněž elektron; nebo R¹³ a R¹⁴ společně vytvářejí =C(R²⁰) (R²¹) ;

R¹⁵ a R¹⁶ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Ln, -OH, C3 až Ci0 alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, C3_i₀ cykloalkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, heterocyklo-Ci-io alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁷, kde zmíněnou heterocyklickou skupinou je 5 až 10ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O, C6.i0 aryl-Ciio alkyl- substituovaný 0 až 3 R¹⁷, Ci.10 alkyl-C₆-io arylsubstituovaný 0 až 3 R¹⁷ a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O a substituované 0 až 3 R¹⁷;

R¹⁷ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k Ln, =0, F, Cl, Br, I, -CF3, CN, -CO2R¹⁸, -C(=O)R¹⁸, -C(=O)N(R¹⁸)2, -CHO, -CH₂OR¹⁸, OC(=O)R¹⁸, -OC (=0) OR^18a, -OR¹⁸, -OC (=0) N (R¹⁸) 2, NR¹⁹C(=0)R¹⁸, -NR¹⁹C (=0) 0R^18a, -NR¹⁹C(=O)N(R¹⁸)2, NR¹⁹SO2N(R¹⁸)2, -NR¹⁹SO2R^18a, -SO3H, -SO₂R^18a, -SR¹⁸, S(=O)R^18a, -SO2N(R¹⁸)2, -N(R¹⁸)2, -NHC(=S)NHR¹⁸, =N0R¹⁸, NO2,

196 • ·

-C (=0) NHOR¹⁸, -C(=O)NHNR¹⁸R^18a, -OCH₂CO₂H, 2-(lmorfolino)ethoxy, Ci-C₅ alkyl, C₂-C₄ alkenyl, C₃-C₆ cykloalkyl, C₃-C₆ cykloalkylmetyl, C₂-C₆ alkyloxyalkyl, aryl substituovaný 0 až 2 R¹⁸ a 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O;

R¹⁸, R^18a a R¹⁹ jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: vazbu k L_n, H, Ci-C₆ alkyl, fenyl, benzyl, Cq-Cs alkyloxy, halid, nitro, kyano a trifluormethyl;

Pg je chránící skupina thiolu;

R²⁰ a R²¹ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, Co. až Cio alkyl, -CN, -CO2R²⁵, -C(=O)R²⁵, -C (=0) N (R²⁵) 2, C₂Cio 1-alken substituovaný 0 až 3 R²³, C2-C10 1-alkin substituovaný 0 až 3 R²³, aryl substituovaný 0 až 3 R²³, nesaturovaný 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a 0 a substituovaný 0 až 3 R²³ a nesaturovaný C3.₁₀ karbocyklus substituovaný 0 až 3 R²³;

n

R²² a R²³ jsou nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, R²⁴, Cj-Cío alkyl substituovaný 0 až 3 R²⁴, C2-C10 alkenyl substituovaný 0 až 3 R²⁴, C2-Ci₀ alkinyl substituovaný 0 až 3 R²⁴, aryl substituovaný 0 až 3 R²⁴, 5 až 10-ti členný heterocyklický systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a 0 a substituovaný 0 až 3 R²⁴ a C₃_io karbocyklus substituovaný 0 až 3 R²⁴;

197 ·« • ·

99 · alternativně vytvářejí R²² a R²³ kondenzovaný aromatický nebo 5 až 10-ti členný heterocyklický kruhový systém obsahující 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze skupiny N, S a O;

a a b označují pozice možného výskytu dvojných vazeb a n je 0 nebo 1;

R²⁴ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: =0, F, Cl, Br, I, -CF3, -CN, -CO2R²⁵, -C(=O)R²⁵, -C(=O)N(R²⁵)2, -N(R²⁵)3⁺, -CH2OR²⁵, -OC(=O)R²⁵, OC(=O)OR^25a, -OR²⁵, -OC(=O)N(R²⁵)2, -NR²⁶C (=0) R²⁵ , NR²⁶C (=0) OR^25a, -NR²⁶C(=O)N(R²⁵)2, -NR²⁶SO2N(R²⁵)2í NR²⁶SO2R^25a, -SO3H, -SO₂R^25a, -SR²⁵, -S(=0)R^25a, -SO2N(R²⁵)2, N(R²⁵)2, =NOR²⁵, -C(=O)NHOR²⁵, -OCH2CO₂H a 2-(lmorfolino)ethoxy; a

R²⁵, R^25a a R²⁶ jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: atom vodíku a C_x až C_e alkyl;

a nějakou její farmaceuticky přijatelnou sůl.

10. Souprava (kit) podle nároku 9vyznačuj ící se tím, že redukující látkou je cín(II) .

11. Diagnostický nebo terapeutický metalofarmakon vyznačující se tím, že tento metalofarmakon zahrnuje: nějaký kov, chelatotvorné činidlo schopné chelatovat daný kov a směrující část, kde tato směrující část navázaná na zmíněné chelatotvorné činidlo je peptid nebo peptidomimetikum a váže se na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena, a v této sloučenině jsou směrující část a chelatotvorné činidlo spojeny 0 až 1 spojující skupinou.

12. Přípravek podle nároku 11 vyznačující se tím, že tímto přípravkem je diagnostický radiofarmakon, zmíněným kovem je radioizotop vybraný ze skupiny: 99m_Tc, 95_Tc, 62^, 64^, 67_{Qa &} 68_{β3; směru} j _ící částí je nějaký peptid nebo peptidomimetikum a zmíněný receptor je vybrán ze skupiny zahrnující: EGFR, FGFR, PDGFR, Flkl/KDR, Flt-1, Tek, Tie, neuropilin-1, endoglin, endosia208 ·· ·· ·· · ·· • · · · · · · · ··· • » ·· · · · 4 9

13. Přípravek podle nároku 12 vyznačující se t'í m, že zmíněnou směrující částí je nějaký cyklický pentapeptid a receptorem je α_νβ3·

14. Přípravek podle nároku 13 vyznačuj ící se tím, že zmíněným radioizotopem je ^99mTc nebo ⁹⁵Tc, a radiofarmakon dále obsahuje nějaký první pomocný ligand a nějaký druhý pomocný ligand schopný tento radiofarmakon stabilizovat.

15. Přípravek podle nároku 14 vyznačující se tím, že zmíněným radioizotopem je ^99mTc.

16. Přípravek podle nároku 15 vyznačující se tím, že tento radiofarmakon je vybrán ze skupiny zahrnující:

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Tyr(N-[ [5[karbonyl] -2-pyridinyl]diazenido] -3-aminopropyl) -Val) j ;

^99mTc (tricin) (TPPMS) (cyklo(Arg-D-Val-D-Tyr(N-[[5[karbonyl] -2-pyridinyl] diazenido] -3-aminopropyl) -D-AspGly));

^99mTc (tricin) (TPPDS) (cyklo(Arg-D-Val-D-Tyr(N-[[5[karbonyl] -2-pyridinyl] diazenido] -3-aminopropyl) -D-AspGly));

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo (Arg-D-Val-D-Tyr (N-[ [5[karbonyl] -2-pyridinyl] diazenido] -3-aminopropyl) -D-AspGly));

^99raTc (tricin) (TPPTS) (cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (N-[ [5[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido])));

209 t :: :

· »» ^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys (N- [ [5[karbonyl]-2-pyridinyl]diazenido]))) ;

^99mTc (tricin) (TPPTS) ([2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]Phe-Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}) -cyklo{Lys-Arg-GlyAsp-D-Phe});

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo{Arg-Gly-Asp-D-Nal-Lys ( [2- [ [ [5[karbonyl] -2-pyridinyl] hydrazono] methyl] -benzensulfonová kyselina])});

^99mTc (tricin) (TPPTS) ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] hydrazono]methyl] -benzensulfonová kyselina] Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Nal}) -cyklo{Lys-Arg-Gly-AspD-Nal});

^99raTc(tricin)(TPPTS)(cyklo(Arg-Gly-Asp-D-Tyr((N-[[5[karbonyl]-2-pyridinyl] diazenido]-18-amino-14-aza-4,7,10oxy-15-oxo-oktadekanoyl) -3-aminopropyl)-Val)) ;

^99mTc (tricin) (TPPTS) (N- [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] diazenido] -Glu (O-cyklo (Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe) ) O-cyklo(Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe));

^99mTc (tricin) (TPPTS) (N- [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] diazenido] -Glu (O-cyklo (D-Tyr (3-aminopropyl) Val-Arg-Gly-Asp)) -O-cyklo(D-Tyr(3-aminopropyl) -Val-ArgGly-Asp) ) ;

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo (Arg-Gly-Asp-Lys (N- [ [5[karbonyl]-2-pyridinyl] diazenido])-D-Val));

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo{D-Lys ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] hydrazono]methyl] -benzensulfonová kyselina]) -DPhe-D-Asp-Gly-Arg});

^99mTc (tricin) (TPPTS) ( [2- [ [ [5- [karbonyl] -2pyridinyl] hydrazono]methyl]-benzensulfonová kyselina]Glu(cyklo{D-Lys-D-Phe-D-Asp-Gly-Arg}) -cyklo{D-Lys-D-PheD-Asp-Gly-Arg});

^99mTc (tricin) (TPPTS) (cyklo{D-Phe-D-Lys ( [2- [ [ [5- [karbonyl] 210

17. Přípravek podle nároku 13 vyznačující se tím, že zmíněným radioizotopem je ¹¹¹In.

18. Přípravek podle nároku 17 vyznačující se tím, že tento radiofarmakon je vybrán ze skupiny zahrnuj ící:

(DOTA-^i;L1In) -Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe}) -cyklo{LysArg-Gly-Asp-D-Phe};

cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (DTPA-^i:llIn)) ; a cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) ₂ (DTPA-^11:LIn) .

19. Přípravek podle nároku 11 vyznačující se tím, že tímto přípravkem je terapeutický radiofarmakon, zmíněným kovem je radioizotop vybraný ze skupíny^1B6Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu, ¹⁴⁹Pm, ⁹⁰Y, ²¹²Bí, ¹⁰³Pd, ¹⁰⁹Pd, ^1S9Gd, ¹⁴°La, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁶⁵Dy, ¹⁶⁶Dy, ⁶⁷Cu, ^10SRh, ^1:L1Ag, a ¹⁹²Ir; směrující částí je nějaký peptid nebo peptidomimetikum a zmíněný receptor je vybrán ze Skupiny zahrnující: EGFR, FGFR, PDGFR, Flk-l/KDR, Flt-1, Tek, Tie, neuropilin-1, endoglin, endosialin, Axl, α_νβ₃, α_νβ₅, «δβΐζ «ίβΐζ «ιβι a οί₂&2» a mezi směrující částí a che211

20-200 t (OCH₂CH₂CH₂) 20-200, (CH₂CH₂CH₂O) ₂o-₂oo ^a (aa)_t-; aa je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená aminokyselina;

R⁶, R^6a, R⁷, R^7a, R⁸, R^8a, R⁹ a R^9a jsou v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: H, =0, COOH, SO₃H, PO₃H, C_x až C_s alkyl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, aryl substituovaný 0 až 3 R¹⁰, benzyl substituovaný 0 až

218

20. Přípravek podle nároku 19 vyznačující se tím, že zmíněnou směrující částí je nějaký cyklický pentapeptid a receptorem je α_νβ₃.

21. Přípravek podle nároku 20 vyznačující se tím, že zmíněným radioizotopem je ¹⁵³Sm.

22. Přípravek podle nároku 21 vyznačuj ící se tím, že tento radiofarmakon je vybrán ze skupiny zahrnuj ící:

cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (DTPA-¹⁵³Sm) ) ;

cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) ₂ (DTPA-¹⁵³Sm) ; a cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Tyr (N-DTPA (¹⁵³Sm) -3-aminopropyl) -Val) .

23. Přípravek podle nároku 20 vyznačující se tím, že zmíněným radioizotopem je ¹⁷⁷Lu.

24. Přípravek podle nároku 23 vyznačující se tím, že tento radiofarmakon je vybrán ze skupiny zahrnující:

cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (DTPA-¹⁷⁷Lu) ) ;

(DOTA-¹⁷⁷Lu) -Glu (cyklo{Lys-Arg-Gly-Asp-D-Phe} ) -cyklo{LysArg-Gly-Asp-D-Phe};

cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) ₂ (DTPA-¹⁷⁷Lu) ; a cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Tyr (N-DTPA (¹⁷⁷Lu) -3-aminopropyl) -Val) .

25. Přípravek podle nároku 20 vyznačující se tím, že zmíněným radioizotopem je ⁹⁰Y.

26. Přípravek podle nároku 23 vyznačující se tím, že tímto radiofarmakonem je:

212 ♦ · ·♦ ·· · «· * • · · 4 · · · · · 9 9 9 • ·«· · 9 9 9 9 9

27. Přípravek podle nároku 11 vyznačující se tím, že tímto metalofarmakem je kontrastní látka přo MRI, zmíněným kovem je iont paramagnetického kovu vybraný ze skupiny: Gd(III), Dy(III), Fe(IIl) a Mn(II); směrující částí je nějaký peptid nebo peptidomimetikum a zmíněný receptor je vybrán ze skupiny zahrnující: EGFR,

FGFR, PDGFR, Flk-l/KDR, Flt-1, Tek, Tie, neuropilin-1, endoglin, endosialin, Axl, α_νβ₃, α_νβ₅, α₅βΐζ α₄βι, αιβι a α₂β₂, a mezi směrující částí a chelatotvorným činidlem je umístěna spojující skupina.

28. Přípravek podle nároku 27 vyznačující se tím, že zmíněnou směrující částí je nějaký cyklický pentapeptid a receptorem je α_νβ₃.

29. Přípravek podle nároku 28 vyznačující se tím, že zmíněným iontem kovu je Gd(III).

30. Přípravek podle nároku 29vyznačující se tím, že zmíněnou kontrastní látkou je:

cyklo (Arg-Gly-Asp-D-Tyr (N-DTPA (Gd (III)) -3-aminopropyl) Val) .

31. Přípravek podle nároku 11 vyznačující se tím, že tímto metalofarmakem je kontrastní látka pro rentgenové záření, zmíněný kov je vybrán ze skupiny:

Re, Sm, Ho, Lu, Pm, Y, Bi, Pd, Gd, La, Au, Au, Yb, Dy,

Cu, Rh, Ag a Ir; směrující částí je nějaký cyklický pentapeptid, zmíněným receptorem je α_νβ₃, a mezi směrující částí a chelatotvorným činidlem je umístěna spojující

213 ·* 99 · ··

32. Přípravek podle nároku 11 vyznačující se tím, že tento přípravek je použit k léčbě revmatické arthritidy.

33. Přípravek podle nároku 11 v y z n a č u j í c í se tím, že tento přípravek je použit k léčbě rakoviny.

34. Přípravek podle nároku 11 vyznačující se tím, že tento přípravek je použit k diagnostickému zobrazování tvorby nových cév.

35. Přípravek podle nároku 12 vyznačující se tím, že tento přípravek je použit k diagnostickému zobrazování rakoviny planární gama scintigrafií nebo SPÉCT gama scintigrafií nebo pozitronovou emisní tomografií .

36. Přípravek podle nároku 27 vyznačující se t í m, že tento přípravek je použit k diagnostickému zobrazování rakoviny magnetickou rezonancí.

37. Přípravek podle nároku 31 vyznačující se tím, že tento přípravek je použit k diagnostickému zobrazování rakoviny rentgenovou počítačovou tomografií.

38. Sloučenina zahrnující směrující část a povrchově aktivní látku vyznačující se tím, že zmíněná směrující část spojená s povrchově aktivní látkou je peptid nebo peptidomimetikum vážící se na nějaký receptor, jehož exprese je během angiogeneze zvýšena, a v této sloučenině jsou mezi směrující částí a povrchově aktivní

214 • · • ·> · látkou 0 až 1 spojující skupiny.

39. Sloučenina podle nároku 38 vyznačuj ící se tím, že zmíněnou směrující částí je nějaký peptid nebo peptidomimetikum a zmíněný receptor je vybrán ze skupiny zahrnující: EGFR, FGFR, PDGFR, Flk-l/KDR, Flt-1, Tek, Tie, neuropilin-1, endoglin, endosialin, Áxl, α_νβ₃, «νβδ, «δβΐζ α₄βι, αιβι a α₂β₂ a mezi směrující částí a povrchově aktivní látkou je umístěna spojující skupina.

40. Sloučenina podle nároku 39 vyznačující se tím, že zmíněným receptorem je integrin α_νβ₃ a daná sloučenina popsaná vzorcem:

(Q)d-Ln-Sf kde Q je cyklický pentapeptid nezávisle vybraný ze skupiny:

K je nějaká L-aminokyselina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: arginin, citrulin, N-methylarginin, lysin, homolysin, 2aminoethylcystein, δ-Ν-2-imidazolinylornithin, δ-Νbenzylkarbamoylornithin a kyselinu β-2benzimidazolylacetyl-1, 2-diaminopropanovou;

K' je nějaká D-aminokyselina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: arginin, citrulin, N-methylarginin, lysin, homolysin, 2aminoethylcystein, δ-Ν-2-imidazolinylornithin, δ-Νbenzylkarbamoylornithin a kyselinu β-2benz imidazolylacetyl -1, 2 - diaminopropanovou ;

215

Β Β

M je kyselina L-asparágová;

M je kyselina D-asparágová;

R¹ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, L-valin, D-valin, alanin, leucin, isoleucin, norleucin, kyselinu 2-aminobutanovou, kyselinu 2-aminohexanovou, tyrosin, fenylalanin, thienylalanin, fenylglycin, cyklohexylalanin, homofenylalanin, 1-naftylalanin, lysin, serin, ornithin, kyselinu 1, 2diaminobutanovou, kyselinu 1, 2-diaminopropanovou, cystein, penicilamin a methionin;

R³ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, D-valin, D-alanin, D-leucin, D-isoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, kyselinu D-2-aminohexanovou, D-tyrosin, D-fenylalanin, Dthienylalanin, D-fenylglycin, D-cyklohexylalanin, Dhomofenylalanin, D-l-naftylalanin, D-lysin, D-serin, Dornithin, kyselinu D-l,.2-diaminobutanovou, kyselinu D1, 2-diaminopropanovou, D-cystein, D-penicilamin a D216 methionin;

R⁴ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, D-valin, D-alanin, D-leucin, D-isoleucin, D-norleucin, kyselinu D-2-aminobutanovou, kyselinu D-2-aminohexanovou, D-tyrosin, D-fenylalanin, Dthienylalanin, D-fenylglycin, D-cyklohexylalanin, Dhomofenylalanin, D-l-naftylalanin, D-lysin, D-serin, Dornithin, kyselinu D-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu D1, 2-diaminopropanovou, D-cystein, D-penicilamin, Dmethionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou;

R⁵ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k Ln, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, L-valin, L-alanin, L-leucin, L-isoleucin, L-norleucin, kyselinu L-2-aminobutanovou, kyselinu L-2-aminohexanovou, L-tyrosin, L-fenylalanin, Lthienylalanin, L-fenylglycin, L-cyklohexylalanin, Lhomofenylalanin, L-l-naftylalanin, L-lysin, L-serin, Lornithin, kyselinu L-l, 2-diaminobutanovou, kyselinu L1, 2-diaminopropanovou, L-cystein, L-penicilamin, Lmethionin a kyselinu 2-aminothiazol-4-octovou; za předpokladu, že v každém Q je jeden z R¹, R², R³, R⁴ a R⁵ substituován vazbou k Ln, a dále za předpokladu, že jestliže R² je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K je N-methylarginin, dále za předpokladu, že jestliže R⁴ je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K a K jsou Nmethylarginin a dále za předpokladu, že jestliže R⁵ je kyselina 2-aminothiazol-4-octová, pak K' je Nmethylarginin;

d je číslo vybrané z následujících: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 a 10;

217 « · _ΑΖ*Ά’Ο

A⁹ je vybrané ze skupiny zahrnují: OH a OR²⁷;

A¹⁰ je OR²⁷;

R²⁷ je 0(=0)0^20 alkyl;

E¹ je Ci-io alkenyl substituovaný 1 až 3 R²⁸;

R²⁸ je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: R³⁰, -PO3H-R³⁰, =0, -C02R²⁹, -C(=O)R²⁹,

-C (=0)N(R²⁹) 2, -CH2OR²⁹, -OR²⁹, -N(R²⁹)2, C_x až C₅ alkyl a C₂až C₄ alkenyl;

R³⁰ je vazba k L_n;

L_n je spojující skupina popsaná vzorcem:

(CR⁶R⁷)g- (W)h- (CR^6aR^7a)g-- (Z)_k- (W)_h-- (CR⁸R⁹)g~- (W)h~(CR^8aR^9a)g-,

W je v každém jednotlivém případu nezávisle zvolené ze skupiny zahrnující: O, S, NH, NHC(=0), C(=0)NH, C(=0), 0(=0)0, 0C(=0), NHC(=S)NH, NHC(=0)NH, S0₂, (OCH₂CH₂) ₂₀.₂₀₀, (CH₂CH₂O)

41. Sloučenina podle nároku 40 vyznačující se tím, že tato sloučenina je popsaná vzorcem:

Q-L_n-Sf kde Q je cyklický pentapeptid nezávisle vybraný ze skupiny:

K je nějaká L-aminokyselina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: arginin, citrulin, N-methylarginin, lysin, homolysin, 2aminoethylcystein, δ-Ν-2-imidazolinylornithin, δ-Nbenzylkarbamoylornithin a kyselinu β-2benzimidazolylacetyl-1, 2-diaminopropanovou;

K je nějaká D-aminokyselina v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: arginin, citrulin, N-methylarginin, lysin, homolysin, 2aminoethylcystein, δ-Ν-2-imidazolinylornithin, δ-Nbenzylkarbamoylornithin a kyselinu β-2benzimidazolylacetyl-1, 2-diaminopropanovou;

M je kyselina L-asparágová;

M je kyselina D-asparágová;

R¹ je nějaká aminokyselina substituovaná 0 až 1 vazbou k L_n, v každém jednotlivém případu nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující: glycin, L-valin, D-valin, alanin, leucin, isoleucin, norleucin, kyselinu 2-aminobutanovou, kyselinu 2-aminohexanovou, tyrosin, fenylalanin, thienyl220 • 9 9 9 9 9 9

42. Sloučenina podle nároku 41 vyznačující se tím, že tato sloučenina je vybraná ze skupiny zahrnuj ící:

43. Přípravek obsahující kontrastní látku pro ultrazvuk, vyznačující se tím, že tento přípravek obsahuje:

(a) sloučeninu podle nároku 40 zahrnující: nějaký cyklický pentapeptid vážící integrin a_vaab₃, povrchově aktivní látku a spojující skupinu mezi zmíněným cyklickým pentapeptidem a povrchově aktivní látkou;

(b) nosič přijatelný pro parenterální aplikaci; a (c) echogenní plyn.

44. . 44 . 44 444 44 jící částí je nějaká sloučenina Q podle nároku 3, a radioaktivní značkou je nějaký terapeuticky používaný izotop vybraný ze skupiny zahrnující: ³⁵S, ³²P, ¹²⁵I, ¹³²I a ²¹¹At.

44 44 44 4 44 • · 4 4 4 4 ·· 4 4

44. Přípravek obsahující kontrastní látku pro ultrazvuk, vyznačující se tím, že tento přípra224 ♦ · • · ' · ··' • '9 9-9 .

vek dále obsahuj e:

kyselinu 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidovou, 1,2dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidylcholin a N(methoxypolyethylenglykol 5000 karbamoyl)-1,2dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidylethanolamin.

• · ' 44 9 49 ' • • • · 4 4 4 9 4 • · 9 • • 4 9 • 4 9 • 4 * » 4 9 4 • • 4 4 4 9 • · 4 4 949 94 4

45. Přípravek obsahující kontrastní látku pro ultrazvuk, vyznačující se tím, že zmíněných echogenním plynem je nějaký C₂-₅ perfluorkarbon.

46. Přípravek podle nároku 40 vyznačující se tím, že tento přípravek je používán pro diagnostické zobrazování rakoviny sonografií.

47. Přípravek podle nároku 40 vyznačující se tím, že tento přípravek je používán pro diagnostické zobrazování tvorby nových cév sonografií.

48. Terapeutický radiofarmakon vyznačující se tím, že tento radiofarmakon zahrnuje:

49. Diagnostický radiofarmakon vyznačující se tím, že tento radiofarmakon zahrnuje:

(a) diagnostický radiofarmakon, kontrastní látku pro MRI nebo kontrastní látku pro rentgenové záření podle nároku 11; a (b) nosič přijatelný pro parenterální aplikaci.

50. Terapeutický radiofarmakon vyznačující se tím, že tento radiofarmakon zahrnuje: radioaktivně značenou směrující část, kde zmíněnou směru225

51. Terapeutický radiofarmakon vyznačující se tím, že tento radiofarmakon zahrnuje: radioaktivně značenou směrující část, kde zmíněnou směrující částí je nějaká sloučenina Q podle nároku 5, a radioaktivní značkou je nějaký terapeuticky používaný izotop, kterým je ¹³¹I.