CZ20014496A3

CZ20014496A3 - Indolové deriváty a jejich pouľití pro léčení osteoporózy

Info

Publication number: CZ20014496A3
Application number: CZ20014496A
Authority: CZ
Inventors: Carlo Farina; Stefania Gagliardi; Pietra A. T. Novella
Original assignee: Glaxosmithkline S. P. A.
Priority date: 1999-06-18
Filing date: 2000-06-16
Publication date: 2002-07-17
Also published as: GB9914371D0; IL147012A; TR200103683T2; JP2003503490A; CZ301697B6; HUP0202049A2; EP1212317B1; GC0000341A; KR100701109B1; ZA200200177B; ATE276245T1; HUP0202049A3; DE60013859T2; US6787550B1; CN1370159A; DE60013859D1; WO2001002388A1; PT1212317E; CA2376657A1; BR0011708A

Description

Tento vynález se týká jistých nových sloučenin, způsobu výroby takových sloučenin, farmaceutických prostředků s obsahem takových sloučenin a použiti takových sloučenin a prostředků v lékařství.

Dosavadní stav techniky chorobách spjatých se ztrátou kostní hmoty je známo, že jsou zapříčiněny nadměrnou aktivitou buněk osteoklastů. Je také známo, že jisté sloučeniny, obvykle příbuzné s bafilomycinem, jsou užitečné při léčbě takových chorob. Například mezinárodní patentová přihláška publikačního čísla WO 91/06296 (Aktiebolaget Astra) popisuje jisté bafilomycinové makrolidy pro léčbu chorob postihujících kost.

Deriváty bafilomycinu však nejsou u lidí selektivní vůči osteoklastům. Použití těchto sloučenin je tudíž spjato s nepřijatelnou toxicitou v důsledku generalisované blokády jiných esenciálních v-ATPas. Ve skutečnosti dodnes neexistuje žádná selektivní léčba, která by byla selektivní vůči lidským osteoklastům.

Hledání úspěšné léčby chorob spjatých se ztrátou kostní hmoty u lidí je dále komplikováno tím, že povaha terapeutického cíle selektivní inhibice osteoklastů je kontroversní. Baron a kol. (mezinárodní patentová přihláška publikačního čísla WO 93/01280) tedy ukazuje, že u osteoklastů byla identifikována specifická vakuolární

ATPasa (v-ATPasa) jako potenciální terapeutický cíl. Baron však svou práci provedl na kuřatech a Halí a kol. (Bone and Minerál, 27, 159 až 166 (1994)) ve studii týkající se savců shrnuje, že oproti ptačí osteoklastové v-ATPase je savčí v-ATPasa farmakologicky podobná v-ATPase v jiných buňkách a je tudíž nepravděpodobné, že by byla dobrým terapeutickým cílem.

Podstata vynálezu

Nyní bylo překvapivě nalezeno, že jisté indolo.vé sloučeniny jsou selektivní pro lidské osteoklasty, přičemž působí tak, že selektivně inhibují jejich kost resorbující aktivitu. Tyto sloučeniny jsou tudíž považovány za obzvláště užitečné pro léčbu a/nebo profylaxi chorob spjatých se ztrátou kostní hmoty, jako je osteoporóza a související osteopenní choroby., Pagetova choroba, hyperparathyroidismus a související choroby. Těmto sloučeninám se také přisuzuje antitumorová aktivita, antivirová aktivita (například proti viru Semliki Forest, věsikulární stomatitidy, ‘Newcastleské choroby, chřipky A a B a HIV), protivředová aktivita (například tyto sloučeniny mohou být užitečné pro léčbu chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori), imunosupresívní aktivita, antilipidemická aktivita, antiatherosklerotická aktivita a má se za to, že jsou užitečné při léčbě AIDS a Alzheimerovy choroby. Dále jsou tyto sloučeniny také považovány za užitečné při inhibici angiogenese, tj. tvorby nových cév, která je pozorována u různých typů patologických stavů (angiogenních chorob), jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriasa a solidní tumory.

Tento vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce (I)

(S s?

nebo její sůl nebo solvát, ve kterém

Ri a R₂ každý nezávisle představují alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo atom halogenu;

R3 a R₄ každý nezávisle představují atom vodíku, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, arylalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylové části, hydroxyskupinu, karboxyalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylové části, hydroxyalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, dihydroxyalkoxyskupínu s 1 až 6 atomy uhlíku, mono- a dialkylaminoalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku jak v alkylové, tak v alkoxylové části nebo aminoalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, a

R5 představuje skupinu -NR_sR_t, kde R_s a R_t každý nezávisle představuje atom vodíku, nesubstituovanou nebo substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo nesubstituovaný nebo substituovaný heterocyklyl.

·· · ·· ·♦ • ·· · ·

Vhodně Rx a R₂ každý nezávisle představují methoxyskupinu nebo atom chloru.

Vhodné polohy pro substituci substituenty Rí nebo R₂ jsou polohy 4, 5, 6 nebo 7.

S výhodou Ri nebo R₂ jsou v poloze 5 nebo 6.

Výhodně Rx je 5-chlor a R₂ je 6-chlor.

Vhodně R₃ je hydroxyskupina, methoxyskupina, ethoxyskupina, propoxyskupina, benzyloxyskupina, ethoxykarbonylová skupina, hydroxyethoxyskupina, dihydroxypropoxyskupina, dimethylaminoethoxyskupina nebo aminopropoxyskupina.

Vhodně R₃ je umístěn k části -COR₅ v poloze ortho nebo meta.

Vhodně R₄ je atom vodíku nebo methoxyskupina.

Vhodně R₄ je umístěn k části -COR₅ v poloze meta.

Vhodně R_s nebo R_t představují nesubstituovanou nebo,substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo nesubstituovaný nebo substituovaný heterocyklyl.

Když R_s nebo R_t představují nesubstituovanou nebo substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, jsou vhodnými alkylovými skupinami s 1 až 6 atomy uhlíku ethyl, propyl a butyl.

ťí

Když R_s nebo R_t představují substituovaný alkyl, jsou výhodnými skupinami 3-[4-(3-methoxyfenyl)piperazin-1-yl]propyl a 3-[4-(2-pyrimidinyl)piperazin-l-yl]propyl.

Vhodně R₅ nebo R_t představují nesubstituovanou nebo substituovanou piperidinylovou skupinu.

S výhodou R_s nebo R_t představují nesubstituovanou nebo substituovanou 4-piperidinylovou skupinu.

Když R_s nebo R_t představují substituovanou piperidinylovou skupinu, vhodné substituenty zahrnují alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, kondenzovanou cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, aralkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, polyhydroxyalkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxykarbonylalkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylové části a 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, karboxyalkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části a aminoalkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.

Výhodnými substituenty piperidinylových skupin jsou alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, obzvláště methylové skupiny.

Když R_s nebo R_t představují substituovanou piperidinylovou skupinu, je výhodné, když substituenty jsou připojeny na jeden nebo oba atomy uhlíku v poloze alfa k atomu dusíku.

Příklady substituovaných piperidinylových skupin

·· ·♦ • · · » • · « • · · • · · • · · · · · jsou 1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-ylová skupina a 2,2, 6, 6-tetramethylpiperidin-4-ylová skupina.

S výhodou R_t je atom vodíku.

Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela vzorec (I), které mají obecný vzorec (!') pod obecný ve kterém

Ri, R₂, R3,

R₄ a R5 mají význam definovaný u obecného vzorce (I), za předpokladu, že obecný vzorec (I') nezahrnuje

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-yl)benzamid;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-methoxy-N-(1,2,2,6, 6-pentamethylpiperidin-4-yl)benzamid;

4-(5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl)-2-methoxy-N-(1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-yl)benzamid;

4- (5,6-dichlor-lH-indol-2-yl.) -3-methoxy-N- (3-diethylaminopropyl)benzamid;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-2-methoxy-N-(3-diethylaminopropyl)benzamid;

·· · ·· ·♦ • · · · · · ?

9 9 9 9 9 9 • · ···· · · · · • · · · · · ·· · ······

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-methoxy-N-[3-[4-(3-chlorfenyl)piperazinyl]propyl]benzamid;

4-(5/6-dichlor-lH-indol-2-yl)-2-methoxy-N-[3-[4-(3-chlorfenyl)piperazinyl]propyl]benzamid;

4-(5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-methoxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-N-methylbenzamid nebo

4-(5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl)-2-methoxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-N-methylbenzamid.

Má se za to, že sloučeniny obecného vzorce (I') jsou nové. Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce (I') nebo její sůl nebo její solvát.

Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela pod obecný vzorec (I) majících obecný vzorec (IA)

ve kterém

Ri, R₂, R₃, R₄ a R₅ mají význam definovaný u obecného vzorce (I),

R_s je 3-[4-(3-methoxyfenyl)piperazin-l-yl]propyl nebo 3-[4-(2-pyrimidinyl)piperazin-l-yl]propyl, a

R_c je atom vodíku.

·· φ • · · · · · · _ 2 _ ·»····· φφφφφ ° φ φ φ φ φ ···· φ φφ · φ· φφ • φ · Φ φ · · φ · · φ φ φ φ φ φ φ φ φ

Má se za to, že sloučeniny obecného vzorce (IA) jsou nové.

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce (IA) nebo její sůl nebo její solvát.

Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela pod obecný vzorec (I), majících obecný vzorec (IB)

Ri, R₂, R3, R4 a R5 mají význam definovaný u obecného vzorce (I),

R_s je 3-pyridyl nebo 3-(6-methoxy)pyridyl a

R_t je atom vodíku.

Má' se za to, že sloučeniny obecného vzorce (IB) jsou nové.

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce (IB) nebo její sůl nebo její solvát.

Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela pod

obecný vzorec (IC) \³

I ve kterém (IC)

9· · • · * • · « • 4444 • 4

4444 · · ·· ·· • · · · · · · • · · · · 4 * • 4444444 · 4 • 4 · · · ·

4 · 44 44 44

R₂, R₄ a Rs mají význam definovaný u obecného vzorce (I),

R5 je 2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl,

R_t je atom vodíku,

R₃ je 3-ethoxyskupina a

Ri je 5-chlor nebo 5-methoxyskupina.

Má se za to, že sloučeniny obecného vzorce (IC) jsou nové.

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce (IC) nebo její sůl nebo její solvát.

Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela, pod obecný vzorec (I) majících obecný vzorec (ID) ve kterém

(ID)

Ri, R₂, R₄ a R₅ mají význam definovaný u obecného vzorce (I),

R=

Rt

Ri je 2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl, je atom vodíku, je 2-methoxyskupina, 3-methoxyskupina, 3-etho- 10 ·· A • · A

9 · • AAA· • · • AAA A • 9 9

9 »

A · A *

A A A A A A • A A

A A · «·

A Ά * • * • A A · · «Α AAAA xyskupina, 3-propoxyskupina, 3-benzyloxyskupina 3-(2-ethoxykarbonylová skupina), 3-(2-hydroxyethoxyskupina), 3-(2,3-dihydroxypropoxyskupinaj 3-(2-dimethylaminoethoxyskupina) nebo 3-(3-aminopropoxyskupina) a 3-hydroxyskupina a

R₄ je 5-methoxyskupina nebo atom vodíku.

Má se za to, že sloučeniny obecného vzorce (ID) jsou nové

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce (ID) nebo její sůl nebo její solvát.

Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela pod obecný vzorec (I) majících obecný vzorec (IE)

Ri, R₂, R₄ a R₅ mají význam definovaný u obecného vzorce (I),· i—.

R_s

Rt

R₃ r₄ je 1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-yl, je atom vodíku a je 2-methoxyskupina nebo 3-ethoxyskupina a je 5-methoxyskupina nebo atom vodíku.

Má se za to, že sloučeniny obecného vzorce (IE) jsou nové

4» • · · · • · · · · · •*44444 · ·

- 11 «4 4 4 4

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce (IE) nebo její sůl nebo její solvát.

zcela pod

Existuj e obecný vzorec podskupina sloučenin spadajících (I) majících obecný vzorec (IF)

Riz R₂, R3, R4 a R5 mají význam definovaný u obecného vzorce (I),

R_s je l-benzylpiperidin-4-yl, 1-(4-ethoxykarbonyl)butylpiperidin-4-yl, 1-(4-hydroxykarbonyl)butylpiperidin-4-yl a

Rr je atom vodíku.

Má se za to, že sloučeniny obecného vzorce (IF) jsou nové.

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce (IF) nebo její sůl nebo její solvát.

Jak je zde používán, pojem alkyl zahrnuje alkylové skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem, které mají od 1 do 12, vhodně od 1 do 6, výhodně od 1 do 4, atomů uhlíku, jako jsou methylová, ethylová, n- a isopropylová a η-, iso- a terč.-butylová a pentylová skupina a také zahrnuje tyto alkylové skupiny při tvorbě části jiných skupin, jako jsou alkoxyskupina nebo alkanoylová skupina.

AA A

- 12 - O AAAA A A A AAAA · A · « :· *..· ϊ ·..*·:· , Vhodné substituenty kterékoli alkylové skupiny zahrnuji heterocyklylové skupiny, například piperazinyl.

Jak je zde používán, pojem aryl zahrnuje fenyl a naftyl, obzvláště fenyl.

Vhodné případné substituenty jakékoli arylové skupiny zahrnují až 5 substituentů, vhodně až 3 substituenty, zvolené z alkylové skupiny, alkoxyskupiny, thioalkylové skupiny, hydroxyskupiny, atomu halogenu, arylové skupiny, heterocyklylové skupiny, trifluormethylové skupiny, alkylkarbonylové skupiny, kyanoskupiny, nitroskupiny nebo skupiny -NR_UR_V, kde R_u a R_v každý nezávisle představují atom vodíku, alkylovou skupinu nebo alkylkarbonylovou skupinu.

Vhodné aralkylové skupiny zahrnují fenethylovou a benzylovou skupinu, obzvláště benzylovou skupinu.

Výhodně substituované aralkylové skupiny jsou substituovány v arylové části.

Jak jsou zde používány, pojmy heterocyklický a heterocyklyl zahrnují nasycené nebo nenasycené jednoduché nebo kondenzované kruhové heterocyklické skupiny, přičemž každý kruh má 4 až 11 atomů kruhu, obzvláště 5 až 8, výhodně 5, 6 nebo 7, kteréžto atomy kruhu zahrnují 1, 2 nebo 3 heteroatomy zvolené z 0, S nebo N. Příklady takových skupin zahrnují piperidyl, pyridyl, piperazinyl a pyrimidinyl.

Vhodné případné substituenty kterékoli heterocyklylové skupiny zahrnují substituenty uvedené u arylové skupiny.

·» 4 • « · 4 · · • · · 4 4 4 4 • · 4 · · · » 4 4 4 4

4 · 4 4 • « · · 4 44 ·

Jak je zde používán, pojem halogen zahrnuje fluor, chlor, brom a jod, vhodně fluor a chlor, výhodně chlor.

Když je zde použit, zahrnuje pojem acyl alkylkarbonylovou skupinu.

Jisté ze sloučenin obecného vzorce (I) mohou obsahovat chirální atomy a/nebo násobné vazby a mohou tudíž existovat jako stereoisomery. Tento vynález zahrnuje všechny stereoisomerní formy sloučenin obecného vzorce (I), včetně geometrických isomerů, diastereoisomerů, enantiomerů a jejich směsí, včetně racemických modifikací.

Stereoisomery se mohou dělit nebo rozštěpit obvyklými způsoby nebo jakýkoli daný isomer se může získat obvyklými stereospecifickými nebo asymetrickými syntézami.

Vhodnými solemi jsou farmaceuticky přijatelné soli.

Vhodné farmaceuticky přijatelné soli zahrnují adiční soli s kyselinou a soli karboxylových skupin.

Vhodné farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou zahrnují soli s anorganickými kyselinami, například jako kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou bromovodíkovou, kyselinou orthofosoforečnou nebo kyselinou sírovou, nebo s organickými kyselinami jako například s kyselinou methansulfonovou, kyselinou toluensulfonovou, kyselinou octovou, kyselinou propionovou, kyselinou mléčnou, kyselinou citrónovou, kyselinou fumarovou, kyselinou jablečnou, kyselinou jantarovou, kyselinou

- 14 • · e

salicylovou, kyselinou maleinovou, kyselinou glycerofosforečnou nebo kyselinou acetylsalicylovou.

Vhodné farmaceuticky přijatelné soli karboxylových skupin zahrnují kovové soli, jako například soli hlinité, soli alkalických kovů, jako je sodík nebo draslík a lithium, soli kovů alkalických zemin, jako je vápník a hořčík a amoniové nebo substituované.amoniové soli, například soli s alkylaminy s 1 až 6 atomy uhlíku, jako je triethylamin, s hydroxyalkylaminy s 1 až 6 atomy uhlíku, jako je 2-hydroxyethylamin, bis(2-hydroxyethyl)amin nebo tri(2-hydroxyethyl)amin, s cykloalkylaminy, jako je dicyklohexylamin, nebo s prokainem, 1,4-dibenzylpiperidínem, N-benzyl-b-fenethylaminem, dehydroabietylaminem, N,N-bisdehydroabietylaminem, glukaminem, N-methylglukaminem nebo s bázemi pyridinového typu, jako je pyridin, kollidin nebo chinolin.

Vhodné solváty sloučenin obecného vzorce (I) jsou farmaceuticky přijatelné solváty, jako jsou hydráty.

Soli a/nebo solváty sloučenin obecného vzorce (I), které nejsou farmaceuticky přijatelné, mohou být užitečné jako meziprodukty při výrobě farmaceuticky přijatelných solí a/nebo solvátu sloučenin obecného vzorce (I) nebo sloučenin obecného vzorce (I) samotných a jako takové tvoří další aspekt předloženého vynálezu.

Sloučenina obecného vzorce (I) se může vyrobit amidací vhodné karboxylové kyseliny vhodným aminem. Předložený vynález tudíž také poskytuje způsob výroby sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její soli nebo jejího

- 15 solvátu, kterýžto způsob zahrnuje amidaci sloučeniny obecného vzorce (II)

----- --______ ⁰ (Π).

ve kterém ί*

Ri-, R₂-, R3- a R4- každý zvlášť představuje R_lř R₂, R₃ a R₄, které mají význam definovaný u obecného vzorce (I), nebo jeho chráněnou formu, sloučeninou obecného vzorce (III)

HNR_S-R_t- (III) ve kterém

R_s- a R_t- každý představují R_s a R_t, které mají význam definovaný u obecného vzorce (I), nebo jeho chráněnou formu a následně, pokud je to nezbytné, provedení jednoho nebo více z následujicích kroků:

(i) konverze jedné sloučeniny obecného vzorce (I) na jinou sloučeninu obecného vzorce (I), (ii) odstranění jakékoli chránící skupiny, (iii) příprava soli nebo solvátu sloučeniny takto vzniklé.

Vhodné způsoby amidace zahrnují zpracování

- 16 • · sloučeniny obecného vzorce (II) se sloučeninou obecného vzorce (III).

{?

¢..

Reakce mezi sloučeninami obecného vzorce (II) a (III) se může provádět za příhodných amidačních podmínek, například v aprotickém rozpouštědle, jako jsou dimethylformamid, acetonitril a tetrahydrofuran, při jakékoli teplotě poskytující vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, příhodně při teplotě místnosti, výhodně se amidační reakce provádí za přítomnosti peptidového kondenzačního činidla, jako je 1-hydroxybenzotriazol (HOBT) a/nebo hydrochlorid 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (WSC).

Sloučenina obecného vzorce (II) se může připravit cyklizací sloučeniny obecného vzorce (IV)

Rp

r.

(IV) ve kterém

Ri-, R₂-, R3- a R₄- mají význam definovaný u obecného vzorce (II) a

R_p představuje chráněnou karboxylovou skupinu nebo skupinu převoditelnou na karboxylovou skupinu, a poté, podle požadavku, převedení skupiny R_p na karboxylovou skupinu.

- 17 • · · · 9 '·' · *' ·· · · 9 9 9 9 H>

99999· 9999999 9 ·

9 9 9 9 9 9 9

9·99 9 ·9 · 99 9999

Vhodně se cyklizační reakce provádí za redukčních cyklizačních podmínek, například za použití směsí práškové železo/kyselina octová nebo hydrogensiřičitanu alkalického kovu, jako je hydrogensiřičitan sodný, v jakémkoli vhodném rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, ethanol, methanol nebo voda nebo jejich směsi, při jakékoli teplotě poskytující vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, jako je zvýšená teplota, příhodně při teplotě zpětného toku rozpouštědla.

Když R_p je chráněná karboxylové skupina, vhodné skupiny zahrnují nižší alkoxykarbonylové skupiny, například methoxykarbonylovou skupinu nebo ethoxykarbonylovou skupinu, které mohou být odstraněny obvyklými způsoby hydrolýzy, například za použití bázické hydrolýzy s využitím ethanolického hydroxidu draselného.

Když R_p je skupina převoditelná na karboxylovou skupinu, vhodné skupiny zahrnují kyanoskupinu. Takové skupiny se mohou převést na karboxylové skupiny za použití obvyklých způsobů, například když R_p je kyanoskupina, může být převedena na karboxylovou skupinu hydrolýzou za použití obvyklých způsobů, například za použití bázické hydrolýzy s využitím roztoku hydroxidu draselného v ethanolu při teplotě zpětného toku.

Výhodně R_p je kyanoskupina.

Sloučenina obecného vzorce (IV) se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce (V) ^Rí

NO,

NÍCH^ (V)

- 18 ·· ·

• · · · · ve kterém

Ri- a R₂- mají význam definovaný u obecného vzorce (II)

ve kterém <*.·

R3- a R₄- a R_pmají význam definovaný u obecného vzorce (IV) a .

Li představuje odstupující skupinu, jako je atom halogenu, například chloru.

Reakce mezi sloučeninami obecného vzorce (V) a (VI) se může provádět v inertním uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je cyklohexan, při jakékoli teplotě poskytující vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, jako je zvýšená teplota, příhodně při teplotě zpětného toku rozpouštědla a za přítomnosti báze, výhodně terciárního aminu, jako je triethylamin.

Reakce mezi sloučeninami obecných vzorců (V) a (VI)probíhá cestou meziproduktu, který se obvykle neisoluje a který poskytuje požadovanou sloučeninu obecného vzorce (IV) při zahřívání in šitu. V alternativním aspektu se meziprodukt isoluje, čímž poskytne alternativní přípravu

• ·

ve kterém

Ri-, R₂-, R3- a R4- mají význam definovaný u obecného vzorce (II) a .

R_p má význam definovaný u obecného vzorce (IV), zahřívá k poskytnutí sloučeniny obecného vzorce (IV) jak je uvedeno výše.

Konverse sloučeniny (VII) na sloučeninu obecného vzorce (IV) se příhodně provádí v polární směsi rozpouštědel, jako je dioxan a voda, obvykle při teplotě zpětného toku směsi rozpouštědel za podmínek analogických podmínkám popsaným v J. Het. Chem., 11, 219 až 221 (1974).

Sloučeniny obecného vzorce (V) jsou známými sloučeninami nebo se připraví za použití způsobů analogických způsobům použitým k přípravě známých sloučenin, jako jsou způsoby, které jsou popsány v Meervein a kol., Ann. Chem., 641, 1 (1961) a Org. Synth. Collective VII, 34 až 41.

'··

- 20 Sloučeniny obecného vzorce (VI) jsou známé, jsou komerčně dostupné nebo se připraví za použití způsobů analogických způsobům použitým k přípravě známých sloučenin, jako jsou sloučeniny popsané v J. March, Advanced Organic Chemistry, 3. vydání (1985), Wiley Interscience.

Sloučeniny obecného vzorce (III) jsou známé nebo se připraví za použití způsobů analogických způsobům použitým k přípravě známých sloučenin, jako jsou sloučeniny popsané v J. March, Advanced Organic Chemistry, 3. vydání, Wiley Interscience.

Aminy obecného vzorce HNR_S-R_t- se mohou připravit za použití způsobů známých v oboru pro přípravu aminů, například jak je uvedeno v Houben-Weil, Methoden der Organischen Chemie, díl Xí/l (1957) a díl E16d/2 (1992), Georg Thieme Verlag, Stuttgart.

(II) (VIII)

Alternativně se sloučenina obecného vzorce může připravit cyklizací sloučeniny obecného vzorce

Ri-, R?·. R3' 3 R₄- mají význam definovaný u obecného vzorce (II) a

Rp- představuje chráněnou karboxylovou skupinu nebo skupinu převoditelnou na karboxylovou skupinu,

- 21 ·· ·

a poté, podle požadavku, převedením skupiny R_p- na karboxylovou skupinu.

Vhodně se cyklizační reakce provádí za použití

Suzukiho reakčních podmínek za použití palladiového katalyzátoru, jako je chlorid bis(acetonitril)palladnatý, za přítomnosti organické báze, jako je triethylamin, v jakémkoli vhodném rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, při jakékoli teplotě poskytující vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, výhodně při zvýšené teplotě, jako při teplotě zpětného toku rozpouštědla.

Když R_p- je chráněná karboxylové skupina, vhodné chrániči skupiny zahrnují alkoxykarbonylové skupiny, například benzyloxykarbonylovou skupinu,, které mohou být odstraněny obvyklými hydrolytickými způsoby, například za použití bázické hydrolýzy s využitím ethanolického roztoku hydroxidu draselného.

Výhodně R_p- je benzyloxykarbonylová skupina.

Sloučenina obecného vzorce (VIII) se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce (IX)

R

R.

H ve kterém

Ri- a R₂- mají význam definovaný u obecného vzorce (II), . 22 se sloučeninou obecného vzorce (X)

ίve kterém

R₃- a R₄- mají význam definovaný u obecného vzorce (II) a

R_p- má význam definovaný u obecného vzorce (VIII).

Reakce mezi sloučeninami obecného vzorce (IX) a (X) se může provádět v aprotickém rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, .při jakékoli teplotě, která poskytne vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, výhodně od’0 do 25 °C, za přítomnosti palladiového katalyzátoru, výhodně chloridu bis(trifenylfosfin)paladnatého, a soli mědi, výhodně jodidu měďného.

Sloučeniny obecného vzorce (IX) jsou známými sloučeninami nebo·se připraví za použití způsobů analogických způsobům použitým k přípravě známých sloučenin, jako jsou sloučeniny, které popsal Yu M. S. a kol., Tetrahedron Letters, 39, 9347 (1998).

Sloučeniny obecného vzorce (X) se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce (XI)

(XD ve kterém ·· ·

- 23 • ···· · ·· ····

R₃- a R₄- mají význam definovaný u obecného vzorce (II) a

R_p- má význam definovaný u obecného vzorce (VIII), se sloučeninou obecného vzorce (XII)

SiMe (XII)

Reakce mezi sloučeninami obecného vzorce (XI) a (XII) se může provádět v aprotickém rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, při jakékoli teplotě, která poskytne vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, výhodně od 0 do 25 °C, za přítomnosti palladiového katalyzátoru, výhodně chloridu bis(trifenylfosfin)paladnatého, a soli mědi, výhodně jodidu měďného,'a za přítomnosti báze, výhodně terciárního aminu, jako je triethylamin.

Reakce mezi sloučeninami obecných vzorců (XI) a (XII) probíhá cestou meziproduktu, který, pokud je to . potřebné, se neisoluje a který poskytuje požadovanou sloučeninu obecného vzorce (X) odstraněním chránící silylové· skupiny pomocí n-tetrabutylamoniumfluoridu.

V alternativním aspektu se meziprodukt isoluje, čímž poskytne alternativní přípravu sloučeniny obecného vzorce (X), kde se sloučenina obecného vzorce (XIII)

MeSi

(XHD ve kterém ·« · • ·

- 24 • · • · · » ···· ·· ♦· » · « · • · * « · 4 • · · ·· ··*·

R₃- a R₄- mají význam definovaný u obecného vzorce (II) a.

R_p- ' má význam definovaný u obecného vzorce (VIII), se zahřívá k poskytnutí sloučeniny obecného vzorce (X) jak je uvedeno výše.

Sloučeniny obecného vzorce (XI) jsou známými sloučeninami nebo se připraví za použití způsobů analogických způsobům použitým k přípravě známých sloučenin, jako jsou sloučeniny, které popsal Buehler a kol., J. Am. Chem. Soc., 68, 574 (1946).

Sloučeniny obecného vzorce (VI) jsou známé, jsou komerčně dostupné nebo se připraví za použití způsobů analogických způsobům použitým k přípravě známých sloučenin, jako jsou sloučeniny popsané v J. March,

Advanced Organic Chemistry, 3. vydání (1985), Wiley Interscienc.e.

Sloučenina obecného vzorce (I) nebo její sůl nebo její solvát se může isolovat z výše uvedených způsobů podle standardních chemických postupů.

Příprava solí a/nebo solvátů sloučenin obecného vzorce (I) se může provádět za použití příhodného obvyklého postupu.

Pokud je to žádoucí, mohou se. směsi isomerů sloučenin podle tohoto vynálezu dělit na jednotlivé stereoisomery obvyklými.prostředky. Například enantiomery se mohou rozštěpit za použití opticky aktivní kyseliny jako štěpícího činidla. Vhodné opticky aktivní kyseliny, které

- 25 « · · « -· *

Φ ·»·» • ·

Φ·Φ· ♦ iř· * • Φ · φ · β *

Φ ♦ ««·« » · Φ

ΦΦ ·

ΦΦ Φ*

Φ · · ·

Φ Φ β · Φ *

Φ Φ · φφ Φ·»Φ se mohou použít jako štěpící činidla, jsou popsány v „Topics in Stereochemistry, díl 6, Willey Interscience, 1971, redaktoři Allinger N. 'L. a Eliel W. L.

Alternativně se může jakýkoli enantiomer sloučeniny podle tohoto vynálezu získat stereospecifickou syntézou za použití opticky čistých výchozích materiálů známé konfigurace.

Absolutní konfigurace sloučenin se může stanovit obvyklými postupy, jako jsou rentgenové krystalografické techniky.

Chránění jakékoli reaktivní skupiny se může provádět v jakémkoli příhodném kroku výše uvedených způsobů. Vhodné chránící skupiny zahrnují skupiny používané v oboru obvykle pro každou chráněnou skupinu. Chrániči skupiny se mohou připravit a odstranit za použití příhodného obvyklého postupu, například hydroxyskupiny, včetně diolů, mohou být chráněny jako silylované deriváty zpracováním s příhodným silylačním činidlem, jako je di-terc.-butylsilylbis(trifluormethansulfonat). Silylová skupina se poté může odstranit za použití obvyklých postupů, jako je zpracování s fluorovodíkem, výhodně ve formě pyridinového komplexu a případně za přítomnosti hliníku, nebo zpracováním s acetylchloridem v methanolu. Alternativně mohou být k ochraně fenolických skupin použity benzyloxylové skupiny, přičemž tyto benzyloxylové skupiny mohou být odstraněny za použití katalytické hydrogenolýzy s využitím takových katalyzátorů, jako je chlorid palladnatý nebo 10% palladium na uhlí.

Aminoskupiny mohou být chráněny za použití obvyklých chránících skupin, například terč.-butylestery karbanové kyseliny mohou být vytvořeny zpracováním aminoskupiny s di-terc.-bytyldikarbonatem, přičemž aminoskupina se regeneruje hydrolýzou esteru za kyselých podmínek, s využitím například -chlorovodíku ve vodném ethanolu nebo kyseliny trifluoroctové v methylendichloridu. Aminoskupina se může chránit jako benzylový derivát, připravený z příhodného aminu a benzylhalogenidu za bazických podmínek, přičemž se benzylová skupina odstraní katalytickou hydrogenolýzou za použití například katalyzátoru palladia na uhlí.

Indolové skupiny NH a obdobné skupiny mohou být chráněny za použití jakékoli obvyklé skupiny, například benzensulfonylové skupiny, methylsulfonylové skupiny, tosylové skupiny, formylové skupiny, acetylové skupiny (všechny z nich jsou odstranitelné zpracováním s alkalickými činidly), benzylové skupiny (odstranitelné buď sodíkem v kapalném amoniaku nebo AICI3 v toluenu), allylové skupiny (odstranitelné zpracováním s chloridem rhoditým za kyselých podmínek), benzyloxykarbonylové skupiny (odstranitelné buď katalytickou hydrogenací nebo alkalikým zpracováním), trifluoroacetylové skupiny (odstranitlené buď alkalickým nebo kyselým zpracováním), terč.-butyldimethylsilylové skupiny (odstranitelné zpracováním s tetrabutylamoniumfluoridem) , 2-(trimethylsilyl)ethoxymethylové skupiny (SEM) (odstranitlené zpracováním s tetrabutylamoniumfluoridem za přítomnosti ethylendiaminu), methoxymethylové skupiny (MOM) nebo methoxyethylové skupiny (MEM) (odstranitlené kyselým zpracováním za mírných podmínek) .

• · · · · · ·

- 27 « · · · · • · »··· ·

Karboxylové skupiny se mohou chránit jako alkylestery, například methylestery, kteréžto estery se mohou připravit a odstranit za použití obvyklých postupů, jedním příhodným postupem pro konverzi methoxykarbonylovéskupiny na karboxylovou skupinu je použití vodného roztoku hydroxidu lithného.

Odstupující skupinou je jakákoli skupina, která se, za reakčních podmínek, odštěpí z výchozího materiálu, čímž navodí reakci na specifickém místě. Příklady takových skupin, pokud není uvedeno jinak, jsou atomy halogenu, mesyloxyskupina, p-nitrobenzensulfonyloxyskupina a tosyloxyskupina,

Soli, estery, amidy a solváty sloučenin zde uvedených mohou podle požadavku být vytvořeny způsoby v oboru obvyklými. Například adiční soli s kyselinou se mohou připravit zpracováním sloučeniny obecného vzorce (I) s příhodnou kyselinou.

Estery karboxylových kyselin se mohou připravit obvyklými esterifikačními postupy, například alkylestery se mohou připravit zpracováním požadované karboxylové kyseliny s příhodným alkanolem, obecně za kyselých podmínek.

Amidy se mohou připravit za použití obvyklých amidačních postupů, například amidy obecného vzorce CONR_S-R_t- se mohou připravit zpracováním relevantní karboxylové kyseliny s aminem obecného vzorce HNR_S-R_t-, kde R_s- a R_t- mají význam definovaný výše.

Alternativně alkylestery s 1 až 6 atomů uhlíku,

- 28 β · '· · '· · • · 9 · · · β • 9 9 9 9 * · 9 9 9 9 · • · 9 9 · '99·· ♦ ·'* · jako je methylester kyseliny, se mohou zpracovat s aminem výše ’ def inovaného obecného vzorce HNR_S-R_t- k poskytnutí požadovaného amidu, případně za přítomnosti, trimethylhliní ku podle postupu popsaného v Tetrahedron Lett., 48, '4171 až 4173 (1977) .

Jak je uvedeno výše, mají sloučeniny podle tohoto vynálezu užitečné terapeutické vlastnosti.

Obzvláštní zájem je věnován osteoporose spjaté s peri- a postmenopausálními stavy. Zahrnuty jsou rovněž léčba a profylaxe Pagetovy choroby, hyperkalcémie spjatá s- kostními neoplasmaty a všechny typy osteoporotických chorob, jak jsou klasifikovány dále podle jejich etiologie:

Primární osteoporosa, involuční typu I neboli postmenopausální .

typu II neboli senilní juvenilní idiopatická u mladých dospělých

Sekundární osteoporosa endokrinní abnormalita hyperthyroidismus hypogonadismus ovariální agenese neboli Turnérův syndrom hyperadrenokorticismus neboli Cushingův syndrom hyperparathyroidismus abnormality kostní dřeně

- 29 mnohočetný myelom a související poruchy systémová mastocytosa cliseminovaný karcinom

Gaucherova choroba abnormality pojivové tkáně osteogenesis imperfecta homocystinurie syndrom Ehlers-Danlos

Marťanův syndrom

Menkeho syndrom různé příčiny imobilisace nebo kachexie

Sudeckova atrofie chronická obstrukční plicní choroba chronický alkoholismus chronické podávání heparinu chronické užívání antikonvulsních léčiv

Tento vynález dále zahrnuje léčbu tumourů, zvláště «tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vesikulární stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B,. virus HIV) , vředy (například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori), pro použití jako imunosupresivní činidlo při autoimunitních chorobách a transplantaci, antilipidemické činidlo pro léčbu a/nebo prevenci hypercholesterolemických a atherosklerotických chorob a má se za to, že jsou užitečné při léčbě AIDS a Alzheimerovy choroby. Tyto sloučeniny také považovány za užitečné při léčbě angiogenních chorob, tj. těch patologických stavů, které jsou závislé na angiogenezi, jako je revmatoidní ·· . ·· * · • · ·

• · · · · · artritida, diabetická retinopatie, psoriasa a solidní tumory.

Předložený vynález tedy poskytuje způsob léčby a/nebo profylaxe chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u savců, kterýžto způsob zahrnuje podávání účinného netoxického množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu.

V dalším aspektu předložený vynález poskytuje způsob léčby osteoporosy a souvisejících osteopenních chorob u lidí a savců jiných, než je člověk, který zahrnuje podávání účinného, netoxického množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího farmaceuticky přijatelného' solvátu člověku nebo savci jinému, než je člověk, který to potřebuje.

V dalším aspektu předložený vynález také poskytuje způsob léčby tumorů,.zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vesikulární stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B, virus HIV), vředy (například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori), autoimunitními chorobami a transplantací, k léčbě a/nebo prevenci hypercholesterolemických a atherosklerotických chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriasa a solidní tumory, u lidí a savců jiných, než je člověk, který zahrnuje podávání účinného, netoxického množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její to

- 31 to farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu člověku nebo savci jinému, než je člověk, který to potřebuje.

V ještě dalším aspektu předloženým vynálezem je sloučenina obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát pro použití jako aktivní terapeutická látka.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález f

sloučeninu obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát pro použití při léčbě nebo profylaxi chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u -savců.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález sloučeninu obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát pro použití při léčbě nebo profylaxi osteoporosy a . souvisejících osteopenních chorob.

V dalším aspektu představuje předložený vynález sloučeninu obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát pro použití k léčbě tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vesikulární stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B, virus HIV), vředy (například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori), autoimunitními chorobami a transplantací, k léčbě a/nebo prevenci hypercholesterolemických a atherosklerotických

- 32 • -·

chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiógenních chorob, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriasa a solidní tumory, u člověka a savce jiného, než je člověk.

Sloučenina obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát se může podávat jako taková nebo, výhodně, jako.farmaceutický prostředek rovněž zahrnující farmaceuticky přijatelný nosič.

Předložený vynález tudíž také poskytuje farmaceutický prostředek obsahující sloučeninu obecného vzorce (I) nebo její' farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát a její farmaceuticky přijatelný nosič.

Aktivní sloučeniny nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo jejich farmaceuticky přijatelné solváty se obvykle podávají ve formě dávkové jednotky.

Množství účinně k léčbě poruch zde výše popsaných závisí na takových faktorech, jako je účinnost aktivních sloučenin, zvláštní povaze zvolené farmaceuticky přijatelné soli nebo farmaceuticky přijatelného solvátu, povaze a závažnosti léčených poruch a hmotnosti savce. Dávková jednotka však bude obvykle obsahovat od 0,01 do 50 mg, například od 1 do 25 mg, sloučeniny podle tohoto vynálezu. Dávkové jednotky budou obvykle podávány jednou nebo více než jednou za den, například 1-, 2-, 3-, 4-, 5- nebo 6-krát za den, obvykleji 1- až 3-krát nebo 2- až 4-krát za den tak, aby celková denní dávka byla obvykle v rozmezí, pro dospělého o hmotnosti 70 kg, od 0,01 do 250 mg, obvykleji od od 1 do 100 mg, například od 5 do 70 mg, t j . v rozmezí od přibližně 0,0001 do 3,5 mg/kg za den, obvykleji od 0,01 do 1,5 mg/kg za den, například od 0,05 do 0,7 mg/kg za den.

ti»·

v.

Při takové léčbě se může aktivní sloučenina podávat jakoukoli vhodnou cestou, např. orální, parenterální nebo topickou cestou. Pro takové použití se sloučenina obvykle použije ve formě farmaceutického prostředku ve spojení s humánním nebo veterinárním farmaceutickým nosičem, ředidlem a/nebo pomocnou látkou, ačkoliv přesná forma prostředku bude přirozeně záviset na způsobu podání.

Prostředky se připraví smísením a jsou vhodně upraveny pro orální, parenterální nebo topické podání, a jako takové mohou být ve formě tablet, kapslí, orálních kapalných prostředků, prášků, granulí, pokroutek, pastilek, rekonstitubilních prášků, injektabilních a infundabilních roztoků nebo suspenzí, čípků a transdermálních prostředků. Prostředky k orálnímu podání jsou výhodné, obzvláště tvarované orální prostředky, jelikož jsou vhodnější pro obecné použití.

Tablety a kapsle pro orální podání jsou obvykle předkládány v dávkové jednotce a obsahují obvyklé pomocné látky, jako jsou pojivá, plnidla, ředidla, tabletovací činidla, mazadla, desintegrancia, barviva, příchutě a zvlhčovadla. Tablety mohou být potaženy podle způsobů v oboru dobře známých.

Vhodná plnidla pro použití zahrnují celulózu, mannitol, laktózu a jiné podobné látky.

• ·

- 34 • 9 · · · ;* • ·· * · · '·· • · »······· · • · · · · · ·· 9 ·· ····

Vhodná desintegrancia zahrnují škrob, polyvinylpyrřolidon a deriváty škrobu, jako je natriumglykolat škrobu..Vhodná mazadla zahrnují například stearat hořečnatý. Vhodná farmaceuticky přijatelná zvlhčovadla zahrnují laurylsíran sodný.

.Tyto tuhé orální prostředky se mohou připravit obvyklými způsoby míšení, plnění, tabletování nebo podobně. Opakované mísící operace se mohou použít k distribuci aktivní látky v těch prostředcích za využití velkých množství plnidel. Takové operace jsou samozřejmě v oboru obvyklé.

Orální kapalné prostředky mohou být ve formě například vodných nebo olejových suspenzí, roztoků, emulzí, sirupů nebo elixírů, nebo mohou být předloženy jako suché , produkty k rekonstituci vodou nebo jiným vhodným vehikulem před použitím. Takové kapalné prostředky mohou obsahovat obvyklé přísady, jako jsou suspenzační činidla, například sorbitol, sirup, methylcelulózu, želatinu, hydroxyethylcelulózu,.karboxymethylcelulózu, gel stearatu hlinitého nebo hydrogenované jedlé tuky, emulgační činidla, -například lecitin, monooleját sorbitanu nebo arabskou gumu, nevodná vehikula (která mohou zahrnovat jedlé oleje), například mandlový· olej, frakcionovaný kokosový olej, olejové estery, jako jsou*estery glycerinu, propylenglykol nebo ethylalkohol, konzervancia, například.methyl- nebo propyl-p-hydroxybenzoat nebo kyselinu sorbovou, a pokud je to žádoucí, obvyklé příchutě a barviva.

Pro parenterální podání se připraví kapalné dávkové jednotky obsahující sloučeninu podle předloženého vynálezu a sterilní vehikulum. Sloučenina, v závislosti na • · · * • · · • · • · · ·· · vehikulu a koncentraci, může být buď suspendována nebo rozpuštěna. Parenterální roztoky se obvykle připraví rozpuštěním sloučeniny ve vehikulu a sterilizací filtrací před plněním,do vhodné skleničky nebo ampule a uzavřením. Výhodně se ve vehikulu také rozpustí pomocné látky, jako jsou lokální anestetika, konzervancia a pufry. K posílení stability se prostředek může po naplnění do skleničky zmrazit a voda odpařit ve vakuu.

Parenterální suspenze se připraví v podstatě stejným způsobem s tím rozdílem, že sloučenina se suspenduje ve vehikulu místo rozpuštění a sterilizuje se expozicí eťhylenoxidu před suspendováním ve sterilním vehikulu. Výhodně se do prostředku zahrne povrchově aktivní látka nebo zvlhčovadlo k usnadnění rovnoměrného rozložení aktivní sloučeniny.

Pro topické podání může prostředek být ve formě transdermálního mazání nebo náplasti pro systémové podání aktivní sloučeniny a může se připravit obvyklým způsobem, například podle’ popisu ve standardních učebnicích, jako je „Dermatological Formulations - B. W. Barry (Drugs and Pharmaceutical Sciences - Dekker) nebo Harry's Cosmeticology (Leonard· Hill Books).

Předložený vynález tudíž poskytuje použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo její farmaceuticky přijatelného solvátu pro_: výrobu léčiva k léčbě a/nebo profylaxi chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u savců. V dalším aspektu poskytuje předložený vynález použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její ··'

farmaceuticky přijatelné soli nebo její farmaceuticky přijatelného solvátu pro výrobu léčiva k léčbě a/nebo profylaxi osteoporosy a souvisejících osteopenních chorob.

V ještě dalším aspektu poskytuje předložený vynález použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo její farmaceuticky přijatelného solvátu pro výrobu léčiva k léčbě tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vesikulární stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B, virus HIV), vředy (například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pyiori), autoimunitními chorobami a transplantací, k léčbě a/nebo prevenci hypercholesterolemických a atherosklerotických chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriasa a solidní tumory.

U sloučenin podle tohoto vynálezu se nepředpokládají žádné nepřijatelné toxikologické účinky, pokud se podávají v souladu s tímto vynálezem. Jako obvyklá praxe budou prostředky obvykle doprovozeny psanými nebo tištěnými pokyny pro použití při dotčené léčbě.

Následující popisy, příklady a farmakologické metody vynález ilustrují, ale žádným způsobem jej neomezuj i.

Příklady provedení vynálezu

Popisy a příklady

Popis 1 trans-4,5-Dichlor-2-nitro-p~dimethylaminostyren

Cl

Roztok 10,3 g (50 mmol) 4,5-dichlor-2-nitrotoluenu (Helv. Chim. Acta, 19, 434 až 439 (1936) ) ve směsi 11,9 g (100 mmol) N,N-dimethylformamiddimethylacetalu v dimethylformamidu (25 ml) se zahřívá na teplotu 100 °C 16 hodin. Tmavá reakční směs se odpaří ve vakuu, odparek se naředí methylenchloridem a promyje se dvakrát vodou. Organický roztok se vysuší síranem hořečnatým, poté se odpaří ve vakuu, čímž se získá 12,6 g (48 mmol, výtěžek 96,5 %) surové sloučeniny pojmenované v záhlaví jako tmavě červených krystalů.

Popis 2

2-Methoxy-4-kyanbenzoylchlorid

Cl

Kyselina 2-methoxy-4-kyanbenzoová (Tetrahedron

Letters, 27(49), 5997 až 6000 (1986)) (1 g, 5,6 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (20 ml).Do roztoku se rychle zavede oxalylchlorid (1,5 ml, 8,2 mmol) a přidá se kapka dimethylformamidu. Proběhme silná reakce s nadměrnou tvorbou plynných produktů. Roztok se míchá 1 hodinu, poté se nechá stát přes noc. Rozpouštědlo se odpaří za použití ·

rotační odpařovačky k získání 1,1 g bělavé tuhé látky (5,6 mmol, výtěžek 99 %), která se použije bez dalšího čištění.

Popis 3

3-Methoxy-4-[2-[(4,5-dichlor-2-nitro)fenyl]-1-oxoethyl]benzonitril

2-Methoxy-4-kyanbenzoylchlorid (1,1 g, 5,6 mmol·),. připravený podle popisu 3, se po částech přidá do míchaného roztoku trans-4,5-dichlor-2-nitro-p-dimethylaminostýrenu ( i, 47 g, 5,6 mmol) a triethylaminu (1,5 ml, 10 mmol) v cyklohexanu (20 ml). Roztok se poté zahřívá na teplotu zpětného toku 16 hodin. Reakční směs se ochladí a všechny těkavé produkty se odpaří za použití rotační odpařovačky. Získá se tmavý odparek, který se poté rozpustí v dichlormethanu (40 ml) a jednou promyje 10% roztokem uhličitanu sodného (20 ml).. Organická vrstva se poté vysuší bezvodým.síranem sodným, zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří za použití rotační odpařovačky. Získá se tmavě hnědý až černý prášek (2,42 g), který se rozpustí v co nejmenším množství ethylacetátu a k tomuto roztoku se přidá hexan k vysrážení světle hnědého prášku (1,72. g, t.t. = 167 až 170 °C), který se použije bez dalšího čištění v příštím kroku.

Tento surový meziprodukt (1,2 g) se rozpustí v

1,4-dioxanu (20 ml) a přidá se voda (10 ml). Roztok se 48 hodin zahřívá na teplotu zpětného toku, ještě za horka se

- 39 zfiltruje a poté se ochladí na ledové lázni. Na Buchnerově nálevce se zachytí žluté až hnědé krystaly, čímž se získá 0,60 g (1,6 mmol, výtěžek 30 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví, t.t. = 171 až 174 °C.

^TH NMR (CDC1₃) δ = 8,27 (s, 1H) ; 7,81 (d, 1H) ; 7,49 (s,

1H); 7,35 (dd, 1H); 7,28 (d, 1H); 4,61 (s, 2H); 4,00 (s,

3H) .

Popis 4

3-Methoxy-4-(5,6-dichlor-1H-indol-2-y1)benzonitril

Methoxy-4-[2-(4,5-dichlor-2-nitro)fenyl-l-oxoethyl]benzonitril (0,4 g, 1,0 mmol) se rozpustí v ethanolu (10 ml) a AcOH (10 ml). Roztok se opatrně zahřeje na teplotu zpětného toku a během hodiny se po malých částech přidá železný prášek (0,5 g, 9 mmol). Roztok se zahřívá na teplotu zpětného toku 12 hodin, načež se rozpouštědla odpaří za použití rotační odpařovačky. Odparek se několikrát extrahuje tetrahydrofuranem. Po odpaření rozpouštědla se získá surový 3-methoxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)'benzonitril (0,35 g, 1,0 mmol, výtěžek 100 %), který se použije v příštím kroku bez dalšího čištění. T.t. = 241 až 244 °C.

^XH NMR (DMSO-d₆) δ = 11,60 (s široký, 1H) ; 7,98 (d, 1H)·; 7,85 (s, 1H); 7,67 (s, 1H); 7,65 (d, 1 H); 7,55 (dd, 1 H); 7,14 (s, 1H); 4,00 (s, 3H).

Popis 5

Kyselina 3-methoxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)benzoová

COOH

H _____

3-Methoxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-benzonitril (0,35 g, 1,0 mmol) se suspenduje ve 30% roztoku hydroxidu sodného (20 ml) a 95% ethanolu (20 ml). Směs se ** zahřívá na teplotu zpětného toku 12 hodin a poté se nechá ochladit na teplotu místnosti. Suspenze se odpaří na asi polovinu objemu' za použití rotační odpařovačky a poté se zfiltruje na Buchnerově nálevce, čímž se získá hnědě až žlutě zbarvený prášek. Ten se míchá 2 hodiny v 10% kyselině chlorovodíkové. Roztok se poté zfiltruje k získání 0,256 g (0,76 mmol, výtěžek 69 %) surové sloučeniny pojmenované v záhlaví, která se vyčistí chromatografii, k získání 150 mg čisté sloučeniny pojmenované v záhlaví, t.t. >270 °C.

⁴Η NMR (DMSO-d₆) δ = 11,60 (s široký, 1H) ; 7,92 (d, 1H) ;

7,83 (s, 1H); 7,66 (m, 3H); 7,10 (s, 1H); 4,02 (s, 3H).

Popis 6

Kyselina 2-ethoxy-4-aminobenzoová

Suspenze methyl-[2-ethoxy-4-acetamidobenzoatu] (50 g, 211 mmol) ve vodném roztoku hydroxidu sodného (hmotnostně 15%, 200 ml) se mírně zahřívá na teplotu zpětného toku 16 hodin. Výsledný světle hnědý roztok se nechá ochladit na teplotu místnosti a poté se dále ochladí • ·

- 41 '· » ·» ·

v ledové lázni. Přidává se koncentrovaná kyselina chlorovodíková (hmotnostně 37%) až roztok dosáhne hodnoty pH 6. Tuhá látka vysrážená z roztoku se zfiltruje ve vakuu, vysuší při teplotě 50 °C k získání 38,3 g sloučeniny pojmenované v záhlaví (výtěžek 100 %).

Popis 7

Kyselina 2-ethoxy-4-kyanbenzoová

HO /—=\

V reaktoru o objemu 1 litr vybaveném uzavřeným mechanickým míchadlem se suspenduje kyanid měďný (12 g, 134 mmol) ve 100 ml destilované vody. Za silného míchání se přidá kyanid sodný .(18,3 g, 373 mmol) a vnitřní teplota se udržuje pod 40 °C až se veškerý kyanid měďný rozpustí. Suspenze kyseliny 2-ethoxy-4-aminobenzoové (20 g, 110 mmol) ve vodě (200 ml) a koncentrované kyseliny chlorovodíkové (33 ml) se míchá a chladí na ledové lázni. Když teplota dosáhne 5 °C, přidává se po kapkách roztok dusitanu sodného (9,7 g, 140 mmol) ve vodě (30 ml) takovou rychlostí, aby se teplota udržela pod 5 °C. Když se přidá veškerý dusitan sodný, roztok se pomalu zavede přes ledem chlazenou kapací nálevku do reaktoru obsahujícího roztok kyanid sodný/kyanid měďný. Reakce proběhne za silné tvorby dusíku. Přidá se několik kapek oktanolu k udržení pěnění pod kontrolou. Míchání pokračuje 4 hodiny. Výsledná suspenze se poté extrahuje ethylacetátem (3 x 100 ml) a organická fáze se vysuší síranem hořečnatým a odpaří ve vakuu, čímž se získá 15 g sloučeniny pojmenované v záhlaví (výtěžek 71,1 %) jako světle hnědého prášku, t.t. = 170 až 172 °C.

- 42 «· · > · · • 9 * • «··· · • · ···· · «*9 · • * '* • * · · • « · · 9 t · • » · ·· · ·· »· • · « · • · · • · · • * © ····

Popis 8

Kyselina 3-ethoxy-4-(5,6^dichlor-lH-indol-2-yl)benzoová

Sloučenina pojmenované v záhlaví se připraví tak, že se vyjde z kyseliny 2-ethoxy-4-kyanbenzoové, připravené podle popisu 7, následuje postup podle popisů 1 až 5. Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví s celkovým výtěžkem 18 %, -založeno na kyselině 2-ethoxy-4-kyanbenzoové.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ = 11,63 (s široký, 1H); ’7,89 (d,. 1H) ; 7,83 (s, 1H); 7,65 (s, 1H); 7,64 (d, 1H) ; 7,63 (s, 1H); 7,13 (s široký, 1H); 4,27 (q, 2H); 1,48 (t, 3H).

Popis 9

Dimethyl-[2,5-dimethoxytereftalatj

OMe

Suspenze kyseliny 2,5-dihydroxytereftalové (5 g, 25 mmol), uhličitan draselný (10 g, 72 mmol) a dimethylsulfát (11 ml, 116 mmol) v acetonu (100 ml) se míchá a zahřívá na teplotu zpětného toku 24 hodin. Směs se ještě za horka zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří na asi polovinu původního objemu. Při chlazení 'se vysráží bílé jehličky a • 9 ty se odfiltrují a vysuší, čímž se získá 4,6 g sloučeniny pojmenované v záhlaví (výtěžek 73 %), t.t. = 141 až 143 °C.

Popis 10

Monomethylester kyseliny 2,5-dimethoxytereftalové (»

í<

Suspenze dimethyl-[2,5-dimethoxytereftalatu] (4 g, 15,7 mmol), připravený podle popisu 9, v methanolickém hydroxidu draselném (0,86 g hydroxidu draselného ve 100 ml methanolu) se zahřívá na teplotu zpětného toku 25 hodin. Roztok se ochladí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu.

Odparek se zpracuje ředěnou kyselinou chlorovodíkovou a tuhá látka se odfiltruje. Surová směs se vyčistí sloupcovou chromatografii za použití směsi ethylacetat/hexan v poměru 1 : 1 jako rozpouštědla, čímž se získá 1,72 g sloučeniny pojmenované v záhlaví (výtěžek 44,7 %), t.t. = 123 až 124 °C.

Popis 11

Kyselina 2,5-dimethoxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)benzoová

COOH

OMe

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle popisu 1 až 5, přičemž se vychází z monomethylesteru kyseliny 2,5-dimethoxy-tereftalové, připraveného podle • ·

- 44 popisu 10. Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví s celkovým výtěžkem 46 %, založeno na monomethylesteru kyseliny 2,5-dimethoxytereftalové.

NMR (DMSO-dg) δ = 11,38 (s široký, 1H); 7,79 (s, 1H); 7,68 (s, 1H);'7,51 (s, 1H) ; 7,43 (s, 1H) ; 7,11 (d, IHj ; 3, 92 (s, 3H); 3,91 (s, 3H) .

Popis 12

Kyselina 4-brom-3-hydroxybenzoová

Tato kyselina se připraví podobným způsobem jaký popsal Buehler a kol. (Buehler, C.A., Harris, J.O., Shacklett, C. a Block, B.P.; J. Am. Chem. Soc., 68, 574 až 577 (1946)). K míchané suspensi kyseliny 3-hydroxybenzoové (50,0 g, 0,362 mol) v kyselině octové (495 ml), při teplotě místnosti pod atmosférou argonu, se během*2 hodin přidá roztok bromu (57,97 g, 0,3627 mol) v kyselině octové (192 ml). Během přidávání vnitřní teplota vzroste z 18,0 na 22,0 °C. Směs se míchá 21 hodinu a poté se odpaří ve vakuu, přičemž se zachytí přibližně 500 ml destilátu. Výsledný koncentrovaný roztok se 2 hodiny skladuje při teplotě 4 °C. Výsledná bílá tuhá látka se odfiltruje a promyje'studenou vodou (100 ml). Tato tuhá látka se rozpustí v minimálním objemu vroucí vody (220 ml), zfiltruje se a nechá se ochladit na teplotu místnosti. Výsledná tuhá látka se zachytí filtrací, promyje studenou vodou a vysuší' ve vakuové sušárně při teplotě 58 °C k získání sloučeniny

231

- 45 pojmenované v záhlaví (12,50 g, výtěžek 15,9 %) , t.t. až 232 °C, (lit. t.t. 225 až 226 °C).

⁴H NMR (400,13 MHz, DMSO-dg) : 13,00 (IH, s široký, CO₂H) , 10,64 (IH, s široký, OH), 7,60 (IH, d, H-5, J5-6 8,0 Hz), 7,52 (IH, d, H-2, J₂_₆ 2,0 Hz), 7,29 (IH, ' dd, H-6, J₂-₆ 2,0 Hz, J₅-₆ 8,0 Hz) .

Popis 13

Benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4-brombenzoové

K míchané suspensi NaH (10,47 g, 60 % hmotnostních, 0,2616 mol) v tetrahydrofuranu (1,40 litru), při teplotě 13,1 °C pod atmosférou argonu se přidá roztok kyseliny 4-brom-3-hydroxybenzoové (28,11 g, 0,130 mol) v tetrahydrofuranu (400 ml) během 1,25 hodiny, přičemž vnitřní teplota se udržuje v rozmezí od 4 do 15 °C. Po 1,5 hodině se během 0,5 hodiny přidá roztok benzylbromidu (44,3 g, 0,2591 mol) v tetrahydrofuranu (70 ml). K výsledné suspensi se přidá dimethylfórmamid (500 ml) a směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Po dalších 15 hodinách se k suspensi přidá další dimethylfórmamid (1,5 litru). Po přibližně 30 minutách je reakční směs v podstatě čirá a analýza chromatografií na tenké vrstvě (25% EtOAc/hexan) ukazuje, že se efektivně spotřeboval veškerý výchozí materiál. Reakční směs se zalije zředěným chloridem amonným (100 ml) a odpaří ve vakuu. K odparku se přidá ethylacetat (1,0 litru) a zředěný chlorid amonný (1,0 litru) a frakce

- 46 fcfc * ·· 4 ·· ·· fc · · » · · · · · fc • · · «fcfcfc ·· · fc ···· fcfc » fc··· · · · · • · fcfcfc fcfcfc ···· « fcfc fc fcfc fcfcfcfc se rozdělí. Vodná frakce se zpětně extrahuje ethylacetátem (1 x 450 ml a 1 x 300 ml). Celková organická frakce se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří ve vakuu.

Výsledná tuhá látka se krystaluje ze směsi ethanol : voda (9 : 1; objemově, 200 ml), zahřívá se na teplotu zpětného toku, ke které se přidává ethanol (65 ml) až se veškerý materiál rozpustí. Poté se po kapkách přidává voda (17 ml), následuje další ethanol (8,0 ml). Výsledný roztok se nechá pomalu ochladit na teplotu místnosti. Výsledná tuhá látka se odfiltruje a vysuší (44,54 g). Tato tuhá látka se poté rozpustí v horkém ethanolu (227. ml) a přidá se voda (5,0 ml) a poté se nechá pomalu ochladit na teplotu místnosti.

Výsledné krystaly se odfiltrují, promyjí studeným ethanolem (25 ml) a vysuší ve vakuové sušárně při teplotě 50 °C k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví (36,79 g, výtěžek

71,5 %). T.t. = 80,5 až 81,5 °C.

⁴H NMR (400,13 MHz, CDC1₃) : 7,67-7,28 (13H, komplexní m, aromatické látky), 5,35 (2H, s, CH₂Ph), 5,20 (2H, s,

CH₂Ph).

Popis 14

Benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4-trimethylsilanylethinylbenzoové

Benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4-brombenzoové, (33,00 g, 83,07 mmol) se umístí do trojhrdlé nádoby a atmosféra se nahradí, ve vakuu, argonem za použití Firestonova ventilu. Tuhá látka se rozpustí v tetrahydrofuranu (215 ml) za míchání, a poté se přidá triethylamin i* (396 ml). Směs se ochladí na ledové lázni a roztok se 5krát zbaví plynu jak je popsáno výše. Rychle se přidá jodid měďný (127 mg, 0,66 mmol) a chlorid bis(trifenylfosf in)palladnatý (933 mg, 1,33 mmol) a roztok se ještě dvakrát zbaví plynu. Poté se stříkačkou během 10 minut po kapkách přidá trimethylsilylacetylen (17,6 ml, 124,6 mmol). Chladicí lázeň se poté odstraní a roztok se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti. Po 21 hodině analýza chromatografií na tenké vrstvě (25% EtOAc/hexan) ukáže, že v podstatě veškerý výchozí materiál se spotřeboval. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a přidá se ethylacetát (500 ml) a'ředěný roztok chloridu sodného (300 ml). Organická frakce se oddělí a vodná fáze se zpětně extrahuje ethylacetatem (1 x 250 ml a 1 x 100 ml). Celková organická, frakce se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří k získání surové hnědé tuhé látky (36,2 g). Tuhá látka se rozpustí v horkém ethylacetatu (80 ml), kde krystaluje sloučenina pojmenovaná v záhlaví. Tato tuhá látka se odstraní filtrací, promyje ethylacetátem a vysuší ve vakuové sušárně při teplotě 40 °C k získání čisté sloučeniny pojmenované v záhlaví (13,75 g, výtěžek 39 %), t.t. = 110,5 až 111,5 °C.

NMR (400,13 MHz, CDC1₃) : 7,66-7,28 (13H, komplexní m, aromatické látky), 5,36 (2H, s, CH₂Ph), 5,19 (2H, s,

CH₂Ph) , 0,26 (9H, s, Si(Me₃)₃).

Filtrát se naloží do náplně silikagelu (400 g, Biotage 75M), která se poté eluuje 50% směsí ethylacetat/hexan, frakce produktu se shromáždí a odpaří ve vakuu k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví (21,1 g, výtěžek 60 %) jako mírně nečisté světle hnědé tuhé látky, která se použije bez dalšího čištění.

• 9 · '·.··· · 9 9

9 9 9 9 t; 9 »····>» · 9 • · 9 9 9 9 9 ·

9 9 9 Φ · 9 9 9 4 9·'·

- 48 Popis 15

Benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4-ethinylbenzoové

K míchanému roztoku benzylesteru kyseliny 3-benzyloxy-4-trimethylsilanylethinylbenzoové (13,5 g,

32,56 mmol) v tetrahydrofuranu (182 ml), pod atmosférou argonu při teplotě -55 °C, se přidá po kapkách během 7 minut roztok tetra-n-butylamoniumfluoridu (33,9 ml, 1,OM v tetrahydrofuranu). Po dalších 3 minutách se odebere vzorek a analýza chromatografií na tenké vrstvě (25% EtOAc/hexan) ukáže, že veškerý výchozí materiál se spotřeboval. Reakční směs se zalije přidáním roztoku kyseliny chlorovodíkové (0,4M, 100 ml) v ředěném chloridu amonném. Přidá se ethylacetat (250 ml) a frakce se rozdělí. Vodná frakce se zpětně extrahuje ethylacetátem (1 x 200 ml a 1 x 50 ml). Celková organická frakce se vysuší síranem· sodným, zfiltruje a odpaří k získání hnědého oleje (14,3 g). Olej se vyjme toluenem (40 ml) a vloží se do silikagelové patrony (400 g, Biotage 75M.) . Patrona se poté eluuje následovně: hexan (400 ml), hexan : toluen (1 : 1, objemově, 5,0 litrů) a konečně hexan : toluen (1 : 1, objemově, 2,3 litrů) při obsahu 4 % diethyletheru. Čisté frakce se shromáždí a odpaří ve vakuu k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví (7,86 g, výtěžek

70,5 %) jako-bílé tuhé látky.

- 49 • · · 00 * 0 · . · · ,jp 0,0 0 0' · », ·' < ♦' • · * · · · · » 0 · • ·»···» «····»· · ·

0 0 0 0 0 · ♦ ·<·· 0 ·;· · ·> ···· ^XH NMR (400,13 MHz, CDC1₃) : 7,67-7,27 (13H, komplexní m, aromatické látky), 5,34 (2H, s, CH₂Ph), 5,22 (2H, s,

CH₂Ph), 3,44 (1H, s, acetylenový).

Popis 16

4,5-Dichlor-2-j odanilin

<·

K míchanému roztoku 3,4-dichloranilinu (1,944 g, 12,0 mmol) v kyselině octové (40 ml) a pod atmosférou argonu při teplotě místnosti se během 22 minut po kapkách přidá roztok chloridu jodného (2,96 g, 18,23 mmol) v kyselině octové (25 ml plus 5 ml na promytí). Po 1,5 hodině míchání se vysráží tuhá látka, která se odfiltruje a promyje 5% thiosíranem sodným (100 ml). Tuhá látka se rozpustí v ethylacetátu (100 ml) a promyje se nasyceným uhličitanem sodným (100 ml) a vodou (100 ml) . Výsledná tuhá látka se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří k ^K' získání tmavě zbarvené tuhé látky (2,69 g). Surová tuhá látka se rozpustí ve směsi EtOAc/hexan (1 : 1, objemově,

6,0 ml) a vloží se na křemičitanovou patronu (90 g,

Biotage), která se eluuje následovně: hexan (600 ml), 4% EtOAc v hexanu (1 litr) a 5% EtOAc v hexanu (1 litr). Čisté frakce se odpaří ve vakuu k získání sloučeniny pojmenované l v záhlaví jako bělavé tuhé látky (0,912 g, výtěžek 26,4 %).

^ΤΗ NMR (400,13 MHz, CDC1₃) : 7,66 (1H, s, H-3) , 6,81 (1H, s, H-6) , 4,14 (2H, s široký, -NH₂) .

MS (AP⁺) : m/z 288,0 a 290, 1 (MH⁺) .

Popis 17

- 50 ť>

Benzylester kyseliny 4-(2-amino-4,5-dichlorfenylethinyl)-3-benzyloxybenzoové

Benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4-ethinylbenzoové (820 mg, 2,395 mmol)'a. 4,5-dichlor-2-jodanilin (710 mg, 2,467.mmol) se umístí do trojhrdlé nádoby a atmosféra se v.e . vakuu nahradí argonem za použití Firestonova ventilu·. Tuhé látky se poté rozpustí v tetrahydrofuranu (13,0 ml) za míchání, a poté se přidá trieťhylámin (20 ml). Směs se ochladí na ledové lázni a roztok se 4-krát zbaví plynu jak je popsáno výše. Rychle se přidá jodid měďný (4 mg, 0,02 mmol) a chlorid bis(trifenylfosfin)palladnatý (27 mg, 0,04 mmol) a roztok se zbaví plynu ještě dvakrát. Chladicí lázeň se poté odstraní a roztok se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti. Po 6 hodinách míchání při teplotě místnosti, analýza chromatografií na tenké vrstvě (25% EtOAc/hexan) ukáže, že veškerý benzylester kyseliny 3-benzylóxy-4-ethihylbenzoové se spotřeboval.’Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a přidá se ethylacetát (50 ml) a ředěný hydrogenuhličitan sodný (25 ml). Organická frakce se oddělí a vodná fáze se zpětně extrahuje ethylacetátem (1 x 25 ml). Celková organická frakce se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří k získání světle žluté tuhé -látky (1,28 g) . Tato tuhá látka se rozpustí v chloroformu (50 ml), přidá se silikagel (Merck 9385, 3,25 g) a směs se odpaří ve vakuu. Surový materiál, předem naložený na křemičitan, se vyčistí chromatografií (Biotage 40 g). Patrona se eluuje směsí e

• ·· · «r · » « • ·.· · A • ·. · ···· A

A A · •A·'·.' A¹ • · A ·· *··· chloroform : hexan (70 : 30), čisté frakce se shromáždí a odpaří ve vakuu k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví (1,113 g, výtěžek 92,5 %) jako světle žluté tuhé látky. Vzorek se rekrystaluje ze směsi toluen : chloroform (45 : 55), t.t. = 152,5 až 153,5 °C.

¹H NMR (400,13 MHz, CDCI3) : 7,71 (2H, m, aromatická látka), 7,57-7,20 (12H, komplexní m, aromatické látky), 6,63 (1H, s, aromatická látka), 5,38 (2H, s,.CH₂Ph), 5,15 (2H, s, CH₂Ph) , 3,94 (2H, s, -NH₂) .

MS (AP⁺) : m/z 502,2 a 502,4 (MH⁺) .

Popis 18

Benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)benzoové

o

Benzylester kyseliny 4-(2-amino-4,5-dichlorfenylethinyl)-3-benzyloxybenzoové (28,32 g, 56,38 mmol) se rozpustí v teplém acetonitrilu (1,50 litru) za míchání pod atomosférou argonu. Směs se ochladí na lázni led/voda a roztok se zbaví plynu pod nízkým vakuem za použití Firestonova ventilu, přičemž se atomosféra nahradí argonem. Tento postup se opakuje 5-krát. Míchaná směs se ohřeje na · teplotu 66 °C a rychle se přidá chlorid bis(acetonitril)palladnatý (1,666 g, 5, 638 mmol) a poté se ohřeje na teplotu 75 °C. Po 1,5 hodině se odebere vzorek a analyzuje se chromatografií na tenké vrstvě (25% EtOAc/hexan), která ukáže, že veškerý výchozí materiál se spotřeboval. Reakční směs se nechá pomalu ochladit teplotu místnosti, načež fy

- 52 • · · 4· · ·» <4' · ♦ ·· « · 9, · ·' · · 4 · · · · · «' • ···· » 4 · ···· * 4 · « * * ·»···· ♦ ··· · ·♦ '4' 4 *ί 99 99 z roztoku vykrystaluje sloučenina pojmenovaná v záhlaví.

Tuhá látka se zachytí filtrací, promyje studeným acetonitrilem (125 ml) a vysuší ve vakuové sušárně k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví (21,375 g, výtěžek

75,5 %) jako bílé tuhé látky, t.t. = 168 až 169 °C.

⁴Η NMR (400, 13 MHz, CDC1₃) : 9,79 (1H, . s široký, -NH) , 7,907,76 (3H, komplexní m, aromatické látky), 7,68 (1H, s, aromatická látka), 7,55-7,32 (10H, komplexní m, aromatické látky), 7,22 (1H, s, aromatická látka), 6,91 (1H, m, aromatická látka), 5,39 (2H, s, CH₂Ph), 5,29 (2H, s,

CH₂Ph).

MS (APM): m/z 502,2 a 502,4 (MH⁺) .

Popis 19

Kyselina 3-benzyloxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)benzoová

o

Roztok benzylesteru kyseliny 3-benzyloxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)benzoové (0,2 g, 0,398 mmol) v ethanolu (10 ml) a tetrahydrofuranu (5 ml) s hydroxidem sodným (5,3 mg, 1,33 mmol) se zahřívá na teplotu zpětného toku 3 hodiny. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a odparek se zpracuje 37% kyselinou chlorovodíkovou. Sraženina se zfiltruje, promyje vodou a vysuší ve vakuu k získání 0,14 g (výtěžek 85 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žlutého prášku, t.t. = >250 °C.

Příklad 1 «> 9' • : · *

- 53 ί» 9 9 9 9 9 »

9φ · · 9 9 ·9 · · ·» 99··

4-(5, 6-Dichlor-lH-indol-2-yl)-3-ethoxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamid

K suspensí kyseliny 3-ethoxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)benzoové (200 mg, 0,57 mmol), připravené podle popisu 8, v CH₃CN (14 ml) a tetrahydrofuranu (6 ml) se přidá WSC (hydrochlorid N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu) (104 mg, 55 mmol) a 1-hydroxybenzotriazolu (77 mg, 0,57 mmol) a reakční směs se zahřívá na teplotu zpětného toku 3 hodiny. Do reakční směsi še zavede 4-amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidin (108 mg, 0,7 mmol) a zahřívání na teplotu zpětného toku pokračuje další 2 hodiny. Reakční směs se ochladí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se zpracuje 30 ml 10% roztoku hydroxidu sodného a poté se zfiltruje. Výsledná tuhá látka se promyje vodou, vysuší a vyčistí chromatografií na silikagelu k získání 154 mg sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle žlutého prášku (výtěžek 55 %), t.t. = 253 až 255 °C.

^XH NMR (DMSO-d₆) δ = 11,56 (s široký, 1H); 8,28 (d široký,

1H) ;	7,85	(d,	1H); 7,82 (s,	1H); 7,64 (s, 1H); 7,59 (s,
1H) ;	7,57	(d,	1H); 7,11 (s,	1H); 4,40-4,21 (m, 1H) ; 4,30
(q,	2H) ;	1,80	(d široký, 2H)	; 1,50 (t, 3H); 1,30 (m, 2H) ;
1,28	(s,	6H) ;	1, 15 (s, 6H) .
ESI	POS;	AQA;'	rozpouštědlo:	MeOH/spray 3 kV/skimmer: 20

V/sonda 135 °C: m/z 488 (MH⁺) .

Příklad 2

- 54 • Φ · ·· · · ♦ ·, (>' · · ’ Φ f·»'¹'· 9,: ·' » ·» • · « · ·*’· · · · '· » ··'·· 9 · · ···· · · f • · · '♦ · · Φ · ««·· « «·' « ·· ·'····

4-(5,6-Dichlor-lH-indol-2-yl)-3-benzyloxy-N-(2,2, 6, 6-te-

K roztoku kyseliny 3-benzyloxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl) benzoové (0,14,. g, 0,34 mmol), připravené podle popisu 19, v tetrahydrofuranu (14 ml), WSC (hydrochlorid. N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu) (0,078 g, 0,408 mmol) a 1-hydroxybenzotriazolu (0,0551 g, 0,408 mmol) se zahřívají na teplotu.zpětného toku 6 hodin. Po kapkách se přidá roztok 4-amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidinu (0,064 g, 0,408 mmol) v tetrahydrofuranu, (2 ml) a směs se zahřívá na teplotu zpětného toku další 2 hodiny.

Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a odparek se suspenduje ve vodě. Tuhá. látka se odfiltruje a vysuší ve vakuu. Tuhá látka se trituruje CH₃CN (5 ml) k získání 0,094 g (výtěžek 45 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílého prášku, t.t. = 220 °C.

¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 11,64 (s široký, 1H) ; 8,24 (d široký,

1H); 7,87	(d,	1H); 7,76	(s,	1H); 7,68 (d, 1H);	7, 62	(s,
1H); 7,59	(dd,	1H); 7,52	(d	, 2H); 7,42 (dd, 2H)	; 7,	34 (dd,
1H); 7,06	(d,	,1H) ; 5,40	(s,	2H); 4,38-4,23 (m,	1H) ;	1,76
(dd, 2H);	1,25	(dd, 2H);	. 1,	23 (s, 6H); 1,12 (s,	6H)

ESI POS; AQA ; rozpouštědlo: MeOH / spray 3 kV / skimmer: 20 V/ sonda 135 °C: m/z 550 (MH⁺) .

Příklad 3

- 55 • ·«·· I»

4-(5,6-Dichlor-lH-indol-2-yl)-3-hydroxy-N-(2,2,6, 6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamid

·<

Směs 4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-benzyloxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamidu (0,08 g,

0,145 mmol), připraveného podle popisu v příkladu 2, v 37% kyselině chlorovodíkové (5 ml) a ethanolu (5 ml) se zahřívá na teplotu zpětného toku 3 hodiny. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří ve vakuu. Výsledná tuhá látka se vyčistí sloupcovou chromatografii na silikagelu (dichlormethan/methanol/hydroxid amonný 86 : 10 : 0,6) k získání, po trituraci CH₃CN, 0,02 g (výtěžek 39 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jaké bílé tuhé látky, t.t. = >270 °C.

ί-, ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 11,44 (s široký, 1H) ; 8,16, (d široký,

1H) ;	7,80-	(d,	1H); 7,78	(s, 1H);	7,69 (s,	1H	); 7,48	(d,
1H) ;	7,39	(dd,	1H); 7,08	(s,· 1H) ;	4,36-4,	20	(m, 1H) ;	1,73
(dd,	2H) ;	1,23	(dd, 2H);	.1,23 (s,	6H); 1,	11	(s, 6H) .

ESI POS; AQA ; rozpouštědlo: MeOH / spray 3 kV / skimmer: 20 V/ sonda 135 °C: m/z 460 (MH⁺) .

Příklad 4

4-(5,6-Dichlor-lH-indol-2-yl)-3-propoxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamid

- 56 • '4 ·

4 4

4 4 0 4' β

Směs 4-(5,6-dichlor-l H-indol-2-yl).-3-hydroxy-N- .(2-, 2,6, 6-tetramethylpiperidin-4-ylj benzamidu (0,05 g, 0,109 mmol), připraveného podle popisu v příkladu 3, uhličitanu.draselného (0,045 g, 0,33 mmol) a 2-brompropanu (0,046 mg, 0,33 mmol) v acetonu (5 ml) se zahřívá na teplotu zpětného toku 8 hodin. Po ochlazení se směs zfiltruje a organická fáze se odpaří ve vakuu. Odparek se chromatografuje na silikagelu směsí dichlormethan/methanol/hydroxid amonný 32% (86 : 10 : 0,6). Získaná sloučenina se trituruje ipr₂O a zfiltruje. k získání 0,017 mg (výtěžek 37 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílého prášku, t.t. = >250 °C.

¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 11,55 (s široký, 1H); 8,19 (d široký,

1H); 7,84- (d, 1H) ; 7,83 (s, 1H) ; 7,62 (s, 1H) ; 7,58 (s,

1H), 7,56 (dd, 1H); 7,10 (d, 1H); 4,37-4,24 (m, 1H); 4,18 (t, 2H); 1,96-1,84 (m, 2H) ; 1,73 (dd, 2.H) ; 1,20 (dd, 2H) ;

1,20 (s, 6H); 1,08 (s, 6H); 1,05 (t, 3H).

ESI POS; AQA ; rozpouštědlo: MeOH / spray 3 kV / skimmer:

V/ sonda 135 °C: m/z 502 (MH⁺) .

Sloučeniny z příkladů uvedené v tabulce 1 se připraví podle '>1

O í-l

Ή >cn '0!

C

O ε

ro

N . £ O O +J λ:

o

Ct co • oá rH S

Z

·« 4, (4 · · • · · • 949

9

9 9 9 4 >·' · 94 4 4 ·< <·'· 4: ♦ 4 4 · · · « Η» 4 '9 444 9 <4 « · .4

Ό >

tO

ι—1	3
Λί	Λ
Ή >3	,,
0.	5*1
> ·	>
3	•H i—1
&	4->
3	>CD
4-J	>
co	CO
o	. >1
a	>

4'4 · (4 4 0

0·,' · '·· ·· /· ^Z·' 4 ,· · «' • 4· 4 4 4 · * 4 4 4 4 4 >4 4 .4 '4

4 4 4 '4 4 • '4 ·4 4 4 '44 4 4

• 4 · 44 · ·· ··

4 4 4 · 0 4 4 0 • 00 0 4 0 0 0 0 0 ,0 0004 0 0 0 0400 0 4 0 4

0 400 000

000 4 44 0 44 .0040

ΐ.

• 4 ·· i ' , .

- 61 f?/ ·· · · .

• · ♦ • · ·

·» · • · · • » · • ···· • · ···· · t ·· *· • · · · · · · • · ···· · · · · • · · » · · · β ·* ····

Tabulka 2

Sloučeniny z příkladů uvedené v tabulce 2 se připraví podlepostupu v příkladu 4.

Vysvětlivky: br v NMR spektrech znamená široký

fcfc fcfc fc · 9 · fcfc fc ··· .· 9 fc fcfc «fcfcfc fcfc t • fc » · fc ···» fc · • fc I ···· fc fc

R fc * fc

(.

9 ·» 9 49 ··

44« 4 9 · · < · · f , 999 9999 4 4 ·

- 04 · · 9494 « 9 9499949 4 4 • 9 49 « 994 ,

4499 9 44 4 99 9944

Biologická stanovení

Podrobné informace

Je známo, že při.připojení na kost se elektrogenní H⁺-adenositrifosfatáza (ATPáza) polarizuje na mezivrstvě osteoklast-kost. Tato pumpa transportuje velká množství protonů do. resorpčního mikroprostředí k navození mobilizace kostního minerálu a k vytvoření prostředí s hodnotou pH v kyselé oblasti požadovaného kolagenázami k degradaci kostní matrix.

Vakuolární povahu osteoklastové protonové pumpy původně rozpoznal Blair (H. C. Blair a kol., Science, 245, 855 (1989)) a o poté potvrdil Bekker (P.J. Bekker a kol.,

J. Bone Min. Res., 5, 569 (1990)) a Váánánen [H.K. Váánánen a kol., J. Cell. Biol., 111, 1305 (1990)). Důkaz je založen na přípravcích zvlněných membránových fragmentů z ptačích osteoklastů (získaných z dřeňové kosti slepic.nosnic s dietou bez vápníku). Výsledné membránové vesikuly se okyselily v odpovědi na ATP, což se snadno stanoví měřením vyhasínání fluorescence akridinové oranže, což je slabá báze, která se akumuluje v kyselých kompartmentech.

Biochemický vzor ukazuje, že osteoklastová protonová pumpa patří k typu vakuolárních ATPáz, jelikož transport protonu se inhibuje N-ethylmaleimidem (NEM), což je sulfhydrylové činidlo, a bafilomycinem Ai, což je selektivní inhibitor vakuolárních H⁺-ATPáz (J.E. Bowman a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 85; 7972 (1988)), zatímco se neinhibuje ouabainem, což je inhibitor Na⁺/K⁺-ATPáz; orthovanadatem sodným, což je inhibitor P-ATPáz nebo omeprazolem nebo SCH 28080, což oba jsou inhibitory

• · · · «· ···· žaludeční H⁺/K⁺-ATPázy (J.P. Mattsson a kol., Acta Physiol. Scand., 146, 253 (1992)).

Je známo, že specifické inhibitory vakuolárních ATPáz, jako je bafilomycin Ai, jsou schopny inhibovat kostní resorpci v kulturách osteoklastů (K. Sundquist a kol., Biochem. Biophys. Res. Commun., 168, 309 až 313 (1990)).

Inhibice transportu protonu a aktivita ν-ATPázy v membránových vesikulách.

Příprava surových kostních mikrosomů slepic nosnic s dietou prostou vápníku.

Vesikuly se připraví z dřeňové kosti získané z tibií a femurů slepic nosnic, které jsou na dietě prosté vápníku alespoň 15 dní. Stručně, kostní fragmenty se seškrábou ostřím sklapel.U'24, suspendují ve 40 ml isolačního média (0,2 M sacharóza, 50 mM KC1, 10 mM Hepes, mM EGTA, 2 mM dithiotheitrol, pH .7,4) 'a zfiltrují přes nylonové síto s velikostí pórů 100 pm. Celý postup se provádí při teplotě 4 °C. Po homogenizaci v homogenizátoru (20 úderů) ve 40 ml isolačního média se provede počáteční odstředění (6500 x g_max x 20 minut) k odstranění mitochondrií a lysosomů. Supernatant se odstřeďuje při 100 000 x g_max 1 hodinu a peleta se zachytí v 1 ml isolačního média, rozdělí na 200μ1 alikvoty, ihned zmrazí v kapalném dusíku a skladuje při teplotě -80 °C. Obsah proteinu se stanoví za použití kolorimetrické soupravy Biorad podle Bradforda (M. Bradford, Anal. Biochem., 72,

248 (1976)). Ke stanovení transportu protonu se použije 5 až 10 μΐ membrán.

9'9 *

- 66 9 · ® · '9 « · 9 9 9·

Vyčištění osteoklastových membrán ml surových mikrosomálních vesikul připravených podle postupu'uvedeného výše se aplikuje (okolo 0,2 ml na zkumavku) na vrcholek sacharózového krokového gradientu sestávajícího z 3,5 ml 15%, 30% a 45% (hmotnostně) sacharózy v isolačním médiu a odstřeďuje se při 280 000 x g_raax 2 hodiny (SW 41 Ti rotor). Po odstředění se shromáždí mezivrstvy mezi 30 a 45% sacharózou, přibližně 20-násobně naředí v isolačním médiu a peletují při 100 000 x g_max 1 hodinu (SW 28 rotor). Peleta se poté resuspenduje v 1 ml isolačního média, alikvotuje a zmrazí v kapalném dusíku a skladuje se při teplotě -80 °C do použití.

Membrány z lidských ledvin

Membrány z· lidských ledvin se získají z kortexu lidských ledvin, ihned po zákroku se zmrazí podle postupu popsaného v literatuře pro hovězí ledvinu (S. Gluck, J. Biol. Chem., 265, 21957 (1990)). '

Příprava lidských osteoklastových mikrosomálních vesikul

Osteoklastu podobné obří buňky isolované z osteoklastomového tumoru se homogenizují skleněnýmteflonovým homogenizátorem (frekvence otáček 1000 za minutu x 20 úderů) a materiál se odstřeďuje při 6000 x g_max 20 minut. Výsledná peleta se poté odstřeďuje při 100 000 x g_max60 minut k peletaci mikrosomální frakce. Resuspenduje se v 1 ml isolačního média s hodnotou pH 7,4, zmrazí ponořením do kapalného dusíku a skladuje se při teplotě -80 °C do použití.

·· · • · · to · · • β » toto to · · to

Transport protonu v membránových vesikulách

Transport protonu v membránových vesikulách se * stanoví, semikvantitativně, měřením počátečního sklonu zhášení fluorescence akridinové oranže (excitace 490 nm; emise 530 nm) po přidání 5 až 20 μΐ membránových vesikul v 1 ml pufru obsahujícího 0,2 M sacharózy, 50 mM KC1, 10 mM Hepes pH 7,4, 1 mM ATP.Na2, 1 mM CDTA, 5 μΜ valinomycinu a 4 μΜ akridinové oranže. Reakce se započně přidáním 5 mM síranu hořečnatého. Výsledky se vyjádří jako procento střední hodnoty dvou kontrol.

Inhibice aktivity bafilomycin-sensitivní ATPázy

Inhibice aktivity bafilomycin-sensitivní ATPázy se stanoví ve vyčištěných membránových vesikulách měřením uvolňování anorganického fosfátu (Pi) během 30 minut inkubace při 37 °C na desce s 96 jamkami buď za přítomnosti nebo za nepřítomnosti bafilomycinu AI. Reakční médium obsahuje 1 mM ATP, 10 mM HEPES-Tris pH 8, 50 mM KC1, 5 μΜ valinomycinu, 5 μΜ nigericinu, 1 mM CDTA-Tris, 100 μΜ molybdatu amonného, 0,2 M sacharózy a membrány (20 μg proteinu/ml). Reakce se započne síranem hořečnatým (8ramenná pipeta) a po 30. minutách se zastaví přidáním 4 objemů činidla malachitové zeleně (96-ramenná pipeta) připravené podle Chana (Anal. Biochem., 157, 375 (1986)). Absorbance při 650 nm se měří po 2 minutách za použití mikrodeskového čítače. Výsledky se vyjádří jako nmol (Pi) x mg proteinu^-1 x min^-1 a, pro každý experiment, představuje střední hodnotu ± standardní odchylka triplikátů.

Farmakologické data

- 68 ♦ » 4 »4

4« ·« • * · · • · · · · * 0 ♦ · ·

I

Sloučeniny popsané v předloženém vynálezu jsou' schopny inhibovat bafilomycin-sensitivní ATPázu kuřecích osteoklastů v rozmezí od 50 nM do 2 μΜ a lidských osteoklastů v rozmezí od 30 nM do 5 μΜ.

ζ t'· ♦ 9, 9 ·'«'<> · 0 0 · • · « · · · 0 ·, 9 ·

9 9 9 · 9 9 9 9 0, · · · · 0 · ·····«* · · » · 0 · » · 0 · 0 0 · 0 -0. · · ' 0 · 0 0 0 0

Claims

1. Sloučenina obecného vzorce (I) _ ⁰ (I) nebo její sůl nebo solvát, ve kterém

R_x a R₂ každý nezávisle představují alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo atom halogenu;

R₃ a R₄ každý nezávisle představují atom vodíku, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, arylalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylové části, hydroxyskupinu, karboxyalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylové části, hydroxyalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, dihydroxyalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, mono- a dialkylaminoalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku jak v alkylové části, tak v alkoxylové části, nebo aminoalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, a

R₅ představuje skupinu -NR_sR_t, kde R_s a R_t každý nezávisle představuje atom vodíku, nesubstituovanou nebo substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo nesubstituovaný nebo substituovaný heterocyklyl.

-- 70 ♦ · ···· · ·· · • **

2. Sloučenina podle nároku 1 nebo nároku 2, kde R_x je 5-chlor a R₂ je 6-chlor.

fc

4. Sloučenina podle nároku 1, kde R₃ je hydroxyskupina, methoxyskupina, ethoxyskupina, propoxyskupina, benzyloxyskupina, ethoxykarbonylová skupina, hydroxyethoxyskupiná, dihydroxypropoxy, dimethylaminoethóxyskupina nebo aminopropoxyskupina.

5. Sloučenina podle nároku 1, kde R₄ je atom vodíku nebo methoxyskupina.

6. Sloučenina podle nároku 1, kde R_s nebo R_t představují nesubstituovanou nebo substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo nesubstituovaný nebo substituovaný heterocyklyl.

7. Sloučenina podle nároku 1 nebo 6, kde R_s nebo R_t představuje 3-[4-(3-methoxyfenyl)piperazin-l-yl]propyl nebo 3-[4-(2-pyrimidinyl)piperazin-l-yl]propyl.

•i. . 8. Sloučenina podle nároku 1, kde R5 nebo R_t představují nesubstituovanou nebo substituovanou piperidinylovou skupinu.

» &

9. Sloučenina podle nároku 1 nebo 8, kde R_s nebo R_tpředstavuje 1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-ylovou skupinu fc <’ ‘ nebo 2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-ylovou skupinu.

10. Sloučenina podle nároku 1, kde Rt je atom vodíku.

• - 71 • fc · ·ι* ς ·· ·· · < ^! · · fc·· · « · · «' fc·* · . · fc * · · ·.

• ···· · · · ···· · · · · • · · · fc · a · • · ·· ·· ·· ·· ····

11. Sloučenina obecného vzorce (IA) ⁰ (IA) ve kterém

Ri, R₂, R3, R4 a R§ mají význam definovaný u’ obecného vzorce (I) podle nároku 1,

R_s . je 3-[4-(3-methoxyfenyl)piperazin-l-yl]propyl nebo 3-[4-(2-pyrimidinyl)piperazin-l-yl]propyl, a . .^: obecného vzorce (IB)

R_t · je atom vodíku, nebo její sůl nebo její solvát.

‘12. Sloučenina ’ f

R₂^ ve kterém

Ri, R2/ R3, R4 a R5 mají význam definovaný u obecného vzorce (I) podle nároku 1,

R_s je 3-pyridyl nebo 3-(6-methoxy)pyridyl a

Rt

O (IB) je atom vodíku,

- 72 • » · • · fcfc • » · · · · · « • · · a « ·

99 99 fc · · fc¹ ·' '· · ve kterém nebo její sůl nebo její solvát.

13. Sloučenina obecného vzorce (IC)

-Rc (IC)

R₂, R₄ a R₅ mají význam definovaný u obecného vzorce (I) podle nároku 1,

Rs je 2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl,

Rt je atom vodíku,

R3 je 3-ethoxyskupina a

Ri je 5-chlor nebo 5-methoxyskupina, nebo její sůl nebo její solvát.

14. Sloučenina obecného vzorce (ID)

O (ID) ve kterém

Ri, R21 R4 a R5 mají význam definovaný u obecného vzorce (I) podle nároku 1,

R« je 2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl,

- 73 • · · · · · A '····· A 9 • · · 9 9 9

9 99 9 9. 9 9 9

R_t je atom vodíku,

R₃ je 2-methoxyskupina, 3-methoxyskupina, 3-ethoxyskupina, 3'^_propoxyskupina, 3-benzyloxyskupina, 3-(2-ethoxykarbonylová skupina), 3-(2-hydroxyethoxyskupinaj, 3-(2,3-dihydroxypropoxyskupina), 3-(2-dímethylaminoethoxyskupina) nebo 3-(3-ami-, nopropoxyskupina) a 3-hydroxyskupina a r₄ je 5-methoxyskupina nebo atom vodíku, nebo její sůl nebo její solvát.

15. Sloučenina obecného vzorce (IE)

Ri, R₂,

R_s

R₄ a R5 mají význam definovaný u obecného vzorce (I) podle nároku 1, je 1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-yl,

R_t je atom vodíku a r₃ je 2-methoxyskupina nebo 3-ethoxyskupina a r₄ je 5-methoxykupina nebo atom vodíku, nebo její sůl nebo její solvát.

- 74 3 Λ a d 3 Λ 3« •S 3 *4 > 1> 3 3 3 3

2. Sloučenina podle nároku 1, kde Ri a R₂ každý nezávisle představují methoxyskupinu nebo atom chloru.

3 Ο Ο Ο Ο 7 Ο 3 3 Λ 3 Λ Λ ο ifcl

R_x, R2, R3, R4 a R5 mají význam definovaný u obecného vzorce (I) podle nároku 1,

R_t je atom vodíku, nebo její sůl nebo její solvát.

17. Sloučenina zvolená ze seznamu sestávajícího z:

4-(5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-ethoxy-N-(2,2,6,6-tetráme thylpiperidin-4-yl)benzamidu;

4- (5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-benzyloxy-N-(2,2,6, 6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamidu;

4-(5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-hydroxy-N-(2,2,6, 6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-propoxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamidu;

- 75 4 4 (4 · · · 9 4 · · • 4 · 4 4 4 4 4 4 · '4 9 4 · 4 4 4 · < ·

4 '4 44 444 44444·· 4 ·

4 4 ·44 >44

4444 4 44 4 ·· 444·

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-[3-[4-(3-methoxyfenyl)piperazin-l-yl]propyl]-3-methoxybenzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-[3-[4-(2-pyrimidyl)piperazin-l-yl] propyl]-3-methoxybenzamidu;

4-(5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-3-methoxybenzamidu;

<

4- (5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl) -N- (1,2,2,6, 6-pentamethylpiperidin-4-yl)-3-ethoxybenzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(3-pyridyl)-3-ethoxybenzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(3-(6-methoxypyridyl))-3-ethoxybenzamídu;

i 4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(l-benzylpiperidin-4-yl)-3-ethoxybenzamidu;

4-(5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(2, 2, 6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-2,5-dimethoxybenzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-yl)-2,5-dimethoxybenzamidu;

4-(5-methoxy-6-chlor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-3-ethoxybenzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-methoxy-N-((1-ethoxykarbonylpentyl)piperidin-4-yl)benzamidu;

0· '0

- 76 0 0

0 0 0 0 -0

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl) -3-methoxy-N- (.(karboxybutyl) piperidin-4-yl)benzamidu;

4-(5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-3-(hydroxykarbonylmethoxy)benzamidu;

4- (5, 6-dichlor-lH.-i-ndol-2-yl) -N- (2, 2, 6, 6-tetramethylpiperidin-4-yl)-3-(2-hydroxyéthoxy)benzamidu;

4-(5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-3-(3-aminopropoxy)benzamidu;

4- (5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl) -N- (2-, 2, 6, 6-tetramethylpiperidin-4-yl)-3-(2-dimethlyaminoethoxy)benzamidu a

4-(5, 6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethýlpiperidin-4-yl)-3-(2,3-dihydroxypropoxy)benzamidu.

X ¢-.

18. Způsob výroby sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 nebo její soli nebo.jejího solvátu, vyznačující. setím, že zahrnuje amidaci sloučeniny obecného -vzorce (II) ve kterém

Ri·, R₂-, R₃- a R₄- každý zvlášť představuje Ri, R₂, R₃ a R₄, které mají význam definovaný u obecného vzorce (I), nebo jeho chráněnou formu,

- 77 99 9 ··' • · · · ·

9 9 9 · ·' < ···«·· · • 9 β ·

9 9 9« · · ·

9‘ ·; 9 1 • 9 1 • 9 9

9 '9 9 • · · 9 · « sloučeninou obecného vzorce (III)

HNR_S-R_t:ni) ve kterém

R_s- a R_t· každý představují R_s a R_t, které mají význam definovaný u obecného vzorce (I), nebo jeho chráněnou formu a následně, podle potřeby, provedení jednoho nebo více z následujících kroků:

(i) konverze jedné sloučeniny obecného vzorce (I) na jinou sloučeninu obecného vzorce (I), (ii) odstranění jakékoli chránící skupiny, (iii) příprava soli nebo solvátu sloučeniny takto vytvořené.

19. Způsob léčby a/nebo profylaxe chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u savců, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání účinného netoxického množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku' 1 nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu.

20. Způsob léčby osteoporosy a souvisejících osteopenních chorob u lidí a savců jiných, než je člověk, vyznačující se t í m, že zahrnuje podávání účinného, netoxického množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu člověku nebo savci jinému, než je člověk, který to potřebuje.

- 78 ·, · • · « • ··<

-Λ

I

I i t te.

21. Způsob léčby tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vesikulární stomatitidy, virus Newcastleské choroby, víry chřipky A a B, virus HIV), vředy (například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori), autoimunitními chorobami a transplantací, k léčbě a/nebo prevenci hypercholesterolemických a atherosklerotických chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriasa a solidní tumory, u lidí a savců jiných, než je člověk, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání účinného, netoxického množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu člověku nebo savci jinému, než je člověk, který to potřebuje.

22. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát pro použití jako aktivní terapeutická látka.

a

23. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát pro použití při léčbě nebo profylaxi chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u savců.

24. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její farmaceuticky §

A·,

- 79 Á' • A A 99 A · A A A

Ιφ · « '9 · · A A A A A • Á · AAAA A A A

A A A A · A A AAAAAAA A A

A. A AAA AAA

AAAA A AA A ·A AAAA přijatelný solvát pro použití při léčbě nebo profylaxi osteoporózy a souvisejících osteopenních chorob.

25. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát pro použití při léčbě tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva,· rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vesikulární stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B, virus HIV), vředy (například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobac.ter pylori), autoimunitními chorobami a transplantací, k léčbě a/nebo prevenci hypercholesterolemických a atherosklerotických chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriasa a solidní tumory, u lidí a savců jiných, než je člověk.

26. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce (I) podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát a její farmaceuticky přijatelný nosič.

27. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu pro výrobu léčiva pro léčbu a/nebo profylaxi chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u savců.

28. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího

- 80 ·· · * · farmaceuticky přijatelného solvátu pro výrobu léčiva pro léčbu a/nebo profylaxi osteoporózy a souvisejících osteopenních chorob.

29. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu pro výrobu léčiva pro léčbu tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou

3 3 ? 3 7 3 3 3

3 3 Ο») 3 > > 3 '3 Ο«> ?' 3 3 7

3 $ ό ) 3 3 3 3 3 Ρ

4 ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vesikulární / . stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a í-. B, virus HIV), vředy (například chronické gastritidy a ( peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori), ti autoimunitními chorobami a transplantací, k léčbě a/nebo f;. prevenci hypercholesterolemických a atherosklerotických chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriasa a solidní tumory.