CZ20004621A3 - Přípravek obsahující karabin a inositolfosfát jako doplňková výživa nebo léčivo - Google Patents

Abstract

Je popsán přípravek vhodný k prevenci a/nebo léčbě kardiovaskulárních a neurocerebrálních, tkáňových anoxických forem, svalových energetických nedostatečností, abnormalit zánětlivého typu, změn krevní koagulace jako je trombóza a tkáňových proliferujících forem, který lze brát ve formě doplňkové výživy, podpůrné výživy nebo jako skutečné léčivo, které obsahuje jako charakteristické účinné složky: (a) propionyl-L-karnitin nebo jeho farmakologicky přijatelnou sůl; a (b) inositolfosfát, zvláště inositohexafosfát (IP6).

Description

Oblast techniky

Vynález se týká kombinovaného přípravku, obsahujícího karnitin a inositolfosfát, vhodného jako doplňková výživa nebo léčivo.

r t

Dosavadní stav techniky

Jak karnitiny, tak inositolhexafosfát jsou pro své důležité metabolické a farmakologické působení dobře známy, a to vedlo k četným významným farmakologickým a klinickým zjištěním.

Co se týká karnitinů, je jejich úloha při β-odbourávání mastných kyselin a syntéze ATP dobře známa.

Jsou také obdařeny důležitým antioxidačním účinkem, jak to dokládá jejich ochranný účinek proti lipoperoxidaci fosfolipidových buněčných membrán a proti oxidativní zátěži vyvolávané v myokardiálních a endotheliálních buňkách. Tyto biochemické účinky karnitinů se obrážejí ve vynikajících výsledcích získaných v klinické praxi při jejich použití při léčbě různých forem atherosklerozy, myokardiální ischemie, periferní vaskulopatie nebo diabetů.

Také pro inositolhexafosfát (IP6) byly publikovány mnohé výzkumné studie jak biochemické, tak klinické povahy, ukazující jejich působení a využití při prevenci a léčbě mnohých patologických změn. I když se zájem o tyto sloučeniny datuje mnoho let nazpět, kdy byla určitým semenům rostlin pro velké procento IP6 přisuzována schopnost antioxidačního působení IP6 z důvodu dlouho trvající schopnosti zachovávat klíčivost, teprve nedávno výzkumníci začali určovat jeho antitrombotické a antisklerotické vlastnosti a jeho schopnost působit kardioprotektivně proti poškozování vyvolaného infarktem, rovněž tak jako jeho schopnost působit ochranně proti nastartování nádorových procesů. Tyto • · vlastnosti mohou mít částečnou spojitost s jeho vysokou antioxidační schopností a na druhé straně s jeho schopností interferovat s uvolňováním cytokináz a dalších látek vyvolaných aktivací receptorů řídících systémy buněčné transdukce.

Ve skutečnosti je dobře známo, že inositolhexafosfát, IP6 či fytin je ve vysokém množství přítomen ve všech tkáních a buňkách. IP6 tvoří 1 až 5 % hmotnostních mnoha obilnin a luštěnin jako například rýže, mouky, sóji, ve kterých je obsaženo přibližně 50 % zásob fosforu. Hlavní oblastí v klinické praxi, ve které byl IP6 úspěšně využit vedle jiných dalších léčebných postupů, je léčba hypercholesterolemie a atherosklerozy, rovněž tak jako hyperkalcemie a rozpouštění ledvinových kamenů. Slibných výsledků bylo rovněž experimentálně dosaženo při jeho využití k inhibici agregace krevních destiček vyvolané ADP nebo reperfuzního poškození takových orgánů, jako je například srdce.

Jeho inkorporace do erythrocytů vede navíc k větší dostupnosti použitelného kyslíku v takových případech, kdy je schopnost získat dostupný kyslík omezena, jako je tomu u ischemie orgánů, hemolytické anemii, plicní nedostatečnosti a erythrocytoze.

Opětovně lze prohlásit, že hlavním faktorem způsobujícím aktivitu IP6 je jeho síla antioxidačního působení spojená především s jeho schopností tvořit cheláty se železem.

Co se týká vaskuloprotektivních, neuroprotektivních a antianoxických účinků IP6, zvyšuje jeho inkorporace do erythrocytů stabilitu iontů železa v nich, a ty pak mohou být vzájemně uvolňovány mezi erythrocyty samotnými a navíc zvyšováním jejich affinity ke kyslíku se vytváří větší množství dostupného kyslíku v těch tkáních, které se staly anoxickými.

I když antioxidační účinky IP6 je nutno přičíst k významné aktivitě v metabolické a kardiovaskulární úrovní, musejí být vzhledem k protizánětlivým, imunostimulačním a protinádorovým vlastnostem vzaty v úvahu i další mechanizmy objasňované v této studii.

IP6 a inositolpentafosfát IP5 patří mezi hlavní fosfáty inositolu přítomné v buňkách. Vedle úpravy hemoglobinové affinity ke kyslíku a působení jako neurotransmitery vykonávají důležitou funkci pro převodové signály působící z povrchu buňky do jejího vnitřku, v aktivaci genu a při tvorbě cytokinás a faktorů řídících růst buněk.

V případě protinádorové aktivity IP6 se předpokládá defosforylace IP6 na IP5 a IP3 a tím i snižování zásoby inositolfosfátu charakterizovaného nižším stupněm fosforylace, jehož rozsah reguluje nebo inhibuje růst buněk. IP6 je navíc schopný blokovat aktivitu fosfatidylinositol-3-kinazy (PI-3-kinasa) a tím blokovat faktor epidermálního růstu a převod mimobuněčných signálů regulovaných aktivací proteinkinasy.

Jiným faktorem, který je nositelem protinádorové aktivity IP6 je ten, že jeho defosforylace na IP3 vypadá, jako by měla vazbu na otevírání odpovídajících vápníkových kanálů, jejichž nárůst není pouze kritickým prvkem při proliferaci buněk, ale je také důležitým faktorem při zavádění buněčné apoptozy. Navíc bylo zjištěno, že IP6 je odpovědný za inzulínové receptory růstového faktoru (IFG-II) a jako důsledek toho bylo demonstrováno, že jejich genové zvýraznění dává možnost vzniku různých nádorových kmenů. V každém případě bylo zjištěno, že IGF receptory jsou důležité při iniciaci buněčné hyperplasie.

Při protizánětlivém, imunostimulačním a protinádorovém působení IP6 se předpokládají dva různé mechanizmy. Jeden je typický pro antioxidační látky, které podobně jako kyselina salicylová inhibují aktivitu přenosu genů přes NK-kbIkB systém a další, který přes zásobník inositolfosfátu reguluje růstové faktory. Z praktického hlediska se v protinádorové oblasti ukázal IP6 jako účinný pro inhibici střevních nádorů vyvolaných u zvířat azoxymethanem, a to podle velikosti dávky.

Jeho použití se také ukázalo jako stejně účinné pro nádor prsu vyvolaný 7,12dimethylbenzanthracenem (DMBA) nebo methylnitrosomočovinou. Výborné výsledky byly také získány při použití IP6 u nádorů plic, prostaty a jater. Zkoušky provedené na lidských materiálech, zvláště na adenokarcinomových a leukemických buňkách ověřily protinádorovou účinnost IP6.

, í

Podstata vynálezu

Nyní bylo překvapivě zjištěno, že kombinovaný přípravek obsahující charakteristické složky:

(a) propionyl-L-karnitin nebo jednu z jeho farmakologicky přijatelných solí; a (b) inositolfosfát vybíraný ze skupiny sestávající z inositolmonofosfátu, inositoltetrafosfátu, inositolpentafosfátu a zvláště inositolhexafosfátu (IP6) je obzvláště účinný při prevenci a/nebo léčbě kardiovaskulárních a neurocerebrálních postižení a různých forem tkáňové anoxie, abnormalit zánětlivého typu, energetických svalových nedostatečností a tkáňových proliferujících forem jako výsledek silného, neočekávaného synergického účinku působeného jeho složkami.

Také bylo zjištěno, že složka (a) může dále případně obsahovat další „karnitin“ vybíraný ze skupiny sestávající z L-karnitinu, acetyl-L-karnitinu, butyryl-Lkamitinu, valeryl-L-karnitinu a isovaleryl-L-kamitinu nebo jejich farmakologicky přijatelných solí nebo jejich směsí a složka (b) může navíc obsahovat inositol.

Hmotnostní poměr složky (a) ke složce (b), kterému se dává přednost se pohybuje v rozmezí od 1 : 10 do 1 : 1.

·· ···· ·· ···· ·· • · · · · · · · · • · · · · · · « « · » • · · · · · · · · · • · · ·· ·· β * ···

Složka (b) může být v přípravku přítomna ve formě rostlinného produktu nebo extraktu rostlinného produktu obsahujícího vysoké procento inositolfosfátů. Vhodnými rostlinnými produkty jsou například otruby a neloupaná rýže.

Přípravek podle vynálezu lze používat buď jako doplňkovou výživu nebo nutriční doplněk hlavně s preventivním účinkem a jako léčivo k léčbě klinicky zjištěných onemocnění.

Překvapující synergický účinek, kterého je dosahováno kombinací „karnitinů“ a inositolfosfátů, avšak zvláště propionyl-L-karnitinu a IP6 byl potvrzen mnoha farmakologickými zkouškami (z nichž některé jsou zde dále popsány) volenými takovým způsobem, aby se zajistila vysoká předpovídací schopnost s výhledem na praktické využití tohoto přípravku a to jak na poli prevence, tak jako přísně terapeutická látka.

Toxikologické zkoušky

Jak L-karnitin a propionyl-L-karnitin tak inositolhexafosfát (IP6) jsou známě svou charakteristickou malou toxicitou a dobrou tolerovatelností. Tyto významné charakteristiky byly ověřeny jednoduchým orálním podáváním L-karnitinu a IP6 krysám a myším v dávkách odpovídajících 1 g.kg'¹ a 750 mg.kg’¹ a u propionyl-Lkarnitinu a IP6 v dávkách odpovídajících 750 mg.kg'¹ a 500 mg.kg'¹ a nebyla zjištěna žádná toxická reakce nebo netolerance. Také bylo tolerováno intraperitoneální podávání 500 mg propionyl-L-karnitinu a 300 mg inositolhexafosfátu krysám a nebyly při tom zjištěny žádné toxické účinky. Tyto vynikající charakteristiky nízké toxicity byly také ověřeny výsledky zkoušek zahrnujících denní orální podávání 300 mg.kg'¹ propionyl-L-karnitinu společně s 200 mg.kg'¹ IP6 krysám po dobu třiceti po sobě jdoucích dní. Na konci těchto ···· ·· ···· «· * * 0 0 0 · · · · · 0 0 · · · · · • 00 · · · · * · « • · 0 00 00 «0 00· zkoušek nebylo zjištěno žádné zmenšení růstu zvířat na které bylo takto působeno, ani nebyly zjistitelné změny hodnot hematokrytu či jiných proměnných složek krve, zvláště sérové glukózy, BUN a cholesterolu.

Při autopsii nebylo možno navíc zjistit žádné abnormality základních ani histologických změn základní parenchymální tkáně zkoušených orgánů.

Protizánětlivé účinky zjišťované zkouškou na karageninový edem

Ke zjištění protizánětlivého účinku nového přípravku byla použita zkouška na karagenní edem, při které byl do nožek krys vpichován karagenin.

Injikování 0,1 ml 1 % roztoku karageninu (Sigma Chemical, St. Louis, Mo, USA) do subplanární oblasti pravé nožky krysy vyvolalo znatelný edém nožky, který dosáhl maximální intenzity 4 až 5 hodin po injikování. Edém byl měřen rtuťovou plethysmografií v různých časových intervalech až do čtyř hodin po injikování karageninu.

Jak propionyl-L-karnitin (250 mg.kg'¹), tak IP6 (250 kg.kg'¹) byly podávány orálně půl hodiny před subplantární karageninovou injekcí. Výsledky této zkoušky (viz tabulka 1) ukazují, že jak propionyl-L-karnitin, tak i nositolhexafosfát vykazují slabý inhibiční účinek na zánětlivou reakci vyvolanou karageninem, avšak jejích kombinace téměř zcela inhibovala edém vyvolaný karageninem, čímž je demonstrován neočekávaný a překvapující synergický účinek propionyl-Lkarnitinu a inositolhexafosfátu.

Tabulka 1

Protizánětlivý účinek zjišťovaný zkouškou na karageninový edem

	1 h	% inhibice po 2h	4h
propionyl-L-karnitin 250 mg.kg'1	-	15±0,3	8±0,9
IP6 250 mg.kg'1	15+1,1	20±2,1	15±0,6
propionyl-L-karnitin 250 mg.kg'1 +	00±4,8	80±7,1 ,	50±3,9

IP6 250 mg.kg'¹

Protizánětlivý účinek prováděný zkouškou na arthritidu vyvolanou kolagenem

Potvrzení protizánětlivého účinku přípravku podle vynálezu bylo získáno za použití zkoušky na arthritidu typu II vyvolanou kolagenem technikou popsanou Trenthamem (Trentham, D. R.: J. Exp. Med., 146, 857, 1977). Při této zkoušce byla skupina myší imunizována intradermálním injikováním 100 pg přírodního kolagenu emulgovaného ve Freundově kompletním adjuvantu (Difco Labs., Detroit, USA) do kořene ocasu.

Po třech týdnech bylo takto připraveným zvířatům opět intraperitoneálně injikována stejná dávka emulgovaného kolagenu. Propionyl-L-karnitin (200 mg.kg'¹) nebo inositolhexafosfát (200 mg.kg'¹) nebo obě sloučeniny v kombinaci se orálně podávaly ode dne injikovíní kolagenu až do konce šestého týdne.

Jedna skupina zvířat neobdržela žádný přípravek a sloužila jako kontrolní skupina. Intenzita edému byla posuzována stupnicí od 1 do 4. Výsledky této zkoušky ukazují silný synergismus mezi propionyl-L-karnitinem a inositolhexafosfátem. Propionyl-L-karnitin samotný nevykazoval žádný inhibiční účinek na edém vyvolaný kolagenem a IP6 vyvolal pouze slabé zmenšení

0

- 8 (přibližně 20 %), avšak pokud byly podány obě sloučeniny v kombinaci, inhibice edému byla vyšší než 80 %.

Působení proti agregaci destiček

Působení přípravku podle vynálezu proti agregaci destiček bylo sledováno na vzorcích krve zdravých dobrovolníků. Na vzorky se působilo citrátem sodným a byly zcentrifugovány (145g po dobu 5 minut při 22°C) a spočítán počet destiček (CA 580 = 4 Platelet Counter - DelCon). Pokud to bylo nutné, byla tato hodnota upravena na hodnotu 300000 destiček na ml přídavkem PPP (Platelet Poor Plasma = plasma s omezeným počtem destiček), získané centrifugováním krve 1600g po dobu 10 min. při 22 °C.

Použitým agregačním činidlem byl kolagen (2,5 ng.ml'¹ ,5 ng.ml·¹) a vyvolaná agregace byla měřena fotometrícky způsobem popsaným Bornem (Born, G. V.: Nátuře, 194,927, 1962). Agregace destiček byla měřena při základních podmínkách a po 10 min. inkubace se samotným propionyl-L-karnitinem a IP6 nebo s jejich kombinací.

Použité dávky propionyl-L-karnitinu byly 10 ng a 20 ng.ml·¹ a u IP6 byly dávky 4 ng a 8 ng.ml'¹.

Výsledky těchto zkoušek ukazují, že zatímco propionyl-L-karnitin samotný neinhibuje agregační účinky kolagenu, samotný IP6 je snižuje až ke 40 %. Kombinace obou slučenin však má za důsledek úplnou inhibici agregačního účinku (100 %), což je ukazatel účinného synergického působení mezi propionylL-karnitinem a IP6.

Protisklerotické účinky

Protisklerotické účinky nového přípravku byly posuzovány u různých skupin krys (samci krys chovu Wistar), kterým byla podávána atherogenická strava obsahující • · · ·· · % kaseinu, 1 % cholesterolu, 15 % bavlníkového oleje, 60 % cukru a 200 mj. g'¹ potravy po šest po sobě následujících týdnů v režimu navrženém Melinowem (Melinow, M. R.: Atherosclerosis, 48, 105, 1983). Na konci šestého týdne působení se vytvářely znatelné atherosklerotické vaskulární léze, které byly zvláště zřetelné v místě abdominální aorty. Závažnost těchto lézí byla hodnocena morfometrickou metodou měřením tloušťky abdominální aorty a intenzitou zabarvení vyvolaného Súdánem IV stupnicí progresivního systému od 1 do 5. V těchto zkouškách obdržely krysy denní dávky 150 mg.kg'¹ propionyl-L karnitinu a 100 mg.kg¹ IP6 současně s jejich atherogenní potravou. Výsledky zkoušek provedených na krysách takto chovaných ukázaly, že zatímco samotný propionylL-karnitin či IP6 vyvolají pouze slabý ochranný účinek, podávání těchto dvou sloučenin v kombinaci téměř zcela inhibuje výskyt atherosklerotických lézí, jak to ukázala morfometrická měření a barvení Súdánem IV, a tím se v tomto případě prokazuje mohutný synergický účinek kombinace propionyl-L-karnitinu a IP6.

Vliv na svalové cvičení

Jelikož IP6, který je bohatý na fosfátové skupiny a je dobrou energetickou rezervou, byla provedena řada zkoušek k určení, zda může jeho podávání prodloužit dobu vytrvalostního plavání myší nucených plavat v obdélníkové nádrži plné vody technikou popsanou Zhengem (Zheng, R. L.: Acta Pharmacol. Sinica, 14, 47, 1993), a zda lze tento účinek zvýšit použitím kombinace s karnitinem, jako například s propionyl-L-karnitinem. Zkoušky byly provedeny s různými skupinami zvířat, kterým byl podáván samotný propionyl-L-karnitin (200 mg.kg¹) nebo IP6 (100 mg.kg¹), či obě sloučeniny v kombinaci.

Sloučeniny byly podávány orálně po tři dny předcházející zkoušce. U takto připravených zvířat se měřil čas vytrvalého plavání a porovnáván s kontrolními zvířaty. Střední čas vytrvalého plavání se mírně zvýšil u krys, které obdržely jak samotný propionyl-L-karnitin tak IP6, avšak významné prodloužení času plavání ·· 9 99 9

- 10 bylo zjištěno u zvířat, která obdržela kombinaci propionyl-L-karnitinu a IP6, čímž byl potvrzen zřejmý synergický účinek (viz tabulka 2).

V jiné sérii zkoušek byl hodnocen účinek propionyl-L-karnitinu a IP6 na nucené svalové cvičení, které, jak známo, může vytvářet sloučeniny s reaktivním kyslíkem (ROS - reactive oxygen species), záněty a poškození svalových struktur.

Nucené svalové cvičení bylo zkoušeno na různých skupinách krys tak, že byly ponechány běhat na pohyblivém pásu s řízenou rychlostí a úhlem náklonu, jak to popisuje Li (Li, J. X.: Acta Pharmacologica Sinica, 20, 126, 1999) a Husain (Husajn, K.: Pathophysiology, 4, 69, 1997). Zvířata byla ponechána běhat na přibližně 5° stoupání při rychlosti pásu 28 m.min'¹. Zvířata byla ponechána takto namáhat po dobu přibližně 85 minutového cvičení.

Zkouška byla provedena na skupinách zvířat, která po tři dny předcházející cvičební zkoušce obdržela samostatně 200 mg.kg'¹ propionyl-L-karnitinu nebo 100 mg.kg'¹ IP6 nebo jejich kombinaci. Pět a třicet minut po ukončení cičení byly z utracených zvířat odebrány vzorky svalu gastrocnemius a ty použity k měření obsahu malondialdehydu (MDA) jakožto představitele úrovně lipoperoxidace reakcí s kyselinou thiobarbiturovou metodou popsanou Ohkawou (Ohkawa, H.: Anal. Biochem., 95, 351, 1979).

Jak je z výsledků uvedených v tabulce 3 zřejmé, jak samotný propionyl-L-karnitin, tak samotný IP6 snížily úroveň svalové lipoperoxidace ve svalovém homogenátu, jak to bylo stanoveno menším zvýšením MDA, což se ukázalo velmi zřetelně u kontrolních zvířat pět minut po ukončení cvičení. Kombinace propionyl-L-karnitinu a IP6 na druhé straně vytvořila téměř úplnou ochranu proti lipoperoxidaci ve svalech pokusných zvířat, čímž se také i v tomto případě prokázalo synergické působení propionyl-L-karnitinu a IP6.

• fl ··»· ·· ···· ·· • · · · · · 4 • · · • · · « · · » · · • · · flfl flfl flfl

- 11 Tabulka 2

Zkouška vytrvalostního plavání látka Doba plavání (min.) kontrolní 98±15 propionyl-L-karnitin 116±19

IP6 136±16 propionyl-L-karnitin + IP6 184±22

Tabulka 3

Zkouška svalového vyčerpání

Látka Obsah MDA ve svalu [nmol.g'¹ (hmotn/hmotn)]

	po 5 min.	po 30 min.
kontrolní	234±9	225±11
propionyl-L-karnitin	210±10	212±14
IP6	200+16	205±8
propionyl-L-karnitin + IP6	175±12	181±12

Vliv na neuronální hypoxii

K vyhodnocení ochranného účinku přípravku podle vynálezu na poškození v neuronální oblasti způsobené hypoxii byly provedeny zkoušky na kulturách kuřecích cerebrálních neuronů, u kterých se omezení respirace buněk vyvolá zavedením NaCN do kultur. Energetický metabolismus neuronálních kultur byl hodnocen měřením koncentrace ATP přítomné v kulturách bez působení látek nebo kulturách, ke kterým byl přidán propionyl-L-karnitin nebo IP6 v dávkách 100 a 50 mg.!'¹. Kuřecí cerebrální neuronové kultury byly připraveny technikou popsanou Pettmanem (Pettman, B.: Nátuře, 281, 378, 1979). Cytotoxická hypoxie byla vyvolána přidáváním NaCN ke kultivačnímu mediu až do konečné ·· ··♦· tt ···· ·· • · · · · · · · · ··· · · · · · • · · · · · ···· ·· ·

- 12 koncentrace 1 mmol.l'¹. Po 120 min. bylo medium vyměněno za medium bez NaCN a metabolismus buněk byl blokován promytím ledovým roztokem ústojného roztoku. Hodnocení ATP bylo provedeno postupem popsaným Wernerem (Werner, A. J.: Chromatogr. Biomed. Appl., 421, 257, 1987).

Výsledky těchto zkoušek jsou uvedeny v tabulce 4. Měření ATP ukazují, že hladiny ATP jsou podstatně sníženy anoxií a zůstávají nízké i po třicetiminutové reoxidaci, zatímco v případě, že je přítomen samotný propionyl-L-karnitin nebo IP6 nebo v kombinaci, je možno pozorovat menší snížení hladiny ATP, rovněž tak jako rychlé obnovení hladin ATP.

Tabulka 4

Vliv na neuronální hypoxii látka ATP nmol.g'¹ proteinu po reoxidační době

	0 min.	30 min.
kontrolní	9,2±0,9	14,4±1,2
propionyl-L-karnitin	11,1±1,6	16,3±2,2
IP6	12,4±2,1	16,9±1,9
propionyl-L-karnitin + IP6	15,8±2,4	23,7±2,3

Antiproliferativní působení

Z pohledu mnoha výzkumných studií týkajících se preventivního chemoterapeutického protinádorového působení pokusně dokazovaného pomocí IP6, zvláště proti nádorům střeva a prsu, bylo hodnoceno antiproliferativní působení přípravku podle vynálezu ve vztahu k proliferaci kožní tkáně pokusně vyvolané na myších subkutálním injikováním teleocidinu, který je podobně jako forbolmyristáty schopný způsobit proliferující kožní abnormality podobné nádorům (Fujiki, A.: Biochem. Biophys. Res. Comm., 90, 976, 1979).

Jelikož je kožní reakce vyvolaná teleocidinem provázena zvýšením ornitin

Μ 0··· 0 0 00··

0 0 0 0 ·0

0 0 0 0 0 0

0 · 00 0 000 • 00 0000 ·

0 00 00

- 13 dekarboxylázové aktivity, může být tento enzym považován za markér na proliferační reakci a na její rozdílné stupně závažnosti.

Při těchto zkouškách byl teleocidin injikován subkutálně do vyholeného hřbetu myší v dávce 5 pg na jednu myš.

Jeden týden před injikováním teleocidinu obdržely různé skupiny zvířat orální dávku propionyl-L-karnitinu (200 mg.kg'¹) nebo IP6 (100 mg.kg'¹) nebo obě sloučeniny . v kombinaci. Pět hodin po injikování teleocidinu bylo na zhomogenizovaném epidermisu zvířat chovaných podle metody popsané 0’Brienem (0’Brien, T. G.: Cancer Res., 42, 2841, 1982) provedeno hodnocení ornitindekarboxylázy.

Vyhodnocení koncentrace ornitindekarboxylázy v proteinu epidermálního extraktu bylo provedeno technikou popsanou Lowrym (Lowry, O. H.: J. Biol. Chem., 193, 265, 1951). Jak je zřejmé z výsledků uvedených v tabulce 5, je zvýšené působení ornitindekarboxylázy vyvolané teleocidinem značně omezeno předchozím podáváním samotného propionyl-L-karnitinu nebo IP6. Pokud se však tyto sloučeniny použily v kombinaci, došli ke značnému a vysoce významnému snížení ornitindekarboxylázy.

Tabulka 5

Antiproliferační působení látka kontrolní teleocidin propionyl-L-karnitin

IP6 propionyl-L-karnitin + IP6 působení ornitindekarboxylázy nmol CO₂ za 60 min.mg'¹ proteinu 0,055±0,004 2,6+0,4 2,1+0,2 1,95±0,2 0,58±0,9

000· • · · · · 0 0 0 00

0 0 0 0 · · 0 0 • · · 0 0 · 0000 0 «00 0000 40 0

0 00 00 00 000

- 14 Farmakologicky přijatelnou solí L-karnitinu nebo alkanoyl-L-karnitinu je míněna jakákoliv sůl těchto aktivních složek s kyselinou, která nedává vznikat nežádoucím toxickým nebo vedlejším účinkům. Tyto kyseliny jsou odborníkům ve farmacii dobře známy.

Příklady vhodných solí, které však nikterak neomezují jejich rozsah jsou: chlorid, bromid, jodid, aspartát, kyselý aspartát, citrát, kyselý citrát, vínan, fosforečnan, kyselý fosforečnan, fumarát, kyselý fumarát, glycerofosfát, glukofosfát, mléčnan, maieát, kyselý maieát, orotát, šťavelan, kyselý šťavelan, síran, kyselý síran, trichloracetát, trifluoracetát a methansulfonát.

Seznam farmakologicky přijatelných solí schválených FDA je uveden v Int. J. of Pharm., 33, 201 -217, 1986; tato poslední publikace je sem vložena jako odkaz.

Přípravek podle vynálezu může také obsahovat vitaminy, koenzymy, minerální látky a antioxidanty.

K výrobě přípravků s ohledem na specifickou cestu jejich podávání lze použít příslušné excipienty, které jsou farmaceutickým a potravinářským odborníkům známy.

Příklady provedení

Ilustrativní, avšak nikterak neomezující příklady přípravků podle vynálezu jsou uvedeny níže.

1)	propionyl-L-karnitin inositolhexafosfát	250 mg 250 mg
2)	L-karnitin	150 mg
	propionyl-L-karnitin	150 mg
	inositolhexafosfát	300 mg

·> 0000 00 *000 00

0 00 0 000

000 000 00

000 000 0000

000 0000 00

0 0 00 00 00 0

- 15 3)

4)

5)

6)

7)

θ)

směs karnitinů		300 mg
(L-karnnitin 75 mg, acetyl-L-karnitin 75 mg, karnitin 75 mg, isovaleryl-L-karnitin 75 mg) inositolhexafosfát	propionyl-L-	300 mg
propionyl-L-karnitin		200 mg
inositolhexafosfát		200 mg
inosin		100 mg
směs karnitinů		200 mg
(L-karnnitin 50 mg, acetyl-L-karnitin 50 mg, karnitin 50 mg, isovaleryl-L-karnitin 50 mg) , inositolfosfátový komplex	propionyl-L-	200 mg
(inositolhexafosfát 100 mg, inositolpentafosfát 50 mg,
inositoltetrafosfát 50 mg) inosin		100 mg
acetyl-L-karnitin		200 mg
propionyl-L-karnitin		200mg
inositolhexafosfát		400 mg
inosin		200 mg
propionyl-L-karnitin		200mg
inositolhexafosfát		200 mg
inosin		100 mg
koenzym Q10		20 mg
vitamin E		5 mg
β-karoten		10 mg
bioflavonoidy		25 mg
vitamin C		25 mg
selen		50 mg
rostlinná vláknina		50 pg
stearan hořečnatý		5 mg
propionyl-L-karnitin		200 mg
Inositolhexafosfát		200 mg
inosin		100 mg
kreatin		100 mg
vitamin		1 mg
vitamin B2		3 mg
vitamin B6		5mg
nikotinamid		5 mg
vitamin E		5 mg
β-karoten		10 mg
vitamin B12		2pg
kyselina listová		700 pg

·♦ ···· ·Φ »··· ·· ·· ··· ···· • · · ··· ···· · • · · · · · · ·· ·.

·· · · · · · · * ···

- 16 Využitelnost

Předložený vynález se týká přípravku k předcházení a/nebo léčbě kardiovaskulárních a neurocerebrálních potíží, různých tkáňových anoxických forem, energetické svalové nedostatečnosti, abnormalit zánětlivého typu, změn v krevní koagulaci jako je trombóza a proliferující tkáňové formy.

r t

Přípravek může mít formu a působit jako doplňková výživa nebo jako skutečný medikament v závislosti na tom, zda má jít o podpůrný nebo preventivní účinek nebo může mít přísně terapeutický účinek, kterým může působit podle stavu příslušného jedince, pro kterého se použije.

Claims (17)

1. Patentové nároky

   1. Kombinovaný přípravek, který obsahuje:

   (a) propionyl-L-karnitin nebo jeho farmakologicky přijatelnou sůl; a (b) inositolfosfát.
2. 2. Přípravek podle nároku 1 vyznačující se tím, že inositolfosfát se vybírá ze skupiny sestávající z inositolmonofosfátu, inositoltetrafosfátu, inositolpentafosfátu a inositolhexafosfátu (IP6).
3. 3. Přípravek podle nároku 1 nebo 2 vyznačující se tím, že složka (a) obsahuje dále „karnitin“ vybíraný ze skupiny sestávající z L-karnitinu, acetyl-L-karnitinu, butyryl-L-karnitinu, valeryl-L-karnitinu, isovaleryl-L-karnitinu nebo jejich farmakologicky přijatelných solí nebo jejich směsí.
4. 4. Přípravek podle nároku 1 až 3, vyznačující se tím, že složka (b) obsahuje dále inositol.
5. 5. Přípravek podle nároku 1 až 4, vyznačující se tím, že hmotnostní poměr (a): (b) se pohybuje v rozsahu od 1 : 10 do 1 : 1.
6. 6. Přípravek podle kteréhokoliv z předchozích nároků vyznačující se tím, že složka (b) je rostlinný produkt nebo extrakt z rostlinných produktů obsahující inositolfosfát.
7. 7. Přípravek podle nároku 6 vyznačující se tím, že rostlinným produktem jsou otruby nebo surová rýže a/nebo jejich extrakty.
8. 8. Přípravek podle kteréhokoliv z předchozích nároků vyznačující se tím, že farmakologicky přijatelná sůl L-karnitinu nebo alkanoyl-L-karnitinu se vybírá ze skupiny ve které je: chlorid, bromid, jodid, aspartát, kyselý aspartát, citrát, ·· ··«· ·« ··«· ·· e • · · t · · ♦ « · · • · · · · · ···
9. 9 9 9 9 9 9 9 9 9 · ·· 9 99 99 99 999

   - 18 kyselý citrát, vínan, fosforečnan, kyselý fosforečnan, fumarát, kyselý fumarát, glycerofosfát, glúkofosfát, mléčnan, maleát, kyselý maleát, orotát, kyselý šťavelan, síran, kyselý síran, trichloracetát, trifluoracetát a methansulfonát.

   9. Přípravek podle kteréhokoliv z předcházejících nároků vyznačující se tím, že obsahuje vitaminy, koenzymy, minerální látky a antioxidanty.
10. 10. Přípravek podle kteréhokoliv z předcházejících nároků vyznačující se tím, že má formu doplňkové výživy pro orální podání.

    í *
11. 11. Přípravek podle kteréhokoliv z předcházejících nároků 1 až 9 vyznačující se tím, že má formu léčiva, které se podává orálně, parenterálně, rektálně nebo transdermálně.
12. 12. Doplňková výživa podle nároku 10 k prevenci tkáňových anoxických forem, kardiálních nebo nervových poruch, svalové energetické nedostatečnosti, asthenie a vyčerpanosti, abnormalit zánětlivého typu a tkáňových proliferuj ících forem.
13. 13. Léčivo podle nároku 11 k terapeutické léčbě patologických stavů vyvolaných volnými radikály, k léčbě kardiovaskulárních nebo cerebrálních poruch způsobených tkáňovou anoxií nebo stárnutím, změn krevní koagulace jako je trombóza, abnormalit zánětlivého typu, svalové energetické nedostatečnosti spojené s asthenií a vyčerpaností a jako adjuvans při léčbě proliferuj ících tkáňových forem.
14. 14. Doplňková výživa podle nároku 12 vyznačující se tím, že je ve formě tablet, pilulek, tobolek, granulátů nebo sirupů.
15. 15. Léčivo podle nároku 13 vyznačující se tím, že je ve formě tablet, pilulek, tobolek, granulátů, sirupů, čípků, fiolek nebo kapek.

    ·· ·*«« • · • · • · · • ·* «···

    4» ·· • 9 9 9

    9 9 9 9 • 9 9 9 9

    9 9 9 9 9

    99 99

    999

    - 19
16. 16. Použití kombinovaného přípravku sestávajícího z charakteristických účinných složek:

    (a) propionyl-L-karnitinu nebo jeho farmakologicky přijatelné soli; a (b) inositolfosfátu vybíraného ze skupiny sestávající z inosiitolmonofosfátu, inositoltetrafosfátu. inositolpentafosfátu a zvláště inositolhexafosfátu (IP6>.

    k přípravě doplňkové výživy nebo léčiva vhodného k prevenci a/nebo léčbě kardiovaskulárních nebo neurocerebrálních poruch způsobených chronickou nebo akutní tkáňovou anoxií, energerické nedostatečnosti, abnormalit zánětlivého typu, nervové a svalové asthenie a proliferujících tkáňových forem.
17. 17. Použití podle nároku 16 vyznačující se tím, že složka (a) dále obsahuje „karnitin“ vybíraný ze skupiny sestávající z L-karnitinu, acetyl-L-kamitinu, butyryl-L-karnitinu, valeryl-L-karnitinu, isovaleryl-L-karnitinu nebo jejich farmakologicky přijatelných solí nebo jejich směsí a složka (b) obsahuje dále inositol.