CZ2000611A3 - Farmaceutický prostředek - Google Patents

Description

FARMACEUTICKÝ PROSTŘEDEK

Oblast techniky

Vynález se týká užití známé sloučeniny pro výrobu farmaceutického prostředku k léčeni nebo prevenci Alzheimerovy nemoci. Dále se vynález týká farmaceutického prostředku pro takové léčení nebo prevenci. Vynález je také orientován k způsobům léčení nebo prevence Alzheimerovy nemoci.

Dosavadní stav techniky

Alzheimerova nemoc(AN), která je jednou z hlavních přičiň demence u dospělých průmyslových oblasti, je degenerativní onemocněni mozku,které se klinicky vyznačuje postupující ztrátou paměti, zmateností, demencí a. nakonec smrtí. Histopatologicky se Alzheimerova nemoc vyznačuje přítomností dvou mozkových poškozeni v neocortexu, zejména v hippocampu, a to neurofibrilárních spleti (NFTs) párových šroubovitých vláken (PHF) v neuronech a neuritickými (senilními) plaky v extracelulárnim prostoru. Tvorba senilních plaků má vztah k objeveni se symptomů a příznaků nemoci včetně amnesie. Po vytvoření senilních plaků je neurofibrilární splet” tvořena v tělech neuronů. Tvorba neurofibrilární spleti má vztah k zhoršování amnesie.

Hlavní složkou senilních plaků je ložisko amyloidu. Častým onemocněním, které se vyskytuje s Alzheimerovou nemocí je šedý zákal. Je umístěn v očích a je také způsoben ložisky amyloidu. Léčení pacientů trpících Alzheimerovou nemocí, jak popsáno v předkládaném popisu, může být tudíž stejně užito k léčení šedého zákalu. Užívaný termín Alzheimerova nemoc, v předkládaném popisu a nárocích, proto také zahrnuje šedý zákal.

Hlavni složkou ložiska amyloidu .je polypeptid, zde zmiňovaný jako Αβ (amyloid-beta). Αβ je normálně rozpustná složka cerebrospinální tekutiny, kde se nalézá v koncentraci kolem 3 5nm.

- 2 Αβ se může skládat z 39-43 aminokyselin, typicky ze 40ti aminokyselin ve zralé formě a je získán jako proteolytický produkt z proteinu z povrchu buněk, nazývaného amyloidový prekursorový protein (APP) (Kang a spol. 1987, Nature 325:733-736).

Mnoho studií ukazuje, že Αβ je toxický in vitro, pokud je přidán přímo ke kulturám buněk neuronu ( Yankner BA, Duffy LK, Kirschner DA, Science 1990, 250 (4978) :279-282,- Koh JY, Yang LL, Cotman CW, Brain Res 1990, 533 (2) : 315-320; a Pike CJ, Burdick D, Walencewicz AJ, Glabe CG, Cotman CW, J. Neurosci 1993, 13(4):1676-1687).

Neurotoxicita Aá je umístěna v pořadí peptidu mezi zbytky aminokyselin 25 a 35 (Αβ(25-35)) . Aá indukuje smrt neuronů stejně silně jako v plné délce Αβ (1-40) ( Yanker BA, Duffy LK, Kirschner DA, Science 19990, 250 (4978) : 279-282). Normální činnost Aa není v současnosti známa, ale Αβ by mohl vytvářet selektivní kationtové kanály skrz buněčné membrány ( Kawahara M a spol., 1997, Biophysical Journal 73/1, 67-75).

Precipitace syntetického Αβ je způsobena několika faktory okolí, které zahrnují nízké pH, vysoké koncentrace solí a přítomnost kovů např. zinku, mědi a rtuti (Bush, A.I. a spol., 1995, Science 268:1921-1923). Je zjištěno, že samotný Αβ specificky až do nasyceni váže zinek s vysokou vazebnou kapacitou (K_D = 107 nM) v molárnim poměru 1:1 (zinek: Αβ) ( Bush, A.I. a spol., 1994, J. Biol. Chern. 269: 12152-12158). Tato vazba nastává při fysiologické koncentraci zinku (Bush, A.I. a spol., 1994, science 265: 1464-1467).

Je zde silný předpoklad, že odstranini ložisek amyloidu u pacientu trpících Alzheimerovou nemocí, bude zmírňovat symptomy Alzheimerovy nemoci. Tudíž, některé pokusy, vedoucí k přípravě takových léků a způsobů hojení Alzheimerovy nemoci, jsou naléhavě hledané.

- 3 Mezinárodni patentová přihláška, č. WO 93/10459, popisuje způsob léčení Alzheimerovy nemoci, kdy se podává látka vázající zinek. Jako výhodné sloučeniny jsou uvedené kyselina ftalová, desferrioximin, citran sodný, EDTA, 1,2-diethyl-3-hydroxy-pyridin4-on a l-hydroxyethyl-3-hydroxy-2-methyl-pyridin-4-on.

Německá patentová přihláška č. DE 39 32 338 popisuje užiti hliníkového chelátoru, jako je 8—hydroxy—chinolin, pro léčení Alzheimerovy nemoci.

U.S. č. 5,373,021 popisuje užití disulfiramu a jeho solí a analogy. Podle vynálezu, mohou být popsané sloučeniny užity k zmirnini neurologických poškození způsobených Alzheimerovou nemocí.

Mezinárodni patentová přihláška č. WO 98/06403 popisuje užiti cliochinolu pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení Alzheimerovy nemoci.

Až potud známé sloučeniny, navrhované pro léčbu Alzheimerovy nemoci, mají několik nedostatku, které brání jejich rozsáhlému užití. Většina sloučenin je neschopná proniknout hematoencefalickou barieru a tudíž nemohou dosáhnout míst, kde je uložen amyloid. Disulfiram, který muže pronikat hematoencefalickou barieru, má ten nedostatek, že pokud je u pacientu kombinován s ethylalkoholem, pak způsobuje některé nepříznivé reakce, které zahrnují bolesti hlavy, nevolnost, zvraceni, pocení, žízeo, slabost a nízký krevní tlak. Cliochinol (5-chloro-7-jodo-8hydroxychinolin), který také může pronikat hematoencefalickou barieru, má špatnou minulost, kterou je jeho vedlejší účinek, způsobující subakutni myelooptickou neuropatii (SMON).

Phanchinon (4,7-fenantrolin-5,6-dion) je až dosud užíván při léčbě různých onemocnění, jako je amébiása. Phanchinon je prodávaný CIBA GEIGY pod ochrannou známkou ENTOBEX. Na rozdíl od cliochinolu nevykazuje vedlejší nepříznivé účinky, pokud je užíván

- 4 v bižném dávkovacím rozmezí.

Předchozí farmaceutický prostředek proti amébiáse, obsahující oba, cliochinol a phanchinon,byl prodáván CIBA GEIGY pod ochrannou známkou Mexafor. Nicméně, obchod s tímto prostředkem byl zastaven, neboť'' bylo zřejmé, že cliochinol způsobuje SMON.

Podstata vynálezu

Předmětem předkládaného vynálezu je zajistit nové užití známé sloučeniny pro léčbu nebo prevenci Alzheimerovy nemoci. Jiným předmětem předkládaného vynálezu, je poskytnout zvýšení účinnosti léčby Alzheimerovy nemoci. Dalším předmětem je vyhýbat se některým škodlivým vedlejším účinkům při léčbě nebo prevenci Alzheimerovy nemoci.

Podle vynálezu, je připravováno užití phanchinonu pro výrobu farmaceutického prostředku k léčbě nebo prevenci Alzheimerovy nemoci.

Phanchinon může být podáván v jakémkoliv účinném množství pro léčbu nebo prevenci Alzheimerovy nemoci. Výhodně může být phanchinon podáván v množství 5 mg- 250 mg, nejvíce výhodní 10 mg50 mg, jednou až třikrát denně.

V dalším provedení vynálezu sloučenina nebo směs sloučenin, vybraná ze skupiny, která zahrnuje antioxidanty, zesilovače acetylcholinu, stopové kovy, prostetické skupiny a cliochinol, je podávána před podáním phanchinonu, spolu s ním nebo po jeho podání.

Vynález se také týká farmaceutického prostředku, zahrnujícího phanchinon a sloučeniny nebo směsi sloučenin, vybrané ze skupiny, která zahrnuje antioxidanty, zesilovače acatylcholinu, stopové kovy, prostetické skupiny a cliochinol. Pokud je vybrán cliochinol, pak je vybrána nejméně jedna další sloučenina z uvedené skupiny.

- 5 Výhodným antioxidantem je vitamin C, vitamin E, Q10 nebo jejich kombinace. Zesilovače acetylcholinu se s výhodou volí z agonistů μΐ nebo inhibitorů acetylcholinesterasy. Výhodnými inhibitory acetylcholinesterasy jsou tacrin (ochranná známka:Cognex) a donepezil (ochranná známka:Aricept). Výhodnou prostetickou skupinou je vitamin B12.

Ve výhodném provedení vynálezu jsou phanchinon a cliochinol užity pro výrobu farmaceutického prostředku k léčbě nebo prevenci Alzheimerovy nemoci. Pro výrobu farmaceutického prostředku je výhodně užita kombinace phanchinonu, cliochinolu a vitaminu B12·

Farmaceutický prostředek může být vyroben pro orální, parenterální nebo intradermální podávání. Dále může být farmaceutický prostředek vyroben jako jediný farmaceutický prostředek nebo jako dva nebo více jednotlivých farmaceutických prostředků pro následné nebo v podstatě současné podávání.

Vynález se také týká způsobu léčení osob suspektních nebo tropících Alzheimerovou nemocí. Tento způsob zahrnuje podávání množství phanchinonu, účinného při léčení nebo prevenci Alzheimerovy nemoci, nemocným osobám.

Na trh je potřeba zavedení léku k využití v léčbě a profylaxi Alzheimerovy nemoci. Podle vynálezu, je navrhovaným známým lékem phanchinon.

V příkladech je ukázáno. Že Αβ (25-35) v buňkách PC12, má výrazný účinek na oxidačně-redukční činnost buněk. Ve způsobu, použitém v příkladu 2, oxidačně-redukční činnost exponovaných buněk 1 ěM Aá(25-35) je snížena na 60% normální hladiny (viz. obr. 2, otevřené kruhy). Nicméně, pokud buňky zpracované působením Αβ (25-35) jsou léčeny s lěg/ml phanchinonu a více, normální oxidačně-redukční činnost se navrátí. To ukazuje, že pokud je phanchinon podáván savcům, například lidem, bude zmírňovat nepříznivý účinek Aá.

- 6 I když není zamýšleno limitovat vynález na jakýkoliv mechanismus účinku, v současnosti se předpokládá, že antioxidační účinek phanchinonu zabrání účinku Aá na oxidačně—redukční činnost buněk.

Antioxidační účinek phanchinonu může být. zlepšen společným podáváním dalších antioxidantů jako je vitamin C, vitamin E, vitamin Q10 nebo jejich kombinace.

Přítomnost senilních plak v extracelulárním prostoru může zabránit nebo tlumit přenos impulsů v cholinergním nervovém systému. Činnost nervového systému závisí na mediátoru acetylcholinu. Tudíž, sloučeniny zvyšující hladinu acetylcholinu, tak jako sloučeniny zabraňující nebo snižující normální hydrolýzu acetylcholinu acetylcholinesterásozu, také nazývané inhibitory acetylcholinesterasy, mohou být podávány s phanchinonem ke zlepšeni účinku. Výhodnými inhibitory acetylcholinesterásy jsou tacrin a donepezil.

Ve studii popisované v příkladech je ukázáno, že phanchinon muže snižovat agregaci Αβ(1-40) navozenou Cu²⁺ a Zn²⁺.

Následující předpokládaný mechanismus účinku vynálezu není určený k limitování vynálezu na tento mechanismus. V současnosti přihlašovatel věří, že phanchinon a Αβ jsou látky, které kompetitivně chelátuji zinek, měď a další těžké kovy. Phanchinon má schopnost proniknout hematoencefalicou barieru. Pokud má phanchinon zachycený iont těžkého kovu v extracelulárním prostoru, přemístí ho do krve a odstraní z těla. Jakkoliv agregát nebo sůl Αβ a iont těžkého kovu je ve stejném poměru s volným Αβ a volným iontem těžkého kovu, může phanchinon postupně pochytat volné ionty těžkých kovů a přemístit je do krve, pokud je přítomen jak agregovaný Αβ tak amyloid. Volný Αβ nemůže pronikat skrz hematoencefalicou barieru pasivní difusí, spíše bude odbouráván proteolytickými enzymy normálně přítomnými v extracelulárním prostoru. Tudíž, volný Αβ nebo jeho degenerativní část, může

- 7 potenciálně poškodit neurony před rozštěpením k netoxickým objemům. Phanchinon bude mezitím zabraňovat nebo inhibovat potenciálnímu cytotoxickému účinku Aá vzhledem ke své schopnosti mařit snížení v oxidačně—redukční činnosti, kterou Aá normálně vyvolává.

2+

Snížení agregace, způsobené phanchinonem je 50-60% pro Cu a 10% pro Zn²⁺. Dále se ukazuje, že cliochinol má opačně tendence. Cliochinol snižuje agregaci Aá (1-40) navozenou Zn více nez o 60%, kdežto agregace navozená Cu²⁺ byla redukována přibližní o 30%. Jinak řečeno, phanchinon je nejlepší v redukci agregace Αβ (1-40) navozené Cu²⁺ a cliochinol je nej lepší v redukci agregace navozené Zn²⁺.

Jak Cu²⁺ tak Zn²⁺ jsou přirozeně přítomné v těle pacienta majícího nebo pravděpodobně majícího Alzheimerovu nemoc, může být žádoucí snížit nebo znovu rozpustit agregaci indukovanou obima ionty. Tak může být výhodné podávání cliochinolu před podáváním phanchinonu, spolu s ním nebo po jeho podávání.

Podávání cliochinolu je nicméně problematické, jak cliochinol tak vedlejší účinek způsobuje SMON. Předchozí studie (viz. WO 98/06403) udávali možné vlivy cliochinolu na vitamin B₁₂Je známo, že cliochinol je vylučovaný ledvinami jako deriváty glukuronidu nebo sulfátu. (Kotaki H., a spol.: Enterohepatic circulation of clioguinol in the rat, J. Pharmacobiodyn. 1984 červen; 7(6) . 420-5 a Jurima a spol.: Metabolism of 14Ciodochlorhydroxyquinoline in the dog and the rat, J. Pharmacobiodyn. 1984 březen; 7(3) : 164-70), například jako sloučenina methyl(5-chloro-7-jodo-chinolyl-2',3',4'-tri-O-acetylglukopyranosid)uronát. Krátce, tato sloučenina se dále týká cliochinol glukuronidu.

Detoxikace hydrofobních látek, jako je cliochinol, probíhá v těle převážní v játrech. Tudíž, pokud je známo, tak odstraoování

- 8 cliochinolu probíhá následovně: Cliochinol je v játrech přeměněn na cliochinol glukuronid. Potom je ve vodě rozpustný cliochinol glukuronid vyměšován do žluče. Žluč vniká do střeva, kde je větší množství cliochinol glukuronidu odstraněno stolicí. Určité množství cliochinol glukuronidu je resorbováno ze střeva do krve. Cliochinol glukuronid je filtrován z krve v ledvinách a objevuje se v terminální moči.

Léčení myší cliochinolem a následné podávání radioizotopu vitaminu B₁₂ ( (⁵⁷Co)-cyankobalamin ) je předvedeno v Mezinárodní patentové přihlášce č. WO 98/06403. Zde se ukazuje, že koncentrace vitaminu B₁₂ v mozku a v játrech u myší léčených cliochinolem setrvává na normální hladině, kdežto koncentrace radioizotopu vitaminu B_i2 v ledvinách je u těchto myší, ve srovnání s normální hladinou, snížena. Podle tohoto objevu je metabolismus vitaminu Bi₂ závislý na cliochinolu. Dále, podle tohoto objevu, jsou ledviny cílovým orgánem, kde dochází k metabolismu závislém na cliochinolu.

Za účelem vyhledávat možné interakce mezi cliochinol glukuronidem a vitaminem B₁₂ byl proveden pokus, kde cliochinol glukuronid a vitamin B₁₂ byly míchány ve vodě. Směs byla analyzována pomocí NMR. Spektra ^ΤΗ NMR, viz. obr. 5-7, ukazují, že níkteré z resonancí vitaminu B_i2 (odpovídající benzimidazolové skupině ) jsou změněny a to samé je pozorováno pro dvě resonance cliochinol glukuronidu ( odpovídajícího chinolinové skupině ). Přihlašovatel věří, že podobné výsledky budou očekávané užitím volného cliochinolu, ale cliochinol nemůže být rozpuštěn ve vodných roztocích pro zkoušku NMR.

Výsledky ukazují hydrofobní interakce mezi cliochinol glukuronidem a vitaminem Bi₂, možné mezi benzimidazolovou skupinou vitaminu B₁₂ a chinolinovou skupinou cliochinol glukuronidu.

Vitamin Bi₂ je po filtraci normálně aktivně vstřebáván z ledvinné plasmy. Tímto způsobem tělo zužitkuje většinu vitaminu

Bi2r jinak je vitamin B12 vyloučen v moči. Nedávno bylo dokázáno, že resorpce vitaminu B₁₂ je zprostředkována činností membránové bílkoviny megalin.( Moestrup S.K. a spol. Proc. Natl. Acad. Sci. 1996; 93(16) : 8612-7). Megalin vykazuje silnou afinitu k vazbě komplexu tvořeného vitaminem B_i2 a transportním proteinem transkobalaminem.

Založeno na novém objevu zde podaném, totiž, že vitamin B₁₂ se váže na cliochinol glukuronid, je jasné, že vitamin B₁₂ se neváže na bílkovinu megalin a/nebo transkobalamin, pokud je již vázán na cliochinol glukuronid. Takto resorpce vitaminu B₁₂ bude nedostačující a tělo bude po určité časové období podáváni cliochinolu trpět nedostatkem vitaminu B₁₂, jestliže nebude zásobováno dostatkem nového vitaminu B₁₂ běžnou stravou.

Pouze potrava je zdroj vitaminu B_i2 přiváděný člověku, neboť člověk vitamin B₁₂ neumí vyrobit. Tak dieta s nízkým obsahem vitaminu Bi₂ v potravě a/nebo mikroorganismy budou evidentně příčinou nedostatku vitaminu B₁₂· Pokud osoby dostávají stravu s příliš nízkým přívodem vitaminu Bi₂, podávání cliochinolu bude zhoršovat stav, protože resorpci vitaminu B_i2 je zabráněno konkurenční vazbou cliochinolu s megalinem. Skutečnost, že SMON byla pozorována pouze v Japonsku a že japonská strava především sestává ze zeleniny a cereálii, zvláště rýže (Kromhout D, a spol. Food consumption pattern in the 1960s in seven countries, Am. J. Clin. Nutr. 49: 889-894, 1989), může vysvětlovat, proč SMON byla omezena na Japonsko.

Protichůdnost vedlejších účinků při podáváni phanchinonu a/nebo cliochinolu může být požadována k společnému podávání stopových kovů a/nebo prostetických skupin. Výhodnou prostetickou skupinou je vitamin Bi₂ (cyankobalamin) .

Formou nelimitujících příkladů mohou být prostředky, jejich užití a způsoby, podle vynálezu, indikované pro: 1) pacienty s diagnostikovanou Alzheimerovou nemocí a s některým klinickým.

stadiem nemoci, 2) prevenci Alzheimerovy nemoci u pacientů s prvotními nebo prodromálními symptomy a příznaky a 3) zpoždiní začátku nebo vývoje nebo zhoršení symptomů a příznaků Alzheimerovy nemoci. Způsoby a prostředky, podle vynálezu, budou například prospěšné pro léčeni Alzheimerovy nemoci, ke zlepšení nebo zmírnění symptomů a příznaků Alzheimerovy nemoci, ke zlepšení patologických nebo laboratorních nálezů u Alzheimerovy nemoci, k opoždění vývoje Alzheimerovy nemoci, k opoždini začátku Alzheimerovy nemoci, symptomů a příznaků, k prevenci výskytu Alzheimerovy nemoci a k zabránění začátku některého ze symptomů a příznaků Alzheimerovy nebo Parkinsonovy nemoci.

Subjekt nebo pacient je zvíře, například savec, a zejména člověk a může jit o plod, dítě nebo dospělého.

Optimální dávka phanchinonu in vivo pro resolubilizaci Aá muže být stanovena lékařem vedoucím běžné pokusy. Příklad takového pokusu je monitorování rozpustného Αβ v cerebrospinální tekutině (CSF) (WO 93/10459, 27.května 1993, Melbournova universita). Začínaje s relativně nízkými dávkami (10-25 mg/den), lékař může monitorovat množství rozpustného Αβ v pacientově CSF. Jestliže se v odpovědi na podáni phanchinonu nezvýší rozpustný Αβ, což je indikací resolubilizace zinkových Αβ agregátů, dávka může být zvýšena do té doby, až je takové zvýšeni pozorováno. Jiný příklad je monitorováni klinických příznaků a symptomů nemoci za užití klinických, behaviorálních a psychologických pozorování a měření.

Před podáním lidem je účinnost výhodně předvedena na modelech zvířat. Může být užit nikterý mode zvířat pro Alzheimerovu nemoc známý v oboru.

Farmaceutické prostředky, podle vynálezu, výhodně obsahují jeden nebo více farmaceuticky přijatelných nosičů a aktivní složku/y/. Nosič/e/ musí být přijatelný ve smyslu být slučitelný s aktivními složkami prostředku a neškodný pro svého příjemce. Ve výhodném provedení, jsou phanchinon a popřípadě další aktivní

složky farmaceutického prostředku čištěné.

Bude oceněno, že množství phanchinonu a popřípadě dalších aktivních složek potřebných pro zmíněnou léčbu nebo prevenci, se bude měnit podle způsobu podávání, léčení poruchy, stavu, věku, anamnesy pacienta a galenické směsi farmaceutického prostředku atd.. Pokud je léčený pacient s diagnostikovanou Alzheimerovou nemocí, množství phanchinonu je výhodní účinné ke zvýšení rozpustnosti Αβ agregátu v cerebrospinální tekutině pacienta.

Obecně vyhovující terapeuticky účinné množství phanchinonu ve farmaceutickém prostředku je, například, 5-250 mg, výhodně 10-50 mg. Vyhovující množství sloučeniny nebo směsi sloučenin, vybrané ze skupiny zahrnující antioxidanty, agonisty μΐ, inhibitory anticholinesterasy, stopové kovy, prostetické skupiny a cliochinol ve farmaceutickém prostředku, je například 5 gg až 250 mg, výhodní 0,5-1 mg. Pokud jsou vybrány clichinol a vitamin Bi₂, množství cliochinolu je výhodní účinné k léčení nebo prevenci Alzheimerovy nemoci a množství vitaminu Βχ₂ je výhodně účinné k zabránění škodlivých vedlejších účinků podávaného cliochinolu. Množství cliochinolu a vitaminu B₁₂ je výhodně 5 mg-250 mg, více výhodně 10 mg - 50 mg a 5μg - 2 mg, nejvíce výhodně 0,5 mg- 1 mg.

Aktuálně podávané množství phanchinonu a popřípadě dalších aktivních složek, jako je cliochinol a vitamin B₁₂, může být určeno ošetřujícím lékařem. Jestliže farmaceutický prostředek v přídavku k phanchinonu obsahuje další aktivní složky, tyto mohou být v tom samém prostředku pro podávání ve společné kombinaci nebo mohou být v různých prostředcích pro podávání v podstatě současně ale odděleně nebo následně.

Léčebné prostředky zahrnují tato možná podávání- parenterální (zahrnující intramuskulární a intravenosní), orální, rektální nebo intradermální, ačkoliv preferováno je orální podávám. Farmaceutické prostředky tak mohou mít formu jako tablety, pilulky, sirupy, kapsle, čípky, prostředky pro kožní aplikaci,

prášky, zvlášti lyofilizované prášky pro rekonstituci s nosičem pro intravenosni podáváni atd..

Termín nosič se týká rozpouštědla, pomocného prostředku, přídavných látek nebo vehikula s kterými je terapie podávána. Nosiče ve farmaceutickém prostředku mohou obsahovat pojivá, jako je mikrokrystalická celulosa, polyvinylpyrrolidon (polyvidone nebo povidon), tragant, želatina, škrob, laktosa nebo monohydrát laktosy; desintegračni činidlo jako je kyselina algova, kukuřičný škrob a podobně; lubrikant nebo smáčedlo jako je stearan hořečnatý, laurylsíran sodný; kluznou látku jako je koloidni kysličník křemičitý; cukernou složku jako je sacharosa nebo sacharin; a/nebo aromatické složky jako je máta peprná, salicylan methylnatý nebo pomerančové aroma.

Léčebné prostředky vhodné pro orální podáváni, například tablety a pilulky,, mohou být získány stlačením nebo lisováním, popřípadě s jednou nebo více přídavnými složkami. Stlačené tablety mohou být připravovány mícháním složek a stlačením teto směsi ve vhodných přístrojích do tablet příslušných rozměrů. Před mícháním může být phanchinon smíchán s pojivém, lubrikantem, s inertním rozpouštědlem a/nebo desintegračnim činidlem a dále popřípadě přítomné složky mohou být míchány s rozpouštidlem, lubrikantem a/nebo smáčedlem.

Ve výhodném provedení,je volně sypný prášek phanchinonu míchán s pojivém jako je mikrokrystalická celulosa a smacedlem jako je laurylsíran sodný, až ke vzniku homogenní smísí. Jme pojivo, jako je polyvidon, je dále přidáno ke směsi během míchaní. Když dojde k stejnomirné distribuci, přidá se za stálého míchaní vodný roztok vitaminu B₁₂. Tato směs je před stlačením do tablet ve standardním kompresivnim přístroji proseta granulačnim sítem a sušena sušením.

V následujícím provedení vynálezu je volně sypný prásek phanchinonu míchán se smáčedly a/nebo emulgačnimi činidly jako je

- 13 Sapamin® (N-(4'-stearoyl amino fenyl) -trimethylamonium methylsirové kyseliny) a monohydrát laktosy, až dojde ke stejnoměrnému rozděleni složek. Následující, přípravek obsahující desintegrační látku, jako je kukuřičný škrob, je přidán za stálého míchání ke směsi phanchinonu. Následující přípravek tak může být připraven přidáním přebytku vroucí vody ke kukuřičnému škrobu, suspendovanému ve studené vodě. Konečná směs je granulována a sušena, jak uvedeno výše, a míchána s kukuřičným škrobem a stearanem horečnatým a nakonec stlačena do tablet ve standardním přistroj i.

Tablety mohou být povlečené nebo nepovlečené. Nepovlečená tableta může být označena zářezem. Povlečená tableta může být povlečena cukrem, želatinou, filmem nebo jiným enterosolventním činidlem.

Léčebné směsi, vhodné pro parenterální podáváni, obsahuji sterilní roztoky nebo suspense aktivních složek. Může být užit vodný nebo olejový nosič. Takové farmaceutické nosiče mohou být sterilní kapaliny jako je voda a oleje, které zahrnují ropu, oleje živočišného, rostlinného nebo syntetického původu jako je podzemnicový olej, sojový olej, minerální olej, sezamový olej a podobné. Prostředky pro parenterální podávání také zahrnují popřípadě další aktivní složky, které jsou rekonstituovány rozpuštěním ve farmaceuticky přijatelném nosiči k rozpuštění aktivních složek, například vodný roztok karboxymethylcelulosy a laurylsulfát.

Pokud je farmaceutickým prostředkem kapsle, může obsahovat kapalný nosič, jako je mastný olej, například kakaové máslo.

Vhodné farmaceutické pomocné látky zahrnují škrob, glukosu, laktosu, sacharosu, želatinu, slad, rýži, mouku, křídu, silikagel, stearan sodný, monostearát glycerolu, mastek, chlorid sodný, sušené odstředěné mléko, glycerol, propylen, glykol, vodu, etanol a podobně. Tyto prostředky mohou dát formu roztokům, suspensím,

- 14 emulsím, tabletám, pilulkám, kapslím, práškům, trvale uvolňovaným prostředkům a podobně. Prostředek může být vyráběn jako čípek s tradičními pojivý a nosiči jako jsou triglyceridy.

Ještě v dalším provedeni může být léčebná sloučenina vydávána v systému s řízeným uvolňováním. V jednom provedeni může být užito čerpadlo (viz.svrchu Langer,; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 201(1987); Buchwald a spol., Surgery 88: 507 (1980); Saudek a spol., N. Engl. J. Med. 321: 574 (1989)). V jiném provedení mohou být užity polymerní látky (viz. Medical Applications of Controlled Release, Langer a Wise (editoři), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen a Ball (editoři), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chern. 23. 61 (1983);viz. také Levy a spol., Science 228: 190 (1985); During a spol., Ann. Neurol. 25: 351 (1989); Howard a spol., J. Neurosurg. 71: 105 (1989). Ještě v jiném provedení může být systém s řízeným uvolňováním umístěn blízko léčebného cíle, tj . centrálního nervového systému. Tak je potřebná pouze část celkové dávky( viz. např. Goodson,in Medical Applications of Controlled Release, svrchu, vol. 2, str. 115-138 (1984) .

Jiné systémy s řízeným uvolňováním jsou probírány v Langrově přehledu (Science 249: 1527-1533 (1990)) .

V jiném provedení farmaceutických prostředků, podle vynálezu, jsou zahrnuty phanchinon a další aktivní složky jako oddálené farmaceutické prostředky. Takový prostředek může například obsahovat phanchinon a cliochinol. Jiný prostředek může obsahovat vitamin Bi₂. Tyto dva prostředky mohou být podávány současně nebo postupně. Například může být podáván prostředek obsahující phanchinon a cliochinol následovaný vitaminem B₁₂ podávaným ve dnu, týdnu nebo měsíci podávání phanchinonu. Jestliže jsou tyto dva prostředky podávány postupně, jednotka obsahující phanchinon a cliochinol je především podávána jeden až tři týdny, které jsou

následované vylučovacím obdobím jednoho až čtyř týdnu, během kterého je podáván prostředek obsahující vitamin B_i2, ale není podáván prostředek, který obsahuje cliochinol. Po čistícím období může být léčba opakována.

Vynález také popisuje farmaceutický balíček nebo sestavu, která obsahuje jeden nebo více nádobek naplněných jednou nebo více složkami farmaceutického prostředku, podle vynálezu. S takovou nádobkou/nádobkami/ mohou být popřípadě sdružené návody popisující užití nebo prodej farmaceutických nebo biologických výrobku včetně souhlasu k použití, prodeji a podávání lidem.

Jiné výrazné vlastnosti a přednosti vynálezu budou zřejmé z následujících příkladů, které ve spojení s průvodními výkresy objasňují cestou příkladů podstaty vynálezu.

Přehled obrázků na výkresech

Obrázek 1 zobrazuje účinek phanchinonu na Aá(25-35) v buokách PC12 v závislosti na dávce.

Obrázek 2 zobrazuje účinek phanchinonu na toxicitu indukovanou Aá(25-35) v buokách PC12.

Obrázek 3 zobrazuje účinek phanchinonu a cliochinolu na Aá agregaci indukovanou Zn .

Obrázek 4 zobrazuje účinek cliochinolu a phanchinonu na Aá agregaci indukovanou Cu²⁺.

Obrázek 5 zobrazuje spektra NMR tří roztoků. Roztok a obsahoval vitamin B₁₂ (hydroxykobalamin) v koncentraci 2,6mM.Roztok b obsahoval směs 2.6 mM vitaminu B_x2 a 10 mM cliochinol glukuronidu (molární poměr kolem 1:4). Roztok c obsahoval 10 mM cliochinol glukuronidu.

Obrázek 6 zobrazuje pravou polovinu obrázku 5 rozšířenou pro

- 16 snazší srovnání poloh při resonanci.

Obrázek 7 zobrazuje levou polovinu obrázku 5 rozšířenou pro snazší srovnání poloh při resonanci.

Příklady provedeni vynálezu

Přiklad 1

Účinek phanchinonu na Aá v buokách PC12 v závislosti na dávce.

Aá (25-35) bylo dodáno Bachem(CH) nebo Sigma(USA) a rozpuštěno ve fysiologickém roztoku s fosfátovým pufrem (PBS) při pH 7,4 2 hodiny před aplikací. Neurotoxicita Αβ je umístěna v sekvenci mezi zbytky aminokyselin 25 a 35 (Aá 25-35) a dekapeptid, zahrnující tuto oblast, způsobuje smrt neuronů stejně silně jako plná délka Αβ(1-40) (Yanker, Duffy LK, Kirschner DA: Neurotrophic and neurotoxic effects of amyloid á protein: reversal by tachykinin neuropeptides. Science 1990,-250(4978):279-282).

PC12 feochromcytomy potkana byly pěstovány v Eaglově prostředí v Dulbeccově modifikaci (DMEM), obsahujícím l%penicilin - streptomycin, 5% zárodečného telecího séra a 10% koňského séra, ve zvlhčeném inkubátoru s 5% CO₂.

Buňky PC12 byly naneseny na mikrotitrační plotny s 96 vyhloubeními ve ΙΟΟμΙ patřičného prostředí. Za 24 hodin byly udané koncentrace AS(25-35) peptidu přidány sami nebo spolu s phanchinonem ve stanovených koncentracích. Inkubace trvala 24 hodin. Po inkubaci byla MTT redukce měřena užitím bižni dodávaného zkušebního balíčku podle pokynů výrobce(Boehringer Mannheim). Zkoumané hodnoty, získané samotným vehikulem, byly stanoveny jako 100% .

MTT je substrát pro oxidoreduktásy intracelulární a oxidoreduktásy plasmatické membrány a je široce užíván k míření

- 17 redukcí oxidačně-redukčni činnosti buněk. Redukce oxidačněredukčni činnosti buněk se ukazuje časným ukazatelem smrti buněk zprostředkované Αβ amyloidem. (Shearman MS, Ragan CI, Iversen LL. Inhibition of PC12 cell redox activity is a specific, early indicator of mechanism of a- amyloid-mediated cell death, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994; 91 (4) :1470-1474) .

Ke zkoušce účinku phanchinonu na toxicitu indukovanou Aá(2535) v PC12 buokách, byly buňky PC12 vystaveny koncentracím peptidu Αβ (25-35) sahajícím od 0 do 10 μΜ. V nepřítomnosti phanchinonu (tj. bylo přidáno pouze vehikulum) vytvářelo Aá(25-35) inhibici MTT redukce v závislosti na dávce (obr. 1, plné kruhy). Koncentrace Αβ(25-35), tak nízké jako 0,01 μΜ, tvořily významnou redukci. V koncentraci Αβ (25-35) na 0,1 ěM nebo výše byla MTT redukce snížena k nej vyšší hladini kolem 50%.

V přítomnosti 10 μg phanchinonu na ml byl toxický účinek Aá(25-35) ve skutečnosti zrušení obr. 1, otevřené kruhy). Stejně tak v koncentracích Αβ tak vysokých jako 1 μΜ, přítomnost phanchinonu zcela zmařila účinek toxického účinku Aá. Pouze v nejvyšši koncentraci ( Αβ 10 ěM) byla malá inhibice MTT redukce způsobené Αβ. Tato inhibice byla nicméně naměřena kolem 10%, jak srovnáno s přibližní 50% při nepřítomnosti phanchinonu.

Přiklad 2

Účinek phanchinonu na toxicitu indukovanou Aá(25-35) v buokách PC12.

V této studii byly použity ty samé látky a způsoby jako v přikladu 1, až na to, že buoky PC12 byly vystaveny stálé koncentraci Αβ 1 ěM, kde koncentrace phanchinonu se měnila pouze mezi 0-10μg/ml. Při nepřítomnosti phanchinonu Αβ (25-35) měl za následek přibližní 40% inhibici MTT redukce (obr. 2, otevřené kruhy). Tato inhibice byla zachována v přítomnosti phanchinonu do 0,lμg/ml. Zvýšeni koncentrace phanchinonu nad 0,lěg/ml vedlo k

- 18 značnému snížení toxického účinku Aá (25-35) . V koncentracích, phanchinonu 1 ěg/ml a výše byl toxický účinek Aá (25-35) zcela odstranin.

Přiklad 3

Účinek phanchinonu a cliochinolu na Aá agregaci indukovanou Zn²⁺ a Cu²⁺.

mg/ml zásobního roztoku Αβ(1-40) dodaného Bachem(CH) bylo čerstvě připraveno před každým pokusem rozpuštinim lyofilizovaného peptidu v 0,01M HC1, následovaný dalším ředěním 1:1 s 0,01 M NaOH k získání neutrálního pH. Poměrná část Αβ(1-40) byla zředěna v PBS (pH 7,4) do 100 μΜ a inkubována v celkovém objemu 30 μΐ 24 hodin při teplotě místnosti. Pro společné inkubační pokusy byly přidány udané koncentrace iontů kovů a/nebo testovaných sloučenin. Testované sloučeniny byly přidány v konečné molární koncentraci 10 ěg/ml.

Tvorba amyloidu byla kvantitativně vyjádřena fluorometrickou zkouškou s thioflavinem T. Thioflavin se váže specificky k amyloidu a to způsobuje posun v jeho emisním spektru a je vytvořen fluorescenční signál přiměřeně k množství tvořeného amyloidu. Po inkubaci byly přidány peptidy Αβ(1-40) k PBS (pH 6,0) a 3 ěM thiflavinu T v konečném objemu Iml. Fluorescence byla monitorována při excitaci 454 nm a emisi 482 nm za užití fluorometru. Fluoroscan II (Molecular devices, UK) . Bylo provedeno podrobné zkoumáni doby fluorescence. Potom, kdy rozpad dosáhl stálé úrovně (kolem 5ti minut), byly průměrně stanoveny tři hodnoty odčítáním pozadí fluorescence o 3 μΜ thioflavinu T. Pro společné inkubační pokusy byla zjištěna fluorescence samotných testovaných sloučenin. Vzorky byly zpracovány třikrát. Na obrázcích (obr. 3 a 4) je znázorněn průměr ±SD pro typický pokus. Phanchinon a cliochinol byly zkoušeny pro svoji schopnost zabránit agregaci Αβ(1-40) do struktury amyloidu. Cliochinol je známá sloučenina v léčbě Alzheimerovy nemoci (viz. mezinárodní publikace č. WO 98/06403) a

- 19 byl původně zkoušen v přítomném pokusu pro srovnávací účely.

Bylo zkoumáno, zda tyto dvě sloučeniny měly nějaký účinek na Aá agregaci katalysovanou iontem kovu, zejména na agregaci způsobenou Zn²⁺ a Cu²⁺. Výsledky pokusů jsou zobrazeny na obr. 3 a 4 .

Na obr. 3 a 4 je zjevné, že Cu²⁺ a Zn²⁺ v menši míře zvyšují agregaci Αβ do amyloidových struktur poměrně k spontánní agregaci. V přítomnosti phanchinonu a cliochinolu v koncentraci 10 pg/ml, byla agregace Aá, indukovaná ionty kovu, význačně snížena.

Ve zkoumané koncentraci 10 pg/ml phanchinonu se agregace indukovaná Cu²⁺ snížila, kdežto agregace indukovaná Zn²⁺ byla pouze mírně snížená, přibližní o 10%. Cliochinol vykazoval neočekávaně opačné tendence. Agregace Αβ(1-40), indukovaná Zn²⁺, byla cliochinolem snížena více než o 60%, kdežto agregace katalysovaná Cu²⁺, byla cliochinolem snížena přibližní o 30%. Farmaceutický prostředek, který obsahuje phanchinon v kombinaci a cliochinolem, může mít také daleko širší užití než farmaceutický prostředek, který obsahuje pouze jednu z těchto sloučenin.

Přiklad 4

V tomto příkladu byl syntetizován metabolit cliochinolu.

Je známo, že cliochinol je vymišován ledvinami jako glukuronidové deriváty cliochinolu (Kotaki H., a spol.:Enterohepatic circulation of cliochinol in the rat, J. Pharmacobiodyn. 1984 červen; 7 (6) : 420-5 a Jurima M. a spol.:Metabolism of 14C-iodochlorohydroxyquinoline in the dog and the rat, J. Pharmacobiodyn. 1984 březen; 7(3): 164-70). Přeměna cliochinolu na odpovídající glukuronid probíhá nejspíše v játrech. Následuje tvorba cliochinol glukuronidu v játrech, který je eventuelně přepraven do ledvin k vyloučení močí. Glukuronový derivát cliochinolu v podobě methyl(5-chloro-7-jodo-chinolyl

- 20 2',3',4'-tri-O-acetyl-glykopyranosid)uronátu byl připraven podle reakčního schématu (viz. sch. Č. 1) .

Směs 5-chloro-8-hydroxy-7-jodo-chinolinu ((50 mg, 0,164 mmol), methyl l-bromo-l-deoxy-2,3,4- tri-O-acetyl-Dglukopyranosiduronátu ( 65 mg, 0,164 mmol) , CaSO4.H2O ; 35mg ) a pyridinu ( 1,5 ml ) byla míchána při teplotě místnosti po dobu 20ti minut. Čerstvě připravený Ag₂CO₃ ( 35 mg) byl přidán k reakční směsi a suspendovaný roztok byl míchán v temnu při teplotě místnosti po dobu 20ti hodin. Dále byl reakční produkt deacetylován 1 A vodným NaOH.

Reakční směs byla zředěna s CH₂C1₂ ( 10 ml ) , filtrována a rozpouštědlo se odpařovalo pod sníženým tlakem. Výše uvedený produkt byl čištěný světelnou chromatografií ( TLC: CH₂C1₂ /MeOH 99/1, eluční činidlo: CH₂Cl₂/-MeOH 99,5/0,5).

NMR ( 400Mhz, CDC1₃ ) 2,04 (s, 3H, Ac), 2,09 (s, 3H, Ac), 2,13 (s, 3H, Ac), 3,68 (s, 3H, Me), 3,99 (d, 1H, 5'-H), 5,40-5,52 (m, 3H, 2', -3', -4',-H), 6,29 (d, 1H, l'-H), 7,56 (m, 1H, 3H) , 7,99 (s, 1H, 6-H), 8,52 (d, 1H, 4-H), 8,93 (s, 1H, 2-H).

Tato sloučenina se dále týká cliochinol glukuronidu.

Přiklad 5

Vzájemné působení vitaminu. B₂₂ a cliochinol glukuronidu, připraveném jako v příkladu 4, bylo zkoumáno užitím spektroskopu nukleární magnetické resonance (NMR).

Protože je cliochinol glukuronid rozpustný ve vodí, byl výzkum proveden v pufrované vodě při pH 6,5. Byly připraveny tři rozdílné roztoky a jejich ’ή NMR spektra byla zaznamenána ve spektrofotometru DRX 400 Mhz při 20 C. Roztok a/ obsahoval volný vitamin B₁₂ (hydroxykobalamin) v koncentraci 2,6 mM. Roztok b/ obsahoval směs 2,6 mM vitaminu B_x2 a 10 mM cliochinol glukuronidu (molární poměr kolem 1:4) . Roztok c/ obsahoval 10 nM cliochinol

- 21 glukuronidu.

Na obrázku 5 jsou uvedena spektra tři roztoků pro aromatickou oblast (5,5-9,8 ppm).Rozdíly jsou docela malé, ale zřejmé, se vztahem v rozšíření na obr. 6 a 7. Některé resonance vitaminu B12 (odpovídající benzimidazolové skupině) byly posunuty (viz. obr. 6) a to samé bylo pozorováno pro dvě resonance cliochinol glukuronidu (odpovídající chinolinové skupině) (viz. obr. 7).

Výsledky ukazují na interakci mezi cliochinol glukuronidem a vitaminem B_x2, pravděpodobně hydrofobní povahy mezi benzimidazolovou skupinou vitaminu B₁₂ a chinolinovou skupinou cliochinol glukuronidu.

Hydrofobní vazba vitaminu B_X2 ke cliochinol glukuronidu je, pokud známo příčinou, že vitamin B₁₂ bude z těla vylučován spolu s cliochinol glukuronidem, tedy je příčinou zabránění resorpce vitaminu B₁₂, která bude eventuelně vést k nedostatku vitaminu Bi₂. Tudíž, nedostatek vitaminu Β_ϊ2 se alespoň v některém stupni zdá být základní příčinou SMON. V důsledku, kdykoliv je cliochinol podáván, by mělo být zajištěno, že hladina vitaminu B₁₂ u léčených subjektů je pro vyhnutí se nedostatku dostatečná. To by mělo být zajištěno společným podáváním cliochinolu a vitaminu B_X2 ·

Příklad 6

Příprava farmaceutického prostředku obsahujícího phanchinon.

250 g phanchinonu bylo mícháno s 200g sapaminu® (N-(4 stearoyl amino-fenyl)-trimethylamonium methylsírové kyseliny) a 1025 g monohydrátu laktosy po dobu 5ti minut. 300g vroucí vody bylo přidáno najednou ke směsi 100 g kukuřičného škrobu ve studené vodě. Kukuřičná suspense, zchlazená na 40°C, byla přidána za stálého míchání k práškové směsi obsahující phanchinon. Směs byla granulována za užití 2,5 mm síta a sušena 18 hodin při 40°C. Sušená granula byla smíchána s 400 g kukuřičného škrobu a 20ti g

- 22 stearanu horečnatého. Výsledná směs byla zpracována do tablet o průměru. 8,0 mm a hmotnosti 200mg.

Přiklad 7

Příprava farmaceutického prostředku obsahujícího phanchinon, cliochinol a vitamin B₁₂.

250 g phanchinonu a 250 g cliochinolu bylo mícháno s 200 g sapaminu® ( N-(4'-stearoyl amino-fenyl)-trimethylamonium kyseliny methylsirové) a 1025 g monohydrátu laktosy po dobu 5ti minut. K tomu bylo přidáno 300 g vroucí vody a směs kukuřičného škrobu ve 100g studené vody. Kukuřičná suspense, zchlazená na 40°C, byla za stálého míchání přidána k práškové směsi obsahující phanchinon a cliochinol. Dále bylo přidáno 5 g vodného roztoku vitaminu B₁₂.Směs byla granulována za užití 2,5 mm síta a sušena 18 hodin při teplotě 40 °C. Sušená granula byla smíchána se 400 g kukuřičného škrobu a 20ti g stearanu hořečnatého. Výsledná směs byla zpracována do tablet o průměrů 8 mm a hmotnosti 200 mg.

Jsou zde citovány různé publikace, jejich obsah je začleněn do přihlášky.

Vynález je tak popsán, aby bylo zřejmé, že to samé muže být odlišné v mnoha cestách. Taková odlišnost nebude brána v úvahu jako odchylka ducha a účelu vynálezu a všechny takové modifikace, jak bude zřejmé odborníkům, jsou určeny, aby byly zahrnuty v rozsahu následujících nároků.

Claims (24)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   Užiti phanchinonu pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení nebo prevenci Alzheimerovy nemoci.
2. 2. Užiti podle nároku 1, kde phanchinon je podáván v množství 5 mg až 250 mg jednou nebo třikrát denně, výhodně 10 mg až 50 mg jednou nebo třikrát denně.
3. 3. Užití phanchinonu a sloučeniny nebo směsi sloučenin, vybrané ze skupiny obsahující antioxidanty, zesilovače acetylcholinu, stopové kovy, prostetické skupiny a cliochinol pro výrobu farmaceutického prostředku k léčeni nebo prevenci Alzheimerovy nemoci.
4. 4. Užití podle nároku 3, kde antioxidantem je vitamin C, vitamin E, Q10 nebo jejich kombinace.
5. 5. Užití podle nároku 3 nebo 4, kde zesilovačem acetylcholinu je donepezil nebo tacrin.
6. 6. Užiti podle nároku 3,4 nebo 5, kde zesilovačem acetylcholinu je vitamin Bi₂.
7. 7. Užití podle nároku 3 až 6, kde pro výrobu farmaceutického prostředku jsou užity phanchinon a cliochinol.
8. 8. Užití podle nároku 3 až 7, kde pro výrobu farmaceutického prostředku jsou užity phanchinon, cliochinol a vitamin Bj₂.
9. 9. Užití podle nikterého z nároků 1 až 8, kde je farmaceutický prostředek zpracován pro orální, parenterálni nebo intradermálni podávání.
10. 10. Užití podle z nikterého z nároků 1 až 8, kde je farmaceutický prostředek zpracován jako jediný farmaceutický prostředek.
11. 11. Užití podle nároku 3 až 8, kde je farmaceutický prostředek zpracován jako dva nebo více oddělených farmaceutických přípravků pro následné nebo v podstatě současné podávání.
12. 12. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, ž e obsahuje (a) množství phanchinonu účinné k léčení nebo prevenci Akzheimerovy nemoci a (b) sloučeninu nebo směs sloučenin vybranou ze skupiny zahrnující antioxidanty, zesilovače acetylcholinu, stopové kovy, prostetické skupiny a cliochinol, pod podmínkou, že je vybrán cliochinol, při nejmenším je ze zmíněné skupiny vybrána jedna další sloučenina.
13. 13. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačuj ία i se tím, že antioxidant je vybrán ze skupiny zahrnující vitamin C, vitamin E, Q10 nebo jejich kombinaci.
14. 14. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačuj íc í se tím, že zesilovačem acetylcholinu je tacrin nebo donepezil.
15. 15. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačuj Ιοί se tím, že prostetickou skupinou je vitamin Bi₂.
16. 16. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, ž e obsahuje (a) množství phanchinonu účinné k léčení nebo prevenci Alzheimerovy nemoci a (b) směs cliochinolu a vitaminu B₁₂.
17. 17. Farmaceutický prostředek podle nároku 12 nebo 16, vyzná čující se tím, že dále obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič.
18. 18. Farmaceutický prostředek podle některého z nároků 12, 16 nebo 17, vyznačující se tí m, ž e množství phanchinonu je 5 mg až 250 mg, výhodní 10 mg až 50 mg.
19. 19. Farmaceutický prostředek podle některého z nároků 12, 16 nebo 17, vyznačující se tím, že množství cliochinolu je 5 mg až 250 mg, výhodní 10 mg až 50 mg.
20. 20. Farmaceutický prostředek podle nároku 16 nebo 17, vyznačující se tím, že množství vitaminu B_i2 je 5ěg až

    2 mg, výhodně 0,5 mg až 1 mg.
21. 21. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, 16 nebo 17, vyznačující se tím, že prostředek je ve formě pro parenterálni podávání, intradermálni podáváni nebo orální podávání.
22. 22. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, 16 nebo 17, vyznačující se tím, že prostředek je ve formě tablet.
23. 23. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, 16 nebo 17, vyznačující se tím, že cliochinol a vitamin B₁₂ jsou ve formě oddělených přípravků, phanchinon je ve formě spolu s cliochinolem, vitaminem B₁₂ nebo odděleně.
24. 24. Sestava, vyznačující se tím, že obsahuje v jedné nebo více nádobkách množství phanchinonu a cliochinolu účinného k léčení nebo prevenci Alzheimerovi nemoci a množství vitaminu B_i2 účinné k inhibici škodlivých vedlejších účinků při podávání cliochinolu.