CZ2003797A3 - Doplněk zvířecího krmiva obsahující kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli, způsob jeho výroby a jeho použití - Google Patents
Doplněk zvířecího krmiva obsahující kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli, způsob jeho výroby a jeho použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2003797A3 CZ2003797A3 CZ2003797A CZ2003797A CZ2003797A3 CZ 2003797 A3 CZ2003797 A3 CZ 2003797A3 CZ 2003797 A CZ2003797 A CZ 2003797A CZ 2003797 A CZ2003797 A CZ 2003797A CZ 2003797 A3 CZ2003797 A3 CZ 2003797A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- weight
- pantothenic acid
- animal feed
- feed supplement
- fermentation
- Prior art date
Links
- GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 182
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 67
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 51
- 239000006052 feed supplement Substances 0.000 title claims abstract description 42
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 37
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 35
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 107
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 107
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N (D)-(+)-Pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 51
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 41
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 37
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 28
- 235000019161 pantothenic acid Nutrition 0.000 claims description 22
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 claims description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 22
- 229940055726 pantothenic acid Drugs 0.000 claims description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 19
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 16
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 12
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 9
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 9
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 7
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 7
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 6
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 6
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 6
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 4
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108010002447 aspartate-alpha-decarboxylase Proteins 0.000 claims description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 4
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 claims description 4
- 241000186031 Corynebacteriaceae Species 0.000 claims description 3
- 241000235395 Mucor Species 0.000 claims description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 claims description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000002074 deregulated effect Effects 0.000 claims description 3
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 3
- HNZZAEBYPPNVOF-DHYYHALDSA-N (2s)-2-amino-3-methylbutanoic acid;(2s,3s)-2-amino-3-methylpentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O.CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O HNZZAEBYPPNVOF-DHYYHALDSA-N 0.000 claims description 2
- 241001112741 Bacillaceae Species 0.000 claims description 2
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 claims description 2
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 52
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 26
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 24
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 19
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 11
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 10
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 10
- 101150079396 trpC2 gene Proteins 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 7
- GHOKWGTUZJEAQD-SSDOTTSWSA-N 3-[[(2s)-2,4-dihydroxy-3,3-dimethylbutanoyl]amino]propanoic acid Chemical class OCC(C)(C)[C@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 6
- QHKABHOOEWYVLI-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-2-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)C(=O)C(O)=O QHKABHOOEWYVLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 101150076071 panD gene Proteins 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 6
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 5
- 101150051152 coaX gene Proteins 0.000 description 5
- 101150043028 ilvD gene Proteins 0.000 description 5
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 5
- 101150028586 panE gene Proteins 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 5
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 4
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 4
- 101150048956 coaA gene Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 101150081585 panB gene Proteins 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 4
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 4
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 101100242684 Mesorhizobium japonicum (strain LMG 29417 / CECT 9101 / MAFF 303099) panD1 gene Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Inorganic materials [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101150109763 coaW gene Proteins 0.000 description 3
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- 101150105723 ilvD1 gene Proteins 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 3
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 3
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 3
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 3
- SERHXTVXHNVDKA-BYPYZUCNSA-N (R)-pantolactone Chemical compound CC1(C)COC(=O)[C@@H]1O SERHXTVXHNVDKA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000276408 Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168 Species 0.000 description 2
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 101100028493 Haloferax volcanii (strain ATCC 29605 / DSM 3757 / JCM 8879 / NBRC 14742 / NCIMB 2012 / VKM B-1768 / DS2) pan2 gene Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 2
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- VUOLWBPDWWANLX-OGFXRTJISA-M [K+].C(CCNC([C@@H](O)C(C)(C)CO)=O)(=O)[O-] Chemical compound [K+].C(CCNC([C@@H](O)C(C)(C)CO)=O)(=O)[O-] VUOLWBPDWWANLX-OGFXRTJISA-M 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 235000020299 breve Nutrition 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 2
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000010410 dusting Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 2
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- -1 panC Proteins 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 101150061166 tetR gene Proteins 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- OTOIIPJYVQJATP-BYPYZUCNSA-N (R)-pantoic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(O)=O OTOIIPJYVQJATP-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 241000004176 Alphacoronavirus Species 0.000 description 1
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 description 1
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 1
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 1
- 241000193747 Bacillus firmus Species 0.000 description 1
- 241000193422 Bacillus lentus Species 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 description 1
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000149420 Bothrometopus brevis Species 0.000 description 1
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241001310335 Paenibacillus lentimorbus Species 0.000 description 1
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 101100125907 Streptomyces coelicolor (strain ATCC BAA-471 / A3(2) / M145) ilvC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003570 air Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910001854 alkali hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001860 alkaline earth metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 235000019730 animal feed additive Nutrition 0.000 description 1
- 235000019728 animal nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000002551 biofuel Substances 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 238000013452 biotechnological production Methods 0.000 description 1
- 101150031021 birA gene Proteins 0.000 description 1
- OWBTYPJTUOEWEK-UHFFFAOYSA-N butane-2,3-diol Chemical compound CC(O)C(C)O OWBTYPJTUOEWEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 235000005939 calcium D-pantothenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011680 calcium D-pantothenic acid Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L calcium hydrogenphosphate Chemical compound [Ca+2].OP([O-])([O-])=O FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Chemical compound [O-2].[Ca+2] BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRTVQUYKMVAQBJ-UHFFFAOYSA-L calcium;3-aminopropanoate Chemical compound [Ca+2].NCCC([O-])=O.NCCC([O-])=O QRTVQUYKMVAQBJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 239000008199 coating composition Substances 0.000 description 1
- 238000010959 commercial synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011118 depth filtration Methods 0.000 description 1
- 235000019700 dicalcium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000002036 drum drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 1
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 101150033780 ilvB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150090497 ilvC gene Proteins 0.000 description 1
- 101150077793 ilvH gene Proteins 0.000 description 1
- 101150060643 ilvN gene Proteins 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012092 media component Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229940014662 pantothenate Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000019624 protein content Nutrition 0.000 description 1
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 1
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/174—Vitamins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K40/00—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs
- A23K40/10—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs by agglomeration; by granulation, e.g. making powders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S426/00—Food or edible material: processes, compositions, and products
- Y10S426/807—Poultry or ruminant feed
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Předložený vynález se týká doplňku zvířecího krmivá obsahujícího kyselinu D-pantothenovou, zlepšeného způsobu jeho výroby a jeho použití.
Dosavadní stav techniky
Jako výchozí produkt k biosyntéze koenzymu A je D-pantothenát v rostliném a zvířecím světě velmi rozšířen.
Na rozdíl od člověka, který přijímá kyselinu pantothenovou v dostatečném množství prostřednictvím výživy, jsou však v případě rostlin a také zvířat často popisovány stavy nedostatku D-pantothenátu. Dostupnost D-pantothenátu má proto velký hospodářský význam, obzvláště v krmivářském průmyslu.
Obvykle se výroba D-pantothenátu provádí chemickou syntézou z D-pantolaktonu a kalcium-β-alaninátu (Ullmann s Encyclopedia of Industrial Chemistry, 6th edition, 1999, elektronická verze, kapitola Vitamins). K přípravě D-pantolaktonu je nutné nákladné klasické štěpení racemátu přes diastereomerní soli. Výsledný obchodní produkt z chemické syntézy je většinou vápenatá sůl kyseliny D-pantothenové - kalcium D-pantothenát.
Oproti chemické syntéze je výhodou biotechnologického způsobu výroby s pomocí mikroorganismů selektivní příprava (čistý enanciomer) D-formy kyseliny pantothenové využitelné • · · • · ··· · • · « « • · · · • «I · · Λ • · · · · · · ♦ · vyššími organismy. Odpadá tak nákladné štěpení racemátu, které je nutné při chemické syntéze.
Fermentativní způsoby výroby kyseliny D-pantothenové s pomocí mikroorganismů jsou opakovaně popsány, mezi jiným v EP 0 590 857, VO 96/33283, US 6 013 492, VO 97/10340, DV 198 46 499, EP 1 001 027, EP 1 006 189, EP 1 006 192 a EP 1 006 193.
Tak se popisuje v GB 598 177 příprava kyseliny pantothenové v oblasti promile jako vedlejší produkt z výroby 2,3-butylenglykolu s pomocí Aerobacter aerogenes. Koncentrování kyseliny pantothenové je však možné pouze adsorpcí na dřevěném uhlí a následnou elucí.
EP 1 006 189 popisuje způsob výroby pantothenátu, při kterém se ve fermentačním roztoku dosáhne obsah maximálně 1 g/1 kyseliny D-pantothenové. Takový nízký obsah kyseliny pantothenové ve fermentačním roztoku, tedy méně než 1 % hmtnostní vztaženo na obsah pevné látky je však pro ekonomickou výrobu doplňků zvířecích krmiv obsahujících kyselinu pantothenovou nevhodný. Další nevýhodou u dosud popsaných způsobů je to, že izolace produktu z fermentačního media vyžaduje početné nákladné zpracovací kroky. Ekonomický způsob výroby v průmyslovém měřítku není zveřejněn.
Tak US 6 013 492 popisuje izolaci kyseliny D-pantothenové z fermentačního roztoku odfiltrováním nerozpustných součástí, jako je příkladně buněčný materiál z kultivačního media, adsorpcí filtrátu na aktivním uhlí, navazující elucí kyseliny D-pantothenové organickým rozpouštědlem, s výhodou methanolem, neutralizaci hydroxidem vápenatým a závěrečnou krystalizací vápenaté soli kyseliny D-pantothenové. Pods-
tatnou nevýhodou nákladných zpracovacích kroků j sou další ztráty cenného produktu. Navíc by bylo při výrobě v průmyslovém měřítku nutné dodatečné zařízení ke zpětnému získávání použitého rozpouštědla. Další nevýhodou je navíc vznik velkých množství odpadních vod, které vyžadují nákladné zpracování nebo dokonce zneškodnění.
Z DE 100 16 321 Al je známý způsob výroby aditiv pro zvířecí krmivá, která se vyrábějí fermentací mikroorganismů produkujících kyselinu D-pantothenovou. Tento způsob ovšem po fermentací vyžaduje přídavek hydroxidů nebo oxidů alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin.
Úkolem předloženoho vynálezu je tedy dát k dispozici doplněk zvířecího krmivá obsahující volnou kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli a rovněž jeho výrobu zlepšeným způsobem, který j iž nemá výše uvedené nevýhody.
Tento úkol byl výhodným způsobem vyřešen předloženým vynálezem.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je způsob výroby doplňku zvířecího krmivá obsahujícího volnou kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli, kde se
a) organismus produkující kyselinu D-pantothenovou fermentuje v kultivačním mediu obsahujícím nejméně jeden zdroj uhlíku a dusíku bez dodávání dalších výchozích látek a
b) fermentační roztok obsahující kyselinu D-pantothe• ·· » · · · · · · · · ··· · · · 9 9
99999 9 909 9 novou a/nebo její soli se bez provedení dalších zpracovacích kroků podrobí sušení a/nebo formulaci.
Způsob podle vynálezu se dále vyznačuje tím, že se fermentace provádí tak dlouho, dokud se nedosáhne obsahu pevné látky nejméně 6 % hmotnostních, s výhodou 7 až 25 % hmotnostních a/nebo obsahu kyseliny D-pantothenové nejméně 2 až 15 % hmotnostních, s výhodou 4 až 15 % hmotnostních.
Přitom se může fermentace provádět známými způsoby provozem typu batch-, fed-batch- nebo repeated-fed-batch nebo kontinuálním způsobem vedení. Jako obsah pevné láty se ve smyslu předloženého vynálezu rozumí vysušený fermentační roztok obsahující mezi jiným vysušenou biomasu, minerálie, D-pantothenát a/nebo jeho soli. Ke stanovení obsahu pevné látky se sterilně odebere vzorek fermentačního roztoku a vysuší se příkladně ve vakuové sušárně pro dobu 12 hodin při teplotě 120 °C.
Zvláštní výhodou způsobu podle vynálezu oproti stavu techniky přitom je, že se fermentační roztok nemusí podrobovat dalšímu nákladnému zpracování, jako příkladně adsorpčnímu procesu na aktivním uhlí, aby se získal produkt, který splňuje požadavky na doplněk zvířecího krmivá požadovaného druhu. Těmito požadavky jsou příkladně relativně vysoký obsah kyseliny D-pantothenové a její dobrá snášenlivost cílovým organismem a rovněž biologická hodnotnost ve smyslu vitaminového účinku produktu podle vynálezu, která odpovídá hodnotě chemicky syntetizované kyseliny D-pantothenové.
Stupeň čistoty kyseliny D-pantothenové jako takové lze zde nahlížet jako nepodstatný, protože se pro zvířecí výživu v mnoha případech zapracuje do krmivových směsí.
• · * · · · « * ·· * · * « · • * · * · · ··
Daleko výrazněji lze vidět další výhodu produktu podle vynálezu v tom, že na základě výše uvedeného způsobu výroby obsahuje vedle kyseliny D-pantothenové další komponenty fermentačního roztoku přínosné ve prospěch zvířat, jako příkladně relativně vysoký obsah proteinů a dále aminokyseliny, minerály, vitaminy a další komponenty sekretované během fermentace případně do media (případně dokonce esenciální).
Další výhodou způsobu podle vynálezu je úspora nákladných zpracovatelských kroků fermentačního roztoku k výrobě produktu s dobrou biologickou hodnotou. Obzvláště se způsob podle vynálezu vyznačuje tím, že se příprava požadovaných hodnotných látek děje zcela bez použití organických rozpouštědel. Dále se podle vynálezu výrazně redukuje množství odpadních vod. To se pak promítá do dalších úspor na nákladných zpracovatelských a zneškodňovacích zařízeních. Tím se způsob podle vynálezu výhodně vyznačuje tím, že je jednodušší, méně náchylný k poruchám, méně časově náročný, výrazně cenově příznivější a tím hospodárnější, než jsou obvyklé způsoby.
Přitom se pod formulaci vyrábět rozumí podle vynálezu, že organismus může syntetizovat větší množství kyseliny D-pantothenové a//nebo jejich solí, než je nutné pro potřeby jeho vlastní látkové výměny. Při jedné výhodné variantě podle vynálezu nejsou syntetizovaná množství kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí přítomny v buňkách, nýbrž se ideálním způsobem předávají z oranizmu do kultivačního media. Toto vylučování se může provádět aktivně nebo pasivně známými mechanizmy.
Podle vynálezu se jako organismy produkující kyselinu D-pantothenovou použijí mikroorganismy. K nim patří podle • · · · • · · · · · * * · ·' · · ···· ····· ·· ♦ ♦ 99 94 vynálezu houby, kvasinky a/nebo bakterie. Podle vynálezu se s výhodou použijí houby jako příkladně Mucor, nebo kvasinky jako příkladně Saccharomyces nebo Debaromyces a z nich s výhodou Saccharomyces cerevisiae. S výhodou se podle vynálezu použijí koryneformní bakterie nebo Bacillaceae. Podle vynálezu jsou s výhodou zahrnuty příkladně bakterie rodů Corynebacterium, Escheríchia, Bacillus, Arthrobacter, Bevibacterium, Pseudomonas, Salmonella, Klebsiella, Próteus, Acinetobacter nebo Rhizobium. Obzvláště výhodné jsou zde příkladně Corynebacterium glutamicura, Brevibacterium breve nebo Bacillus subtilis, B. licheniformis, B. amyloliquefaciens, B. cedreus, B. lentimorbus, B. lentus, B. firmus,
B. panthothenticus, B. circulans, B. coagulans, B. megaterium, B. pumilus, B. thuringiensis, B. brevis, B. stearothermophilus a další druhy Bacillus skupiny 1, které jsou charakterizovány jejich 16sRNA nebo Actinum mycetalis.
Tento výčet slouží k vysvětlení a není v žádném případě limituj ící pro předložený vynález.
Nadto zahrnuje předložený vynález také použití geneticky změněných organismů k výrobě doplňků zvířecího krmivá obsahujících volnou kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli podle vynálezu. Takové geneticky změněné organismy se mohou izolovat příkladně chemickou mutagenezí a následnou selekcí vhodným způsobem screening. Podle vynálezu jsou zahrnuty také tak zvané produkční kmeny, které jsou vhodné k výrobě produktů ve smyslu předloženého vynálezu a vykazují genetické změny z hlediska toku látkové výměny ve směru kyseliny D-pantothenové, přičemž jsou zahrnuty také změny z hlediska vylučování kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí přes buněčnou membránu.
Možné je také použití transgeních organismů, které • 4 « ·
jsou výsledkem přenosu hmologních a/nebo heterologních sekvencí nukleotidů, které jsou nebo mohou být nutné k syntéze požadovaných produktů. Přitom je možná přeexprese a/nebo deregulace jednoho nebo několika genů jednotlivě nebo v kombinaci, lokalizované v genomu a/nebo na jeden vektor.
Takové transgení organismy mohou výhodným způsobem obsahovat dodatečné kopie a/nebo geneticky změněné geny vybrané ze skupiny panB, panC, panD, panE a/nebo jejich kombinací a nebo dokonce organisační jednotky, jako je panBCD-Operon. Dále mohou být do organismu s výhodou manipulovány další cesty látkové výměny, jako příkladně cesta biosyntézy isoleucin - valin, jak se příkladně popisuje v EP 1 006 189, EP 1 006 192, EP 1 006 193 nebo v EP 1 001 027. Tím se namnoží k dispozici výchozí substance s rozvětveným řetězcem pro biosyntézu kyseliny pantothenové. S výhodou se případně přeexprimují geny pro tuto cestu biosyntézy, to znamená ilvB, ilvN, ilvC a/nebo ilvD.
Navic j sou podle vynálezu zahrnuty genetické změny aspartát-a-dekarboxylázy (panD), příkladně přeexpresí a/nebo deregulací v použitém organismu produkujícím kyselinu D-pantothenovou. S výhodou je tak β-alanin obsažen již v buňkách ve zvýšené koncentraci oproti odpovídajícím geneticky nezměněným organismům a nemusí se tak přidávat jako prekurzor do kultivačního media, jak se příkladně popisuje v EP-A 0 590 857. Výhodné jsou mikroorganismy, jejichž biosyntéza kyseliny pantothenové-(pan)- a/nebo isoleucinvalin-(ilv) a/nebo asparát-a-dekarboxylázy (panD) je deregulována.
Dále je výhodná dodatečná přeexprese ketopanthoátreduktázy (panE) v mikroorganismech.
• · «·«··· ··· · • to to ··· to · to · • · · * « ♦ · ·· toto • « · · · · • « • to • · · « « toto
Dále je výhodné, jestliže se případně coaA-gen, který je nutný k syntéze koenzymu A sníží ve své aktivitě nebo se zcela vyřadí (příkladně v druzích Bacillus). Bacillus totiž obsahuje vedle coaA další gen pro tuto enzymatickou funkci (= coaX). Také aktivita tohoto genu coaX nebo korespondujícího enzymu se může změnit, s výhodou snížit, nebo dokonce deletovat, pokud coaA sám vykazuje ještě dostatečnou, i když také sníženou enzymatickou aktivitu, to znamená že enzymatická aktivita coaA není zcela ztracena. Vedle přeexprese různých genů je výhodná také genetická manipulace promotorových regionů těchto genů takovým způsobem, že tato manipulace vede k přeexpresi genových produktů.
V jedné variantě provedení předloženého vynálezu se použijí kmeny popsané v příloze (PCT/US-přihláška 0025993), jako je příkladně PA 668 a/nebo jeho deriávty. Při jedné výhodné variantě provedení podle vynálezu se použije mikroorganismus Bacillus subtilis PA 377, jaký se popisuje v příloze (PCT/US-přihláška 0025993). Tento kmen Bacillus subtilis PA 377 se vyrobí následujícím způsobem :
Vychází se z kmenu Bacillus subtilis 168 (kmen Marburg ATCC 6051), který vykazuje genotyp trpC2 (Trp+) se vyrobí transdukci markéru Trp+ (z divokého typu Bacillus subtilis V23) kmen PY 79. Do kmenu PY 79 se klasickými metodami genových technik (jak se popisují příkladně v Harwood, C.R. a Cutting, S.M. (editoři), Molecular Biological Methods for Bacillus (1990), John Villey & Sons, Ltd., Chichester, Velká Británie) zavedou mutace delta panB a delta panEl.
Výsledný kmen se transformuje genomickou DNA kmenu Bacillus subtilis PA221 (genotyp P2gpanBCD, trpC2 (Trp+)) • · · · a genomickou DNA kmenu Bacillus subtilis PA303 (genotyp P2gpanEl)· Výsledný kmen PA327 má genotyp P2gpanBCD, P2gpanEl a je auxotrofní tryptofan (Trp+).
Se kmenem Bacillus subtilis PA 327 se kultivuje v 10 ml kultury s mediem SVY (25 g/1 Difco Veal Infusion Broth, 5 g/1 Difco Yeast Extract, 5 g/1 glutamátu sodného, 2,7 g/1 síranu amonného doplněno na 740 ml vodou, autoklávováno, následně se přidá 200 ml 1 M fosforečnanu draselného, pH 7,0 a 60 ml 50 % roztoku glukózy), které bylo suplementováno s 5 g/1 β-alaninu a 5 g/1 α-ketoisovalerátu, dokud se nedosáhne titru kyseliny pantothenové až 3,0 g/1 (24 hodin).
Výroba kmenu PA221 Bacillus subtilis (genotyp P2gpanBCD, trpC2 (Trp+)) je popsána v následujícím odstavci :
Klasickými metodami genových technologií se s pomocí sekvenční informace operonu panBCD E.coli (viz Merkel a spol., FEMS Microbiol.Lett., 143, 1996 : 247-252) vycházejíce z Bacillus subtilis GP 275 plasmidové knihovny klonuje operon panBCD Bacillus. Ke klonování se použije kmen BM4062 E. coli (birts) a informace, že operon Bacillus leží v blízkosti genu birA. Operon panBCD se vnese do plasmidu replikovatelného v E.coli. Ke zlepšení exprese operonu panBCD se použijí silné, konstitutivní promotory fágů SP01 (P2g) Bacillus subtillis a místo vazby ribosomů (= RBS) se před genem panB nahradí artificiální RBS. Před kazetu P2gpanBCD se na plasmid liguje DNA fragment, který leží bezprostředně naproti přírodnímu genu panB v Bacillus. Tento plasmid se transformuje do kmenu RL-1 Bacillus subtilis (derivát získaný klasickou mutagenezí Bacillus subtilis 168 (kmen Marburg ATCC 6051), genotyp trpC2 (Trp+)) a homologickou rekombinací se nahradí přírodní operon panBCD operonem toto · · « · ·« ··· ·
P2gpanBCD. Výsledný kmen se jmenuje PA221 a má genotyp PzgpanBCD, trpC2 (Trp+).
Se kmenem PA221 Bacillus subtilis se v 10 ml kultury s mediem SVY, které je suplementováno 5 g/1 β-alaninu a 5 g/1 α-ketoisovalerátu dosáhne titru kyseliny pantothenové až 0,92 g/1 (24 hodin).
Výroba kmenu PA303 Bacillus subtilis (genotyp P2gpan El) je popsána v následujcím odstavci :
S pomocí genové sekvence panE E.coli se analogicky klonuje sekvence panE Bacillus. Ukázalo se, že v B.subtilis existují dva homology genu panE od E.coli, které byly označeny j ako panEl a panE2. Deleční analýzou se ukázalo, že gen panEl odpovídá za 90 % produkce kyseliny pantothenové, zatímco delece genu panE2 neměla žádný významný vliv na produkci kyseliny pantothenové. Také zde byl analogicky ke klonování operonu panBCD promotor nahražen silným konstitutivním promotorem ?2g a misto vazby ribosomu před genem panEl nahraženo artificiálním místem vazby. Fragment P2gpanEl se klonuje ve vektoru, který je vytvořen tak, že fragment P2^panEl se může integrovat do originálního lokusu panEl v genomu Bacillus subtilis. Kmen rezultující po transformaci a homologické rekombinací se jmenuje PA303 a má genotyp P2gpanEl.
Se kmenem PA303 Bacillus subtilis se v 10 ml kultury s mediem SVY, které je suplementováno 5 g/1 β-alaninu a 5 g/1 α-ketoisovalerátu dosáhne titru kyseliny pantothenové až 1,66 g/1 (24 hodin).
Další konstrukce kmene se provádí transformací PA327 plasmidem, který obsahuje operon P2gilvBNC a markerový gen • · · ·
*· · · ···· • · · · « pro spektinomycin. Operon P2gilvBNC integruje do amyE-lokusu, což bylo prokázáno pomocí PCR. Transformant byl označen jako PA340 (genotyp P2gpanBCD, P2gpanEl, P2gilvBNC, specR, trpC2 (Trp+)).
Se kmenem PA340 Bacillus subtilis se v 10 ml kultury s mediem SVY, které je suplementováno pouze 5 g/1 β-alaninu dosáhne titru kyseliny pantothenové až 3,6 g/1 (24 hodin), v 10 ml kultivačy s mediem SVY,· které je suplementováno 5 g/1 β-alaninu a 5 g/1 α-ketoisovalerátu se dosáhne titru kyseliny pantothenové až 4,1 g/1 (24 hodin).
Proto byla do kmenu PA340 vnesena deregulovaná kaseta ilvD. K tomu se transformuje plasmid, který obsahuje gen ilvD pod kontrolou promotoru P2g s artificiální RBS2 na PA340. Přitom se gen P^ilvD integruje homologickou rekombinací do originálního lokusu ilvD. Výsledný kmen PA374 má genotyp P2gpanBCD, P^panEl, P2gilvBNC, P2gilvD, specR a trpC2 (Trp+).
Se kmenem PA374 Bacillus subtilis se v 10 ml kultury s mediem SVY, které je suplementováno pouze 5 g/1 β-alaninu dosáhne titru kyseliny pantothenové až 2,99 g/1 (24 hodin).
Aby se s kmenem PA374 β-alanin produkovala bez výživo vání kyselina pantothenová, byly do kmene PA374 zavedeny do datečné kopie genu panD kódujícího pro aspartát-a-dekarboxylázu. K tomu se chromosomální DNA kmene PA401, který bu de dále popsán, transformuje na PA374. Selekcí na tetracyk lin se získá kmen PA377.
Výsledný kmen PA377 má genotyp P2gpanBCD, P2gpanEl, P2gilvBNC, P2gilvD, specR, tetR a trpC2 (Trp+).
• ·Φ • · · · • φ φ φ φφφ φ φ φ φφφ φφ φφφφ
Se kmenem ΡΑ377 Bacillus subtilis se v 10 ml kultury s mediem SVY bez přikrmování výchozími látkami dosáhne titru kyseliny pantothenové až 1,31 g/1 (24 hodin).
Výroba kmenu PA401 Bacillus subtilis (genotyp p2gpanD) Je popsána v následujcím odstavci :
Gen panD Bacillus subtilis se klonuje z operonu panBCD do vektoru, který nese markerový gen tetracyklinu. Před genem panD se klonuje promotor P2g a výše popsaná artificiální RBS. Restrikčním trávením se vyrobí fragment, který obsahuje genový markér tetracyklinu a gen P26panD. Tento fragment se religuje a transformuje na výše popsaný kmen PA221. Přitom fragment integruje do genomu kmene PA211. Výsledný kmen PA401 má genotyp P2gpanBCD, P2gpanD, tetR a trpC2 (Trp+).
Se kmenem PA401 Bacillus subtilis se v 10 ml kultury s mediem SVY, které je suplementováno 5 g/1 a-ketoisovalerátu dosáhne titru kyseliny pantothenové až 0,3 g/1 (24 hodin). V 10 ml kultury s mediem SVY, které je suplementováno 5 g/1 kyseliny D-pantoinové a 10 g/1 L-aspartátu se dosáhne titru kyseliny pantothenové až 2,2 g/1 (24 hodin).
Přesnou konstrukci kmenu je možné zjistit podle přílohy přihlášky PCT/US 0025993.
S výše popsaným kmenem PA377 se při fermentaci s limitovanou glukózou v mediu SVY (25 g/1 Difco Veal Infusion Broth, 5 g/1 Difco Yeast Extract, 5 g/1 tryptofanu, 5 g/1 glutamátu sodného, 2 g/1 síranu amonného, 10 g/1 KH2PO4, 20 g/1 K^HPO^, 0,1 g/1 chloridu vápenatého, 0,1 g/1 síranu hořečnatého, 1 g/1 citrátu sodného, 0,01 g/1 FeS04 x 7 H20 a 1 ml/1 roztoku stopových solí následujícího složení :
0,15 g Na2Mo04 x 2 H20, 2,5 g H3BO3, 0,7 g CoCl2 x 6 H20, • φφ ······ φ
9 9 9 9 9
999999 9 * 9 9 9 9 9
9 99 99 99 • 9 9999
0,25 g CuSO4 x 5 H2O, 1,6 g MnCl2 x 4 H2O, 0,3 g ZnS04 x 7 H2O, doplněno vodou na 1 1) v 10 1 měřítku při kontinuálním přikrmování roztokem glukózy dosáhne za 36 hodin (48 hodin) koncentrace kyseliny pantothenové ve fermentačním mediu 18 - 19 g/1 (22 - 25 g/1).
Vývojem fermentačního procesu, media a kmene bylo možné zvýšit titr kyseliny pantothenové ve fermentačním mediu až na 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, a > 90 g/1.
Podstatnou výhodou způsobu podle vynálezu je, že se fermentace provádí v kultivačním mediu, které kromě nejméně jednoho zdroje uhlíku a dusíku neobsahuje jako výchozí sloučeniny žádné další předstupně (prekurzory). To znamená že biosyntéza kyseliny D-pantothenové je nezávislá na přikrmování dalšími předstupni. Jako takové předstupně se podle vynálezu rozumí substance jako je β-alanin, a/nebo
L-aspartát a/nebo L-valin a/nebo α-ketoisovalerát a/nebo jej ich kombinace.
Při jedné výhodné variantě způsobu podle vynálezu se fermentace organismu produkujícího kyselinu D-pantothenovou provádí v kultivačním mediu, které jako předstupeň obsahuje nejméně jeden zdroj uhlíku a dusíku, ale žádný β-alanin přidaný k mediu. Nezávislost na přikrmování předstupni představuje obzvláště podstatnou ekonomickou výhodu způsobu podle vynálezu oproti známým způsobům, protože řada předstupňů je velmi drahá.
Příklady zdrojů dusíku vhodných podle vynálezu k použití v kultivačním mediu k fermentaci výše uvedených organizmů jsou cukry, jako hydrolyzáty škrobu (mono-, di-, oli14 • 4 44
4 4 4 •444 ••4 44 4
4 4 •4 4444
4 4 • 4 4 • 4 4 4 • 4 4 4 • 4 44 gosacharidy), s výhodou glukóza nebo sacharoza a rovněž řepná melasa nebo melasa ze surového cukru, proteiny, hydrolyzáty proteinů, sojová moučka, voda z botnání kukuřice, tuky, volné mastné kyseliny, zpět uvedené buňky z již provedených fermentací nebo jejich hydrolyzáty a rovněž kvasnicový extrakt. Ani tento výčet není limitující pro předložený vynález, stejně jako dále uvedené příklady vhodných zdrojů dusíku, jako je amoniak, síran amonný, močovina, proteiny, hydrolyzáty proteinů nebo kvasnicový extrakt. Dále obsahuje fermentační medium minerální soli a/nebo stopové prvky jako aminokyseliny a vitaminy. Přesné složení vhodných fermentační ch medií je dostatečně známo a odborníkům je přístupné.
Po inokulaci fermentačního media vhodným organismem produkujícím kyselinu D-pantothenovou s hustotou buněk známou odborníkům se provádí případně za přídavku protipěnového přípravku kultivace organismu. Fermentace se podle vynálezu vede tak, že při ukončení vykazuje obsah pevné látky ve vysušeném fermentačním roztoku nejméně 6 % hmotnostních a obsah volné kyseliny D-pantothenové nejméně 2 % hmotnostní, s výhodou nejméně 4 % hmotnostní. Dále se fermentace může provádět šaržovým způsobem, způsobem šaržovým s doplňováním a opakovaným šaržovým způsobem s doplňováním. Teplota fermentace činí 10 až 70 °C, s výhodou 20 až 50 °C. Zásobování plynem při fermentací se provádí kyslíkem, vzduchem nebo směsemi s dusíkem nebo jinými inertními plyny. Hodnota pH se upraví na hodnotu v rozmezí 4 až 8, s výhodou 5 až 7,5 a případně se upravuje dávkováním vhodných bází nebo a/nebo kyselin.
Dále je předložený způsob výhodný v tom, že se celkový obsah cukru ke konci fermentace redukuje na minimum, protože jinak ztěžuje pozdější sušení a/nebo formulaci fermentačního ··· · • · ·
• ·«
99
9 9
9 9
9 9 ·9 9
9 9 9
9 9
9 9
9 9 9
99 roztoku slepováním. Toho se může podle vynálezu dosáhnout tak, že se fermentace vede ještě nějakou dobu poté, co je spotřebován zdroj uhlíku (při kultivaci šaržovým způsobem) nebo po ukončení přívodu uhlíku (při způsobu šaržovém s doplňováním a opakovaném šaržovém způsobu s doplňováním) a/nebo se reguluje tak, aby koncentrace zdroje uhlíku byla téměř nulová (při způsobu šaržovém s doplňováním a opakovaném šaržovém způsobu s doplňováním nebo při kontinuálním způsobu vedení procesu).
To se podle vynálezu provádí tak, že se po přerušní dávkování zdroje uhlíku (příkladě roztoku cukru) pokračuje ve fermentaci až k dosažení koncentrace rozpuštěného kyslíku (PO2) nejméně 80 %, s výhodou 90 % a obzvláště výhodně 95 % hodnoty nasyceného fermentačního roztoku.
Podle vynálezu je dále pro způsob podle vynálezu podstatné, aby se fertmentační roztok mohl bez dalších zpracovatelských kroků podrobit sušení a/nebo formulaci. To znamená, že nejsou potřebné nákladné zpracovatelské kroky k izolaci požadovaného cenného produktu obsahujícího kyselinu D-pantothenovou z fermentačního roztoku, jako je příkladně adsorptivní čištění přes aktivní uhlí. Oddělení biohmoty z fermentačního roztoku rovněž není bezpodmínečně nutné, takže obsah proteinu v produktu podle vynálezu, to znamená doplňku zvířecího krmivá obsahujícího kyselinu D-pantothenovou může být až 50 % hmotnostních.
Sušení a/nebo formulace fermentačního roztoku se provádí známými způsoby jako je příkladně rozstřikovací sušení, rozstřikovací granulace, sušení ve fluidní vrstvě, sušení v bubnu nebo nebo sušení způsobem spin-flash (Ullmann s Encyclopedia of Industrial Chemistry, 6 th editi*♦·· • · · · on, 1999, elektronické vydání, kapitola Drying of Solid Materials). Teplota vstupu plynu při konvekčním sušení leží v rozmezí 100 až 280 °C, s výhodou 120 až 210 °C. Teplota vstupu plynu leží v rozmezí 50 až 180 °C, s výhodou 60 až 150 °C. K nastavení požadovaného rozděleni velikosti částic a tím spojenými vlastnostmi produktu se mohou jemné částice oddělit a uvést zpět. Produkt podle vynálezu vykazuje příkladně béžové až hnědé zabarvení. Dále obsahuje zbytkový obsah vody méně než 5 % hmotnostních, s výhodou 1 až 3 % hmotnostní a obzvláště výhodně 0,5 až 2 % hmotnostní. Aby se zabránilo spékání produktu, neměl by obsah vody překročit hodnotu 5 % hmotnostních. Schematický blokový diagram výše uvvedeného způsobu je shrnutý na obrázku 1.
Při jedné variantě výše uvedeného způsobu podle vynálezu se před sušením a/nebo formulací fermentačního roztoku provádí případně oddělení biohmoty z fermentačního roztoku. Toto oddělení se může provádět téměř úplně nebo pouze částečně. S výhodou se provádí částečné oddělení biohmoty, čímž se sníží obsah proteinu na méně než 10 % hmotnostních.
K dosažení téměř úplného oddělení biohmoty se mohou podíly pevné látky z vodné kapaliny oddělit příkladně centrifugací. Vztaženo na vysušený konečný produkt se může v další variantě vynálezu upravit obsah proteinů na dokonce méně než 5 % hmotnostních. Oddělená biohmota se může využít výhodným způsobem k vyrovnání přirozeného a v určitých tolerančních hranicích kolísajícího obsahu kyseliny D-pantothenové ve fermentačním roztoku rozdílných výrobních šarží. Příkladně se může po oddělení biohmoty z několika rozdílných šarží novým přídavkem předtím oddělené biohmoty dodávat produkt s rovnoměrným konstantním obsahem D-pantothenátu a/nebo jeho solí. To zaručuje produkt s reprodukovatelnou konstantní kvalitou.
·« ···· • · · φ ··· t
φ φ
Při jedné další formě provedení způsobu podle vynálezu se může před sušením a/nebo formulací fermentačního roztoku a případně po oddělení biohmoty provést koncentrace fermentačního roztoku ke zvýšení obsahu pevné látky obsahuj ící kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli. Toho se dosáhne příkladně odtažením vody pomocí odpaření, které se z ekonomických důvodů může provádět případně vícestupňové a k ochraně produktu kromě normálního tlaku také za sníženého tlaku. Další možností je využití membránových procesů. Zde se mohou příkladně použít způsoby jako je nanofiltrace a/nebo reverzní osmoza. Koncentrace se může provádět až do obsahu kyseliny D-pantothenové 20 až 50 % hmotnostních. Případně se může zároveň provádět zpětné uvádění vody do fermentačního procesu. Tím se výhodným způsobem snižuje množství vznikajících odpadních vod, čímž se podstatně sníží náklady na zpracování odpadních vod. To je schematicky znázorněno na obrázku 2.
Při jedné další výhodné formě provedení předloženého vynálezu dochází ke kombinaci oddělení biomasy a koncentrování zbývajícího fermentačního roztoku, případně za současného zpětného uvádění vody. Znázornění blokovým diagramem ukazuj e obrázek 3.
K tomu se může k nastavení konstantního obsahu účinné látky v produktu při způsobu podle vynálezu po ukončení fermentace oddělit biohmota nebo její část příkladně pomocí separace, centrifugace, ultrafiltrace, mikrofiltrace, hloubkové filtrace nebo jejich kombinací. Takto získaná biohmota se může opět dále zbavit vlhkostí pomocí dekanteru. Čirý výtok z dekanteru se potom může uvádět na přítok separátoru. Oddělením buněk se může zvýšit obsah kyseliny D-pantothe·· ··*· ···· nové v produktu případně se může její obsah udržovat na konstantní hodnotě, kdy se spolu smíchají různé frakce, takže se bez problémů může zpracovat i kolísající obsahy z fermentace. Obsah vztažený na volnou kyselinu D-pantothenovou a/nebo její sole činí 20 až 95 % hmotnostních, s výhodou 30 až 90 % hmotnostních. Obzvláště výhodně má výsledný produkt vysoký obsah volné kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí, který činí 60 až 80 % hmotnostních a obzvláště více jak 80 % hmotnostních.
V dalších variantách způsobu podle vynálezu se může před sušením a/nebo formulací fermentačního roztoku provést nejméně jeden z následujících kroků, zahrnujících
1) lyže a/nebo usmrcení biohmoty a/nebo
2) oddělení biohmoty z fermentačního roztoku a/nebo
3) přidáni dalších přísad a/nebo
4) koncentrace fermentačního roztoku, s výhodou odtažením vody a případně současným uváděním vody do fermentačního procesu a/nebo
5) kombinaci kroků 1 až 4.
Předmětem předloženého vynálezu j e tak také způsob, při kterém se ještě ve fermentačním roztoku nebo teprve po oddělení biohmoty od fermentačního roztoku provede lyže a/nebo usmrcení biohmoty. To se může provést příkladně tepelným zpracováním, s výhodou při teplotě 80 až 200 °C a/nebo zpracováním s kyselinami, s výhodou s kyselinou sírovou nebo kyselinou chlorovodíkovou a/nebo enzymaticky, s výhodou pomoci lysozymu. Ke znázornění ukazuje obrázek 4 blokové schéma.
Další forma provedení způsobu podle vynálezu popisuje postup, při kterém se k fermentačnímu roztoku před koncent•w 4444
444 • 4 ·· 4 • •4 • · 4
4 4 4
4 4 4 raci a/nebo před sušením a/nebo před formulací přidají další přísady a/nebo jejich směsi k dosažení jednotného obsahu kyseliny D-pantothenové a/nebo ke zlepšení vlastností produktu, jako je prášení, tekutost, schopnost přijímání vody a stabilita při skladování. Příklady takových přísad a/nebo jejich směsí mohou být založeny na bázi cukrů, jako je příkladně laktoza nebo maltodextrin, na bázi obilných nebo luštěninových produktů jako je příkladně moučka z kukuřičných vřeten, pšeničné otruby a sojový šrot, na bázi minerálních solí mezi jiným vápenatých, hořečnatých, sodných a draselných solí, a rovněž také samotné kyseliny D-pantothenové nebo jejích solí (chemicky nebo fermentativně vyrobené soli kyseliny D-pantothenové). Přídavek se může provést před sušením a/nebo během samotného procesu granulace a/nebo formulace. To je souhrnně znázorněno na obrázku 5.
Při jedné dalši variantě předloženého vynálezu se vyrobí kalcium-D-pantothenát, při kterém se pokud možno při pozdějším kroku způsobu podle vynálezu, tedy s výhodou před a/nebo během koncentrace a/nebo sušení a/nebo formulace fermentačního roztoku (viz obrázek 5) provede přidání vápenaté soli. Přitom se obsah vápenatých iontů upraví přídavkem vápenatých soli tak, aby ve formulovaném konečném produktu byl obsažen asi 1 mol vápenatých solí na 2 moly kyseliny D-pantothenové. Přitom se může s výhodou zohlednit obsah vápenatých iontů, které jsou již obsaženy ve fermentačním roztoku. Jako vápenaté soli se mohou použít příkladně oxid vápenatý, hydroxid vápenatý, hydrofosforečnan vápenatý, uhličitan vápenatý, síran vápenatý, chlorid vápenatý a/nebo jiná vápenatá sůl.
Předložený vynález se tedy také týká způsobu, při kte»· ··»·
2·· «»» · ··· ··· · « a a , · · ·· · · · a « • ·· ·· ·· ·· ·· rém se vztaženo na obsah kyseliny váném produktu před a/nebo během koncentrace, sušení a/nebo formulace přidá 1 mol vápenatých iontů na 2 moly kyseliny D-pantothenové ve formě přísady vápenaté soli.
Navíc se může v jiné variantě podle vynálezu složením fermentačního media a zde obzvláště volbou minerálních solí se specielním kationem vyrobit produkt, který obsahuje ve vyšší míře vybranou sůl kyseliny D-pantothenové. Příkladně se může použitím di-kaliumhydrogenfosfát/-kaliumdihydrogenfosfátového pufru již v průběhu fermentace vyrobit produkt, který obsahuje značné množství draselné soli kyseliny D-pantothenové. Možnými solemi jsou příkladně vápenaté, draselné, hořečnaté, sodné nebo amonné soli kyseliny D-pantothenové nebo jejich libovolné směsi. Blokové schéma j e znázorněno na obrázku 6.
Podle vynálezu jsou všechny výše uvedené varianty a rovněž způsob postupu zobrazený na obrázcích 1 až 6 volně kombinovatelné.
D-pantothenové ve formuloPředmětem předloženého vynálezu je dále doplněk zvířecího krmivá vyrobený některým z výše popsaných způsobů na bázi fermentačního roztoku získaného fermentací nejméně jednoho organismu produkujícího kyselinu D-pantothenovou, který obsahuje nejméně volnou kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli o koncentraci nejméně 30 až 95 % hmotnostních, celkový podíl cukru 0,1 až 15 % hmotnostních a obsah proteinu nižší než 5 až 50 % hmotnostních vztaženo na sušinu.
Doplněk zvířecího krmivá podle vynálezu se vyznačuje tím, že obsahuje 50 až 95 % hmotnostních, s výhodou 70 až 95 % hmotnostních, obzvláště výhodně 60 až 80 % hmotnostních »· • · • Β ·»· *· ····
B B • · · • · ·
Β · • *
B · • · · • ·
BB ** et·· • B • B
Β B • · ·
B BC a obzvláště více jak 80 % hmotnostních volné kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí.
Podle vynálezu obsahuje nezpracovaný fermentační roztok jako základ pro doplněk zvířecího krmivá podle vynálezu nejméně 10 g/1, s výhodou nejméně 20 g/1 a obzvláště výhodně nejméně 40 g/1 D-pantothenátu a/nebo jeho solí.
Dále může doplněk zvířecího krmivá podle předloženého vynálezu obsahovat vápenaté, draselné, hořečnaté, sodné a/nebo amonné soli kyseliny D-pantothenové a/nebo jejich směsi.
Zvláštní varianta doplňku zvířecího krmivá podle předloženého vynálezu se vyznačuje složením sušiny s nejméně následuj icími komponentami :
a) volná kyselina D-pantothenová
| a/nebo její soli | nej méně | 30 | i až 95 % hmotnostních | ||
| b) | proteiny | max. | 50 | % | hmotnostních |
| c) | celkový cukr | max. | 15 | % | hmotnostních |
| d) | minerální látky | max. | 20 | % | hmotnostních. |
Podle vynálezu může mít doplněk zvířecího krmivá obsah proteinů maximálně 50 % hmotnostních jako horní hranici a jako spodní hranici méně než 10 % hmotnostních, s výhodou méně než 7 % hmotnostních a obzvláště výhodně méně než 5 % hmotnostních. Celkový podíl cukru v doplňku zvířecího krmivá činí maximálně asi 15 % hmotnostních a může jej jako spodní hranici obsahovat méně jak 0,1 % hmotnostních, přičemž jsou možné všechny mezihodnoty. Z hlediska obsahu vody se vyznačuje produkt podle vynálezu obsahující kyselinu D-pantothenovou zbytkovým obsahem vody méně než 5 % hmotnostních, s výhodou 1 až 3 % hmotnostní a obzvláště výhodně 0,5 až 2 % hmotnostní.
Předmětem předloženého vynálezu je dále doplněk zvířecího krmivá obsahující neživé, živé a/nebo rozmnožování schopné podíly organismů produkujících kyselinu D-pantothenovou. S výhodou se přitom jedná o mikroorganismy, s výhodou houby, kvasinky a/nebo bakterie. Obzvláště výhodně obsahuje doplněk zvířecího krmivá podle vynálezu neživé, živé a/nebo rozmnožování schopné podíly hub rodu Mucor, kvasinky rodu Saccharomyces a/nebo bakterie Enterobakteriaceae jako je Escherichia coli, salmonely jako je Salmonella typhimurium, Próteus vulgaris, pseudomonády jako je Pseudomonas matophila, Bacillaceae jako je Bacillus subtilis nebo Bacillus cereus, koryneformní bakterie jako Corynebacterium glutamicum nebo Brevibacterium breve a/nebo Actinum mycetalis a/nebo jejich směsi. Zcela obzvláště výhodné jsou bakterie rodu Bacillus a z něj typ Bacillus subtilis. Rovněž jsou podle vynálezu zahrnuty geneticky změněné a/nebo transgení organismy a/nebo produkční kmeny vhodné k výrobě doplňků zvířecího krmivá. Výše uvedený výčet přitom není pro předložený vynález limitující.
Dále je podle vynálezu zahrnut doplněk zvířecího krmivá, který obsahuje další přísady, s výhodou na bázi cukrů, a/nebo na bázi obilných nebo luštěninových produktů, a/nebo na bázi minerálních solí a/nebo kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí a/nebo jejich směsí (odděleně vyrobené chemicky a/nebo fermentativně).
Doplněk zvířecího krmivá podle vynálezu je dále charakterizován formulací se sypnou hustotou 0,35 až 0,7 kg/1, s výhodou 0,4 až 0,6 kg/1. Přitom vykazuje podle vynálezu • · ··· · · ·· · ·
střední průměr zrna v rozmezí 10 až 2000 pm, s výhodou 20 až 1500 pm, obzvláště výhodně 25 až 1000 pm a nejvýhodněji 30 až 800 pm. Doplněk má béžovou až hnědou barvu. Doplněk zvířecího krmivá podle vynálezu může být ve formě prášku, granulátu, pelety, opatřený povlakem (coated) a/nebo jako j ej ich kombinace. Formulace doplňku zvířecího krmivá podle vynálezu, příkladně sloučeninami vytvářejícími povlak slouží příkladně ke zlepšení vlastností produktu, jako je prášení, tekutost, schopnost přijímání vody a stabilita při, skladování .
Předmětem předloženého vynálezu je dále použití doplňku zvířecího krmivá s výše uvedenými vlastnostmi jako přídavku ke zvířecímu krmivu a/nebo k doplňkovým prostředkům pro zvířecí krmivá.
Vysvětlení obrázků na výkresech
Na přiložených obrázcích je znázorněno následující :
Obrázek 1 Blokové schéma způsobu výroby soli kyseliny D-pantothenové sušením a/nebo formulací fermentačního roztoku
Obrázek 2
Obrázek 3
Blokové schéma způsobu výroby soli kyseliny D-pantothenové sušením a/nebo formulací fermentačního roztoku s dodatečným procesem koncentrace a a zpětným uváděním oddělené vody do fermentace
Blokové schéma způsobu výroby soli kyseliny D-pantothenové sušením a/nebo formulací
fermentačního roztoku s oddělením buněk
Obrázek 4
Obrázek 5
Obrázek 6
Blokové schéma způsobu výroby soli kyseliny D-pantothenové, při kterém se provádí lyže buněk a/nebo usmrcení organismů po fermentací (A) a/nebo po oddělení buněk (B)
Blokové schéma způsobu výroby solí kyseliny D-pantothenové, při ktermém se k sušení přidávají přísady
Blokové schéma způsobu výroby soli kyseliny D-pantothenové, při kterém se požadovaného kationu dosáhne volbou soli použité ve fermentačním mediu
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady provedení slouží k vysvětlení předloženého vynálezu, nepůsobí však jako limitující.
Příklad 1
Výroba fermentačního roztoku s B. subtilis, obsahujícího kyselinu D-pantothenovou
Do laboratorního fermentoru s míchadlem a plynovacím zařízením o obsahu 14 1 se předloží fermentační medium o následujícím složení :
Kvasnicový extrakt g/1 • · · • ·· ·
Tryptofan 5 g/1 Síran amonný 2 g/1 Glutamát sodný 5 g/1
Po sterilizaci se dále přidají následující složky media :
| kh2po4 | 10 | g/1 |
| K2HPO4 X 3 H20 | 20 | g/1 |
| Glukóza | 10 | g/1 |
| MgCl2 x 6 H20 | 1 | g/1 |
| CaCl2 x 2 H20 | 0,1 | g/1 |
| Citrát sodný | 1 | g/1 |
| FeSO4 x 7 H20 | 0,01 | g/1 |
| Roztok stopových solí | 6 | ml/1 |
Roztok stopových solí má následující složení :
0,15 g Na2Mo04 x 2 H20, 2,5 g H3BO3, 0,7 g CoCl2 x 6 H20, 0,25 g CuS04 x 5 H20, 1,6 g MnCl2 x 4 H20, 0,3 g ZnS04 x 7 H20, doplněno vodou na 11.
Přidání roztoku stopových solí se provádí přes filtrační sterilizaci. Počáteční objem kapaliny činí 6 1. Výše uvedené obsahy j sou vztaženy k této hodnotě.
K tomuto roztoku se přidá 60 ml očkovací kultury (ODgQQ = 9,5) Bacillus subtilis PA377 a fermentuje se při teplotě 37 °C při 200 otáčkách/minuta s uváděním plynu 12 1/minutu. Tento kmen je popsán podle přílohy v PCT/US přihlášce 0025993.
V průběhu 72 hodin se nadávkuje 4,5 1 sterilního vodného roztoku. Jeho složeni je :
| 26 | .· ·· ® • « · ; • · · · * · • · · ·♦· ♦· · | |
| Glukóza | 400 g/1 | |
| CaCl2 x 2 H20 | 0,4 g/1 | |
| Kvasnicový extrakt | 25 g/1 | |
| Během fermentace se | udržuj e pH hodnota na 7,2 |
dávkováním amoniaku do fermentačního plynování případně kyselinou fosforečnou. Amoniak zároveň slouží jako zdroj dusíku pro fermentaci. Otáčky míchacího orgánu se řídí tak, aby se obsah rozpuštěného kyslíku udržoval na 30 % hodnoty plného nasycení. Po přerušení dávkování zdroje uhlíku se fermentace vede dále tak dlouho, dokud obsah rozpuštěného kyslíku (PO2) nedosáhne hodnoty 95 % plného nasycení. Potom se fermentace ukončí a organismy se tepelně usmrtí. Nato se fermentační roztok udržuje 1 hodinu při teplotě 100 °C. Usmrcení se prokazuje na desce. Koncentrace kyseliny D-pantothenové při přerušení po 72 hodinách činí 28 g/1.
Analogicky je možné také vyrábět fermentační břečky, které vykazují titr kyseliny D-pantothenové bez dokrmování β-alaninem o hodnotách 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, a > 90 g/1.
Při této fermentaci se kation ke kyselině D-pantothenové získá použitím di-kaliumhydrogenfosfát/-kaliumdihydrogenfosfátového pufru v průběhu fermentace, takže se získá prakticky výhradně draselná sůl kyseliny D-pantothenové, tedy kalium-D-pantothenát.
Příklad 2
Oddělení buněk a sušení fermentačního roztoku z E. coli obsahujícího kyselinu D-pantothenovou • · · · · ·
Výroba fermentačního roztoku obsahujícího kyselinu D-pantothenovou se provádí podle Příkladu 1 v US 6 013 492 s Escherichia coli IFO 814/pFV 31. Následně se potom fermentace sytí plynem až do úplného spotřebování zdroje uhlíku, dokud nestoupne obsah rozpuštěného kyslíku (pC^) na více jak 80 %.
-Následně se buňky oddělí v separátoru. Obsah kysejiny D-pantothenové zde činí 38,5 g/1. Po odpaření v rotační odparce za vakua (< 10 kPa) na obsah sušiny asi 45 % hmotnostních se koncentrát vysuší v laboratorní rozstřikovací sušárně za následujících podmínek :
Vstupní teplota plynů 100 až 250 °C
Výstupní teplota plynů 60 až 150 °C
Získá se sypký produkt se středním průměrem částic 20 až 300 pm.
Příklad 3
Sušeni fermentačního roztoku z B. subtilis obsahujícího kyselinu D-pantothenovou s dodatečným oddělením buněčné hmoty
Fermentační roztok (1 1) z příkladu 1 se vysuší v laboratorní rozstřikovací sušárně za následujících podmínek :
Vstupní teplota plynů Výstupní teplota plynů
100 až 250 °C 60 až 150 °C
Získá se sypký produkt se středním průměrem částic 20
• · ··· · • 44 • · až 300 gm.
Příklad 4
Oddělení buněčné hmoty a sušení fermentačního roztoku obsahujícího kyselinu D-pantothenovou s laktozou jako přidanou látkou
Bicihmota z fermentačního roztoku (1 1) podle příkladu 1 se centrifuguje v centrifuze. Zbytek se smíchá se 30 g laktozy a vysuší v laboratorní rozstřikovací sušárně za následuj ících podmínek :
Vstupní teplota plynů 100 až 250 °C
Výstupní teplota plynů 60 až 150 °C
Získá se sypký produkt se středním průměrem částic 40 až 500 gm a obsahem volné kyseliny D-pantothenové > 30 % hmotnostních.
Příklad 5
Sušení fermentačního roztoku obsahujícího kyselinu D-pantothenovou s chemicky vyrobeným kalcium-D-pantothenátem jako přidanou látkou, příkladně k nastavení dané koncentrace kyseliny D-pantothenové v konečném produktu
Biohmota z fermentačního roztoku (1 1) podle příkladu 1 se centrifuguje v centrifuze. Zbytek se smíchá se 100 g chemicky vyrobeného kalcium-D-pantothenátu a vysuší v laboratorní rozstřikovací sušárně za následujících podmínek :
Vstupní teplota plynů Výstupní teplota plynů
100 až 250 °C 60 až 150 °C • ·· · · ·· ····
Získá se sypký produkt se středním průměrem částic 40 až 500 gm a obsahem volné kyseliny D-pantothenové > 60 % hmotnostních.
Příklad 6
Úprava obsahu vápníku ve formulacích kyseliny D-pantothenové z fermentačních roztoků
Fermentační roztok obsahující kyselinu D-pantothenovou obsahuje po oddělení biohmoty sušinu 95 g/1, z toho 70 g/1 kyseliny D-pantothenové a 25 g/1 jiných pevných látek (soli, zbytky biohmoty, další pevné podíly podle fermentačního media, žádné vápenaté ionty).
Dále jsou uvedeny získané obsahy kyseliny D-pantothenové ve formulovaném produktu při přidání různých vápenatých solí. Přitom se obsah vápníku upravil tak, aby 1 mol vápenatých iontů připadal na 2 moly kyseliny D-pantothenové.
| Přidaná vápenatá sůl (1 mol na 2 moly kyseliny D-pantothenové) | Obsah kyseliny D-pantothenové ve formulovaném produktu v (% hmot.) |
| Bez přídavku | 74 |
| Ca(OH)2 | 66 |
| CaO | 67 |
| CaSO4 | 57 |
| CaHPO4 | 60 |
| CaCO3 | 63 |
| CaCl2 | 62 |
P/''
* · ·· · ·
J0®r. MtloS VgETEČKA advokát
ΊΛΟ 00 PRAHA 2, Hálkova 2
Claims (26)
1) lyže a/nebo usmrcení biohmoty a/nebo
1. Způsob výroby doplňku zvířecího krmivá obsahujícího volnou kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli, kde se
a) organismus produkující kyselinu D-pantothenovou fermentuje v kultivačním mediu obsahujícím nejméně jeden zdroj uhlíku a dusíku bez dodávání dalších výchozích látek a
b) fermentační roztok obsahující kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli se bez provedení dalších zpracovacích kroků podrobí sušeni a/nebo formulaci.
2) odděleni biohmoty z fermentačního roztoku a/nebo
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se fermentace provádí tak dlouho, dokud se nedosáhne obsahu pevné látky nejméně 6 % hmotnostních, s výhodou 7 až 25 % hmotnostních a/nebo obsahu kyseliny D-pantothenové nejméně 2 až 15 % hmotnostních, s výhodou 4 až 15 % hmotnostních.
3) přidání dalších přísad a/nebo
3. Způsob podle některého z nároků 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se dávkování zdroje uhlíku přeruší a/nebo řídí tak, aby jeho koncentrace byla téměř nulová a/nebo se fermentace provádí dále až k dosaženi koncentrace rozpuštěného kyslíku nejméně 80 %, s výhodou 90 % a obzvláště výhodně 95 % hodnoty nasyceného fermentačního roztoku.
4) koncentrování fermentačního roztoku, s výhodou odtažením vody a případně současným uváděním vody zpět do fermentačního procesu a/nebo
4. Způsob podle některého z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se použije organismus produkující kyselinu D-pantothenovou, jehož biosyntéza • · ·♦ ; ♦ * • · · · · • · ·· ·· kyseliny pantothenové-(pan)- a/nebo isoleucin-valin-(ilv) a/nebo asparát-a-dekarboxyláza je deregulována.
5) kombinace kroků 1 až 4.
5. Způsob podle některého z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že se před sušením a/nebo formulací provede případně oddělení biohmoty z fermentačního roztoku.
6. Způsob podle některého z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že se před sušením a/nebo formulaci a případně po oddělení biohmoty provede koncentrování fermentačního roztoku odtažením vody, za případného současného zpětného uvádění vody do fermentačního procesu.
7. Způsob podle některého z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že se před sušením a/nebo formulací provede nejméně jeden z následujících kroků, zahrnujících
8. Způsob podle některého z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že se lyže a/nebo usmrcení biohmoty provede ještě ve fermentačním roztoku nebo po oddělení biohmoty z fermentačního roztoku.
9. Způsob podle některého z nároků 1 až 8, vyznačující se tím, že sek fermentačnímu • * · · φ φ ♦ · ·ΦΦΦ • ·· φ φ roztoku před a/nebo během koncentrování, sušení a/nebo formulováním přidají další přísady a/nebo jejich směsi.
10. Způsob podle některého z nároků 1 až 9, vyznačující se tím, že se vztaženo na obsah kyseliny D-pantothenové ve formulovaném produktu před a/nebo během koncentrování, sušení a/nebo formulace přidá jako přísada 1 mol vápenatých iontů na 2 moly kyseliny D-pantothenové ve formě vápenaté soli.
11. Doplněk zvířecího krmivá na bázi fermentačního roztoku získaného fermentací nejméně jednoho organismu produkujícího kyselinu D-pantothenovou, který obsahuje nejméně volnou kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli o koncentraci 30 až 95 % hmotnostních, celkový podíl cukru 0,1 až 15 % hmotnostních a obsah proteinu nižší než 5 až 50 % hmotnostních vztaženo na sušinu.
12. Doplněk zvířecího krmivá podle nároku 11, vyznačující se tím, že obsahuje 50 až 95 % hmotnostních, s výhodou 70 až 95 % hmotnostních, obzvláště výhodně 60 až 80 % hmotnostních a obzvláště více jak 80 % hmotnostních volné kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí.
13. Doplněk zvířecího krmivá podle jednoho z nároků 11 nebo 12, vyznačující se tím, že nezpracovaný fermentační roztok obsahuje nejméně 10 g/1, s výhodou nejméně 20 g/1 a obzvláště výhodně nejméně 40 g/1 D-pantothenátu a/nebo jeho solí.
14. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 13, vyznačující se tím, že obsahuje vápenaté, draselné, hořečnaté, sodné a/nebo amonné soli kyseliny D-pantothenové nebo jejich směsi.
·· *·
15. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11
16. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 15, obsahující proteiny v množství méně jak 10 % hmotnostních, s výhodou méně jak 7 % hmotnostních a obzvláště výhodně méně jak 5 % hmotnostních.
17. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 16, obsahující celkový podíl cukru méně jak 10 % hmotnostních, s výhodou asi 0,5 % hmotnostních a obzvláště výhodně asi 0,1 % hmotnostních.
18. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 17, obsahující zbytkový obsah vody méně jak 5 % hmotnostních, s výhodou 1 až 3% hmotnostní a obzvláště výhodně 0,5 až 2 % hmotnostní.
19. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 18, vyznačující se tím, že obsahuje neživé, živé a/nebo rozmnožování schopné podíly organismů produkujících kyselinu D-pantothenovou.
20. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 19, vyznačující se tím, že obsahuje neživé, živé a/nebo rozmnožování schopné podíly mikroorganismů •444 • 4 s výhodou houby, kvasinky a/nebo bakterie.
21. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 20, vyznačuj ící se tím, že obsahuje neživé, živé a/nebo rozmnožování schopné podíly hub rodu Mucor, kvasinek rodu Saccharomyces a/nebo bakterií rodu Enterobakteriaceae, Salmonella, Pseudomonada, Bacillaceae, koryneformní bakterie a/nebo rodu Próteus a/nebo Actinum a/nebo jejich směsi.
22. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 21, vyznačuj ící se tím, že obsahuje další přísady, s výhodou na bázi cukrů a/nebo na bázi obilných a/nebo luštěninových produktů a/nebo na bázi minerálních solí a/nebo kyseliny D-pantothenové, jejich solí a/nebo jejich směsí.
23. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 22, vyznačující se tím, že formulace má sypnou hustotou 0,35 až 0,7 kg/1, s výhodou 0,4 až 0,6 kg/1.
24. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 23, vyznačuj ící se tím, že má střední průměr zrna v rozmezí 10 až 2000 gm, s výhodou 20 až 1500 gm, obzvláště výhodně 25 až 1000 gm a nejvýhodněji 30 až 800 gm.
25. Doplněk zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 24, vyznačuj ící se tím, že má formu prášku, granulátu, pelet, je opatřený povlakem a/nebo jako jejich kombinace.
26. Použití doplňku zvířecího krmivá podle některého z nároků 11 až 25 jako přídavku ke zvířecímu krmivu a/nebo k doplňkovým prostředkům pro zvířecí krmivá.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10046490 | 2000-09-20 | ||
| DE10112207A DE10112207A1 (de) | 2001-03-14 | 2001-03-14 | Tierfuttersupplement enthaltend D-Pantothensäure und/oder deren Salze, verbessertes Verfahren zu dessen Herstellung sowie dessen Verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2003797A3 true CZ2003797A3 (cs) | 2003-06-18 |
Family
ID=26007117
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2003797A CZ2003797A3 (cs) | 2000-09-20 | 2001-09-08 | Doplněk zvířecího krmiva obsahující kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli, způsob jeho výroby a jeho použití |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20040050335A1 (cs) |
| EP (1) | EP1318725A2 (cs) |
| JP (1) | JP2004508841A (cs) |
| KR (1) | KR20030038751A (cs) |
| CN (1) | CN1531398A (cs) |
| AU (1) | AU2002218164A1 (cs) |
| BR (1) | BR0113399A (cs) |
| CA (1) | CA2422817A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ2003797A3 (cs) |
| EE (1) | EE200300112A (cs) |
| HU (1) | HUP0301095A3 (cs) |
| IL (1) | IL154824A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA03002345A (cs) |
| NO (1) | NO20031261D0 (cs) |
| PL (1) | PL360590A1 (cs) |
| RU (1) | RU2003111457A (cs) |
| SK (1) | SK3262003A3 (cs) |
| WO (1) | WO2002024001A2 (cs) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002066664A2 (de) * | 2001-02-21 | 2002-08-29 | Basf Aktiengesellschaft | Verfahren zur herstellung von d-pantothensäure und/oder salze als zusatz zu tierfuttermitteln |
| BR0207473A (pt) * | 2001-02-21 | 2004-04-06 | Basf Ag | Processo para preparar ácido d-pantotênico e/ou seus sais, e, composição para uso como aditivo de alimento para animal e/ou suplemento de alimento para animal |
| DE10108223A1 (de) * | 2001-02-21 | 2002-10-10 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salze als Zusatz zu Tierfuttermitteln |
| DE10108225A1 (de) | 2001-02-21 | 2002-10-10 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salze als Zusatz zu Tierfuttermitteln |
| DE102004026152A1 (de) * | 2004-05-28 | 2005-12-15 | Basf Ag | Fermentative Herstellung von Feinchemikalien |
| US8709977B2 (en) * | 2009-03-23 | 2014-04-29 | Donaghys Industries Limited | Bio-stimulant for improved plant growth and development |
| MX348659B (es) * | 2010-11-19 | 2017-05-08 | Centro De Innovacion Biotecnologica A C | Alimentos funcionales con altos contenidos de harina de soya (sbm), almidon y bacillus ssp. |
| CN105166414A (zh) * | 2015-10-10 | 2015-12-23 | 山西农业大学 | 肉牛过瘤胃泛酸添加剂及其制备方法 |
| CN109161574A (zh) * | 2018-09-18 | 2019-01-08 | 陕西科技大学 | 一种提高枯草芽孢杆菌抗菌蛋白产量的发酵方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3710497B2 (ja) * | 1992-09-25 | 2005-10-26 | ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト | Ｄ−パント酸、ｄ−パントテン酸およびそれらの塩の製造法 |
| DK0822989T3 (da) * | 1995-04-21 | 2001-04-17 | Takeda Chemical Industries Ltd | Fremgangsmåde til fremstilling af D-pantothenat |
| KR100421088B1 (ko) * | 1995-09-13 | 2004-06-04 | 바스프 악티엔게젤샤프트 | 디-판토산및디-판토텐산또는그의염의생성방법 |
| DE19855312A1 (de) * | 1998-12-01 | 2000-06-08 | Degussa | Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure unter Verwendung coryneformer Bakterien |
| PT1050219E (pt) * | 1999-05-05 | 2003-04-30 | Degussa | Aditivos alimentares para animais contendo acido d-pantotenico e/ou seus sais e processo para a sua preparacao |
| US6238714B1 (en) * | 1999-05-05 | 2001-05-29 | Degussa-Huls Ag | Feedstuff additive which contains D-pantothenic acid and/or its salts and a process for the preparation thereof |
| US6319528B1 (en) * | 1999-05-05 | 2001-11-20 | Degussa Aktiengesellschaft | Feedstuff additive which contains D-pantothenic acid and/or its salts and a process for the preparation thereof |
-
2001
- 2001-09-08 BR BR0113399-3A patent/BR0113399A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-09-08 US US10/380,053 patent/US20040050335A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-08 AU AU2002218164A patent/AU2002218164A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-08 CN CNA018152767A patent/CN1531398A/zh active Pending
- 2001-09-08 EE EEP200300112A patent/EE200300112A/xx unknown
- 2001-09-08 CZ CZ2003797A patent/CZ2003797A3/cs unknown
- 2001-09-08 JP JP2002528046A patent/JP2004508841A/ja not_active Withdrawn
- 2001-09-08 MX MXPA03002345A patent/MXPA03002345A/es unknown
- 2001-09-08 KR KR10-2003-7003965A patent/KR20030038751A/ko not_active Withdrawn
- 2001-09-08 RU RU2003111457/13A patent/RU2003111457A/ru not_active Application Discontinuation
- 2001-09-08 IL IL15482401A patent/IL154824A0/xx unknown
- 2001-09-08 CA CA002422817A patent/CA2422817A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-08 HU HU0301095A patent/HUP0301095A3/hu unknown
- 2001-09-08 SK SK326-2003A patent/SK3262003A3/sk unknown
- 2001-09-08 EP EP01985230A patent/EP1318725A2/de not_active Withdrawn
- 2001-09-08 WO PCT/EP2001/010386 patent/WO2002024001A2/de not_active Ceased
- 2001-09-08 PL PL36059001A patent/PL360590A1/xx not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-03-19 NO NO20031261A patent/NO20031261D0/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BR0113399A (pt) | 2003-07-15 |
| WO2002024001A3 (de) | 2002-06-06 |
| NO20031261L (no) | 2003-03-19 |
| SK3262003A3 (en) | 2003-08-05 |
| EP1318725A2 (de) | 2003-06-18 |
| AU2002218164A1 (en) | 2002-04-02 |
| RU2003111457A (ru) | 2004-12-10 |
| EE200300112A (et) | 2005-04-15 |
| IL154824A0 (en) | 2003-10-31 |
| CA2422817A1 (en) | 2003-03-19 |
| HUP0301095A2 (hu) | 2003-10-28 |
| CN1531398A (zh) | 2004-09-22 |
| WO2002024001A2 (de) | 2002-03-28 |
| PL360590A1 (en) | 2004-09-06 |
| NO20031261D0 (no) | 2003-03-19 |
| MXPA03002345A (es) | 2003-06-30 |
| HUP0301095A3 (en) | 2004-04-28 |
| KR20030038751A (ko) | 2003-05-16 |
| JP2004508841A (ja) | 2004-03-25 |
| US20040050335A1 (en) | 2004-03-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| MX2014006502A (es) | Microorganismo para producir simultáneamente l-amino ácidos y riboflavina, y método para producir l-amino acidos y riboflavina usando el mismo. | |
| CZ2003797A3 (cs) | Doplněk zvířecího krmiva obsahující kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli, způsob jeho výroby a jeho použití | |
| KR20170044575A (ko) | 바이오-기반 n-아세틸-l-메티오닌 및 이의 용도 | |
| CZ20032245A3 (cs) | Způsob výroby kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí jako přísady do zvířecích krmiv | |
| CZ20032236A3 (cs) | Způsob výroby kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí jako přísady do zvířecích krmiv | |
| US7727748B2 (en) | Method for producing D-pantothenic acid and/or salts thereof via purification by anion exchange as an additive for animal feed | |
| US7824891B2 (en) | Method for producing D-pantothenic acid and/or salts thereof via purification by electrodialysis as an additive for animal feed | |
| HUP0303472A2 (hu) | Eljárások pantotenát fokozott termelésére |