CZ2009795A3 - Kmen mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca, zpusob jeho kultivace a využití - Google Patents
Kmen mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca, zpusob jeho kultivace a využití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2009795A3 CZ2009795A3 CZ20090795A CZ2009795A CZ2009795A3 CZ 2009795 A3 CZ2009795 A3 CZ 2009795A3 CZ 20090795 A CZ20090795 A CZ 20090795A CZ 2009795 A CZ2009795 A CZ 2009795A CZ 2009795 A3 CZ2009795 A3 CZ 2009795A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- strain
- active ingredient
- preparation
- armeniaca
- red
- Prior art date
Links
- 241000985513 Penicillium oxalicum Species 0.000 title claims abstract description 20
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 title abstract 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 239000001044 red dye Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 10
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 13
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 8
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims description 5
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 5
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims description 5
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 claims description 4
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 4
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 claims description 4
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 3
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 208000007093 Leukemia L1210 Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 3
- RZVHIXYEVGDQDX-UHFFFAOYSA-N 9,10-anthraquinone Chemical group C1=CC=C2C(=O)C3=CC=CC=C3C(=O)C2=C1 RZVHIXYEVGDQDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 claims description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 2
- -1 3-methyl-1,3-butadienyl Chemical group 0.000 claims 1
- SGNLBAXNGDNQSB-UHFFFAOYSA-N 6-ethyl-10-hydroxy-3,3-dimethyl-7,12-dihydronaphtho[2,3-f]chromene-9-carboxylic acid Chemical group C1C2=CC(O)=C(C(O)=O)C=C2CC2=C1C(C=CC(C)(C)O1)=C1C=C2CC SGNLBAXNGDNQSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 19
- 239000000049 pigment Substances 0.000 abstract description 16
- 239000000576 food coloring agent Substances 0.000 abstract description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 abstract description 3
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 abstract description 3
- PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N anthraquinone Natural products CCC(=O)c1c(O)c2C(=O)C3C(C=CC=C3O)C(=O)c2cc1CC(=O)OC PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 150000004056 anthraquinones Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 39
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 239000001054 red pigment Substances 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 4
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 4
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 3
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 3
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 3
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 3
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 3
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010015946 Eye irritation Diseases 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- VYLQGYLYRQKMFU-UHFFFAOYSA-N Ochratoxin A Natural products CC1Cc2c(Cl)cc(CNC(Cc3ccccc3)C(=O)O)cc2C(=O)O1 VYLQGYLYRQKMFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 2
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 2
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 231100000013 eye irritation Toxicity 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000000892 gravimetry Methods 0.000 description 2
- 231100000334 hepatotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003082 hepatotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 2
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 208000025036 lymphosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- RWQKHEORZBHNRI-BMIGLBTASA-N ochratoxin A Chemical compound C([C@H](NC(=O)C1=CC(Cl)=C2C[C@H](OC(=O)C2=C1O)C)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 RWQKHEORZBHNRI-BMIGLBTASA-N 0.000 description 2
- DAEYIVCTQUFNTM-UHFFFAOYSA-N ochratoxin B Natural products OC1=C2C(=O)OC(C)CC2=CC=C1C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 DAEYIVCTQUFNTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039358 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type-2 Human genes 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 description 1
- RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N Alizarin Natural products C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC=C3C(=O)C2=C1 RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 238000010953 Ames test Methods 0.000 description 1
- 231100000039 Ames test Toxicity 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 208000019399 Colonic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010010725 Conjunctival irritation Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 101001035740 Homo sapiens 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229930186657 Lat Natural products 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 206010028400 Mutagenic effect Diseases 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000107 OECD 471 Bacterial Reverse Mutation Test Toxicity 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 241000269908 Platichthys flesus Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KYGRCGGBECLWMH-UHFFFAOYSA-N Sterigmatocystin Natural products COc1cc2OC3C=COC3c2c4Oc5cccc(O)c5C(=O)c14 KYGRCGGBECLWMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTSVPXMQSFGQTM-UHFFFAOYSA-N Sterigmatrocystin Natural products O1C2=CC=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(C1C=COC1O1)=C1C=C2OC UTSVPXMQSFGQTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- BXFOFFBJRFZBQZ-QYWOHJEZSA-N T-2 toxin Chemical compound C([C@@]12[C@]3(C)[C@H](OC(C)=O)[C@@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@]3(COC(C)=O)C[C@@H](C(=C1)C)OC(=O)CC(C)C)O2 BXFOFFBJRFZBQZ-QYWOHJEZSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 231100000460 acute oral toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- HFVAFDPGUJEFBQ-UHFFFAOYSA-M alizarin red S Chemical compound [Na+].O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C=C(S([O-])(=O)=O)C(O)=C2O HFVAFDPGUJEFBQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBFQJDQYXXHULB-UHFFFAOYSA-N arsane Chemical class [AsH3] RBFQJDQYXXHULB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-KLVWXMOXSA-N beta-L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1CO[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-KLVWXMOXSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- DGQLVPJVXFOQEV-NGOCYOHBSA-N carminic acid Chemical compound OC1=C2C(=O)C=3C(C)=C(C(O)=O)C(O)=CC=3C(=O)C2=C(O)C(O)=C1[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DGQLVPJVXFOQEV-NGOCYOHBSA-N 0.000 description 1
- 229940114118 carminic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000012730 carminic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004106 carminic acid Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000003518 caustics Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- RHGQIWVTIHZRLI-UHFFFAOYSA-N dihydrosterigmatocystin Natural products O1C2=CC=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(C1CCOC1O1)=C1C=C2OC RHGQIWVTIHZRLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940069417 doxy Drugs 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 244000144992 flock Species 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000025 genetic toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 235000021552 granulated sugar Nutrition 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002689 maleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 238000001869 matrix assisted laser desorption--ionisation mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 230000003589 nefrotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 231100000381 nephrotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000003305 oral gavage Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012770 revaccination Methods 0.000 description 1
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- UTSVPXMQSFGQTM-DCXZOGHSSA-N sterigmatocystin Chemical compound O1C2=CC=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C([C@@H]1C=CO[C@@H]1O1)=C1C=C2OC UTSVPXMQSFGQTM-DCXZOGHSSA-N 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Rešení se týká kmene ES mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca CCM 8374 produkujícího cervené barvivo a zpusobu jeho kultivace a využití produktu biosyntézy. Penicillium oxalicum var. Armeniaca kmen ES CCM 8374 produkuje cervený exogenní pigment antrachinonového typu, použitelný jako potravinárské barvivo, potravinový doplnek a prostredek s profylaktickým úcinkem vuci nádorum, zejména colon CT26, karcinom mlécné žlázy 4T1, Lewisuv plicní karcinom, Leukémie L1210 a lidský karcinom colon HCT116.
Description
Kmen mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca, způsob jeho kultivace a využití
Oblast techniky
Vynález se týká kmene mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca.
Vynález se také týká způsobu kultivace kmene mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca, prostředku získaného tímto způsobem kultivace, použití tohoto prostředku a způsobu přípravy přípravku s účinnou látkou pro toto použití.
Vynález se také týká potravinového doplňku z kmene mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca.
Vynález se také týká barviva z kmene mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca.
Dosavadní stav techniky
V českém patentu č. 285 721 je popsána mikroskopická houba Penicillium oxalicum var. Armeniaca CCM 8242 produkující exogenní červené potravinářské barvivo s různými možnostmi použití. Tento mikroorganismus byl základem výzkumu zaměřeného na získáni nových kmenů s dále vylepšenými nebo s novými vlastnostmi. Penicillium oxalicum var. Armeniaca byl uložen dne
19. 3. 1998 v mezinárodním ukládacím místě CCM - Česká sbírka mikroorganismů Masarykovy univerzity pod přírůstkovým číslem CCM 8242. Jedná se o přírodní mikroorganismus, získaný z půdy v údolí pod horou Ararat. Kultivaci byl získán nový kmen, produkující látku, která má trojí účinnost, tj. je použitelná jako červené potravinářské barvivo, profylaktický protinádorový doplněk stravy a potravina nového typu s ochranným účinkem.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je kmen ES mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca CCM 8374. Kmen ES byl získán z houby Penicillium
PS3654CZ1
13.1.2010
PV 2009-795
27.11.2009 oxalicum var. Armeniaca očkováním do kombinovaných organických prostředí a také do prostředí, jež blokovala nebo potlačovala biosyntézu pigmentu s obvyklým růstem kultury.
V rámci výzkumu mechanizmu biosyntézy s cílem získat aktivnější nový průmyslový kmen bylo provedeno třídění vhodných předchůdců biosyntézy červeného pigmentu, jež vedlo k regulaci usměrněné biosyntézy a aktivaci enzymatických systémů odpovědných za metabolismus exogenního červeného pigmentu.
Výzkumy prokázaly, že mezi 39 aminokyselinami ve formách L-, D- a DL s jakostí předchůdců aktivní biosyntézy, pozitivní vliv na biosyntetickou aktivitu prokázaly aminokyseliny L-tyrozin a L-dioxifenilalanin, jenž je schopen stimulovat enzymatické systémy (částečné fenoloxidázy), podílející se na řízené biosyntéze červeného pigmentu.
Očkováním se pokračovalo až do 7. - 8. generace. Zatím kolonie přenášely do optimálních prostředí biosyntézy barviva, tj. do zelného odvaru, nebo do kukuřičného extraktu 20g/L, nebo do kvasničného extraktu 7g/L s cukrem 20g/L.
Nový kmen ES podstatně zvýšil aktivitu tvorby pigmentu z hodnoty 1,2 až
1,5 g/l (patent 285 721) na hodnotu 5 až 10g/I, zkrátil dobu vedení fermentace na 4-5 hodin, výrazně snížil užívání cukru z hodnoty 20g/l na hodnotu 17g/l a snížil vytváření biomasy.
Kmen ES houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca se podle fiziologicko-kulturálních a biochemických příznaků a podle aktivity biosyntézy pigmentu liší od předešlé chráněné kultury CCM 8242.
Po dobu výzkumu nebyly použity chemické mutagenní látky, ani způsoby ovlivňující genetické změny.
Penicillium oxalicum var. Armeniaca kmen ES byl uložen dne 12. 08. 2009 v mezinárodním ukládacim místě CCM - Česká sbírka mikroorganismů Masarykovy univerzity, Tvrdého 14, 602 00 Brno, pod přírůstkovým číslem CCM 8374.
Morfologické znaky: Kolonie rychle rostoucí, sametové, silně sporulující,
PS3654CZ1
13.1.2010
PV 2009-795
27.11.2009 tmavozelené. Houba Penicillium oxalicum var. Armeniaca kmen ES v mono sporové kultuře na agarových živných půdách Čapka - Doxy pro houby na sladovém agaru tvoří normálně rostoucí kolonie dosahující v průměru 2,0 až 2,5 cm za 72 hodin inkubace a 4,0 až 5,0 cm za 120 -144 hodin inkubace. Kolonie jsou nezvrásněné, hladké, klenuté, segmentace chybějí, mají sametové jemný vzhled a neprodukují barvivo při růstu kultury. Hyfy jsou krátké, hojně sporulující s křehkým povrchem a vydrolující se.
Na půdě se zelným vývarem jsou hyfy krátké s křehkým povrchem. Podhoubí stárnuté 120-144 hodin je krátké s bohatými výtrusy a snadno opadavé. Při vytřásání Petriho misky se zralou kulturou vypadají v podobě práškové hmoty. Zonálnost se neprojevuje. Mycelium je krátké, mající podélné přepážky, chybí příčné přepážky, světle zelené barvy, která se postupně s růstem kultury mění na tmavě zelenou. Bílý proužek rostoucího okraje kolonie dosahuje šířky 1 až 2 mm. Silně produkuje barvivo, které difunduje do agaragar.
Na půdě s kukuřičným a kvasničným extraktem se výrazně zvyšuje růst kultury a snižuje sporulující schopnost, mycelia jsou dlouhá, kultura je slabě zelená, s postupujícím růstem se stává popelové zelenou, silně produkuje exogenní barvivo. Druhá strana mladé kultury má růžovou barvu, která se s rozvojem houby dynamicky hromadí a intenzivně difunduje do agaru, jež silné barví na tmavě rudou barvu.
Mikroskopické znaky: Konidiofory hladké, 60 až 70 x 5 až 6 pm, dlouhé, terminálně větvené, se 2 - 4 přitisklými metulami. Fialidy acerozní 10 - 15 pm dlouhé. Laty o délce 28 až 32 pm se vyskytují v přeslenu v počtu 3 až 5 ks. Konidie jsou protáhle eiipsoidní, hladké až jemně bradavčité velké, 3,5 - 5 pm dlouhé.
Kmen ES silné hydrolyzuje škrob, neředí želatinu, nehydrolyzuje mléko. Sloučeniny s obsahem dusíku v okysličené formě (NO-) mají potlačovací účinek na tvorbu pigmentu. Organický dusík v redukované formě (NH+) v podobě aminokyselin L-asparagin, L-valin, L-serin, L-tyrozin a L-fenylalanin, má pozitivní vliv na biosyntetickou aktivitu pigmentu. Výborným zdrojem sacharidové výživy jsou L-sacharóza, L-(+)-maltóza, L-(+)-arabinóza, D
PV 2009-795
27.11.2009
PS3654CZ1
13.1.2010 (+)sorbit a D-(+)-manit.
Optimální je sacharóza. Monosacharid - glukóza má kladný vliv na růst a rozvoj producentu, současné však silné potlačuje proces tvorby pigmentu. Dobře se přizpůsobuje etylalkoholu a glycerinu. Z organických kyselin absorbuje jantarovou, mléčnou a maleinovou kyselinu.
Optimální teplota pro růst houby a biosyntézu barviva je 27 až 29Ό. Produkční kmen ES se množí při teplotě 37 až 38Ό, ale vlastnost tvorby pigmentu je slabá. Produkční kmen ES se uchovává metodou periodických přeočkování ve zkumavkách v houfech, zelném arizovaném prostředí v ledničce při teplotě +4 až +5 Ό. Perioda p řeočkování je 2 až 3 měsíce.
Kmen ES Penicillium oxalicum var. Armeniaca není patogenní, nevyvolává mykózy a neprodukuje mykotoxiny - Alfatoxiny (suma B1, B2, G1, G2), Ochratoxin A, Sterigmatocysitin, D Sekalonovou kyselinu. Neprodukuje antibiotika. Nemá vliv na G+, G' bakterie.
Pigmentace na obrácené straně kolonie začíná již druhý den inkubace kmene a dosahuje maxima u sedmidenní kultury. Při hodnotě pH prostředí nižší než 4,0 a vyšší než 8,5 při normálním růstu kultury se zastavuje biosyntéza červeného barviva nebo se produkuje slabě. Optimální hodnota pH pro produkování červeného barviva činí 5,6 až 6,2. Zápach se neprojevuje. Při aktivním růstu a biosyntéze barviva se někdy projevuje exudát.
Jako komponenty živného prostředí se používají uhlohydráty, různé cukry, vícemocné alkoholy a uhlovodíky. Pro zásobování dusíkem se využívá kukuřičný extrakt, kvasnicový autolyzát nebo extrakt a také sloučeniny obsahující dusík v různých podobách.
Přehled obrázků na výkrese
Na obr. 1 je schematicky znázorněno zmenšení nádoru po podání preparátu a nástup účinnosti preparátu proti rakovině.
PV 2009-795
27.11.2009
PS3654CZ_1
13.1.2010
Technologicky postup výroby
Kultivaci produkčního kmene ES je možno provádět ve fermentorech v tekutém živném prostředí hlubinnou metodou za aerobních podmínek. Živné prostředí obsahuje 17 g/l krystalového cukru, 7 g/l kvasničného extraktu. Pro očkováni se využívají pracovní mycelie s dvoudenní kulturou inkubovanou v kvasničném extraktu, vypěstovanou v očkovacím přístroji, v množství 5 až 7% obj. vztaženo na objem živného prostředí.
Fermentace se provádí při teplotě 27 až 29Ό v průběhu 64 až 68 h, v pracovním přetlaku 0,05 až 0,1 MPa., výhodně s kontinuálním promícháváním rychlosti 80 až 200 min'1 při odvodu vzduchu v poměru 20 až 80 l/h, při pH= 5,6 až 6,2, s obsahem uhlohydrátů, výhodně 1,5 až 2,3 % hmot., a amonného dusíku, výhodně 0,66 až 0,69 % hmot. Už po 30 až 35 h fermentace se kapalina zbarvuje do červené barvy, jejíž intenzita dosahuje svého maxima tmavě višňové barvy - po době inkubace 64 až 68 h (5,0 až 10,0 g/l).
Po 64 až 68 hodinách je biomasa od roztoku barvicích látek oddělena filtrováním na kalolisu nebo odstředivkou. Druhý stupeň filtrace se provádí mikrofiltrací s použitím membrán 10 000 až 20 000 pm pro odstranění makromolekulárních bílkovin a různých příměsí. Oddělení nízkomolekularních solí a vody je realizováno na ultrafiltračním zařízení na membránách 200 až 500 pm na koncentrát s obsahem barviva 80 až 120 g/l.
Koncentrovaný roztok je sušen ve sprejové sušárně při teplotě 180 až 220° C s fyziologickým a inertním nosí čem (maltodextrin nebo škrob) od 20 až 50%, což je tmavě červený amorfní prášek, ve vodném roztoku krvavé červené barvy. Produkovaná látka je sekundárním metabolitem houby Peniciilium oxalicum var. Armeniaca kmen ES.
Zápach a chuť se neprojevuje ani ve formě amorfní, ani v roztoku, které se používají jako červené potravinářské barvivo, potravinový doplněk, profylaktický protinádorový doplněk stravy a potravina nového typu s ochranným účinkem.
V průběhu výroby červeného pigmentu byl z odpadního mycelia Peniciilium oxalicum var. Armeniaca z frakce buněčných stěn obdržené po varu mycelia v koncentrovaném roztoku alkalického louhu metodou kyselé extrakce
PV 2009-795
27.11.2009
PS3654CZ1
13.1.2010 ředěnou kyselinou chlorovodíkovou získán chitosan, . Hydrolýzou izolovaného chitosanu lze získat glukosamin. Tuto hydrolýzu je možno provést koncentrovanou kyselinu za horka, nebo s použitím různých enzymů.
Určení struktury
Na základě chromatografické separace (HPLC v systému s normální fází a využitím detektoru diodového pole, DAD) lze konstatovat, že pigment obsahuje 2 majoritní barevné komponenty s velmi podrobným absorpčním spektrem ve viditelné oblasti spektra.
Molekulově - hmotnostní charakterizace pigmentu byla provedena metodami LDI (Laser Desorption lonization) a MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption lonization).
Podle údajů získaných z hmotových spekter MALDI, je molekulová hmotnost molekuly chromoforu rovna 378,32 a tento chromofor má alespoň 3 skupiny dostatečně kyselé, aby vázaly kationty sodíku (alkalického kovu); jedna je výraznější, další dvě odpovídající vyšší saturaci, jsou slabší; může se např. jednat o karboxylovou skupinu, fenolické hydroxyly, ale i o karbonylové skupiny přecházející v plynné fázi na enolformy při měření MALDI.
Ze spekter NMR lze usuzovat, že základnímu chromoforu přísluší pouze 3 singlety (izolované nekaplované vodíky) a alespoň jeden dublet nearomatické CH=CH skupiny, že obsahuje skeletální karbonyly, a že jsou na něj vázány alespoň dva fenolické hydroxyly, a to na kvartérní uhlíky s 13C NMR rezonancemi u 151,0 a 152,0 ppm (v karmínové kyselině jsou hydroxyly vázány na uhlíky antrachinonového skeletu s rezonancemi od 147,6 do 159,8 ppm, v alizarinu u 150,6 a 152,6 ppm).
PS3654CZ1
13.1.2010
PV 2009-795
27.11.2009
kde Ri až R5 je HO-,
HO-, skupina obsahující izolovanou dvojnou vazbu, karboxyl nebo esterová skupina navázané na skelet buď přímo nebo přes spacer a další skupina blokující pátou z osmi volných pozic antrachinonového 5 skeletu. Může se jednat např. o následující strukturu a její izomemi varianty:
V případě vzorců la a Ib se pak konkrétné jedná o 8ethyl-3,6dihydroxy 5[(IE)-3methyl-1,3butadienyl]-9.10dinxo-9,10dihydroantracen-2-karboxylovou kyselinu,resp. 6ethyl-10-hydroxy-3,3dimethyl-7,12dihydro-3H-nafto[2,3f|cromen10 9-karboxylovou kyselinu.
Tato struktura vyhovuje i skutečnosti, že v NMR spektrech je viditelný vodík v oblasti u 9 ppm, který lze přisoudit vodíku v intramolekulárním můstku mezi fenolickou a karboxylovou skupinou.
Dále je nutno vzít v úvahu již zmíněnou skupinu spojující aromatický 15 skelet a karbonyl, kterou může byt útvar typu -CH2-CH=0, CH2-CO-CH3, -CH2
PS3654CZ_1
13.1.2010
PV 2009-795
27.11.2009
COOH, -CH2-COO-R. Prihlédneme-li ale k závěrům vyplývajícím z IR spekter, jako pravděpodobné struktury přicházejí v úvahu zejména dvě poslední uvedené. S přihlédnutím k možným typům skeletů syntetizovaných organismy k tomu, že aromatické vodíky vázané přímo na skelet spolu nesousedi, lze však z uvedených poznatků navrhnout pravděpodobné struktury základního chromoforu.
Teplota tání je 127X3 (rozklad). Rozpouští se ve vodě a v etylalkoholu. Dobře se rozpouští ve vaječném bílku a v koncentrované kyselině octové. Barva barviva se nemění v závislosti na hodnotě pH, což znamená, že nevykazuje bathochromicitu. Vykazuje vysokou stálost na světle a odolnost proti teplotě.
Neprojevuje se změna barevnosti při vařeni v roztocích po dobu 1 h při teplotě 100Ό. Pohlcuje světlo ve viditelné oblasti (Amax = 420 nm a Amax = 502 nm). Dvě spektrometrická maxima ve vodném roztoku barviva při pH - 7,0 - 7,5 A1 max. = 420 nm, A2 max. = 498 nm. Poměr těchto dvou maximálních hodnot A2:Ai určuje kvalitu produktu, která standardně čini 1,2 až 1,5.
Produkt biosyntézy je možno v množství 50 až 400 mg/kg přidávat do potravinářských výrobků, například uzenin, cukrovinek, jogurtů, nealkoholických a alkoholických nápojů apod. Dále je možno z nich připravovat vodné, lihové nebo vodně-lihové roztoky o koncentracích účinné látky 2 až 50 % obj.
Červené barvivo, izolované za výše popsaných podmínek a mající výše uvedené vlastnosti, bylo podrobeno toxikologickým testům a protinádorové účinnosti.
Toxikoloqická studie
Akutní orální toxicita na myších
Podáním látky v limitním testu po jednorázové aplikaci v dávce 2000 mg/kg nebyl zjištěn žádný vliv na klinický stav zvířat a nebyly zjištěny žádné makroskopické patologické nálezy, nepozorovány žádné účinky ani smrt zvířat.
PV 2009-795
27.11.2009
PS3654CZ_1
13.1.2010
Akutní kožní a oční dráždivost
Barvivo nezpůsobilo dráždění kůže ani očí. Reverzibilní podráždění spojivky (obdobné jako u mnoha substancí v práškové formě) nebyly pozorovány po 72 h.
Mikronukleus test na savčích erytrocytech
Studie byla provedena na 20 myších. Červený pigment v podmínkách testu neměl žádný mutagenní nebo cytotoxický vliv na kostní dřeň laboratorních myší.
denní subchronická toxikoloqická studie na potkanech
Studie byla provedena na 120 potkanech, 60 samcích a 60 samicích v dávkách 0,5, 10, 25 mg/kg p.o. (jícnová sonda) po dobu 90 dní.
Před zahájením aplikace, na konci aplikačního období a na konci přežití bylo provedeno vyšetření hematologické, biochemické, oftalmologické a vyšetřeni moče. Týdně byla sledována tělesná hmotnost.
Makroskopická pitva a histopatologické vyšetření bylo provedeno u všech zvířat. Všechna zvířata přežila do konce experimentálního období. Denní aplikace látky byla dobře tolerována, nebyly pozorovány žádné známky toxicity nebo změny chování zvířat. Hematologické a biochemické vyšetření neprokázalo žádné podstatné rozdíly mezi jednotlivými skupinami.
Makroskopické patologické vyšetření neprokázalo žádné změny na orgánech dutiny hrudní a břišní. Histopatologické vyšetření neprokázalo žádný hepatotoxický nebo neurotoxický efekt. Nebyly pozorovány žádné nálezy na gastrointestinálním traktu ani na jiných orgánech a tkáních.
Bakteriální test reverzních mutací
Stanovení mutagenního potenciálu testované položky barviva bylo provedeno Amesovým testem na bakteriích až do max. dávky stanovené legislativou. Test byl proveden opakovaně na auxotrofních kmenech Salmonella typhimurium TA1535, TA97, TA98, TA100 a Escherichia coli WP2uvrA, v obou případech s metabolickou aktivací a bez metabolické aktivace testované látky.
PS3654CZ_1
13.1.2010
PV 2009-795
27.11.2009
V podmínkách testu nebyl prokázán mutagenní nebo toxický efekt na bakterie.
Micronucleus test na savčích erytrocytech
Studie byla provedena na 50 potkanech. Barvivo bylo podáváno orálně v dávkách 100, 500 a 1000 mg/kg. V průběhu aplikace nedošlo k žádnému úhynu, u zvířat nebyly pozorovány žádné projevy intoxikace. Statistické hodnocení neprokázalo žádné významné rozdíly ve výskytu mikrojader mezi testovanými skupinami a negativní kontrolou. Ani u ostatních monitorovaných parametrů nebyly prokázány významné rozdíly. Barvivo nezpůsobilo v podmínkách testu žádný cytotoxický vliv na buňky kostní dřeně laboratorních potkanů.
denní pilotní studie na potkanech a osech
Studie byla provedena na 4 psech plemene beagle (2 samci a 2 samice) a na 20 potkanech (10 samců a 10 samic). Látka byla aplikována denně v dávkách 500 a 1000 mg/kg po dobu 14 dní.
Účelem studie bylo charakterizovat toxický vliv testované látky na laboratorních zvířatech po opakovaném 14 denním podání a získat dávkové rozpětí pro další studie.
Před aplikací a na konci aplikačního období bylo provedeno hematologické a biochemické vyšetření. Po ukončení aplikačního období byla provedena makroskopická pitva u nejvyšší dávkové skupiny. Histopatologické hodnocení bylo provedeno u jater, ledvin, žaludku a tenkého a tlustého střeva.
Všechna zvířata přežila až do konce experimentálního období. Denní aplikace látky byla dobře snášena, nebyly pozorovány žádné známky intoxikace nebo změny chování zvířat.
Hematologické a biochemické vyšetření neprokázalo žádné změny na orgánech dutiny ústní a břišní. Histopatologické vyšetření neprokázalo nefrotoxický ani hepatotoxický efekt. Nebyly pozorovány žádné nálezy na gastrointestinálním traktu.
PS3654CZ1
13.1.2010
PV 2009-795
27.11.2009
Produkt neprokázal v žádné studii příznaky toxického působení a ani žádné tělesné orgány nevykázaly jakoukoliv reakci. Histopatologicky nebylo zjištěno ovlivnění somatických ani pohlavních buněk. Testy genotoxicity neprokázaly možný mutagenní účinek.
Předmětem vynálezu je tedy také prostředek s profylaktickým protinádorovým účinkem, obsahující jako účinnou složku produkt získaný biosyntézou produkčním mikroorganismem Penicillium oxalicum var. Armeniaca kmen ES CCM 8374, resp. červené barvivo, získané touto biosyntézou.
Testy proti nádorové účinnosti
Produkt biosyntézy - červené barvivo, izolované za výše popsaných podmínek a mající výše uvedené vlastnosti, byl podroben screeningové studii na protinádorové vlastnosti Gardnerova lymfosarkomu IP-LsG (patent 289 242).
Vliv pigmentu na růst svnqenních nádorů u inbredních myši
Cílem předkládané studie bylo stanovit protinádorový účinek preparátu na růst syngenních myších tumorů u inbredních myší. K pokusu byly použity syngenní nádorové linie, které byly získány z tkáňové kultury. Melanom B16, Karcinom CT26, Karcinom mléčné žlázy 4T1, Lewisův plicní karcinom, Leukémie L1210, rostoucí v podkoží jako lymfosarkom.
Nádorové buňky byly aplikovány myším subkutánně (s. c.) na pravý bok myši, v množství 1 x 107 bunék/myš, s výjimkou melanomu B16 kde bylo s. c. aplikováno pouze 2 x 106 nádorových buněk.
K pokusům byly použity inbrední myši, samice, tělesné hmotnosti 18 20g, celkem 80 ks, 16 myší kmene DBA 2, 32 ks myší BALB/c a 32 ks myší C57B16. Myši byly chovány v SPF zvěřinci, podestýlány radiačně sterilizovanou podestýlkou, krmeny radiačně sterilizovanou dietou ST-1 a napájeny sterilizovanou vodou ad libitum.
Den před vlastní inokulací nádorových buněk byla všem myším odebrána krev z očního plexu a byl stanoven výchozí krevní obraz.
PS3654CZ1
13.1.2010
PV 2009-795
27.11.2009
Za 24 hodin po odběru byly inbredním myším s.c. inokulovány nádorové buňky, a to v počtu 2 x 106 /myš v případě melanomu B16, u ostatních nádorových buněk v počtu 1 x 107/myš. Za 24 hodin po inokulaci nádorových buněk byla zahájena terapie. Pokusným myším bylo perorálně sondou aplikováno 200 mg/kg pigmentu denně po celou dobu trvání pokusu. Kontrolním myším byl sondován shodný objem fyziologického roztoku.
Rostoucí nádory byly v průběhu pokusu každý 3. - 4. den měřeny a byl kalkulován objem rostoucího nádoru podle vzorce V = a x b2 x ττ/6, kde a = délka tumoru, b = šířka tumoru. Současně byly myši každý 3. - 4. den váženy. 30., 45. a 60. den po první perorální aplikaci byla myším z očního plexu opět odebrána krev pro stanovení krevního obrazu. Pokus byl ukončen po uhynutí všech myší.
Hodnocení pokusu bylo provedeno na základě porovnání růstových křivek tumorů u jednotlivých pokusných skupin ve srovnání se skupinou kontrolní 10., 21. a 31. den pokusu bylo spočítáno % inhibice růstu nádoru - % TGI (tumor growth inhibition), pro průměrný objem tumoru, % TGI = [1(průměrný objem tumoru v léčené skupině/ průměrný objem tumoru v kontrolní skupině)] x 100.
% Dosažené inhibice nádorového růstu (%TGl)
| 10. den | 21.den | 31.den | |
| Melanom B16 | +20,68 | 36,06 | 16,36 |
| Ca colon CT26 | 52,33 | 48,76 | 56,29 |
| Ca mléčné žlázy 4T1 | 33,21 | 34,41 | 30,19 |
| Lewisův plícni karcinom | 14,89 | 1,89 | |
| Leukémie L1210 | 57,18 | 15,08 | +7,02 |
Červené barvivo mělo statistický významný inhibiční účinek na růst ca kolon CT26 u inbrednich myši BALB/c. 31. den pokusu bylo dosaženo 56,29% inhibice nádorového růstu proti kontrolní skupině (100%).
PV 2009-795
27.11.2009
PS3654CZJ
13.1.2010
Červené barvivo statistický významně prodlužovalo přežití inbredních myší BALB/c s rostoucím ca colon CT26. Průměrná doba přežití léčených myší byla 57,63 dne a u kontrolní skupiny pouze 32,88 dne.
Červené ban/ivo nemělo statistický významný vliv na růst melanomu B16 u inbredních myší C57B16 a na růst Lewisova plicního karcinomu u inbredních myši C57B16. Látka také statisticky významně neovlivňovala přežívání pokusných zvířat s uvedenými nádory.
Červené barvivo přechodně statistický významně inhibovalo růst karcinomu mléčné žlázy 4T1 (od 17. do 28. dne pokusu). Dosažené % inhibice nádorového růstu bylo 21. den pokusu pouze 34,41 % proti kontrolní skupině (100 %). Červené barvivo nemělo statistický významný vliv na přežití pokusných myší s rostoucím karcinomem mléčné žlázy 4T1.
Červené barvivo mělo v počáteční fázi terapie statisticky významný inhibiční účinek na růst leukemie L1210 u inbredních myší kmene DBA 2, a to od 7. do 10. dne pokusu.
Dosažené % inhibice nádorového růstu 10. den pokusu bylo 57,18% proti kontrolní skupině (100%). V další fázi terapie byla látka neúčinná. Látka neměla statistický významný vliv na přežití pokusných myší s leukémií L1210.
Červené barvivo nevyvolávalo statistický významné změny krevního oběhu u pokusných zvířat s nádorovým onemocněním ve srovnání s kontrolní neléčebnou skupinou.
Vliv červeného barviva na růst lidského karcinomu colon (linie HCT 116)
Cílem předkládané studie bylo stanovit protinádorový účinek červeného barviva na růst lidského karcinomu colon (linie HCT 116) subkutánné (s.c.) transplantovaného do podkoží nu/nu myší.
Aplikovaný roztok barviva se připravoval bezprostředně před každou aplikací, byl ředěn pitnou vodou, aplikován byl denně perorálně (p. o v dávce 250 mg/kg, 5mg/20g), v objemu 0,2 ml/20g, 10 ml/kg) tělesné hmotností. Kontrolním skupinám byl aplikován denně, p.o., shodný objem pitné vody (0,2 ml/20g, 10 ml/kg tělesné hmotnosti).
PV 2009-795
27.11.2009
PS3654CZ_1
13.1.2010
K pokusu byla použita lidská nádorová linie karcinomu colon (HCT-116), byla primárně získána z Evropské nádorové banky ECACC (European Collection of Cell Cultures, CAMR, Salisbary, Wiltshire SP40JG, United Kingdom).
V tkáňové kultuře byla tato nádorová linie namnožena a nu/nu myším bylo s.c. aplikováno 1 x 107 nádorových buněk společně s 0,1 ml Matrigelu - na pravý bok myši.
K pokusu byly použity outbrední nu/nu myši kmene CD-1, samice, tělesné hmotnosti 18 - 20g, celkem 32 ks, 16 myší pokusných a 16 myší kontrolních. Myši byly chovány v air liminal flow boxech, podestýlány radiačně sterilizovanou podestýlkou, krmeny radiačně sterilizovanou dietou ST-1 a napájeny sterilizovanou vodou ad libitum.
Den před zahájením podávání látky (den 0) byla myším odebrána krev z očního plexu a byl stanoven výchozí krevní obraz. Za 24 hodin po odběru bylo nu/nu myším CD-1 zahájeno perorální podávání pigmentu, po dobu 10 dní (pokusným myším bylo perorálně sondou aplikováno 250 mg/kg pigmentu, 11 den byly nu/nu myším s.c. inokulovány nádorové buňky, na pravý bok myší, a to v počtu 1 x 107 /myš. Po inokulaci nádorových buněk bylo plynule pokračováno v terapii preparátem u pokusné skupiny, kontrolním myším bylo po stejnou dobu sondou podáváno shodný objem pitné vody. Pokus byl ukončen 36. den po zahájení perorálního podání pigmentu.
Hodnocení pokusu bylo provedeno na základě porovnání růstových křivek tumorů u pokusné skupiny ve srovnání se skupinou kontrolní. V průběhu a na konci pokusu bylo spočítáno % inhibice růstu nádoru - % TGI (tumor growth inhibition), pro průměrný objem tumoru % TGI = [ (1 - (průměrný objem tumoru v léčené skupině / průměrný objem tumoru v kontrolní skupině)] x 100. Získané výsledky byly statisticky hodnoceny neparametrickým oboustranným Studentovým t - testem.
Červené barvivo preventivním perorálním podáváním 10 dní před s.c. aplikací nádorových buněk a následně denně podávané i po jejich aplikaci prodlužovalo statisticky významně dobu latence nárůstu ca colon (HCT-116) u pokusných nu/nu myší, v průměru o 7,93 dne na 18,56 dne (o 74%) na 174,6%
PS3654CZ1
13.1.2010
PV 2009-795
27.11.2009 proti kontrolní neléčené skupině, ve které byl nárůst tumoru zjištěn za 10,63 dne (100%).
Preparát částečně inhiboval růst lidského karcinomu colon (linie HCT116) na nu/nu myších. Dosažená inhibice byla statisticky významná od 18. do 36. dne pokusu, a to na 1% hladině významnosti. Dosažené % inhibice růstu tumoru proti kontrolní skupině bylo (% TGI) 18. den pokusu 64,4%, 22. den pokusu 56,1%, 25. den 53,8%, 29. den 47,04%, 32. den 39,53%, 36. den 31,61%. Ztráta tělesné hmotnosti nu/nu myší byla statisticky významná na 1% hladině významnosti od 11. dne do 36. dne terapie.
Z výsledku je zřejmé, že pigment částečně inhiboval růst lidského karcinomu colon (linie HCT-116) u nu/nu myší, zvláště příznivě se projevil efekt preventivního podávání preparátu od prvního dne pokusu, tj. ještě před transplantací nádorových buněk. S přibývající dobou podávání preparátu se % dosažené inhibice růstu tumoru postupné snižovalo.
Zmenšeni nádoru po podáni preparátu a nástup účinnosti proti rakovině jsou graficky znázorněny na obr. 1.
Indikace
Zostra inhibuje růst nádorových buněk u laboratorních pokusných zvířat Melanom B16, Ca. colon CT26, Ca. mléčně žlázy, Lewisův plicní karcinom a Leukémie L1210.
Nepůsobí negativně na složení krve. Jeho suplementace značně povzbuzuje aktivitu bílých krvinek.
Neprojevuje antibiotickou aktivitu s nezjistitelnou LD50.
Nevyvolává podrážení a alergii a rovněž se nevyskytují vedlejší účinky ani nepříznivé reakce.
Specificky snižuje cytotoxickou aktivitu NK buněčné subpopulace a zároveň snižuje absolutní počty buněk produkujících protilátky IgG.
Preparát stimuluje aktivovanou B-buněčnou subpopulaci (podpora antiinfekční imunity) a snižuje spontánní proliferací aktivitu lymfocytů.
PV 2009-795
27.11.2009
PS3654CZ1
13.1.2010
Zostra omezuje vytvoření nádorových buněk (reguluje vznik volných radikálů a ochraňuje antioxidační enzymové systémy).
Podpůrný prostředek při zánétlivých stavech, při funkčních potížích GIT, pomáhá při léčbě prekanceróz různých orgánů, doplněk léčby malignit.
Zvyšuje obranyschopnost organizmu ve smyslu zvýšeného množství Tlymfocytů.
Preparát podporuje léčbu při zánětech střev, nemocech tračníku, tlustého střeva a konečníku.
Normalizuje fyziologickou funkci jater, ledvin, žaludku a nadledvinek. Pozitivně ovlivňuje také preventivní léčbu.
Použití jako fyziologicky aktivní látky neoplazmatických procesech a také při degenerativních onemocněních.
Preparát je schopen vychytávat volné kyslíkové radikály a neutralizuje toxické formy volného kyslíku. Reguluje rovnováhu oxidačních a obnovitelných procesů.
Molekulární mechanizmus barviva je regulace oxidačních procesů a neutralizace volných radikálů, což ochraňuje antioxidační enzymové systémy.
Když bychom krátce charakterizovali funkce červeného barviva jako proti nádorového prostředku, tak se můžeme dostat k následujícímu - je to nejsilnější antioxidant jako možný předpokládaný blokátor oxidačních procesů.
Příklady provedení vynálezu
Složení živného prostředí
Příklad 1
Krystalový cukr
Kukuřičný extrakt
Přiklad 2
Krystalový cukr
Kvasnicový extrakt až 20 g/l až 10 g/l až 20 g/l a ž 10 g/l
PV 2009-795
27.11.2009
PS3654CZ_1
13.1.2010
Přiklad 3
Krystalový cukr
Kvasnicový autolyzát až 20 g/l až 12 g/l
Přiklad 4
Produkce barviva probíhá ve fermentoru za aerobních podmínek s pH
5,8 až 6,2 při teplotě 27 až 29 Ό. Produkovaná látka je sekundárním metabolitem houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca kmen ES. Fermentace je zpravidla ukončena po 68 až 72 hodinách.
Přiklad 5 g koncentrátu získaného postupem podle příkladu 4 se homogenizuje se 70 g maltodextrinu a vysuší se na sprejové sušárně při teplotě 180 až 220° C.
g koncentrátu získaného postupem podle přikladu 4 se homogenizuje s 50 g škrobu nebo maltodextrinu a vysuší se na sprejové sušárně při teplotě 180 až 220° C.
Příklad 6
Produkty podle příkladů 1 až 4 se v množství 80 až 300 mg/kg přidávají do potravinářských výrobků, například uzenin, cukrovinek, jogurtů, nealkoholických i alkoholických nápojů apod. Dále se z nich připravují vodné, lihové nebo vodo-lihové roztoky o koncentracích účinné látky 5 až 20% obj.
Přiklad 7
Produkt získaný podle přikladu 1 až 4 se homogenizuje s farmaceutickým masťovým základem ve formě emulze, homogenizuje se s maltodextrinem a lisuje na tablety s obsahem účinné látky 10, 50 a 100 mg. Tablety je možno připravovat i s laktózou, glukózou a jinými farmaceuticky přijatelnými nosiči,
PS3654CZJ
13.1.2010
PV 2009-795
27.11.2009
Přiklad 8
V průběhu výroby červeného barviva z odpadního mycelia Penicillium oxalicum var. Armeniaca kmen ES, byl po varu mycelia v koncentrovaném roztoku alkalického louhu z frakce buněčných stěn metodou kyselé extrakce ředěnou kyselinou chlorovodíkovou získán chitosanHydrolýzou izolovaného chitosanu lze získat glukosamin. Tuto hydrolýzu je možno provést koncentrovanou kyselinou za horka, nebo s použitím různých enzymů.
Charakteristika
Barvivo je rozpustné v alkalické vodě při pH = 8 - 9 (NHs), ledové kyselině octové (odstín červeného roztoku se nezmění), vaječném bílku, etanolu, metanolu a butanolu. Látka je stabilní, v neutrálním roztoku při povarení po dobu 30 min.
| Chemická čistota | Metoda | |
| stanovení | ||
| Sušina | 91,5 % | gravimetrie |
| Obsah pigmentu | 84,42% | |
| spektrometrie | ||
| Popel | 12,0% | gravimetrie |
| Aminový dusík | 2,94 (N | x 6,25) formulová |
| titrace |
| Těžké kow | |||
| arzen hydridy | ne více než | 0,015 mg/kg | AAS- |
| olovo kyveta | ne více než | 7,98 mg/kg | AAS |
| rtuť | ne více než | 0,0048 mg/kg | AAS - |
AMA
PS3654CZ1
13.1.2010
PV 2009-795
27.11.2009
| kadmium | ne více než | 0,036 mg/kg | AAS- |
| kyveta | |||
| Mvkotoxinv | |||
| Aflatoxiny (suma Bl, B2, Gl ,G2) | ne více než | 10 pg/kg | HPLC- |
| FLD | |||
| Ochratoxin A | ne více než | 20 pg/kg | HPLC- |
| FLD | |||
| sterigmatocystin | ne více než | 10 pg/kg | TLC |
| Fluorensc. | |||
| T-2 toxine | ne více než | 50 pg/kg | GLC-ECD |
| sekalo nová kyselina | ne více než | 12,5 pg/kg | HPTLC |
| Mikrobiální čistota | |||
| celkový počet bakterií | 5000/g | ||
| celkový počet plísni a kvasinky | 100/g | ||
| Salmonella | negativní ve | 25g vzorku | |
| Escherichia colli | negativní ve | 25g vzorku |
Identifikace: spektrometrie
Dvě spektrometrická maxima ve vodném roztoku barviva při pH = 7,0 -
7,5 Ai max. = 420 nm, A2 max. = 498 nm.
Poměr dvou hodnot A2: Ai určuje kvalitu produktu, která standardně činí
1,2-1,5.
Způsob určení procenta: naváží se 10 mg krystalického pigmentu a rozpustí se za stálého míchání ve 100 ml destilované vody s úpravou pH na hodnotu 8,5 - 9,0 pomocí amoniakového roztoku. Roztok se kvantitativné převede do odměrné baňky o objemu 1000 ml a doplní se destilovanou vodou
PV 2009-795
27.11.2009
PS3654CZ1
13.1.2010 na daný objem. Roztok se promíchá, a změří se max. absorbance v kyvetě (1 cm) při délce vlny A max. = 498 nm proti destilované vodě.
Procentuální obsah látky (X%) ve zkoumaném vzorku se vypočte podle vzorce:
IOOxAxIOO
X% =----------------0,72 x W kde: A - hodnota absorpce při délce vlny A max. = 498nm
0,72 - konstanta
W - hmotnost vzorku (10 mg v 1000 ml vody)
Průmyslová využitelnost
Konečným produktem technologie je přírodní látka mikrobiologického původu, která je použitelná pro potravinářský a farmaceutický průmysl jako červené potravinářské barvivo, jako potravinový doplněk s protinádorovým účinkem a jako potravina nového typu s ochranným účinkem.
Z odpadního mycelia houby byl získán chitosan a glukosamin jako konečný produkt hydrolýzou izolovaného chitosanu.
Claims (18)
- PV 2003 785
PV 2009-795 PS3654CZ 1 27.11.2009 21 13.1.2010 PATENTOVÉ NÁROKY 1. Kmen ES mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca CCM 8374 produkující červené barvivo. - 2. Způsob kultivace kmene CCM 8374, vyznačující se tím, že se provádí fermentaci při teplotě 27 až 29C po dobu 64 až 68 h p ři pracovním přetlaku 0,05 až 0,1 MPa, s kontinuálním promícháváním rychlostí 80 až 200 min'1 při odvodu vzduchu v poměru 20 až 80 l/h, při pH až 5,6 až 6,2 s obsahem uhlohydrátů a amonného dusíku, načež se z živného prostředí oddělí kapalina, ze které se následně izoluje 5 až 10 g/l přírodní látky mikrobiologického původu ve formě tmavě červeného amorfního prášku, který má ve vodném roztoku krvavě červenou barvu.
- 3. Způsob kultivace kmene CCM 8374 podle nároku 2, vyznačující se tím, že od roztoku barvicích látek filtrováním na kalolisu nebo odstředivkou oddělí biomasa, načež se pro odstranění makromolekulárních bílkovin a různých příměsí provede druhý stupeň filtrace mikrofiltrací s použitím membrán 10 000 až 20 000 pm a pro oddělení nízkomolekulámích solí a vody se provede filtrace na ultrafiltračním zařízení na membránách 200 až 500 pm, čímž se získá koncentrát s obsahem barviva 80 až 100 g/l.
- 4. Způsob kultivace kmene CCM 8374 podle nároku 3, vyznačující se tím, že po filtraci se z odpadního mycelia Penicillium oxalicum var. Armeniaca kmen ES získá chitosan a případně i glukosamin.
- 5. Potravinový doplněk získaný způsobem podle nároku 3, vyznačující se tím, že sestává z 20 až 99,99 % hmotnostních produktu získaného způsobem podle nároku 3, a 0,01 až 80 % hmotnostních fyziologicky inertního nosiče a popřípadě pomocných látek.
- 6. Barvivo získané způsobem podle nároku 3, vyznačující se tím, že je má červenou barvu a tvoří přísadu do potravin.PS3654CZ_113.1.2010PV 2009-79527.11.2009
- 7. Prostředek získaný způsobem podle nároku 3, vyznačující se tím, že má červenou barvu a jeho chromoforem je antrachinonový derivát obecného vzorce I kde Ri je hydroxyl a R2 je 3metyl-1,3 butadienyl a tyto substituenty jsou popřípadě spolu cyklizované přes kyslík hydroxylu.
- 8. Prostředek podle nároku 7, vyznačující se tím, že chromoforem je 8ethyl-3,6 dihydroxy-5[(IE)-3 metyl -1,3 butadienj-9,10 dioxo-9,10 dihydroantracen-2-karboxylová kyselina.
- 9. Prostředek podle nároku 7, vyznačující se tím, že chromoforem je 6ethyl- 10-hydroxyl 3,3 dimethyl-7,12dihydro-3H-nafto[2,3f] chromen-9karboxylová kyselina.
- 10. Použití prostředku podle nároku 8 nebo 9 jako účinné složky přípravku s profylaktickým protinádorovým účinkem.
- 11. Použití prostředku podle nároku 8 nebo 9 jako účinné složky přípravku s profylaktickým účinkem na nádor melanom B16.
- 12. Použití prostředku podle nároku 8 nebo 9 jako účinné látky přípravku s profylaktickým účinkem na nádor Ca colon CT26.
- 13. Použití prostředku podle nároku 8 nebo 9 jako účinné látky přípravku s profylaktickým účinkem na nádor Ca mléčné žlázy 4T1.PS3654CZ_113.1.2010PV 2009-79527.11.2009
- 14. Použiti prostředku podle nároku 8 nebo 9 jako účinné látky přípravku s profylaktickým účinkem na Lewisův plícní karcinom.
- 15. Použití prostředku podle nároku 8 nebo 9 jako účinné látky přípravku s profylaktickým účinkem na leukémii L1210.5
- 16. Použití prostředku podle nároku 8 nebo 9 jako účinné látky přípravku s profylaktickým účinkem na lidsky karcinom colon HCT 116.
- 17. Způsob přípravy přípravku s účinnou látkou pro použití podle kteréhokoli z nároků 10 až 16, vyznačující se tím, že se účinná látka homogenizuje farmaceutickým masťovým základem ve formě emulze, následně10 se homogenizuje s maltodextrinem a lisuje se do tablet s obsahem účinné látky 10, 50 a 100 mg.
- 18. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že se během homogenizace přidává glukóza a případně i další farmaceuticky přijatelný nosič.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20090795A CZ302696B6 (cs) | 2009-11-27 | 2009-11-27 | Kmen mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca a zpusob výroby cerveného barviva |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20090795A CZ302696B6 (cs) | 2009-11-27 | 2009-11-27 | Kmen mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca a zpusob výroby cerveného barviva |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2009795A3 true CZ2009795A3 (cs) | 2011-06-08 |
| CZ302696B6 CZ302696B6 (cs) | 2011-09-07 |
Family
ID=44114436
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20090795A CZ302696B6 (cs) | 2009-11-27 | 2009-11-27 | Kmen mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca a zpusob výroby cerveného barviva |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ302696B6 (cs) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022179646A1 (en) * | 2021-02-28 | 2022-09-01 | Gesmed Biotec s.r.o. | Method of making a composite pigment based on red, purple, orange and brown dyes with an antioxidant effect and the resulting composite pigment |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA028640B1 (ru) * | 2016-06-22 | 2017-12-29 | Сардарян, Гагик Эдуардович | Красный пигмент группы антрахинонов, способ получения красного пигмента штамма гриба penicillium oxalicum var. armeniaca, продукт способа, его применение, фармацевтическая композиция и способ профилактики и/или лечения онкологических заболеваний |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ97098A3 (cs) * | 1998-03-30 | 1999-10-13 | Eduard Dr. Sardaryan | Kmen mikroorganismu Penicillium oxalicum var. Armeniaca a jeho použití |
| CZ20002950A3 (cs) * | 2000-08-10 | 2001-12-12 | Eduard Dr. Sardaryan | Prostředek s profylaktickým protinádorovým účinkem |
-
2009
- 2009-11-27 CZ CZ20090795A patent/CZ302696B6/cs not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022179646A1 (en) * | 2021-02-28 | 2022-09-01 | Gesmed Biotec s.r.o. | Method of making a composite pigment based on red, purple, orange and brown dyes with an antioxidant effect and the resulting composite pigment |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ302696B6 (cs) | 2011-09-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109939027B (zh) | 一种猴头菌发酵制备含麦角硫因的化妆品原液的方法 | |
| US7883708B2 (en) | Substance derived from basidiomycetes culture, method for producing it and its use | |
| US20130011384A1 (en) | Use of a Material, Produced from Fungal Fermentation, as a Food Supplement | |
| US20120124703A1 (en) | Novel coprinus comatus and tremella mesenterica mushroom strains, products and extracts thereof and compositions comprising them | |
| CN101233225B (zh) | 云芝菌株、其提取物及其应用 | |
| EP1320300B1 (en) | Food supplement | |
| CZ2009795A3 (cs) | Kmen mikroskopické houby Penicillium oxalicum var. Armeniaca, zpusob jeho kultivace a využití | |
| CN114875104B (zh) | 一种桑叶酵素原液及其制备方法和应用 | |
| JP3063930B2 (ja) | アロサミジン化合物及びその製造法 | |
| JP2008106008A (ja) | ゲニポシド酸誘導体 | |
| KR20110060002A (ko) | 숙취 개선용 조성물 | |
| KR102876402B1 (ko) | 커피박 효소분해물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물 | |
| EA028640B1 (ru) | Красный пигмент группы антрахинонов, способ получения красного пигмента штамма гриба penicillium oxalicum var. armeniaca, продукт способа, его применение, фармацевтическая композиция и способ профилактики и/или лечения онкологических заболеваний | |
| RU2270868C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИКОПИНА, ФОСФОЛИПИДОВ, ЖИРНЫХ КИСЛОТ И ЭРГОСТЕРИНА ПУТЕМ СОВМЕСТНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ (+) И (-) ШТАММОВ ГРИБА Blakeslea trispora | |
| JPWO1997034012A1 (ja) | 生理活性物質ｔｋｒ１７８５類、製造方法及び微生物 | |
| KR101194402B1 (ko) | 불로초속 버섯 균사체 가노데르마 레지나세움 ｋｆｒｉ-ｍ101 균주 및 이를 이용한 당뇨의 예방 및 개선용 조성물 | |
| JP2008127301A (ja) | 新規抗酸化性リグナン化合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20181127 |