CZ2013104A3

CZ2013104A3 - Farmaceutické prípravky a metody lécby

Info

Publication number: CZ2013104A3
Application number: CZ20130104A
Authority: CZ
Inventors: Iliich Epshtein@Oleg; Alexandrovna Sergeeva@Svetlana; Fyodorovna Dolgovyh@Liudmila; Anatolievna Kheyefets@Irina; Leonidovna Dugina@Julia; Alexandrovna Zabolotneva@Julia; Alexandrovich Tarasov@Sergey
Original assignee: Iliich Epshtein@Oleg
Priority date: 2010-07-15
Filing date: 2011-07-15
Publication date: 2013-05-29
Also published as: GB201302653D0; ITTO20110641A1; FI20135146L; AU2011278040A1; SG187037A1; PE20131338A1; NO20130219A1; EA029400B1; EP2593477A2; EE201300005A; DE112011102349T5; US8865163B2; LT5987B; BR112013000841A2; MX361778B; CA2805091A1; EA201300133A1; JP2013535436A; ES2542042A2; MY158183A

Abstract

Resení poskytuje farmaceutické prípravky, obsahující aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru, a jejich pouzití pri lécbe obezity a souvisejících metabolických poruch. Resení dále poskytuje farmaceutické prípravky, obsahující aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidního receptoru a aktivovanou potencovanou formu protilátek proti proteinu S-100, pro pouzití pri lécbe závislosti na psychoaktivních látkách.

Description

Farmaceutické přípravky a metody léčby

OBLAST TECHNIKY

Předložený vynález se týká farmaceutických přípravků, které mohou být použity při léčbě obezity a souvisejících metabolických poruch a pro léčení závislosti na psychoaktivních látkách, zejména nikotinu.

DOSAVADNÍ STAV TECHNIKY

Obezita je dnes považována za chronické onemocnění, které vyžaduje léčbu, aby se snížila s ním spojená zdravotní rizika. Nárůst obezity je znepokojivý kvůli zdravotním rizikům spojeným s obezitou, včetně ischemické choroby srdeční, mrtvice, hypertenze, cukrovky druhého typu, dyslipidémie, spánkové apnoe, osteoartritidy, chorob žlučníku, deprese a některých druhů rakoviny (například děložní sliznice, prsu, prostaty a tlustého střeva). Negativní zdravotní důsledky obezity jsou druhou nejčastější příčinou zbytečných úmrtí ve Spojených státech. Viz: McGinnis M, Foege W H., „Actual Causes of Death in the United States, JAMA, 270, 2207 12 (1993).

Má se za to, že 5-10% snížení tělesné váhy může podstatně zlepšit metabolické hodnoty, jako je například hladina glukózy v krvi, zvýšený krevní tlak a koncentrace lipidů.

Běžně dostupné léky, předepisované pro zvládání obezity, obecně snižují váhu tím, že navozují pocit sytosti nebo sníží vstřebávání tuků z potravy. Sytosti je dosaženo zvýšením synaptické hladiny noradrenalinu, serotoninu nebo obou. Například stimulace serotoninového receptoru podtypu 1B, 1D a 2C a 1- a 2adrenergních receptoru snižuje příjem potravy tím, že reguluje pocit sytosti. Viz. Bray GA, „The New Era of Drug Treatment. Pharmacologic Treatment of Obesity: Symposium Overview Obes. Res., 3 (suppl 4), (1995). Adrenergní látky (například diethylpropion, benzfetamin, fendimetrazin, mazindol a fentermin) působí tím, že ovlivňují centrální receptory noradrenalinu a dopaminu podporou uvolňování

katecholaminu. Starší adrenergní léky na hubnutí (např. amfetamin, metamfetamin a fenmetrazin), které silně zasahují do dopaminových drah, se již nedoporučuji vzhledem k riziku jejich zneužívání. Serotoninergní látky používané k regulaci chuti k jídlu, fenfluramin a dexfenfluramin, nejsou již k dispozici pro použití.

Vzhledem k vedlejším nežádoucím účinkům a vzniku závislosti, vyplývající z použití těchto psychoaktivních látek, není účinný a bezpečný lék s centrálním účinkem dosud k dispozici. A tak stále existuje potřeba účinnější a bezpečnější terapeutické léčby pro snížení nebo prevenci obezity a souvisejících metabolických poruch.

Kromě obezity existuje také neuspokojená potřeba léčby závislosti na návykových látkách.

Tabáková závislost představuje nejvýznamnější příčinu nemocí a úmrtí v naší společnosti, kterým by bylo lze předejít, odpovědnou za tisíce úmrtí ročně. Polovina všech kuřáků umírá na nemoci přímo spojené s užíváním tabáku a mnoho kuřáků 15 trpí značnou nemocností. Přibližně 15 milionů kuřáků se snaží přestat kouřit, ale jen jeden milion z nich každoročně uspěje v odvykání kouření.

Cigaretový kouř obsahuje velký počet velmi složitých látek, z nichž nejvýznamnější je nikotin, což je látka, která u kuřáků cigaret vyvolává závislost. Při léčbě závislosti na tabáku se ukázaly jako účinné některé farmakoterapie. Patří mezi 20 ně náhradní nikotinové terapie ve formě žvýkaček, náplastí, nosních sprejů a inhalátorů. Jako metoda léčby závislosti na nikotinu byly vyvinuty nenikotinové farmakologické terapie. K možným činidlům patří terapie blokující nikotin, léky ovlivňující serotonergní neurotransmisi, antidepresiva, anxiolytika, klonidin a smyslová náhrada v dýchacích cestách (Rose, 1996 a Cinciripini et al., 1998 25 Oncology 12: 249-256). Terapie blokující nikotin (označovaná také jako aplikace antagonistů receptorů nikotinu) využívá látky, které obsazují nikotinové receptory a tím zeslabují odměnu získanou z užití tabáku (Clarke, 1991 Br. J. Addict. 86: 501505). Nicméně existuje potřeba efektivnější léčby závislosti na tabáku.

Kanabinoidní receptory patří do třídy receptorů buněčných membrán v rámci 30 superrodiny receptorů, spřažených s G proteinem. Kanabinoidní receptory jsou aktivovány třemi hlavními skupinami ligandů, (a) endokanabinoidy (produkovanými těly savců), (b) rostlinnými kanabinoidy (např. THC, produkovaný rostlinou konopí) a , _β « Ο * #· * * * ® · « _s - _; # - * 9 = * ····»· · · t * * * * · (c) syntetickými kanabinoidy (např. HU-210, prvně syntetizován v roce 1988 z (1R,5S)-myrtenolu). Tyto kanabinoidy vyvolávají svůj účinek vazbou na kanabinoidní receptory, umístěné v buněčné membráně. Endokanabinoidy jsou zapojeny v široké škále fyziologických a patofyziologických procesů. V současnosti je většina léků používaných k interakci s endokanabinoidním systémem odvozena z konopí. Konopí získalo největší oblibu jako surovina pro výrobky, jako jsou marihuana a hašiš, a jeho pravidelné užívání může vést k vývoji závislosti.

Byly charakterizovány dva kanabinoidní receptory: kanabinoidní receptor 1 (CB1), centrální receptor nalézající se v savčím mozku a periferních tkáních a kanabinoidní receptor 2 (CB2), periferní receptor, nalézající se pouze v periferních tkáních. Receptor CB1 je exprimován hlavně v několika oblastech mozku, včetně limbického systému (amygdala, hippocampus), hypothalamu, mozkové kůry, mozečku a bazálních ganglií. Bylo prokázáno, že sloučeniny, které jsou agomsty nebo antagonisty jednoho nebo obou těchto receptorů, poskytují řadu farmakologických účinků. Viz například Pertwee, RG, Pharmacology of cannabinoid CB1 and CB2 receptors, Pharmacol. Ther, (1997), 74:129-180 a Di Marzo, V., Melck, D., Bisogno, T., DePetrocellis, L: Endocannabinoids: endogenous cannabinoid receptor ligands with neuromodulatory action, Trends Neurosci. (1998), 21.521-528.

Léčebný účinek extrémně zředěné (neboli ultra-nízké) formy protilátek potencovaných podle homeopatické technologie (aktivovaná potencovaná forma) byl objeven původcem tohoto vynálezu, Dr. Olegem I. Epshteinem. US patent č. 7,582,294 popisuje lék pro léčení benigní prostatické hyperplazie nebo zánětu prostaty podáním homeopaticky aktivované formy protilátek proti prostatickému specifickému antigenu (PSA).

S-100 protein je kyselý cytoplazmatický protein, exprimovaný v nervovém systému. Bylo ukázáno, že S-100 protein má úlohu v úzkosti. Viz Ackermann et al., S100A1 -deficient male mice exhibit increased exploratory activity and reduced anxiety-related response, Biochim. Biophys. Acta 2006, 63 (11): 1307-19; Diehl et al., Long lasting sex-specific effects upon behavior and S100b levels after maternal separation and exposure to a model of post-traumatic stress disorder in rats, Brain Res., 2007, 144: 107-16, na něž se zde odkazuje.

Bylo prokázáno, že ultra-nízké dávky protilátek proti S-100 proteinu mají anxiolytické, antiastenické, antiagresivní, protistresové, antihypoxické, antiischemické, neuroprotektivní a nootropické účinky. Viz Castagne V. et al., Antibodies to S100 proteins have anxiolytic-like activity at ultra-low doses in the adult rat, J. Pharm. Pharmacol. 2008, 60 (3): 309-16; Epshtein O. I., Antibodies to calciumbinding S100B protein block the conditioning of long-term sensitization in the terrestrial snail, Pharmacol. Biochem. Behav., 2009, 94(1): 37-42; Voronina T.A. et al., Chapter 8. Antibodies to S-100 protein in anxiety-depressive disorders in experimental and clinical conditions. In „Animal models in biological psychiatry , Ed. Kalueff A.V. N-Y, „Nova Science Publishers, Inc.“, 2006, pp. 137-152, na něž se zde odkazuje.

Nadále trvá potřeba nových léčivých přípravků s požadovanou terapeutickou účinností pro léčbu nadměrné tělesné hmotnosti nebo obezity a drogové závislosti.

PODSTATA VYNÁLEZU

Vynález poskytuje v jednom aspektu farmaceutický přípravek, obsahující aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru. Přednostním lidským kanabinoidním receptorem je kanabinoidní receptor 1 (CB1). Předpokládá se, že aktivovanou potencovanou formou protilátky je v tomto aspektu vynálezu v celém lidském organismu kanabinoidní receptor 1. Konkrétně se předpokládají konkrétní sekvence uvedené v detailním popisu vynálezu. Předpokládá se, že aktivovaná potencovaná forma protilátky je k polypeptidickému fragmentu lidského kanabinoidního receptoru 1. Aktivovaná potencovaná forma protilátky je přednostně ve formě směsi homeopatických ředění C12, C30 a C200. V obzvláště výhodné variantě je aktivovaná forma protilátky ve formě směsi homeopatických ředění C12, C30 a C200, impregnované na pevný nosič. Předpokládá se, že aktivovanou potencovanou formou protilátky k lidskému kanabinoidnímu receptoru je monoklonální, polyklonální nebo přírodní protilátka. Přednostně je aktivovanou potencovanou protilátky k lidskému kanabinoidního receptoru protilátka polyklonální. Protilátka proti lidskému kanabinoidního receptoru může být připravena postupným setinným ředěním spojeným s protřepáním každého ředění.

...... ·· ' *'* *’

Dále vynález poskytuje způsob léčby obezity a souvisejících metabolických poruch, který zahrnuje podávání farmaceutického přípravku v jakékoli variantě nebo provedení farmaceutického přípravku podle vynálezu. Farmaceutický přípravek může být podáván pacientovi v jedné nebo ve dvou formách jednotkové dávky od jednou denně až po čtyřikrát denně. Zejména se uvažuje podávání dvakrát denně.

Dále vynález poskytuje způsob léčby závislosti na nikotinu, který zahrnuje podávání farmaceutického přípravku v jakékoli variantě nebo provedení farmaceutického přípravku podle vynálezu. Farmaceutický přípravek může být podáván pacientovi v jedné nebo ve dvou formách jednotkové dávky od jednou denně až po čtyřikrát denně. Zejména se uvažuje podávání dvakrát denně.

Dále vynález poskytuje způsob modifikace antropometrických parametrů savce s očekávaným užitkem z takové změny, který zahrnuje podávání farmaceutického přípravku v jakékoli variantě nebo provedení farmaceutického přípravku podle vynálezu. V jednom z provedení je antropometrickým parametrem obvod pasu. V jednom z provedení je antropometrickým parametrem poměr pasu a výšky. V jiném provedení je antropometrickým parametrem poměr pasu k bokům. K dispozici jsou různé varianty.

Dále vynález poskytuje způsob snížení tělesné hmotnosti savce, který zahrnuje podávání farmaceutického přípravku v jakékoli variantě nebo provedeni farmaceutického přípravku podle vynálezu. V jedné variantě je tělesná hmotnost snížena o nejméně 5%. V jiné variantě je tělesná hmotnost snížena o nejméně 10%, tělesná hmotnost je snížena o nejméně 15%. V další variantě je tělesná hmotnost snížena o méně než 15 %.

Dále vynález poskytuje způsob snížení nárůstu tělesné hmotnosti savce, který zahrnuje podávání farmaceutického přípravku v jakékoli variantě nebo provedeni farmaceutického přípravku podle vynálezu. V jedné variantě je narůst telesne hmotnosti nižší o nejméně 10% V jiné variantě je nárůst tělesné hmotnosti mzsi o nejméně 30 %.

Dále vynález poskytuje způsob usnadnění snížení příjmu potravy u savce s očekávaným užitkem takového snížení, který zahrnuje podávání farmaceutického ” · * “ “ ^κ • Ο - r , , - -· : « * « >r · « ' · * * « - * θ «»**·· · * · * » ^Λ · * přípravku v jakékoli variantě nebo provedení farmaceutického přípravku podle vynálezu.

Dále vynález poskytuje farmaceutický přípravek obsahující aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru a aktivovanou potencovanou formu protilátky proti S-100 proteinu. V jedné variantě je protilátkou proti S-100 proteinu protilátka proti celému S-100 proteinu. Sekvence pro S-100 protein jsou uvedeny v popisu přihlášky. Protilátka proti S-100 proteinu je přednostně ve formě směsi C12, C30 a C200 homeopatických ředění, impregnované na pevný nosič. Farmaceutický přípravek u tohoto provedení vynálezu může obsahovat protilátku proti S-100 proteinu, kterou je monoklonální, polyklonální nebo přírodní protilátka. S výhodou je protilátka proti S-100 proteinu polyklonální protilátka. Protilátka proti S-100 proteinu může být připravena postupným setinným redemm spolu s protřepáváním každého ředění.

Dále vynález poskytuje způsob léčení pacienta trpícího závislostí na psychoaktivních látkách, který zahrnuje podávání farmaceutického přípravku, obsahujícího aktivovanou potencovanou formu protilátek proti lidskému kanabinoidnímu receptoru a aktivovanou potencovanou formu protilátek proti S-100 proteinu. Preferovanou psychoaktivní látkou je nikotin. Výhodně vede podávání uvedené kombinace ke statisticky významnému zlepšení schopnosti snášet odvykaní kouřeni, jak bylo zjištěno analýzou údajů z MPSS testu. Podávám uvedené kombinace vede výhodně ke statisticky významnému snížení kouření u pacientů se středně těžkou nikotinovou závislostí, měřeno Fagestrómovým testem závislosti na nikotinu. Podávání uvedené kombinace výhodně vede ke statisticky významnému snížení kouření u pacientů s těžkou nikotinovou závislostí, měřeno Fagestrómovým testem závislosti na nikotinu.

Dále vynález poskytuje farmaceutický přípravek pro použití k léčbě pacienta se závislostí na psychoaktivních drogách uvedeným přípravkem, který je získán použitím a) potencovaného roztoku protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru a b) potencovaného roztoku aktivované potencované formy protilátky proti S-100 proteinu, z nichž každý byl připraven postupným opakovaným ředěním a opakovaným vertikálním protřepáním každého získaného roztoku v souladu • * * · · · * * * * s homeopatickou technologií, a pak buď kombinací potencovaných roztoků smícháním, nebo alternativně impregnací hmoty nosiče uvedenou kombinaci roztoků nebo oddělenými roztoky.

Dále vynález poskytuje farmaceutický přípravek pro použití při léčbě obezity a souvisejících metabolických poruch, který byl získán použitím potencovaného roztoku protilátek proti lidskému kanabinoidnímu receptoru, připraveného postupným opakovaným ředěním a opakovaným vertikálním protřepáním každého získaného roztoku v souladu s homeopatickou technologií, a potom případnou impregnaci hmoty nosiče uvedeným roztokem.

PŘEHLED OBRÁZKŮ NA VÝKRESECH

Obrázek 1 ukazuje vliv ULD anti.-.CB1 a subutraminu na růst tělesné hmotnosti a příjem potravy.

Obrázek 2 ukazuje snížení tělesné hmotnosti po podání ULD antiO-OCBI.

Obrázek 3 ukazuje snížení hmotnosti pacientů o 5 % nebo více.

PODROBNÝ POPIS

Vynález je definován s odkazem na připojené patentové nároky. Dále jsou vysvětleny příslušné definice s ohledem na patentové nároky.

Výrazem „protilátka“, jak je použit v tomto dokumentu, se rozumí imunoglobulin, který se specificky váže, a proto je definován jako komplementární, na konkrétní prostorové a polární uspořádání další molekuly. Protilátky, jak se uvádějí v nárocích, mohou obsahovat kompletní imunoglobulin nebo jeho fragment, mohou být přirozené, polyklonální nebo monoklonální, a mohou zahrnovat různé třídy a izotypy, jako je IgA, IgD, IgE, lgG1, lgG2a, lgG2b a lgG3, IgM atd. Jejich fragmenty mohou zahrnovat Fab, Fv a F(ab')₂, Fab' a podobně. Singulár „protilátka“ zahrnuje i množné číslo „protilátky“.

Výraz „aktivovaná potencovaná forma“, resp. „potencovaná forma s ohledem na protilátky uváděné v tomto dokumentu se používá k označení produktu * ft · » » » r * * · g ····« · · · * * · * homeopatické potenciace jakéhokoli počátečního roztoku protilátek. „Homeopatická potenciace“ označuje použití metod homeopatie k předání homeopatické potence počátečnímu roztoku příslušné látky. I když ne výlučně, může „homeopatická potenciace“ zahrnovat například opakovaná po sobě jdoucí ředění v kombinaci s vnějším působením, zejména (mechanickým) protřepáváním. Jinými slovy, výchozí roztok protilátek je podroben řadě opakovaných ředění a opakovanému vertikálnímu protřepání každého získaného roztoku v souladu s homeopatickou technologií. Přednostní koncentrace výchozího roztoku protilátek v rozpouštědle, kterým je nejlépe voda nebo směs voda/ethanol, je v rozmezí od asi 0,5 do asi 5,0 mg/ml. Přednostní postup pro přípravu každé složky, tj. roztoku protilátek, je použití směsi tří vodných nebo vodně-alkoholových ředění primárního základního roztoku (mateřské tinktury) protilátek, ředěných 100¹², 100³⁰ a 100 ²⁰⁰ krát, což je ekvivalentní setinným homeopatickým ředěním C12, C30, resp. C200. Příklady homeopatické potenciace jsou popsány v US patentech č. 7,572,441 a 7,582,294, na které se zde v plném rozsahu pro uvedený účel odkazuje. Zatímco v patentových nárocích se používá výraz „aktivovaná potencovaná forma“, v příkladech je používán výraz „ultra-nízké dávky“. Výraz „ultra-nízké dávky“ se stal odborným termínem v oblasti zkoumání a využití homeopaticky zředěných a potencovaných forem látky. Výraz „ultra-nízká dávka“ nebo „ultra-nízké dávky“ je míněn jako plně podporující a primární synonymum pro výraz „aktivovaná potencovaná“ forma, používaný v patentových nárocích.

Jinak řečeno, protilátka je v „aktivované potencované“ nebo „potencované“ forme, pokud jsou přítomny tři faktory. Předně, „aktivovaná potencovaná“ forma protilátky je produkt procesu přípravy, uznávaného v oboru homeopatie. Zadruhé, musí „aktivovaná potencovaná“ forma protilátky mít biologickou aktivitu určenu metodami obecně přijímanými moderní farmakologií. A zatřetí, biologickou aktivitu, vykazovanou „aktivovanou potencovanou“ formou protilátky, není možno vysvětlit přítomností molekulární formy protilátky v konečném produktu homeopatického procesu.

Aktivovaná potencovaná forma protilátek může být například připravena podrobením počáteční izolované protilátky v molekulární formě postupným opakovaným ředěním spolu s vnějším působením, jakým je mechanické protřepání.

a * ί· λ ' ^β ·»«·«· · · · »»©*··

Vnější působení během snižování koncentrace může také spočívat například ve vystavení ultrazvukovým, elektromagnetickým nebo jiným fyzikálním vlivům. Publikace V. Schwabe „Homeopathic medicines“, Μ. , 1967, patenty USA číslo 7 229,648 a 4,311,897, na něž zde k uvedenému účelu odkazujeme v plném rozsahu, popisují takové procesy, které jsou obecně přijatými metodami homeopatické potenciace v oboru homeopatie. Tento postup vede k jednotnému postupu snížení molekulární koncentrace počáteční molekulární formy protilátky. Tento postup se opakuje, dokud není dosaženo požadované homeopatické potence. Pro jednotlivou protilátku může být potřebná homeopatická potence určena biologickým testováním mezilehlých ředění v požadovaném farmakologickém modelu. I když ne výlučně, může „homeopatická potenciace“ zahrnovat například opakovaná po sobě jdoucí ředění v kombinaci s vnějším působením, zejména svislým (mechanickým) protřepáním. Jinak řečeno je výchozí roztok protilátek podroben řadě opakovaných ředění a opakovanému vertikálnímu protřepání každého získaného roztoku v souladu s homeopatickou technologií. Přednostní koncentrace výchozího roztoku protilátek v rozpouštědle, kterým je nejlépe voda nebo směs voda/ethanol, je v rozmezí od asi 0,5 do asi 5,0 mg/ml. Přednostní postup pro přípravu každé složky, tj. roztoku protilátek, je použití směsi tří vodných nebo vodněalkoholových ředění primárního základního roztoku (mateřské tinktury) protilátek, ředěných 100¹², 100³⁰ a 10 0 ²⁰⁰ krát, což je ekvivalentní setinným homeopatickým ředěním C12, C30, resp. C200. Příklady jak získat požadovanou homeopatickou potenci jsou popsány také například v patentech USA číslo. 7,229,648 a 4,311,897, na něž pro uvedený účel odkazujeme. Postup použitelný na „aktivovanou potencovanou“ formu protilátek popsaných v tomto dokumentu je podrobněji popsán níže.

Pokud jde o homeopatickou léčbu lidských subjektů, je dosud předmětem značných kontroverzí. Zatímco vynález se opírá o přijaté homeopatické postupy při získání „aktivované potencované“ formy protilátek, k důkazu účinnosti u lidi nelze spoléhat pouze na homeopatii. Původcem tohoto vynálezu bylo překvapivě objeveno a v uznávaných farmakologických modelech dostatečně prokázáno, že rozpouštědlo získané nakonec z opakovaných ředění výchozí molekulární formy protilátky má konečnou aktivitu, která nesouvisí s přítomnosti stop molekulární formy protilátky v cílovém ředění. Zde uváděné „aktivované potencované“ formy protilátky jsou testovány na biologickou aktivitu v uznávaných farmakologických modelech účinnosti, a to buď ve vhodných pokusech in vitro, nebo in vivo na vhodných zvířecích modelech. Pokusy, které zde jsou dále uvedeny, poskytují důkaz biologické aktivity v těchto modelech. Klinické studie na lidech, rovněž uvedené zde níže, prokazují mimo jiné, že účinek pozorovaný na zvířecím modelu lze dobře převést na léčbu lidí. Studie na lidech rovněž poskytly důkaz o schopnosti „aktivovaných potencovaných“ forem popsaných v tomto dokumentu léčit konkrétní lidské choroby nebo poruchy, uznávané lékařskou vědou jako patologické stavy.

Mimoto nárokovaná „aktivovaná potencovaná“ forma protilátky zahrnuje pouze roztoky nebo pevné přípravky s biologickou aktivitou, jež nemůže být vysvětlena přítomností molekulární formy protilátky, která zbývá z původního výchozího roztoku. Jinými slovy, pokud by se předpokládalo, že „aktivovaná potencovaná forma protilátky může obsahovat stopy původní molekulární formy protilátky, odborník nemůže v přijatých farmakologických modelech přiřadit pozorované biologické aktivity zbývající molekulární formě protilátky s určitým stupněm pravděpodobnosti vzhledem k extrémně nízké koncentraci molekulární formy protilátky zbývající po opakovaných následných ředěních. Zatímco vynález není omezen žádnou konkrétní teorií, biologickou aktivitu „aktivované potencované“ formy protilátky podle vynálezu není možné přičíst počáteční molekulární formě protilátky. Preferována je „aktivovaná potencovaná“ protilátka v kapalné nebo pevné formě, ve které koncentrace molekulární formy protilátky je pod hranicí detekce uznávaných analytických technik, jako jsou kapilární elektroforéza a vysokoúčinná kapalmova chromatografie (HPLC). Zvláště výhodná je „aktivovaná potencovaná“ forma protilátky v kapalném nebo pevném stavu, ve které je koncentrace molekulární formy protilátky nižší než Avogadrovo číslo. Ve farmakologii molekulárních forem terapeutických látek je obecnou praxí vytvořit křivku dávka-odezva, kde je úroveň farmakologické odpovědi vynesena proti koncentraci aktivní látky podávané subjektu nebo testované in vitro. Minimální dávka léčiva, která produkuje jakoukoli zjistitelnou reakci, je známa jako prahová dávka. Je zvláště výhodné, aby uvažovaná „aktivovaná potencovaná“ forma protilátky obsahovala molekulární protilátku, pokud vůbec, v koncentraci nižší než je prahové dávka pro molekulární formu protilátky v daném biologickém modelu.

Výraz „CB1 receptor má svůj obecný odborný význam, a může zahrnovat přirozeně se vyskytující CB1 receptor a jeho varianty a modifikované formy. CB1 receptor může být z jakéhokoli zdroje, ale typicky je ze savců.

Výraz obezita označuje oblast hmotností, které jsou větší, než jaké se obecně považují za zdravé pro danou tělesnou výšku. Míra obezity se stanovuje pomocí hmotnosti a výšky výpočtem čísla s názvem „body mass index (BMI). U dospělého je BMI mezi 25 a 29,9 považován za nadváhu. Dospělý, který má BMI 30 nebo vyšší, je považován za obézního. Vzorec BMI je následující:

Hmotnost - (výška v palcích)² x 703 = BMI

BMI neurčuje vždy přesně stupeň tělesné tloušťky. Rostoucí počet příspěvků ukazuje, že rozložení centrálního tuku (centrální obezita), může být mnohem více spojeno s metabolickými riziky než BMI. Zdá se, že měření míry centrální distribuce tuku je důležité pro včasné odhalení následných zdravotních rizik, a to i mezi jednotlivci s normální váhou. S D Hsieh, H Yoshinaga a T Muto, International Journal of Obesity (2003) 27, 610-616. Viz také Price GM, Uauy R, Breeze E, Bulpitt CJ, Fletcher AE (August 2006). „Weight, shape, and mortality risk in older persons: elevated waist-hip ratio, not high body mass index, is associated with a greater risk of death“ Am.J.Clin.Nutr. 84 (2): 449-60. Jako zástupné měřítko centrální obezity byl použit obvod pasu a z něj odvozené indexy, jako je poměr pas-boky a poměr a pasvýška. Sung et. al. Waist circumference and waist-to-height ratio of Hong Kong Chinese children, BMC Public Health 2008,8:324. Měření antropometrických parametrů, například obvodu pasu, poměru pas-boky a poměru pas-výška, se tak považována za ukazatel stupně tloušťky.

Výraz „poměr pas-boky“ je poměr obvodů pasu a boků. Poměr pas-boky se rovná obvodu pasu, dělenému obvodem boků. Poměr pas-boky větší než 0,9 u žen, a 1,0 u mužů, je spojen se zvýšeným rizikem kardiovaskulárních onemocnění, a je indikací k léčbě obezity. V ideálním případě by ženy měly mít poměr pas-boky 0,8 nebo nižší a muži by měli mít poměr pas-boky 0,95 nebo nižší.

A Ě 4 · · * ·

..···· · · · ··· · ·

Výraz „poměr pas-výška“ osoby je definován jako obvod pasu, dělený výškou osoby. Pro osoby mladší 40 let je poměr pasu a výšky větší než 0,5 kritický, pro lidi ve věkové skupině mezi 40 a 50 lety je kritická hodnota mezi 0,5 a 0,6, a pro lidi nad 50 let kritické hodnoty začínají na 0,6.

Výraz „s obezitou související metabolické poruchy“ odkazuje na chronická onemocnění, která vyžadují léčbu za účelem snížení nadměrných zdravotních rizik spojených s obezitou, a příkladné poruchy zahrnují diabetes mellitus druhého typu, kardiovaskulární onemocnění a hypertenzi, hyperlipidemii a fibrmolytické abnormality.

Výraz „Fagerstromův test“ se vztahuje na standardní test nikotinové závislosti, která je testem pro posouzení intenzity návyku na nikotin. Viz Heatherton, T. F., Kozlowski, L.T., Frecker, R.C., Fagerstrom, K.O. „The Fagerstrom test for Nicotine Dependence: A revision of the Fagerstrom Tolerance Questionnaire..

Br J Addict 1991; 86:1119-27. Test spočívá v krátkém sebehodnotícím šetření, které měří závislost na nikotinu na stupnici 0-10, přičemž 10 je nejvyšší míra závislosti.

Výraz „Mood and Physical Symptoms Scale“ (MPSS) odkazuje na stupnici vyvinutou krátce po roce 1980, určenou k posouzení příznaků abstinence cigaret. (West R, Hajek P: Evaluation of the mood and physical symptoms scale (MPSS) to assess cigarette withdrawal. Psychopharmacology 2004, 177 (1-2): 195-199).

Základní prvky MPSS zahrnují 5-bodové hodnocení depresivní nalady, podrážděnosti, neklidu, potíží se soustředěním a hladu a 6-bodový žebříček sily nutkání ke kouření a času stráveného tímto nutkáním.

Výraz „Hospital Anxiety and Depression Scale“ (HADS) odkazuje na subjektivní stupnici pro screening příznaků úzkosti a deprese u hospitalizovaných pacientů a ambulantních pacientů. Viz Zigmond, A.S., Snaith, R.P., The Hospital Anxiety and Depression scale, Acta Psychiatr. Scand., 1983, sv. 67, str. 361-370.

Vynález poskytuje farmaceutický přípravek k podávání pacientům, kteří to potřebují, přičemž farmaceutický přípravek obsahuje aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidního receptoru.

Vynález dále poskytuje farmaceutický přípravek k podávání pacientům, kteří to potřebují, přičemž farmaceutický přípravek obsahuje aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidního receptorů a b) aktivovanou potencovanou formu protilátky proti proteinu S-100.

Farmaceutický přípravek podle tohoto provedeni vynálezu může být v kapalné formě nebo v pevné formě. Každá z aktivovaných potencovaných forem protilátek obsažených ve farmaceutickém přípravku je připravena z výchozí molekulární formy protilátky prostřednictvím procesu používaného v homeopatické technice. Výchozí protilátky mohou být monoklonální nebo polyklonální protilátky připravené v souladu se známými postupy, například jak je popsáno v Immunotechniques, G. Frimel, M„ „Meditsyna“, 1987, pp. 9-33; „Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years afteh' autorů Laffly E., Sodoyer R. -2005- Vol. 14. - N° 1-2, pp. 33-55; obojí je zde uvedeno jako odkaz.

Předpokládá se, že farmaceutická kombinace pro léčbu obezity a závislosti na nikotinu je podávána ve výši 6-8 tablet denně. V jedné variantě způsob podávání zahrnuje 2 tablety třikrát denně. V další variantě způsob podávání zahrnuje 3 tablety dvakrát denně. V další variantě způsob podávání obsahuje 4 tablety dvakrát denně. V další variantě způsob podávání zahrnuje 1 tabletu šestkrát denně. V další variantě, způsob podávání zahrnuje 2 tablety čtyřikrát denně.

Monoklonální protilátky mohou být získány například prostřednictvím hybridomové technologie. Počáteční fází procesu je imunizace založená na zásadách jiz vyvinutých pro přípravu polyklonálního antiséra. Další fáze práce zahrnují produkci hybridních buněk vytvářejících klony protilátek s identickou specifičnosti. Jejich samostatná izolace se provádí za použití stejných metod jako v případě přípravy polyklonálního antiséra.

Polyklonální protilátky lze získat prostřednictvím aktivní imunizace zvířat. Pro tento účel například vhodná zvířata (např. králíci) obdrží sérii injekcí vhodného antigenu, a to buď lidského kanabinoidního receptorů nebo proteinu S-100. Imunitní systém zvířat generuje odpovídající protilátky, které jsou odebírány od zvířat známým způsobem. Tento postup umožňuje přípravu séra bohatého monospecifickými protilátkami.

V případě potřeby může být sérum obsahující protilátky vyčištěno, např. pomocí afinitní chromatografie, trakčního srážení solemi nebo iontovýměnné chromatografie.

··*»·» * * * »»»«··

Výsledné vyčištěné, protilátkami obohacené sérum může být použito jako výchozí materiál pro přípravu aktivované potencované formy protilátek. Přednostní koncentrace výsledného výchozího roztoku protilátek v rozpouštědle, nejlépe vodě nebo směsi voda-ethanol, je v rozmezí od asi 0,5 do asi 5,0 mg/ml.

Přednostním postupem pro přípravu aktivované potencované formy protilátek podle tohoto vynálezu nebo kombinace protilátek podle vynálezu je použití směsi tří vodně-alkoholových ředění primárního základního roztoku protilátek, ředěných 100 , 100³⁰ a 100²⁰⁰ krát, což je ekvivalentní setinným homeopatickým ředěním C12, C30, resp. C200. K přípravě pevné lékové formy je pevný nosič napuštěn požadovanou naředěnou směsí získanou prostřednictvím homeopatického procesu. Pro získám pevné formy jednotné dávky kombinace podle vynálezu je hmota nosiče napuštěna každým ředěním. Pro přípravu požadované kombinace lékové formy jsou vhodná obě pořadí impregnace.

Ve výhodném provedení je výchozí látkou pro přípravu aktivované potencované formy podle vynálezu polyklonální protilátka zvířecího původu k odpovídajícímu antigenu, jmenovitě k lidskému kanabinoidnímu receptoru a/nebo proteinu S-100.

Pro získání aktivované potencované formy polyklonální protilátky proti lidskému kanabinoidního receptoru může být požadovaný antigen aplikován jako imunogen do laboratorního zvířete, přednostně králíka. Za účelem získání polyklonálních protilátek proti lidskému kanabinoidního receptoru je možné použít celou molekulu lidského kanabinoidního receptoru. Za vhodný antigen je konkrétně považována následující sekvence (SEQ. ID. NO: 1) lidského kanabinoidního receptoru:

SEQ. ID. Č. 1: Met Lys 1 1 lie Thr ¹

LIDSKÝ CB1 RECEPTOR Ser He Leu Asp Gly Leu Ala Asp Thr Thr Phe Arg Thr

5 Thr Asp Leu Leu Tyr Vai '

Gly

10 Ser Asn Asp He Gin

15 Tyr

5

16

20

25

30

Glu t

vsp

He I

□ys

Gly Asp Met Ala

Ser

Lys Leu (

Sly '

Eyr :

Phe

Pro

31

35

40

45

Gin I

□ys

Phe 1

Pro

Leu Thr ;

Ser Phe

Arg

Gly Ser J

Pro :

Phe

Gin

Glu

46

50

55

60

10

Lys Met

Thr .

Ala

Gly Asp

Asn ]

Pro

Gin

Leu 3

ral :

Pro

Ala

Asp

Gin

61

65

70

75

Vai Asn

He

Thr

Glu Phe

Tyr .

Asn

Lys

Ser 1

Leu

Ser

Phe

Lys

76

80

85

90

Glu .

Asn

Glu

Asn

He

Gin

Cys

Gly

Glu Asn

Phe

Met

Asp

He

15

91

95

100

105

Glu

Cys

Phe

Met

Vai

Leu

Asn

Pro

Ser

Gin

Leu

Ala

lie

Ala

106

110

115

120

Vai

Leu

Ser

Leu

Thr

Leu

Gly

Thr

Phe

Thr

Vai

Leu

Glu

Asn

Leu

121

125

130

135

20

Leu

Vai

Leu

Cys

Vai

He

Leu

His

Ser

Arg

Ser

Leu

Arg

Cys

Arg

136

140

145

150

Pro

Ser

Tyr

His

Phe

He

Gly

Ser

Leu

. Ala

Vai

Ala

Asp

Leu

l Leu

151

155

160

165

Gly

Ser

Vai

He

Phe

Vai

Tyr

Ser

Phe

> He

Asp

Phe

His

Vai

. Phe

25

166

170

175

180

His

Arg

Γ Lys

Asp

• Ser

Arg

Asn

Vai

. Phe Leu

Phe

Lys

Let

i Gl}

r Gly

181

185

190

195

Vai

Thr Ala

Sei

: Phe

Thr

Ala

Sei

: Vai

L Gly

Ser

Leu

l Phe Leu Thr

196

200

205

210

30

Ala

11«

j Asp

Arc

j Tyr

He

! Ser

Ilť

3 His Arg

Pro

। Let

i Al<

a Tyr Lys

211

215

220

225

Arg

lie Vai

. Th]

r Arg

Pre

> Lys

Ala Val Vai

Ala Phe Cyi

s Leu Met

226

230

235

240

	16	«	• e • · ·	* p	„ _{ř w} » » * * « ♦ · · · ·
Trp Thr : 241 Asn Cys ( 256 Tle Asp ¹ 271 Leu Leu 286 Ala His 301 Ser lie 316 Arg Pro 331 Val Leu 346 Ala Tle 361 Lys Thr 376 Thr Val 391 His Ala 406 Pro Leu 421 Ala Asn 436 Lys Ser 451 Asp Thr 466	Ele Ala lie Val lie Ala Val Leu Pro Leu Leu ( 245 ²⁵⁰ 31u Lys Leu Gin Ser Val Cys Ser Asp lie Phe : 260 ²⁶⁵ Glu Thr Tyr Leu Met Phe Trp lie Gly Val Thr 275 ²⁸⁰ Leu Phe lie Val Tyr Ala Tyr Met Tyr lie Leu 290 29⁵ Ser His Ala Val Arg Met lie Gin Arg Gly Thr 305 310 lie lie His Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Gin 320 325 Asp Gin Ala Arg Met Asp lie Arg Leu Ala Lys 335 340 lie Leu Val Val Leu He lie Cys Trp Gly Pro 350 355 Met Val Tyr Asp Val Phe Gly Lys Met Asn Lys 360 370 Val Phe Ala Phe Cys Ser Met Leu Cys Leu Leu 375 385 Asn Pro lie lie Tyr Ala Leu Arg Ser Lys Asp 395 400 Phe Arg Ser Met Phe Pro Ser Cys Glu Gly Thr 410 415 Asp Asn Ser Met Gly Asp Ser Asp Cys Leu His 425 430 Asn Ala Ala Ser Val His Arg Ala Ala Glu Sei 440 445 • Thr Val Lys lie Ala Lys Val Thr Met Ser Val 455 460 r Ser Ala Glu Ala Leu 470 472	31y Trp 255 Pro His 270 Ser Val 285 Trp Lys 300 Gin Lys 315 Val Thr 330 Thr Leu 345 Leu Leu 360 Leu lie 375 Asn Ser 390 Leu Arg 405 Ala Gin 420 í Lys His 435 r Cys lie 450 L Ser Thr 465

SEQ. ID. Č. 2: LIDSKÝ CB2 RECEPTOR

Met Glu Glu Cys Trp Vai Thr Glu He Ala Asn Gly Ser Lys Asp

1

5

10

15

Gly Leu .

Asp 1

Ser

Asn Pro Met I

Lys 1

ksp '

Pyr Met lie Leu

Ser C

Sly

5

16

20

25

30

Pro (

Sin

Lys ¹

Thr

Ala Vai Ala

7al I

Leu

Cys Thr Leu ]

Leu

Gly 1

Leu

31

35

40

45

Leu Í

3er

Ala

Leu

Glu 1

^sn i

Tai ,

Ala ¹

7a 1

Leu I

?yr 1

Leu :

He

Leu 1

Ser

46

50

55

60

10

Ser His

Gin

Leu

Arg i

\rg :

Lys

Pro

Ser

Tyr J

Leu 3

Phe

lie

Gly

Ser

61

65

70

75

Leu .

Ala

Gly

Ala

Asp :

Phe :

Leu

Ala

Ser

Vai ¹

7al

Phe

Ala

Cys

Ser

76

80

85

90

Phe

Vai

Asn

Phe

His '

Vai

Phe

His

Gly

Vai .

Asp

Ser

Lys

Ala

Vai

15

91

95

100

105

Phe

Leu

Lys

He

Gly

Ser

Vai

Thr

Met

Thr

Phe

Thr

Ala

Ser

106

110

115

120

Vai

Gly

Ser

Leu

Thr

Ala

lie

Asp

Arg

Tyr

Leu

Cys

Leu

121

125

130

135

20

Arg

Tyr

Pro

Ser

Tyr

Lys

Ala

Leu

Thr

Arg

Gly

Arg

Ala

136

140

145

150

Leu

Vai

Thr

Leu

, Gly

lie

Met

Trp

Vai

Leu

Ser

Ala

Leu

. Vai

Ser

151

155

160

165

Tyr

Leu

. Pro

Leu

l Met

Gly

Trp

Thr

Cys

Pro

Arg

Pre

> Cys

Ser

25

166

170

175

180

Glu

Leu

l Phe

Pre

> Leu

He

Pro

Asn

Asp

> Tyr

Leu

Sei

: Trp

Leu

181

185

190

195

Leu

Phe He

Ala Phe

Leu

Phe

Ser

Gly

r He

He

Tyr

Thi

r Tyr

Gly

196

200

205

210

30

His

Vai

L Leu

i Trj

? Lys

Ala

His

; Gin

. His Vai

Ala

Ser

• Leu Ser Gly

211

215

220

225

His

Gli

i Asp Arg Gin

Vai

Pre

> Gly

' Met Ala

Arg

Met Arg Lei

i Asp

226

230

235

240

e

» ·

* ”

»» Λ S'

* *

18

1 * · *

• ·

Val

Arg

Leu

Ala

Lys

Thr

Leu

Gly

Leu

Val

Leu

Ala

Val

Leu

241

245

250

255

lie

Cys

Trp

Phe

Pro

Val

Leu

Ala

Leu

Met

Ala

His

Ser

Leu

Ala

256

260

265

270

5

Thr

Leu

Ser

Asp

Gin

Val

Lys

Ala

Phe

Ala

Phe

Cys

Ser

271

275

280

285

Met

Leu

Cys

Leu

lie

Asn

Ser

Met

Val

Asn

Pro

Val

Ile

Tyr

Ala

286

290

295

300

Leu

Arg

Ser

Gly

Glu

lie

Arg

Ser

Ala

His

Cys

Leu

Ala

10

301

305

310

315

His

Trp

Lys

Cys

Val

Arg

Gly

Leu

Gly

Ser

Glu

Ala

Lys

Glu

316

320

325

330

Glu

Ala

Pro

Arg

Ser

Val

Thr

Glu

Thr

Glu

Ala

Asp

Gly

Lys

331

335

340

345

15

lie

Thr

Pro

Trp

Pro

Asp

Ser

Arg

Asp

Leu

Asp

Leu

Ser

Asp

Cys

346

350

355

360

Jako imunogen (antigen) pro imunizaci králíků se přednostně používá fragment 20 polypeptidu lidského kanabinoidního receptoru. K získání polyklonálních protilátek, aby se získal fragment polypeptidu lidského kanabinoidního receptoru, je možné použít jako imunogen (antigen) syntetický peptid lidského kanabinoidního receptoru. Vhodné sekvence (lidského CB1 receptoru) pro takový antigen, jsou následující:

* ·

SEQ. ID. Č.3:

Gin Arg Gly Thr Gin Lys

310

315

Ser He He He

316

319

SEQ. ID. Č.4:

	Glu Lys 258	Leu Gin Ser Vai Cys 260	Ser Asp He Phe Pro His
265	270
10	He	Asp Glu	Thr	Tyr	Leu
	271			275	276

SEQ ID Č.

5: lie Asp

lie His

Thr Arg

He 309 Ser Glu Asp Met 337

Gin Arg Gly Thr

Gin Lys

310

Gin

Vai

315 Thr 330

Ser 316 Arg 331

He Pro

Gly 325

Lys

Vai

Gin

320 Ala 335

SEQ

ID Č.

,6:

Lys

300

Ala

His

Ser

His

Ala

Vai

Arg

Met

He

Gin

Arg

Gly

Thr

Gin

Lys

301

305

310

315

Ser

He

His

Thr

Ser

Glu

Asp

Gly

Lys

Vai

Gin

Vai

Thr

316

320

325

330

Arg

Pro

Asp

Gin

Ala

Arg

Met

Asp

He

Arg

Leu

Ala

Lys

Thr

331

335

340

344

SEQ ID Č. 7:

Asp Thr Ser Ala Glu Ala Leu	Met 461	Ser Vai	Ser Thr 465
5	466	470	472
	SEQ ID Č. 8:
	Thr	Glu Phe	Tyr Asn Lys	Ser Leu	Ser Ser	Phe Lys
	79	80		85		90
10	Glu Asn Glu Glu	Asn lie	Gin Cys Gly	Glu Asn	Phe Met	Asp He
	91	95		100		105
	Glu Cys Phe Met	Vai Leu	Asn Pro Ser
	106	110	114
15	SEQ IDČ.9:
						Gin
						420
	Pro Leu Asp Asn	Ser Met	Gly Asp Ser	Asp Cys	Leu His	Lys His
	421	425		430		435
20	Ala Asn
	436 437
	SEQ ID Č. 10:
					Gly Thi	r Gin Lys
					312	315
25
	Ser lie lie lie	í His Thi	: Ser Glu Asp	> Gly
	316	320		325

SEQ ID Č.	11:
Met	Thr Ala Gly Asp Asn Pro Gin Leu Vai Pro Ala Asp Gin
62	65 70 75

·> * »

Val Asn lie Thr Glu Phe Tyr Asn Lys

Ser Leu Ser Ser Phe Lys

76 80 Glu Asn Glu Glu Asn lie Gin Cys 91 95 Glu Cys Phe Met Vai Leu Asn 106 HO 112

Gly

85 Glu Asn Phe Met Asp 100

90 He 105

SEQ ID Č.

12:

Vai

Ala

Phe

Cys

Leu

Met

234

235

240

Trp Thr

He

Ala

He

Vai

lie

241

245

247

SEQ ID Č.

13:

Glu

Phe

Tyr

Asn

Lys

Ser

Leu

Ser

Phe

Lys

80

85

90

Glu Asn

Glu

Asn

He

Gin

Cys

Gly

Glu

Asn

Phe

Met

Asp

lie

91

95

100

105

Glu Cys

Phe

Met

Vai

Leu

Asn

Pro

Ser

Gin

Leu

Ala

. He

Ala

106

HO

115

120

Vai Leu

Ser

Leu

Thr

Leu

121

125

126

SEQ ID Č

. 14:

Asn Glu

Glu

l Asn

He

Gin

l Cys

Gl}

T Git

1

92

95

100

SEQ ID Č. 15:

Gly	Ser Pro Phe Gin Glu
55	60
Lys Met Thr Ala Gly Asp Asn Pro Gin Leu 61 65 ⁷⁰	Vai Pro Ala Asp Gin 75

* ·.: ,. ήW « K <- 4 c *' r ΐ »· j B« * * * · ·« · · ·

Vai Asn lie Thr Glu Phe Tyr Asn Lys Ser Leu

80 8586

SEQIDČ. 16:

Ala Tyr Lys 223225

Arg lie Vai Thr Arg Pro Lys Ala Val Vai Ala Phe Cys LeuMet

226 230 235240

Trp Thr He Ala He Vai He Ala Vai Leu Pro Leu Leu Gly Trp 241 245 250255

Asn

256

Příklad postupu přípravy výchozích polyklonálních protilátek proti lidskému kanabinoidnímu receptoru může být popsán následovně. 7 až 9 dnů před odběrem krevního vzorku jsou králíkům aplikovány 1 až 3 nitrožilní injekce požadovaného antigenu, aby se zvýšila úroveň polyklonálních protilátek v jejich krevním řečišti. Po 20 imunizaci jsou odebrány vzorky krve k testování hladiny protilátek. Obvykle je maximální úroveň imunitní reakce rozpustného antigenu dosažena za 40 až 60 dnů po prvním podání antigenu. Po dokončení prvního očkovacího cyklu mají králíci 30denní rehabilitační období, po němž je znovu provedena imunizace dalšími 1 až 3 intravenózními injekcemi.

K získání antiséra s obsahem požadovaných protilátek je imunizovaným králíkům odebrána krev a umístěna do 50 ml centrifugační zkumavky. Sraženina vytvořená na stěnách se odstraní dřevěnou špachtlí a do sraženiny uprostřed zkumavky se pak vloží tyčinka. Krev se pak umístí přes noc v mrazicím boxu při teplotě asi -40 °C. Následujícího dne se sraženina na špachtli odstraní a zbývající kapalina se odstředí 30 po dobu 10 minut při 13 000 otáčkách za minutu. Supernatant je cílené antiserum.

Získané antisérum je typicky žluté. K antiséru se přidá 20 % NaN₃ (hmotnostní koncentrace) do konečné koncentrace 0,02 % a uchová se před použitím ve zmrazeném stavu při teplotě -20 °C nebo bez NaN₃ při teplotě -70 °C. Pro oddělení cílové protilátky ke kanabinoidnímu receptorů z antiséra je vhodný následující postup absorpce na pevné fázi:

0 ml králičího antiséra se zředí stejným objemem 0,15 M NaCl, pak se přidá 5 6,26 g Na₂SO₄, promíchá a inkubuje 12-16 hodin při teplotě 4 °C. Sediment se odstraní odstředěním, zředí 10 ml fosfátového pufru a dialyzuje přes noc při pokojové teplotě proti témuž pufru. Po odstranění usazeniny se roztok nanese na sloupec DEAE-celulózy vybalancovaný fosfátovým pufrem. Frakce protilátky se stanoví měřením optické hustoty eluátu při 280 nm.

Izolované surové protilátky se vyčistí pomocí afinitní chromatografie navázáním získané protilátky na kanabinoidní receptor umístěný v nerozpustné matrici chromatografického media s následnou elucí koncentrovaným vodným roztokem solí.

Výsledný roztok pufru se použije jako výchozí roztok procesu homeopatického ředění pro přípravu aktivované potencované formy protilátek. Počáteční koncentrace 15 výchozího roztoku antigenem čištěné polyklonální králičí protilátky ke kanabinoidnímu receptorů je přednostně 0,5 - 5,0 mg/ml, s výhodou 2,0 až 3,0 mg/ml.

Specifický mozkový S-100 protein, exprimovaný neurony a gliovými buňkami (astrocyty a oligodendrocyty), vykonává v CNS přímo nebo prostřednictvím interakce s jinými proteiny řadu funkcí zaměřených na zachování normálního fungování 20 mozku, včetně ovlivňování procesu učení a paměti, růstu a životaschopnosti neuronů, regulace metabolických procesů v tkáních neuronů a dalších. Pro získání polyklonálních protilátek proti specifickému mozkovému proteinu S-100, se používá specifický mozkový protein S-100, jehož fyzikální a chemické vlastnosti jsou popsány v článku Μ. V.Starostin, S.M.Sviridov, Neurospecific Protein S-100, Progress of 25 Modern Biology, 1977, Vol. 5, pp. 170-178; který se nachází v knize M.B.Shtark,

Brain-Specific Protein Antigenes and Functions of Neuron, „Medicine , 1985, pp. 12-14. Specifický mozkový protein S-100 se oddělí z mozkové tkáně býka následujícím postupem:

- býčí mozková tkáň zmrazená v kapalném dusíku se převede na prášek pomoci 30 specializovaného mlýnku;

- bílkoviny jsou extrahovány v poměru 1:3 (hmotnost/objem), za použití extrakčního pufru s homogenizaci;

- homogenát se zahřívá po dobu 10 minut při teplotě 60 °C a pak se ochladí na 4 °C v ledové lázni;

- termolabilní proteiny se odstraní odstředěním;

- provede se frakcionace síranem amonným v několika fázích, s následným odstraněním precipitovaných bílkovin;

- frakce obsahující S-100 protein se vysráží pomocí 100% nasyceného síranu amonného při poklesu pH na 4,0, požadovaná frakce je pak oddělena centrifugací;

- sraženina se rozpustí v minimálním objemu pufru obsahujícího EDTA a merkaptoethanol, pak se dialyzuje deionizovanou vodou a lyofilizuje;

- následuje frakcionace kyselých proteinů chromatografií na iontoměničích, DEAEcelulóze DE-52 a pak DEAE-Sephadexu A-50;

- shromážděné a dialýzované frakce, které obsahují S-100 protein, jsou rozděleny podle molekulové hmotnosti gelovou filtrací na Sephadexu G-100,

- vyčištěný S-100 protein se dialyzuje a lyofilizuje.

Molekulová hmotnost vyčištěného specifického mozkového proteinu S-100 je 21000 daltonů.

Vzhledem k vysoké koncentraci asparagové a glutamové kyseliny je specifický mozkový protein S-100 velmi kyselý a při elektroendoosmóze v diskontinuálmm pufrovém systému na polyakrylamidovém gelu zaujímá extrémní anodovou pozici, což usnadňuje jeho identifikaci.

Polyklonální protilátky proti S-100 proteinu lze získat také pomocí metody, podobné metodě popsané pro kanabinoidní receptory protilátek s použitím adjuvans. Jako imunogen (antigen) pro imunizaci králíků může být použita celá molekula S-100 proteinu:

♦ » β * β

SEQ ID Č. 17: - BÝČÍ S100B

Met Ser Glu Leu Glu Lys Ala Val Val Ala Leu lie Asp Val Phe
1	5		10 ¹⁵
His ' 16	Gin Tyr Ser Gly Arg ' 20	Glu Gly Asp	Lys His Lys Leu Lys Lys 25 30
Ser 31	Glu Leu Lys Glu Leu 35	Ile Asn Asn	Glu Leu Ser His Phe Leu 40 ⁴⁵
Glu 46	Glu Ile Lys Glu Gin 50	Glu Val Val	Asp Lys Val Met Glu Thr 55 θθ
Leu 61	Asp Ser Asp Gly Asp 65	Gly Glu Cys	Asp Phe Gin Glu Phe Met 70 ⁷⁵
Ala Phe Val Ala Met lie 76 80 His Glu 91 92 SEQ ID Č. 18: - LIDSKÝ S100B	Thr Thr Ala	Cys His Glu Phe Phe Glu 85 90
Met 1	Ser Glu Leu Glu Lys 5	Ala Met Val	Ala Leu Ile Asp Val Phe 10 ¹⁵
His 16	Gin Tyr Ser Gly Arg 20	Glu Gly Asp	Lys His Lys Leu Lys Lys 25 30
Ser 31	Glu Leu Lys Glu Leu 35	Ile Asn Asn	Glu Leu Ser His Phe Leu 40 ⁴⁵
Glu 46	Glu Ile Lys Glu Gin 50	Glu Val Val	Asp Lys Val Met Glu Thr 55 ⁶⁰
Leu 61	Asp Asn Asp Gly Asp 65	Gly Glu Cys	Asp Phe Gin Glu Phe Met 70 ⁷⁵
Ala 76	Phe Val Ala Met Val 80	Thr Thr Ala Cys His Glu Phe Phe Glu 85 90

His Glu

92

SEQ ID Č. 19: - LIDSKÝ S100A1

Met

Gly

Ser

Glu

Leu

Glu

Thr

Ala

Met

Glu

Thr

Leu

Ile

Asn

Val

1

5

10

15

Phe

His

Ala

His

Ser

Gly

Lys

Glu

Gly

Asp

Lys

Tyr

Lys

Leu

Ser

16

20

25

30

Lys

Glu

Leu

Lys

Glu

Leu

Gin

Thr

Glu

Leu

Ser

Gly

Phe

31

35

40

45

Leu

Asp

Ala

Gin

Lys

Asp

Val

Asp

Ala

Val

Asp

Lys

Val

Met

Lys

46

50

55

60

Glu

Leu

Asp

Glu

Asn

Gly

Asp

Gly

Glu

Val

Asp

Phe

Gin

Glu

Tyr

61

65

70

75

Val

Leu

Val

Ala

Leu

Thr

Val

Ala

Cys

Asn

Phe

76

80

85

90

Trp Glu Asn Ser

94

SEQ ID Č. 20: - BÝČÍ S100A1

Met 1

Gly

Ser

Glu

Leu 5

Glu

Thr Ala

Met

Glu 10

Thr

Leu

Ile

Asn

Val 15

Phe 16

His

Ala

His

Ser 20

Gly

Lys

Glu

Gly

Asp 25

Lys

Tyr

Lys

Leu

Ser 30

Lys 31

Lys

Glu

Leu

Lys 35

Glu

Leu

Gin

Thr 40

Glu

Leu

Ser

Gly

Phe 45

Leu 46

Asp

Ala

Gin

Lys 50

Asp

Ala

Asp

Ala

Val 55

Asp

Lys

Val

Met

Lys 60

Glu 61

Leu

Asp

Glu

Asn 65

Gly

Asp

Gly

Glu

Val 70

Asp

Phe

Gin

Glu

Tyr 75

Val 76 Trp 91

Val Glu

Leu Asn

Val Ser 94

Ala 80

Ala

Leu

Thr

Val

Ala 85

Cys

Asn

Phe

Phe 90

», .· * · * , .- # «t π e « - «>>“»· ·' ^A

K získání antiséra se připraví specifický mozkový protein S-100 nebo směs proteinů S-100 (antigenů) v komplexu s methylovaným albuminem býčího sera jako nosičem s Freundovým kompletním adjuvans a přidá se k oddělenému specifickému mozkovému proteinu S-100, který se aplikuje v množství 1-2 ml subdermální injekcí do oblasti hřbetu laboratornímu zvířeti - králíkovi. Imunizace se opakuje 8. a 15. den. Odběr krve se provádí (například ze žíly v uchu) 26. a 28. den.

Titr získaného antiséra je 1:500 až 1:1000, s extraktem nervové tkáně vytváří jednoduchý precipitační pruh, ale nereaguje s výtažky z heterologmch orgánů a vytváří jediný precipitační vrchol jak s čistým S-100 proteinem, tak i s extraktem nervové tkáně, což naznačuje, že získané antisérum je monospecifické.

Aktivovaná potencované forma protilátek podle vynálezu může být připravena z výchozího roztoku homeopatickou potenciací, nejlépe metodou poměrného snižování koncentrace sériovým ředěním 1 dílu každého předcházejícího roztoku (počínaje výchozím roztokem) s 9 díly (pro desetinná ředění), nebo s 99 díly (pro setinná ředění), nebo s 999 díly (pro tisícinná ředění) neutrálního rozpouštědla, počínaje výchozím roztokem protilátky v rozpouštědle, přednostně ve vodě nebo směsi voda-etanol, v rozmezí koncentrace od asi 0,5 do asi 5,0 mgZml, spojeným s vnějším působením. Vnějším působením se přednostně rozumí vertikální protřepání (dynamizace) každého ředění. Přednostně se pro každé další zředění na požadovanou úroveň nebo ředicí faktor použijí oddělené nádoby. Tato metoda je uznávána v homeopatické technice. Viz např. publikaci V. Schwabe „Homeopathic medicines“, Μ., 1967, str. 14-29, na kterou ktomuto účelu odkazujeme.

Například k přípravě 12-setinného ředění (označeného C12), se rozředí jeden díl výchozího základního roztoku protilátek proti lidskému kanabinoidnímu receptoru o koncentrací 3,0 mg/ml 99 díly neutrálního vodného nebo vodně-alkoholového rozpouštědla (přednostně 15% ethanol) a pak mnohokrát (10 a více) opakovaně svisle protřepe, aby se vytvořilo 1. setinné ředění (označované jako C1). 2. setinné ředěni (C2), se připravuje z prvního setinného ředění C1. K přípravě 12. setinného ředění se tento postup opakuje 11 krát. To znamená, že dvanácté setinné ředění C12 představuje roztok, získaný 12. sériovým ředěním jednoho dílu výchozího základního roztoku protilátek proti lidskému kanabinoidnímu receptoru o koncentrací 3,0 mg/ml .1 ft - ” *

2g ·»···♦ ·· * ♦* * · · díly neutrálního rozpouštědla v různých nádobách, což odpovídá setinnému homeopatickému ředění C12. Podobné postupy s příslušným ředicím faktorem se provedou s cílem získat roztoky C30 a C200. Pro kontrolu účinnosti v požadovaném biologickém modelu mohou být testována mezilehlá ředění. Preferovanou aktivovanou potencovanou formou protilátek tvořících vynález jsou pro každou aktivovanou potencovanou formu směs ředěni C12, C30 a C200. Při použití směsi různých homeopatických ředění (především setinného) účinné látky jako biologicky aktivní kapalné složky je každá součást složení (např. C12, C30, C200) připravena odděleně v souladu s výše popsaným postupem, dokud se nezíská předposlední ředění (např. C11, C29 a C199), a pak se jeden díl každé složky přidá do nádoby podle složení směsi a smíchá s potřebným množstvím rozpouštědla (např. s 97 díly pro setinné ředění).

Je možné použít účinnou látku jako směs různých homeopatických ředění, např. desetinného a/nebo setinného (D20, C30, C100 nebo C12, C30, C50 atd.), jejíž účinnost je stanovena experimentálně testováním ředění na vhodném biologickém modelu, například v modelech popsaných zde v příkladech.

V průběhu potenciace a snižování koncentrace může být vertikální protřepání nahrazeno vnějším působením ultrazvuku, elektromagnetických polí nebo jiným podobným vnějším vlivem, uznávaným v homeopatické technice.

Farmaceutický přípravek podle vynálezu muže přednostně být ve formě kapaliny nebo v pevné jednotkové dávkové formě. Pokud se farmaceutický přípravek skládá ze dvou protilátek, jeho kapalné provedení zahrnuje směs dvou protilátek, přednostně v poměru 1:1 aktivovanou potencovanou formu protilátek proti lidskému kanabinoidnímu receptoru a aktivovanou potencovanou formu protilátek proti proteinu S-100. Přednostním kapalinovým nosičem je voda nebo směs vodaethanol.

Jednotka pevné lékové formy farmaceutického přípravku podle vynálezu může být připravena napuštěním pevného farmaceuticky přijatelného nosiče směsi aktivovaných potencovaných forem vodných nebo vodně-alkoholových roztoků aktivních složek. Pokud se farmaceutický přípravek skládá ze dvou protilátek, účinné složky jsou smíchány, přednostně v poměru 1:1, a použity v kapalné lékové formě.

Alternativně může být nosič napuštěn každým požadovaným ředěním postupné.

Přijatelná jsou obě pořadí impregnace.

Farmaceutický přípravek v pevné jednotkové lékové formě se přednostně skládá z granulí farmaceuticky vhodného nosiče, který byl předem nasycen vodným nebo vodně-alkoholovým roztokem zředěných protilátek v aktivované potencované formě. Pevná léková forma může být v jakékoliv modifikaci známé ve farmaceutické praxi, včetně tablety, kapsle, pastilky, a jiných. Jako neaktivní lékovou přísadu lze použít glukózu, sacharózu, maltózu, škrob, izomaltózu, izomalt a jiné mono-, oligoa polysacharidy používané při výrobě léčiv, jakož i technologické směsi výše uvedených neaktivních složek léčivých přípravků s jinými farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami, například izomaltem, krospovidonem, cyklamátem sodným, sacharinátem sodným, bezvodou kyselinou citrónovou, atd.), včetně mazadel, rozvolňovadel, pojiv a barviv. Preferovanými nosiči jsou laktóza a izomalt. Dávková léková forma může dále obsahovat standardní farmaceutické pomocné látky, například mikrokrystalickou celulózu a stearát hořečnatý.

Příklad přípravy pevné jednotky lékové formy je uveden dále. K přípravě pevné perorální formy jsou 100 - 300 pm granule laktózy napuštěny vodným nebo vodněalkoholovým roztokem aktivované potencované formy protilátek proti lidskému kanabinoidnímu receptorů a/nebo aktivované potencované formy protilátek proti proteinu S-100 v poměru 1 kg roztoku na 5 nebo 10 kg laktózy (1:5-1:10). K docílení impregnace se granule laktózy vystaví nasycení ponořením ve fluidní varné lázni (například v zařízení „Hůttlin Pilotlab“ společnosti Hůttlin GmbH) s následným sušením ohřátým vzduchem při teplotě nižší než 40 °C. Odhadované množství sušených granulí (10-34 hmotnostních dílů) nasycených aktivovanou potencovanou formou protilátek je umístěno v mixéru a smícháno s 25 až 45 hmotnostními díly nenasycené čisté laktózy (používá se pro snížení nákladů, zjednodušení a zrychlení technologického procesu bez snížení účinnosti čištění) , společně s 0,1 až 1 hmotnostním dílem stearátu hořečnatého, a 3-10 hmotnostními díly mikrokrystalické celulózy. Získaná tabletová hmota je po rovnoměrném rozmíchání tabletována přímým suchým lisováním (např. v tabletovacím lisu Korsch XL 400) se vytvarují okrouhlé pilulky o hmotnosti 150 až 500 mg, přednostně 300 mg. Tabletováním se získají 300 mg pilulky, které jsou nasyceny vodné alkoholovým if « - ·) ř · ' ^& ·

3Q ···· ·· · * · ·* * < * roztokem (3,0-6,0 mg na 1 pilulku) kombinace aktivované potencované formy protilátek. Každá složka této kombinace, použité k impregnaci nosiče, je ve formě směsi setinných homeopatických ředění, přednostně C12, C30 a C200.

Přestože vynález není omezen na konkrétní teorii, předpokládá se, že zde 5 popisovaná aktivovaná potencované forma protilátek neobsahuje molekulární formu protilátky v natolik dostatečném množství, aby bylo možné biologickou aktivitu připsat takové molekulární formě. Biologická aktivita farmaceutického přípravku podle vynálezu a kombinovaného farmaceutického přípravku podle vynálezu je dostatečně prokázána v připojených příkladech.

Farmaceutický přípravek obsahující aktivovanou potencovanou formu protilátek proti lidskému kanabinoidního receptoru může být použit pro podávání pacientům s obezitou a souvisejícími metabolickými poruchami.

Jak je uvedeno v připojených příkladech, podávání aktivované potencované formy protilátky podle vynálezu má za následek snížení tělesné hmotnosti, snížení růstu 15 tělesné hmotnosti, snížení centrální obezity a usnadnit snížení spotřeby potravin.

V jednom z provedení poskytuje tento vynález způsob léčení obezity a souvisejících metabolických poruch podáním farmaceutických přípravků, obsahujících aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidního receptoru, přednostně kanabinoidního receptoru 1.

V jiném provedení vynález poskytuje způsob usnadňující snížení spotřeby potravy subjektem, u nějž se očekává přínos z takového snížení, podáváním farmaceutického přípravku, obsahujícího aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru, přednostně kanabinoidnímu receptoru 1.

V jiném provedení jsou k dispozici postupy pro změnu antropometrických 25 parametrů, např. obvodu pasu, poměru obvodu pasu a boků a poměru obvodu pasu k výšce. V jednom z provedení jsou poskytnuty postupy pro zmenšení obvodu pasu subjektu, přičemž postup zahrnuje podávání, u subjektu, který to potřebuje, farmaceutických přípravků obsahujících aktivovanou potencovanou formu protilátek proti lidskému kanabinoidnímu receptoru v množství účinném pro zmenšení obvodu 30 pasu subjektu. V jednom provedení je lidským kanabinoidním receptorem lidský kanabinoidní receptor 1. V jednom provedení se obvod pasu subjektu zmenši nejméně o asi 1 %. V jiných provedeních se obvod pasu subjektu zmenší nejméně o asi 1,5%, 2%, 2,5%, 3 % nebo 3,5% v porovnání se subjektem před podáváním farmaceutických přípravků obsahujících aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidního receptoru. V jednom provedení se obvod pasu subjektu zmenší nejméně o asi 1 cm. V jiných provedeních se obvod pasu subjektu zmenší nejméně o asi 2 cm, 3 cm nebo 4 cm v porovnání se subjektem před podáváním farmaceutických přípravků obsahujících aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru.

V jiném provedení jsou poskytnuty postupy pro snížení tělesné hmotnosti subjektu, přičemž způsob zahrnuje podávání u subjektu, který to potřebuje, farmaceutických přípravků obsahujících aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru v množství účinném pro zmenšení tělesné hmotnosti subjektu. V jednom provedení je lidským kanabinoidním receptorem lidský kanabinoidní receptor 1. V jednom provedení se tělesná hmotnost subjektu zmenší nejméně o asi 15%. V jiných provedeních se tělesná hmotnost subjektu zmenší o asi 5%, 10% nebo 15% v porovnání se subjektem před podáváním farmaceutických přípravků obsahujících aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru.

V jiném provedení jsou poskytnuty postupy pro omezení růstu tělesné hmotnosti subjektu, přičemž postup zahrnuje podávání subjektu, který to potřebuje, farmaceutických přípravků, obsahujících aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru v množství účinném pro omezení růstu tělesné hmotnosti subjektu. V jednom provedení je lidským kanabinoidním receptorem lidský kanabinoidní receptor 1. V jednom provedení je růst tělesné hmotnosti subjektu omezen o nejméně asi 60 %. V jiných provedeních je růst tělesné hmotnosti subjektu omezen o nejméně asi 10%, 25%, 30%, 50%, nebo 60% v porovnání se subjektem před podáváním farmaceutických přípravků obsahujících aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru.

Farmaceutický přípravek obsahující aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru a aktivovanou potencovanou formu

protilátky proti proteinu S-100 může být použit pro podávání pacientům trpícím závislostí na psychoaktivních látkách, přednostně závislostí na nikotinu.

Přihlašovatel překvapivě zjistil, že kombinace aktivované potencované formy protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru s aktivovanou potencovanou formu protilátky proti proteinu S-100 je použitelná při léčení drogové závislosti.

V jednom provedení je kombinace aktivované potencované formy protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru s aktivovanou potencovanou formu protilátky proti proteinu S-100 použitelná při léčení závislosti na nikotinu.

Podávání farmaceutického přípravku, obsahujícího aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru 1 a aktivovanou potencovanou formu protilátky proti proteinu S-100 při léčbě pacientů s nikotinovou závislostí zlepšuje parametry kvality života, hodnocené takovými měřítky, jako jsou deprese a úzkost.

Bylo experimentálně prokázáno, že podávání farmaceutického přípravku obsahujícího aktivovanou potencovanou formu protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru 1 a aktivovanou potencovanou formu protilátky proti proteinu S-100 při léčbě pacientů se závislostí na nikotinu zvyšuje schopnost tolerovat odvykání kouření jednodušeji a snadněji, měřeno analýzou údajů testu MPSS.

Bylo experimentálně prokázáno, že podávání přípravku pacientům s nepříliš závažnou nikotinovou závislostí >4, měřeno Fagestromovým testem nikotinové závislosti, vede ke snížení kouření o nejméně 23% za 4 týdny; nejméně 36% za 8 týdnů a nejméně o 41 % za 12 týdnů. Bylo také experimentálně prokázáno, že podávání přípravku pacientům s nepříliš závažnou závislostí na nikotinu vede ke statisticky významnému snížení počátečního průměrného počtu bodů ve Fagerstrómově testu o nejméně 1,34 ± 0,14.

Bylo experimentálně prokázáno, že podávání přípravku pacientům s těžkou závislosti na nikotinu > 7, měřeno Fagestromovým testem nikotinové závislosti, vede ke snížení kouření o nejméně 11 % za 4 týdny; nejméně 22 % za 8 týdnů a nejmene 30% za 12 týdnů. Bylo také experimentálně prokázáno, že podávání přípravku pacientům s nepříliš závažnou závislostí na nikotinu vede ke statisticky významnému * ftsnížení počátečního průměrného počtu bodů ve Fagerstrómově testu o nejméně 4,42 ±0,30.

V jednom provedení se rovněž uvažuje samostatné podávání přípravku ve dvou nezávisle připravených lékových formách jednotkové dávky, z nichž každá obsahuje 5 jednu z aktivovaných potencovaných forem protilátek.

Vynález je dále objasněn s odkazem na připojené neomezující příklady.

PŘÍKLADY

PŘÍKLAD 1.

io Ve dvou režimech, v režimu agonisty a v režimu antagonisty, byl in vitro testován účinek ultra-nízkých dávek polyklonálních králičích protilátek proti lidskému kanabinoidnímu receptoru typu 1 (ULD anti-CB1), čištěnému antigenem, získaných hyper-zředěním počátečního základního roztoku 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ krát (směs setinných homeopatických ředění C12, C30 a C200) na funkci kanabinoidního 15 receptoru typu 1.

Režim agonisty:

Před zavedením do jamek na desce (deska s 96 jamkami o objemu po 250 μΙ) byly buňky suspendovány v HBSS pufru (Invitrogen), který obsahoval 20 mM HEPES (pH = 7,4). Buňky byly předtím inkubovány po dobu 10 minut při teplotě 20 místnosti s přidáním 20 μΐ preparátu ULD anti-CB1. Po preinkubaci byl přidán aktivátor adenylátcyklázy NKH477. Buňky byly lyžovány inkubací po dobu 10 minut při teplotě 37 °C. Do jamek byly přidány fluorescenční akceptor (cAMF, značený D2) a fluorescenční donor (protilátky cAMF, značené europium kryptátem).

Jako základní kontrola byla buněčná suspenze předem inkubována místo ULD 25 anti-CB1 s pufrem HBSS (20 μΙ). Jako stimulovaná kontrola byla buněčná suspenze předem inkubována místo ULD anti-CB1 s referenčním agonistou CP 55940 (20 μΙ).

Funkční aktivita (koncentrace cAMF) byla hodnocena homogenní fluorescenční metodou s časovým rozlišením (HTRF). Intenzita fluorescence v základní kontrole byla považována za pozadí a její hodnota byla odečtena od intenzity fluorescence zjištěné u experimentu (ULD anti-CB1) a kontroly (CP 55940):

Změřená specifická reakce buňky na zavedení ULD anti-CBI byla vypočtena podle vzorce: intenzita fluorescence v experimentu (ULD anti-CBI) — intenzita fluorescence bazální kontroly.

Změřená specifická reakce buňky na zavedení referenčního agonisty (CP 55940) byla vypočtena podle následujícího vzorce: intenzita fluorescence kontroly (CP 55940) minus intenzita fluorescence bazální kontroly.

Výsledky byly vyjádřeny v procentech specifické odpovědi buňky na zavedení referenčního agonisty v stimulované kontrole:

Odpověď referenčního agonisty (v procentech) = ((naměřená specifická reakce/ specifická reakce kontroly na zavedení referenčního agonisty) x 100 %).

Režim antagonisty:

Před zavedením do jamek na desce (deska s 96 jamkami o objemu po 250 pl), byly buňky suspendovány v HBSS pufru (Invitrogen), který obsahoval 20 mM HEPES (pH = 7,4). Buňky byly předtím inkubovány po dobu 5 minut při teplotě místnosti s přidáním 20 μΐ roztoku ULD anti-CB1. Po přidání referenčního CP 55940 agonisty do jamek byly buňky inkubovány po dobu 10 minut při teplotě místnosti. Do jamek byl pak přidán aktivátor adenylátcyklázy NKH477. Buňky byly lyžovány inkubací po dobu 10 minut při teplotě 37 °C. Do jamek byly přidány fluorescenční akceptor (cAMF, označený D2) a fluorescenční donor (protilátky cAMF, značené europium kryptátem).

Jako základní kontrola byla buněčná suspenze předem inkubována místo ULD anti-CB1 s referenčním antagonistou AM 281 (20 μΙ). Do jamek se základní kontrolou nebyl přidán referenční agonista CP 55940. U stimulované kontroly byla buněčná suspenze předem inkubována v přítomnosti pufru HBSS, který obsahoval 20 mM HEPES (pH = 7,4) a referenčního agonistu CP 55940 (20 μΙ).

Výsledky byly vyjádřeny v procentech specifické odpovědi buňky na zavedení referenčního agonisty v kontrole:

Inhibice odpovědi referenčního agonisty (v procentech) = 100% -- ((naměřená specifická reakce/specifická reakce kontroly na zavedení referenčního agonisty) x 100 %).

Jako výsledek tohoto šetření bylo prokázáno (viz tabulka 1), že ULD anti-CB1 mění funkční aktivitu kanabinoidního receptoru typu 1, měřeno vnitrobuněčnou intracelulární koncentrací cAMF.

Zkoušená látka (ultra-nízké dávky protilátek vůči kanabinoidnímu receptoru typu 1 (směs homeopatických ředění C12, C30 a C200) vykazovala aktivitu agonisty ke kanabinoidnímu receptoru typu 1. Velikost agonistického účinku byla 21 %, vztaženo k vlivu standardního agonisty CP 55940 (standardní agonistický účinek se bere jako 100 %).

• * » *

Tabulka 1

receptor	testovaná látka	obsah ULD anti- CB1 v jamce (obj. %) (celkový objem v jamce byl 200 pl)	režim agonisty	režim antagonisty	vysvětlení
% odpovědi k ULD anti-CB1	standardní agonista	% inhibice antagonisty	standardní antagonista
CB1 receptor	ULD anti- CB1	10 %	21	CP 55940	0	AM 281	ULD anti-CB1 vykazuje agonistický vliv o velikosti 21 % vzhledem ke standardnímu agonistovi

PŘÍKLAD 2

Zkoušenou látkou byl vodný roztok ultra-nízké dávky polyklonálních králičích protilátek proti lidskému kanabinoidního receptoru typu 1 (ULD Anti-CB1), čištěnému antigenem, získaných hyper-zředěním počátečního základního roztoku 100¹², 10 0 ³⁰, 100²⁰⁰ krát (směs setinných homeopatických ředění C12, C30 aC200).

Ve studii bylo použito 40 myších samců z linie C57B1 (hmotnost na zacatku studie: 13,5-15,5 g). 10 myší obdrželo normální krmivo (standardní dietu); 30 myší obdrželo normální krmivo s vysoce kalorickými přísadami (vysokokalorická dieta) a současně buď destilovanou vodu (kontrola, 0,4 ml/myš) nebo subutramin (10 mg tobolky Meridia, společnosti Abbott GmbH, Německo) (10mg/kg) nebo ULD antiCB1 (0,4 ml/myš). Všechny přípravky byly podávány ve stravě jednou denně v průběhu 5 měsíců. Byla změřena spotřeba krmivá myšmi před zavedením testovaných látek. Spotřeba krmivá myšmi byla také měřena každý týden poté. Spotřeba krmivá byla hodnocena jako průměrné množství potravy (v gramech), spotřebované myší po 1 a 2 měsících studie, a jako průměrné množství krmivá na 10 g hmoty myšího těla.

Během celého sledovaného období spotřebovaly myši na nízkokalorické dietě v průměru o 15 % méně krmivá než myši na vysokokalorické dietě (tabulka 2). Jak Subutramin, tak ULD anti-CB1 snižovaly spotřebu krmivá. Účinek subutrammu se projevoval poněkud výrazněji: týdenní spotřeba krmivá se snížila o 19,3% (p < 0,05), zatímco ULD anti-CB1 snižovala spotřebu krmivá o 9,3 % vzhledem ke kontrole (p > 0,05). Tabulka 2 ukazuje výsledky studie, konkrétně vliv ULD anti-CBI asubutraminu na spotřebu krmivá myšmi linie C57B1 (průměrné hodnoty po

5 měsících pozorování), M ± m.

Tabulka 2

přípravek	denní spotřeba potravy (g/myš)	denní spotřeba potravy (gramů na 10 g tělesné hmotnosti myši)
standardní dieta	2,95 ± 1,42	1,35 + 0,05
vysokokalorická dieta + destilovaná voda	# 3,4 ± 1,64	1,54 ± 0,05^#
vysokokalorická dieta + subutramin	2,75 ± 1,36**	1,28 ± 0,05**
vysokokalorická dieta + ULD anti-CB1	3,10 ± 2,02	1,44 ± 0,08

** - rozdíly od kontroly jsou statisticky významné na hladině p < 0,01;

# - rozdíly od standardní diety jsou statisticky významné na hladině p < 0,05.

Ve dvacátém týdnu pokusu myši na vysokotučné dietě, které dostávaly ULD antiCB1, spotřebovaly více krmivá v porovnání s prvním týdnem pokusu, což je zobrazeno na obrázku 1. Obrázek 1 ukazuje vliv ULD anti-CB1 a subutraminu na růst tělesné hmotnosti myší linie C57B1 a spotřebu potravy na 10 g hmotnosti po posledním 20. týdnu pokusu.

U myší, které dostávaly ULD anti-CB1, bylo pozorováno snížení růstu tělesné hmotnosti o 51,2% v porovnání s kontrolou. Subutramin v posledním dvacátém týdnu pokusu snižoval tělesnou hmotnost o 51,5 % v porovnání s kontrolní skupinou.

PŘÍKLAD 3

Zkoušenou látkou byl vodný roztok ultra-nízké dávky polyklonálních králičích protilátek proti lidskému kanabinoidního receptorů typu 1 (ULD anti-CB1), čištěnému antigenem, získaných hyper-zředěním počátečního základního roztoku 100¹², 100 , 100 ²⁰⁰ krát (směs setinných homeopatických ředění C12, C30 a C200).

* ® * * ·> e

Ve studii byly použito 33 myších samců z linie C57B1 (hmotnost na začátku studie: 13,09 ± 0,738 g). Myši přijímaly upravenou stravu s vysokým obsahem tuku (45 %) a současně buď destilovanou vodu (kontrola, 0,2 ml/myš) nebo subutramin (10 mg/kg) nebo ULD anti-CB1 (0,2 ml/myš). Všechny přípravky ULD anti-CB1 byly 5 podávány ve stravě jednou denně v průběhu 2 měsíců. Hmotnost myši byla měřena na elektronické váze Philips Cucina HR 239016 (Maďarsko) před zahájením podávání přípravků (původně) a také každý týden po jejich zavedení. Růst tělesné hmotnosti myší byl vyjádřen v procentech počáteční hmotnosti.

Počínaje 6.týdnem od zavedení, snižovala ULDanti-CB1 růst tělesné hmotnosti 10 myší, které byly udržovány na vysokotučné dietě. Tabulka 3 zobrazuje průměrnou týdenní hmotnost (g) myší z linie C57B16, které přijímaly vysokotučnou dietu a antiCB1 (0,2 ml/myš) nebo subutramin (10 mg/kg) (M ± m). Tabulka 3 ukazuje růst tělesné hmotnosti myší.

Tabulka 3

skupina	tělesná hmotnost (g), po týdnech studie
0	1	2	3	4	5	6	7	8
destilovaná voda	12,18 ±0,501	15,27 ±0,982	15,27 ±0,488	16,00 ±0,972	18,18 ±0,569	17,27 ±0,557	20,18 ±0,501	20,55 ±0,608	21,45 ±0,857
Δ k počátku		25,4	25,4	31,3	49,3	41,8	65,7	68,7	76,1
subutramin	13,82 ±1,094	13,45 ±0,474	16,73 ±0,407 *	19,82 ±0,501“	20,18 ±0,784	20,91 ±0,563 “	22,36 ±0,927	23,64 ±1,343	22,91 ±1,091
Δ k počátku		-2,6	21,1	43,4	46,1	51,3	61,8	71,1	65,8
ULD anti-CB1	13,27 ±0,619	16,18 ±0,182	17,45 ±0,282 **	19,64 ±0,453 “	20,18 ±0,423 *	20,18 ±0,423 **	19,82 ±0,501	21,64 ±0,364	22,00 ±0,467
Δ k počátku		21,9	31,4	47,9	52,1	52,1	49,43	63,0	65,8

Poznámka: * - p < 0,05 vzhledem ke kontrolní skupině ** - p < 0,001 vzhledem ke kontrolní skupině

Jak je vidět, ULDanti-CB1 snižuje růst tělesné hmotnosti myší na vysokotučné dietě, snižuje spotřebu potravy a nemá nižší účinnost než známá, široce používaná sloučenina pro snížení tělesné hmotnosti, subutramin.

PŘÍKLAD 4.

300 mg tablety nasycené vodně-alkoholovým roztokem (6 mg/tabletu) aktivované potencované formy polyklonálních králičích protilátek proti lidskému kanabinoidnímu receptoru 1, čištěnému antigenem, v ultra-nízkých dávkách, získaných hyperzředěním počátečního základního roztoku 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ krát (směs setinných homeopatických ředění C12, C30 a C200 (ULD anti-CB1)).

Na studii se podílelo 80 osob (20 mužů a 60 žen) ve stáří 20 až 69 let (průměrný věk byl 40,2 ±1,26 roků), z nichž 68,7 % trpělo nadměrnou tělesnou hmotnosti nebo obezitou (stupeň l-lll). Bylo jim podáváno po 1 tabletě 2 krát denně. Tabulka 4 zachycuje demografické a antropometrické ukazatele u pacientů zařazených do studie. Údaje o všech osobách, které se podílely na studii (n = 80), byly zahrnuty do analýzy bezpečnosti. Během celé doby pozorování osob byla zaznamenána dobrá snášenlivost přípravku. Nežádoucí účinky se nevyskytovaly. Všechny osoby ze skupiny dokončily léčbu ve lhůtách stanovených protokolem studie, žádný z pacientů předčasně nevypadl. Při hodnocení vlivu ULD anti-CB1 na změnu tělesné hmotnosti osob bylo zjištěno, že použití přípravku vedlo ke snížení tělesné hmotnosti u 56 (70 %) pacientů. U 24 (30 %) pacientů hmotnost zůstala beze změny nebo se zvýšila nevýznamně. Nicméně je třeba poznamenat, že z těchto pacientů mělo 14 (17,5 %), zpočátku normální tělesnou hmotnost (BMI < 25 kg/m ).

Tabulka 4

parametr	hodnota
věk (roků)	M+m	40,2 ± 1,26
výška (cm)	M±m	167,1 ± 0,89
hmotnost (kg)	M±m	80,3 ± 1,85
pohlaví	muž	20 osob (25 %)
žena	60 osob (75 %)
BMI, kg/m²	M ± m	28,7 ± 0,6
BMI, kg/m²	méně než 25	25 osob (31,3 %)	normální tělesná hmotnost
25 - 29,99	28 osob (35 %)	nadměrná tělesná hmotnost (pre-obezita)
30 - 34,99	20 osob (25 %)	obezita 1. stupně ____________________
35-39,99	5 osob ( 6,2 %)	obezita 2. stupně
40 nebo více	2 osoby (2,5 %)	obezita 3. stupně

Byl pozorován statisticky významný pokles tělesné hmotnosti (p < 0,001) s ohledem na pacienty, kteří reagovali na léčbu. Po pouhých 15 dnech podávám ULD anti-CB1, byla tělesná hmotnost snížena o 1,1 kg (1,3 %) a po 1 měsíci snížení dosáhlo 1,9 kg (2,2 %) z původní hodnoty (obr. 2).

S ohledem na pacienty, kteří reagovali na léčbu, byl statisticky významný pokles (p < 0,001) obvodu pasu a stehen pozorován již jeden (1) týden po začátku podávám ULD anti-CB1, a na konci léčby pokles dosáhl 2,3 %, resp. 2,7 %. Tabulka 5 uvádí dynamiku změn obvodu pasu a stehen.

Tabulka 5

	1. den (počátek)	7. den	14. den	15. den	16. den	22. den	29. den	30. den
obvod pasu, cm
M ± m, cm	96,3 ± 1,97	95,2 ± 2,07 “	93,7 ± 1,82	94,2 ± 1,96 *“	95,1 ± 2,16	94,5 ± 2,16***	94,3 ± 2,10 ***	94,1 ± 2,07 ***
Δ od počátku, %		- 1,1 %	- 2,7 %	- 2,2 %	- 1,2%	- 1,9%	-2,1 %	-2,3%
obvod stehen, cm
M ± m, cm	110,8± 1,52	110,8± 1,66	109,3 ± 1,37 ***	109,9 ± 1,50	108,7 ± 1,60	108,3 ± 1,56 ***	108,1 ± 1,58 ***	107,8 ± 1,69 ***
Δ od počátku, %		- 0,0 %	- 1,4 %	- 0,8 %	- 1,9%	-2,3%	- 2,4 %	- 2,7 %

** - p < 0,01 vzhledem k počáteční hodnotě; “* - p < 0,001 vzhledem k počáteční hodnotě

Při hodnocení pacientova pocitu hladu na vizuální analogové stupnici (VAS) byla největší intenzita pocitu hladu zaznamenána ve večerních hodinách. Na konci 1. měsíce po začátku podávání ULDanti-CB1 byla úroveň hladu ve večerních hodinách výrazně snížena (s p < 0,001) ze 49,4 ± 3,75 na 42,0 ± 4,32 bodů. Byla též zaznamenána tendence ke snížení pocitu hladu ráno a během dne (z 20,5 ±3,23 na 13,6 ± 1,78 bodů v ranních hodinách, a ze 44,7 ± 3,45 na 27,3 ± 3,72 bodů přes den). Přestože data vztahující se k rannímu hladu nedosáhla na konci léčby statisticky významné hodnoty, což lze vztáhnout k nevysokým počátečním hodnotám, nelze dynamiku ignorovat.

v · * S 4

Provedené klinické studie ULDanti-CB1 tak potvrdily vysokou toleranci zkoušeného přípravku; po užívání zkoušeného přípravku nebyly pozorovány žádné nežádoucí účinky.

PŘÍKLAD 5. Fagerstrómův test závislosti na nikotinu

Tento příklad představuje samotný test. Příslušné údaje jsou uvedeny samostatně dále zde níže. Fagerstrómův test nikotinové závislosti je test pro posouzení intenzity závislosti na nikotinu, viz Heatherton, T.F., Kozlowski, L.T., Frecker, R.C., Fagerstróm, K.O. The Fagerstróm test for Nicotine Dependence: A revision of the 10 Fagerstróm Tolerance Questionnaire. Br J Addict 1991; 86:1119-27, na nějž zde odkazujeme. Ve studiích popsaných dále v tomto dokumentu níže, pacienti odpověděli na všechny otázky. Celkové skóre udává míru závislosti na nikotinu. Stupeň závislosti na nikotinu je hodnocen součtem skóre takto: méně než 4 - slabá závislost, 4-6 - průměrný stupeň závislosti a 7-10 - silná závislost

Tabulka 6

1. Za jak dlouho po probuzení kouříte svou první cigaretu?
více než 60 minut __	0
31 až 60 minut	1
6 až 30 minut	2
méně než 5 minut	3
2. Je pro Vás obtížné nekouřit tam, kde je to zakázáno, například na schůzích, v letadle, v kině apod.?
ne __________	0
ano ____	1
3. Které cigarety je pro Vás nejtěžší se vzdát?
první ranní __ ________________	1
kterékoliv jiné	0
4. Kolik cigaret denně vykouříte?
10 nebo méně ___________	0
11-20 _____________	1
21-30 ________________________________________________	2

♦ e · ·

31 nebo více __	3
5. Kouříte více v prvních ranních hodinách, než v jinou denní dobu?
ne	0
ano	1
6. Kouříte, i když jste nemocni a musíte zůstat většinu dne na lůžku?
ne	0
ano ____________________________________	1

PŘÍKLAD 6. Stupnicový test nálady a fyzických příznaků (MPSS).

Tento příklad uvádí samotný test. Dále níže jsou zde uvedeny samostatně 5 příslušné údaje. V níže popsaných studiích odpovídali pacienti, kteří se vzdali kouření, na 12 otázek (skóre bylo hodnoceno 1 až 5 body za každou otázku), k vyhodnocení pocitů během posledních 24 hodin (otázky 1-7), přitažlivosti kouření (otázky 8-9) a projevů fyzických příznaků (otázky 10-12). Pacienti kroužkují pouze jedno číslo pro každou otázku. Souhrn výsledků lze rozdělit do tří oblastí (M - otázky 10 1-7, C - otázky 8-9 a P - otázky 10-12), nebo na celkové skóre, které se může lišit od minima (12 bodů) po maximum (60 bodů), což odráží úroveň příznaků při abstinenci nikotinu.

Tabulka 7

Uveďte pro každou otázku, jak jste se cítil během posledních 24 hodin (Zakroužkujte pouze jedno číslo pro každou otázku)

-----	vůbec	mírně zvýšeně	silněji	velmi silně	mimořádně silně
1. deprese	1	2	3	4	5
2. úzkost	1	2	3	4	5
3. podráždění	1	2	3	4	5
4. strach	1	2	3	4	5
5. pocit hladu	1	2	3	4	5
6. nepozornost	1	2	3	4	0
7. poruchy spánku	1	2	3	4	0

8. Jak dlouho jste pociťoval chuť kouřit v posledních 24 hodinách? (Zakroužkujte pouze jedno číslo)

ani jednou nepříliš dlouho menší část dne	většinu dne	téměř vždy	stále
0 1 2	3	4	5

9. Jak silná byla touha kouřit? (Zakroužkujte pouze jedno číslo)

vůbec	mírná	střední	silná	velmi silná	mimořádně silná
0	1	2	3	4	5

Vyskytly se některé projevy v posledních 24 hodinách? (Zakroužkujte pouze jedno číslo)

	ne	mírná	střední	silná	velmi silná
10. bolesti v ústech	1	2	3	4	5
11.zácpa	1	2	3	4	5
12. kašel / bolest v krku	1	2	3	4	5

West. R., Hajek, P. Evaluation of the mood and physical symptoms scale (MPSS) to assess cigarette withdrawal. Psychopharmacology, 2004; Volume 177, Numbers 1-2, 195-199, uvedeno zde jako odkaz.

PŘÍKLAD 7. Míra úzkosti a deprese z hospitalizace (HADS).

Tento příklad uvádí samotný test. Příslušné údaje jsou uvedeny samostatně dále zde níže. Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS) je subjektivní stupnice pro prověřování příznaků úzkosti a deprese u hospitalizovaných a ambulantních pacientů. Viz Zigmond, A.S., Snaith, R.P. Hospital Anxiety and Depression Scale II Acta Psychiatr. Scand.-1983.-svazek 67. - str. 361-370, zde uvedeno jako odkaz.

Způsob aplikace: Formulář stupnice je dán pacientovi k vyplnění a je doprovázen následujícími pokyny:

„Vědci se domnívají, že emoce hrají důležitou roli v počátku většiny nemocí. Pokud Váš lékař ví víc o Vašich zkušenostech, může Vám lépe pomoci. Tento dotazník má Vašemu lékaři pomoci pochopit, jak se cítíte. Nevěnujte pozornost číslům a písmenům v levé části dotazníku. Pozorně si přečtěte každé tvrzení a do prázdného prostoru na levé straně vložte „X“ vedle odpovědi, která nejlépe odpovídá tomu, jak jste se cítil minulý týden. Nepřemýšlejte příliš o každém tvrzení. Vaše první reakce bude vždy nejlepší.“

Stupnice obsahuje 14 tvrzení rozdělených do 2 podstupnic: „úzkost“ (liché otázky -1,3, 5, 7, 9, 11, 13) a „deprese“ (sudé otázky - 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14). Každé tvrzení má 4 možné odpovědi, které odrážejí závažnost pocitu nebo emoce a stupňovitě charakterizují závažnost příznaků od 0 (absence) do 3 (maximum).

Při interpretaci výsledků je pro každou podstupnici, vzat v úvahu celkový ukazatel, 10 rozdělený do 3 oblastí hodnot: 0-7, označující „normálnost“ (nepřítomnost spolehlivě projeveného příznaku úzkosti a deprese); 8-10, označující „subklinickou úzkost /depresi a 11 a více, což ukazuje na „klinickou úzkost/depresi“.

Tabulka 8

1	Pociťují napětí, nejsem ve své kůži	— vždy — často — čas od času, občas — nemám zkušenost	3 2 1 0
2	Co mne dříve velmi uspokojovalo, dává mi stále stejný pocit	— rozhodně ano — pravděpodobně ano — jen v malé míře — vůbec ne	0 ; 3
3	Mám pocit, že se stane něco zlého	— určitě ano, a strach je velmi silný — ano, ale strach není příliš silný — občas, ale nevadí mi to — nemám takovou zkušenost	3 2 1 0
4	Jsem schopen se smát a vidět něco vtipného v té či oné události	— rozhodně ano — pravděpodobně ano — jen v malé míře — nejsem vůbec schopen	U 1 2 3
5	Mám znepokojivé myšlenky ____—--------	— stále	3

» « » e ' **

Λ ** * to = - 4 ' ' *♦ • · · · · · ♦ · ·

		— po většinu času — čas od času — jen někdy	2 1 0
6	Mám dobrou náladu	— nikdy — velmi zřídka — občas — téměř vždy	3 2 1 0
7	Je pro mne snadné posadit se a relaxovat	— určitě — pravděpodobně — pouze zřídka — nikdy	0 1 2 3
8	Zdá se mi, že jsem začal dělat všechno pomalu	— téměř vždy — často — občas — nikdy	3 2 1 0
9	Prožívám vnitřní napětí nebo třes	— nikdy — občas — často — velmi často	0 1 2 3
10	Nezáleží mi na mém vzhledu	— je to tak — nevěnuji mu tolik času, kolik bych měl — připouštím, že jsem mu začal věnovat menší pozornost — dbám o sebe stejně jako dříve	3 2 1 0
11	Pociťuji neklid, jako bych se neustále musel pohybovat	— rozhodně ano — pravděpodobně ano — jen v malé míře — nemám takovou zkušenost	3 2 1 0
12	Cítím, že mé věci (usilování, zájmy) mi mohou přinést pocit uspokojení	— stejně jako dříve — ano, ale ne tolik jako dříve — výrazně méně než dříve — vůbec to tak necítím	0 1 2 3
13	Mám náhlé pocity paniky	— velmi často — často	3 ²

« * · 9

		— nepříliš často — nikdy	1 0
	Mohu nalézt uspokojení v dobré	— často — občas	0 1
14	knize, rozhlasovém nebo televizním programu	— zřídka — velmi zřídka	2 3

Zigmond, A. S„ Snaith, R,P. The Hospital Anxiety and Depression scale // Acta Psychiatr.

Scand. - 1983. - sv. 67, - str. 361-370, uvedeno zde jako odkaz.

PŘÍKLAD 8. Srovnávací, dvojitě slepá, placebem kontrolovaná klinické studie s cílem zhodnotit kombinaci ultra-nízké dávky protilátek proti proteinu S-100 a ultranízké dávky protilátek proti receptoru CB1, s ultra-nízkou dávkou protilátek proti receptoru CB1 pro léčbu střední závislosti na nikotinu a obezity.

Ve studii (ULD anti-S100 + ULD anti-CB1) byly použity 300 mg tablety nasycené vodně-alkoholovým roztokem (6 mg na každou tabletu) polyklonálních králičích protilátek proti specifickému mozkovému proteinu S-100 (ULD anti-S100) a proti lidskému kanabinoidnímu receptoru typu 1 (ULD anti-CB1), v ultra-nízkých dávkách, získaných hyper-zředěním počátečního základního roztoku 100¹², 100 ,100 krát (směs setinných homeopatických ředění C12, C30 a C200 ). Ve studii byly též použity 300 mg tablety nasycené vodně-alkoholovým roztokem (6 mg/tabletu) polyklonálních králičích protilátek proti lidskému kanabinoidnímu receptoru typu 1 (ULD anti-CB1), v ultra-nízkých dávkách, získaných hyper-zředěním počátečního základního roztoku 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ krát (směs setinných homeopatických ředění C12, C30 a C200).

pacientů s přáním přestat kouřit bylo zahrnuto do srovnávací, dvojitě slepé, placebem kontrolované studie hodnotící účinnost kombinace ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 a anti-CB1 při léčbě závislosti na nikotinu. 22 pacientů bylo zařazeno do skupiny aktivního přípravku a dostávali ULD anti-S100 + ULD anti-CB1, 1 tabletu třikrát denně. 17 pacientů bylo zahrnuto do skupiny porovnávacího přípravku a dostávali ULD anti-CB1, 1 tabletu třikrát denně. 20 pacientů bylo zařazeno do skupiny placeba a dostávali 1 tabletu třikrát denně (tableta granulované laktózy a pomocných látek bez účinných látek). Terapie trvala 12 týdnů. Všechny tři skupiny pacientů byly srovnatelné v počátečních demografických, antropometrických i klinických laboratorních ukazatelích. Všichni pacienti měli nikotinovou závislost menšího stupně podle Fagerstromova testu (méně než 4 body), kouřili nejméně jeden rok a měli 1. stupeň obezity (body mass index [BMl] = 30,0-34,9 kg/m ). Všichni pacienti ve studii dokončili léčbu v období požadovaném protokolem studie, žádný z pacientů nevypadl předčasně.

Analýza dat ukázala, že počet pacientů, kteří se vzdali kouření, vzrostl mezi pacienty, kteří dostávali ULD anti-S100 + ULD anti-CB1, a ULD anti-CB1 (tabulka 9). Ve skupině ULD anti-S100 + ULD podíl pacientů, kteří přestali kouřit do 4 týdnů léčby, byl 23 %, v 8 týdnech 36 %, a na konci po 12 týdnech dosáhl 41 %. Ve skupině ULD anti-CB1 byly odpovídající ukazatele 12 %, 24 % a 29 % (ve srovnání s 5 %, 5 % a 10 % ve skupině s placebem). Rozdíl v účinnosti léčby v souladu s hlavním parametrem účinnosti ve srovnání s terapií placebem byl 31 % (pro skupinu ULD anti-S100+ULD) a 19% (pro skupinu ULD anti-CB1), a byl statisticky významný.

Vyhodnocení účinku ULD anti-S100 +ULD anti-CB1 ukázalo podstatný pokles závislosti na nikotinu, a to jak pro skupinu jako celek, tak pro podskupinu pacientů, kteří nebyli schopni přestat kouřit. Počáteční průměrné celkové skóre ve Fagerstrómově testu bylo 2,67 ±0,14. Po 12 týdnech léčby se snížilo na 1,33 ±0,14, navíc byl pokles statisticky významný, a to nejen ve srovnání s původními indikátory, ale též ve srovnání se skupinou s placebem. U pacientů, kteří užívali ULD anti-CB1 a kteří nepřestali kouřit, se také ukázala pozitivní dynamika s ohledem na projevy jejich závislosti na nikotinu, která na konci 3 měsíců léčby byla významné mzsi ve srovnání s původními úrovněmi a s placebem.

Analýza dat z testu Stupnice nálady a fyzických příznaků (MPSS) ukázala, že u pacientů, kteří vzdali kouření, se postupně snižovaly nikotinové abstinenční příznaky, jež dosáhly minimálních hodnot 12 týdnů po začátku léčby jak pro ULD anti-S100 + ULD anti-CB1, tak pro ULDanti-CB1 (tabulka 9). Nejnižší celkové skóre bylo zaznamenáno ve skupině ULD anti-S100 + ULD anti-CB1, což ukazuje, že podávání kombinace ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 a ULDanti-CB1 umožňuje « * v * e snášet odvykání kouření jednodušeji a snadněji ve srovnání se samotným ULD antiCB1.

Tabulka 9

Dynamika základních ukazatelů v závislosti na formě terapie

období	ULD anti-S100+ULD anti-CB1 (M ± SE)	ULD anti-CB1 (M ± SE)	placebo (M ± SE)
	Fagerstrómův test, body (n - počet kuřáků)

počátek	2,64 ±0,10 (n=22)	2,65 ± 0,12 (n=17)	2,65 ±0,11 (n=20)
počátek	2,67 ±0,14 (n=12)	2,58 ± 0,14 (n=12)	2,66 ±0,11 (n=18)
12 týdnů	1,33 ± 0,14*^# (n=12)	1,25 ±0,13* (n=12)	2,39 ± 0,26 (n=18)
	Podíl pacientů, kteří přestali kouřit, %
4 týdny	23 % (n= 5)	12 % (n=2)	5 % (n=1)
8 týdnů	36 % (n= 8)	24 % (n=4)	5%(n=1) .
12 týdnů	41 % (n=10)	29 % (n=5)	10 % (n=2)
	Stupeň abstinenčních příznaků (MPSS), body (n - počet odvykajících kouřeni)
4 týdny	33,4 ± 1,25 (n= 5)	33,00 ± 2,00 (n=2)	36 (n=1)
8 týdnů	28,12 ± 1,02 (n= 8)	25,50 ± 2,22 (n=4)	34 (n=1)
12 týdnů	14,85 ±2,41*** (n=10)	20,80 ±1,62* (n=5)	32,50 ± 0,50 (n=2)
	Míra úzkosti a deprese z hospitalizace (HADS), body (n - počet zkoumaných pacientu)
počátek	11,73 ±0,36 (n=22)	11,41 ± 0,50 (n=17)	11,4 ±0,44 (n=20)
4 týdny	10,32 ±0,32 (n=22)	10,47 + 0,30 (n=17)	11,95 ±0,45 (n=20)
8 týdnů	8,59 ± 0,33 (n=22)	9,88 ± 0,32 (n=17)	12,55 ±0,35 (n=20)
12 týdnů	7,68 ± 0,46*^#(n=22)	9,41 ±0,35 (n=17)	12,05 ± 0,18 (n=20)

Poznámka: * statisticky významný rozdíl proti skupině užívající placebo, p < 0,05, ** statisticky významný rozdíl mezi skupinou ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 a skupinou ULD anti-CB1, p < 0,05;

# statisticky významný rozdíl proti počátečním hodnotám

Všechny skupiny pacientů zahrnutých do studie obsahovaly pacienty s prvním stupněm obezity. Body Mass Index (BMI) byl měřen v pravidelných intervalech u pacientů ve všech skupinách ve studii. Výsledky studie jsou uvedeny v tabulce 10.

Tabulka 10

Průměrné rozdíly mezi počáteční a aktuální hmotnosti (v kg) při každé návštěvě

období	ULD anti-S100+ULD anti-CB1 (n=22; M ± SE)	ULD anti-CBI (n=17;M±SE)	placebo (n=20; M ± SE)
0	0 ± 0,0	0 ± 0,0	0 ± 0,0
2 týdny	-1,2 ±0,5	-0,9 ±0,3	-0,4 ±0,2
4 týdny	-1,7 ±0,4	-1,5 ±0,5	-0,5 ±0,4
6 týdnů	-2,5 ±0,4	-2,2 ±0,6	-1,3 ±0,4
8 týdnů	-3,1 ±0,7*	-2,8 ±0,7*	-1,3 ±0,4
10 týdnů	-3,8 ±0,6*	-3,4 ± 0,8*	-1,8 ±0,5*
12 týdnů	-4,2 ±0,9*	-3,8 ±1,0*	-1,8 ±0,6*

Poznámka: Pro hodnocení statistické významnosti změn hmotnosti při kontrolní návštěvě (návštěva 0) v porovnání se všemi příštími návštěvami byl použit Studentův dvoustranný test v modifikaci podle Dunnetta.

Významné rozdíly (p < 0,05) jsou označeny hvězdičkou.

V důsledku této 12-týdenní léčby se tělesná hmotnost u obou testovacích skupin výrazně snížila ve srovnání s placebem. Ve 3 měsících léčby zhruba polovina pacientů (52 % a 47 %) ve dvou zkušebních skupinách snížila svou hmotnost o 5 % 15 nebo více, ve srovnání s počátečním stavem (ve srovnání s15% pacientů ve skupině s placebem; s p < 0,05) (obrázek 3).

Hodnocení bezpečnosti léčby, prováděné na základě záznamu o nežádoucích příhodách během léčby a následnou studií laboratorních ukazatelů, prokázalo dobrou snášenlivost jak ULD anti-S100 + ULD anti-CB1, tak i ULD anti-CB1. Bezpečnostní 20 analýza zahrnovala data všech pacientů, kteří se podíleli na studu (n = 59). Nebyl odhalen žádný negativní vliv léčby na centrální nervový systém; nebyly přítomny příznaky psychiatrických následků. Tento závěr byl potvrzen sledováním ukazatelů pomocí testu Míra úzkosti a deprese z hospitalizace (HADS) (tabulka 9). Kombinace ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 prokázala pozitivní vliv na symptomy úzkosti a deprese, které byly na konci léčby ve srovnání s oběma počátečními hodnotami a placebem výrazně sníženy. Nevyskytovaly se nežádoucí účinky. Laboratorní ukazatele, včetně obecné a biochemické analýzy krve a klinické analýzy moči, neprokázaly žádné významné odchylky od normálních hodnot.

To znamená, že studie prokázaly účinnost a bezpečnost kombinace ULD antiS100 + ULD anti-CB1 a ULDanti-CB1 při léčbě závislosti na nikotinu. Účinky ošetření byly patrné z vysokého procenta pacientů, kteří se vzdali kouření, snížení abstinenčních příznaků v průběhu léčby, a snížení závislosti na nikotinu u těch pacientů, kterým se nepodařilo přestat kouřit, Všechny pozorované účinky byly statisticky významné ve srovnání s placebem, Účinnost kombinace ULD antiS100 + ULD anti-CB1 překročila účinnost ULDanti-CB1 samotné. Bezpečnostní profil byl vynikající jak pro kombinaci ULD anti-S100 + ULD anti-CB1, tak i ULD antiCBI. Ani kombinace ULD anti-S100 + ULD anti-CB1, ani ULDanti-CB1 nevedly k výskytu klinických projevů úzkosti a/nebo deprese. Byl také prokázán pokles tělesné hmotnosti u pacientů s prvním stupněm obezity.

PŘÍKLAD 9. Srovnávací dvojitě slepá, placebem kontrolovaná klinická studie s cílem zhodnotit kombinaci ultra-nízkých dávek protilátek proti S-100 proteinu, ultranízkých dávek protilátek proti receptoru CB1, a ultra-nízké dávky protilátek proti receptoru CB1 při léčbě těžké závislosti na nikotinu.

Ve studii byly použity 300 mg tablety nasycené vodně-alkoholovým roztokem (6 mg/tabletu) polyklonálních králičích protilátek proti specifickému mozkovému proteinu S-100 (ULD anti S-100) a proti kanabinoidnímu receptoru typu 1 (ULD anti-CB1), v ultra-nízkých dávkách, získaných hyper-zředěním počátečního základního roztoku 1 oo¹², 100 ³⁰, 100 ²⁰⁰ krát (směs setinných homeopatických ředění C12, C30 a C200 (ULD anti S-100 + ULD anti-CB1). Ve studii byly použity také 300 mg tablety nasycené vodně-alkoholovým roztokem (6 mg/tabletu) polyklonálních králičích protilátek proti kanabinoidnímu receptoru 1 (ULD anti-CB1), v ultra-nízkých dávkách,

B a e * získaných hyper-zředěním počátečního základního roztoku 100¹², 10 0 ³⁰, 100 ²⁰⁰ krát (směs setinných homeopatických ředění C12, C30 a C200.

K vyhodnocení účinnosti ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 v léčbě těžké závislosti na nikotinu byla provedena srovnávací, dvojitě slepá, placebem kontrolovaná studie 5 s účastí 61 pacientů, kteří byli náhodně rozděleni do tří skupin takto: 18 pacientů v první skupině (ULD anti-S100 + ULD anti-CB1, 1 tableta čtyřikrát denně), 22 pacientů ve druhé skupině (ULD anti-CB1, 1 tableta čtyřikrát denně) a 21 pacientů v placebové skupině (1 tableta čtyřikrát denně) (tableta granulované laktozy a pomocných látek bez účinných látek). Terapie trvala 12 týdnů. Pacienti tří skupin 10 byli porovnáváni podle počátečních ukazatelů, včetně demografických, fyzických a laboratorních. Podle prvotních výsledků Fagerstromova testu měli všichni účastníci těžkou závislost na nikotinu (> 7 bodů) a kouřili déle než tři roky. Pacienti byli monitorováni při měsíčních návštěvách a podrobeni fyzickým a laboratorním vyšetřením a testům (Fagerstrómův test, test Míra úzkosti a deprese z hospitalizace 15 [HADS]). U pacientů, kteří se vzdali kouření, byly měřeny abstinenční příznaky testem Stupnice nálady a fyzických příznaků [MPSS], Všichni pacienti dokončili léčbu v obdobích stanovených protokolem studie, žádný z pacientů předčasně nevypadl.

Výsledky studie jsou uvedeny v tabulce 11:

Tabulka 11. Dynamika základních ukazatelů v závislosti na formě terapie

období	ULD anti-S100+ULD anti-CB1 (M ± SE)	ULD anti-CB1 (M ± SE)	placebo (M ± SE)
	Fagerstrómův test, body (n - počet kuřáků)

počátek počátek	8,78 ±0,26 (n=18)	8,55 ± 0,26 (n=22)	8,52 ±0,24 (n=21)
8,92 ±0,34 (n=12)	8,47 ±0,24 (n=17)	8,47 ± 0,25 (n=20)
12 týdnů	4,50 ±0,26* *^M(n=12)	6,11 ±0,26* (n=17)	8,73 ±0,23 (n=19)
	Podíl pacientů, kteří přestali kouřit, %
4 týdny	11 % (n=2)	9 % (n=2)	5 % (n=1)
8 týdnů	22 % (n=4)	14 % (n=3)	5 % (n=1)
12 týdnů	30 % (n=6)	23 % (n=5)	10 % (n=2)

.---------------------------------------------------------------	Stupeň abstinenčních příznaků (MPSS), body (n - počet odvykajících kouření)
4 týdny	54,33 ±1,2 (n=2)	54,50 ± 0,50 (n=2)	54 (n=1)
8 týdnů	46,75 ±1,89 (n=4)	47,33 ± 0,67 (n=3)	50 (n=1)
12 týdnů	38,67 ±0,88* **(n=6)	45,22 ±1,11* (n=5)	53,00 ±1,00 (n=2)
--	Míra úzkosti a deprese z hospitalizace (HADS), body (n - počet zkoumaných patentuj
počátek	12,61 ±0,36 (n=18) ^Ί	12,50 ±0,29 (n=22)	11,81 ±0,38 (n=21)
	11,95 ± 0,25 (n=22)	13,05 ±0,47 (n=21)
4 týdny	11,17 ± 0,31 (n=18)
8 týdnů	9,56 ±0,30 (n=18)	10,86 ±0,22 (n=22)	13,24 ± 0,39 (n=21)
12 týdnů	7,72 ± 0,32*^# (n=18)	9,50 ± 0,19 (n=22)	12,67 ±0,23 (n=21)

Poznámka : * rozdíly proti placebové skupině jsou statisticky významné s p < 0,0 , ** rozdíly mezi skupinami ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 a ULD anti-CB1 jsou statisticky významné s p < 0,05;

# rozdíly proti počátečním parametrům jsou statisticky významné s p < 0,05.

Ve skupině ULD anti-S100 +ULD anti-CB1 byl podíl pacientů, kteří přestali kouřit po 4 týdnech léčby, 11 %, po 8 týdnech 22 %, a na konci 12 týdnů dosáhl 30 %. Ve skupině ULDanti-CB1 byly odpovídající ukazatele 9%, 14% a 23% (oproti 5 %, 5 % a 10 % v placebové skupině).

Projevy závislosti na nikotinu výrazně poklesly po podání ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 jak pro skupinu jako celek, tak pro podskupinu pacientů, kteří nebyli schopni přestat kouřit (viz tabulka 11). Jejich počáteční průměr celkových bodů ve Fagerstrómově testu byl 8,92 ± 0,34, a po 12 týdnech léčby klesl téměř na polovinu, na 4,50 ±0,26. Navíc byl tento pokles statisticky významný nejen ve srovnání s původními hodnotami, ale i ve srovnání se skupinami ULD anti-CB1 a s placebem.

Po podávání kombinace ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 se u pacientů projevil také statisticky významný pokles abstinenčních příznaků ve srovnání se skupinami ULD anti-CB1 (s p < 0,05) a placebem (p < 0,005) na základě údajů stupnice MPSS, při dosažení minimální hodnoty po 12 týdnech od začátku léčby.

Bylo provedeno rovněž hodnocení bezpečností. Bezpečnostní analýza zahrnovala data všech pacientů, kteří se podíleli na studii (n = 61), a byla provedena na základe záznamu nežádoucích příhod a sledovací studie laboratorních ukazatelů. Výsledky » * V β ····*· ft * * studie ukázaly, nejen dobrou toleranci ke kombinaci ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 i k ULD anti-CB1 samotné, ale také nepřítomnost jakýchkoli nežádoucích účinků spojených s přijetím léků. Nebyl odhalen žádný negativní vliv léčby na centrální nervový systém; nebyly přítomny příznaky psychiatrických následků. Tento závěr byl potvrzen sledováním ukazatelů pomocí testu Míra úzkosti a deprese z hospitalizace (HADS) (tabulka 11). ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 prokázaly pozitivní vliv na symptomy úzkosti a deprese, které byly ke konci léčby ve srovnaní s oběma počátečními hodnotami a placebem výrazně sníženy. Nevyskytly se nežádoucí účinky. Laboratorní ukazatele, včetně obecné a biochemické analýzy krve a klinické analýzy moči, neprokázaly žádné významné odchylky od normálních hodnot.

Výsledky studie tak prokázaly účinnost a bezpečnost ULD anti-S100 + ULD antiCB1 při léčbě těžkých závislosti na nikotinu, Během 12týdenní léčby byla téměř třetina kuřáků schopna vymanit se ze své závislosti na nikotinu, Jak je vidět v tabulce 11, účinnost ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 překročila účinnost placeba statisticky významným způsobem. ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 výrazně zlepšila schopnost pacientů jednodušeji a snadněji vydržet odvykání kouření. Mezi pacienty, kterým se nepodařilo přestat kouřit v průběhu pozorování, byl projev závislosti na nikotinu po podávání ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 významně snížen ve srovnání jak s ULD anti-CBI, tak s placebem.

Jak ULD anti-S100 + ULD anti-CB1. tak i ULD anti-CB1 byly charakterizovány vynikajícím bezpečnostní profilem bez nepříznivých účinků na centrální nervový systém.

PŘÍKLAD 10.

Byly studovány vlivy i) kombinace ultra-nízkých dávek polyklonálních králících protilátek proti specifickému mozkovému proteinu S-100 (ULD anti-S100) a ultranízkých dávek protilátek proti kanabinoidnímu receptoru typu 1 (ULD anti-CB1), každé získané hyper-zředěním počátečního základního roztoku 100¹², 10 0 ³⁰, 10 0 ²⁰⁰krát (směs setinných homeopatických ředění C12, C30 a C200) (ULD anti-S100 + ULD anti-CB1), ii) samotné ULD anti-CB1, a iii) samotné ULD anti-S100 na pohybovou aktivitu myší, s cílem zhodnotit jejich anti-nikotinové vlastnosti.

Λ « * «

Bylo použito 40 bílých outbredních samců (22 až 25 g, 1,5 měsíčních). 10 myši bylo intaktních. Zbytku myší byl podáván po 4 dny podkožně nikotin v dávce 0,3 mg/kg, podávání nikotinu předcházelo (1 hodinu před) intragastrické podání bud destilované vody (kontrola, 0,4 ml/myš), nebo ULDanti-S100 (0,4 ml/myš), nebo ULDanti-CB1 (0,4 ml/myš), nebo ULD anti-S100 + ULD anti-CB1 (0,4 ml/myš). 30 minut po posledním podání nikotinu byl proveden test „otevřeného pole“. Zvířata byla umístěna doprostřed zařízení s fotosenzory Tru Scan (Coulbourn, USA), kde byly po dvě (2) minuty automaticky zaznamenávány vertikální a horizontální pohybové aktivity zvířat. Model „otevřeného pole“ umožňuje vyhodnotit vliv látek na pohybovou aktivitu zvířat (Gershenfield H.K., Neumann P.E., Mathis C„ Crawley J.N., LiX., Paul S.M. Mapping quantitative trait loci for open-field behavior in mice. Behavioral Genetics -1997.- svazek 27. - číslo 3 - str. 201-209, kterou zde zmiňujeme za uvedeným účelem v celém rozsahu). Parametry zařízení: velikost 270 x 270 x 360 mm, rozděleno do 64 čtverců 2,5 x 2,5, s 25 mm otvory nacházejícími se v podlaze plošiny, osvětlení 150 W žárovkou.

Nikotin je alkaloid nacházející se v rostlinách z čeledi Solanaceae, převážně v tabáku, a má psychotropní aktivitu. Účinek nikotinu je považován za nepřímý prostřednictvím periferních a centrálních receptorů N-cholinu. V závislosti na dávce může zavedení tohoto alkaloidu do těla způsobit rozvoj symptomů úzkostné deprese, euforie, excitace, nebo naopak klidu. Navíc dlouhodobá aplikace nikotinu vede k závislosti. Přípravky používané k usnadnění skončení s kouřením mimo jiné usiluji o odstranění patologických změn v psychoemociální oblasti, což usnadňuje osvobození pacientů od patologické slabosti pro tabák.

V této studii podávání nikotinu vedlo ke zvýšení pohybové aktivity u myší: doba aktivity vzrostla o 8,2% (p<0,05), uražená vzdálenost o 5,1%, množství zkoumaných děr o 78,2% (p < 0,05), reakční doba studie o 76,9%, přičemž doba nehybnosti naopak poklesla o 13,5 % (p < 0,05) ve srovnání s neovlivněnými zvířaty.

Samotná ULD anti-S100 neměla významný vliv, pokud jde o kontrolu s ohledem na konkrétní parametry v rámci šetření. ULDanti-CB1 snižovala dobu aktivity a uraženou vzdálenost u myší v testované skupině na úroveň intaktních myši. ULDanti-CB1 však neměla vliv na dobu nehybnosti, počet otvorů a reakční dobu.

Současně kombinované podávání ULDanti-CBI a ULD anti-S100 snižovalo dobu aktivity a odpovídajícím způsobem zvyšovalo dobu nehybnosti na úroveň intaktmch zvířat, značně snižovalo uraženou vzdálenost (o 29,2% v porovnání s kontrolními a o 25,5% ve srovnání s intaktními zvířaty) a poněkud snížilo aktivitu (počet otvorů 5 klesl o 15,3%, reakční doba se snížila o 17,4%).

To znamená, že podávání ULD anti-CB1 a podávání kombinace ULD anti-CB1 s ULD anti-S 100 přispělo k odstranění změn v chování zvířat, způsobených podáním nikotinu. Použiti kombinace ULD anti-CB1 + ULD anti-S100 bylo účinnější ve srovnání s podáváním ULD anti-CB1 samotného.

Tabulka 12. Vliv přípravků na pohybovou aktivitu myší (open field test), M±m

-----	doba aktivity, sec	délka pohybu cm	doba nehybnosti sec	počet zkoumaných děr	reakční doba
intaktní	74,1 ±1,9	393,6 ±19,6	46,0 ±2,0	5,5 ±1,0	2,6 ±0,6
kontrola	80,2 ±1,3*	413,7 ±15,4	39,8 ±1,3*	9,8 ±1,4*	4,6 ± 0,9#
ULD anti-S100	76,5 ±1,4	434,4 ±23,5	43,5 ±1,4	10,0 ± 1,1**	5,1 ±1,0#
ULD anti-CB1	72,4 ±1,4##	366,3 ±19,1	47,6 ±1,4##	9,8 ±0,8	5,6 ± 1,1*#
ULD anti-CB1 + ULD anti-S100	74,5 ±2,8	393,1 ± 28	45,5 ±2,9	8,3 ±1,5	3,8 ±0,7 __

statisticky významný rozdíl proti intaktním: *- s p < 0,05, - s p < 0,01 a ## Π Π1 statisticky významný rozdíl proti kontrole: - s p < 0,05; - s p < 0,01

5q β β * e · * f fe « » i v «

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že zahrnuje aktivovanou potencovanou formu protilátky lidského kanabinoidního receptoru.
2. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedeným lidským kanabinoidním receptorem je kanabinoidní receptor 1 (CB1).
3. Farmaceutický přípravek podle nároku 2, vyznačující se tím, že uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky je celý lidský kanabinoidní receptor 1.
4. Farmaceutický přípravek podle nároku 3, vyznačující se tím, že uvedený celý lidský kanabinoidní receptoru 1 je tvořen sekvencí, uvedenou jako SEQ ID No:

1.
5. Farmaceutický přípravek podle nároku 2, vyznačující se tím, že uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky je polypeptidový fragment lidského kanabinoidního receptoru 1.
6. Farmaceutický přípravek podle nároku 5, vyznačující se tím, že uvedený polypeptidový fragment lidského kanabinoidního receptoru 1 je vybrán ze skupiny sestávající ze sekvencí, uvedených v SEQ ID číslo 3 až 16.
7. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená aktivovaná potencovaná forma protilátky je ve formě směsi homeopatických ředění C12, C30 a C200.
8. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená aktivovaná potencovaná forma protilátky je ve formě směsi homeopatických ředění C12, C30 a C200 impregnované na pevný nosič.
9. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že aktivovanou potencovanou formou protilátky k lidskému kanabinoidnímu receptoru je monoklonální, polyklonální nebo přírodní protilátka.
10. Farmaceutický přípravek podle nároku 9, vyznačující se tím, že uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky k lidskému kanabinoidnímu receptoru je polyklonální protilátka.
11. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že protilátka proti 5 lidskému kanabinoidnímu receptoru je připravena postupným setinným ředěním, spojeným s protřepáním každého ředění.
12. Způsob léčby obezity a souvisejících metabolických poruch, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání farmaceutického přípravku podle nároku 1 nebo 2.
13. Způsob podle nároku 12, vyznačující se tím, že uvedený farmaceutický .0 přípravek se podává pacientovi jako jedna nebo dvě jednotkové lékové formy jednou až čtyřikrát denně.
14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že uvedená léková forma nebo formy se podávají dvakrát denně.
15. Způsob měnění antropometrických parametrů savce, u nějž se očekává užitek 15 z takové změny, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání farmaceutického přípravku podle nároku 1 nebo 2.
16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že uvedeným antropometrickým parametrem je obvod pasu.
17. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že uvedeným antropometrickým 20 parametrem je poměr pasu k výšce.
18. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že uvedeným antropometrickým parametrem je poměr pasu k bokům.
19. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že obvod pasu se sníží o nejméně 1 %.

25
20. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že obvod pasu se smzi o nejméně 2 %.
21. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že obvod pasu se sníží o nejméně 3 %.
22. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že obvod pasu se sníží o nejméně 1 cm.
23. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že obvod pasu se sníží o nejméně 3 cm.
24. Způsob snižování tělesné hmotnosti savce, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání farmaceutického přípravku podle nároku 1 nebo 2.
25. Způsob podle nároku 24, vyznačující se tím, že tělesná hmotnost se sníží o nejméně 5 %.
26. Způsob podle nároku 24, vyznačující se tím, že tělesná hmotnost se sníží o nejméně 10 %.
27. Způsob podle nároku 24, vyznačující se tím, že tělesná hmotnost se sníží o nejméně 15 %.
28. Způsob podle nároku 24, vyznačující se tím, že tělesná hmotnost se sníží o méně než 15%.
29. Způsob snižování růstu tělesné hmotnosti savce, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání farmaceutického přípravku podle nároku 1 nebo 2.
30. Způsob podle nároku 29, vyznačující se tím, že růst tělesné hmotnosti se sníží o nejméně 10 %.
31. Způsob podle nároku 29, vyznačující se tím, že růst tělesné hmotnosti se sníží o nejméně 30 %.
32. Způsob usnadňování snížení příjmu potravy u savce, u nějž se očekává užitek z takového snížení, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání farmaceutického přípravku podle nároku 1.
33. Farmaceutický přípravek podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že dále obsahuje aktivovanou potencovanou formu protilátky proti S-100 proteinu.
34. Farmaceutický přípravek podle nároku 33, vyznačující se tím, že protilátkou proti S-100 proteinu je protilátka proti celému S-100 proteinu.
35. Farmaceutický přípravek podle nároku 34, vyznačující se tím, že uvedený celý S-100 protein je tvořen sekvencí uvedenou v SEQ ID Č: 17.
36. Farmaceutický přípravek podle nároku 33, vyznačující se tím, že protilátka proti S-100 proteinu je ve formě směsi C12. C30 a C200 homeopatických ředění, impregnované na pevný nosič.
37. Farmaceutický přípravek podle nároku 33, vyznačující se tím, že protilátkou proti S-100 proteinu je monoklonální. polyklonální nebo přírodní protilátka.
38. Farmaceutický přípravek podle nároku 37, vyznačující se tím, že protilátkou proti S-100 proteinu je polyklonální protilátka.
39. Farmaceutický přípravek podle nároku 36, vyznačující se tím, že protilátka proti S-100 proteinu je připravena postupným setinným ředěním, spojeným s protřepáním každého ředění.
40. Způsob léčení pacienta, trpícího psychoaktivní drogovou závislostí, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání farmaceutický přípravku podle nároku 33.
41. Způsob podle nároku 40, vyznačující se tím, že psychoaktivní látkou je nikotin.
42. Způsob podle nároku 41, vyznačující se tím, že podávání uvedené kombinace vede ke statisticky významnému zlepšení schopnosti snášet odvykání kouření, měřeno rozborem údajů testu MPSS.
43. Způsob podle nároku 41, vyznačující se tím, že podávání uvedené kombinace vede ke statisticky významnému snížení kouření u pacientů s mírnou závislostí na nikotinu, měřeno Fagestromovým testem nikotinové závislosti.
44. Způsob podle nároku 41, vyznačující se tím, že podávání uvedené kombinace vede ke statisticky významnému snížení kouření u pacientů s těžkou závislostí na nikotinu, měřeno Fagestromovým testem nikotinové závislosti.
45. Způsob léčby závislosti na psychoaktivní látce, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání farmaceutického přípravku podle nároku 33.
46. Farmaceutický přípravek pro použití při léčbě pacienta s psychoaktivní drogovou závislostí, vyznačující se tím, že uvedený přípravek byl získán poskytnutím a) potencovaného roztoku protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru a b) potencovaného roztoku aktivované potencované formy protilátky proti S-100 proteinu, každého připraveného po sobě opakovaným ředěním a mnohonásobným vertikálním protřepáním každého získaného roztoku v souladu s homeopatickou technologií, a pak buď kombinováním smícháním potencovaných roztoků, nebo alternativně 5 impregnací hmoty nosiče uvedenou kombinaci roztoků nebo oběma roztoky zvlášť.
47. Farmaceutický přípravek pro použití při léčbě obezity a souvisejících metabolických poruch, vyznačující se tím, že uvedený přípravek byl získán poskytnutím potencovaného roztoku protilátky proti lidskému kanabinoidnímu receptoru, připraveného po sobě opakovaným ředěním a mnohonásobným vertikálním protřepáním každého získaného roztoku v souladu s homeopatickou technologií, a pak popřípadě impregnací hmoty nosiče uvedeným roztokem.
48. Způsob podle nároku 40, vyznačující se tím, že uvedenou psychoaktivní 15 návykovou látkou je nikotin.