CZ2015574A3 - Hydrofobizované esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo jejich soli, způsob jejich přípravy, nanomicelární kompozice, způsob jejich přípravy a použití - Google Patents
Hydrofobizované esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo jejich soli, způsob jejich přípravy, nanomicelární kompozice, způsob jejich přípravy a použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2015574A3 CZ2015574A3 CZ2015-574A CZ2015574A CZ2015574A3 CZ 2015574 A3 CZ2015574 A3 CZ 2015574A3 CZ 2015574 A CZ2015574 A CZ 2015574A CZ 2015574 A3 CZ2015574 A3 CZ 2015574A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- ppm
- hyaluronic acid
- mmol
- propan
- sub
- Prior art date
Links
- -1 ester derivatives of hyaluronic acid Chemical class 0.000 title claims abstract description 67
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 59
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims description 31
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims abstract description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 183
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 156
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 142
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 100
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 95
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 85
- PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N benzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC=C1 PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical class CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 49
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 41
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 37
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 36
- LUKBXSAWLPMMSZ-OWOJBTEDSA-N Trans-resveratrol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1\C=C\C1=CC(O)=CC(O)=C1 LUKBXSAWLPMMSZ-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims description 33
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 32
- QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N Resveratrol Natural products OC1=CC=CC(C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)=C1 QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 229940016667 resveratrol Drugs 0.000 claims description 31
- 235000021283 resveratrol Nutrition 0.000 claims description 31
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- VYGQUTWHTHXGQB-FFHKNEKCSA-N Retinol Palmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C VYGQUTWHTHXGQB-FFHKNEKCSA-N 0.000 claims description 16
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 16
- 238000007738 vacuum evaporation Methods 0.000 claims description 16
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 10
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 9
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 8
- 235000019172 retinyl palmitate Nutrition 0.000 claims description 8
- 229940108325 retinyl palmitate Drugs 0.000 claims description 8
- 239000011769 retinyl palmitate Substances 0.000 claims description 8
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 6
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 6
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims description 6
- IMNIMPAHZVJRPE-UHFFFAOYSA-N triethylenediamine Chemical compound C1CN2CCN1CC2 IMNIMPAHZVJRPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q10 Natural products COC1=C(OC)C(=O)C(CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000017471 coenzyme Q10 Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 claims description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940110767 coenzyme Q10 Drugs 0.000 claims description 4
- ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N coenzyme Q10 Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N 0.000 claims description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 claims description 4
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910001413 alkali metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910001420 alkaline earth metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229960001701 chloroform Drugs 0.000 claims description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 abstract description 18
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 abstract description 5
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 59
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 58
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 51
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 48
- 239000002585 base Substances 0.000 description 41
- 239000000047 product Substances 0.000 description 41
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 39
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 39
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 37
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 34
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 30
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 28
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 28
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 28
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 27
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 25
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 22
- IALWCYFULVHLEC-UHFFFAOYSA-N 4-(octyloxy)benzoic acid Chemical compound CCCCCCCCOC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 IALWCYFULVHLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- OBKXEAXTFZPCHS-UHFFFAOYSA-N 4-phenylbutyric acid Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=CC=C1 OBKXEAXTFZPCHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 14
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 13
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 13
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 13
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 13
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 9
- GQHTUMJGOHRCHB-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,6,7,8,9,10-octahydropyrimido[1,2-a]azepine Chemical compound C1CCCCN2CCCN=C21 GQHTUMJGOHRCHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FVUPZAXHDNJCDC-UHFFFAOYSA-N 11-(4-methylphenyl)undecanoic acid Chemical compound CC1=CC=C(CCCCCCCCCCC(O)=O)C=C1 FVUPZAXHDNJCDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 229950009215 phenylbutanoic acid Drugs 0.000 description 7
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 7
- JTXZPQIXIXYMDY-UHFFFAOYSA-N 6-phenylhexanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCC1=CC=CC=C1 JTXZPQIXIXYMDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 9H-carbazole Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- 229940014041 hyaluronate Drugs 0.000 description 6
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 6
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 5
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 4
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 4
- DTUPYPVUSZZFPO-UHFFFAOYSA-N 11-carbazol-9-ylundecanoic acid Chemical compound C1=CC=C2N(CCCCCCCCCCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 DTUPYPVUSZZFPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 101100264174 Mus musculus Xiap gene Proteins 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HFNPVFKUZYCDIB-UHFFFAOYSA-N methyl 11-bromoundecanoate Chemical compound COC(=O)CCCCCCCCCCBr HFNPVFKUZYCDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N nile red Chemical compound C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=O)C2=C1 VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- 125000003884 phenylalkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 3
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VFTFKUDGYRBSAL-UHFFFAOYSA-N 15-crown-5 Chemical compound C1COCCOCCOCCOCCO1 VFTFKUDGYRBSAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NOGFHTGYPKWWRX-UHFFFAOYSA-N 2,2,6,6-tetramethyloxan-4-one Chemical compound CC1(C)CC(=O)CC(C)(C)O1 NOGFHTGYPKWWRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholin-4-ium;chloride Chemical compound [Cl-].COC1=NC(OC)=NC([N+]2(C)CCOCC2)=N1 BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- NZNICZRIRMGOFG-UHFFFAOYSA-N 4-decoxybenzoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCOC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 NZNICZRIRMGOFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALQLYJHDBAKLBB-UHFFFAOYSA-N 4-dodecoxybenzoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCOC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALQLYJHDBAKLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZECIAZMSHBQOC-UHFFFAOYSA-N 8-phenyloctanoic acid Chemical class OC(=O)CCCCCCCC1=CC=CC=C1 VZECIAZMSHBQOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 239000012973 diazabicyclooctane Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- IXFPHCBFQWFZDR-UHFFFAOYSA-N methyl 11-(4-methylphenyl)undecanoate Chemical compound COC(=O)CCCCCCCCCCc1ccc(C)cc1 IXFPHCBFQWFZDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000065 noncytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002020 noncytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N oxidanium;4-methylbenzenesulfonate Chemical compound O.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000004808 supercritical fluid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- PAPBSGBWRJIAAV-UHFFFAOYSA-N ε-Caprolactone Chemical compound O=C1CCCCCO1 PAPBSGBWRJIAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-3-[(2s,3r,5s,6r)-3-acetamido-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5,6-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical class CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- QVCUKHQDEZNNOC-UHFFFAOYSA-N 1,2-diazabicyclo[2.2.2]octane Chemical compound C1CC2CCN1NC2 QVCUKHQDEZNNOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IUDGNRWYNOEIKF-UHFFFAOYSA-N 11-bromo-undecanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCBr IUDGNRWYNOEIKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003821 2-(trimethylsilyl)ethoxymethyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si](C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C(OC([H])([H])[*])([H])[H] 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- MCGBIXXDQFWVDW-UHFFFAOYSA-N 4,5-dihydro-1h-pyrazole Chemical compound C1CC=NN1 MCGBIXXDQFWVDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTMHHQFADWIZCP-UHFFFAOYSA-N 4-decanoyloxybenzoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)OC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 QTMHHQFADWIZCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DXLIYCDGSKTGKK-UHFFFAOYSA-N 4-dodecanoyloxybenzoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 DXLIYCDGSKTGKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000000590 4-methylphenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002572 Alpha-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010068307 Alpha-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical group OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 description 1
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000003547 Friedel-Crafts alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Chemical group CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Chemical group CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 101100439777 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CIT2 gene Proteins 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000004791 biological behavior Effects 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001244 carboxylic acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N cis-caffeic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012650 click reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000003271 compound fluorescence assay Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000914 diffusion-ordered spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000004880 explosion Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000002795 fluorescence method Methods 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010439 graphite Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxotungsten Chemical compound O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.OP(O)(O)=O IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 description 1
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- TZNXEWGKCWPLQI-UHFFFAOYSA-N pyren-1-ylmethanamine Chemical group C1=C2C(CN)=CC=C(C=C3)C2=C2C3=CC=CC2=C1 TZNXEWGKCWPLQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003220 pyrenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229940094938 stannous 2-ethylhexanoate Drugs 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 231100000378 teratogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003390 teratogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical class CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- KSBAEPSJVUENNK-UHFFFAOYSA-L tin(ii) 2-ethylhexanoate Chemical compound [Sn+2].CCCCC(CC)C([O-])=O.CCCCC(CC)C([O-])=O KSBAEPSJVUENNK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Řešení se týká hydrofobizovaných esterových derivátů kyseliny hyaluronové obsahující alkylarylové nebo alkylheteroarylové substituenty obecného vzorce I, kde R.sup.1.n.je H.sup.1.n.nebo její stůl, R.sup.2.n.je H nebo –CO(CH.sub.2.n.)C.sub.6.n.H.sub.4-p .n.R.sup.5.n.nebo –CO-C.sub.6.n.H.sub.4-p .n.O(CH.sub.2.n.).sub.y.n.CH.sub.3.n., nebo –CO-(CH.sub.2.n.).sub.z.n.NC.sub.12.n.H.sub.8.n., kde R.sup.5.n.je H nebo CH.sub.3.n.; x je celé číslo v rozmezí 4 až 21, s výhodou 4 až 15 nebo y je celé číslo v rozmezí 8 až 21, s výhodou 8 až 15 nebo z je celé číslo v rozmezí 3 až 16, s výhodou 7 až 11, nejlépe 10; a –(CH.sub.2.n.).sub.x-.n.nebo –(CH.sub.2.n.).sub.y-.n.nebo –(CH.sub.2.n.).sub.z-.n.je lineární nasycená nebo nenasycená část řetězce, přičemž alespoň v jedné opakující se jednotce je jeden nebo více nebo –CO(CH.sub.2.n.).sub.x.n.C.sub.6.n.H.sub.4.n..sub.-p .n.R.sup.5.n.nebo –CO-C.sub.6.n.H.sub.4-p .n.O(CH.sub.2.n.).sub.y.n.CH.sub.3.n., nebo –CO-(CH.sub.2.n.).sub.z.n.NC.sub.12.n.H.sub.8.n.; R.sup.3.n.je H nebo R.sup.2.n.; a kde n je celé číslo v rozmezí 1 až 495 dimerů. Dále se řešení týká způsobu jejich přípravy a jejich použití pro enkapsulaci biologicky aktivních aromatických látek nerozpustných ve vodě za vzniku nanomicelární kompozice, která se pak použije pro farmaceutické a kosmetické aplikace.
Description
Hydrofobizované esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo jejich soli, způsob jejich přípravy, nanomicelární kompozice, způsob jejich přípravy a použití
Oblast techniky
Vynález se tyká hydrofobizovaných esterových derivátů kyseliny hyaluronové nebo jejich solí obsahující alkylarylové nebo alkylheteroarylové substituenty, způsobu jejich přípravy a jejich použití pro enkapsulaci biologicky aktivních aromatických látek nerozpustných ve vodě. Hydrofobní substituenty hyaluronanu mohou ve vodných roztocích agregovat, vytvářet nepolární domény, ve kterých mohou být nekovalentně enkapsulovány kosmeticky nebo farmaceuticky aktivní látky pomocí fyzikálních π-π interakcí. Vynález se také týká nanomicelární kompozicí, způsobu jejich přípravy a použití pro farmaceutické a kosmetické aplikace.
Dosavadní stav techniky
Kyselina hyaluronová (nebo také hyaluronan neboli HA vzorce 1 níže) je polysacharid tvořený opakujícími se disacharidovými jednotkami glukuronové kyseliny a N-acetylglukosaminu spojených β-(1,4) a β-(1,3) glykosidovými vazbami. Molekulová hmotnost se pohybuje v rozmezí 104 - 107 g/mol. HA je hlavní komponentou extracelulámí matrix a je esenciální pro správný buněčný růst, strukturní stabilitu orgánů a organizaci tkání. Z farmaceutického hlediska je HA slibná látka díky svým vlastnostem, jako je biodegradabilita, biokompatibilita a netoxicita.
vzorec 1
Modifikace kyseliny hyaluronové
Kyselina hyaluronová může být modifikována na hydroxylových či karboxylových skupinách. K modifikačním reakcím HA jsou používána různá aktivační činidla, která však mají mnohé nevýhody. Podle US 2007/0224277 se N,N'-karbonyldiimidazol (CD1) jako činidlo využívá pro přípravu esterů hyaluronanu (Schéma 1).
Schéma 1: Schéma tvorby esteru pomocí GDI
Nicméně i CD1 má mnohé nevýhody: je náchylné k hydrolýze a s vodou reaguje bouřlivě za vzniku CO2 a imidazolu (viz Schéma 2) [1]. Musí být proto používán v prostředí bezvodých organických rozpouštědel, jako např. CHCI3, THF, benzenu nebo DMF, ve kterých je však HA (kyselá i nativní forma) velmi obtížně rozpustná. Acylimidazolové deriváty jsou všeobecně relativně stabilní, a tedy i méně reaktivní, což může způsobit vznik vedlejších produktů [2]. Použití výrazného nadbytku CDI reakci urychlí, ale nadbytečný GDI zůstává v reakční směsi a brání acylaci [3].
Schéma 2: Hydrolýza CDI s vodou K urychlení reakce jsou proto běžně přidávány organokatalyzátory jako 1 -hydroxy-benzotriazol (HOBt), či l,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-en (DBU) aj. Použití těchto činidel však s sebou nese mnohé nevýhody, jako je riziko exploze (HOBt) či toxicita (DBU) (Larrivee-Aboussafy et al., 2010). Podle US 2007/0224277 může být esterifikace doprovázena, při použití CDI jako aktivačního činidla, kross-linkační reakcí mezi hydroxylem a karboxylem HA. Patentový dokument US 2012/8324356 popisuje esterifikaci HA pomocí CDI ve formám idu, který je však teratogenní. CDI není použitelný ani pro reakce ve vodném prostředí, protože rychle degraduje (viz Schéma 2 výše). Podle patentového dokumentu WO 2012/013670 nebylo vyššího stupně substituce dosaženo ani při esterifikaci v THF, kde SS získaného produktu byl 2 %. Podle US 2012/0289478 byl získán produkt s SS= 7 % při hydrofobizaci kyselinou 3,4-dihydroxyskořicovou, ale také ve formamidu.
Modifikace karboxylových skupin HA není výhodná, pokud je zamýšlená aplikace derivátu HA spojena s terapií, ve které hrají důležitou roli HA receptory, protože chemická modifikace karboxylových skupin IIA mění její biologické chování v organismu. HA nebývá po takové modifikaci rozpoznávána receptory pro HA [4]. V patentovém dokumentu US 1986/4851521 je popsáno, že estery HA modifikovaných přes karboxylovou skupinu HA jsou špatně rozpustné ve vodě (v závislosti na stupni substituce a Mw). Tato vlastnost limituje využití těchto derivátů jako nosičů aktivních látek, protože při některých, zejména farmaceutických aplikacích (např. intravenózních podáních) je nezbytné, aby byly polymerní nosiče zcela dobře rozpuštěné ve vodném prostředí a neagregovaly ve větší celky.
Dalším běžně používaným aktivačním činidlem pro hydrofobizace HA je l-ethyl-3-(3-dimethylaminoisopropyljkarbodiimid (EDC). EDC je ve vodném prostředí používán spolu s organokatalyzátorem A-hydroxysukcinimidem (NHS) [1], ale i přesto modifikační reakce poskytují jen deriváty s nízkým stupněm substituce. Navíc při použití EDC může dojít k tvorbě nežádoucích vedlejších produktů a to intramolekulámíiu přesmykem vznikajícího acylu intermediátu: NHS-ester, anhydridy karboxylových kyseliny, N-acylmoěoviny, nezreagované kyseliny a hydrolyzovaný terč. butyl ester [5], Další velkou nevýhodou použití EDC/NHS je také nezbytnost kontroly pH reakce. NHS-intermediát vzniká při kyselém pH (3,5 - 4,5), zatímco nukleofilní atak aminu žádá neutrální či zásadité pH, ve kterém je NHS-intermediát hydrolyticky labilní [6]. Tyto reakění podmínky (zejména kyselé pH) navíc způsobují degradaci HA. Kromě výše zmíněných činidel může být HA aktivována také pomocí 4-(4,6-dimethoxy-l,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorfolinium chloridu (DMTMM). Pro modifikace HA byl popsán jako optimální nevýhodný až 4 násobný molární nadbytek DMTMM vůči HA a dlouhá reakění doba (až 5 dní), (EP 2008/1992364, D'Este, Eglin & Alini, 2014). Ν,Ν'-Dicyklohexylkarbodiimid (DCC) je kondenzační činidlo používané při přímých kondenzacích karboxylových kyselin s aminy a alkoholy. DCC je ve vodě nerozpustný, proto reakce se provádí v polárních aprotických organických rozpouštědlech (například v DMSO nebo DMF). V tomto prostředí je sodná sůl kyseliny hyaluronové nerozpustná a musí být převedena na kyselou formu či tetrabutylamoniovou sůl. Nevýhodou tohoto postupu je, že způsobuje degradaci řetězce HA [7]. Samotný DCC vykazuje nízkou reaktivitu, a proto se používá spolu s organokatalyzátory, například l,l,3,3-tetramethyl-4-(4-pyridyl)guanidinem [8], který je však komerčně nedostupný nebo 4-dimethylaminopyridinem (DMAP). Ve velkém molární množství DCC dochází k intra- i intermolekulárnímu kross-linku HA.
Amfifilní graft polymer HA s aromatickým řetězcem jako nosič Příprava amfifiiního graft polymeru kyseliny hyaluronové byla provedena pomocí poly(e-kapiOlaktonu) (PCL), který byl připraven polymerizací benzylalkoholu a ε-kaprolaktonu (viz vzorec 2 níže). Tato syntéza vykazuje mnoho nevýhod: využívá kyselou formu hyaluronanu a vysokou teplotu (80 °C po dobu 4 h), což degraduje polysacharidový řetězec, dalším problémem je použití bezvodého DMSO a inertní atmosféry, což je v průmyslovém měřítku neuskutečnitelné. Poslední nevýhodou je nemožnost přesně definovat délku alifatického řetězce během polymerizace. PCL je syntetický polymer, při jeho syntéze se používá vysoce toxický katalyzátor (2-ethylhexanoát cínatý), jenž není doporučený pro biomedicínské aplikace, což je zásadní problém kvůli registrační dokumentaci [9]. Velikou nevýhodou polymemích micel je relativně vysoké CAC (0,05 g.ml'1)
vzorec 2: HA modifikovaná polykaprolaktonem
Pyrenem substituovaný hyaluronan byl připraven a popsán v publikaci [10]. 1-Pyrenmethylamin je navázán na karboxylovou skupinu HA a blokuje terapeuticky významné karboxylové skupiny HA [11]. Podobné výsledky byly získány s konjugátem 1-pyrenylbutyrové kyseliny a hyaluronanu pro cílení do nádorových buněk [12]. Bohužel, deriváty pyrenu způsobují nádory u myší po dermální i podkožní expozicí (Report on Carcinogens, 12. vydání, 2011, US Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Toxicology program). Micely na bázi PEG, kyseliny skořicové a HA vykazovaly pomalé uvolňování léčiva a dosahovaly malého průměru. Hlavní nevýhodou těchto polymerních micel je vysoké CAC (0,366 mg/ml), nízká stabilita v krevních proteinech, zejména albuminu, a- a β- globulinu ay- globulinu [13], která je způsobena jejich adsorbcí na povrch micel [14].
Polymemí micely na bázi gradované HA však také mají nějaké nevýhody: 1) známé polymerní micely HA patřící do stavu techniky nejsou vhodné pro použití in vivo, protože mohou mít nežádoucí vlastnosti, například vysokou toxicitu díky použitému linkeru 1-pyrenmethylaminu. 2) hodnota CAC je vysoká, například od 0,12 nebo 0,30 mg/ml a vyšší [15]
Blokové kopolymery na bázi hyaluronanu (Di)-blokové kopolymery byly syntetizovány na reduktivním konci hyaluronanu nebo jiných polysacharidů pomocí oximové vazby („click reakcím“), v dextranu, hyalurononu nebo chitosanu [16]. Bohužel, pro tuto modifikaci je nutné HA převést na její kyselou formu [17], což způsobuje degradaci řetězce. Pro tento typ ko-polymeru hodnota CAC není známá.
Amfifilní kopolymery jako nosiče
Xu et al. publikovali amfifilní kopolymery poly(s-kaprolaktonu) (PCL) a poly(ethylenglykolu) (PEG), ale nevýhodou blokových kopolymerů oproti graft polymerům je vysoká kritická agregační koncentrace (CAC) [18].
Aromatické blokové kopolymery jako nosiče
Známé jsou například polymerní micely na bázi poly(ethylenglykol)-b-poly(karbonát-ko-L-laktid)blok kopolymerů [19] či micely aromaticky esterifikovaného poly(ethylenglykol)-poly(p-benzyl L-aspartát)blok kopolymerů [20]. PEG je syntetický nebiodegradabilní polymer [21]. Nevýhodou syntetických polymerů je, že jejich charakter je tělu cizí a že může docházet k jejich nechtěné akumulaci v organismu.
Patentový dokument W02014082609 popisuje acylované deriváty HA, které však nevykazují potřebnou míru enkapsulace biologicky aktivních látek, zvláště těch, jenž obsahují aromatickou strukturu nebo obsahují vyšší počet násobných vazeb. Jejich vazebná kapacita není dostatečná pro aplikační využití.
Podstata vynálezu
Vzhledem k tomu, že HA nemůže být použita k agregaci a enkapsulaci hydrofobních léčiv ve své nativní formě, musí být k tomuto účelu provedena její modifikace. Vhodnou modifikací mohou být pro různé aplikace zlepšeny i další přirozené fyzikálně-chemické vlastnosti HA jako její rozpustnost, viskozita či amfifilita. Jak bylo popsáno výše, syntetické polymery HA stavu techniky mají značné nevýhody pro jejich použití k enkapsulaci biologicky aktivních aromatických látek nerozpustných ve vodě. Proto byly připraveny hydrofobizované esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo jejich soli obecného vzorce I podle vynálezu, obsahující alespoň jeden alkylarylový nebo alkylheteroarylový substituent
kde R1 je H+ nebo její sůl, R2 je H nebo A20(CH2)XC6H4-/>R5 nebo -CO-C6H4-/>0(CH2)yCH3, nebo -CO-(CH2)zNCi2H8,, kde R3 je H nebo CH3; x je celé číslo v rozmezí 4 až 21, s výhodou 4 až 15 nebo y je celé číslo v rozmezí 8 až 21 s výhodou 8 až 15, nebo z je celé číslo v rozmezí 3 až 16, s výhodou 7 až 11, nejlépe 10, a -(CH2)X- nebo -(CH2)y- nebo -(CH2)Z- je lineární nasycená nebo nenasycená část řetězce, přičemž alespoň v jedné opakující se jednotce je jeden nebo více -CO(CH2)xC6H4-/?R5 nebo -CO-C6H4-/>0(CH2)yCH3. nebo -CO-(CH2)zNCi2H8; R3 je H nebo R2; a kde n je celé číslo v rozmezí 1 až 495 dimerů. Výhodným provedením vynálezu je derivát kyseliny hyaluronové nebo jeho sůl obecného vzorce 1 výše, kde R2 je -CO(CH2)xC6ÍÍ4-pR5 nebo -CO-C6H4-pO(CH2)yCH3,nebo -CO-(CH2)zNCi2H8 alespoň v jedné opakující se jednotce, přičemž R3 je I I. Výhodná je tedy substituce primární hydroxylové skupiny v pozici 6 glukosaminové části HA.
Dalším provedením vynálezu je derivát kyseliny hyaluronové obecného vzorce I výše, který je ve formě soli, kde R1 je vybrán ze skupiny obsahující některý z iontů alkalických kovů nebo iontů kovů alkalických zemin, s výhodou Na+, K+, Mg2+, Ca2+ nebo Li+.
Ještě dalším provedením vynálezu je derivát kyseliny hyaluronové nebo jeho sůl obecného vzorce I výše, kde množství -C0(CH2)xC6H4-pR:> nebo -CO-C6H4-pO(CH2)yCH3, nebo -CO-(CH2)7.NCi2H8 v hydrofobizováném esterovém derivátu HA obecného vzorce I je od 0,1 do 50% na 100 dimerů hyaluronové kyseliny nebo její soli, s výhodou 2 až 18 %, výhodněji 8 až 15 %. Deriváty HA podle vynálezu s tímto stupněm substituce vykazují výbornou rozpustnost ve vodě. Chemická struktura je ukázana na Obr. 1 až 5.
Hydrofobizované esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo jejich soli podle vynálezu jsou vůči buňkám necytotoxické a to ani při delším působení, jak je i doloženo v příkladech a na Obr. 6,7 a 8 dále. Další výhodou hydrofobizovaných esterových derivátů HA nebo jejích solí podle vynálezu je, že si zachovávají i po modifikaci HA volné karboxylové skupiny, které jsou zodpovědné za rozpoznání vazebných míst pro HA receptory. Tím, že si zachovávají biologické vlastnosti, jsou s výhodou použitelné jako nanomicelámí polymerní nosiče biologicky aktivních hydrofobních látek ve vodném prostředí pro cílení léčivé látky do požadovaných míst, protože mohou být například rozpoznávány CD44 receptory, které jsou přítomny u řady nádorů.
Hydrofobizované deriváty HA podle vynálezu kombinují vlastnosti tohoto polysacharidu a biokompatibilních substituentů. Polymerní nosiče z nich vzniklé mohou rozšířit terapeutické aplikace na trhu.
Dalším provedením vynálezu je způsob syntézy derivátu HA obecného vzorce I podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že aromatická kyselina obecného vzorce II nebo obecného vzorce III nebo obecného vzorce IV
(IV),
kde R5, x, y a z jsou, jak definovány výše, je aktivována pomocí benzoylchloridu vzorce V
v přítomnosti organické báze, s výhodou v přítomnosti terciálního aminu, výhodněji N,N-diisopropylethylaminu (D1PEA); směsi vody a vodou mísitelného polárního nebo nepolárního rozpouštědla za vzniku reaktivního anhydridu obecného vzorce VI,
kde R4 je -(CH2)X C6H4-/>R5, nebo - C6H4-pO(CH2)yCH3, nebo -(CH2)zNC]2H8, kde R5, x, y a z jsou, jak definovány výše, který reaguje s kyselinou hyaluronovou nebo její solí v přítomnosti organické báze, s výhodou v přítomnosti terciálního aminu vybraného ze skupiny obsahující triethylamin (TEA), Α,Α-diisopropylethylaminu (DIPEA) nebo 1,4-diazabicyklo[2.2.2]oktanu (DABCO); s výhodou Ν,Ν-diisopropylethylaminu (DIPEA), výhodněji triethylamin (TEA), směsi vody a vodou mísitelného polárního rozpouštědla.
Aktivace aromatické nebo heteroaromatické kyseliny benzoylchloridem (A) s následnou aplikací na esterifikaci kyseliny hyaluronové nebo její soli je znázorněno na chématu 1 (B) níže:
Schéma 1
R1, R2, R3 jsou, jak definováno výše. S výhodou se aktivace aromatické kyseliny obecného vzorce 11 nebo III nebo IV se provádí po dobu 5 až 120 minut při teplotě v rozmezí od -10 °C do 40 °C, s výhodou po dobu 30 minut od 0 °C do 25 °C.
Podle výhodného provedení způsobu podle vynálezu je množství reaktivního anhydridu obecného vzorce V výše, kde R4je -(CFbjx-CéH^pR5 nebo -(CH2)zNCi2H8, přičemž R5 a x nebo z jsou, jak definováno výše, odpovídá 0,01 až 3 ekvivalentům, s výhodou 0,5 až 1 ekvivalentům, výhodněji 0,7 ekvivalentů na dimer kyseliny hyaluronové nebo její soli.
Podle dalšího výhodného provedení způsobu podle vynálezu je množství reaktivního anhydridu obecného vzorce V, kde R4 je - C6H'4-0(CH2)yCH3, přičemž y je jak definováno výše, odpovídá 0,01 až 3 ekvivalentům, s výhodou 1,5 až 2,5 ekvivalentům, výhodněji 2,0 ekvivalentů na dimer kyseliny hyaluronové nebo její soli.
Podle ještě dalšího výhodného provedení způsobu podle vynálezu tvorba hydrofobizovaného esterového derivátu kyseliny hyaluronové nebo jeho soli je prováděna po dobu 1 až 48 hodin při teplotě v rozsahu od 0 do 60 °C, s výhodou 2 až 20 hodin při 25 °C, výhodněji 2 hodiny při 25°C. Výhodou způsobu přípravy derivátů HA podle tohoto vynálezu je jeho jednoduchost, použití účinných reakčních činidel, která nezpůsobují vedlejší reakce. Nepoužívají se ani toxická rozpouštědla nebo karcinogenní látky. Také reakční časy jsou krátké a reakční podmínky mírné, proto nedochází k degradaci řetězce HA.
Aktivace karboxylové skupiny alkylového řetězce s aromatickým susbtituentem v příkladech probíhá ve směsi voda a s vodou mísitelném protickém nebo aprotickém polárním rozpouštědle, například propan-2-olu (IP A), dimethylsulfoxidu (DMSO)nebotetrahydrofuranu (THF), s výhodou propan-2-olu. Obsah rozpouštědla je v rozsahu 45 až 55 obj.%, a obsah vody v roztoku je v rozsahu 45 až 55 obj.%.V roztoku je množství HA pro chemickou modifikaci v rozsahu 1 až 5 hmot.% s výhodou 2,5 hmot.%.
Aktivace aromatické nebo heteroaromatické kyseliny probíhá po 0,5 do 6 h s výhodou 3 hod. 15 min při 0 °C až 60 °C, výhodněji při 10 °C pro 1 l-(4-methylfenyl)undekanovou kyselinu a deriváty kyseliny 3-alkyl-hydroxybenzoové.
Vhodná molekulová hmotnost kyseliny hyaluronové pro danou reakci je v rozmezí 6 x 103 až 2,50 x 105 g/mol, s výhodou 1,5 x 104 až 1,9 x 105 g/mol nebo 495 dimers. Jiná molekulová hmotnost nebo HA sůl není pro reakci překážkou. Výhodou způsobu podle vynálezu oproti známým chemickým modifikacím kyseliny hyaluronové je velmi malá degradace polysacharidu vzhledem k mírným reakčním podmínkám.
Esterifíkace hyaluronanu je dále uskutečněna přidáním organické báze, jako je terciární amin vybraný ze skupiny obsahující N, N '-d i isopropylethy lam i n (DIPEA), 1,4- diazabicyklo[2.2.2]oktan (DABCO) nebo triethylamin (TEA), s výhodou DIPEA. Esterifíkace fungují s 0,01 až 6 ekvivalenty báze, výhodněji 4,0 ekvivalenty. Bližším studiem reakce bylo zjištěno, že stupeň substituce je závislý na ekvivalentním množství aktivovaného alkylového řetězce s arylovým nebo heteroarylovým substituentem. Chemické modifikace kyseliny hyaluronové fungují s 0,01 až 3 ekvivalenty aktivované aromatické nebo heteroaromatické kyseliny, výhodněji 0,7 do 1,5 ekvivalentu na dimer hyaluronanu.
Pro názornost jsou zde uvedeny hydrofobizované esterové deriváty HA mající alespoň jeden alkylarylový nebo alkylheteroarylový substituent obecných vzorců VII, VIII a IX, kde R1, R3, R5, x, y a z jsou, jak definovány výše.
Ještě dalším provedením vynálezu jsou nanomicelární kompozice na bázi hydrofobizovaného esterového derivátu kyseliny hyaluronové nebo jeho soli podle obecného vzorce (I), jak je definován výše, přičemž obsahuje nanomicely, které obsahují hydrofobní jádro tvořené -€0(CH2)XC6H4-/>R5 nebo -C0C6H4-/?0(CH2)yCH3 nebo -(CH2)zNCi2H8 skupinami, kde x je celé číslo v rozmezí 4 až 21, s výhodou 4 až 15 a R5 je H nebo CH3, nebo y je celé číslo v rozmezí 8 až 21, s výhodou 8 až 15, nebo z je celé číslo v rozmezí 3 až 16, s výhodou 7 až 11, nejlépe 10, navázanými na kyselinu hyaluronovou a hydrofilní obal tvořený hydrofilními funkčními skupinami kyseliny hyaluronové a jednu nebo více biologicky aktivních aromatických látek fyzikálně vázaných v nanomicele.
Dalším výhodným provedením nanomicelární kompozice podle vynálezu je kompozice obsahující 0,3 až 8,0 hmotn. %, s výhodou 2,5 až 8,0 hmotn. %, výhodněji 5,0 až 8,0 hmotn. % biologicky aktivních aromatických látek vzhledem k hmotnostnímu obsahu hydrofobizovaného esterového derivátu kyseliny hyaluronové nebo jeho soli, přičemž biologicky aktivní aromatická látka je vybrána ze skupiny zahrnující farmaceuticky a kosmeticky aktivní látky, zejména vitamíny, léčiva, s výhodou cytostatika, steroidy, dále fytoextrakty, fytokomplexy nebo fytoaktivní látky apod. S výhodou se jedná o resveratrol, koenzym Q10, retinyl palmitát. Nanomicelámí kompozice podle vynálezu se použijí pro farmaceutické a kosmetické aplikace.
Ještě dalším výhodným provedením vynálezu je nanomicelámí kompozice, která obsahuje vyšší koncentraci hydrofobizovaného esterového derivátu kyseliny hyaluronové než je jeho kritická agregační koncentrace. Jeho koncentrace v kompozici podle vynálezu ve vodném roztoku je v rozmezí 0,003 mg.ml'1 až 20 mg.ml"1, s výhodou 1 až 10 mg.mr1. Nanomicely obsahující hydrofobizované esterové deriváty kyseliny hyaluronové podle vynálezu zůstávají i při koncentraci 0,003 mg.ml"1 ve vodném roztoku intaktní, tedy neagregují se.
Ještě dalším provedením vynálezu je způsob přípravy nanomicelámí kompozice, který spočívá v tom, že se hydrofobizovaný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo jeho sůl podle obecného vzorce (I) rozpustí ve vodě a biologicky aktivní aromatická látka se rozpustí v organickém rozpouštědle vybraném ze skupiny obsahující trichlormethan, methanol nebo propan-2-ol, přičemž oba roztoky se smíchají, poté se organické rozpouštědlo odstraní. Organické rozpouštědlo se s výhodou odstraní vakuovou evaporací, následně se vodná fáze rehydratuje, získané nanomicelámí útvary se zfiltrují a nakonec lyotilizují.
Hydrofobizované esterové deriváty HA podle vynálezu, například deriváty 11-(4-methylfenyl )undekanoyl hyaluronátu (UNFEHA) (viz Příklady 39,42,49) nebo 4-oktyloxybenzoyl hyaluronátu (OBEHA) (viz Příklady 43, 44), vykazují až dvakrát vyšší enkapsulaci aktivní látky (Obr. 9), ve srovnání s deriváty s alifatickým řetězcem HA-C18:1 (viz Příklady 45,46 a 50), HA-C16 (viz Příklad 47) nebo HA-C6 (viz Příklad 48), které jsou uvedeny v dokumentu WO2014082609. Hydrodynamická velikost (cca 40 až 200 nm, Obr. 10) a rozpustnost vzniklých agregátů ve vodném nebo fyziologickém prostředí je vhodná pro topickou i parenterální aplikaci nosičů loadovaných aktivními látkami. Nosiče jsou necytotoxické a mohou podporovat aktivitu vázané látky. Stabilita nosičů v přítomnosti bílkovin krevního séra se s výhodou zvyšuje s délkou substituentu (Obr. 11).
Deriváty HA s alkylarylovými nebo alkylheteroarylovými substituenty podle vynálezu mohou enkapsulovat biologicky aktivní aromatické látky, léčiva a další komponenty, přičemž biologicky aktivní aromatická látka je vybrána ze skupiny zahrnující farmaceuticky a kosmeticky aktivní látky, s výhodou vitamíny, léčiva s výhodou cytostatika, steroidy, dále fytoextrakty, fytokomplexy nebo fytoaktivní látky apod.
Definice pojmů: Část substituentu „CřH^-,, znamená fenylový zbytek nebo Ph, přičemž Části substituentu jsou k němu navázány v pozici para. Část substituentu „NCiiHs" znamená karbazylový zbytek, který je ke zbytku substituentu navázán před heteroatom N.
Termín „aktivovaná kyselina'4 je produkt reakce mezi benzoylchloridem a substituovanou kyselinou benzoovou nebo fenyl(tolyi)alkylovou kyselinou, anebo směsného anhydridu kyseliny benzoové a kyseliny fenyl-alkylové, kyseliny alkyl-oxo-benzoové nebo karbazol N-alkylové kyseliny.
Termín „organická báze“ je alifatický amin, s výhodou terciální amin mající rozvětvenou, nasycenou nebo nenasycenou, substituovanou nebo nesubstituovanou C3-C30 alkylovou skupinu.
Termín „kritická agregační koncentrace" (CAC) je koncentrace polymeru, při níž se v roztoku polymeru začínají tvořit hydrofobní domény agregací nepolárních funkčních skupin. Pod touto koncentrací jsou jednotlivé polymemí řetězce v systému ve formě nezagregovaných řetězců.
Termín „laboratorní teplota" odpovídá 20 až 25°C.
Termín „biologicky aktivní aromatická látka" znamená látku, která vykazuje biologickou aktivitu při kosmetické nebo farmaceutické aplikaci a obsahuje delokalizovaný systém π elektronů v planámí molekule.
Stupeň substituce (SS) znamená (průměrný) počet substituentu -CO(CH2)x CVTč-p- CI I3, nebo “COCóÍ Í4-pO(CÍ Í2)yCH3 nebo CO-(CH2)zNCi2Hs na 100 dimerů HA nebo její soli.
Polyraerní nanomicely jsou agregáty koloidních rozměrů tvořené polymerními řetězci amfifilních polymerů ve vodném prostředí, kdy jádro micely tvoří nepolární funkční skupiny polymeru, zatímco obal micely tvoří polární část polymeru.
Ekvivalent (ekv) se vztahuje na dimer kyseliny hyaluronové, není-li uvedeno jinak. Procenta se uvádějí jako hmotnostní procenta, pokud není uvedeno jinak. h ehled obrázků na výkresech
Obr. l.HSQC 6-fenylhexanoylhyaluronátu
Obr. 2. DOSY 8- fenyloktanoyl hyaluronátu
Obr. 3. 'HNMR ll-(4-methylfenyl)undekanoyl hyaluronátu (UNFEHA)
Obr. 4. HSQC 1 l-(4-methylfenyl)undekanoyl hyaluronátu (UNFEHA)
Obr. 5. 'H NMR 4-oktyloxybenzoyl hyaluronátu (OBEHA)
Obr.6. Vliv 4-fenylbutanoyl derivátu kyseliny hyaluronové na viabilitu Swiss 3T3 buněčné linie
Obr. 7. Vliv 1 l-(4-methylfeny)undekanoyl derivátu kyseliny hyaluronové na viabilitu Swiss 3T3 buněčné linie
Obr. 8. Vliv 4-oktyloxybenzoyl derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové na viabilitu Swiss 3T3 buněčné linie
Obr. 9. Porovnaní UV/Vis spekter stanovení resveratrolu v HA-0-CO(CH)ioC6H4-/> CH3 (UNFEHA) a derivátu HA-C18:1 podle W02014082609.
Obr. 10. DLS analýza a SEM s polymerními micelami z derivátu UNFEHA. Enkapsulován je resveratrol.
Obr. 11. Grafický výsledek stability micel tvořených jednotlivě deriváty kyseliny hyaluronové nebo jejich solemi podle obecného vzorce I, kde HA-0-C0(CH)x C6H4-/J-CH3 a x=3, 5, 7 a 10 v roztoku bovinního sérového albuminu (v koncentraci 40 mg/ml).
Literatura 1. Schanté CE, Zuber G, Herlin C, Vandamme TF. Chemical modifications of hyaluronic acid for the synthesis of derivatives for a broad range of biomedical applications. Carbohydrate Polymers 2011 ;85(3):469-489. 2. Larrivee-Aboussafy C, Jones BP, Price KE, Hardink MA, McLaughlin RW, Lillie BM, et al. DBU Catalysis of Ν,Ν'-Carbonyldiimidazole-Mediated Amidations. Org Lett 2010; 12(2):324-327. 3. Morton RC, Mangroo D, Gerber GE. A novel method of complete activation by carbonyldiimidazole: application to ester synthesis. Canadian Journal of Chemistry 1988 2015/07/15;66(7):1701-1705. 4. Jiang G, Park K, Kim J, Kim KS, Hahn SK. Target Specific Intracellular Delivery of siRNA/PEI-HA Complex by Receptor Mediated Endocytosis. Mol Phann 2009;6(3):727-737. 5. Wang C, Yan Q, Liu H-B, Zhou X-H, Xiao S-J. Different EDC/NHS Activation Mechanisms betvveen PAA and PMAA Brushes and the Following Amidation Reactions. Langmuir 2011 ;27( 19): 12058-12068. 6. D'Este M, Eglin D, Alini M. A systematic analysis of DMTMM vs EDC/NHS for ligation of amines to hyaluronan in water. Carbohydr Polym 2014 Aug 8; 108:239-246. 7. Smejkalová D, Hermannová M, Buffa R, Čožiková D, Vištejnová L, Matulková Z, et al. Structural characterization and biological properties of degradation byproducts from hyaluronan after acid hydrolysis. Carbohydrate Polymers 2012;88(4):1425-1434. 8. Wang YM, Ikeda A, Hoři N, Takemura A, Ono H, Yamada T, et al. N,N-dicyclohexylcarbodiimide assisted synthesis and characterization of poly(vinyl alcohol-co-vinyl levulinate). Polymer 2005:46(23):9793-9802. 9. Huang P, Yang C, Liu J, Wang W, Guo S, Li J, et al. Improving the oral delivery effíciency of anticancer drugs by chitosan coated polycaprolactone-grafted hyaluronic acid nanoparticles. Journal of Materials Chemistry B 2014;2(25):4021-4033. 10. Jang E, Lim E-K, Choi Y, Kim E, Kim H-O, Kim D-J, et al. pi-Hyaluronan nanocarriers for CD44-targeted and pH-boosted aromatic drug delivery. Journal of Materials Chemistry B 2014;l(41):5686-5693. 11. Choi KY, Saravanakumar G, Park JH, Park K. Hyaluronic acid-based nanocarriers for intracellular targeting: interfacial interactions with proteins in cancer. Colloids Surf B Biointerfaces 2012 Nov 1:99:82-94. 12. Lim E-K, Kim H-O, Jang E, Park J, Lee K, Suh J-S, et al. Hyaluronan-modified magnetic nanoclusters for detection of CD44-overexpressing breast cancer by MR imaging. Biomaterials 2011;32(31):7941-7950. 13. Lai Y, Lei Y, Xu X, Li Y, He B, Gu Z. Polymeric micelles with [smáli pi]-[small pi] conjugated cinnamic acid as lipophilic moieties for doxorubicin delivery. Journal of Materials Chemistry B 2013:1(34):4289-4296. 14. Sosnik A, Menaker Raskin M. 2015Polymeric micelles in mucosal drug delivery: Challenges towards clinical translation. Biotechnol Adv Jan 15. 15. Calce E, Ringhieri P, Mercurio FA, Leone M, Bugatti V, Saviano M, et al. A biocompatible process to prepare hyaluronan-based materiál able to self-assemble into stable nano-particles. RSC Advances 2015:5(37):29573-29576. 16. Novoa-Carballal R, Muller AHE. Synthesis of polysaccharide-b-PEG block copolymers by oxime click. Chem Commun 2012:48(31):3781-3783. 17. Novoa-Carballal R, Silva C-, Moller S, Schnabelrauch M, Reis RL, Pashkuleva 1. Tunable nano-carriers from clicked glycosaminoglycan block copolymers. Journal of Materials Chemistry B 2014:2(26):4177-4184. 18. Xu P, Tang H, Li S, Ren J, Van Kirk E, Murdoch WJ, et al. Enhanced Stability of Core-Surface Cross-Linked Micelles Fabricated from Amphiphilic Brush Copolymers. BÍomacromolecules 2004;5(5): 1736-1744. 19. Danquah M, Fujiwara T, Mahato Rl. Self-assembling methoxypoly(ethylene glycol)-b-poly(carbonate-co-L-lactide) block copolymers tor drug delivery. Biomaterials 2010 Mar;31(8):2358-2370. 20. W atanabe M, Kawano K, Y okoyama M, Opanasopit P, Okano T, Maitani Y. Preparation of camptothecin-loaded polymeric micelles and evaluation of their incorporation and circulation stability. Int J Pharm 2006 Feb 3;308( 1 -2): 183-189. 21. Jones M-C, Leroux J-C. Polymeric micelles: anewgeneration of colloidal drug carriers. Eur J Pharm Biopharm 1999;48(2): 101-111. Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Syntéza 4-fenylbutanoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze DIPEA 0,5064 g (1,25 mmol, 6 x 10’ g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění HA bylo k roztoku přidáno 0,435ml (DTPEA; 2,5 mmol, 2 ekv. dimeru HA), absolutní propan-2-ol (4 ml) a 2 mg (0,0125 mmol) 4-dimethylaminopyridinu (DMAP) (0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna 0,4105 g ,4- kyselina fenylbutanová (2,5 mmol, 2 ekv) v absolutním propan-2-olu (4 ml), poté byla do roztoku přidána báze 0,435 ml (DIPEA; 2 ekv) a 0,29 ml benzoylchloridu (2,5 mmol, 2 ekv). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min za laboratorní teploty. Směsný anhydrid kyseliny benzoové a kyseliny 4-fenyl-butanové (2 ekv) byl přidán k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě po dobu 2 hod.. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla ponechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml), a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. 'H NMR (D2O) signály acylu: δ 1,9 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,35 - 2,5 ppm (bs, 2H, C.H2), δ 2,6 - 2,73 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,1 - 8,2 ppm (m, 5H, CóHs). Signály HA: δ 2,1 ppm (s, 3H, NHCH3), (m, 10H, skeletal HA), δ 4,5 ppm (d, 2H, diasterotopicky, HA) SS 34%(‘HNMR)
Příklad 2: Syntéza 4-fenylbutanoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze DABCO 0,507 g (1,25 mmol, 6 x 103 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění HA bylo k roztoku přidáno 0,28 g (2,5 mmol, 2 ekv dimeru HA) l,4-diazabicyklo[2.2.2]oktanu (DABCO); absolutní propan-2-ol (4 ml) a 2 mg 4-dimethylaminopyridinu (DMAP) (0,0125 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna 0,4105 g kyselina 4-fenylbutanová (2,5 mmol, 2 ekv.) v absolutním propan-2-olu (4 ml), poté bylo do roztoku přidáno 0,28 g (2,5 mmol) 1,4-diazabicyklo[2.2.2]oktanu (DABCO; 2 ekv) a 0,29 ml benzoylchloridu (2,5 mmol, 2 ekv). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min. za laboratorní teploty. Takto aktivovaná kyselina 4-fenylbutanová (2 ekv) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při 25°C, po dobu 2 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantací byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml), a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. 1H NMR (DiO) signály acylu: 6 1,9 ppm (bs, 2H, CHi), δ 2,35 -2,5 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,6 - 2,73 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,1 - 8,2 ppm (m, 5H, C6H5). Signály HA: δ 2,1 ppm (s, 3H, NHCH3), (m, 10H, skeletal HA), δ 4,5 ppm (d, 2H, diasterotopicky, HA) SS 2% (’H NMR)
Příklad 3: Syntéza 4-fenylbutanoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze TEA 0,50 g (1,25 mmol, 18 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána 0,35 ml triethylamin (TEA, 3,75 mmol nebo 3,0 ekv.), absolutní propan-2-ol (6 ml) a 0,0015 g 4-dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 4-fenylbutyrová (0,3 g, 1,8 mmol, 1,5 ekv.) v absolutním propan-2-olu (4 ml), poté byly do roztoku přidány (TEA, 3,75 mmol nebo 3,0 ekv.) a 0,22 ml benzoylchloridu (1,8 mmol, 1,5 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min. za laboratorní teploty. Takto aktivovaná 4-fenylbutyrová kyselina (1,5 ekv) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 2 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), k vysrážení produktu. Tato směs byla ponechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml), a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. 1H NMR (D2O) signály acylu: δ 1,9 ppm (bs, 2H, Ob), δ 2,35 -2,5 ppm (bs, 211, Cl b), δ 2,6 - 2,73 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,1 - 8,2 ppm (m, 5H, C6H5). Signály HA: δ 2,1 ppm (s, 3H, NHCH3), (m, 10H, skeletal HA), δ 4,5 ppm (d, 2H, diasterotopicky, HA) SS 43 % ( ιΗ NMR)
Příklad 4: Syntéza 4-fenylbutanoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze TEA 0,501 g (1,25 mmol, 1,8 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byl přidán izopropanol (4 ml), 0,29 ml triethylaminu (TEA, 2,5 mmol, 2 ekv) a 0,0015 g dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 4-fenylmáselná (0,4105 g, 2,5 mmol, 2 ekv) v izopropanolu (4 ml), poté byly do roztoku přidány TEA (0,29 ml, 2,5 mmol, 2 ekv) a benzoylchlorid (2,5 mmol, 2,0 ekv). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min za laboratorní teploty. Takto aktivovaná kyselina 4-fenylmáselná (2 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu a reakce probíhala při laboratorní teplotě 2 h. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního isopropanolu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem isopropanolu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním isopropanolem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 h při 40 °C. SS 29 % (‘H NMR). Ή NMR (D20) signály acylu: δ 1,9 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,35 -2,5 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,6 - 2,73 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,1 - 8,2 ppm (m, 5H, C6H5).
Příklad 5: Syntéza 4-fenylbutanoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze TEA 0,5040 g (1,25 mmol, 1,8 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byly přidány izopropanolu (4 ml), 0,35 ml triethylaminu (TEA, 2,5 mmol, 2 ekv) a 0,0015 g dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 4-fenylmáselná (0,532 g, 3,15 mmol, 2,5 ekv) v izopropanolu (4 ml), poté byly do roztoku přidány TEA (0,35 ml, 2,5 mmol, 2 ekv) a benzoylchlorid (3,12 mmol, 2,5 ekv). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min za laboratorní teploty. Takto aktivovaná kyselina 4-fenylmáselná (2,5 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu a reakce probíhala při laboratorní teplotě 2 h. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního isopropanolu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla ponechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem isopropanolu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním isopropanolem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 h při 40 °C. SS 20 % ('H NMR). ’H NMR (D20) signály acylu: δ 1,9 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,35 -2,5 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,6 - 2,73 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,1 - 8,2 ppm (m, 5H, CďHj).
Příklad 6: Syntéza 6-fenylhexanoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze DIPEA 0,503 g (1,25 mmol, 1,5 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 0,5 ml (DIPEA, 2,5 mmol, 2,0 ekv.), absolutní propan-2-ol (4 ml) a 0,0015 g 4-dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna 0,16 g kyselina 6-fenylhexanová (0,87 mmol, 0,7 ekv.) v absolutním propan-2-olu (4 ml), poté byly do roztoku přidány 0,5 ml DIPEA (2.5 mmol, 2,0 ekv.) a 0,29 ml benzoylchlorid (0,87 mmol, 0,7 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min. za laboratorní teploty. Takto aktivovaná 6- kyselina fenylhexanová (0,2 ekv) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 2 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS: 32 % ('H NMR) HSQC je ukázáno v Obr. 1. 1I I NMR (D2O) signály acylu: δ 1,2 - 1,4 ppm (bs, 2H, CH2), δ 1,5 - 1,72 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,25 - 2,5 ppm (bs, 4H, CH2), δ 2,55 - 2,7 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,1 - 8,2 ppm (m, 5H, C6H5).
Příklad 7: Syntéza 6-fenylhexanoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze DIPEA 0,5 g (1,25 mmol, 6 x 10' g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 0,44ml (DIPEA, 2,5 mmol, 2 ekv.), absolutní propan-2-ol (4 ml) a 0,0015 mg 4-dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 6-fenylhexanová (0,481 g, 2,5 mmol, 2 ekv.) v absolutním propan-2-olu (4 ml), poté byly do roztoku přidány 0,44 ml DIPEA (2,5 mmol,2 ekv.) a 0,29 ml benzoylchloridu (2,5 mmol, 2 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakění směs míchána právě 30 min. za laboratorní teploty. Takto aktivovaná 6- kyselina fenylhexanová (2,0 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 2 hod.. Poté bylo k reakění směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 52 % ('H NMR) Ή NMR (D2O) signály acylu: δ 1,2 - 1,4 ppm (bs, 2H, CE12), 6 1,5 - 1,72 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,25 - 2,5 ppm (bs, 4H, CH2), δ 2,55 - 2,7 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,1 - 8,2 ppm (m, 5H, C6H5).
Příklad 8: Syntéza 6-fenylhexanoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí pomocí báze DIPEA 0,5 g (1,25 mmol, 1,5 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byly přidány tetrahydrofuran (4 ml), N,N -diisopropylethylamin 0,44 ml (DIPEA, 2,5 mmol, 2 ekv) a 0,0015 g dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 6-fenylhexanová (0,4105 g, 2,5 mmol, 2 ekv.) v tetrahydrofuranu (4 ml), poté byly do roztoku přidány 0,44 ml DIPEA (2,5 mmol, 2 ekv.) a benzoylchlorid (2,5 mmol, 2 ekv). Po přídavku benzoylchloridu byla reakění směs míchána právě 30 min za laboratorní teploty. Takto aktivovaná kyselina 6-fenylhexanová (2,0 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 2 h. Poté bylo k reakění směsi přidáno 100 ml absolutního isopropanolu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla ponechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem isopropanolu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním isopropanolem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 h při 40 °C. SS 45%('HNMR) 1H NMR (D20) signály acylu: δ 1.2-1,4 ppm (bs, 2H, CH2), δ 1,5-1,72 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,25 - 2,5 ppm (bs, 411, CH2), δ 2,55 - 2,7 ppm (bs, 2H, Cl 12), δ 7,1 - 8,2 ppm (m, 5H, C6H5).
Příklad 9: Syntéza 8-fenyloktanoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze DIPEA 0,5 g (1,25 mmol, 1,5 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 0,43 ml (DIPEA, 2 ekv.), absolutní propan-2-ol (4 ml) a 0,0015 g 4-dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 8-fenyloktanová (0,048 g, 0,25 mmol, 0,2 ekv.) v absolutním propan-2-olu (4 ml), poté byly do roztoku přidány DIPEA (0,2 ekv.) a 0,029 ml benzoylchloridu (0,25 mmol, 0,2 ekv). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min za laboratorní teploty. Aktivovaná kyselina 8-fenyloktanová (0,2 ekv) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala 2 hod při laboratorní teplotě. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. Při 40 °C. SS 14 % ('H NMR) '11 NMR (D20) signály acylu: δ 1,2 - 1,4 ppm (bs, 6H, CH2), 1,48 - 1,67 ppm (bs, 4H, CH2), δ 2,25 - 2,48 ppm (bs, 2H, CI I2). δ 2,54 - 2,68 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,1 - 8,1 ppm (m, 5H, CeHs).
Příklad 10: Syntéza 8-fenyloktanoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze DIPEA 0,5 g (1,25 mmol, 1,5 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 0,43 ml (DIPEA, 2 ekv.), absolutní propan-2-ol (4 ml) a 0,0015 g 4-dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 8-fenyloktanová (0,08 g, 0,25 mmol, 0,3 ekv.) v absolutním propan-2-olu (4 ml), poté byly do roztoku přidány DIPEA (0,43ml, 2 ekv.) a 0,041 ml benzoylchloridu (0,37 mmol, 0,3 ekv). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min za laboratorní teploty. Aktivovaná kyselina 8-fenyloktanová (0.3 ekv) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala 2 hod při laboratorní teplotě. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 11 % ('H NMR) DOS Y je ukázáno v Obr. 2. 'H NMR (D2O) signály acylu: δ 1,2-1,4 ppm (bs, 6H, CH2), 1,48 - 1,67 ppm (bs, 4H, CH2), δ 2,25 - 2,48 ppm (bs, 2H, CII2), δ 2,54 - 2,68 ppm (bs, 2H, CIT2), δ 7,1 - 8,1 ppm (m, 5H, C6H5). Příklad 11: Syntéza linkeru: kyseliny ll-(4-methylfenyl)undekanové krok 1) protekce
Syntéza methyl-(l 1-bromundekanoátu): 7,173 g (37,71 mmol, 2 ekv.) monohydrátu kyseliny />-toluensulfonové bylo rozpuštěno v 20 ml methanolu. K tomuto roztoku bylo přidáno 5 g (18,86 mmol kyseliny) 11-bromundekanové. Výsledný roztok byl refluxován 5 hod.. Po ochlazení reakční směsi byl methanol odpařen na RVO, získaný olej byl naředěn vodou (20 ml) a extrahován diethyletherem (DEE) (3 x 20 ml). Spojené organické podíly byly extrahovány vodou (2 x 40 ml) a solankou (1x30 ml). Organická fáze byla sušena nad Na2S04 a odpařena na RVO. Produktem byl žlutý olej. Výtěžek byl 94 %.
'H NMR (CDCb): δ 1,25 - 1,34 ppm (m, 10H, CH2), δ 1.42 ppm (kv, 2H, CH2), δ 1.62 ppm (kv, 2H, CH2), δ 1,85 ppm (kv, 2H, CH2), δ 2,30 ppm (t, 2H, CH2), δ 3,40 ppm (t, 2H, CH2), δ 3,67 ppm (s, 3H, CI13). krok 2) Friedel-Craftsova alkylace: syntéza methyl-(ll-(4-methyfenyl)undekanoátu): 2,4 g (18 mmol) bezvodého AlCb bylo rozsuspendováno v 25 ml bezvodého toluenu a vzniklá suspenze byla vychlazena na 4 °C. Do míchané suspenze byl v pětiminutových intervalech ve třech dávkách přidán methyl-(l 1 -bromundekanoát) (2,9 ml, 12 mmol). Směs byla zahřáta na 60 °C a při této teplotě byla míchána 2 hod. Po ochlazení byla reakční směs nalita na led. Vodná fáze byla extrahována diethyletherem (3 x 25 ml), spojené organické podíly byly extrahovány 10% vodným roztokem NaHCCb (1 x 50 ml). Organická fáze byla sušena nad Na2S04 a odpařena na RVO. Produkt je nažloutlý olej. Výtěžek byl 95 %.
Ή NMR (CDCb): δ 1,05 - 1,35 ppm (m, 12 H, CH2), δ 1,45 - 1,65 ppm (m, 4H, CH2), δ 2,2 - 2,3 ppm (m, 5H, CH2, CH3), 2,55 ppm (t, 2H, CH2), 3,65 ppm (m, 3H, CH2), δ 6,9 -7,2 ppm (m, CH). krok 3) deprotekce, syntéza ll-(4-methylfenyl)undekanové kyseliny: methyl-(l l-(4-methylfenyl)undekanoát) (3,328 g, 11,36 mmol) byl emulgován v 10% roztoku NaOH v MeOH (30 ml). Reakční směs byla refluxována 1 hod.. Po 10 min zahřívání vznikla bílá sraženina. Po ukončení zahřívání byl z reakční směsi odpařen MeOH. Sraženina byla zalita 20 ml H20 a pomocí koncentrované HC1 bylo pH upraveno na hodnotu 2 až 3. Produkt byl extrahován diethyletherem (3 x 30 ml). Spojené organické podíly byly promyty 10% NaHC03 (1 x 20 ml), H20 (1 x 20 ml) a sušeny nad Na2S04. Organická fáze byla sušena nad Na2S04 a odpařena na RVO. Produkt je nažloutlý olej. Výtěžek byl 87 %.
Ή NMR (CDCb): δ 1,05 - 1,35 ppm (m, 12 H, CH2), δ 1,45 - 1,65 ppm (m, 4H, CH2), δ 2,25 - 2,38 (m, 5H, CH2, CH;), δ 2,55 ppm (t, 2H, CH2), δ 6,9 - 7,2 ppm (m, CH).
Příklad 12: Syntéza ll-(4-methylfenyl)undekanoyl derivátu kyseliny hyaluronové (UNFEHA), pomocí báze DIPEA 1.8 g (4,50 mmol, 15 x 103 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 18 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze DIPEA (2 ekv.), absolutní propan-2-ol (9 ml) a 0,006 g DMAP (0,045 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina ll-(4-methylfenyl)undekanová (0,871 g, 3,15 mmol, 0,7 ekv.) v absolutním propan-2-olu (9 ml), poté byly do roztoku přidány DIPEA (2 ekv.) a benzoylchlorid (3,15 mmol, 0,7 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min při teplotě cca 0 °C. Takto aktivovaná 1 l-(4-methylfenyl)undekanová kyselina (0,7 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 2 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 150 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCI (cca 2 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 50 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 50 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 24 hod. při 40 °C. SS 13 % (Ή NMR) 'HNMR (D2O) signály acylu: δ 0,95 - 1,4 ppm (bs, 12H, CH2), 5 1.4— 1,7 ppm (bs, 4H, CH2), δ 2,3 ppm (bs, 3H, CH3), δ 2,35 - 2,48 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2.5 - 2,67 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,4 - 8,2 ppm (m, CóHs)
Příklad 13: Syntéza ll-(4-methylfenyl)undekanoyl derivátu kyseliny hyaluronové (UNFEHA), pomocí báze DIPEA 1.8 g (4,50 mmol, 15 x 103 g/mol ) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 18 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze DIPEA (2 ekv), v dimethylsulfoxidu (9 ml) a DMAP (0,045 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 1 I-(4-methylfenyl)undekanová (0,871 g, 3,15 mmol, 0,7 ekv) v dimethylsulfoxidu (9 ml), poté byly do roztoku přidány 1,16 g DIPEA (9 mmol,2 ekv.) a 0,37 ml benzoylchlorid (3,15 mmol, 0,7 ekv,). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min. při laboratorní teplotě (25 °C). Takto aktivovaná kyselina 1 l-(4-methylfenyl)undekanová (0,7 ekv) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 2 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 150 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCI (cca 2 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla ponechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 50 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 50 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C, SS 8 % ('H NMR) 'H NMR (DjO) signály acylu: δ 0,95 - 1,4 ppm (bs, 1211, CH2), δ 1,4 - 1,7 ppm (bs, 411, CH2), δ 2,3 ppm (bs, 3H, CH3), δ 2,35 - 2,48 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,5 - 2,67 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7.4 - 8,2 ppm (m, CóHs)
Příklad 14: Syntéza ll-(4-methylfenyl)undekanoyl derivátu kyseliny hyaluronové (UNFEHA), pomocí báze DIPEA 1,8 g (4,50 mmol, 15 x 103 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 18 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 1,17 g DIPEA (9 mmol, 2 ekv.) v tetrahydrofuranu (9 ml) a DMAP (0,045 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 1 l-(4-methylfenyl)undekanová (0,871 g, 3,15 mmol, 0,7 ekv.) v tetrahydrofuranu (9 ml), poté byly do roztoku přidány DIPEA (2 ekv) a benzoylchlorid (3,15 mmol, 0,7 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min při teplotě cca 0 °C. Takto aktivovaná kyselina 11 -(4-methylfenyl)undekanová (0,7 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 2 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 150 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCI (cca 2 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 50 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 50 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 17 % (1H NMR) 'H NMR (D2O) signály acylu: δ 0,95 - 1.4 ppm (bs, 12H, CH2), δ 1,4 - 1.7 ppm (bs, 4H, CH2), δ 2,3 ppm (bs, 3H, CH3), δ 2,35 - 2,48 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,5 - 2,67 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7.4 - 8,2 ppm (m, CňHs) Příklad 15: Syntéza ll-(4-methylfenyI)undekanoyl derivátu kyseliny hyaluronové (UNFEHA) 2,00 g (5,0 mmol, 1,5 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 20 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byl do roztoku HA přidán isopropanol (10 ml), 1,25 g nebo 1,74 ml DIPEA (10 mmol, 2 ekv) a 6,1 mg DMAPu (0,5 mmol, 0,01 ekv.). V 10 ml 1PA bylo rozpuštěno 0,96 g kyseliny 11 -(4-methylfenyl)undekanové (3,5 mmol, 0,7 ekv), poté bylo do roztoku přidáno 1,74 ml N,N-diisopropylethylaminu (10 mmol, 2 ekv.) a 0,40 ml benzoylchloridu (3,50 mmol, 0,7 ekv.). Při aktivaci byla reakční směs míchána při 10 °C po 30 min. Roztok aktivované kyseliny 1 l-(4-methylfenyl)undekanová (0,7 ekv), byl přimíchán do roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 2 hod. Poté byl k reakční směsi přidán nasycený roztok chloridu sodného (cca 2 ml) a dále 150 ml 100% isopropanolu, aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4x50 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 50 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 h při 40 °C. SS 10 % (Ή NMR na Obr. 3 a HSQC na Obr. 4). Ή NMR (D20) signály acylu: δ 0,95 - 1,4 ppm (bs, 12H, CH2), δ 1,4 - 1,7 ppm (bs, 4H, CH2), δ 2,3 ppm (bs, 3H, CH3), δ 2,35 - 2,48 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,5 - 2,67 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,4 - 8,2 ppm (m, CftHs). Příklad 16: Syntéza ll-(4-methylfenyl)undekanoyl derivátu kyseliny hyaluronové (UNFEHA) 0,43 g (1,075 mmol, 1,5 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 18 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 0,37 ml (DIPEA, 2,15 mmol,2 ekv.), absolutní propan-2-ol (9 ml) a 0,006 g DMAP (0,045 mmol, 0,01 ekv). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 1 l-(4-methylfenyl)undekanová(0,29 g, 1,07 mmol, 1,0 ekv.) v absolutním propan-2-olu (9 ml), poté bylo do roztoku přidáno 0,37 ml DIPEA (2,15 mmol, 2 ekv.), a 0,12 ml benzoylchloridu (3,15 mmol, 1,0 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min při teplotě cca 0 °C. Takto aktivovaná kyselina 11-(4-methylfenyl)undekanová (1,0 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 2 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 150 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 2 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 50 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 50 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 33 % (!H NMR) *H NMR (D2O) signály acylu: δ 0,95 - 1,4 ppm (bs, 1211, CH2), δ 1,4 - 1,7 ppm (bs, 4H, CH2), δ 2,3 ppm (bs, 3H, CH3), δ 2,35 - 2,48 ppm (bs, 2H, CH2), δ 2,5 - 2,67 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,4 - 8,2 ppm (m, Cfdís) Příklad 17: Příprava 4-alkyl-oxy-benzoové kyseliny (RO-C6H4-COOH)
Stručně, 2,0 g kyseliny 4-hydroxybenzoové (14,5 mmol) bylo rozpuštěno ve 10% roztoku NaOH ve vodě (1,252 g NaOH v 12,5 ml vody). Poté bylo přidáno 50ml DMSO při teplotě 80°C. Do reakce byl přidáván n-alkyl-bromid (15,5 mmol, 1,1 ekv). Reakční směs byla míchána 4 hod. při laboratorní teplotě. Reakční směs byla vlita do ledové vody (120 ml), Pomocí koncentrované HCl bylo pH převedeno do kyselé oblasti (pil 2). Precipitát byl filtrován přes fritu pomocí sníženého tlaku. Produkt byl rekrystalizován s roztokem acetonitril: vodu (50/50 obj/obj).
a) kyselina 4-oktyl-oxy-benzoová: 'H NMR (CDCb): δ 0,89 ppm (t, 3H, CH3), δ 1,2 - 1,4 ppm (m, 8H, CH2), δ 1,47 ppm (kv, 2H, CH2), δ 1,81 ppm (kv, 2H, CH2), δ 4,02 ppm (t, 2H, CH2), δ 6,93 ppm (d, 2H, CH), δ 8,05 ppm (d, 2H, CH), δ 11,88 ppm (s, 1H, COOH). Vytežek: 84% b) Kyselina-4-(decanoyl-oxy)benzoová: 'H NMR (CDCb): δ 0,8 ppm (t, 3H, CH3), δ 1,2 - 1,4 ppm (m, 10H, CH2), δ 1,47 ppm (kv, 2H, CH2), δ 1,8 ppm (kv, 2H, CH2), δ 4,02 ppm (t, 2H, CH2), δ 6,93 ppm (d, 2H, CH), δ 8,05 ppm (d, 2H, CH), δ 11,88 ppm (s, 1H, COOH). Vytežek: 60% c) Kyselina-4-(dodekanoyloxy)benzoová: *H NMR (CDCI3): δ 0,8 ppm (t, 311, CII3), δ 1,2-1,4 ppm (m, 12H, CH2), δ 1,47 ppm (kv, 2H, CH2), δ 1,8 ppm (kv, 2H, CH2), δ 4,02 ppm (t, 2H, CH2), δ 6,93 ppm (d, 2H, CH), δ 8,05 ppm (d, 2H, CH), δ 11,88 ppm (s, 1H, COOH). Vytežek: 45%
Příklad 18: Syntéza 4-oktyloxybenzoyl derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové pomocí báze D1PEA 0,5 g (1,25 mmol, 6 x 103 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 4,4 ml DIPEA (2,5mmol, 2 ekv.), absolutní propan-2-ol (4 ml) a dimethylaminopyridin (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 4-oktyl-oxybenzoová (0,6960 g, 2,5 mmol, 2 ekv) v absolutním propan-2-olu (8 ml), poté bylo do roztoku přidáno 6,6 ml DIPEA (3,75 mmol, 3 ekv.) a 0,25 ml benzoylchloridu (2,5 mmol, 2 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min. za laboratorní teploty. Takto aktivovaná kyselina 4-oktyl-oxybenzoová (2 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při 37°C, 12 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla ponechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 0,57 % (*H NMR) 'H NMR (EfcO) signály acylu: δ 0,85 ppm (s, 3H, CH3), δ 1,19 - 1,40 ppm (m, 12H, CH2), δ 1,45 ppm (bs, 2H, CH2), δ 1,70 - 1,84 ppm (bs, 2H, CH2), δ 4,09 - 4,24 (bs, 2H, CH2), δ 7,28 -8,21 (m, 4H, C6H4). Příklad 19: Syntéza 4-oktyloxybenzoyI derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové pomocí
báze TEA 0,1 g (0,25 mmol, 6 x 103 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 2 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 0,102 ml (TEA, 3 ekv), absolutní propan-2-ol (4 ml) a 2 mg dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna 0,094 g kyseliny 4-oktyloxybenzoové (0,375 mmol, 1,5 ekv.) v absolutním propan-2-olu (2 ml), poté byly do roztoku přidány 0,102 ml TEA (3 ekv.) a 0,044 ml benzoylchlorid (0,375 mmol, 1,5 ekv). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána 30 min. za laboratorní teploty. Takto aktivovaná kyselina 4-oktyloxybenzoová (1,5 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala 3 hod při laboratorní teplotě. Poté bylo k reakční směsi přidáno 25 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 5,7 % (1H NMR) 1H NMR (D20) signály acylu: δ 0,86 ppm (s, 3H, CH3), δ 1,21 - 1,40 ppm (m, 8H, CH2), δ 1,41 - 1,51 ppm (bs, 2H, CH2), δ 1,70 - 1,85 ppm (bs, 2H, CH2), δ 4,09 - 4,24 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,35 - 8,19 ppm (m, 4H, C6H4).
Příklad 20: Syntéza 4-oktyIoxybenzoyl derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové pomocí báze TEA 1,0 g (2,5 mmol, 6 x 103 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 2 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 1,02 ml (TEA, 3 ekv), absolutní propan-2-ol (4 ml) a 2 mg dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna 0,94 g kyseliny 4-oktyloxybenzoové (3,75 mmol, 1,5 ekv.) v absolutním propan*2-olu (2 ml), poté byly do roztoku přidány 1,02 ml (TEA, 3 ekv), a 0,53 ml benzoylchloridu (0,375 mmol, 1,5 ekv). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána 3 hod. 15 min za 5°C. Takto aktivovaná kyselina 4-oktyloxybenzoová (1,5 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala 19 hod při laboratorní teplotě. Poté bylo k reakční směsi přidáno 25 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem(4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 6,7 % ('H NMR) 1H NMR (D2O) signály acylu: δ 0,86 ppm (s, 3H, CH3), δ 1,21 - 1,40 ppm (m, 8H, CH2), δ 1,41 - 1,51 ppm (bs, 2H, CH2), δ 1,70 - 1,85 ppm (bs, 2H, CH2), δ 4,09-4,24 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,35 - 8,19 ppm (m, 4H, C6H4).
Příklad 21: Syntéza 4-oktyloxybenzoyl derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové pomocí báze TEA 0,50 g (1,25 mmol, 1,5 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 10 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 0,170 ml (TEA, 1 ekv), absolutní propan-2-ol (10 ml) a 8 mg dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0625 mmol, 0,05 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna 0,313 g kyseliny 4-oktyloxybenzoové ( 1,25 mmol, 1,0 ekv.) v absolutním propan-2-olu (2 ml), poté byly do roztoku přidány 0,170 ml TEA (1 ekv.) a 0,144 ml benzoylchloridu (1,25 mmol, 1,0 ekv). Reakční směs byla míchána 30 min. za laboratorní teploty. Takto aktivovaná kyselina 4-oktyloxybenzoová (1,0 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala 3 hod při laboratorní teplotě. Poté bylo k reakční směsi přidáno 25 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem(4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 4,4 % ('H NMR) 'H NMR (D2O) signály acylu: δ 0,86 ppm (s, 3H, CH3), δ 1,21 - 1,40 ppm (m, 8H, CH2), δ 1,41 - 1,51 ppm (bs, 2H, CH2), δ 1,70 - 1,85 ppm (bs, 2H, CH2), δ 4,09 - 4,24 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,35 -8,19 ppm (m. 4H, C6H4).
Příklad 22: Syntéza 4-oktyloxybenzoyl derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové pomocí báze TEA 0,5 g (1,25 mmol, 1,5 xl04g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 10 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 0,5 ml (TEA, 3 ekv.) v absolutním propan-2-olu (4 ml) a 8 mg dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,05 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 4-oktyloxybenzoová (0,469 g, 1,87 mmol, 1,5 ekv.) v absolutním propan-2-olu (10 ml), poté byly do roztoku přidány TEA (3 ekv.) a benzoylchlorid (1,87 mmol, 1,5 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 4 hod při 60°C. Takto aktivovaná 4-oktyloxybenzoová kyselina (1,5 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotu 24 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem(4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 3,8 % (iHNMR) !H NMR (D2O) signály acylu: δ 0,86 ppm (s, 3H, CH3), δ 1,21 - 1,40 ppm (m, 8H, CH2), δ 1,41 - 1,51 ppm (bs, 2H, CH2), δ 1,70 - 1,85 ppm (bs, 2H, CH2), δ 4,09-4,24 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,35 - 8,19 ppm (m, 4H, C6ÍI4).
Příklad 23: Syntéza 4-oktyloxybenzoyl derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové pomocí báze TEA 0,1 g (0,25 mmol, l,5xl04 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 10 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 0,102 ml (TEA, 2 ekv.),absolutní propan-2-ol (4 ml) a 2 mg dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,05 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 4-oktyloxybenzoová (0,125 g, 0,5 mmol, 2 ekv.) v absolutním propan-2-olu (10 ml), poté byly do roztoku přidány TEA (2 ekv.) a 0,44 ml benzoylchloridu (0,375 mmol, 2 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min za laboratorní teploty. Takto aktivovaná 4-oktyloxybenzoová kyselina (2 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při 60°C, 24 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla ponechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 5,0 % ('H NMR) 'H NMR (D2O) signály acylu: δ 0,86 ppm (s, 3H, CH3), δ 1,21 - 1,40 ppm (m, 8H, CH2), δ 1,41 - 1,51 ppm (bs, 2H, CH2), δ 1,70 - 1,85 ppm (bs, 2H, CH2), δ 4,09 - 4,24 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,35 - 8,19 ppm (m, 4H, C6H4).
Příklad 24: Syntéza 4-oktyloxybenzoyl derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové pomocí báze TEA 0,5 g (1,25 mmol, 1,15 xlO3 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 10 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 0,5 ml (TEA, 3 ekv.) v absolutním propan-2-olu (4 ml) a 8 mg dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,05 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 4-oktyloxybenzoová (0,469 g, 1,87 mmol, 1,5 ekv.) v absolutním propan-2-olu (lOml), poté byly do roztoku přidány TEA (3 ekv.) a benzoylchlorid (1,87 mmol, 1,5 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 3 hod. 15 min za 10°C. Takto aktivovaná 4-oktyloxybenzoová kyselina (1,5 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala za laboratorní teploty po dobu 20h. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) potom absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 22,7% (Ή NMR) *H NMR (D2O) signály acylu: δ 0,86 ppm (s, 3H, CH3), δ 1,21 - 1,40 ppm (m, 8H, CH2), δ 1,41 -1,51 ppm (bs, 2H, CH2), δ 1,70 - 1,85 ppm (bs, 2H, CH2), δ 4,09 - 4,24 ppm (bs, 2H, CH2), δ 7,35 - 8,19 ppm (m, 4H, C6H4). Příklad 25: Syntéza 4-oktyloxybenzoyl derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové pomocí
báze TEA 1,0 g (2,5 mmol, 4,2 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 1,02 ml (TEA, 7,5 mmol 3 ekv.), absolutní propan-2-ol (4 ml) a 16 mg dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,01 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 4-oktyl-oxybenzoová (0,93 g, 3,75 mmol, 1,5 ekv.) v absolutním propan-2-olu (8 ml), poté byly do roztoku přidány 1,02 ml TEA (7,5 mmol, 3 ekv.) a 0,43 ml benzoylchloridu (3,75 mmol, 1,5 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 3 hod. 15 min. za 10°C. Takto kyselina aktivovaná 4-oktyl-oxybenzoová (1,5 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 20 h. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla ponechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 h při 40 °C. SS 16 % (Ή NMR) na Obr. 5. 'H NMR (D2O) signály acylu: δ 0,85 ppm (s, 3H, CH3), δ 1,19 - 1,40 ppm (m, 12H, CH2), δ 1,45 ppm (bs, 2H, CH2), δ 1,70 - 1,84 ppm (bs, 2H, CH2), δ 4.09 - 4.24 (bs, 2H, CH2), δ 7,28 - 8,21 (m, 4H, C6H4).
Příklad 26: Syntéza 4-oktyIoxybenzoyl derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové pomocí báze TEA 0,5 g (1,25 mmol) 1,98 x 10s g/mol hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 10 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 0,5 ml TEA (3,75 mmol, 3 ekv.) v absolutní propan-2-olu (4 ml) a 8 mg dimethylaminopyridinu (DMAP, 0,0125 mmol, 0,05 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 4-oktyloxybenzoová (0,469 g, 1,87 mmol, 1,5 ekv.) v absolutním propan-2-olu (10 ml), poté byly do roztoku přidány TEA (3 ekv.) a benzoylchlorid (1,87 mmol, 1,5 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 3h 15 min za 10°C. Takto aktivovaná 4-oktyloxybenzoová kyselina (1,5 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala za laboratorní teploty 20 h. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) potom absolutním propan-2-olem(4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 35 % ('H NMR) 111 NMR (D2O) signály acylu: δ 0,85 ppm (s, 3H, CH3), δ 1,19 - 1,40 ppm (m, 12H, CH?), δ 1,45 ppm (bs, 2H, CH2), δ 1,70 - 1,84 ppm (bs, 2H, CH2), δ 4,09 - 4,24 (bs, 2H, CH2), δ 7,28 -8,21 (m,4H, C6H4).
Příklad 27. Syntéza 4-dekanoyloxybenzoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze TEA 0,5 g (1,25 mmol, 1,5 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 1,2 ml TEA (6,25mmol, 6 ekv.), absolutní propan-2-ol (4 ml) a dimethylaminopyridin (DMAP 0,065 mmol, 0,05 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 4-dekanoxybenzoová (0,8 g, 2,5 mmol, 2,0 ekv.) v absolutním propan-2-olu (8 ml), poté byly do roztoku přidány 1,2 ml TEA (6,25 mmol, 6 ekv.), a benzoylchlorid (2,5 mmol, 2,0 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 2h min. za 10°C. Takto aktivovaná kyselina 4-dekanoxybenzoová (2,0 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 20 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 10 % ('H NMR) *H NMR (D2O) signály acylu: δ 0,83 ppm (bs, 3H, CH3), δ 1,18— 1,50 ppm (m, 18H, CH2), δ 1.69 ppm (m, 2H, CH2), δ 4.12 ppm (bs, 2H, CH2), δ 6,82 - 8,18 ppm (m, 4H, C6H4).
Příklad 28. Syntéza 4-dodecyloxybenzoyl derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze TEA 0,5 g (1,25 mmol, 1,5 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpuštěno v 8 ml demineralizované vody. Po úplném rozpuštění byla přidána báze 1,2 ml TEA (6,25mmol, 6 ekv.), absolutní propan-2-ol (4 ml) a dimethylaminopyridin (DMAP, 0,0065 mmol, 0,05 ekv.). Zároveň byla rozpuštěna kyselina 4-dodecyl-oxy-benzoová (0, 9 g, 2,5 mmol, 2.0 ekv.) v absolutním propan-2-olu (8 ml), poté byly do roztoku přidány 2 ml TEA (6,25mmol, 6 ekv.), a benzoylchlorid (2,5 mmol, 2,0 ekv.). Po přídavku benzoylchloridu byla reakční směs míchána právě 30 min. za 10°C. Takto aktivovaná kyselina 4-dodecyloxybenzoová (2,5 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 20 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla nechána dekantovat. Sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml). Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS 7 % ('H NMR) 'H NMR (D2O) signály acylu: δ 0,83 ppm (bs, 3H, CH3), δ 1,18 - 1,50 ppm (m, 18H, CH2), δ 1.69 ppm (m, 2H, CH2), δ 4,12 ppm (bs, 2H, CH2), δ 6,82 - 8,18 ppm (m, 4H, C6H4). Příklad 29. Příprava kyseliny ll-(9-karbazolyl)undekanové:
Krok 1: Alkylace karbazolu: 1,008 g (5,985 mmol) karbazolu a 1,8 ml (7,459 mmol) methyl 11-bromundekanoátu bylo přidáno v acetonitrilu, dále 0,4805 g K2CO3 (17,95 mmol) bylo rozsuspendováno v smeš. Reakce byla zahřívána k refluxu 28 h, po chlazení na laboratorní teplotu byla zfíltrována přes skládaný filtr, organická fáze byla odpařena, v baňce zůstala směs bílých a žlutých krystalů a jasně žlutá kapalina, Výtěžek: 0,70 g.
Krok 2, štěpení: 0,6820 g (17,05 mmol) NaOH bylo rozpuštěno v 6,85 ml MeOH, v tomto roztoku bylo smícháno 0,9995 g methylesteru kyseliny 1 l-(9-karbazolyl)undekanové:, prášek byl dispergován a zahříván k refluxu 5h. Disperze byla vlita na fritu. Filtrát byl okyselen koncentrovanou HC1, potom byl filtrován přes fritu za sníženého tlaku, promyt EtOH, část krystalků prošla přes fritu. Výtěžek: 0,5651 g. Ή NMR (CDCb): δ 0,83 ppm (bs, 3H, CH3), δ 1,2 - 1,30 ppm (m, 13H, CH2), δ 1,6 ppm (m, 2H, CH2), δ 1,9 ppm (m, 2H, CH2), δ 4,3 ppm (m, 2H, CH2), δ 7,2 ppm (m, 2H, δ 7,3 ppm (m, 4H, C6H4),. δ 8,0 ppm (m, 2H, C6H4)
Příklad 30. Syntéza kyseliny ll-(9-karbazolyl)undekanové derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze DIPEA 0,4996 g (1,25 mmol, 1,5 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpouštěno v 8 ml demi H20, poté byly přidány 0,323 lg DIPEA (2,5 mmol, 2ekv.) a AIPA (2 ml) a DMAP (1,8 mg,). 0,2 g kyseliny 11-(9-karbazolyl)undekanové (0,6242 mmol, 0,5 ekv.) bylo rozpuštěno v 8 ml ΑΓΡΑ po cca 5 min. bylo přidáno 0,3231g DIPEA (2,5 mmol, 2ekv.), a přídavek 0,07 ml benzoylchloridu (0,62 mmol, 0,5 ekv). Po přídavku benzoylchloridu byla směs míchána 30 min. při laboratorní teplotě. Takto aktivovaná kyselina 1 l-(9-karbazolyl)undekanová (0,5 ekv) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 3 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla ponechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-olu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS = 4 % (DS určováno podle píků na 0,83 (2H) a 2,1 (3H) ppm 'H NMR (D2O): signály acylu: δ 0,83 ppm (bs, 3H, CH3), δ 1,2 - 1,30 ppm (m, 13H, CH2), δ 1,6 ppm (m, 2H, CH2), δ 1,9 ppm (m, 2H, CH2), δ 3,2-4,0 ppm ), δ 7,2 ppm (m, 211, δ 7,3 ppm (m, 4H, C6H4),. δ 8,0 ppm (m, 2H, C6H4). Signály HA: δ 2,1 ppm (s, 3H, NHCH3), (m, 10H, skeletal HA), δ 4,5 ppm (d, 2H, diasterotopicky, HA)
Příklad 31. Syntéza kyseliny ll-(9-karbazolyl) undekanové derivátu kyseliny hyaluronové pomocí báze DIPEA 0,51 g (1,25 mmol, 1,5 x 104 g/mol) hyaluronanu sodného bylo rozpouštěno v 8 ml demi H2O, poté byly přidány 0,323lg DIPEA (2,5 mmol, 2 ekv.), a AIPA (2 ml) a DMAP (1,8 mg,). 0,2 g kyseliny 1 l-(9-karbazolyl)undekanové (1,25 mmol, 1 ekv) bylo rozpuštěno v 8 ml AIPA. Po cca 5 min. bylo přidáno 0,3231 g DIPEA (2,5 mmol, 2 ekv.), a přídavek 0,14 ml benzoylchloridu (1,25 mmol, 1 ekv). Po přídavku benzoylchloridu byla směs míchána 30 min. při laboratorní teplotě. Takto aktivovaná kyselina 11 -(9-karbazolyl)undekanová (1 ekv.) byla přidána k roztoku hyaluronanu. Reakce probíhala při laboratorní teplotě 3 hod. Poté bylo k reakční směsi přidáno 100 ml absolutního propan-2-olu a nasycený roztok NaCl (cca 0,5 ml), aby došlo k vysrážení produktu. Tato směs byla ponechána dekantovat. Po dekantaci byla většina tekutiny slita a sraženina byla promyta vodným roztokem propan-2-oiu (85% obj., 4 x 25 ml) a poté absolutním propan-2-olem (4 x 25 ml) pro odstranění vody. Sraženina byla sušena 15 hod. při 40 °C. SS = 15 % (DS určováno podle píku na 0,83 (2H) a 2,1 (3H) ppm) 1H NMR (D2O): signály acylu: δ 0,83 ppm (bs, 3H, CH3), δ 1,2 - 1,30 ppm (m, 13H, CH2), δ 1,6 ppm (m. 2H, CH2), δ 1,9 ppm (m, 2H, CH2), δ 3.2-4,0 ppm (δ 7,2 ppm (m, 2H, δ 7,3 ppm (m, 4H, C6H4), δ 8,0 ppm (m, 2H, C6H4). Signály HA: δ 2,1 ppm (s, 3H, NHCH3), (m, 10H, skeletal HA), δ 4,5 ppm (d, 2H, diasterotopicky, HA) Příklad 32: Cytotoxicita 4-fenyIbutanoyl derivátu kyseliny hyaluronové
Cytotoxicita esteru kyseliny hyaluronové popsaného v Příkladu 1 byla testována na Swiss 3T3 buněčné linii. Tedy, 0,1 (hm./obj.) % roztok derivátu byl rozpuštěn v kompletním kultivačním mediu a míchán přes noc. Poté byl roztok filtrován přes sterilní filtrační zařízení (0,22 pm), vytvářející konečné koncentrace vzorku, například 1,0,5 a 0,1 mg/ml. 3000 buněk (Swiss 3T3) bylo nasazeno na jamku 96-ti jamkových testovacích destiček. Buňky byly pěstovány po dobu 24 hodin před přidáním testovaných roztoků. Buněčná životaschopnost byla měřena 0, 24, 48, 72 hodin po ošetření pomocí testu s 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyl tetrazolium bromidem (MTT). Stručně, 20 μΐ zásobního roztoku MTT (5 mg/ml) bylo přidáno do 200 μΐ media buněčné kultury v každé jamce. Destičky byly inkubovány při 37°C v inkubátoru buněčných kultur po 2,5 hodiny. MTT roztok byl odstraněn a bylo přidáno 220 μΐ lyzačního roztoku. Buňky byly lyžovány po 30 minut při laboratorní teplotě na orbitální třepačce a optická hustota byla měřena pomocí Microplate reader VERSAmax při 570 nm. Experimentální provedení bylo doplněno sadou kontrolních buněk pěstovaných v běžném mediu bez ošetření a blankovými vzorky. MTT test byl využit k získání základních informací o buněčném metabolismu a proliferaci. Test životaschopnosti buněk byl opakován minimálně třikrát a je vypočítán průměr (v procentech) ve srovnání s kontrolou a směrodatná odchylka průměrů (SEMs). Tedy, tento derivát byl nalezen tak, aby nebyl cytotoxický do koncentrace 1000 pg/ml. Grafický důkaz viability je znázorněn na Obr. 6. Příklad 33: Cytotoxicita ll-(4-methylfenyl)undekanoyl derivátu kyseliny hyaluronové (UNFEHA)
Cytotoxicita esteru kyseliny hyaluronové popsaného v Příkladu 12 byla testována na Swiss 3T3 buněčné linii stejným postupem a za stejných podmínek, jak je popsáno v Příkladu 32. Grafický důkaz viability je znázorněn na Obr.7. Příklad 34: Cytotoxicita 4-oktyIoxybenzoyI derivátu kyseliny hyaluronové
Cytotoxicita esteru kyseliny hyaluronové popsaného v Příkladu 25 byla byla testována na Swiss 3T3 buněčné linii stejným postupem a za stejných podmínek, jak je popsáno v Příkladu 23. Grafický důkaz viability je znázorněn na Obr. 8. Příklad 35: Enkapsulace Koenzymu Q10 do 4-fenylbutanoyl derivátu kyseliny hyaluronové 100 mg acylového derivátu hyaluronanu připraveného v Příkladu 1 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok Koenzymu Q10 (7 mg v 5 ml isopropanolu). Propan-2-ol byl z roztoku kontinuálně odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění propan-2-olu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 μηι skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného koenzymu Q10 (HPLC stanovení): 4,0 % (hmotn.) Příklad 36: Enkapsulace Nilské červeně do 4-fenylbutanoyl derivátu kyseliny hyaluronové 100 mg derivátu připraveného v Příkladu 1 bylo rozpuštěno v 10 ml demineralizované vody. K připravenému roztoku byl přidán roztok Nilské červeně (3,0 mg ve 3 ml CHCb) a směs roztoků byla řádně promíchána. CHCb byl z roztoku odstraněn vakuovou evaporací. Poté byly přidány další 2 ml CHCb a CHCb byl z roztoku opět odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění CHCb byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 pm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázané nilské červeně (fluorescenční stanovení): 0,2 % (hmotn.). Příklad 37: Enkapsulace FRET barviv do fenyl-alkylových derivátů kyseliny hyaluronové 200 mg derivátů HA obecného vzorce I, kde Ráje -CO(CH)xC6H4pR5, kde x=3,5,7 a 10 a Rs je -H nebo -CH3 bylo jednotlivě rozpuštěno v 20 ml demineralizované vody. 2 mg DiO (donor) byly rozpuštěny v 10 ml absolutního propan-2-olu. 2 mg Dii (akceptor) bylo rozpuštěno v 15 ml absolutního propan-2-olu. Oba roztoky (DiO a Dii) byly smíseny a polovina tohoto roztoku byla přilita k vodnému roztoku derivátu připraveného v Příkladech 4,6, 9 nebo 12. Propan-2-ol byl z roztoku odstraněn vakuovou evaporací. Poté byl přidán zbytek roztoku (DiO a Di!) a propan-2-ol byl z roztoku opět odstraněn evaporací. Po odstranění propan-2-olu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 pm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován. Příklad 38: Stanovení stability micel nosiče fenyl alkylových derivátů kyseliny hyaluronové s FRET barvivý fluorescenční metodou 6 mg derivátů připravených dle Příkladů 37 bylo jednotlivě rozpuštěno v 4 ml roztoku bovinního sérového albuminu (BSA) o koncentraci 40 mg/ml ve fyziologickém roztoku. Emisní spektra roztoků byla proměřována na fluorometru RF-5301 (Shimadzu) při excitaci 484 nm. Emise byla snímána v rozmezí 495-600 nm. Měření probíhalo při 37 °C a v časech 0 min, 15 min, 30 min, 45 min, 60 min, 75 min, 90 min, 105 min, 2 h, 3 h, 4 h, 5 h a 24 h. Stabilita micel nosiče byla stanovena porovnáním intenzit píků akceptoru a donoru. Grafický výsledek stability je na Obr. 11. Příklad 39: Enkapsulace Resveratrolu do ll-(4-methylfenyl)undekaitoyl derivátu kyseliny hyaluronové (UNFEHA) 100 mg acylového derivátu hyaluronanu připraveného v Příkladu 10 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok resveratrolu (5 mg ve 3 ml isopropanolu). Propan-2-ol byl z roztoku kontinuálně odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění propan-2-olu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes l μιη skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného resveratrolu (UV-Vis stanovení): 3,0 % (hm) Příklad 40. Stanovení zeta potenciálu nanomicel hyaluronanu
Zeta potenciál byl stanoven na Zetasizeru Nano-ZS (Malvem Instruments) vybaveném He-Ne laserem (633 nm). V 0,9% NaCl zeta potenciál klesl na - 30 až -23 mV. Absolutní hodnota zeta potenciálu tedy indikuje vysokou stabilitu připravených nanomicel ve vodných roztocích a relativně vysokou stabilitu v solných roztocích. Velikost nanomicel hyaluronanu UNFEHA s enkapsulovaným resveratrolem (příklad 39): 40-60 nm (DLS distribuce Obr. 10). Příklad 41. Morfologická analýza nanomicel hyaluronanu
Mikroskopické analýzy byly provedeny na scanning elektronovým mikroskopem. Nosič s resveratrolem připraveno v příkladu 39 byl rozpuštěn na koncentraci 10 mg/ml v H2O. Z takto připraveného roztoku bylo odebráno 10 μΐ vzorku do eppendorfky a přidáno 10 μΐ 1% roztoku kyseliny fosfowolframové. Na mřížku bylo přeneseno 10 μΐ roztoku, takto připravená mřížka byla inkubována 20 min při 40°C. Poté byl odsát přebytečný roztok pomocí filtračního papíru a mřížka byla připravena k měření. Snímky polymemích micel s loadovaným resveratrolem z elektronového mikroskopu jsou na Obr. 10. Příklad 42: Enkapsulace Resveratrolu do 1 l-(4-methylfenyl)undekanoyl derivátu kyseliny hyaluronové (UNFEHA) 100,4 mg acylového derivátu hyaluronanu připraveného v Příkladu 12 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok resveratrolu (5 mg ve 3 ml ethanolu). Ethanol byl z roztoku kontinuálně odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění methanolu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 pm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného resveratrolu (UV-Vis stanovení): 2,91 % (hmotn.) Příklad 43: Enkapsulace Resveratrolu do 4-oktyloxybenzoyl derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové 100,4 mg acylového derivátu hyaluronanu připraveného v Příkladu 22 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok resveratrolu (5 mg ve 3 ml etanoiu). Etanol byl z roztoku kontinuálně odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění metanolu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 pm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného resveratrolu (UV-Vis stanovení): 2,61 % (hmotn.) Příklad 44: Enkapsulace Resveratrolu do 4-oktyloxybenzoyl derivátu (OBEHA) kyseliny hyaluronové 103 mg acylového derivátu hyaluronanu připraveného v Příkladu 22 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok resveratrolu (3 mg ve 3 ml isopropanolu). Propan-2-ol byl z roztoku kontinuálně odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění propan-2-olu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 pm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného resveratrolu (UV-Vis stanovení): 1,7 % (hm)
Srovnávací příklad 45: Enkapsulace Resveratrolu do HA-C18:1 derivátu kyseliny hyaluronové (podle W02014082609) 100,1 mg acylového derivátu hyaluronanu připraveného podle WO2014082609 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok resveratrolu (5 mg ve 5 ml isopropanolu). Propan-2-ol byl z roztoku kontinuálně odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění propan-2-olu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 μηη skleněný filtr. Filtrát byl zlyofílizován.
Množství navázaného resveratrolu (UV-Vis stanovení): 1,3 % (hmotn.)
Srovnávací příklad 46: Enkapsulace Resveratrolu do HA-CI8:1 derivátu kyseliny hyaluronové (podle W02014082609) 100,5 mg acylového derivátu hyaluronanu připraveného podle patentu W02014082609A1 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok resveratrolu (5 mg ve 10 ml ethanol). Ethanol byl z roztoku kontinuálně odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění methanolu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 pm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofílizován.
Množství navázaného resveratrolu (UV-Vis stanovení): 1,2 % (hm)
Srovnávací příklad 47: Enkapsulace Resveratrolu do HA-C16 derivátu kyseliny hyaluronové (podle W02014082609) 101,2 mg acylového derivátu hyaluronanu připraveného podle W02014082609A1 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok resveratrolu (2,2 mg ve 2 ml isopropanolu). Propan-2-ol byl z roztoku kontinuálně odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění propanolu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 pm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofílizován.
Množství navázaného resveratrolu (UV-Vis stanovení): 1,68 % (hmotn.)
Srovnávací příklad 48: Enkapsulace Resveratrolu do HA-C6 derivátu kyseliny hyaluronové (podle W02014082609) 99,8 mg acylového derivátu hyaluronanu připraveného podle patentu WO2014082609 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K. připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok resveratrolu (3,3 mg ve 3 ml methanolu). Methanol byl z roztoku kontinuálně odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění methanolu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 μιη skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného resveratrolu (UV-Vis stanovení): 0,7 % (hmotn.) Příklad 49: Enkapsulace retinyl palmitátu do ll-(4-methylfenyl)undekanoyl derivátu kyseliny hyaluronové (UNFEHA) 100,4 mg acylového derivátu hyaluronanu připraveného v Příkladu 12 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok retinyl palmitátu (12,4 mg ve 5 ml isopropanolu). Isopropanol byl z roztoku kontinuálně odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění metanolu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 pm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného retinyl palmitát (Superkritické fluidní chromatografie stanovení): 7,22 % (hmotn.)
Srovnávací příklad 50: Enkapsulace retinyl palmitátu do HA-C18:! derivátu kyseliny hyaluronové (podle W02014082609) 101,6 mg acylového derivátu hyaluronanu připraveného podle patentu W02014082609 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok retinyl palmitátu (6 mg ve 5 ml isopropanolu). Propan-2-ol byl z roztoku kontinuálně odstraněn vakuovou evaporací. Po odstranění isopropanolu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 μιη skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného retinyl palmitát (Superkritické fluidní chromatografie stanovení): 3,14 % (hmotn.).
Claims (17)
- PATENT OVÉ NÁROKY1. Hydrofobizovaný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo jeho soli obecného vzorce Ikde R1 je H+ nebo jeho sůl, R2 je H nebo -CO(CH2)xC6H4-jpR5 nebo -C0-C6H4-/?0(CH2)yCH3, nebo CO-(CH2)zNCi2H8, kde R5 je H nebo CH3; x je celé číslo v rozmezí 4 až 21, s výhodou 4 až 15 nebo y je celé číslo v rozmezí 8 až 21, s výhodou 8 až 15 nebo z je celé číslo v rozmezí 3 až 16, s výhodou 7 až 11, nejlépe 10; a -(CH2)X- nebo -(CH2)y- nebo -(CH2)Z- je lineární nasycená nebo nenasycená část řetězce, přičemž alespoň v jedné opakující se jednotce je jeden nebo více -CO(CH2)xC6H4-/?R5 nebo -CO-C6H4-pO(CH2)yCH3, nebo -CO-(CH2)i0NCi2H8; R3 je H nebo R2; a kde n je celé číslo v rozmezí 1 až 495 dimerů.
- 2. Derivát podle nároku 1, kde R2 je -CO(CH2)xC6H4-/?R5 nebo -CO-C6H4-pO(CH2)yCH3, nebo -CO-(CH2)zNCi2H8 alespoň v jedné opakující se jednotce, přičemž R3 je H.
- 3. Derivát podle nároku 1, kde R1 je vybrán ze skupiny obsahující některý z iontů alkalických kovů nebo iontů kovů alkalických zemin, s výhodou Na+, K+, Mg2+, Ca2+ nebo Li+.
- 4. Derivát podle nároku 1, kde množství -CO(CH2)xC6H4-pR5 nebo CO-C6H4-p 0(CH2)yCH3, nebo -CO-(CH2)zNCi2H8 v derivátu kyseliny hyaluronové nebo jeho soli obecného vzorce I je od 0,1 do 50% na 100 dimerů hyaluronové kyseliny nebo její soli, s výhodou 2 až 18 %, výhodněji 8 až 15 %.
- 5. Způsob syntézy derivátu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že aromatická kyselina obecného vzorce II nebo obecného vzorce III nebo obecného vzorce IV(IV), kde R5, x, y a z jsou, jak definovány v nároku 1, je aktivována pomocí benzoylchloridu vzorce Vv přítomnosti organické báze, s výhodou v přítomnosti terciálního aminu, výhodněji N,N-diisopropylethylaminu (DIPEA); směsi vody a vodou mísitelného polárního nebo nepolárního rozpouštědla za vzniku reaktivního anhydridu obecného vzorce VI,kde R4 je -(CH2)X C6H4-p R5, nebo - C6H4:pO(CH2)yCH3, nebo -(CH2)zNCi2H8, přičemž R5x, y nebo z jsou definovány v nároku 1, který reaguje s kyselinou hyaluronovou nebo její solí v přítomnosti organické báze, s výhodou v přítomnosti terciálního aminu vybraného ze skupiny obsahující triethylamin (TEA), A,,¥-diisopropylethylaminu (DIPEA) nebo l,4-diazabicyklo[2.2.2]oktanu (DABCO); s výhodou Ν,Ν-diisopropylethylaminu (DIPEA); výhodněji triethylaminu (TEA), směsi vody a vodou mísitelného polárního nebo nepolárního rozpouštědla.
- 6. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že aktivace aromatické kyseliny obecného vzorce II nebo III nebo IV se provádí po dobu 5 až 120 minut při teplotě v rozmezí od -10 °C do 40 °C, s výhodou po dobu 30 minut od 0 °C do 25 °C
- 7. Způsob podle nároku 5 nebo nároku 6, vyznačující se tím, že množství reaktivního anhydridu obecného vzorce V, kde R4 je -(Cthjx-CóEU-p R5 nebo -(CH2)zNCi2H8, odpovídá 0,01 až 3 ekvivalentům, s výhodou 0,5 až 1 ekvivalentům, výhodněji 0,7 ekvivalentů na dimer kyseliny hyaluronové nebo její soli.
- 8. Způsob podle nároku 5 nebo nároku 6, vyznačující se tím, že množství reaktivního anhydridu obecného vzorce V, kde R4 je -C6H4-0(CH2)yCH3, odpovídá 0,01 až 3 ekvivalentům, s výhodou 1,5 až 2,5 ekvivalentům, výhodněji 2,0 ekvivalenty na dimer kyseliny hyaluronové nebo její soli.
- 9. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 5 až 8, vyznačující se tím, že tvorba derivátu kyseliny hyaluronové nebo její soli je prováděna po dobu 1 až 48 hodin při teplotě v rozsahu od 0 do 60 °C, s výhodou 2 hodiny při 25 °C.
- 10. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 5 až 9, vyznačující se tím, že vodou mísitelné polární nebo nepolární rozpouštědlo je vybráno ze skupiny obsahující propan-2-ol, dimethylsulfoxid, tetrahydrofuran, s výhodou propan-2-ol.
- 11. Nanomicelámí kompozice na bázi hydrofobizovaného esterového derivátu kyseliny hyaluronové podle obecného vzorce (I), vyznačující se tím, že obsahuje nanomicely, které obsahují hydrofobní jádro tvořené -CO(CH2)xC6H4-pR5 nebo -COC6H4-pO(CH2)yCH3 nebo -(CH2)zNCi2H8 skupinami, kde x je celé číslo v rozmezí 4 až 21, s výhodou 4 až 15 a R5 je H nebo CH3, nebo y je celé číslo v rozmezí 8 až 21, s výhodou 8 až 15, nebo z je celé číslo v rozmezí 3 až 16, s výhodou 7 až 11, nejlépe 10, navázanými na kyselinu hyaluronovou a hydrofilní obal tvořený hydrofilními funkčními skupinami kyseliny hyaluronové a jednu nebo více biologicky aktivních aromatických látek fyzikálně vázaných v nanomicele.
- 12. Nanomicelámí kompozice podle nároku 11, vyznačující se tím, že obsahuje 0,3 až 8,0 hmotn. %, s výhodou 2,5 až 8,0 hmotn. %, výhodněji 5,0 až 8,0 hmotn. % biologicky aktivních látek vzhledem k hmotnostnímu obsahu hydrofobizovaného esterového derivátu kyseliny hyaluronové nebo jeho soli, přičemž biologicky aktivní aromatická látka je vybrána ze skupiny zahrnující farmaceuticky a kosmeticky aktivní látky, zejména vitamíny, léčiva s výhodou cytostatika, steroidy.
- 13. Nanomicelámí kompozice podle nároku 11 nebo nároku 12, vyznačující se tím, že biologicky aktivní aromatická látka je vybrána ze skupiny obsahující resveratrol, koenzym Q10, retinyl palmitát.
- 14. Nanomicelámí kompozice podle kteréhokoli z nároků 11 až 13, vyznačující se tím, že koncentrace derivátu kyseliny hyaluronové v kompozici ve vodném roztoku je v rozmezí 0,003 mg.mr1 až 20 mg.ml'1, s výhodou 1 až 10 mg.ml'1.
- 15. Způsob přípravy nanomicelámí kompozice definované v kterémkoli z nároků 11 až 14, vyznačující se tím, že derivát kyseliny hyaluronové podle obecného vzorce (I) se rozpustí ve vodě a biologicky aktivní aromatická látka se rozpustí v organickém rozpouštědle vybrané ze skupiny obsahující trichlormethan, methanol nebo propan-2-ol, přičemž oba roztoky se smíchají, poté se organické rozpouštědlo odstraní.
- 16. Způsob přípravy podle nároku 15, vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo se odstraní vakuovou evaporací, následně se vodná fáze rehydratuje, získané nanomicelámí útvary se zfiltrují a nakonec lyofilizují.
- 17. Použití nanomicelámí kompozice definované v kterémkoliv z nároků 11 až 16 pro farmaceutické a kosmetické aplikace.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2015-574A CZ2015574A3 (cs) | 2015-08-26 | 2015-08-26 | Hydrofobizované esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo jejich soli, způsob jejich přípravy, nanomicelární kompozice, způsob jejich přípravy a použití |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2015-574A CZ2015574A3 (cs) | 2015-08-26 | 2015-08-26 | Hydrofobizované esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo jejich soli, způsob jejich přípravy, nanomicelární kompozice, způsob jejich přípravy a použití |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2015574A3 true CZ2015574A3 (cs) | 2017-03-08 |
Family
ID=58449349
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2015-574A CZ2015574A3 (cs) | 2015-08-26 | 2015-08-26 | Hydrofobizované esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo jejich soli, způsob jejich přípravy, nanomicelární kompozice, způsob jejich přípravy a použití |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ2015574A3 (cs) |
-
2015
- 2015-08-26 CZ CZ2015-574A patent/CZ2015574A3/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK2934592T3 (en) | C6-C18 acylated hyaluronic acid derivative, method of preparation thereof, on the basis of nanomicellar composition, method of preparation thereof, and method of preparation of a stabilized nanomicellar composition and use thereof | |
| KR101587521B1 (ko) | 소수성 알코올 유도체에 의해 치환된 카복실 관능기를 포함하는 폴리사카라이드 | |
| Elsabee et al. | Surface active properties of chitosan and its derivatives | |
| Tian et al. | The effect of the molecular weight of hyaluronic acid on the physicochemical characterization of hyaluronic acid-curcumin conjugates and in vitro evaluation in glioma cells | |
| Lee et al. | Triphenylphosphonium-conjugated glycol chitosan microspheres for mitochondria-targeted drug delivery | |
| EP2682131B1 (en) | Switching-type fluorescent nanoparticle probe, and fluorescent molecular imaging method using same | |
| Sun et al. | A photo-controlled hyaluronan-based drug delivery nanosystem for cancer therapy | |
| US8445465B2 (en) | Glycol chitosan derivative, preparation method thereof and drug delivery system comprising the same | |
| JP2019123878A (ja) | 新規な陽イオン性ポリホスファゼン化合物、ポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物およびその製造方法 | |
| Lu et al. | Facile synthesis of chitosan-based nanogels through photo-crosslinking for doxorubicin delivery | |
| EP3530291A1 (en) | Bi-functionalizable amphiphilic diblock copolymers, conjugates and uses thereof | |
| Wali et al. | Tailoring the supramolecular structure of amphiphilic glycopolypeptide analogue toward liver targeted drug delivery systems | |
| RU2713295C2 (ru) | Способ сшивания полисахаридов при помощи фотоудаляемых защитных групп | |
| Matelová et al. | Synthesis of novel amphiphilic hyaluronan containing-aromatic fatty acids for fabrication of polymeric micelles | |
| Li et al. | Alkylated Sulfonium Modification of Low Molecular Weight Polyethylenimine to Form Lipopolymers as Gene Vectors | |
| US20100204177A1 (en) | Process for preparing thermosensitive (poly(ethylene oxide) poly(propylene oxide)) derivates that can be used to functionalize chitosan | |
| CZ2015574A3 (cs) | Hydrofobizované esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo jejich soli, způsob jejich přípravy, nanomicelární kompozice, způsob jejich přípravy a použití | |
| EP3295933A1 (en) | Hydrogels based on functionalized polysaccharides | |
| CZ30265U1 (cs) | Mořicí zařízení obsahuje naklápěcí páteřový rám (8), na kterémje uspořádán míchací buben (1) včetně hnacího motoru (15), násypka (6) se škrticí klapkou (2) a rozprašovací tryskou (17) a výsypka (7), na kterou navazuje rozváděči šoupátko (19) a hrdlo (18) pro pytlování. Míchací buben (1)je uvnitř opatřen alespoň jednou řadou gravitačních žeber (3) se šikmo uspořádanými nabíracími lopatkami (4). Mořicí zařízeníje vhodné pro moření obilí o různých velikostech zrna. | |
| CN106581691A (zh) | 还原响应的靶向聚乙二醇‑聚碳酸酯美登素前药胶束、其制备方法与应用 | |
| EP3393527B1 (en) | Fluorescent cypate conjugate of hyaluronic acid or salt thereof, hydrophobized conjugate, methods of preparation and use thereof | |
| CZ2024269A3 (cs) | Amfifilní konjugát oligomeru kyseliny hyaluronové, micelární kompozice, která jej obsahuje, způsob jejich přípravy a použití | |
| Zhang et al. | Synthesis and micellization of block copolymer based on host–guest recognition and double disulphide linkage for intracellular drug delivery | |
| Breitenbach | Responsive Polysaccharide Macrosurfactants from Dextran Building Blocks | |
| WO2011135401A1 (fr) | Polysaccharides comportant des groupes fonctionnels carboxyles substitues par esterification par un alcool hydrophobe |