CZ20004654A3

CZ20004654A3 - Cyklická analoga somatostatinu

Info

Publication number: CZ20004654A3
Application number: CZ20004654A
Authority: CZ
Inventors: Thomas D Gordon; Y Rocky Tsao
Original assignee: Sod Conseils Rech Applic
Priority date: 1999-06-11
Filing date: 1999-06-11
Publication date: 2001-06-13

Abstract

Nové cyklické analogy somatostatinu obsahující v molekule imidazolovou skupinu představující cis amidickou vazbu, které se váží selektivně k různým somatostatinovým receptorům, a jež lze tedy použít pro výrobu farmaceutických přípravků, vhodných pro léčení celé řady onemocnění * souvisejících s činností somatostatinu v organismu.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká cyklických derivátů obsahujících imidazolovou mimetickou cisamidovou vazbu, které se selektivně váží na subtypy somatostatinových receptorů. Vynález se dále zabývá způsoby přípravy sloučenin podle tohoto vynálezu.

Dosavadní stav techniky

Somatostatin (SRIF) je cyklický tetradekapeptidový hormon obsahující disulfidický můstek mezi polohami 3 a 14 a mající schopnost inhibovat uvolňování růstového hormonu (GH) a hormonu stimulujícího thyroid, a dále mající schopnost inhibovat uvolňování insulinu a glukagonu a snižovat gastrickou sekreci. Metabolismus somatostatinu amidopeptidázami a karboxypeptidázami vede ke krátké době účinku.

Somatostatiny se váží k pěti rozdílným receptorovým subtypům (SSTR) s relativně vysokou afinitou pro každý subtyp. Menší, rigidnější analoga podle tohoto vynálezu vykazují vysokou selektivitu pro některé z receptorových subtypů. Vázání k různým typům somatostatinových subtypů je spojováno s léčením následujících nemocí. Aktivace typů 2 a 5 je spojována s potlačením růstového hormonu a konkrétněji se sekrecí GH adenomas a TSH adenomas. Aktivace typu 2 ovšem bez aktivace typu 5 je spojena s léčením adenomas vylučujících prolaktin. Další indikace spojované s aktivací somatostatinových subtypů jsou retinosa, inhibice insulinu a/nebo glukagonu a konkrétněji diabetes mellitus, hyperlipidemie, necitlivosti k insulinu, syndromu X, angiopathie, proliferativní retinopathie, Dawnova syndromu a nefropathie, inhibici vylučování žaludečních kyselin a konkrétněji peptických vředů, enterokutánních a pankreatikokutánních píštělů, syndrom podrážděných vnitřností, dumping syndromu, syndrom vodnatého průjmu, průjmu vyvolaném AIDS, průjmu vyvolaném chemoterapií, léčení rakoviny jako třeba hepatomie, inhibice angiogenese, léčení zánětlivých onemocnění jako je artritida, chronické odmítnutí štěpů, angioplastie, odmítnutí roubovaných cév a gastrointestinální krvácení. Somatostatinové agonisty mohou být také použity pro snižování tělesné hmotnosti u pacientů.

I • ..·· ··· • · · · · ···· · ·· »·· ··· ······· ·· ··· ·· ···

Bylo popsáno, že somatostatinové agonisty jsou užitečné při inhibici proliferace heliobacter pylori.

Podstata vynálezu

V jednom z aspektů tento vynález zajišťuje sloučeninu obecného vzorce I,

O

O) nebo její farmakologicky přijatelná sůl, kde Y a Z jsou každý nezávisle D- nebo L- přírodní nebo nepřírodní a-aminokyselina; n jsou nezávisle 0 až 50, za předpokladu že obě n nemohou být zároveň 0; m je 0 nebo celé číslo od 1 do 10;

a je H nebo R¹;

bjeOH, -OR¹ nebo-NR⁹R⁹;

nebo a tvoří společně s b amidickou vazbu;

R¹ je nezávisle H, (C, až C₄)alkyl nebo aryl(C, až C₄)alkyl;

R² je H nebo případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující (C, až C4)alkyl, fenyl, fenyl(C, až C4)alkyl nebo heterocyklyl(C, až C4)alkyl, kde případně substituovaná skupina je případně substituovaná s jedním nebo více substituenty, které jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny obsahující (C, až C4)alkyl, (C3 až CJcykloalkyl, -O-R⁶, -S(O)q-R⁷, -N(R⁹R⁹), -NHCO-R⁶, -NHSO2R⁹, -CO2R⁹, -CONR⁹R⁹ a-SO₂NR⁹R⁹, kde q je 0, 1, 2 nebo 3;

R³ a R⁴ jsou každý nezávisle H, halo nebo případně substituovaná skupina, vybraná ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, (C₃ až C₈)cykloalkyl, aryl a aryl(C, až C₄)alkyl, kde případně substituovaná skupina je případně substituovaná s jedním nebo více substituentů, vybraných ze skupiny obsahující OH, (Cj až C₄)alkyl, (C, až C₄)alkoxy, aryloxy, aryl(C, až C₄)alkoxy, N(R⁹R⁹), -COOH, -CONR⁹R⁹ a halo;

nebo R³ a R⁴ jsou brány společně s uhlíky, knimž jsou připojeny, za vzniku případně substituovaného arylu, kde aryl je případně substituován s jedním nebo více substituenty vybranými nezávisle ze skupiny obsahující OH, (C, až C₄)alkyl, (C, až C₄)alkoxy, aryloxy, aryl(C, až C₄)alkoxy, -NR⁹R⁹, -COOR⁵, -CONR⁹R⁹a halo;

R⁵ je při každém výskytu nezávisle H nebo je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, OH, (C, až C₄)alkoxy, aryloxy, NO₂, aryl(C, až C₄)alkoxy, NR⁹R⁹, -COOH, -CONR⁹R⁹ a halo;

R⁶ je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny obsahující H, (C, až C₄)alkyl, (C, až C₄)alkoxy, aryl(C, až C₄)alkyl, a aryl(C, až C₄)alkoxy,

R⁷ je H když q je 3 nebo R⁷ je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, aryl nebo aryl(C, až C₄)alkyl, když q je 0, 1 nebo 2, a

R⁹ je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny obsahující H, NO₂, (C, až C₄)alkyl, aryl a aryl(C, až C₄)alkyl.

Preferovaná sloučenina obecného vzorce I je sloučenina H-Trp-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-methoxyfenyl)imidazol)-Gly-OH.

V dalším aspektu vynález zajišťuje sloučeninu obecného vzorce II,

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, kde Y a Z jsou každý nezávisle D- nebo L- přírodní nebo nepřírodní a-aminokyselina; m je 0 nebo celé číslo od 1 do 10; n je pro každý výskyt nezávisle 0 až 6, bjeOH, -OR¹ nebo-NR⁹R⁹;

R¹ je při každém výskytu nezávisle H, (C, až C₄)alkyl nebo aryl(C, až C₄)alkyl;

R² je H nebo případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, fenyl, fenyl(C, až C₄)alkyl nebo heterocyklyl(C, až C₄)alkyl, kde případně substituovaná skupina

je případně substituovaná s jedním nebo více substituenty, které jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, cykloalkyl, -O-R⁶, -S(O)q-R⁷, -N(R⁹R⁹), -NHCO-R⁶, NHSO2R⁹, -CO2R⁹, -CONR⁹R⁹ a-SO2NR⁹R⁹, kde q je 0, 1, 2 nebo 3;

R³ a R⁴ jsou každý nezávisle H, halo nebo případně substituovaná skupina, vybraná ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, cykloalkyl, aryl a aryl(C, až C₄)alkyl, kde případně substituovaná skupina je případně substituovaná s jedním nebo více substituenty, vybranými ze skupiny obsahující OH, (C, až C₄)alkyl, (C, až C₄)alkoxy, aryloxy, aryl(C, až C₄)alkoxy, -N(R⁹R⁹), COOH, -CONR⁹R⁹ a halo;

R⁵ je při každém výskytu nezávisle H nebo je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl a aryl(C, až C₄)alkyl, kde případně substituovaná skupina je případně substituována s jedním nebo více substituenty, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, OH, (C, až C₄)alkoxy, aryloxy, aryl(Cj až C₄)alkoxy, -NR⁹R⁹, -COOR⁵, -CONR⁹R⁹a halo;

R⁶ je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny obsahující H, (C, až C₄)alkyl, (C, až C₄)alkoxy, aryl(C, až C₄)alkyl a aryl(C, až C₄)alkoxy,

X¹ je přírodní nebo nepřírodní D- nebo L-a-aminokyselina, kde X¹ je Phe, Nal, Trp, Tyr, Pal nebo His, jejichž aromatický kruh je případně substituován na uhlíku nebo dusíku substituentem R⁶ nebo když Ser nebo Thr je kyslík postranního řetězce případně substituován s jedním nebo více R';

X²je D- nebo L-Trp, N-methyl-D-Trp nebo N-methyl-L-Trp;

X³ je Lys, α-N-methyl-Lys nebo ε-Ν-( C, až C₄)alkyl-Lys nebo e-N-[aryl-(C, až C₄)alkyl]-Lys;

X⁴ je přírodní nebo nepřírodní D- nebo L-a-aminokyselina, kde X⁴ je Phe, Nal, Trp, Tyr nebo His, jejichž aromatický kruh je případně substituovaný na uhlíku nebo dusíku substituentem R⁸

nebo když X⁴ je Ser, Tyr nebo Thr může být kyslík postranního řetězce substituován s jedním nebo více substituenty R¹.

Vazby mezi X¹, X², X³ a X⁴ jsou amidické vazby stejně jako vazba mezi X¹ a Z a vazba mezi X⁴ a Y.

Preferovaná skupina sloučeniny obecného vzorce II, označená jako A, je taková kde každé nje 2, m je 0 nebo 1 až 5,

R¹ je u každého výskytu nezávisle H, methyl nebo aryl(C, až C₄)alkyl,

R² je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující fenyl-(C, až C₄)alkyl, a heterocyklyl-(C, až C₄)alkyl, kde případně substituovaná skupina je substituována substituentem vybraným ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl a -O-R⁶ a

R³ a R⁴ jsou každý nezávisle H, halo nebo případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl a aryl, kde případně substituovaná skupina je případně substituovaná se substituentem vybraným ze skupiny obsahující OH, (C, až C₄)alkoxy, aryloxy a halo.

Preferovaná skupina B u skupiny A sloučenin podle tohoto vynálezu je taková, kde X¹ je Phe, Nal, Trp, Tyr, Pal nebo His, kde je aromatický kruh případně substituován na uhlíku nebo dusíku substituentem R⁶, a

X⁴ je Val, Abu, Ser, Thr, Nal, Trp, Tyr nebo His, kde je aromatický kruh v Nal, Trp, Tyr a His případně substituován na uhlíku a/nebo dusíku substituentem R⁸ nebo kde X⁴ je Ser, Tyr nebo Thr, jejichž kyslík v postranním řetězci případně substituován substituentem R¹.

Preferovaná skupina C ve skupině sloučenin B je taková, kde X¹ je Phe, Trp nebo Tyr, jejichž aromatický kruh je případně substituován na uhlíku nebo dusíku substituentem R⁶,

X² je D-Trp nebo N-methyl-D-Trp,

X³ je Lys nebo a-N-methyl-Lys,

X⁴ je Val, Thr, Abu, Nal nebo Tyr, kde kyslík v hydroxylové skupině postranního řetězce u Thr a Tyr je případně substituován s R¹;

R¹ je pro každý výskyt nezávisle H, methyl nebo benzyl;

R² je případně substituovanou skupinou vybranou ze skupiny obsahující fenylmethyl a heterocyklylmethyl, kde případně substituovaná skupina je substituována substituentem vybraným ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl a -O-R⁶;

R³ je (C, až C₄)alkyl nebo případně substituovaný aryl, kde případně substituovaný aryl je substituován se substituentem vybraným ze skupiny obsahující OH, (C, až CJalkoxy, aryloxy a halo;

R⁴je H, a

R⁶ je pro každý výskyt nezávisle vybrán ze skupiny obsahující H a aryl(C, až C₄)alkoxy.

Preferovaná skupina D ve skupině sloučenin C je taková, kde X¹ je Phe, Trp, Tyr nebo Tyr(Obzl);

X⁴ je Val, Thr, Abu, Nal nebo Tyr, přičemž hydroxyskupina v Thr a Tyr je případně substituována benzylem;

Mje 0, 2 nebo 4;

R² je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující fenylmethyl nebo 3indoly lmethy 1, kde případně substituovaná skupina je případně substituovaná s -O-R⁶; a R³ je 1,1-dimethylethyl nebo případně substituovaný aryl, kde případně substituovaný aryl je případně substituován se skupinou vybranou ze skupiny obsahující OH, (C, až C₄)alkoxy a halo.

Preferovaná skupina E ze skupiny sloučenin D je taková, kde R² je fenylmethyl;

R³ je 1,1-dimethylethyl nebo případně substituovaný fenyl, kde případně substituovaný fenyl je případně substituován s OH nebo OCH₃ a

R⁶ je pro každý výskyt nezávisle vybrán ze skupiny obsahující H nebo benzylmethoxy.

Preferovanou skupinou F ze skupiny sloučenin E je:

Cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-GIy], cyklo [Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-I ys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-1 ys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyI)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidamle)Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly), cyklo [Phe-D-Trp-I ys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(1, l-dimethylethyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly), cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazoh-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly), • · · · · · • · · · · · • · · · · · · · • · · · · ·· · · ··· ·· · cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Glyj, cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-rrethoxyfenyl)imidazol (y)Abu), cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(4-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(fenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-(ř:)Ahx] a cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-(y)Abu).

Preferovanou skupinou skypiny sloučenin F, označovanou jako skupina G, je cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)irnidazoh)-Gly], cyklo [Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly , cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol}-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazoh)-Glyj, cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxy feny l)imidazol)-Gfy], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazoh)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(1, l-dimethylethyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidamle-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly] a cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-VahPhe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Glyj.

Preferovaou skupinou sloučenin G, označovanou jako skupina H, je cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Yal-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyljimidaz )-Gly], cycto [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Phe-D-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3 -methoxyfenyl)imidazol-Gly] nebo cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Yal-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-GlyJ.

Preferovanou skupinou sloučenin H, označovanou jako skupina I, je cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Lys-Va e Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], • ·· ·· · ·· • · · · · « · · ♦ · • · · · · * · • · · · · · · · * • · · · · · · ······· «· ··· fl* cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imdazol)-Gly] a cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly].

Další preferovanou skupinou sloučenin F, označovanou jako skupina J, je cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3- methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Glyj, cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-{3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(1,1 -dimethylethyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-t ys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Glyj, cyklo [Trp-D-Trp-I ys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyí)imidazol-Glyj, cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-I ys-Nal-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-( )Abu], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(4-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(fenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-(8)Ahx] a cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-( )Abu].

Preferovanou skupinou sloučenin J, označovanou jako skupina K, je cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-(y)Abu], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(4-methoxyfenyl)imidazol-Glyj nebo cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(fenyl)imidazol-Glyj.

Preferovanou skupinou sloučenin K, označovanou jako skupina L, je cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazoie-Glyj, cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-(Y)Abu], • ···· ···· · ·· ··· · · · ······· ·· ··· ·· ··· cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(4-methoxyfenyl)imidazol-Gly] a cyklo (Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(fenyl)imidazol-Gly].

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje farmaceutický přípravek obsahující účinné množství sloučeniny obecného vzorce I nebo vzorce II nebo její farmaceuticky přijatelná sůl a farmaceuticky přijatelný nosič.

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob vyprovokování účinku agonisty somatostatinového receptorů u savců, což zahrnuje podávání účinného množství sloučeniny obecného vzorce I nebo II popř. jejich farmaceuticky přijatelného nosiče zmíněným savcům.

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob vyprovokování účinku antagonisty somatostatinového receptorů u savců, což zahrnuje podávání účinného množství sloučeniny obecného vzorce I nebo II popř. jejich farmaceuticky přijatelného nosiče zmíněným savcům.

V dalším aspektu tohoto vynálezu je zajištěn způsob léčení prolaktin adenomy, diabetes mellitus, hyperlipidemie, necitlivosti k inzulínu, Syndromu X, angiopathie, proliferativní retinopathie, dawnova syndromu, neuropathie, sekrece žaludečních kyselin, peptických vředů, enterokutánní a pankreatikokutánní píštěle, syndromu podrážděných střev, Dumping syndromu, syndromu vodnatého průjmu, průjmu vyvolaném AIDS, průjmu vyvolaném chemoterapií, akutní nebo chronická pankreatida, gastrointestinální tumory vylučující hormony, rakoviny, hepatomy, angiogeneze, zánětlivá onemocnění, artritidy, chronického odmítání štěpů, angioplastie, krvácení z roubovaných cév nebo gastrointestinální krvácení u savců, což zahrnuje podávání sloučeniny obecného vzorce I nebo II nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí zmíněným savcům.

V dalším aspektu tohoto vynálezu je zajištěn způsob inhibice proliferace heliobacter pylori u savců, což zahrnuje podávání sloučeniny obecného vzorce I nebo II nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí zmíněným savcům.

V dalším aspektu tohoto vynálezu je zajištěn způsob výroby sloučeniny obecného vzorce

H-N’

R¹ χ-W.— Ν' ( «%· o=c '~v'” o

(i)

(ii)

což zahrnuje odchránění sloučenin vzorce

štěpením Prt skupiny, kde

Prt je chránící skupina aminokyselinového řetězce,

Y a Z jsou každý nezávisle D- nebo L-přírodní nebo nepřírodní ot-aminokyselina, mající případně chráněný postranní řetězec, kde H-N* je aminoskupina zN-koncové aminokyseliny definované pomocí Y a O=C* je karboxylová skupina z C-koncové aminokyseliny definované pomocí Z;

n pro každý výskyt je nezávisle 1 až 50;

a všechny další proměnné jsou stejné jako bylo definováno výše v obecném vzorci I.

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob přípravy sloučeniny vzorce

což zahrnuje

<γ-Ρη)„—Ν' . tyty

HOOC (ΦΑ. ^R λν <tf) pro sloučeniny vzorce a, tvorbu amidické vazby mezi terminální aminoskupinou poslední aminokyseliny definované pomocí Y a terminální karboxylovou skupinou poslední aminokyseliny definované pomocí Z, reakcí sloučeniny obecného vzorce a’ s peptidovým kaplovacím činidlem a aditivem; nebo pro sloučeniny vzorce b, tvorbu amidické vazby mezi terminální aminoskupinou a terminální karboxylovou skupinou poslední aminokyseliny definované pomocí Z, reakcí sloučeniny obecného vzorce b’ s peptidovým kaplovacím činidlem a aditivem; nebo pro sloučeniny vzorce c, tvorbu amidické vazby mezi terminální aminoskupinou poslední aminokyseliny definované pomocí Y a terminální karboxylovou skupinou, reakcí sloučeniny obecného vzorce c’ s peptidovým kaplovacím činidlem a aditivem;

kde Prt je chránící skupina aminokyselinového postranního řetězce;

Y a Z jsou každý nezávisle D- nebo L-přírodní nebo nepřírodní a-aminokyseliny, mající případně chráněný postranní řetězec, kde H-N* je aminoskupina zN-koncové aminokyseliny definované pomocí Y a O=C* je karboxylová skupina z C-koncové aminokyseliny definované pomocí Z;

n pro každý výskyt je nezávisle 1 až 50;

všechny ostatní proměnné jsou stejné jako ve výše uvedené definici sloučeniny obecného vzorce I.

R°

což zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce f s a-haloketonem vzorce

X’-CH(R³)CO(R⁴) v přítomnosti báze a polárního aprotického rozpouštědla až do ukončení zmíněné reakce, odpaření polárního aprotického rozpouštědla za vzniku tuhé látky, rozpuštění tuhé látky v aprotickém organickém rozpouštědle a přebytečného množství vodného NH₄OAc za vzniku roztoku a vaření roztoku a současným odstraňováním polární vrstvy za vzniku sloučeniny vzorce A, kde

Xje chránící skupina aminoskupiny,

X’ je halo, a další proměnné jsou stejné jako bylo definováno výše pro vzorec I.

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob výroby sloučeniny obecného vzorce I, což zahrnuje spojování sloučeniny obecného vzorce B s Nechráněnou aminokyselinou, (Prt)-Y, kde Nechráněná aminokyselina je ve formě jejího aktivovaného esteru, anhydridu nebo halidu kyseliny, v přítomnosti báze až do praktického

·· 0 00 0 • 0 · 0 00 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0

0 0 0 000 0 0

000 000

000 0000 00 000 0· ··· proběhnutí reakce za vzniku sloučeniny obecného vzorce C, případné odchránění aminoskupiny N_a-chráněné aminokyseliny, (Prt)-Y, s využitím obvyklých deprotekčních reakcí a opakováním kaplovací reakce s další Nechráněnou aminokyselinou až do získání požadovaného produktu obecného vzorce I;

Y je pro každý výskyt nezávisle D- nebo L-přírodní nebo nepřírodní a-aminokyselinou, mající postranní řetězec s chránící skupinou;

Prt je aminochránící skupina,

R’ je alkylester nebo benzylester, nje 1 až 100;

a všechny další proměnné jsou stejné jako ve výše uvedené definici sloučeniny vzorce I.

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, podle výše uvedené definice, zahrnující kaplování sloučeniny obecného vzorce B, aktivované jako její aktivně ester, anhydrid nebo chlorid, s N-odchráněnou peptidovou pryskyřicí (A’), připravenou způsoby dobře známými odborníkům v oboru peptidové syntézy, odchánění Nkoncové Fmoc skupiny s využitím piperidinu v DMF, TAEA nebo podobné báze a odchráněním a rozštěpením vzniklého intermediátů B’ od pryskyřice s využitím silné kyseliny. Všechny proměnné jsou stejné jako ve výše uvedené definici sloučeniny I.

r M'^Rl

Fmoc—N

⁰ B

H,N-(y)n— i pryskyřice

A’

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, zahrnující kapling sloučeniny vzorce B, aktivované jako její aktivní ester, anhydrid nebo halid, s N-odchráněnou peptidovou pryskyřicí (H), připravené způsobem dobře známým odborníkům v oboru peptidové syntézy, deprotekci N-terminální Fmoc skupiny s využitím piperidinu v DMF, TAEA nebo podobné báze, acylaci odchráněné N-terminální aminoskupiny s N_a-Fmoc-chráněné aminokyseliny x s využitím peptidové kaplovací reakce dobře známé odborníkům v oboru, opakování deprotekce bází a kaplovacího kroku podle potřeby až do zabudování dalších

99 9

9 9 ··

9 9 9

9 9 9 9

9 9 9

999 99 9*9

99 9* •9 · 9 » » • >99 • · 9 9 9 • · 9 9 ««9 9«9· 99 aminokyselin x, odchránění a odštěpení vzniklého intermediátu C’ z pryskyřice s využitím silné kyseliny. Všechny proměnné jsou stejné jako ve výše uvedené definici sloučeniny obecného vzorce I.

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, zahrnující kaplování sloučeniny obecného vzorce B, aktivované jako její aktivní ester, anhydrid nebo halid, s aminosubstituovanou pryskyřicí jako je Tris-(alkoxy)-benzylaminová pryskyřice (PAL pryskyřice), 4-(2’,4’-dimethoxyfenylaminomethyl)fenoxy pryskyřice (N-odchráněné Rink pryskyřice) nebo benzhydrylaminové pryskyřice, odchránění N-terminální Fmoc skupiny s využitím piperidinu v DMF, TAEA nebo podobné báze, acylací uvolněné N-terminální aminoskupiny s N_a-Fmoc-chráněnou aminokyselinou x s využitím peptidové kaplovací reakce dobře známé odborníkům v oboru, opakování bazické deprotekce a kaplovacího kroku podle potřeby k zahudování dalších aminokyselin x, odchránění a štěpení vzniklého intermediátu D’ od pryskyřice s využitím silné kyseliny a všechny ostatní proměnné jsou stejné jako ve výše uvedené definici sloučeniny I.

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob výroby sloučeniny obecného vzorce I, zahrnující reakci sloučeniny obecného vzorce B s bází jako je třeba Cs₂CO₃, reakci vzniklé fenolické česné soli E’ s halomethylovanou polystyrénovou pryskyřicí jako je Merrifieldova peptidová pryskyřice, odstranění Fmoc chránící skupiny s piperidinem nebo podobnou organickou bází, acylaci uvolněné N-terminální aminoskupiny s N_a-Fmoc chráněnou •· φ · · φφφ · ··· φ φφφφ φφφ • ΦΦΦ· ΦΦΦΦ ·

ΦΦ ΦΦΦ Φ · Φ

ΦΦΦ ΦΦΦΦ «· ΦΦΦ ·Φ ΦΦΦ aminokyselinou χ s využitím kaplovací reakce dobře známé odborníkům v oboru, opakování odchránění a kaplovacího kroku podle potřeby až do zabudování dalších aminokyselin x, odchránění finální chráněné peptidové sekvence na N-konci s piperidinem nebo podobnou organickou bází a na C-konci s Tfa, cyklizaci vzniklého intermediátu F’ s využitím kaplovací reakce dobře známé odborníkům v oboru a štěpení vzniklého intermediátu G’z pryskyřice s využitím silné kyseliny. Všechny proměnné jsou stejné jako ve výše uvedené definici vzorce I.

E P

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, podle výše uvedené definice, zahrnující spojení sloučeniny obecného vzorce B, aktivované jako její aktivní ester, anhydrid nebo halid, s N-odchráněnou peptidovou pryskyřicí A’, připravenou pomocí metod dobře známých v oboru, odchránění N-terminální Boc skupiny s využitím Tfa a odchránění chránících skupin v postranním řetězci a odštěpení vzniklého intermediátu H’ z pryskyřice pomocí silné kyseliny jako je HF. Všechny proměnné jsou stejné jako ve výše uvedené definici vzorce I.

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob výroby sloučeniny obecného vzorce I, zahrnující kapling sloučeniny obecného vzorce B, aktivované ve formě aktivního esteru, anhydridu nebo acylhalidu, s N-odchráněnou peptidovou pryskyřicí H, připravenou způsoby dobře známými v oboru, odchránění N-terminální Boc skupiny s využitím Tfa, acylací uvolněné N-terminální aminoskupiny s N_a-Boc-chráněnou aminokyselinou x s využitím peptidové kaplovací reakce dobře známé odborníkům v oboru, opakování Tfa deprotekce a kaplovacího • · ·«· · · · ······· ·· ··« ·» ··· kroku podle potřeby až do zavedení dalších aminokyselin x, odchránění a odštěpení vzniklého intermediátu Γ z pryskyřice s využitím silné kyseliny. Všechny proměnné jsou stejné jako ve výše uvedené definici vzorce I.

H-(x|n—N

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, zahrnující reakci sloučeniny obecného vzorce B s bází jako je Cs₂CO₃, reakci vzniklé fenolické česné soli J’ s halomethylovanou polystyrénovou pryskyřicí jako je Merrifieldova peptidová pryskyřice, odstranění Boc chránící skupiny s Tfa, acylaci uvolněné N-terminální aminoskupiny s N„-Boc chráněnou aminokyselinou x s využitím kaplovací reakce dobře známé odborníkům v oboru, opakování Tfa odchránění a kaplovacího kroku podle potřeby až do zabudování dalších aminokyselin x, odchránění finální chráněné peptidové sekvence na N-konci s Tfa a na C-konci s anorganickou bází jako je LiOH ve vodném DMF, cyklizaci vzniklého intermediátu K’ s využitím peptidové kaplovací reakce dobře známé odborníkům v oboru a štěpení vzniklého intermediátu L’z pryskyřice s využitím silné kyseliny. Všechny proměnné jsou stejné jako ve výše uvedené definici vzorce I.

V dalším aspektu tento vynález zajišťuje způsob výroby sloučeniny obecného vzorce 1, zahrnující kapling sloučeniny obecného vzorce B, aktivované ve formě jejího aktivního esteru, anhydridu nebo acylhalidu, s N-odchráněnou peptidovou 4-nitrobenzofenonoximovou pryskyřicí M’, připravenou způsoby dobře známými v oboru, odchránění N-terminální Boc skupiny • ·» ·· * ·· · «· · · · ··· · · · · • · * · « · · · • · · * · *·· ······· · · ··· ·» 94 9 s využitím Tfa, acylaci uvolněné N-terminální aminoskupiny s N_a-Boc-chráněnou aminokyselinou x s využitím peptidové kaplovací reakce dobře známé odborníkům v oboru, opakování Tfa deprotekce a kaplovacího kroku podle potřeby až do zavedení dalších aminokyselin x, odchránění N-terminální Boc skupiny s Tfa, cyklizaci a odštěpení vzniklého N’odchráněného intermediátu N’ neutralizací s vhodnou organickou bází a odstranění chránících skupin z postranního řetězce s využitím silné kyseliny jako je třeba HF. Všechny proměnné jsou stejné jako ve výše uvedené definici vzorce I.

M'

Detailní popis

Termín heterocyklus označuje v tomto vynálezu libovolný heterocyklus, který se může vyskytovat v postranním řetězci aminokyseliny. Příklady zahrnují (ovšem nejsou omezeny pouze na uvedené) takové heterocykly jako je benzothienyl, kumaryl, imidazolyl, indolyl, purinyl, pyridyl, pyrimidinyl, chinolinyl, thiazolyl, thienyl a triazolyl.

Termín aryl označuje v tomto vynálezu libovolný stabilní monocyklický nebo bicyklický uhlíkový kruh až sedmičlenný v každém kruhu, kde alespoň jeden kruh je aromatický. Příklady arylových skupin zahrnují bifenyl, indanyl, naftyl, fenyl a 1,2,3,4-tetrahydronaftalen.

V tomto vynálezu je použito několika zkratek pro aminokyselinové komponenty, určité preferované chránící skupiny, reagenty a rozpouštědla. Význam těchto zkratek je uveden v Tabulce 1.

Zkrácené označení		Význam
Aminokyseliny	His	L-Histidin
	Lys	L-Lysin
	Nal	L-3-(2-naftyl)alanin
	Phe	L-Fenylalanin

	Ser	L-Serin
	Thr	L-Threonin
	Trp	L-Tryptofan (pokud není označeno jinak)
	Tyr	L-Tyrosin
	Ahx	6-Aminohexanová kyselina
Chránící skupiny	Boc	1,1 -(Dimethylethoxy)karbonyl
	Cbz	Benzyloxykarbonyl
	Fmoc	9-F luorenylmethoxykarbony 1
	Trt	Trifenylmethyl
Rozpouštědla	DMF	N,N-dimethylformamid
	THF	T etrahydrofuran
	EtOAc	Ethylacetát
Reakční činidla	Tfa	Trifluoroctová kyselina
	NMM	4-methylmorfolín
	DIEA	Diisopropylethylamin
	TEA	Triethylamin
	TAEA	Tris(2-aminoethyl)amin
	HOAT	1 -Hydroxy-7-azabenzotriazol
	HATU	[O-(7-azabenzotrazol-1 -yl)-1,1,3,3 -tetramethyluronium hexafluorofosfát
	EDC	l-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid hydrochlorid
	DCC	Dicyklohexylkarbodiimid

In vitro stanovení

Afinita sloučeniny pro lidské receptory somatostatinových subtypů 1 až 5 (ssf, sst₂, sst₃, sst₄ a sst₅) se určuje měřením inhibice vázání [¹²⁵I-Tyr¹¹]SRIF-14 k CH0-K1 buňkám.

Lidský gen sst, receptoru byl klonován jako genomický fragment. Pst | -Xmn | segment (1,5 Kb) obsahující 5’-nepřeložený úsek (100 bp), 1,17 Kb veliký celkový kódovací úsek a 230 bp 3’-nepřeloženého úseku bylo modifikováno pomocí přídavku Bgll | linkru. Vzniklý fragment DNA byl subklonován do BamHl úseku pCMV-81 za účelem vytvoření savčího expresivního • · ·

« 9 • 9 plasmidů (poskytnuto Dr. Graeme Bellem z University v Chicagu). Klonální buněčná linie stabilně exprimující sst, receptor byl získán přenesením do CH0-K1 buněk (ATCC) s využitím srážecí metody s fosfátem vápenatým (1). Plasmid pRSV-neo (ATCC) byl zahrnut jako vybratelná značka. Klonální buněčné linie byly vybrány v RPMI 1640 médiu obsahujícím 0,5 mg/ml G418 (Gibco), kruh byl klonován a expandován do kultury.

Lidský gen sst₂ somatostatinového receptoru, izolovaný jako 1,7 Kb BamHl Hindi | genomický fragment a subklonovaný do plasmidového vektoru pGEM3Z (Promega) byl laskavě poskytnut Dr. G. Bellem z University v Chicagu). Savčí buněčný expresivní vektor byl zkonstruován vložením 1,7Kb BamH 1-Hindi | fragmentu do kompatibilního místa restrikční endonukleázy v plasmidů pCMV5. Klonální buněčná linie byla získána přenesením do CHO-K1 buněk s využitím srážecí metody s fosfátem vápenatým. Plasmid pRSV-neo byl zahrnut jako vybratelná značka.

Lidský sst, byl izolován na genomickém fragmentu a kompletní kódovací sekvence byla obsažena ve 2,4 Kb BamHl Hindll | fragmentu. Savčí expresivní plasmid pCMV-h3 byl konstruován vložením 2,0 Kb Nco| -Hindi I fragmentu do EcoRl místa pCMV vektoru po modifikaci konců a přídavku EcoRl linkrů. Klonální buněčná linie stabilně exprimující sst, receptor byla získána přenesením do CHO-K1 buněk (ATCC) s využitím srážecí metody s fosfátem vápenatým. Plasmid pRSV-neo (ATCC) byl zahrnut jako vybratelná značka. Klonální buněčné linie byly vybrány v RPMI 1640 mediu obsahujícím 0,5 mg/ml G418 (Gibco), kruh byl nakloňován a expandován do kultury.

Plasmid exprimující lidský sst₄ receptor, pCMV-ΗΧ byl poskytnut Dr. Graemem Bellem z University Chicago). Vektor obsahující 1,4 Kb Nhe| -Hne| genomický fragment kódující lidský sst₄, 456 bp 5'-nepřeloženého úseku a 200 bp 3'-nepřeloženého úseku, byl klonován do Xbal/EcoRl úseku PCMV-HX. Klonální buněčná linie exprimující sst₄ receptor byla získána přenesením do CHO-K1 buněk (ATCC) s využitím srážecí metody s fosfátem vápenatým. Plasmid pRSV-neo (ATCC) byl zahrnut jako vybratelná značka. Klonální buněčné linie byly vybrány v RPMI 1640 médiu obsahujícím 0,5 mg/ml G418 (Gibco), kruh byl klonován a expandován do kultury.

Lidský sst₅ gen byl získán pomocí PCR s využitím λ genomického klonu coby templátu a byl laskavě poskytnut Dr. Graemem Bellem z University Chicago). Vzniklý 1,2 Kb PCR fragment obsahuje 21 párů baží v 5'-nepřeloženém úseku, plně kódující úsek a 55 bp 3’nepřeloženého úseku. Klon byl vložen do EcoRl místa plasmidů pBSSK(+). Insert byl

· • 4 ·

4 regenerován jako 1,2 Kb Hindi Ixbal fragment pro subklonování do pCVM5 savčího expresivního vektoru. Klonální buněčná linie stabilně exprimující sst₅ receptor byl získán převedením do CHO-K1 buněk (ATCC) s využitím metody srážení s fosfátem vápenatým. Plasmid pRSV-neo (ATCC) byl zahrnut jako vybratelná značka. Klonální buněčné linie byly vybrány v RPMI 1640 médiu obsahujícím 0,5 mg/ml G418 (Gibco), kruh byl nakloňován a expandován do kultury.

CHO-K1 buňky stabilně exprimující jeden z lidských sst receptorů byly pěstovány v RPMI 1640 obsahujícím 10% telecího séra a 0,4 mg/ml geneticinu. Buňky byly sebrány s 0,5 mM EDTA a centrifugovány při 500 g po dobu 5 min při 4 °C. Peleta byla rozpuštěna v 50 mM Tris, pH 7,4 a dvakrát centrifugována při 500 g po dobu 5 minut při 4 °C. Buňky byly lyžovány pomocí sonifikace a centrifugace při 39000 g po dobu 10 min při 4 °C. Peleta byla opět suspendována ve stejném pufru a centrifugována při 50000 g po dobu 10 minut při 4 °C a membrány ve vzniklé peletě byly přechovávány při -80 °C.

Srovnávací inhibiční experimenty vázání [¹²⁵I-Tyr^H]SRIF-14 byly prováděny dvojitě v polypropylenové desce s 96 jamkami. Buněčné membrány (10 pg proteinu na jamku) byly inkubovány s [¹²⁵I-Tyr^H]SRIF-14 (0,05 nM) po dobu 60 min při 37 °C v 50 mM HEPES (pH 7,4), 0,2 % BSA, 5 mM MgCl₂, 200 KlU/ml Trasylol, 0,02 mg/ml bacítracinu a 0,02 mg/ml fenylmethylsulfonylfluoridu.

Vázaný [¹²⁵I-Tyr^H]SRIF-14 je od volného separován bezprostřední filtrací přes GF/C skleněnou filtrační desku (Unifilter, Packard) předem napuštěnou s 0,1% póly ethy leniminem (PEI) s využitím Filtermate 196 (Packard) buněčného sběrače. Filtry byly promyty s 50 mM HEPES při 0 až 4 °C po dobu 4 sec a určeny na radioaktivitu s využitím Packard Top Count.

Specifické vázání se získá odečtením nespecifického vázání (určeného v přítomnosti 0,1 pM SRIF-14) od celkového vázání. Vázací data jsou analyzována pomocí počítačové nelineární regresní analýzy (MDL) a jsou určeny hodnoty inhibiční konstanty Ki.

Určení toho, zda sloučenina podle tohoto vynálezu je agonistou nebo antagonistou se provádí následujícím měřením.

CHO-K1 buňky exprimující subtypy receptorů lidského somatostatinu (SRIF-14) se nasadí do kultivačních desek s 24 jamkami do RPMI 1640 média s 10% FCS a 0,4% mg/ml geneticinu. Médium se mění den před experimentem.

Buňky o koncentraci 10⁵ buněk na jamku se promyjí dvakrát s 0,5 ml čerstvého ŘPMI s

0,2% BSA doplněného s 0,5 mM (1) 3-isobutyl-l-methylxantinu (IBMX) a inkubovány po dobu min při 37 °C.

• Produkce cyklického AMP je stimulována přídavkem lmM forskolinu (FSK) po dobu 15 až 30 min při 37 °C.

• Agonistický efekt sloučeniny se měří simultánním přidáváním FSK (1 μΜ), SRIF-14 (10'¹²M až 10'⁶ M) a testované sloučeniny (10‘¹⁰ M až 10'⁵ M).

• Antagonistický efekt sloučeniny se měří simultánním přidáváním FSK (1 μΜ), SRIF-14 (1 až 10 nM) a testované sloučeniny (ΙΟ'¹⁰ M až 10‘⁵ M).

Reakční médium se odstraní a přidá se 200 ml 0,1 N HCI. Měří se cAMP s využitím radioimunostanovení (Kit FlashPlate SMP001A, New England Nuclear).

Stanovení vázání radioligandu

Membrány pro in vitro stanovení vázání receptorů byly získány homogenizací (Polytron, nastavení 6, 15 s) CHO-K1 buněk, exprimujících hsst receptorové subtypy, v ledem chlazeném 50 mM Tris-HCl a centrifugací dvakrát při 39 000 g (10 min) s okamžitým následným suspendováním v čerstvém pufru. Finální pelety byly suspendovány v 10 mM Tris-HCl pro stanovení. Pro stanovení hsstl, hsst3, hsst4, hsst5 byly alikvoty membránového preparátu inkubovány (po dobu 30 min při 37 °C s 0,05 nM [¹²⁵I-Tyr¹¹]SRIF-14 v 50 mM HEPES (pH 7,4) obsahujícím BSA (10 mg/ml); MgCl₂ (5 mM)), Trasylol (200 KlU/ml), bacitracin (0,02 mg/ml) a fenylmethylsulfonyl fluorid (0,02 mg/ml). Konečný objem pro stanovení byl 0,3 ml.

Pro stanovení hsst2 byl použit [¹²⁵I]MK-678 (0,05 nM) jako radioligand a imkubace byla prováděna 90 minut při 25 °C. Inkubace byly přerušeny rychlou filtrací přes GF/C flitry (předem napuštěné 0,3% póly ethy leniminu) s využitím Brandelova filtračního zařízení. Každá zkumavka a filtr byly poté promyty třikrát s 5 ml alikvotu ledem chlazeného pufru.

Specifické vázání bylo definováno jako celkový radioligand minus ligand vázaný v přítomnosti 1000 nM SRIF-14 (hsstl,3,4,5) nebo 1000 nM MK-678 pro hsst2.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být stanoveny in vivo pro jejich využití spojené s vázáním k somatostatinovému receptoru, včetně specifického vázání k somatostatinovým receptorovým subtypům podle metody dobře známé odborníkům v oboru, jak je například popsáno v I. Shimon, et al., „Somatostatin receptor subtype specificky in human fetal pituitary cultures“, J. Clin. Invest., vol. 99, číslo 4, str. 789-798, 1997 a C. Gilon et al., „A backbone22 cyclic receptor 5-selective somatostatin analogue: Synthesis, bíoáctívíty and núčíear magnetic resonance conformational analysis“, J. Med. Chem., 1998, 41, 919-929.

Jak je dobře známo odborníkům v oboru jsou známá a potenciální využití somaztostatinových antagonistů a/nebo agonistů četná a různorodá. Tato různá použití somatostatinu může být shrnuto následovně:

Somatostatinové agonisty lze použít k potlačení růstového hormonu a konkrétněji endomáz vylučujících GH (akromegalie) a adenomáz vylučujících TSH; léčení adenomáz vylučujících prolaktin, k inhibicí insulinu a/nebo glukagonu a konkrétněji diabetes mellitus, angiopathie, proliferativní retinopathie, Dawnova syndromu a nefropathie; inhibicí vylučování žaludečních kyselin a konkrétněji žaludečních vředů; enterokutánní a pankreatikokutánní píštěle, syndrom podrážděných střev, průjmu vyvolaném chemoterapií, akutní nebo chronická pankreatida a gastrointestinální nádory vylučující hormony; léčení rakoviny jako hepatomu; inhibicí angiogeneze; léčení zánětlivých onemocnění jako je arthritida; retinopathie; chronické odmítnutí štěpů; angioplastie, prevenci odmítnutí roubů a gastrointestinální krvácení.

Tento vynález tedy zahrnuje také přípravu farmaceutických přípravků obsahujících jako aktivní složku alespoň jednu sloučeninu podle tohoto vynálezu společně s farmaceuticky přijatelným nosičem.

Sloučenina podle tohoto 'vynálezu může být podávána orálně, parenterálně (např. íntramuskulárně, intraperitoneálně, intravenosně nebo subkutánní injekcí nebo implantátem), nasálně, vaginálně, rektálně, sublinguálně nebo místními cestami podávání a může být formulován s farmaceuticky přijatelným nosičem za vzniku dávkové formy příslušné pro každou cestu podávání.

Pevné dávkové formy pro orální podávání zahrnují kapsle, tablety, pilulky, prášky a granule. V těchto tuhých dávkových formách se aktivní sloučenina míchá alespoň s jedním inertním farmaceuticky přijatelným nosičem jako je sacharosa, laktosa nebo škrob. Tyto dávkové formy mohou také zahrnovat, jak je běžná praxe, další dodatečné substance jiné než tato inertní ředidla, např. lubrikační činidla jako je stearát hořečnatý. V případě kapslí, tablet a pilulek mohou dávkové formy také zahrnovat pufrující činidla. Tablety a pilulky mohou být dále připraveny s enterickým povlakem.

Kapalné dávkové formy pro orální podávání zahrnují farmaceuticky přijatelné emulze, roztoky, suspenze, sirupy, elixíry obsahující inertní ředidla běžně používaná v oboru, jako je třeba voda. Kromě těchto inertních rozpouštědel mohou přípravky také zahrnovat adjuvanty jako jsou smáčecí činidla, emulgační a suspenzní činidlo a sladidla, voňavé a chuťové látky.

Přípravky podle tohoto vynálezu pro parenterální podávání zahrnují sterilní vodné nebo nevodné roztoky, suspenze nebo emulze. Příklady nevodných rozpouštědel nebo vehikula jsou propylenglykol, polyethylenglykol, rostlinné oleje jako jsou olivový olej a kukuřičný olej, želatina a injektovatelné organické estery jako je ethyloleát. Tyto dávkové formy mohou také obsahovat adjuvanty jako jsou ochranné látky, smáčení, emulgační a disperzní činidla. Mohou být sterilizovány pomocí např. filtrace přes filtr zachycující baktérie, zavedením sterilizujících činidel, zavedením činidla do přípravku, ozařováním přípravku nebo zahříváním přípravku. Mohou být také vyráběny ve formě sterilní tuhé látky, která může být před použitím rozpuštěna ve sterilní vodě nebo v nějakém jiném sterilním injektovatelném médiu.

Přípravky pro rektální nebo vagunální podávání jsou s výhodou čípky, které mohou obsahovat kromě aktivní substance také excipienty jako jsou kakao vé máslo nebo čípkový vosk.

Přípravky pro nasální nebo sublinguální podávání se připravují se standardními excipienty známými v oboru.

Kromě toho sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být podávány v přípravcích s postupným uvolňováním, jako třeba v těch, které jsou popsány v následujících patentech. U. S. Patent č. 5,672,659 popisuje přípravky s postupným uvolňováním zahrnující bioaktivní činidlo a polyester, U. S. Patent č. 5,595,760 popisuje přípravky s postupným uvolňováním zahrnující bioaktivní činidlo v gelové formě. U. S. přihláška č. 08/929,383 podaná 9. září 1997 popisuje polymerní přípravky s postupným uvolňováním zahrnující bioaktivní činidlo a chitosan. U. S. přihláška č. 08/740,778 podaná 1. listopadu 1996 popisuje přípravky s postupným uvolňováním obsahující bioaktivní činidlo a cyklodextrin. U. S. přihláška č. 09/015,394 podaná 29. ledna 1998 popisuje absorbovatelné přípravky s postupným uvolňováním bioaktivního činidla. Náplně všech předcházejících patentů a přihlášek jsou zde zahrnuty jako reference.

Dávkování aktivní složky v přípravcích podle tohoto vynálezu se může lišit, je ovšem nezbytné, aby množství aktivní složky bylo takové aby bylo dosaženo vhodné dávkové formy. Vybrané dávky závisí na požadovaném terapeutickém účinku, na způsobu podávání, na délce léčení. Obecně, úrovně dávek se pohybují od 0,0001 do 100 mg na 1 kg tělové hmotnosti denně pro lidi a další živočichy, např. savce, aby bylo dosaženo požadovaného efektu.

Preferovaný rozsah je od 0,01 do 5,0 mg/kg tělové hmotnosti denně, který může být podán v jediné dávce nebo rozdělen do několika dávek.

Sloučenina podle tohoto vynálezu může být syntetizována podle následující popisu a Schématu 1. V prvním kroku se aminokyselina, ochráněná na ot-aminoskupině pomocí Boc, Cbz nebo jiné vhodné skupiny, převede na karboxylátovou sůl s anorganickou bází, například NaOH, KOH, K₂CO₃ nebo nejvýhodněji Cs₂CO₃ v polárním rozpouštědle jako jsou H₂O, DMF, THF a pod. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbylá sůl se znovu rozpustí v polárním aprotickém rozpuštědle jako je DMF a přidá se vhodný α-haloketon za míchání při teplotě -20 °C až 100 °C, nejvýhodněji při laboratorní teplotě. V míchám se pokračuje po dobu 10 minut až 24 hodin nebo až do ukončení vzniku esteru podle TLC analýzy, přičemž poté se roztok zkoncentruje za vakua při 0 °C až asi 100 °C, nejvýhodněji při 40 °C až 70 °C. Intermediát se poté znovu rozpustí v aprotickém organickém rozpouštědle jako je benzen, toluen nebo nejvýhodněji xyleny a přidá se pětinásobek až stonásobek nebo nej výhodněji kolem 15-20 násobný molární přebytek NH₄OAc. Dvoufázová směs se zahřívá k refluxu a polární vrstva se odstraní během 1 až 4 hodin pomocí azeotropického nástavce za vzniku surového intermediátu A, který může být použit surový nebo čištěný krystalizací nebo sloupcovou chromatografií.

Schéma 1

X= e.g. CBZ, BOC

1. CsjCOj/DMF/HjO

2. Br-CH(R³)CO(R⁴)

3. NH₄OAc

1. Deprotekce nebo derivatizace

2. Případná opakovaná protekce

3. Případná derivatizace

(B) (A)

1syntéza peptidu v roztoku

2. cyklizace a deprotekce

Ve druhém kroku se intermediát A odehrání s využitím katalytické hydrogenace nebo pomocí silné kyseliny jako je HF, HCI, HBr nebo Tfa. α-Aminoskupina může být potom ochráněna pomocí chránící skupiny citlivé k bázi jako je Fmoc skupina s využitím komerčně dostupného N-(9-fluorenylmethoxykarbonyloxy)sukcinimidu a K₂CO₃, například v acetonitrilu a vodě. Alternativně může být N_a-Cbz ochráněný imidazolový dusík alkylován s chránícím karboxylovým esterhalidem a odchráněna α-aminoskupina s využitím katalytické hydrogenace « · ··· · * ··· · · «· • « « » · ··· · 9 · · » « · · « • · · · · ·« za vzniku Β’ (V = H, W = -(CH₂)_mCR⁵CO₂R’, kde R’ reprezentuje alkyl nebo benzylester). Imidazolový dusík může být ochráněn s využitím komerčně dostupného trifenylmethylchloridu a terciální aminové báze jako je 4-methylmorfolin, diisopropylethylamin nebo triethylamin za vzniku Fmoc-chráněného intermediátu, který se následně odehrání na a-aminoskupině s využitím bází jako např. TAEA za vzniku intermediátu Β (V = H, W = Trt). Alternativně může být použit N-odchráněný imidazol Β” (V = H, W = H) bez další modifikace.

Ve třetím kroku se použije intermediát Β, B’ nebo B” jako kotvící skupina pro pokračování syntézy cílového peptidů vroztokové fázi. Kotvící skupina se tedy rozpustí v ethylacetátu při koncentraci kolem 50 až 200 mmol na litr a přidá se 1 až 5 molárních ekvivalentů, výhodněji 1,1 až 1,5 molárních ekvivalentů N_a-Fmoc ochráněné aminokyseliny ve formě jejího aktivovaného esteru, anhydridu nebo acylhalogenidu. Směs se míchá s druhou vrstvou slabé báze jako je vodný Na₂CO₃ nebo výhodněji vodný roztok NaHCO₃ až do proběhnutí reakce. Vodná vrstva se odstraní a přidá se kolem 1 až 10 ml/mmol nebo výhodněji kolem 2 až 4 ml/mmol TAEA nebo piperidinu a směs se míchá asi 30 minut. Roztok se potom promyje nasyceným roztokem NaCI (dvakrát s asi 30 ml/mmol) a poté se s 10% roztokem fosfátového pufru adjustuje pH roztoku na 5,5 (třikrát s 10 ml/mmol). Následující cykly se provádí podobným způsobem jako první cyklus. Finální aminokyselina může být ochráněna na N„ pomocí Boc nebo Fmoc skupinou.

Ve čtvrtém kroku se odstraní N-terminální a C-terminální chránící skupiny pomocí vodné báze nebo pomocí silné kyseliny a vzniklý peptidový intermediát může být cyklizován s využitím technik klasického peptidového kaplingu podle popisu v „The Practice of Peptide Synthesis“, Bodanszky and Bodanszky, Springer-Verlag, 1984. Peptidový intermediát se rozpustí v aprotickém rozpouštědle jako je DMF a roztok se zalkalizuje přídavkem terciálního aminové báze jako třeba 4-methylmorfolinu. Karboxylová část intermediátu se aktivuje přídavkem 1 až 6-tinásobného molámího přebytku karbodiimidu jako je DCC nebo EDC a přídavkem např. 1-hydroxy benzotriazolu. Směs se míchá při 0 °C až 100 °C, nej výhodněji při laboratorní teplotě až do úplného proběhnutí reakce.

V závěrečném kroku se chráněný peptid uvolní od chránících skupin s využitím katalytické hydrogenace nebo silných kyselin jako jsou HF, HCI, HBr nebo Tfa za vzniku finální produktu C, kde R¹ až R⁵, a, b, Y, Z a n jsou stejné jako bylo definováno výše pro sloučeninu obecného vzorce I.

• ·· ·* · 00 0 000 0 0 000 « 000

0 0 · 0 000

0 0 · 0 0 ·

000 0000 00 000 00 000

Infuzní hmotnostní spektra byla měřena na Finnigan SSQ 7000 spektrometru vybaveném s ESI (elektrospray ionizace) zdrojem. NMR data byla získána na 300 MHz Varian Unity spektrometru na vzorcích při koncentracích od 10 do 20 mg/ml v naznačených rozpouštědlech.

Alternativně mohou být sloučeniny podle tohoto vynálezu připraveny pomocí technik syntézy peptidů v pevné fázi. Tak intermediát A (X = Boc) se alkyluje s např. ethylbromacetátem a vhodnou bází jako např. K₂CO₃ v aprotickém rozpouštědle jako je třeba DMF a vzniklý ethylesterový intermediát se hydrolyzuje s využitím vodné báze, např. NaOH za vzniku intermediátu Β (V = Boc, W = -CH₂CO₂H). Intermediát Β (V = Boc, W = -CH₂CO₂H) může být aktivován s využitím známých aktivačních technik podle popisu v „The Practice of Peptide Synthesis“, Bodanszky and Bodanszky, Springer-Verlag, 1984, a může být použit přímo pro kapling k narůstajícímu peptidu na tuhém nosiči nebo intermediát Β (V = Boc, W = CH₂CO₂H) může být připojen přímo k pevnému nosiči na začátek syntézy v pevné fázi. Odchránění n-terminální Boc skupiny s např. Tfa, dovoluje pokračování peptidové syntézy za podmínek známých odborníkům v oboru syntézy peptidů.

Intermediát Β (V = Fmoc, W = -CH₂CO₂t-Bu např.) může reagovat s kyselinou například s Tfa kvůli odstranění chránící terc-butylové esterové skupiny a vzniklý intermediát Β (V = Fmoc, W = -CH₂CO₂H, např.) může být použit pro syntézu peptidu v pevné fázi pomocí Fmoc. Intermediát Β (V = Fmoc, W = -CH₂CO₂H) může být aktivován s využitím známých aktivačních technik podle popisu v „The Practice of Peptide Synthesis“, M. Bodanszky and A. Bodanszky, Springer-Verlag, 1984 a může být použit přímo pro kapling k rostoucímu peptidu na pevném nosiči. Deprotekce N-terminální Fmoc skupiny pomocí např. piperidinu dovoluje pokračování peptidové syntézy za podmínek známých odborníkům v oboru.

Syntéza cyklických analogů v pevném stavu může být také prováděna podle níže uvedeného Schématu II.

SCHÉMA II

Ε-

ν# — \

O- pryskyřice (F)

R' = alkyl, benzyl R* = Boc, Fmoc

Intermediát A (X = Boc nebo Cbz, R³ = 2-methoxyfenyl, 3-methoxyfenyl nebo 4methoxyfenyl) může reagovat s 1 M BBr3 v CH2CÍ2 po dobu 0,5 h za vzniku volného fenolu A (X = H, R³ =2-hydroxy fenyl, 3-hydroxyfenyl nebo 4-hydroxyfenyl). α-Dusík může být ochráněn s chránící skupinou citlivou na kyselinu jako je Boc skupina s využitím di-terc-butyldikarbonát a báze, např. NaOH ve směsi organického s vodou mísitelného rozpouštědla jako např. dioxan a vody. Intermediát A (X = Boc, R³ = 2-hydroxyfenyl, 3-hydroxyfenyl a 4-hydroxyfenyl) se alkyluje s ethylbromoacetátem a vhodnou bází např. K2CO₃ v aprotickém rozpouštědle, jako např. DMF za vzniku ethylesterového intermediátu D. Intermediát D se poté převeden na česnou sůl působením uhličitanu česného. Česná sůl se nechá reagovat v přebytku s Merrifieldovou pryskyřicí za vzniku intermediátu E. Intermediát E se poté podrobí opracování s použitím standardní Boc syntézy v pevné fázi nebo standardní Fmoc syntézy v pevné fázi jak bylo • 9 · · · · · · · · · · • 9 9 9· · 9 9 • · · 9 9 « * · · 9

9 9 9 9 9 9 9 • 99 9999 99 ··· «9 999 popsáno dříve za vzniku intermediátú F. Když se zkonstruuje úplná aminokyselinová sekvence C-konec se odmaskuje s využitím vhodné báze jako např. LiOH ve vodném DMF a peptid se cyklizuje s využitím standardního aktivačního protokolu, např. karbodiimid s hydroxybenzotriazolem a terciální bází jako např. diisopropylethylamin za vzniku intermediátú G. Finální odchránění postranních řetězců a odštěpení z pryskyřice se provádí přidáním velmi silné kyseliny jako např. HF za vzniku sloučenin podle tohoto vynálezu.

Tento vynáůez je dále ilustrován pomocí příkladů, které ovšem nejsou zamýšleny jako limitující.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 cyklo[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Glyj

Příklad 1 byl syntetizován podle syntetického schéma 1 jak je ukázáno dále:

*

0«

3. NH₄OAc

4. 6N HCI

1. CSjCOj/DMF/Η,Ο

2. Br-CH(R«)CO-R³

Fmoc-OSu/K,CO₃CHjCN/HjO ·»

R·

FmocN

R 'VVk

H

Trityl-Cl/NMM

CH,CI, (b)

Syntéza v roztoku

R‘

Fmoc-ÍZVX^X^-X^YVN^^ (d)

R N Trt

1. Tfa/iPr₃SiH

2. Br-(CH₂)_CHR⁵CO₂Et/ KHCO/DMF

1. TAEA/EtOAc

2. NaOH/H,0/MeOH

3. EDC/HOBt/DMF

HYPd na uhlíku HOAc

O

(g)

O (f)

Krok a: 2-(l-(S)-amino-2-fenylethyl)-4-(3-methoxyfenyl)imidazol

Cbz-(L)-Fenylalanin (10,0 g, 33,4 mmol) a Cs₂CO₃ (5,44 g, 16,7 mmol) bylo smícháno se směsí 2:1 DMF:voda (75 ml) a směs byla míchána až do zhomogenizování. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku, zbytek byl rozpuštěn v DMF (70 ml) a bylo přidáno 7,65 g 2brom-3’-methoxyacetofenonu (33,4 mmol) ve 30 ml DMF. Směs byla míchána 30 min při laboratorní teplotě a poté byla zkoncentrována za sníženého tlaku. Vzniklý ketoester se rozpustil ·· *· · ·· · • · ♦ ♦ ·· < · ·· φφφφ φ φ · • •φφ φ·»· >

φ φφφ φφ· φφφ φφφφ φφ _φφ v xylenu (150 ml) a CsBr byl odfiltrován. Pak byl přidán acetát amonný (40,0 g, 0,52 mol) a směs byla zahřívána k varu 2 h s odstraňováním přebytečného AcONH₄ a vzniklé vody pomocí azeotropického nástavce. Reakce byla ochlazena a promyta nasyceným roztokem NaHCO₃ (50 ml) a poté nasyceným roztokem NaCl (50 ml). Xylenová vrstva byla sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována zkoncentrována ve vakuu.

Zbytek byl rozpuštěn ve 30 ml dioxanu, byla přidána 6N HCI (115 ml) a směs byla zahřívána k refluxu asi 3 h. Roztok byl zkoncentrován za sníženého tlaku a triturován s diethyletherem (4 x 100 ml). Zbytek byl sušen za vakua do konstantní hmotnosti za vzniku 12,15 g (99 %) intermediátu la, hmotnostní spektrum 294,2 MH⁺.

Krok b: 2-(l -(S)-((Fluorenylmethoxy)karbonyl)amino-2-fenylethyl)-4-(3-methoxyfenyl)imidazol

Intermediát la (11,8 g, 32,2 mmol) byl rozpuštěn ve 200 ml směsi acetonitril:voda (1:1) a poté byl v dávkách přidán opatrně K₂CO₃ (5,38 g, 39 mmol). Pak byl přidán 9-fluorenylmethy 1sukcinimidylkarbonát a vzniklá směs byla intenzivně míchána 20 minut. Produkt byl extrahován s ethylacetátem (100 ml) a ethylacetátová vrstva byla promyta s vodou (2 x 50 ml). Ethylacetátová vrstva byla sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována a zkoncentrována za vakua. Produkt byl čištěn flash chromatografií na silikágelu (150 g) s elučním rozpouštědlem 2:2:l/CH₂Cl₂:hexan:EtOAc a poté l:l/hexan:EtOAc. Frakce produktu byly spojeny a zkoncentrovány za vakua za vzniku intermediátu lb ve formě světle žluté pěny, 14,77 g (85 %). Hmotnostní spektrum 516,3 MH⁺, NMR (300 MHz, DMSO-d₆), 11,8-12,0 (IH, s), 7,8-8,0 (3H, d), 7,6-7,8 (2H, d), 7,5 (IH, s), 7,1-7,5 (12H, m), 6,7-6,9 (IH, d), 4,8-5,0 (IH, m), 4,1-4,3 (3H, m), 3,7-3,9 (3H, s), 3,0-3,4 (2H, m).

Krok c: 2-(l-(S)-((Fluorenylmethoxy)karbonyl)amino-2-fenylethyl)-4-(3-methoxyfenyl)-ltrifenylmethylimidazol

Intermediát lb (13,9 g, 26,9 mmol) byl rozpuštěn v 50 ml CH₂C1₂ pod atmosférou N₂, pak byl přidán 4-methylmorfolín (2,96 ml, 26,9 mmol) a chlortrifenylmethan (7,51 g, 26,9 mmol) a roztok byl míchán při laboratorní teplotě 45 minut. Tuhé látky byly odstraněny filtrací a filtrát byl čištěn flash chromatografií na silikágelu (300 g) s využitím směsi 70:30/hexan:EtOAc jako eluentu. Frakce obsahující produkt byly spojeny a zkoncentrovány za vakua za vzniku intermediátu lc ve formě pěny, 18,0 g (88 %), NMR (300 MHz, DMSO-d₆), 7,84-7,95 (2H, d),

7,7-7,8 (IH, d), 7,6-7,7 (IH, d), 6,7-7,5 (29H, m), 4,3-4,5 (IH, m), 3,75-3,95 (2H, m), 3,75-3,85 (3H, s), 3,6-3,7 (IH, m), 2,65-2,85 (IH, dd), 2,05-2,2 (IH, m).

Krok d: 2-(l-(S)-((Fmoc-Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)amino-2-fenylethyl)-4-(3-methoxyfenyl)-1 -(trifenylmethyl)imidazol

Intermediát lc (1,89 g, 2,50 mmol) byl rozpuštěn ve 40 ml ethylacetátu, pak bylo přidáno 9 ml tris(2-aminoethyl)aminu a směs byla intenzivně míchána asi 30 min. Ethylacetátová vrstva byla promyta nasyceným roztokem NaCl (2 x 120 ml) a poté bylo pH adjustováno s 10 % fosfátovým pufrem na pH = 5,5 (3 x 40 ml). Ethylacetátová vrstva byla míchána přes noc s nasyceným roztokem NaHCO₃ (40 ml) a byl přidán Fmoc-Val-F (1,02 g, 3,00 mmol). Reakční směs byla míchána 1 h a vodná vrstva byla odstraněna.

Intermediát byl poté sekvenčně odchráněn a kaplován s Fmoc-Lys(Cbz)-Osu, Fmoc-DTrp-Osu a Fmoc-Tyr(OBzl)-Osu podobným způsobem jako bylo popsáno výše pro Fmoc-Val-F cyklus. Ethylacetátová vrstva byla naředěna s 1,5 násobkem objemu hexanu a aplikována na kolonu silikagelu pro čištění pomocí flash chromatografie s využitím nejdříve směsi 50:30:20/CH₂Cl₂:EtOAc:hexan a poté směsí 4:l/EtOAc:hexan jako eluentu. Frakce s obsahem produktu byly spojeny a zkoncentrovány za vakua za vzniku intermediátu ld ve formě bílé pěny, 1,90 g (46 %). Hmotnostní spektroskopie 1581,2 MNa⁺, 1559,5 MH⁺.

Krok e: l-((2-Ethoxy-2-oxo)ethyl)-2-(l-(S)-((Fmoc-Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)amino-2fenylethyl)-4-(3-methoxyfenyl)imidazol

Intermediát ld (519 mg, 0,33 mmol) byl rozpuštěn v 10 ml Tfa obsahující i-Pr₃SiH (205 pl, 1,0 mmol) a směs byla míchána 15 minut. Intermediát byl vysrážen přidáním diethyletheru (60 ml) a zfiltrován. Hmotnostní spektroskopie: 1316 MH⁺. Intermediát byl rozpuštěn ve 3 ml DMF, pak byl přidán KHCO₃ (198 mg, 2,0 mmol) a ethylbromacetát (721 pl, 6,5 mmol) a směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě. Směs byla zkoncentrována za vakua, rozpuštěna v 10 ml CH₂C1₂ a byla promyta s 10 ml vody. Dichlormethanová vrstva byla sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována a zkoncentrována za vakua za vzniku surového intermediátu le (540 mg), který byl použit bez dalšího čištění.

Krok f: cyklo[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Glyj ·· ·· · ·· · • · · ·· ···· • · · · · · · • · · · · · · · · • · ·»· · · · ··· ···· ·· ··· ·· ··«

Intermediát le (540 mg, 0,33 mmol) byl suspendován v 10 ml ethylacetátu, byl přidán 1 ml tris(aminoethyl)aminu a směs byla intenzivně míchána 30 minut. Pak byl přidán ethylacetát (10 ml) a roztok byl promyt nasyceným roztokem NaCl (2 x 25 ml) a poté bylo upraveno pH pomocí 10% fosfátového pufru na hodnoty 5,5 (3x10 ml). Intermediát byl vy srážen přídavkem hexanu (40 ml) a roztok byl dekantován. Zbytek byl rozpuštěn v 10 ml méthanolu a míchán přes noc při laboratorní teplotě s 2,5 N NaOH (0,5 ml). Směs byla naředěna až do zákalu s vodou a pH bylo adjustováno na pH = 6,7. Odchráněný intermediát byl odfiltrován a sušen ve vakuu. Tuhá látka se rozpustila v DMF (25 ml) a bylo přidáno DCC (340 mg, 1,65 mmol) a HOBt (252 mg, 1,65 mmol). Směs byla míchána 2 h při laboratorní teplotě a poté zkoncentrována za sníženého tlaku. Surový produkt byl čištěn flash chromatografií na silikagelu s využitím AcOEt jako eluentu. Frakce obsahující produkt byly spojeny a zkoncentrovány ve vakuu za vzniku intermediátu lf ve formě skla (180 mg, 48% z intermediátu ld). Hmotnostní spektroskopie:

1134,5 MH⁺.

Krok g: cyklo[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Intermediát lf (180 mg, 0,16 mmol) byl rozpuštěn v 10 ml kyseliny octové obsahující

10% paladium na uhlíku (24 mg) a směs byla třepána pod atmosférou H₂ (25 psi) při laboratorní teplotě po dobu 8 h. Katalyzátor byl poté zfiltrován a zbytek zkoncentrován ve vakuu. Surová směs byla složena ze zcela odchráněného materiálu (jak CBz tak i benzylethery byly odstraněny) a z částečně odchráněného materiálu (Cbz odsytraněn, benzylether zůstává). Směs byla čištěna preparativní HPLC na koloně VYDAC® Protein & Peptide C_]8 (The Nést Group lne., Southborough, MA) s využitím gradientu 20 % až 70 % CH₃CN/0,l% Tfa během 55 minut. 4isté frakce více polárního píku byly spojeny, zkoncentrovány a lyofilizovány (2 x 10 ml 0,5% HCI, potom 1 x 10 ml voda) za vzniku titulní sloučeniny z Příkladu 1 (1,45 mg, 29%). Hotnostní spektrometrie: 910,4 MH⁺.

Příklad 2 cyklo[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 2 byl připraven podle syntetického schématu 1 v Příkladu 1, ovšem s využitím příslušných aminokyselin. Čisté frakce méně polárního píku z čištění 1 g látky byly spojeny, zkoncentrovány a lyofilizovány (2 x 10 ml 0,5% HCI, potom 1 x 10 ml voda) za vzniku produktu z Příkladu 2, 33 mg (21 %). Hmotnostní spektroskopie: 1000,4 MH⁺.

AA ·· · AA A • A · ·· AAAA • · · · A A A • AAA AAAA A

A AAA AAA

AAA AA AAA AA AAA

Příklad 3 cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 3 byl připraven podle syntetického schématu 1 v Příkladu 1, ovšem s následujícími rozdíly:

Krok d: 2-(l-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)amino-2-fenylethyl)-4-(3-methoxyfenyl)-l(trifenylmethyl)imidazol

Intermediát lc (757 mg, 1,0 mmol) byl rozpuštěn ve 20 ml AcOEt, pak byl přidán tris(2aminoethyljamin (3 ml) a směs byla intenzivně míchána půl hodiny. Ethylacetátová vrstva byla promyta nasyceným roztokem NaCI (2 x 60 ml) a poté bylo pomocí 10% fosfátového pufru nastaveno pH směsi na 5,5 (3 x 20 ml). Ethylacetátová vrstva byla míchána přes noc s nasyceným roztokem NaHCO₃ (20 ml) a bylo přidáno Fmoc-Val-F (825 mg, 2,33 mmol). Reakce byla míchána 1 h a vodná fáze byla odstraněna.

Intermediát byl postupně odchráněn a kaplován s Fmoc-Lys(Cbz)-OSu, Fmoc-D-TrpOSu a Fmoc-Trp-OSu podobným způsobem jako bylo popsáno pro Fmoc-Val-F cyklus. Ethylacetátová vrstva byla naředěna s 1,5 násobkem objemu hexanu a byly podrobena sloupcové chromatografii nejdříve s využitím 50:30:20/CH₂Cl₂:EtOAc:hexan a poté 4:l/EtOAc jako eluentu. Frakce obsahující produkt byly spojeny a zkoncentrovány za sníženého tlaku za vzniku intermediátu 3d ve formě bílé pěny, 1,02 g, (68 %). Hmotnostní spektroskopie: 11492, 0 (MNa⁺), 1514,2 (MH⁺).

Krok e: l-((2-Ethoxy-2-oxo)ethyl)-2-(l-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)amino-2-fenylethy 1)-4-(3 -methoxyfenyl)-1 -(trifeny Imethy ljimidazol

Intermediát 3d (1,00 g, 0,67 mmol) byl rozpouštěn ve směsi CH₂C1₂ (10 ml), Tfa (1 ml) a i-Pr₃SiH (205 μΐ, 1,0 mmol) a směs byla míchána 20 minut. Směs l:l/Et₂O:hexan (100 ml) byla přidána a intermediát byl odfiltrován a sušen (0,88 g). Intermediát byl rozpuštěn v 10 ml DMF, pak byl přidán KHCO₃ (200 mg, 2,00 mmol) a ethylbromacetát a reakčni směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě. Směs byla poté zkoncentrována za sníženého tlaku za vzniku intermediátu 3e, který byl dále použit bez dalšího čištění. Hmotnostní spektrometrie: 1335,7 MH⁺.

Krok f: cyklo[Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Intermediát 3e (surový, 0,67 mmol) byl rozpuštěn v 10 ml methanolu a míchán 45 minut při laboratorní teplotě s 2,5 N NaOH (1,0 ml). Směs byla naředěna vodou až do zákalu a pH bylo nastaveno na hodnotu 6,9. Rozpouštědlo bylo zdekantováno a zbytek byl triturován s vodou za • ·· ·· · ·· · ·· * · · · ·· · · ·· • · · « · · · · • · · · ♦ · ♦ · · · • · · · · · · · ······· ·· 999 «· »«· vzniku světle žlutého prášku (650 mg, hmotnostní spektrometrie: 1085,5 MH⁺). Prášek (629 mg) byl rozpuštěn ve 20 ml DMF, bylo přidáno NMM (220 μΐ, 2,0 mmol), EDC (192 mg, 1,0 mmol) a HOBt (153 mg, 1,0 mmol). Směs byla míchána při laboratorní teplotě 2 hod a poté zkoncentrována ve vakuu. Surový produkt byl rozpuštěn v 15 ml CH2C12 a promyt s 10% fosfátovým pufrem^- (adjustovaným na pH = 5,5). Dichlormethanová vrstva byla sušena nad Na2SO₄, zfiltrována a zakoncentrována na 2 ml. Pak byl přidán ethylether kvůli vysrážení produktu, který byl odfiltrován a sušen za vzniku intermediátu 3f (440 mg, 71%). Hmotnostní spektrum: 1067,4 MH⁺.

Krok g: cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Intermediát 3f (200 mg, 0,19 mmol) byl rozpuštěn v 15 ml kyseliny octové obsahující

10% plladium na uhlíku (40 mg) a směs byla třepána pod atmosférou vodíku (25 psi) 2 dny při laboratorní teplotě. Katalyzátor byl poté odfiltrován a zbytek byl zkoncentrován ve vakuu. Surová směs byla čištěna s využitím preparativní HPLC na C₁₈ koloně (Rainin Microsorb™ 80220-C5) s využitím gradientu 20 % až 70 % CH₃CN/0,l% Tfa během 55 minut. Drzhý průchod s využitím gradientu 30% až 50 % CH₃CN/0,l% Tfa během 55 minut byl o požadováno pro získání dobré separace. Čisté frakce byly spojeny, zkoncentrovány a lyofilizovány (2 x 10 ml 0,5% HCI, potom 1 x 10 ml voda) za vzniku titulní sloučeniny Příkladu 3, 26 mg, (14%). Hmotnostní spektroskopie: 933,5 MH⁺.

Příklad 4:

cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 4 byl připraven podle syntetického schématu 1 podobně jako bylo popsáno v Příkladu 1 s následujícími rozdíly:

Krok g: cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly]

Intermediát 3f (150 mg, 0,14 mmol) byl rozpuštěn ve 12 ml CH₂C1₂ a roztoku BBr₃ v hexanu pod dusíkovou atmosférou. Vzniklá kaše byla míchána 0,5 h. Pak byl přidán methanol (10 ml) a směs byla zkoncentrována ve vakuu. Surová směs byla čištěna preparativní HPLC na C_lg koloně s využitím gradientu od 24% do 48% CH₃CN/0,2/ NH₄OAc během 50 minut. Čisté frakce byly spojeny, zakoncentrovány a lyofilizovány (2 x 10 ml vody) za vzniku titulní sloučeniny z Příkladu 4, 40 mg (29%). Hmotnostní spektroskopie: 919,4 MH⁺.

Příklad 5 • «0 00 0 »0 0 ·· · · 0 · 00 0 0 00 • 0 0*0 0 0 0 • · 0 · · 0 0·· 0 •0 000 000 • 00 0000 00 000 00 00· cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Glyj

Příklad 5 byl připraven podle schématu 1 podobným způsobem jako bylo popsáno pro Příklad 3 s tou výjimkou, že Fmoc-Thr(OBzl)-F byl použit namísto Fmoc-Val-F v kroku d. Hmotnostní spektrometrie: 1025,5 MH⁺.

Příklad 6 cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 6 byl připraven podle schématu 1 podobným způsobem jako bylo popsáno pro Příklad 4 s tou výjimkou, že intermediát 5f, cyklo[Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Thr(Obzyl)-Phe Ψ (4-(3methoxyfenyl)imidazol)-Gly] byl použit namísto intermediátu 3f v kroku g. Hmotnostní spektroskopie: 1025,5 MH⁺.

Příklad 7 cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 7 byl připraven podle schématu 1 podobným způsobem jako bylo popsáno pro Příklad 3 stou výjimkou, že Fmoc-Abu-F byl použit namísto Fmoc-Val-F v kroku d a nebyla provedena cyklizace karbodiimidem a HoBt v kroku 3f. Hmotnostní spektrometrie: 937,3 MH⁺.

Příklad 8 cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 8 byl připraven podle schématu 1 podobným způsobem jako bylo popsáno pro Příklad 3 s tou výjimkou, že Fmoc-Abu-F byl použit namísto Fmoc-Val-F v kroku d. Hmotnostní spektrometrie: 919,5 MH⁺.

Příklad 9 cyklo[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(1,1 -dimethylethyl)imidazol)-Gly]

Příklad 9 byl připraven podle schématu 2.

• ·· • · · fl fl ♦	··	• ·« •	• fl	• • « fl
• fl	• •	• fl	• •
• ·	•	•	•	•	fl	•
• flfl flflfl*		• fl	flflfl	• ·		• flfl

SCHÉMA 2

BocNH

Ř' ,ν*

syntéza v roztoku

R*

Fmoc-(Z)_n-X‘

(h)

R

Br(CH₂)_OTCHR⁵CO₃Et/

KHCO₃/DMF

Krok a: 2-( 1 -(S)-amino-2-fenylethyl)-4-( 1,1 -dimethylethyl)imidazol

Boc-(L)-fenylalanin (5,31 g, 20,0 mmol) a Cs₂CO₃ (3,26 g, 10,0 mmol) byly smíchány ve směsi 1:1/DMF;H₂O (50 ml) a směs byla míchána až do získání homogenní směsi. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a zbytek byl rozpuštěn v 50 ml DMF a byl přidán 1chlorpinakolon (2,63 ml, 20,0 mmol). Směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě a potom zkoncentrována za sníženého tlaku. Vzniklý ketoester byl rozpuštěn ve 100 ml xylenu a CsBr byl odfiltrován. Pak byl ke směsi přidán acetát amonný (25,0 g, 0,33 mol) a směs byla

• ··	··	•	99
• · 9	9	9	• 9	9	9	99
• 9	9 ·	•	9	9
• · *	•	•	•	• 9	9
• 9	•	9	9	t	9
99 9999	99	999	99	99

zahřívána 2 h k refluxu za současného odstraňování přebytečného AcONH₄ a uvolněné vody pomocí azeotropického nástavce. Reakce byla ochlazena a promyta s nasyceným roztokem NaHCO, (50 ml), sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována a zkoncentrována ve vakuu. Čištění ochráněného intermediátú bylo provedeno pomocí flash chromatografie na silikagelu s využitím směsi 80:20/hexan:EtOAc jako eluentu za vzniku 3,45 g (50 %) krystalického intermediátú (Hmotnostní spektrometrie: 344,3 MH⁺). Tento intermediát byl rozpuštěn ve 30 ml methanolu a byla přidána koncentrovaná kyselina sírová (5,0 ml) a směs byla míchána asi 3 h. Roztok byl zakoncentrován ve vakuu a zbytek byl srážen z THF a diethyletheru. Tuhá látka byla sušena pod vakuem za vzniku 1,89 g (95 %) intermediátú 9a. NMR (300 MHz, DMSO-d₆), 8,5-10,5 (3H, široký s), 7,3-7,4 (1H, s), 7,15-7,35 (3H, m), 7,0-7,1 (2H, m), 4,9-5,1 (1H, t), 3,5-3,65 (2H, d), 1,2-1,3 (9H, s).

Krok h: 2-(l-(S)-((Fmoc-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(Obzl))-amino-2-fenylethyl)-4-( 1,1-dimethylethyl)-lH-imidazol

Intermediát 9a (790 mg, 2,50 mmol) byl rozpuštěn ve 40 ml AcOEt, byl přidán tris(2aminoethyl)amin (9 ml) a směs byla intenzivně míchána po dobu 0,5 hod. Ethylacetátová vrstva byla promyta s nasyceným roztokem NaCl (2 x 120 ml) a poté s 10% fosfátovým pufrem adjustovaným na pH = 5,5 (3 x 40 ml). Ethylacetátová vrstva byla míchána s nasyceným roztokem NaHCO₃ (40 ml) a byl přidán FmocTyr(OBzl)-OSu (1,02 g, 3,00 mmol). Reakce byla míchána 1,5 h a vodná vrstva byla odstraněna.

Intermediát byl postupně odchráněn a kaplován s Fmoc-Lys(Cbz)-OSu, Fmoc-D-TrpOSu a Fmoc-Phe-OSu podobným způsobem jako bylo popsáno výše pro Fmoc-Tyr(OBzl)-OSu cyklus. Ethylacetátová vrstva byla aplikována na sloupec silikagelu pro čištění pomocí flash chromatografie s využitím 1% kyselina octová/EtOAc jako eluentu. Frakce obsahující produkt byly spojeny a zkoncentrovány za vakua. Surový produkt byl rozpuštěn v AcOEt, vysrážen přídavkem hexanu a zfiltrován. Tuhá látka byla sušena ve vakuu za vzniku intermediátú 9h, 1,67 g (52%). Hmotnostní spektroskopie: 1280,7 MH⁺.

Krok e: 4-(l,l-dimethylethyl)-2-(l-(S)-((Fmoc-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(Obzl))-amino-2-fenylethyl)-1 -(2-ethoxy-2-oxoethyl)imidazol

Intermediát 9h (128 mg, 0,10 mmol) byl rozpuštěn ve 2 ml DMF, byl přidán K₂CO₃ (35 mg, 0,25 mmol) a ethylbromacetát (28 pl, 0,25 mmol) a směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě. Směs byla zkoncentrována ve vakuu, rozpuštěna v 10 ml AcOEt a promyta vodou (10 ml). Ethylacetátová vrstva byla sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována a zkoncentrována ve vakuu za vzniku surového intermediátu 9e (126 mg, 92%), který byl použit bez dalšího čištění.

Krok f: cyklo[Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Intermediát 9e (116 mg, 0,085 mmol) byl suspendován ve 2 ml AcOEt a byl přidán tris(aminoethyl)amin (0,5 ml) a směs byla míchána intenzivně po dobu 0,5 hod. Pak byl přidán ethylacetát (10 ml) a roztok byl promyt nasyceným roztokem NaCI (2x5 ml) a poté s 10% roztokem fosfátového pufru (pH = 5,5, 3x5 ml). Intermediát byl vysrážen přídavkem 40 ml hexanu a intermediát byl odfiltrován (76 mg). Zbytek byl rozpuštěn ve 2 ml methanolu a míchán přes noc při laboratorní teplotě s 2,5 N NaOH (0,1 ml). Směs byla naředěna až do zákalu s vodou a pH bylo adjustováno na hodnotu 6,0. Odchráněný intermediát byl odfiltrován a sušen ve vakuu. Tuhá látka byla rozpuštěna v DMF (20 ml) a byl přidán DCC (126 mg, 0,60 mmol) a HOBt (90 mg, 0,60 mmol). Směs byla míchána 6 h při laboratorní teplotě a poté zkoncentrovány ve vakuu. Poté byl rozpuštěn v 5 ml EtOAc a promyt s nasyceným roztokem NaHCO₃ (1x5 ml) a nasyceným roztokem NaCI (5 ml). Směs byla sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována a zkoncetrována za vakua za vzniku intermediátu 9f. Hmotnostní spektroskopie: 1098,5 MH⁺.

Krok g: cyklo[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(1, l-dimethylethyl)imidazol)-Gly]

Intermediát 9f (surový, 0,085 mmol) byl rozpuštěn v Tfa (9,4 ml) obsahující i-Pr₃SiH a vodu (0,5 ml), směs byla míchána 20 minut a poté zkoncentrována ve vakuu. Surová směs byla čištěna preparativní HPLC na C₁₈ koloně s využitím gradientu 30% až 60% CH₃CN/0,l% Tfa během 50 minut. Druhý průchod s využitím gradientu 32% až 80% CH₃CN/0,2% NH₄OAc během 50 minut byl požadován pro dobrou separaci. Čisté frakce byly spojeny, zkoncentrovány a lyofilizovány (2 x 10 ml 0,5% HCI, poté 1 x 10 ml vody) za vzniku titulní sloučeniny z Příkladu 9, 9 mg (10 %). Hmotnostní spektroskopie: 998,4 MH⁺.

Příklad 10 cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxy feny l)imidazol)-Gly]

Příklad 10 byl připraven podle schématu 1 podobným příkladem jako v Příkladu 3 stou výjimkou, že Fmoc-Phe-Osu byl použit namísto Fmoc-Trp-F v kroku d. Hmotnostní spektroskopie: 894,4 MH⁺.

Příklad 11 cyklo [Phe-D-Trp-Lys-T yr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3 -methoxyfenyl)imidazol)-Gly] • ·· ·· · *« * ··· · b ··· · · · · • · · · · ··· • · · · * · · · · · • · ··· ··· ··· ···· ·· ··» ·· ··· Příklad 11 byl připraven podle Schématu 1 podobným způsobem jako bylo popsáno v Příkladu 3 s tou výjimkou, že byl použit Fmoc-Phe-OH namísto Fmoc-Trp-F a FmocTyr(OBzl)-OH byl použit namísto Fmoc-Val-F v kroku d. Fmoc-Tyr(OBzl)-OH byl aktivován s DCC a komerčně dostupným HOAt. Surová směs v kroku g se skládala ze zcela odchráněného materiálu (jak Cbz a benzylether byly odstraněny) a částečně odchráněného materiálu (Cbz byla odstraněna, benzylether zůstal). Méně polární pík vzniklý částečnou deprotekcí poskytl titulní sloučeninu z Příkladu 11. Hmotnostní spektroskopie: 1048,5 MH⁺.

Příklad 12 cyklo[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 12 byl připraven podle Schématu 1 podobným způsobem jako bylo popsáno v Příkladu 3 s tou výjimkou, že byl použit Fmoc-Phe-OH namísto Fmoc-Trp-F a FmocTyr(OBzl)-OH byl použit namísto Fmoc-Val-F v kroku d. Fmoc-Tyr(OBzl)-OH byl aktivován s DCC a komerčně dostupným HOAt. Surová směs v kroku g se skládala ze zcela odchráněného materiálu (jak Cbz a benzylether byly odstraněny) a částečně odchráněného materiálu (Cbz byla odstraněna, benzylether zůstal). Více polární pík vzniklý částečnou deprotekcí poskytl titulní sloučeninu z Příkladu 12. Hmotnostní spektroskopie: 958,4 MH⁺.

Příklad 13 cyklo[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Glyj

Příklad 13 byl připraven podle Schématu 1 podobným způsobem jako bylo popsáno v Příkladu 4 stou výjimkou, že intermediát llf, cyklo[Phe-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3methoxyfenyl)imidazol)-Gly] byl použit namísto intermediátu 3f v kroku g. Hmotnostní spektrometrie: 944,6 MH⁺.

Příklad 14 cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 14 byl připraven podle Schématu 2 podobným způsobem jako bylo popsáno v Příkladu 9 s následujícími rozdíly:

Krok h: 2-(l-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(Bzl))-amino-2-fenylethyl)-4-(3methoxy fenyl)-1 -(trifenylmethyl)imidazol • ·· ·» · *· · «· · · · · ·· ···· • · · · · ··· • · · · · · * · ♦ · • · ··· · · * ··· ···· ·· ··· ··

Peptidová syntéza byla provedena podobným způsobem jako v kroku 9h s tou výjimkou, že byl použit Fmoc-Trp-OSu namísto Fmoc-Phe-OSu, Fmoc-Lys(Boc)-OSu byl použit namísto Fmoc-Lys(Cbz)-OSu a Fmoc-Tyr(Bzl)-OSu byl použit namísto Fmoc-Val-OSu. Výzěžek = 783 mg (57 %). Hmotnostní spektroskopie: 1370,6 MH⁺.

Krok e: 1 -((2-Ethoxy-2-oxo)ethyl)-2-(l-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl))-amino-2fenylethyl)-4-(3-methoxyfenyl)-imidazol

Alkylace intermediátu 14h byla provedena podobným způsobem jako v reakci 9h, výtěžek = 640 mg (80 %), hmotnostní spektroskopie: 1456,3 MH⁺.

Krok f: cyklo[Trp-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Intermediát 14e (640 mg, 0,44 mmol) byl rozpuštěn v 15 ml methanolu a byl přidán 2,5N NaOH (1 ml, 2,5 mmol). Směs byla míchána 0,5 hod a poté bylo pH adjustováno na hodnotu 7,0 pomocí 5% roztoku HCI. Methanol byl odstraněn za sníženého tlaku a vodná vrstva byla dekantována. Zbytek byl dobře usušen za sníženého tlaku a poté rozpuštěn v 15 ml DMF. Byl přidán DCC (206 mg, 1,0 mmol) a HOBt (153 mg, 1,0 mmol) a směs byla ponechána míchat přes noc. Reakce byla zkoncentrována ve vakuu, rozpuštěna v 10 ml AcOEt a promyta dvakrát s 10% roztokem fosfátového pufru, pH = 5,5. Ethylacetátová vrstva byla aplikována na sloupec silikagelu a produkt byl eluován s ethylacetátem. Frakce obsahující produkt byly spojeny a zkoncentrovány za vzniku 240 mg (46%) intermediátu 14f.

Krok g: cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Intermediát 14f (240 mg, 0,20 mmol) byl rozpuštěn v 10 ml CH₂C1₂ a byla přidána Tfa (10 ml) obsahující i-Pr₃SiH (205 μΐ, 1,0 mmol). Směs byla míchána 15 minut při laboratorní teplotě. Dichlormethanová vrstva byla odpařena za sníženého tlaku a surový produkt byl vysrážen přídavkem etheru. Rozpouštědla byla dekantována a zbytek byl dále čištěn pomocí preparativní HPLC na C₁₈ koloně s využitím gradientu 30% až 50% CH₃CN/0,l% Tfa během 55 minut. Čisté frakce byly spojeny, zkoncentrovány a lyofilizovány (1 x 10 ml 0,5% HCI, potom 1 x 10 ml vody) za vzniku titulní sloučeniny z Příkladu 14, 25 mg (11%). Hmotnostní spektroskopie: 1087,4 MH⁺.

Příklad 15 cyklo[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 15 byl připraven podle syntetického schéma 1 podobným způsobem jako v Příkladu 4 s následujícími výjimkami:

• 99·· · » * • · · · · · · · · * ·· · · · · 9' · ··· ···>» ·· ··· ·· ···

Intermediát lf (130 mg, 0,115 mmol) byl rozpuštěn v 5 ml dichlormethanu a byl přidán IM BBr₃v hexanu (5 ml) pod atmosférou N₂. Vzniklá kaše byla míchána po dobu 0,5 hod a poté ochlazena na 0 °C. Pak byl přidán methanol (10 ml) a směs byla zkoncentrována ve vakuu. Surová směs byla aplikována na C_I8 kolonu, promyta s 1% NH₄OAc, promyta s 0,1% Tfa a poté eluována s gradientem 20% až 35% CH₃CN/0,l% Tfa během 50 minut. Čisté frakce byly spojeny, zkoncetrovány a lyofilizovány (2 x 10 ml 0,5% HCI) za vzniku titulní sloučeniny z Příkladu 15, 60 mg (54%). Hmotnostní spektroskopie: 896 MH⁺.

Příklad 16 cyklo[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 16 byl připraven podle schématu 1 podobným způsobem jako bylo popsáno v Příkladu 3 s následujícími výjimkami:

Krok d: 2-( 1 -(S)-((Fmoc-Phe-D-Trp-Lys(Cbz)-Nal)-amino)-2-fenylethyl)-4-(3-methoxyfenyl)-1 (trifenylmethyl)-imidazol

Intermediát 16d byl připraven podobně jako intermediát ld stou výjimkou, že Fmoc-Nal-OAt byl použit namísto Fmoc-Val-F a Fmoc-Phe-OH byl použit namísto Fmoc-Tyr(Bzl)-OH.

Krok g: cyklo[Phe-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly]

Krok 16g byl proveden podobným způsobem jako krok 4g za vzniku titulní sloučeniny z Příkladu 16.

Příklad 17 cyklo[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 17 byl připraven podle schémal podobným způsobem jako bylo popsáno pro analogický Příklad 16 s následujícími výjimkami:

Intermediát 17f (310 mg, 0,27 mmol) byl suspendován ve 3 ml anisolu a bylo přidáno 12 ml bezvodého HF. Směs byla míchána 1 h při 0 °C. HF byla vydestilována a produkt byl vysrážen přídavkem etheru. Surový produt byl odfiltrován a dále čištěn pomocí preparativní HPLC s využitím gradientu 20 až 80% CH₃CN/0,l% Tfa během 40 minut. Čisté frakce byly spojeny, zkoncentrovány a lyofilizovány dvakrát zředěné HCI. Výtěžek = 56 mg (19 %). Hmotnostní spektrometrie: 992,4 MH⁺.

Schéma 3

HN'

R' JU ω fe*

V

3. NH₄OAc syntéza v roztoku ► φ φ φφφ φφφ · φ · · *··< ·* φ

1. CSjCOj/DMF/HjO

2. Br-CH(R⁴)CO-R³

(i)

1. Br-(CH(R⁵)CO,tBu /KaCQj/DMF

2. H/PdonC

R*

Βοο-ίΖ^-Χ’-χΤχίχ^χ.Ν ''>A_-_R ³ (k)

Ř’ kJ ^R<

R‘

R'

O

1. EDCZHOBt/DMF

3.Tfa/iPr,SiH -Χ'-Χ’-Χ^Υ),

0) <V;

R N/

HO

O

silná kyselina H-j/Pd na uhlíku HÓAc

Příklad 18 cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-(y)Abu]

Příklad 18 byl připraven podle syntetického schématu 3.

Krok i: 2-(l-(S)-((Fenylmethoxy)karbonyl)-amino-2-fenylethyl)-4-(4-methoxyfenyl)imidazol

Cbz-(L)-Fenylalanin (10,0 g, 33,4 mmol) a Cs₂CO₃ (5,44 g, 16,7 mmol) bylo smícháno ve směsi 2:l/DMF:voda (75 ml) a směs byla míchána až do vzniku homogenní směsi. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a zbytek byl rozpuštěn ve 70 ml DMF a bylo přidáno 243 brom-3’-methoxy acetofenon (7,65 g, 33,4 mmol) ve 30 ml DMF. Směs byla míchána 0,5 h při laboratorní teplotě a poté byla zkoncentrována za sníženého tlaku. Vzniklý ketoester byl rozpuštěn ve 150 ml xylenu a CsBr byl odfiltrován. Pak byl přidán acetát amonný /40,0 g, 0,52 mol) a směs byla zahřívána k refluxu 2 h za současného odstraňování přebytečného octanu amonného a uvolňované vody pomocí azeotropického nástavce. Reakce byla ochlazena a promyta s nasyceným roztokem NaHCO₃ (50 ml) a nasyceným roztokem NaCl (50 ml). Xylenová vrstva byla sušena nad Na₂SO₄, byla zfiltrována a zkoncentrována ve vakuu za vzniku intermediátu 18i ve formě žlutohnědé tuhé látky (13,8 g, 96 %). Hmotnostní spektrometrie: 428,2 (MH⁺).

Krok j: 2-( 1 -(S)-amino-2-fenylethyl)-1 -(4-( 1,1 -dimethylethyloxy)-4-oxobutyl-4-(4-methoxyfenyl)imidazol

Intermediát 18i (2,14 g, 5,0 mmol) byl rozpuštěn v 11,5 ml DMF a bylo přidáno KHCO₃(1,50 g, 15,0 mmol) a 4-brom-terc-butylbutyrát (6,69 g, 30 mmol) ve třech porcích a směs byla míchána 18 h při 50 °C. Směs byla poté naředěna etherem a promytajednou s nasyceným roztokem NaHCO₃ a jednou s nasyceným roztokem NaCl. Etherová vrstva byla odstraněna, sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována a koncentrována do formy oleje. Sloupcová chromatografie na silikagelu s využitím CH₂C1₂ jako eluentu dala produkt ve formě oleje.

Surový alkylovaný produkt byl odchráněn hydrogenaci v kyselině octové s využitím 10% Pd na uhlíku jako katalyzátoru. Katalyzátor byl poté odfiltrován a rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v AcOEt a promyt s nasyceným roztokemNaHCO₃ a nasycenným roztokem NaCl, sušena nad Na₂SO₄ a zkoncetrována za vzniku intermediátu 18j ve formě oleje (450 mg), který byl dále použit bez následného čištění.

Krok k: 2-(l-(S)-((Boc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)-amino-2-fenylethyl)~l-((4-(l,l-dimethylethoxy)-4-oxo)butyl-4-(3-methoxyfenyl)imidazol

Syntéza v roztoku byla provedena způsobem analogickým k syntéze popsané v kroku ld s tou výjimkou, že Boc-Trp-OSu byl použit namísto Fmoc-Tyr(OBzl)-OSu a Fmoc-Tyr(OBzl)OAt byl použit namísto Fmoc-Val-F za vzniku intermediátu 18k. Výtěžek = 1,03 g (81 %).

Krok 1: 2-(l-(S)-((H-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)-amino-2-fenylethyl)-l-((4-hydroxy-4-oxo)butyl4-(3 -methoxyfenyl)imidazol

Intermediát 18k byl nechán reagovat s roztokem obsahujícím (i-Pr)₃SiH (593 μΐ, 2,90 mmol) v 10 ml Tfa a směs byla nechána reagovat 1 h. Reakce byla zkoncentrována a triturována » · · » 0 · · *

0 · 0 0 * 000 • 0 0 0 0 0 0 • 000 000 0 0 • 0 0 · 0 0 0

000 00 00 · 00 00 0 se směsí 1:1 ether:hexan za vzniku intermediátu 181 ve formě žlutohnědé tuhé látky, která byla použita v dalším kroku bez následného čištění. Hmotnostní spektrometrie: 1267,7 MH⁺.

Krok f: cyklo[Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-(y)Abu]

Intermediát 181 byl rozpuštěn ve 20 ml DMF a byl přidán 4-methylmorfolin (159 μΐ, 1,45 mmol), HOBt (196 mg, 1,45 mmol) a EDC (278 mg, 1,45 mmol) a reakce byla míchána přes noc. Reakce byla zkoncentrována za vakua a čištěna pomocí flash chromatografií na silikagelu s využitím směsi CH₂Cl₂:MeOH (9:1) jako eluentu za vzniku intermediátu 18f. Výtěžek = 220 mg (24 %). Hmotnostní spektrometrie: 1249,7 MH⁺.

Krok g: cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-(y)Abu]

Intermediát 18f (220 mg, 176 pmol) byl parciálně hydrogenován v kyselině octové pod tlakem H₂ 30 psi při laboratorní teplotě s využitím 10% Pd na uhlíku jako katalyzátoru po dobu 14 h. Katalyzátor byl odfiltrován a filtrát byl zkoncentrován ve vakuu. Surová směs byla čištěna preparativní HPLC na C₁₈ koloně s využitím gradientu 0% až 75% CH₃CN/0,l% Tfa během 40 minut. Čisté frakce produktu byly spojeny, zkoncentrovány a lyofilizovány (2 x 10 ml 0,5% HCI, potom 1 x 10 ml vody) za vzniku titulní sloučeniny z Příkladu 18, 72 mg (37 %). Hmotnostní spektroskopie: 1115,6 MH⁺.

Příklad 19 cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(4-methoxyfenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 19 byl připraven podle Schématu 3 podobným způsobem jako bylo popsáno v Příkladu 18 s následujícími rozdíly:

Krok j: 2-(l -(S)-amino-2-fenylethyl)-1 -(2-(1,1 -dimethylethyloxy)-2-oxo-ethyl)-4-(4-methoxyfenyljimidazol

Intermediát 181 (854 mg, 2,0 mmol) byl rozpuštěn v 10 ml DMF a byl přidán tercbutylbromacetát (646 μΐ, 4,0 mmol) a K₂CO₃ (552 mg, 4,0 mmol) a reakce byla míchána přes noc při laboratorní teplotě. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a zbytek byl rozpuštěn v EtOAc a promyt s nasyceným roztokem NaCl. Ethylacetátová vrstva byla sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována a zkoncentrována za vakua za vzniku 1,02 g ve formě pěny. Hmotnostní spektrometrie: 428,2 MH⁺. NMR (300 MHz, DMSO-d₆), 7,85-8,0 (IH, d), 7,6-7,75 (2H, d), 7,857,95 (IH, s), 7,1-7,35 (10H, m), 6,9-7,0 (2H, d), 4,75-5,05 (5H, m), 3,7-3,9 (3H, s), 3,1-3,4 (2H, m), 1,3-1,5 (9H, s).

Bílá pěna intermediátu (1,02 g, 1,88 mmol) byla rozpuštěna v kyselině octové (50 ml) obsahující 10% Pd na uhlíku (50 mg) a byla hydrogenována při laboratorní teplotě pod atmosférou vodíku (30 psi) po dobu 10 hod. Katalyzátor byl poté odfiltrován a byla přidána 2N HCI (940 μΐ, 1,88 mmol). Směs byla lyofilizována jednou a poté znovu lyofilizovánaz 20% CH₃CN/H₂O za vzniku intermediátu 19j ve formě světle hnědé tuhé látky (862 mg), která byla použita bez dalšího čištění. Hmotnostní spektroskopie: 408,2 MH⁺.

Krok g: Katalytická hydrogenace a zpracování bylo provedeno podobně jako bylo popsáno v kroku 18g za vzniku titulní sloučeniny (22 mg, 4 %) ve formě bílé tuhé látky. Hmotnostní spektroskopie: 1088,2 MH⁺.

Příklad 20 cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(fenyl)imidazol)-Gly]

Příklad 20 byl připraven podle Schématu 3 podobným způsobem jako bylo popsáno v Příkladu 18 stou výjimkou, že byl použit 2-bromacetofenon namísto 2-brom-3’methoxyacetofenonu v kroku i. Hmotnostní spektroskopie: 1057,4 MH⁺.

Příklad 21 cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3 -methoxy feny l)imidazol)-(s)Ahx]

Příklad 21 byl připraven podle Schématu 3 podobným způsobem jako bylo popsáno v příkladu 18 s následujícími rozdíly:

Krok j: 2-( 1 -(S)-Amino-2-fenylethyl)-1 -(6-(ethoxy)-6-oxohexyl)-4-(3 -methoxyfenyl)imidazol

Intermediát 21i (855 mg, 2,0 mmol) byl rozpuštěn v 8,0 ml DMF a byl nechán reagovat s KHCO₃ (200 mg, 2,0 mmol) a ethyl 6-bromhexanoátem (3,56 ml, 20 mmol) 8 h při 120 °C. Směs byla zkoncentrována a zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu s využitím směsi 2:l/hexan:EtOAc jako eluentu za vzniku čistého produktu ve formě gumy (0,94 g)·

Surový alkylovaný produkt byl odchráněn hydrogenací v kyselině octové s využitím 10% Pd na uhlíku jako katalyzátoru. Katalyzátor byl poté odfiltrován a rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v ředěné HCI, znrazen a lyofilizován za vzniku intermediátu 21j ve formě světle žluté tuhé látky, (720 mg, 91%), která byla použita v následujícím kroku bez dalšího čištění. Hmotnostní spektrometrie: 436,2 MH⁺.

• · • · · · · * « · • ···· · · · · · • · · · · ··· «* ···· ·> ··· ·· «··

Krok ka krok 1: 2-(l-(S)-((H-Trp-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzI)-2-(l-(S)-amino-2-fenylethyl)-l(6-(ethoxy)-6-oxohexyl)-4-(3-methoxyfenyl)imidazol

Fmoc-Tyr(OBzl)-OAt byl připraven mícháním Fmoc-Tyr(OBzl)-OH (493 mg, 1,00 mmol), HOAt (136 mg, 1,0 mmol) a DCC (206 mg, 1,0 mmol) v 8 ml ethylacetátu po dobu 0,5 h a poté odfiltrováním dicyklohexylmočoviny. Vzniklý roztok byl přidán k roztoku intermediátu 2lj (457 mg, 0,9 mmol) ve 4 ml EtOAc a směs byla míchána s nasyceným roztokem NaHCO₃(10 ml) až do úplného proběhnutí reakce podle hmotnostní spektrometrie. Vodná vrstva byla odstraněna a EtOAc vrstva byla sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována a nechána reagovat s tris(2aminoethyl)aminem (2,7 ml). Směs byla míchána intenzivně o dobu 0,5 h. Ethylacetátová vrstva byla promyta s nasyceným roztokem NaCl (2 x 60 ml) a poté s 10% fosfátovým pufrem adjustováným na pH = 5,5 (3 x 15 ml).

Intermediát byl postupně odchráněn a kaplován s Fmoc-Lys(Cbz)-OSu, Fmoc-D-Trp-Osu a Fmoc-Trp-Osu podobným způsobem jako bylo popsáno výše pro Fmoc-Tyr(OBzl)-OAt cyklus. Finální Fmoc odchránění poskytlo N-terminálně odchráněný intermediát ve formě ethylesteru. Ethylacetátová vrstva byla sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována a naředěna se čtyřmi objemy hexanu. Rozpouštědlo bylo odlito a zbytek byl triturován s hexanem za vzniku produktu ve formě tuhé látky (0,67 g, 58%), která byla použita dále bez následného čištění. Hmotnostní spektroskopie:

1289,6 MH⁺.

Ethylester byl odstraněn reakcí intermediátu v 5 ml methanolu s 1,7 M roztokem NaOH (1,7 ml) přes noc. Směs byla adjustována na pH = 8,2 pomocí 5% roztoku HCI a rozpouštědla byla odstraněna za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v DMF, NaCl byl odstraněn filtrací a DMF roztok byl použit v následném kroku bez dalšího čištění.

Cyklizace a deprotekce byly provedeny způsobem analogickým k Příkladu 18 za vzniku titulní sloučeniny z Příkladu 21 ve formě bílého prášku, 62 mg. Hmotnostní spektroskopie:

1143,9 MH⁺.

Příklad 22 cyklo[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-(y)Abu]

Příklad 22 byl připraven podle Schématu 3 způsobem podobným Příkladu 18 s následujícími rozdíly:

Krok j: 2-( 1 -(S)-Amino-2-fenylethyl)-1 -(4-(ethoxy-4-oxobutyl)-4-(4-hydroxyfenyl)imidazol • · • · 9

9 9 9

9 9

9 9 • 99

9 9 99

A » · 9 ·

Intermediát 22i (2,0 g, 4,68 mmol) byl rozpuštěn v 7,0 ml DMF a byl ponechán reagovat s KHCO₃ (468 mg, 4,68 mmol) a s ethyl 4-brombutyrátem (6,70 ml, 46,8 mmol) a směs byla míchána 30 h při 100 °C. Směs byla naředěna s etherem a promyta jednou s nasyceným roztokem NaHCO, a jednou s nasyceným roztokem NaCI. Etherická vrstva byla sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována a zkoncentrována za vzniku oleje. Sloupcová chromatografie na silikagelu s využitím dichlormethanu jako eluentu poskytla produkt ve formě oleje (2,53 g, 94 %). Hmotnostní spektroskopie: 542,3 MH⁺.

Surový alkylovaný produkt (2,53 g, 4,67 mmol) v 50 ml dichlormethanu byl přidán po kapkách během 15 minut při -10 °C do roztoku 1M BBr₃/hexan (23,4 ml) ve 250 ml dichlormethanu. Směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu a byla míchána 2 h. Pak byl ke směsi přidán ethanol (40 ml) a směs byla zkoncentrována na asi 50 ml. Roztok byl naředěn se 100 ml ethanolu a byl ponechán míchat přes noc při laboratorní teplotě. Směs byla zkoncentrována za sníženého tlaku a zbytek byl distribuován mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO₃. Ethylacetátová vrstva byla sušena nad Na₂SO₄, zfiltrována a zkoncentrována za sníženého tlaku za vzniku oleje (1,41 g, 76%), který byl použit do následující reakce bez chránění fenolické skupiny. Hmotnostní spektrometrie: 394,3 MH⁺.

· · 9

9 9 9

9 9

9*

9

HPLC retenční doby

Příklad číslo:	HPLC systém	Retenční doba (minuty)
1	A	13,65
2	A	18,50
3	A	16,03
4	B	6,97
5	C	20,41
6	C	11,75
7	D	9,53
8	B	11,02
9	E	7,69
10	J	6,02
11	F	4,18
12	G	4,11
13	H	5,50
14	G	6,16
15	I	17,03
16	K	9,12
17	J	8,11
18	J	8,86
19	L	6,47
20	M	6,65
21	G	8,14
22	N	12,10

« A

	49	• · A A · · A • * A A A • A
HPLC systémy:
A.	Gradient: 20-80% CH3CN /0,1% Tfa, 24min. Rychlost toku: 1,0 ml / min. Detekce: 254nm Kolona: VYDAC® Protein and Peptide Cl8
B.	Gradient: 35-50% CH3CN /0,1% Tfa, 24min. Rychlost toku: 1,0 ml / min. Detekce: 254nm Kolona: VYDAC® Protein and Peptide Cl8
C.	Gradient: 32-64% CH3CN / 0,1% NH4OAC, 24min. Rychlost toku: 1,0 ml / min. Detekce: 254nm Kolona: VYDAC® Protein and Peptide Cl8
D.	Gradient: 20-60% CH3CN / 0,1% Tfa, 24min. Rychlost toku: 1,0 ml / min. Detekce: 254nm Kolona: VYDAC® Protein and Peptide Cl8
E.	Gradient: 55-75% CH3CN / 0,1% Tfa, 24min. Rychlost toku: 1,0 ml / min. Detekce: 220nm
	Kolona: Phenomenex LICHROSPHERE® 5 RP18 (Phenomenex, 2320 W) 205* St., Torrance, CA)
F.	Gradient: 60 . CH3CN /0,1% Tfa, isokraticky Rychlost toku: 1,0 ml / min. Detekce: 254nm Kolona: VYDAC® Protein and Peptide C18
G:	Gradient: 50% CH3CN / 0,1% Tfa, isokraticky Rychlost toku: 1,0 ml / min. Detekce: 254nm Kolona: VYDAC® Protein and Peptide C18

• · · · * · · • f · « * » ·« · · · • · · * · · « » · · 9 · · · « · • · 9 9 9 9 9

999 9999 99 999 99 9

Η. Gradient: 38% CH3CN /0,1% Tfa, isokraticky Rychlost toku: 1,0 ml / min.

Detekce: 254nm

Kolona: VYDAC® Protein and Peptide Cl8

I. Gradient: 20 - 40% CH3CN / 0,1 % Tfa, 24 minut Rychlost toku: 1,0 ml /min.

Detekce: 254nm

Kolona: VYDAC® Protein and Peptide C18

J. Gradient: 50% CH3CN / 0,1 % Tfa, isokraticky Rychlost toku: 1,0 ml /min.

Detekce: 254nm

Kolona: NUCLEOSIL™ Cl 8, 5 mikron (Alltech Associates, 2051,

Waukegan Rd., Deerfield, Illinois)

K. Gradient: 40% CH3 CN / 0,1 % Tfa, isokraticky Rychlost toku: 1,0 ml / min.

Detekce: 254nm

Kolona: NUCLEOSIL™ C18, 5 mikron

L. Gradient: 52% CH3CN / 0,1% Tfa, isokraticky Rychlost toku: 1,0 ml / min.

Detekce: 254nm

Kolona: NUCLEOSIL™ Cl8, 5 mikron

M. Gradient: 50% CH3CN / 0,1% Tfa, isokraticky Rychlost toku: 1,0 ml /min.

Detekce: 254nm

Kolona: NUCLEOSIL™ Cl8, 5 mikron

N. Gradient: 48% CH3CN / 0,1 % Tfa, isokraticky Rychlost toku: 1,0 ml / min.

Detekce: 254nm

Kolona: NUCLEOSIL™ Cl8, 5 mikron

; )

Průmyslová využitelnost

Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou vhodné pro výrobu farmaceutických výrobků použitelných pro léčení celé řady onemocnění souvisejících s činností somatostatinu v organismu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce I nebo její farmakologicky přijatelná sůl, kde

Y a Z jsou pro každý výskyt každý nezávisle D- nebo L- přírodní nebo nepřírodní aaminokyselina;

n je pro každý výskyt nezávisle 0 až 50, za předpokladu že obě n nemohou být zároveň 0; mje 0 nebo celé číslo od 1 do 10; aje H nebo R¹;

b je OH, -OR¹ nebo -NR⁹R⁹;

nebo a tvoří společně s b amidickou vazbu;

R¹ je nezávisle H, (C, až C₄)alkyl nebo arylfC, až C₄)alkyl;

R² je H nebo případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující (C, až C4)alkyl, fenyl, fenyl(C, až C4)alkyl nebo heterocyklyl(Cj až C4)alkyl, kde případně substituovaná skupina je případně substituována s jedním nebo více substituenty, které jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny obsahující (C, až C4)alkyl, (C3 až Cs)cykloalkyl, -O-R⁶, -S(O)q-R⁷, -N(R⁹R⁹), -NHCO-R⁶, -NHSO2R⁹, -CO2R⁹, -CONR⁹R⁹ a-SO₂NR⁹R⁹, kde q je 0, 1, 2 nebo 3;

R³ a R⁴ jsou každý nezávisle H, halogen nebo případně substituovaná skupina, vybraná ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, (C₃ až C₈)cykloalkyl, aryl a aryl(Cj až C₄)alkyl, kde případně substituovaná skupina je připadne substituována s jedním nebo více substituenty, vybranými ze skupiny obsahující OH, (C, až C₄)alkyl, (C, až C₄)alkoxy, aryloxy, aryl(C, až C₄)alkoxy, N(R⁹R⁹), -COOH, -CONR⁹R⁹ a halogen;

·· ·· · ·· ·

4 4 4 49 9 4 9 9

9 9 9 9 4 9 9

9 9 4 9 4 4·4 4

4 9 9 9 4 4 4

444 9 4 449 49 4 49 nebo R³ a R⁴ tvoří společně s uhlíky, k nimž jsou připojeny, případně substituovaný aryl, kde aryl je případně substituován s jedním nebo více substituenty vybranými nezávisle ze skupiny obsahující OH, (C, až C₄)alkyl, (C, až C₄)alkoxy, aryloxy, aryl(C, až C₄)alkoxy, -NR⁹R⁹, COOR⁵, -CONR⁹R⁹ a halogen;

R⁵ je při každém výskytu nezávisle H nebo je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl a aryl(C] až C₄)alkyl, kde případně substituovaná skupina je případně substituována s jedním nebo více substituenty, kde je každý nezávisle vybrán ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, OH, (Oj až C₄)alkoxy, aryloxy, NO₂, aryl(C, až C₄)alkoxy, NR⁹R⁹, -COOH, -CONR⁹R⁹ a halogen;

R⁶ je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny obsahující H, (C, až C₄)alkyl, (C, až C₄)alkoxy, aryl(C, až C₄)alkyl, a aryl(C, až C₄)alkoxy,

R⁷ je H když q je 3 nebo R⁷ je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny obsahující (Q až C₄)alkyl, aryl nebo aryl(C, až C₄)alkyl, když q je 0,1 nebo 2, a

R⁹ je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny obsahující H, NO₂, (C_} až C₄)alkyl, aryl a aryl(C, až C₄)alkyl.
2. Sloučenina obecného vzorce II, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, kde Y a Z jsou pro každý výskyt každý nezávisle D- nebo L- přírodní nebo nepřírodní aaminokyselina;

m je 0 nebo celé číslo od 1 do 10;

n je pro každý výskyt nezávisle 0 až 6,

R¹ je při každém výskytu nezávisle H, (C, až C₄)alkyl nebo aryl(C, až C₄)alkyl;

• 99 ·· 9 99 · •9 · 9 9 9 9 9 · *·· • »999 999

99 999 99»

999 9999 99 999 99 999

R² je H nebo případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující (C, až C4)alkyl, fenyl, fenyl(C, až C4)alkyl nebo heterocyklyl(C, až C4)alkyl, kde případně substituovaná skupina je případně substituována s jedním nebo více substituenty, které jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny obsahující (C, až C4)alkyl, cykloalkyl, -O-R⁶, -S(O)q-R⁷, -N(R⁹R⁹), -NHCO-R⁶, NHSO2R⁹, -CO2R⁹, -CONR⁹R⁹ a -SO₂NR⁹R⁹, kde q je 0, 1, 2 nebo 3;

R³ a R⁴ jsou každý nezávisle H, halo nebo případně substituovaná skupina, vybraná ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, cykloalkyl, aryl a aryl(C, až C₄)alkyl, kde případně substituovaná skupina je případně substituovaná s jedním nebo více substituenty, vybranými ze skupiny obsahující OH, (C, až C₄)alkyl, (Cj až C₄)alkoxy, aryloxy, aryl(C, až C₄)alkoxy, -N(R⁹R⁹), COOH, -CONR⁹R⁹ a halogen;

nebo R³ a R⁴ tvoří společně s uhlíky, k nimž jsou připojeny, případně substituovaný aryl, kde aryl je případně substituován s jedním nebo více substituenty, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny obsahující OH, (C, až C₄)alkyl, (C, až C₄)alkoxy, aryloxy, aryl(C, až C₄)alkoxy, -NR⁹R⁹, -COOR⁵, -CONR⁹R⁹ a halogen;

R⁵ je při každém výskytu nezávisle H nebo je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl a aryl(C, až C₄)alkyl, kde případně substituovaná skupina je případně substituována s jedním nebo více substituenty, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, OH, (Oj až C₄)alkoxy, aryloxy, aryl(C, až C₄)alkoxy, -NR⁹R⁹, -COOR⁵, -CONR⁹R⁹ a halogen;

R⁶ je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny obsahující H, (C, až C₄)alkyl, (C, až C₄)alkoxy, aryl(C, až C₄)alkyl a aryl(C, až C₄)alkoxy,

R⁷ je H když q je 3 nebo R⁷ je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl, aryl nebo aryl(C, až C₄)alkyl, když q je 0, 1 nebo 2, a

R⁹ je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny obsahující H, NO₂, (C, až C₄)alkyl, aryl a aryl(C, až C₄)alkyl.

X¹ je přírodní nebo nepřírodní D- nebo L-a-aminokyselina, kde X¹ je Phe, Nal, Trp, Tyr, Pal nebo His, jejichž aromatický kruh je případně substituován na uhlíku nebo dusíku substituentem R⁶ nebo když X¹ je Ser nebo Thr je kyslík postranního řetězce případně substituován s jedním nebo více R¹;

X²je D- nebo L-Trp, N-methy 1-D-Trp nebo N-methyl-L-Trp;

X³ je Lys, α-N-methyl-Lys nebo ε-Ν-( C, až C₄)alkyl-Lys nebo 8-N-[aryl-(C, až C₄)alkyl]-Lys;

00 00 * ♦· ·

00 0 0 · 0 0 0 0 0 0 0 • 0 0 0 0 0 0 0 • 0 0 0 0 · ♦ · Φ 0

00 «00 000 000 0000 00 00· ·· 0·· X⁴ je přírodní nebo nepřírodní D- nebo L-a-aminokyselina, kde X⁴ je Phe, Nal, Trp, Tyr nebo His, jejichž aromatický kruh je případně substituovaný na uhlíku nebo dusíku substituentem R⁸nebo když X⁴ je Ser, Tyr nebo Thr může být kyslík postranního řetězce substituován s jedním nebo více substituenty R^!.
3. Sloučenina obecného vzorce II podle nároku 2, kde každé nje 2;

m je 0 nebo 1 až 5;

R¹ je u každého výskytu nezávisle H, methyl nebo aryl(C_t až C₄)alkyl;

R² je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující fenyl-(C, až C₄)alkyl, a heterocyklyl-(C, až C₄)alkyl, kde případně substituovaná skupina je substituována substituentem vybraným ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl a -O-R^{6 *} a

R³ a R⁴ jsou každý nezávisle H, halogen nebo případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl a aryl, kde případně substituovaná skupina je případně substituována se substituentem vybraným ze skupiny obsahující OH, (C, až C₄)alkoxy, aryloxy a halo.
4. Sloučenina obecného vzorce II podle nároku 3, kde

X' je Phe, Nal, Trp, Tyr, Pal nebo His, kde je aromatický kruh případně substituován na uhlíku nebo dusíku substituentem R⁶, a

X⁴ je Val, Abu, Ser, Thr, Nal, Trp, Tyr nebo His, kde je aromatický kruh v Nal, Trp, Tyr a His případně substituován na uhlíku a/nebo dusíku substituentem R⁸ nebo když X⁴ je Ser, Tyr nebo Thr, je kyslík v jejich postranním řetězci případně substituován substituentem R¹.
5. Sloučenina obecného vzorce II podle nároku 4, kde

X¹ je Phe, Trp nebo Tyr, jejichž aromatický kruh je případně substituován na uhlíku nebo dusíku substituentem R⁶,

X² je D-Trp nebo N-methyl-D-Trp,

X³ je Lys nebo a-N-methyl-Lys,

X⁴ je Val, Thr, Abu, Nal nebo Tyr, kde kyslík v hydroxylové skupině postranního řetězce u Thr a Tyr je případně substituován s R¹;

R¹ je pro každý výskyt nezávisle H, methyl nebo benzyl;

• «· ·· ♦ ·· ·

44 4 4 9 4 49 4 4 49

4 9 4 4 4 4 4 4

4 9 4 4 4 4 4 4 4 4

4 4 4 9 4 4 4 4

449 4444 44 444 44 444

R² je případně substituovanou skupinou vybranou ze skupiny obsahující fenylmethyl a heterocyklylmethyl, kde případně substituovaná skupina je substituována substituentem vybraným ze skupiny obsahující (C, až C₄)alkyl a -O-R⁶;

R³ je (C, až C₄)alkyl nebo případně substituovaný aryl, kde případně substituovaný aryl je substituován se substituentem vybraným ze skupiny obsahující OH, (C, až C₄)alkoxy, aryloxy a halogen;

R⁴jeH, a

R⁶ je pro každý výskyt nezávisle vybrán ze skupiny obsahující H a aryl(C, až C₄)alkoxy.
6. Sloučenina obecného vzorce II podle nároku 5, kde

X' je Phe, Trp, Tyr nebo Tyr(Obzl);

X⁴ je Val, Thr, Abu, Nal nebo Tyr, přičemž hydroxyskupina v Thr a Tyr je případně substituována benzylem; m je 0, 2 nebo 4;

R² je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny obsahující fenylmethyl nebo 3indolylmethyl, kde případně substituovaná skupina je případně substituována s -O-R⁶; a R³ je 1,1-dimethylethyl nebo případně substituovaný aryl, kde případně substituovaný aryl je případně substituován se skupinou vybranou ze skupiny obsahující OH, (C, až C₄)alkoxy a halogen.
7. Sloučenina obecného vzorce II podle nároku 6, kde

R² je fenylmethyl;

R³ je 1,1-dimethylethyl nebo případně substituovaný fenyl, kde případně substituovaný fenyl je případně substituován s OH nebo OCH₃ a

R⁶ je pro každý výskyt nezávisle vybrán ze skupiny obsahující H nebo benzylmethoxy.
8. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde zmíněná sloučenina je

H-Trp-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly-OH.
9. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 7, kde zmíněná sloučenina je cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], • · 0 0 · • 0 0 0 0 0 0 0 «00 cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Glyj, cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly), cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(1, l-dimethylethyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly), cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly), cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-rrethoxyfenyI)imidazol (y)Abu), cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(4-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(fenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-(c)Ahx] nebo cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-(y)Abu).
10. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 9, kde zmíněná sloučenina je cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)irnidazol)-Gly], cyklo [Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly , cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyí)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(1,1-dimethylethyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly] nebo ·· ·· 9 99 • · · 9 · ··· · · · • · ♦ · · · · • · · · e · · cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly].
11. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 10, kde zmíněná sloučenina je cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-(3 -methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Phe-D-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly] nebo cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly].
12. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 11, kde zmíněná sloučenina je cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Glyj, cyklo [Trp-D-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly] a cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly].
13. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 9, kde zmíněná sloučenina je cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3- methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Abu-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(1, l-dimethylethyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], • · · · · ··· · · • · · · « · φ • ···· · · · · • · · · · · · cyklo (Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-(y)Abu], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(4-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(fenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-(s)Ahx] nebo cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-(y)Abu].
14. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 13, kde zmíněná sloučenina je cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol)-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Phe-D-Trp-Lys-Nal-Phe Ψ (4-(3-hydroxyfenyl)imidazol-Glyj, cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-(y)Abuj, cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(4-methoxyfenyl)imidazol-Glyj nebo cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(fenyl)imidazol-Gly].
15. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 14, kde zmíněná sloučenina je cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-Gly], cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(3-methoxyfenyl)imidazol-(y)Abuj, cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(4-methoxyfenyl)imidazol-Gly] nebo cyklo [Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe Ψ (4-(fenyl)imidazol-Glyj.
16. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelné soli a farmaceuticky přijatelný nosič.
17. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství sloučeniny podle nároku 2 nebo její farmaceuticky přijatelné soli a farmaceuticky přijatelný « nosič.
18. Způsob vyvolání agonistického efektu somatostatinového receptoru u savců, kteří to potřebují, vyznačující se t i m, že se zmíněným savcům podává účinné množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli.

ft« ·· · ·· ft • ftft 9 · ftftft ft ··· ft ···· · ft · e «««ft ft > · · · ·· · · · · · · • A· ««ft* ·· ··· ·· ft··
19. Způsob vyvolání agonistického efektu somatostatinového receptoru u savců, kteří to potřebují, vyznačující se tím, že se zmíněným savcům podává účinné množství sloučeniny podle nároku 2 nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli.
20. Způsob vyvolání antagonistického efektu somatostatinového receptoru u savců, kteří to potřebují, vyznačující se tím, že se zmíněným savcům podává účinné množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli.
21. Způsob vyvolání antagonistického efektu somatostatinového receptoru u savců, kteří to potřebují, vyznačující se tím, že se zmíněným savcům podává účinné množství sloučeniny podle nároku 2 nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli.
22. Způsob léčení prolaktin vylučující adenomy restenosy, diabetes mellitus, hyperlipidemie, necitlivosti k inzulínu, syndromu X, angiopathie, proliferativní retinopathie, dawnova syndromu, neuropathie, sekrece žaludečních kyselin, peptických vředů, enterokutánní a pankreatikokutánní píštěle, syndromu podrážděných střev, Dumping syndromu, syndromu vodnatého průjmu, průjmu vyvolaném AIDS, průjmu vyvolaném chemoterapií, akutní nebo chronické pankreatidy, gastrointestinálních tumorů vylučujících hormony, rakoviny, hepatomy, angiogeneze, zánětlivých onemocnění, artritidy, chronického odmítání štěpů, angioplastie, krvácení z roubovaných cév nebo gastrointestinálního krvácení u savců, vyznačující se t í m, že se zmíněným savcům podává sloučenina podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
23. Způsob léčení prolaktin vylučující adenomy restenosy, diabetes mellitus, hyperlipidemie, necitlivosti k inzulínu, syndromu X, angiopathie, proliferativní retinopathie, dawnova syndromu, neuropathie, sekrece žaludečních kyselin, peptických vředů, enterokutánní a pankreatikokutánní píštěle, syndromu podrážděných střev, Dumping syndromu, syndromu vodnatého průjmu, průjmu vyvolaném AIDS, průjmu vyvolaném chemoterapií, akutní nebo chronické pankreatidy, gastrointestinálních tumorů vylučujících hormony, rakoviny, hepatomy, angiogeneze, zánětlivých onemocnění, artritidy, chronického odmítání štěpů, angioplastie, krvácení z roubovaných cév nebo gastrointestinálního krvácení u savců, vyznačující se tím, že se zmíněným savcům podává sloučenina podle nároku 2 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
24. Způsob inhibování proliferace helicobacter pylori u savců, vyznačující se t í m, že se zmíněným savcům podává sloučenina podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
25. Způsob inhibování proliferace helicobacter pylori u savců, vyznačující se tím, že se zmíněným savcům podává sloučenina podle nároku 2 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.