CZ20014603A3 - Pouľití aminopolykarboxylátových ligandů při značení biologicky aktivních substrátů Tc-99m-trikarbonylovými prekurzory - Google Patents

Description

Použití aminopolykarboxylátových ligandů při značení biologicky aktivních substrátů Tc-99m-trikarbonylovými prekursory

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nových ligandů pro přípravu radionuklidových komplexů, nových komplexů inkorporujících takové ligandy, způsobů přípravy takových komplexů, zobrazovacích Činidel inkorporujících takové komplexy a způsobů pro zobrazení takových činidel.

Dosavadní stav techniky

Scintigrafické zobrazování a podobné radiografické techniky pro vizualizaci tkání in vivo mají stále větší uplatnění v biologickém a lékařském výzkumu a v diagnostických a terapeutických postupech. Obecně, scintigrafické postupy zahrnují přípravu radioaktivních činidel, která se po podání biologickému subjektu lokalizují ve specifickém orgánu, tkáni nebo kosterní struktuře. Po takovéto lokalizaci se stopy, grafy nebo scintigrafické fotografie distribuce radiografického materiálu in vivo mohou provést za použití různých detektorů' radiace, například za použití posuvných skenerů nebo scintilačních kamer. Distribuce a odpovídající relativní intenzita detekovaného radioaktivního materiálu ukazuje nejen místo obsazené cílovou tkání, ale také ukazuje na přítomnost receptorů, antigenů, aberací, patologických stavů a podobně.

Obecně, podle typu radionuklidu a cílového orgánu nebo tkáně, obsahují prostředky radionuklid, nosič specifický pro daný orgán nebo tkáň, různá pomocná činidla, která fixují radionuklid na nosič, vodu nebo jiné transportní vehikulum vhodné pro injekci nebo aspiraci pacientovi, například fyziologické pufry, soli a podobně. Nosič váže nebo komplexuje radionuklid na nosič, což vede k lokalizaci radionuklidu v ·· · místě, ve kterém se u biologického subjektu koncentruje nosič.

Technecium-99m (^99mTc) je radionuklid, který je dobře známý a používaný tkáňové zobrazovací činidlo. Z důvodu jeho bezpečnosti a ideálních zobrazovacích vlastností je tento radionuklid dostupný komerčně ve formě oxidovaného pertechnecistanu (“TcO/) , který je zde dále označován jako _ „pertechnecistan-Tc99m. Nicméně, pertechnecistan netvoří komplexy s většinou používaných nosičů pro radionuklidové * zobrazování tkání. Proto jsou zobrazovací činidla značená techneciem obvykle připravována smísením izotonického salinického roztoku pertechnecistanu-Tc99m, činidla redukujícího technecium, jako je chlorid cínu nebo natriumdithionit, a chelátu konjugovaného na daný peptidový nosič specifický pro daný orgán nebo tkáň. Alternativně může být připraven meziproduktový tekutý komplex pro přenos technecia Tc99m před přidáním chelátu-biologické molekuly pro zachování oxidovaného stavu na požadované úrovni. Příklady jsou 99m Tcvinan nebo 99m Tc-glukonát.

Jiným problémem je to, že scintigrafická zobrazovací činidla obsahující technecium jsou nestabilní za přítomnosti kyslíku, primárně v důsledku oxidace redukčního činidla a/nebo destrukce komplexu technecium-99m/specifický nosič. Proto se obvykle taková zobrazovací činidla připravují bez kyslíku tak, že se prostředky nasytí dusíkem nebo se připraví v atmosféře neobsahující kyslík. Stabilizace zobrazovacích činidel může být ^Z také provedena chemickými prostředky. US patent č. 4232000, Fawzi, udělený 4.11.1980, popisuje použití gentisyl-alkoholu jako stabilizačního činidla pro zobrazovací činidla obsahující technecium. Obdobně, US patent č. 4233284, Fawzi, udělený 11.11.1980, popisuje použití kyseliny gentisové jako stabilizačního činidla.

V publikované PCT přihlášce č. PCT/US98/07979 (Mezinárodní

¢přihláška č. WO 98/48848), která je zde uvedena jako odkaz, je popsán způsob přípravy sloučenin obecného vzorce (I): fac[m (CO) 3 (OH2) 3]⁺, kde M je Mn, ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re, který zahrnuje reakci kovu v permetalátové formě s oxidem uhelnatým a redukčním činidlem, kde se směs baze, redukčního činidla rozpustného ve vodě, ale ne významně rozkládaného vodou, a volitelně stabilizačního činidla, rozpustí ve vodě obsahující c systém rozpouštědel obsahující roztok kovu ve formě permanganistanu, pertechnecistanu nebo perrhenistanu, za

- přítomnosti oxidu uhelnatého a volitelně za přítomnosti halogenidu. Ligandy popsané pro značení biologicky aktivních molekul mají tendenci stabilizovat kovy v jejich nízkém oxidačním stavu. Tyto ligandy mají společnou přítomnost vakantních orbitů s nízkým číslem majících vhodnou symetrii pro \ tvorbu π-vazeb přijetím elektronů z obsazeného d-orbitu kovu, což je fenomém známý jako zpětná vazba. Mezi ligandy uvedené v této patentové přihlášce patří isonitrily, fosfiny, thioethery, Schiffovi baze, a pyridinové, imidazolové a pyrazolové skupiny. Jako ideální chelát je uvedena aminokyselina histidin. Pro některé účely spočívá problém s použitím histidinu a jiných nenasycených organických molekul jako chelátů v tom, že vzniklé značené sloučeniny jsou vysoce lipofilní, což vede k vysokému vychytávání do jater a do krve. Převládající hepatobiliární vychytávání a klírens jsou pro některé účely nežádoucími charakteristikami specifických zobrazovacích činidel.

, Publikace a jiné materiály použité pro dokreslení vynálezu nebo uvádějící další podrobnosti provedení jsou zde uvedeny jako odkazy a jsou uvedeny v připojeném seznamu odkazů.

Podstata vynálezu

Vynález poskytuje způsob přípravy sloučenin vzorce f ac-[M (CO) 3 (0H₂) ₃]⁺ (I)

kde M je Mn, ^9SmTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re, který zahrnuje reakci kovu v permetalátové formě s oxidem uhelnatým a redukčním činidlem, kde se směs baze, redukčního činidla rozpustného ve vodě, ale ne významně rozkládaného vodou, a volitelně stabilizačního činidla, rozpustí ve vodě obsahující systém rozpouštědel obsahující roztok kovu ve formě permanganistanu, pertechnecistanu nebo perrhenistanu, za přítomnosti oxidu uhelnatého. Sloučenina vzorce (I) může reagovat s ligandem L_x za vzniku sloučeniny vzorce fac-[M (CO) ₃ (X) ₂Li]^a (II) kde M je stejný, jak je definován výše, L_x je multidentátní ligand, a n je náboj ligandu L_x zvýšený o jeden + náboj.

Vynález se také týká nových sloučenin a kitů pro provádění popsaných způsobů.

Popis obrázků na připojených výkresech

Obr. 1A-E ukazují strukturu His-Tyr-3-oktreotátu (obr. ΙΑ), n-DTPA-Tyr-3-oktreotátu (obr. 1B), iso-DTPA-Tyr-3-oktreotátu (obr. IC), DTPA'-Tyr-3-oktreotátu (obr. ID) a IDA-glukosy (obr. IE) .

Obr. 2 je grafické znázornění vychytávání [Tc (CO) 3(His-Y³oktreotátu)] a [Tc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotátu) ] u samců Lewisových krys s implantáty CA20948 nádorů 4 hodiny po injekci. Měřítko ukazuje procento injikované dávky (ID) na gram tkáně, jak je uvedeno v dolní části grafu.

Obr. 3 je scintigrafie krys, kterým byl injekčně podán buď studený peptid (krysy 3 a 4) nebo salinický kontrolní roztok (krysy 1 a 2) a za 30 minut poté jim byla podána injekce 50 μθί [⁹⁹“Tc (CO) 3 (DTPA-Y³-oktreotátu) ]. Scintigrafie byla provedena 3

» · hodiny po injekci.

Obr. 4 je graf srovnávající vychytávání 99mTc-2148 3 hodiny po injekci v různých tkáních Lewisových krys s CA20948 nádory, kterým byl injikován buď salinický roztok, nebo blokovací dávka neznačeného peptidů 30 minut před injekcí značeného peptidů.

Podrobný popis vynálezu

Předkládaný vynález se týká použití multivazebných ligandů, kterými jsou výhodně aminopolykarboxylátové cheláty pro značení biologických molekul, které obvykle vedou k zisku více hydrofilních sloučenin, které jsou vylučovány především ledvinami. Ačkoliv nejsou tyto typy ligandů obvykle píkyselinami a obvykle nestabilizují technecium v nízkém oxidačním stavu, tvoří velmi stabilní komplexy s Tc(I)trikarbonylovým prekursorem a mají výhodnou biologickou distribuci. V zejména výhodném použití nejsou ligandy pro použití v předkládaném vynálezu bidentátní. Příklady aminopolykarboxylátových ligandů j sou kyselina diethylentriamin-pentaoctová (DTPA), kyselina ethylendiamintetraoctová (EDTA), a kyselina 1,4,7,10tetraazacyklododekan-1,4,7,10-tetraoctová (DOTA). Výhodnými aminopolykarboxylátovými cheláty jsou ty, které obsahují jednu tridentátní stranu, která se může navázat na techneciové centrum, jako je kyselina iminodioctová (IDA), kyselina nitriltrioctová (NTA) a triazacyklononantriacetát.

Vynález popisuje způsoby pro přípravu faciálních metaltrikarbonylových sloučenin a dalších koordinovaných faciálních metaltrikarbonylových sloučenin. Vynález se dále týká použití uvedených faciálních metaltrikarbonylových sloučeninpři značení biologicky aktivních substrátů a jiných ligandů, a kitů pro přípravu faciálních metaltrikarbonylových sloučenin a dalších koordinovaných faciálních

metaltrikarbonylových sloučenin.

Použití komplexů kovů, s různými radionuklidy, v oblasti nukleární medicíny, se stalo hlavním nástrojem v diagnostice a nověji také v terapii. Komplexy kovů jsou často navázány na biologicky aktivní substrát, který působí jako činidlo se specifickou vazbou. Jedním z nejpoužívanějších způsobů pro značení biologicky aktivních substrátů, jako jsou proteiny, peptidy, sacharidy nebo malé biologicky aktivní sloučeniny, kovem, je stabilizace M(V)=O skupiny (radioaktivních) kovů skupiny 7B periodické tabulky různými tridentátními ligandy. Po redukci je M(V)=O skupina přechodně stabilizována větším množstvím pomocného ligandu, jako je glukoheptanoát, který je potom substituován chelátorem navázaným na systém, který má být značen. Tento způsob se osvědčil v mnoha případech, ale má některé významné nevýhody, jako například to, že vyžaduje vyšší denticitu a objemnost ligandu, a to, že je obtížné syntetizovat a navázat takový ligand.

V oboru je známo (Alberto et al., 1994a), že faciální metaltrikarbonylové komplexy radioaktivních kovů skupiny 7B periodické tabulky jsou velmi vhodnými výchozími materiály pro substituční reakce v organických rozpouštědlech, stejně jako ve vodě, protože tyto sloučeniny jsou stabilní ve vodě po dobu týdnů, i při expozici vzduchu. Proto jsou uvedené sloučeniny velmi užitečné pro značení biologicky aktivních substrátů, jako jsou aminokyseliny, peptidy, proteiny, sacharidy a jakékoliv molekuly vážící se na receptory. Hlavní nevýhodou těchto sloučenin je to, že je možno je získat pouze z karbonylačních reakcí při vysoké teplotě a za použití hořlavého a toxické a proto nebezpečného redukčního činidla BH₃ (Alberto et al.,

1994b).

Předmětem předkládaného vynálezu je způsob přípravy faciálních metaltrikarbonylových sloučenin (radioaktivních) ·· ♦ ·

• '· • ♦ • fc kovů skupiny 7B za použití snadno dostupných a málo toxických výchozích materiálů při středních teplotách a normálním tlaku CO, za přiměřenou dobu a s vysokým výtěžkem.

Taková metoda je účinným prostředkem, který může být použit pro syntézu diagnostických a terapeutických činidel, zejména pro syntézu uvedených diagnostických a terapeutických činidel odvozených od radioaktivních kovů s krátkým poločasem, a umožní přístup k těmto značeným sloučeninám a chudě vybaveným nemocničním laboratořím. Když je výše uvedené diagnostické činidlo značené radionuklidem, může být detekováno takzvanou počítačovou tomografií využívající emise jednotlivých fotonů (SPÉCT a SPĚT), a když je značeno paramagnetickým atomem kovu, může být detekováno magnetickou rezonancí.

Výše definovaný předmět vynálezu může být dosažen, podle předkládaného vynálezu, způsobem přípravy sloučeniny obecného vzorce:

fac-[M (CO) ₃ (OHz) ₃]⁺ (I) kde M je Mn, ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re, který zahrnuje reakci kovu ve formě permetalátu s oxidem uhelnatým a redukčním činidlem, kde se směs baze, redukčního činidla rozpustného ve vodě, ale ne významně rozkládaného vodou, a volitelně stabilizačního činidla, rozpustí ve vodě obsahující systém rozpouštědel obsahující roztok kovu ve formě permanganistanu, pertechnicistanu nebo perrhenistanu, za přítomností oxidu uhelnatého.

Kovem M je výhodně Mn, ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re, protože tyto radionuklidy, když jsou použity v diagnostických nebo terapeutických činidlech, mají výhodu v tom, že mohou být aplikovány ve velmi nízkých koncentracích, což minimalizuje riziko toxicity.

$

Termín „není významně rozkládaný vodou znamená, že po adici roztoku permanganistanu, pertechnecistanu nebo perrhenistanu do vody je rychlost rozkladu redukčního činidla vodou nula nebo je velmi nízká ve srovnání s reakcí uvedeného redukčního činidla s permanganistanem, pertechnecistanem nebo perrhenistanem, takže je reakce s uvedeným permetalátem dokončena za trvající přítomnosti redukčního činidla.

Je velmi překvapivé, že kvantitativní redukce permetalátů ve vodě obsahující systém rozpouštědel může být provedena při střední teplotě a za rozumnou dobu při použití redukčních činidel, která jsou nukleofilní a která jsou obvykle považována za méně reaktivní než elektrofilní redukční činidlo BH3 známé v oboru.

Způsob podle předkládaného vynálezu může být snadno proveden smíšením roztoku permetalátů s dalšími činidly za přítomnosti oxidu uhelnatého. Roztok permetalátů může volitelně obsahovat ionty halogenidů potřebné pro eluci permetalátů z generátoru. Oxid uhelnatý může být dodáván pomocí uzavřeného systému s atmosférou obsahující dostatečné množství oxidu uhelnatého, nebo probubláváním oxidu uhelnatého roztokem. Výhodně je plynem v podstatě čistý oxid uhelnatý.

Použitou baží je výhodně bazický boritanový pufr. Mezi další baze patří anorganické baze vybrané ze skupiny zahrnující stabilní hydroxidy a uhličitanové soli, jako je NaOH, KOH, NaHC03, Na2CO3, KHCO3, K2HCO3, Ca (OH) 2 a Mg (OH) 2. Baze se přidá v molárním poměru k redukčnímu činidlu mezi 0,1 a 2, a výhodně v molárním poměru přibližně 0,35.

Reakce může být provedena s a bez stabilizačního činidla. Jako stabilizační činidlo může být použit gentisát (2,5dihydroxybenzoát), glukoheptanoát, citrát nebo vinan, například

NaK-vinan. Stabilizační činidlo se přidá do reakční směsi v takovém množství, že jeho koncentrace je vyšší než koncentrace kovu, který má být redukován.

Ve výhodných provedeních směs obsahuje kyselinu L-vinnou.

V ještě výhodnějších provedeních směs obsahuje laktosu.

Pro redukci může být použito několika redukčních činidel, jako je borohydridový anion (BH₄~) nebo substituovaný borohydridový anion, ve kterém jsou až tři z atomů vodíku, které obsahuje borohydridový anion, nahrazeny nezávisle inertními substituenty. Příklady uvedených inertních substituentů jsou alkoxy nebo alkylkarbonyloxy skupiny obsahující 1 až 10 atomů uhlíku a kyano skupiny. Protiion redukční skupiny může být kov skupiny IA nebo 2A periodické tabulky nebo zinek nebo ammonium nebo tetrasubstituovaná ammoniová skupina nebo tetrasubstituovaný fosfoniový iont, kde čtyři substituenty jsou každý nezávisle alkylová skupina obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, hydroxyalkylová skupina nebo alkoxyalkylová skupina obsahující 2 až 10 atomů uhlíku nebo arylové skupiny.

Výhodným redukčním činidlem je borohydridový anion, zejména ve formě sloučenin, jako je borohydrid sodný, borohydrid draselný, borohydrid lithný a borohydrid zinečnatý.

Nejvýhodnějším redukčním činidelm je KBH₄.

Redukční činidlo reaguje s permetalátem v molárním poměru vyšším než 3. Redukční reakce může být provedena při teplotě mezi 20 °C a 100 °C. Výhodná reakční teplotě je přibližně 75 °C. Zahřívání reakční směsi může být provedeno normálním způsobem, ale je možno využít také zahřívání mikrovlnami. Reakce může být také provedena za použití ultrazvuku, například provedením reakcí v ultrazvukové lázni při teplotě místnosti, což obvykle ·» ··«·

vede ke stejné rychlosti reakce při nižší reakční teplotě.

Získaná sloučenina obecného vzorce (I) je velmi vhodná pro značení biologicky aktivních substrátů, jako jsou aminokyseliny, peptidy, proteiny, sacharidy malé molekuly vážící se na receptory nebo buňky.

Příklady peptidů, které mohou být značeny, jsou růstové faktory, somatostatin, bombesin, insulin, LHRH, gastrin, peptid uvolňující gastrin, hormon uvolňující thyreotropin, thyreostimulační hormon, prolaktin, vasoaktivní intestinální peptid (VIP), polypeptid aktivující hypofyzární adenylát cyklasu (PACAP), angiotensin, neurotensin, interferony, IL-1, IL-4 a IL-6, monoklonální protilátky a jejich analogy či deriváty. Po značení vhodnou značkovací substancí mohou být tyto peptidy použity při detekci a lokalizaci maligních lidských nádorů.

Příklady sacharidů, které mohou být značeny, jsou glukosa a deoxyglukosa a deriváty uvedených sloučenin.

Malé molekuly vážící se na receptory jsou definovány jako nepeptidové molekuly, které se váží na receptory a obvykle mají molekulovou hmotnost nižší než přibližně 500 Daltonů.

Příklady malých molekul vážících se na receptory, které mohou být značeny, jsou substance pro serotoninergní systém popsané ve WO 96/30054, nebo substance pro dopaminergní systém (například raclopirid, β-CIT, lisurid), pro cholinergni systém (například epibatidin), pro glutaminergní systém (například mematin) nebo pro benzodiazepinový systém (například flumazenil, iomazenil). Příklady metabolicky aktivních molekul, které mohou být značeny, jsou DOPA, tyrosin, mlBG, MAO-I a jejich analogy.

Příklady buněk, které mohou být značeny, jsou erytrocyty a

leukocyty.

V důsledku značení (biologicky aktivních) substrátů sloučeninou obecného vzorce I se získají další koordinované sloučeniny obecného vzorce fac-[M (CO) 3 (X) ₂Li]ⁿ fac-[M (CO) 3 (X) L2]ⁿ fac-[M (CO) 3L₃]ⁿ (II) , (III), nebo (IV) , kde

M je Mn, ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re;

Li je monodentátní ligand;

L₂ je vybrán ze skupiny zahrnující bidentátní ligand a dva monodentátní ligandy;

L₃ je vybrán ze skupiny zahrnující tridentátní ligand, monodentátní ligand a bidentátní ligand, a tři monodentátní ligandy;

X je H₂0 nebo halogenidový iont;

n je součet nábojů ligandů Li nebo L₂ nebo L₃ a X zvýšený o jeden + náboj.

Po značkovací reakci je ligandem X obvykle H₂0. Nicméně, jeden z H₂O ligandů může být nahrazen iontem halogenidu, pokud je dostupný, pro neutralizaci náboje komplexu. Toto často platí pro sloučeniny obecného vzorce III.

Když je ligand Li, L₂ nebo L₃ před a/nebo po značení faciální metaltrikarbonylovou sloučeninou biologicky aktivní molekulou, poskytuje předkládaný vynález snadný přístup ke sloučeninám, které mohou být přímo použity jako diagnostická a terapeutická činidla.

Příklady monodentátních ligandů spadajících do definice Li,

L₂ nebo L₃ jsou (biologicky aktivní) substráty obsahující

skupiny jako jsou fosfiny, isonitrily, nitrily, imidazoly, thioethery a pyridinu podobné aromatické aminy.

Příklady bidentátních ligandu spadajících do definice L₂ nebo L3 jsou (biologicky aktivní) substráty obsahující pyridinové, imidazolové nebo pyrazolové skupiny, jako je histidin, histamin, funkcionalizované imidazolové systémy, bidentátní thioethery, bidentátní isokyanidy, ligandy typu Schiffovi baze a kyselina pikolinová.

Příklady monodentátních ligandů spadajících do definice L₃ jsou tris-pyrazolyl-boritan, tris-pyrazolylmethan, tris-imidazolylboritan, tris-pyrazolylmethan, 1,4,7-trithiacyklononan(9-anS3) a trithiacyklononan (9-anN₃) , histidin, methionin, cystein derivatizovaný na thiolové skupině za zisku thioětheru a deriváty cyklopentadienylu.

V některých případech může být žádoucí připravit radioaktivně značené biologicky aktivní sloučeniny v jednom stupni. Toto může být dosaženo způsobem podle předkládaného vynálezu pro přípravu sloučenin obecného vzorce fac-[M (CO) ₃ (X) ₂Li]ⁿ fac-[M (CO) 3 (X) L2]ⁿ fac-[M (CO) 3L₃]ⁿ (II) (III), nebo (IV) kde

M je Mn, ⁹⁹Tc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re;

Li je monodentátní ligand;

L₂ je vybrán ze skupiny zahrnující bidentátní ligand a dva monodentátní ligandy;

L₃ je vybrán ze skupiny zahrnující tridentátní ligand, monodentátní ligand a bidentátní ligand, a tři monodentátní ligandy;

X je H₂0 nebo halogenidový iont;

n je součet nábojů ligandů Li nebo L2 nebo L3 a X zvýšený o jeden + nábojové kterém se směs baze, ligandů Li nebo L2 nebo L3, redukčního činidla rozpustného ve vodě, ale ne významně rozkládaného vodou, a volitelně stabilizačního činidla, rozpustí ve vodě obsahující systém rozpouštědel obsahující roztok kovu ve formě permanganistanu, pertechnecistanu nebo perrhenistanu, za přítomnosti oxidu uhelnatého a volitelně za přítomnosti halogenidu.

Zejména v případě radioaktivně značených sloučenin je často nemožné připravit prostředky určené pro použití; příčinou je často krátká skladovací doba radioaktivně značené sloučeniny a/nebo krátký poločas použitého radionuklidu. V takových případech musí uživatel provést značkovací reakci s kovem v nemocnici nebo laboratoři. Pro tento účel jsou uživateli často nabízeny různé reakční složky ve formě takzvaného kitu. Je jasné, že procesy nutné pro provedení požadované reakce musí být co možná nej jednoduší, aby mohl uživatel připravit z kitu radioaktivně značený prostředek za použití pomůcek, které má k dispozici. Proto se vynález také týká kitů pro přípravu radioaktivně značených prostředků, kde značené prostředky obsahují sloučeniny vzorce I jako značkovací činidla.

Takový kit pro značení biologicky aktivního substrátu podle předkládaného vynálezu obsahuje (i) redukční činidlo rozpustné ve vodě, ale ne významně rozkládané vodou, (ii) bázi, (iii) pokud je to žádoucí, tak stabilizační činidlo a/nebo chelatační činidlo, a (iv) pokud je to žádoucí, jeden nebo více inertních farmaceuticky přijatelných nosičů a/nebo pomocných činidel a/nebo adjuvans, kde alespoň jedna z uvedených složek (i) až (iv) je uskladněna v zásobníku s atmosférou obsahující dostatečné množství oxidu uhelnatého, kde uvedené složky (i) až (iv) mohou být volitelně kombinovány, a (v) návod k použití s popisem reakce složek kitu s kovem (M) vybraným ze skupiny

zahrnující Mn, ”Tc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re ve formě roztoku permetalátu. Výhodně kit obsahuje lyofilizovaný prostředek včetně bazického boritanového pufru a redukčního činidla rozpustného ve vodě, ale ne významně rozkládaného vodou, a směs je uzavřena v zásobníku s oxidem uhelnatým, nejlépe s v podstatě čistým oxidem uhelnatým. V jiných provedeních může kit obsahovat kov (Μ), jak je definován výše. V ještě dalších provedeních může kit obsahovat ligand (L_x) , kterým je výhodně multidentátní aminopolykarboxylátový ligand.

Předkládaný vynález popisuje snadný způsob pro přípravu faciálních trikarbonylmetalových sloučenin v časovém horizontu, který je přijatelný při srovnání s poločasem použitých radioizotopů, a s vysokým výtěžkem, a dále kit pro značení biologicky aktivních substrátů uvedenými faciálními trikarbonylmetalovými sloučeninami.

V některých případech může být výhodné uzavřít biologický substrát do kitu, takže se získá kit pro přípravu radiofarmaceutických prostředků.

Alternativně se biologicky aktivní sloučenina tvoří po reakci ligandu s faciální trikarbonylmetalovou sloučeninou.

Takový kit pro přípravu diagnostických a terapeutických farmaceutických prostředků, podle jiného provedení předkládaného vynálezu, obsahuje (i) vhodný substrát, který má být značen kovem vybraným ze skupiny zahrnující Mn, ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re, (ii) redukční činidlo rozpustné ve vodě, ale ne významně rozkládané vodou, (iii) bázi, (iv) pokud je to žádoucí, tak stabilizační činidlo a/nebo chelatační činidlo, a (v) pokud je to žádoucí, jeden nebo více inertních farmaceuticky přijatelných nosičů a/nebo pomocných činidel a/nebo adjuvans, kde alespoň jedna z uvedených složek (i) až (v) je uskladněna v zásobníku s atmosférou obsahující

£.

dostatečné množství oxidu uhelnatého, kde uvedené složky (i) až (iv) mohou být volitelně kombinovány, a (vi) návod k použití s popisem reakce složek kitu s uvedeným kovem ve formě roztoku permetalátu.

Příprava diagnostických a terapeutických farmaceutických prostředků za použití výše uvedeného kitu obsahujícího (biologicky aktivní) substrát může probíhat ve dvou alternativních provedeních. V prvním provedeni se nejprve připraví faciální trikarbonylmetalová sloučenina, která potom reaguje se substrátem, který má být značen.' Ve druhém provedení se redukce provede za přítomnosti substrátu, který má být značen, což vede přímo k zisku značené sloučeniny.

Vynález bude nyní popsán podrobněji v následujících příkladech, které jsou pouze ilustrativní a nijak neomezují rozsah vynálezu. V příkladech se využívají standardní techniky nebo techniky, které jsou v nich popsány.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1: Syntéza [^99mTc (0H₂) 3 (CO) 3] ⁺

V 10 ml zkumavce s uzávěrem se smísí následující sloučeniny: 5,5 mg NaBH_4z 4,0 mg Na₂CO3 a 20,0 mg NaK-vinanu. Zkumavka se uzavře zátkou a pomocí stříkačky se směsí nechá probublávat po dobu 10 minut oxid uhelnatý. 3 ml 0,9% roztoku NaCl z Mo-99/Tc99 generátoru, mající aktivitu přibližně 100 mCi, se přidají skrz membránu a zkumavka se zahřeje na teplotu 75 °C na dobu 30 minut a potom se ochladí na teplotu místnosti. Produkt se analyzuje TLC na standardních Merck silikagelových plotnách s methanolem/koncentrovanou HC1 = 99/1 jako mobilní fází a potom se provede analýza silikagelové plotny pomocí skeneru radioaktivity. Výtěžek redukce pertechnecistanu na faciální [^99mTc (OH2) 3 (CO) 3] ⁺ je > 95% podle TLC. Po neutralizaci roztoku ···· ·· ·· © ·© © © © roztokem PBS (fosfátového pufru (pH = 7,4, salinický.roztok 0,9%) - neutrálním fyziologickým roztokem, se získá roztok vhodný pro značení.

Tabulka 1 ukazuje, že za různých reakčních podmínek mohou být získány roztoky [^99mTc (ΟΗ₂) 3 (CO) ₃] ⁺ mající aktivitu až 700 mCi.

Tabulka 1: Příprava [^99mTc (0H₂) 3 (CO) 3] ⁺ za různých reakčních podmínek

Pokus	Stabilizační činidlo	Objem roztokuTcO/ (ml)	Aktivita (mCi)	Rozpouštědlo	Teplota (°C)	Reakční doba (min.)	Výtěžek (TLC) (%)
1	NaK-vinan	3	«100	H2O	75	30	>95
2	NaK-vinan	3	«400	H2O	75	30	>95
3	NaK-vinan	3	«700**	H2O	75	30	>95
4	NaK-vinan	3	n.d. *	H2O	75	30	>95
5	NaK-vinan	6	n.d.*	H2O	75	30	>95
g***	NaK-vinan	3	n.d.*	H2O	75	30	40
7		3	n.d.*	H2O	75	30	70
8	Na-citrát	3	n.d. *	H20	75	30	20
9	Na-fonniát	3	n.d.*	H2O	75	30	35
10	NaK-vinan	3	n.d.*	H2O/EtOH 80/20	75	30	>95
11	NaK-vinan	3	n.d. *	H2O	100	10	60

* Aktivita nebyla určena přesně, ale byla mezi 50 a 200 mCi. ** Aktivita určená po ředění na 1% *** 4,0 mg Ca (OH) 2 byly použity jako baze místo 4,0 mg Na2CO₃.

Příklad 2: Příprava radioaktivně značených peptidů

Komplexy [^99mTc (CO) 3 (n-DTPA-Y³-oktreotátu) ] , [⁹⁹“Tc(CO)₃(isoDTPA-Y³-oktreotátu) ] a [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotátu) ] se připraví způsobem popsaným v tomto příkladu. Ačkoliv tyto tři

6t

9999 ·· • Φ Φ 9 φ · Φ • ΦΦΦ

ΦΦΦ ΦΦ ΦΦ komplexy obsahují každý oktreotát, mohou být podobným způsobem připraveny komplexy s jinými biomolekulami, jako jsou proteiny, sacharidy atd. mezi takové biomolekuly patří peptidy popsané ve WO 98/48848, například protilátky, His-neurotensin a scFv. Syntéza Tc-99m trikarbonyloktreotátů se provedla následujícím dvoustupňovým způsobem.

Stupeň 1; Příprava [^99mTc (0H₂) 3 (CO) 3] ⁺

V prvním stupni se ^99mTcO4~ z komerčního generátoru (50-150 mCi, 1 ml) přidá do zkumavky obsahující 2 mg NaBH₄, 10 mg NaKvinanu a 2 mg Na₂CO₃. Zkumavka se uzavře a napíchne a do prostoru nad směsí se potom vhání po dobu 5 minut plynný oxid uhelnatý. Přípravek se potom mísí a zahřívá po dobu 10 minut při 100 °C za zisku ^99mTc (I)-trikarbonylového meziproduktu. Kontrola kvality provedená HPLC s reverzní fází (C-18 kolona s 0,05 Μ TEAP (tetramethylammoniumfosfátem); pH =

2,25/methanolový gradient) ukáže > 95% radiochemickou čistotu (retenční čas = 4,3 minut).

Stupeň 2: [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotát) ]

Ve druhém stupni se 0,1 ml [^99mTc (OH₂) 3 (CO) ₃]⁺ meziproduktu přidá do zkumavky obsahující 1,0 ml fosfátem pufrovaného salinického roztoku (PBS). Potom se přidá 50-125 μg peptidového komplexu DTPA'-Y³-oktreotátu a získaný roztok se zahřívá po dobu 30 minut při teplotě 75 °C. Separace radioaktivně značeného komplexu od radiochemických nečistot se provede za použití Waters C-18 Sep-Pak náplně. Náplň se nejprve kondicionuje ethanolem a potom se propláchne vodou. Reakční směs se potom aplikuje do horní části náplně, promyje se vodou pro odstranění radiochemických nečistot a produkt se potom eluuje ethanolem. Kontrola kvality provedená HPLC s reverzní fází (C-18 kolona s 0,05 M TEAP/methanolovým gradientem) ukáže > 95% radiochemickou čistotu (retenční čas = 20-21 minut).

·»♦· • ····· · · · · · 4 • 4 444 .44© • 4 44 44 4 44 444 4 [^99mTc (CO) 3 (n-DTPA-Y³-oktreotát) ] a [^99mTc (CO) 3 (iso-DTPA-Y³oktreotát)] se připraví stejně jako [^99mTc (CO) ₃ (DTPA'-Y³oktreotát) ] s tou výjimkou, že iso-DTPA-Y³-oktreotátový nebo nDTPA-Y³-oktreotátový peptidový komplex se použije místo DTPA'Y³-oktreotátového komplexu.

Data týkající se syntézy 3 radioaktivně značených Y³oktreotátů j sou uvedena v tabulce 2.

Tabulka 2:

Peptid	n-DTPA-YJ- oktreotát	iso-DTPA-Y3- oktreotát	dtpa'-y3- oktreotát
Množství peptidu	138 pg	75 gg	125 gg
Aktivita Tc-99m	9 mCi	8 mCi	9 mCi
HPLC retenční čas	20,3 a 20,6 minut (2 píky)	20,1 minut	19,8 minut
Radiochemický výtěžek	89%	84%	85%
Radiochemická čistota	99%	99%	98%

Příklad 3: Příprava radioaktivně značených biologických substrátů za použití [^99mTc (0Η₂) 3 (CO) ₃] ⁺ a aminopolykarboxylátových ligandů

V pokusech uvedených v příkladu 5 bylo zjištěno, že DTPA'Y³-oktreotát má lepší biologickou distribuci než iso- DTPA-Y³oktreotát a n-DTPA-Y³-oktreotát. Proto byly další pokusy provedeny s DTPA'-Y³-oktreotátem. Tento příklad popisuje drobné variace způsobů příkladu 2 pro přípravu této sloučeniny, tyto způsoby jsou výhodnější než způsoby podle příkladu 2 a považujeme je za výhodnější než způsoby popsané ve WO 9848848.

• ·· ·· ···· ·· ·· • · · · · V · · · · • · • · · «I .Stupeň 1: Příprava [^99mTc (0H₂) 3 (CO) 3] ⁺

Do 10 ml uzavřené zkumavky obsahující následující lyofilizovaný přípravek: 20 mg laktosy-H²0, 13 mg kyseliny Lviné, 7,6 mg KBH4, boritanový pufr při pH 11,6 a oxid uhelnatý v prostoru nad hladinou, se přidají 2 ml ^99mTcO4” z komerčního generátoru (50-200 mCi). Zkumavka se důkladně třepe po dobu 30 sekund a umístí se do vroucí vodní lázně na dobu 15 minut. Kontrola kvality provedená HPLC s reverzní fází (C-18 kolona s 0,05 M TEAP/methanolovým gradientem) ukáže > 90% radiochemickou čistotu (retenční čas = 4,3 minuty).

Stupeň 2: [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotát) ]

Ve druhém stupni se 0,3 ml [^99mTc (OH₂) 3 (CO) 3] ⁺ meziproduktu přidá do 2,0 ml zkumavky, do které se potom přidá 35-40 μΐ IN HCl. Přidá se 100 pg peptidu a získaný roztok se zahřívá po dobu 35 minut při teplotě 75 °C. Separace radioaktivně značeného komplexu od radiochemických nečistot se provede za použití Waters C-18 Sep-Pak náplně. Náplň se nejprve kondicionuje ethanolem a potom se propláchne vodou. Reakční směs se potom aplikuje do horní části náplně, promyje se vodou pro odstranění radiochemických nečistot a produkt se potom eluuje ethanolem. Kontrola kvality provedená HPLC s reverzní fází (C-18 kolona s 0,05 M TEAP/methanolovým gradientem) ukáže > 95% radiochemickou čistotu (retenční čas - 19-21 minut). Specifická aktivita = 250 Ci/mol.

Příklad 4: Příprava [^99mTc (CO) ₃ (IDA-glukosy) ]

Kromě oktreotátový komplexů popsaných výše se pro pokus syntetizuje [^99mTc (CO) 3 (IĎA-glukosa) ] . [^99mTc (OH2) 3 (CO) 3]⁺ se syntetizuje stejně jakp ve stupni 1 příkladu 3. Ve druhém stupni se potom 0,3 ml [^99mTc (OH2) 3 (CO) ₃] ⁺ meziproduktu přidá do • · · · · · · · ·

9« » C e 9 β

2,0 ml zkumavky, do které se potom přidá 35-40 μΐ IN HCl. Přidá se 1 mg analogu glukosy a získaný roztok se zahřívá po dobu 60 minut při teplotě 75 °C. Separace radioaktivně značeného komplexu od radiochemických nečistot se provede za použití Waters C-18 Sep-Pak náplně. Náplň se nejprve kondicionuje ethanolem a potom se propláchne vodou. Reakční směs se potom aplikuje do horní části náplně, promyje se vodou pro odstranění radiochemických nečistot a produkt se potom eluuje ethanolem. Kontrola kvality provedená HPLC s reverzní fází (C-18 kolona s 0,05 M TEAP/methanolovým gradientem) ukáže > 95% radiochemickou čistotu (retenční čas = 16-17 minut).

Příklad 5: Biodistribuce [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotátu) ] u Lewisových krys s CA20948 nádory

Tento pokus se provedl pro hodnocení biologické distribuce a zobrazovacího potenciálu těchto sloučenin u Lewisových krys s implantáty CA20948 pankreatických nádorů krys.

A) Způsoby

Pro každý pokus se 6 samců Lewis krys s implantovanými CA20948 nádory anestezovalo Metofanem a injekčně se jim aplikovalo 200 μΐ (při použití sloučeniny z příkladu 2) nebo 50 μΐ (při použití sloučeniny z příkladu 3) testovaného přípravku s aktivitou přibližně 50 μCi. Zvířata byla snímána na 100K počet pod gama-kamerou po dobu 30 minut (n = 3) a 4 hodin (n = 3) po injekci, a potom byla utracena a následující tkáně byly odebrány pro test: krev, játra, ledviny, sval, slezina, pankreas, tenké střevo, nadledviny a nádor. Data jsou uvedena jako % injikované dávky na gram a % injikované dávky na celý orgán. Stejná data jsou také uvedena graficky.

B) Výsledky · 4 44 4 4 4 4

4 4 4 4 4

4 4 4 · 4 • 4 4

444 44

Měkké tkáně krve, jater a svalu ukazovaly relativně slabé vychytávání. Tkáně exprimující somatostatinové receptory, pankreas, nadledvina a nádor, vykazovaly významné a dlouhodobé vychytávání. Scintigrafy zvířat ukázaly dostatečné vychytávání činidla v nádoru. Množství aktivity v játrech a GI traktu při použití [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotátu) ] je významně nižší ve srovnání s [^99mTc (CO) 3 (His-Y³-oktreotátem) ] .

Výsledky tohoto pokusu (tabulka 3 pro sloučeniny z příkladu 2 a tabulka 4, obr. 2 pro sloučeniny z příkladu 3) ukazují, že tyto sloučeniny se lokalizují ve tkáních exprimujících somatostatinové receptory, jako je pankreas, nadledvina a nádor, s menším hepatobiliárním vychytáváním a klírens pro [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotát) ] než pro [^99mTc (CO) 3 (His-Y³oktreotátem)]. Použitými peptidy byly:

Peptid

MP-2423

MP-2138

MP-2148

MP-2377

Radioaktivně značený komplex Tc-99m(CO) 3-iso-DTPA-Tyr-3-oktreotát Tc-99m (CO) ₃-n-DTPA-Tyr-3-oktreotát Tc-99m (CO) 3-DTPA'-Tyr-3-oktreotát Tc-99m(CO) 3^-His-Tyr-3-oktreotát

Příklad 6: Vylučování [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotátu) ] vs .

[^99mTc (CO) 3 (His-Y³-oktreotátu) ] močí a jejich metabolismus

Během obecných pokusů týkajících se biologické distribuce se provedla u jednoho dalšího zvířete na pokus ligace pro zabránění močení před injekcí. Zvíře se ponechalo v anestesii po dobu 3 hodin po injekci a potom se utratilo a odebrala se moč. Změřil se objem a aktivita moči a vzorek se analyzoval HPLC za použití způsobu popsaného výše.

Obě sloučeniny zůstávaly v podstatě intaktní, jak bylo určeno HPLC analýzou. % renální klírens je přibližně dvojnásobné pro • · [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotát) ] vs. [^99mTc (CO) ₃ (His-Y³oktreotát)]. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 5.

Tabulka 3:

Čas - 30 minut

%ID/g	(%3D)	(%ID)	(% ID)	(%ID)
Orgán^	MP-2423	MP-2138	MP-2148	MP-2377
1 krev	0.472 ± 0.019	0.735 + 0.027	0.471 ±0.035	0.348 ±0.013
'nádor	0.950 ±0.012	0.847 ±0.078	0.793 ± 0.041	1.274 + 0.152
pankreas,	1.793 ±0.039	1.556 ±0.110	1.151 ±0.032	2.672 + 0.163
ledviny	21231 ±0.136	5.282 ± 0.014	2.141 ±0.12	3.506 ±0.438
játrar	0.327 + 0.006	0.567 ±0.015	0.494 ±0.011	1.823 ± 0.098
‘nádor/krev>d	2	1.1	1.7	3.7
' nádor/jálrar	3	1.3	1.6	0.7
nádor/ledviny	0.4	0.14	0.37	0.4

i Čas: 4 hodiny

krev,d	0.115 + 0.001	0.218 ±0.01	0.114 ±0.005	0.03 ±0.00
i nádor ]j.	0.848 ± 0.067	0.822 ±0.13	0.769 ± 0.069	1.001+0.066
pankreas s	2.025 ±0.103	1.761 ±0.089	0.956 ±0.054	2.669 ±0.114
‘ledviny	3.202 ±0.111	5.703 ± 0.052	3.136 ±0.08	1.638 ± 0.069
] játra	0.276 + 0.004	0.516 + 0.034	0.363 ± 0.022	0.283 ± 0.006
q^nádor/krev	7.4	3.7	6.7	33
nádor/játra	3	1.6	2.1	3.5
; nádor/ledviny	0.3	0.14	0.25	0.61

»4» ·· 4 44 4 44 ·4 ♦ ♦ 4 4 4 4 · 4. <4 · 4' • 44 4 4 4 4 4 4 '4 4

Tabulka 4

Orgán (%ID/g ve 4 hodinách p.i.)	[99nTc(CO)3(DTPA'-Y3- oktreotát)]	[99mTc(CO)3(His-Y3- oktreotát)]
Krev	0,083	0,03
Nádor	1,06	1,00
Slinivka břišní	0,99	2,67
Játra	0,19	0,28
Ledvina	3,27	1,64

Tabulka 5

Sloučenina	[mTc(CO)3(DTPA'-Y3- oktreotát)]	[mTc(CO)3(His-Y3- oktreotát)]
Aktivita/objem moči	10,4 μθϊ/1,5 ml	5,8 μθ/1,5 ml
%ED	30,7%	15,2%
HPLC analýza	96%	93%

Příklad 7: Blokování SST-2 receptorů u CA20948 Lewisových krys za použití neaktivního Y³-oktreaotátu pro určení specificity pro [ ^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktr eot át) ]

Použily se dvě krysy pro každou skupinu. Skupině 1 se aplikovalo podkožně v oblasti týlu 500 μΐ PBS 30 minut před injekcí [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotátu) ] . Skupině 2 se aplikovalo podkožně v oblasti týlu 350 μΐ Y³-oktreotátu v 500 μΐ fosfátem pufrovaného salinického roztoku (PBS) 30 minut před injekcí [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotátu) ] .

minut po injekci neaktivního peptidů nebo kontrolního salinického roztoku se zvířata anestezovala plynným Metofanem a injikovalo se jim 50 μΐ (50 μθί) Skupině 1 se aplikovalo podkožně v oblasti týlu 500 μΐ PBS 30 minut před injekcí [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotátu) ] . Za 3 hodiny po injekci se • i ·· i i 9 9 ‘9 9 9

99 9 » 9 9 9 9 '9 · 9

9' 9 9 9 9 9 9 '9 ·· 99 ·· 9 99 99 9» zvířata utratila, odebraly se vzorky jejich krve a provedla se scintigrafie krys pro 100K hodnotu (obr. 3). Na závěr pokusu se zvířata pitvala a následující tkáně se odebraly pro radiotest: játra, ledviny, sval, slezina, srdce, pankreas, nadledviny a nádor. Data byla vypočtena jako % injikované dávky na gram a % injikované dávky na celý orgán. Data jsou uvedena na v tabulce 6 a na obr. 4.

U zvířat s blokovanými somatostatinovými receptory bylo vychytávání ve tkáních exprimujících somatostatinové receptory významně sníženo o 90% v nádoru, o 95% ve slinivce břišní a o 81% v nadledvinách. Krev, játra, ledviny, svaly, slezina a srdce nevykazovaly významné změny mezi dvěma skupinami zvířat. Data ukazují, že [^99mTc (CO) 3 (DTPA'-Y³-oktreotát) ] je specifický pro receptory.

Tabulka 6: Biologická distribuce ppmTc-2148 (DTPA'-Y3oktreotátu) u Lewisových krys s CA20948 nádory 3,0 hodiny po injekci

	Krysa č. 1	Krysa č. 2	Krysa č. 3
Tkáň	%ID/g	%ID/orgán	%ID/g	%ID/orgán	%ID/g	%ID/orgán
Krev	0,122	1,330	0,107	1,552	0,115	1, 441
Játra	0,268	2,313	0,204	2,389	0,236	2,351
Ledviny	3,324	6,229	2,646	7,414	2,985	6, 822
Sval	0,06	5, 951	0,055	7,252	0,058	6, 604
Slezina	0,081	0, 040	0,062	0,048	0,072	0, 044
Srdce	0, 068	0,046	0,056	0, 051	0,062	0,049
Pankreas	1,216	0,787	0,616	0,736	0,916	0,762
Nadledviny	NA	0, 049	NA	0,035	NA	0, 042
Nádor	1,354	5,343	0,857	5, 022	1,115	5,183

	Krysa č. 4	Krysa č. 5	Průměr
Tkáň	%ID/g	%ID/orgán	%ID/g	%ID/orgán	%ID/g	%ID/orgán
Krev	0,107	1,530	0,131	1,644	0,119	1, 587

Φ «« ··.. ···· ·♦ φ ’· 9 «· Φ

Φ» .

♦ <«'<

• · · Φ · · · · *' · · *' • · · · · ''· Φ φ φφ· ΦΦ ·· Φ ·Φ φφφφ

Játra	0,200	2, 614	0,238	2,600	0,219	2,607
Ledviny	2,454	6,238	2,849	6,239	2, 652	6,239
Sval	0,053	6,897	0,061	6,967	0, 057	6, 932
Slezina	0,065	0,043	0,065	0, 040	0, 065	0,042
Srdce	0,059	0, 056	0,070	0, 058	0,065	0,057
Pankreas	0,047	0,048	0,053	0,056	0,050	0,052
Nadledviny	NA	0, 007	NA	0, 008	NA	0, 008
Nádor	0,109	0,218	0,112	0,768	0,111	0,493

Krysám 1 a 2 se aplikoval salinický roztok

Krysám 3 a 4 se podala blokovací dávka 350 μg neaktivního peptidu

Je třeba si uvědomit, že ačkoliv byl vynález popsán ve svých výhodných provedeních, je tento popis pouze ilustrativní a existují modifikace spadající do rozsahu předkládaného vynálezu, jak je definován v připojených patentových nárocích.

Odkazy:

Alberto R, et al. (1994a). J Nucl. Biol. Med. 38:388-90 ^=Tc-^{Re) and}

Nuclear Medícine. No 4. Cortina IntemaHonfl/Milano. “ ^Wí” O**“? ^md

U.S. Pat. No. 4,232,000, Fawzi, issued Nov. 4,1980.

U.S. Pat. No. 4,233,284, Fawzi, issued Nov. 11,1980.

Claims (28)

1. Patentové nároky

   1. Způsob přípravy sloučeniny vzorce fac-[M (CO) 3 (0H₂) ₃]⁺ (I) kde M je Mn, ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re, vyznačující se tím, že zahrnuje reakci kovu v permetalátové formě s oxidem uhelnatým a redukčním činidlem, kde se směs bazického boritanového pufru a redukčního činidla rozpustného ve vodě, ale ne významně rozkládaného vodou, rozpustí ve vodě obsahující systém rozpouštědel obsahující roztok kovu ve formě permanganistanu, pertechnecistanu nebo perrhenistanu, za přítomnosti oxidu uhelnatého.
2. 2. Způsob podle nároku lvyznačující se tím, že uvedená směs dále obsahuje stabilizační činidlo.
3. 3. Způsob podle nároku lvyznačující se tím, že uvedeným redukčním činidlem je KBH₄.
4. 4. Způsob podle nároku lvyznačující se tím, že uvedená směs dále obsahuje laktosu.
5. 5. Způsob podle nároku lvyznačující se tím, že uvedená směs dále obsahuje kyselinu L-vinnou.
6. 6. Způsob přípravy sloučeniny vzorce fac-[M(CO) ₃L_x]ⁿ (II) kde:

   M je Mn, ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re; L_x je multidentátní ligand; a ·· ··«.· «* • · ’* « · ^rt« ♦ »* · n je náboj ligandů L_x zvýšený o jeden + náboj;

   vyznačující se tím, že zahrnuje reakci sloučeniny vzorce (I) připravené podle nároku 1 s‘ ligandem L_x.
7. 7. Způsob podle nároku 6vyznačujícíse tím, že reakce s ligandem L_x probíhá za přítomnosti halogenidů.
8. 8. Způsob podle nároku 6vyznačující se tím, že L_x obsahuje aminopolykarboxylát.
9. 9. Způsob podle nároku 6vyznačujícíse tím, že L_x obsahuje biologicky aktivní substrát vybraný ze skupiny zahrnující aminokyseliny, peptidy, proteiny, sacharidy, malé molekuly vážící se na receptor a buňky.
10. 10. Způsob podle nároku 6vyznačující se tím, že je proveden při teplotě mezi přibližně 20 °C a 100 °C.
11. 11. Způsob podle nároku 6vyznačující se tím, že je proveden při teplotě přibližně 75 °C.
12. 12. Způsob podle nároku 8vyznačující se tím, že uvedený aminopolykarboxylátový ligand je vybrán ze skupiny zahrnující kyselinu diethylentriamin-pentaoctovou (DTPA), kyselinu ethylendiamintetraoctovou (EDTA), kyselinu 1,4,7,10tetraazacyklododekan-1,4,7,10-tetraoctovou (DOTA), kyselinu iminodioctovou (IDA), kyselinu nitriltrioctovou (NTA) a triazacyklononantriacetát.
13. 13. Způsob podle nároku 8vyznačující se tím, že uvedený ligand není bidentátní.
14. 14. Způsob podle nároku 8vyznačující se tím, že uvedený ligand je tridentátní.

    • toto toto ···· toto ··' • to >· · '· to to » e e to ··· ·· ·· ·· · to to · · · · toto· tototo toto to· * toto ····
15. 15. Sloučenina vzorcef ac-[M (CO) ₃L_x]ⁿ (II) kde:

    M je Mn, ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re;

    L_x je multidentátni aminopolykarboxylátový ligand; a n je součet nábojů ligandů L_x.
16. 16. Sloučenina podle nároku 15, kde L_x neni bidentátni ligand.
17. 17. Kit pro provedení způsobu podle nároku 1 vyznačující se tím, že obsahuje lyofilizovaný prostředek obsahující bazický boritanový pufr a redukční činidlo rozpustné ve vodě, ale ne významně rozkládané vodou, kde uvedená směs je uzavřena v zásobníku obsahujícím prostor obsahující oxid uhelnatý.
18. 18. Kit podle nároku 17 vyznačující se tím, že uvedený prostor obsahuje v podstatě čistý oxid uhelnatý.
19. 19. Kit podle nároku 17 vyznačuj ící se tím, že uvedeným redukčním činidlem je KBH4.
20. 20. Kit podle nároku 17 vyznačující se tím, že uvedený prostředek dále obsahuje laktosu.
21. 21. Kit podle nároku 17 uvedený prostředek dále vyznačující se obsahuje kyselinu L-vinnou tím, že
22. 22. Kit podle nároku 17 vyznačující se tím, dále obsahuje kov M, kterým je Mn, ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re.

    že
23. 23. Kit pro provedení způsobu podle nároku 6 vyznačující se tím, že obsahuje lyofilizovaný

    • *0 0 · · 00 ·' > • ««0 0 0# • 00 0 0 0 ··· · 0 0 0 0 ^:,0 0 0' 0' 0 0 0 0 '0 0 0' 0 0' 0 0 •0 0 9 0 · 000

    prostředek obsahující bazický borit.anový pufr a redukční činidlo rozpustné ve vodě, ale ne významně rozkládané vodou, kov M, kterým je Mn, ^99mTc, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re.
24. 24. Kit podle nároku 23 vyznačující se tím, že uvedeným redukčním činidlem je KBH4.
25. 25. Kit podle nároku 23 uvedený prostředek dále vyznačuj i obsahuje laktosu.

    se t i m, že
26. 26. Kit podle nároku 23 uvedený prostředek dále vyznačující se obsahuje kyselinu L-vinnou t i m, že
27. 27. Kit podle nároku 23 vyznačující se tím, že dále obsahuje ligand L_x, kterým je multidentátní aminopolykarboxylátový ligand.
28. 28. Kit podle nároku 27 vyznačující se tím, že L_x není bidentátní ligand.