CZ202796A3 - Cyclic derivatives, process of their preparation and pharmaceutical compositions containing thereof - Google Patents

Description

Cyklické deriváty, způsob jejich výroby a farmaceutické prostředky s jejich obsahem

Oblast techniky

Vynález se týká cyklických derivátů, zejména derivátů sordarinu s antifungálním účinkem, způsobu výroby těchto látek a farmaceutických prostředků, které tyto látky obsahují a jsou určeny k léčení nebo prevenci chorob, způsobených .hou bami u živočichů včetně člověka.

Dosavadní stav techniky

V britském patentovém spisu č. 1 152 027 se popisuje příprava antibiotika SL2256 kultivací kmene NRRL 3196 houby Sordaria araneosa. Toto antibiotikum, později označované sor darin má fungistatickou účinnost. Titíž autoři popsali také degradaci sordarinu na sordaricin v Helvetica Chimica Acta, 1971, 51, 119 - 120. Zveřejněná japonská patentová přihláška č. 76 2040292A popisuje způsob výroby antibiotika zofimarinu pro toto antibiotikum se rovněž uvádí antifungální účinnost.

Pro sordarin, sordaricin a zofimarin je možno uvést následující společný obecný vzorec A -

kde v případe, že OR znamená skupinu.

, Jde o sordarin, v případě, že OR znamená OH, jde o scrdaridin a v případě, že OR znamená skupinu ococh=²ch-ch=⁵chch₃

HO

OCHjde o zořimarin.

o o ch₃

Přestože sordarin a.zofimarin mají antifungální účin nost, jsou obě tyto sloučeniny jen málo účinné a mají omeze né spektrum účinku při testování proti celé řadě houbových organismů.

Nyní byla zjištěna nová skupina fungicidních sordari nových derivátů s velmi dobrou antifungální účinností a sou časně se širokým spektrem účinku.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří cyklické deriváty obecného vzorce I

kde 2 je tetrahydropyranoskupina a) nebo b)

R² R³ y

X^->fCR^sR^s)n

O R ⁴ (a)

(b) jakož i farmaceuticky přijatelné soli a solváty, například hydráty těchto sloučenin nebo jejich metabolicky labilní deriváty, v nichž

R^ znamená atom vodíku nebo halogenu, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku nebo acyloxyskupinu,

Ξ 3

R a R nezávisle znamenají atom vodíku, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v každé části nebo tvoří společně s atomem uhlíku, na nějž jsou vázány, skupinu C=0, C=S nebo cykloalkyl o 3. až 8 atomech uhlíku,

7 7

R znamená atom vodíku nebo skupinu CH₂R , v níž R je atom vodíku, hydroxyskupina nebo alkoxyskupina o 1 až 8 8 atomech uhlíku nebo skupina OCOR , v níž- R je alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku nebo aryl,

6

R a R^a nezávisle znamenají atom vodíku, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v každé části nebo tvoří spolu s atomem uhlíku, na nějž jsou vázány, skupinu C=0, C=S nébo cykloalkyl o 3 až..

atomech uhlíku, n znamená celé číslo 0 nebo 1,

X a Y nezávisle znamenají atom kyslíku nebo síry nebo skupinu 9 10 9 10

CR R (kde R a R nezávisle znamenají vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v každé části nebo tvoří spolu s atomem uhlíku, na nějž jsou vázány, skupinu C=0, C=S, cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku nebo skupinu CsCHR¹¹, v níž R¹¹ je atom vodíku nebo alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku), nebo v případě, že X nebo Y znamená atom kyslíku a n = O, mohou

3 2 3 skupiny -Y^CR R nebo -X-CR R znamenat také skupiny.

-N=CR³- nebo -NR¹²-CR²R³- (kde CR² a R³ znamenají sku12 pinu C=0 a R znamená alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku 13 13 nebo acyl vzorce COR , kde R znamená alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku) nebo v případě, že Y znamená atom kyslíku a n = 0, může X znamenat skupinu CR'¹'¹ (kde r!\ má svrchu uvedený význam), vázanou na. pyranový kruh dvojnou vazbou,

- 5 15

R znamená atom vodíku nebo halogenu, azídoskupinu, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupi. nu o 1 az 6 atomech uhlíku (popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma hydroxyskupinami nebo její acetal nebo substituovanou jednou nebo dvěma alkoxyskupinami o 1 až 3 atomech uhlíku), arylalkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku v alkoxylové části, alkenyloxyskupinu o 3 až 6 atomech uhlíku, skupinu OCOR (kde R znamená arylalkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku v alkylové části nebo alkyl o 1 až 10 atomech uhlíku, popřípadě obsahující jednu nebo dvě dvojné vazby) nebo alko• xykarbonylalkoxyskupinu o 1 až- 5 atomech uhlíku v první a 1 až 4 atomech uhlíku ve druhé alkoxylové části a

R¹® znamená atom vodíku nebo tvoří R·¹⁵ a R¹® spolu' s atomem uhlíku, na nějž jsou vázány, skupinu C=0 nebo

19 19

R znamená skupiny CH₂R , v níž R znamená atom -vodíku, hydroxyskupinu.,. alkoxyskupinu o 1 až 14 atomech uhlíku

-- 20 nebo skupinu OCOR. , v mz R znamena alkyl o 1 az 4 atomech uhlíku., a

W znamená atom kyslíku nebo síry nebo skupinu CHg a přerušovaná čára ve skupině a) znamená případnou přítomnost další vazby.

Vhodné farmaceuticky přijatelné soli sloučenin obecného vzorce I zahrnují soli s anorganickými bázemi, například s alkalickými kovy, jako soli sodné nebo draselné, amonné soli a soli s organickými bázemi. Jako vhodné organické baze je možno uvést soli s aminy, například s trialkylaminy, jako triethylaminem, soli s dialkylaminy, jako dicyklohexylaminem, soli s případně substituovaným benzylaminem, jako fenylbenzylaminem nebo p-brombenzyláminem, soli s prokainem, ethanoleminem, diethanolaminem, N-methylglukosaminem a tri(hydroxymethyl) methylaminem a soli s aminokyselinami, jako lysinem nebo argininem.

- o Pokud jde v' průběhu přihlášky o sloučeniny obecného vzorce I, rozumí se pod tímto pojmem vždy také farmaceuticky přijatelné soli uvedených látek.

Další soli, které nejsou farmaceuticky přijatelné, je mošno použít pro výrobu cyklických derivátů obecného vzorce I, tyto soli tvoří rovněž jedno z -provedení vynálezu.

Metabolicky labilní deriváty sloučenin obecného vzorce I jsou sloučeniny, které se v organismu mění na sloučeniny obecného vzorce I. Jako příklady takových derivátů je možno uvést běžně známé metabolicky labilní estery, vytvořené na volné karboxylové skupině v molekule.

Vynález zahrnuje také jakékoliv jednotlivé isomery včetně optických isomerů sloučenin obecného.vzorce I a jejich směsi včetně zcela nebo částečně racemických směsí.

Alkylové skupiny jako samostatné skupiny nebo jako části jiných skupin mohou mít přímý nebo rozvětvený řetězec¹;. Jako příklady těchto skupin je možno uvést methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sek.butyl a terč.butyl, n-hexyl a n-oktyl.

Arylové skupiny jako samostatné skupiny nebo jako část jiných skupin mohou znamenat fenyl nebo heteroaryl, tyto skuρ-ιη-y mchcu-byt substituovaný'' jean-im ²Π6υο· vecsúm poetem j například 1, 2 nebo 3 atomy nebo skupinami ze skupiny atom halogenu, hydroxyskupina, alkyl nebo alkoxyl vždy o 1 až 6 atomech uhlíku nebo alkoxykarbonyl o 1 až 4 atomech uhlíku v alkoxylové části. Heteroarylovou skupinou může být 5- nebo 6-členný heteroaromatický kruh.s obsahem jednohonebo většího počtu heteroatomů ze skupiny dusík, kyslík a síra. Vhodným příkladem heteroarylových skupin mohou být pyridyl, furyl, thienyl a pyrrolyl.

Atomem halogenu se rozumí atom fluoru, chloru, bromu nebo jóďu'.'' ' ........ ....... '..... ......- —

V případě, že R^ znamená acyloxyskupinu, může jít na13 13 příklad o skupinu OCOR , kde R má svrchu uvedený význam.

Příkladem cykloalkylové skupiny o 3 až 8 atomech uhlíku mohou být cyklopentyl a cyklohexyl.'

Jako příklady skupiny X je možno uvést atom kyslíku, skupinu CR⁹R¹⁰, kde R⁹ a R¹⁰ znamenají atomy vodíku, alkoxyl 9 10 nebo alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku nebo CR R ve významu li—· 11

C=0 nebo C=CHR , například C=CH₂, nebo může X znamenat'CR· .

Jako příklad vhodných skupin Y je možno užít kyslík nebo CR⁹R¹⁰, kde R⁹ je atom vodíku, alkoxyskupina nebo alkyl vždy o 1 až 4 atomech uhlíku a R^^ znamená atom vodíku nebo alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku.

V případě, že R znamená nenasycenou alkylovou skupinu o 1 až 10 atomech uhlíku, může zvláště jít o alkyl o 5 až atomech uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem se dvěma 7 e dvojnými vazbami, například -CH= CH-CH= CHCH^.

V případě, že R^⁵ znamená alkoxyskupinu, substituovanou hydroxyskupinou nebo alkoxyskupinou, může například jít o 2,3-dihydroxypropoxyskup inu nebo odvozený aceal acetonu, odvozený od této skupiny, nebo o 2,3-dimethoxypropoxyskupinu.

' 15

R je s výhodou atom vodíku při R v konfiguraci alfa.

R¹ může znamenat například atom vodíku nebo hydroxylovou skupinu.

R může znamenat například atom vodíku nebo alykl o 1 až 4 atomech uhlíku, například methyl a R může znamenat například atom vodíku, alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku, například methyl, ethyl nebo n-propyl nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v každé části, například methoxyethyl nebo mů2 3 že skupina CR R znamenat C=0, C=S nebo cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, například cyklopentyl.

R^ může znamenat například methyl nebo alkoxymethyl o 1 až 4 atomech uhlíku, například methoxymethyl.

5

R³ a R° mohou nezávisle znamenat atom vodíku nebo alkyl o-l až 4 atomech'uhlíku, například methyl.

Jako příklady kruhových systémů, představovaných skupinou

Jako příklady skupin R¹⁵ je možno uvést atom halogenu, například fluoru, azidoskupinu, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku, benzyloxyskupinu, 'oenzyloxykarbonyloxyskupinu, alkoxykarbonyloxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku v alkoxylové'části, alkoxyalkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku v každé části, jako methoxyethoxyskupinu, alkoxykarbonylalkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku v každé alkoxylové Části, alkylkarbonyloxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku v alkylové části, 2,3-dihydroxypropoxyskupinu a její acetoacetal,

2, 3-diměthóxýpropóxýskupinů, álkehylóxyškúpihúó’'3 áž'6 atomech uhlíku, jako allyloxyskupinu nebo 3-methylallyloxysku15 16' pinu nebo tvoří R a R spolu s atomem uhlíku, na nějž jsou vázány skupinu C=0 nebo C=CH₂·

R může znamenat například methyl nebe alkoxymethyl o 1 áž 4 atomech uhlíku v alkoxylové části, jako methoxymethyl nebo hydroxymethyl.

R s výhodou znamená alkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku, alkenyloxyskupinu o 3 až 4 atomech uhlíku, benzyloxy4 4 „ skupinu nebo OCOR , kde R je alkyl o 1 az 4 atomech uhlíku, zvláště'v konfiguraci alfa..

R s výhodou znamená methyl, W s výhodou znamená, atom kyslíku. ·.

Zvláště, výhodnou skupinu sloučenin, podle vynálezu, .tvoří cyklické deriváty'obecného-vzorce I,.v němž' Z znamená.skupinu

kde jeden ze symbolů . 9 10

X a Y znamená atom kyslíku a druhý znamena skupinu CR R .

Ze sloučenin z této skupiny jsou zvláště vhodné ty látky, v nichž R¹ znamená hydroxyskupinu nebo atom vodíku,

10 9

X znamená atom kyslíku nebo skupinu CR R , v níž R znamena atom vodíku, alkoxyskupinu o 1 až 3 atomech uhlíku, alkyl o až 4 atomech uhlíku a znamená atom vodíku nebo znamená skupina CR^R^°„skupinu. C=0 nebo C^CHR¹¹, Y. znamená atom kys„ 9 9 iiku nebo skupinu CHR , kde R znamená vodík nebo alkyl o 1 - - 2 3 az 4 atomech uhlíku, R a R nezávisle znamenají vodík, alkyl o L.až 4 atomech uhlíku, například methyl nebo propyl nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v alkoxylové Části, jako methoxymethyl nebo R a R tvoří spolu s atomem uhlíku, na nějž jsou vázány cyklopentylovou skupinu, skupinu C=0 nebo

6

C=S a R a R s výhodou znamenají atomy vodíku.

V případě , že R¹ znamená hydroxyskupinu nebo alkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku, nachází se tato skupina s výhodou v axiální konfigurací. S výhodou však R^ znamená atom vodíku.

3

R a R mohou nezávisle znamenat zvláště atom vodíku nebo alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku.

, 5 5

R s výhodou znamena methyl. R a R s výhodou známe'nají atomy vodíku a n s výhodou znamená 0.

Výhodný kruhový systém, představovaný obecným vzorcem je například skupina

3 kde R a R mají svrchu uvedeny vyznám a α 10

X a Y nezávisle znamenají atom. kyslíku nebo skupinu CR'?.

10 v níž R a R mají svrchu uvedený význam za předpokladu, že nejméně jeden ze symbolů X a Y znamená atom kyslíku, i

další výhodnou skupinou je skupina ,CH. CH 'O W

Z kruhových systémů

R* R~ x^Xv jsou výhodnými kruhy takové kruhy, v nichž jeden ze symbolů X a Y znamená atom kyslíku a druhý znamená sku'_* pinu CR⁹Rⁱ⁰ (kde R⁹ aR¹⁰ nezávisle znamenají vodík nebo alkyl o l.až 4 atomech uhlíku, například methyl * 9 iq nebo znamená skupinu CR R* skupinu C=0 nebo C=CH_?) nebo zna2 3“ menaji oba symboly X a Y atomy kyslíku, R a R znamena vodík, alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku nebo skupinu CO.

Je zřejmé, že vynález zahrnuje jakékoliv kombinace svrchu uvedených výhodných- významů jednotlivých symbolů.

Další zvláštní skupinu sloučenin podle vynálezutvoří ty sloučeniny obecného vzorce I, v němž Z znamená skupinu a),

]. 4 - 2...... 3

R znamená atom vodíku a R znamena methyl, n - 0, R_ aR znamenají atom vodíku nebo- alkyl o 1 až. 4 atomech uhlíku,.

X a Y jsou atomy kyslíku nebo Y znamená atom-kyslíku a X zna. ° 9 měna skupinu CHR^J, kde.R je atom-vodíku nebo alkyl o 1 az atomech uhlíku, C=0, C=CH- nebo X znamená skupinu CH, Y .zna 4 3 mená atom kyslíku, n ..= 0 a R a R jsou atomy vodíku.

Další specifickou skupinu sloučenin podle vynálezu tvoří cyklické deriváty obecného vzorce I, v němž Z znamená skupinu b)

jakož i farmaceuticky přijatelné soli a solváty, například hydráty těchto sloučenin, v nichž W znamená atom kyslíku nebo siry a R má svrchu uvedený význam. Zejména znamená W atom kyslíku a R¹^ znamená alkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku, ’ 4 benzyloxyskupinu nebo skupinu OCOR , v níž R znamená alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku, například isopropyl nebo terč.butyl, nebo také alkenyloxyskupinu o 3 až 4 atomech uhlíku nebo alkoxykarbonylalkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku v každé alkoxylové části.

Jako specifické sloučeniny podle vynálezu je možno uvést následující látky:

kyselina /lR-(lalfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/8a-//1S,7R,9R/-2,8-dioxa-9-methyl-4-methylen-cis-bicyklo/3.4.0/ -non-7-yloxymethyl/ -4-formyl-4,4a ,5,6,7,7a,8, ea-okta^hydro-7-methy1-3-(1-methylethyl)-1,4-methano-s-indacen-3a(1H)-karboxylová, kyselina /lR-(lalfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/8a-/(2,6-dideoxy-3,4-0-isopropyliden-beta-D-allopyranosyloxy)methyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methy1-3-(L-methylethyl)-1,4-methano-s-indacen-3a(1H)-karboxylová, kyselina /IR—(lalfa,4abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/8a-//lS,4R,7R,9R/-2,8-dioxa-4,9-dimethyl-cis-bicyklo/3.4.0/-non-7-yloxymethyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methy1-3-(1-methylethy1)-1,4-methano-s-indacen-3a(1H)karboxylová, kyselina / IR— (lalfa,4abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/8a-//15,4S,6R,8R/-2,7-dioxa-4,6-dimethyl-cis-bicyklo/3.4,0/non-8-yloxymethyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-(l-methylethyl)-L,4-methano-s-indacen-3a(lH)-karboxylová, kyselina /IR—(lalfa,3aalfa,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,7abeta)/8a-/(2,3-anhydro-6-deoxy-4-0-propyl-beta-D-mannopyranosyloxy)methyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,3a-oktahydro-7-methy1-3-(l-methylethyl)-1,4-methano-s-indacen-3a(1H)-karboxylová, kyselina /IR-(lalfa,Babeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/8a-/ (2,3-anhydro-o-deoxy-4-0-methyl-beta-D-mannopyranosyloxymethyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1,4-methano-s-indacen-3a(IH)-karboxylové, jakož i farmaceuticky přijatelné soli a solvázy, například hydráty tšchto látek nebo jejich metabolický labilní deriváty.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou velice účinné fungicidní Látky, které je možno použít k léčení fungálních infekcí u živočichů včetně člověka. Je například možno je použít k léčení infekcí, které byly vyvolány organismy z čeledí Candida j ako Candida albicans, Candida qlabrata, (Torulopsis qlabrata), Candida tropicalis, Candida oaraosiiosis a Candida ossudotropicajís), Cr/otocaccus neoformans; Fneumocvstís carinii, Asoeraiílus Sp_ (dato Asoeraiilus fiavus a *' Aspergillus fumigatus). Coccidioides jako Coccidioides immitisí Paracoccidioides f.i akoParacoccidioides brasiiiensis). Kistooiasma

(.iakoHistooiasma caosulatum), Blastomvces( jako Blastomvces dermatitidis).

*

Uvedené látky je možno použít také k léčení infekcí, které byly způsobeny Čeleděmi Candida, Trichophyton., P4icrosporum nebo Epidermophyton (jako Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton rubrum, Microsporum canis nebo Epidermophyton floccosum) nebo k léčení infekcí sliznic, vyvolaných Candida albicans.

Cyklické deriváty obecného vzorce I je také možno použít k léčení dalších infekcí, vyvolaných čeleděmi vláknitých hub, jako Geotrichum (jako Geotrichum clavatum), Trichosporon (jako Trichosporon'beigelii), Blastoschizomyces (jako Elastoschizomyces capitatus), Sporothrix (jako Sporothrix schenckii), Scedosporium (jako Scedosporium apiosperum), Cladosporium (jako Cladosporium carríoni) a Pityrosporum cvale.

Sloučeniny obecného vzorce I je také možno použít k léčení infekcí, způsobených prvoky, jako jsou Toxoplasma,

Cryptosporidium, Leishmania, Trypanosoma, Giardia a Trichomonas

Vyhodnocení antifungální účinnosti sloučenin podle vynálezu bylo prováděno na kapalném nebo pevném živném prostředí pomocí běžné zřéďovací řady pro stanovení'minimální inhibiční koncentrace MIC účinné látky, tato koncentrace byla stanovena pro růst po 24 až 48 hodinách při inkubaci při teplotě 37 °C. Řady agarových ploten nebo ředěného bujónu s vždy dvojnásobným ředěním účinné látky byly naočkovány standardní kulturou pathogenního organismu, například Candida albicans. Výsledky byly odečítány podle přítomnosti nebo ne) přítomnosti rostoucího mikroorganismu a. byla zaznamenána příslušná hodnota MIC.

Hodnoty MFC, to znamená nejnižší koncentrace, při níž uhyne v kapalném prostředí nejméně 99,9 % mikroorganismů, původně naočkovaného do prostředí je možno stanovit tak, žé v

se pestuje vždy 0,01 az 0,1 mikrolitru živného prostředí z y:

kontrolního vyhloubení a prvního vyhloubení s obsahem rostoucího mikroorganismu, a každého vyhloubení, prostého mikroorganismu na agarových plotnách. ^ř '

Vyhodnocení sloučenin obecného vzorce I in vivo je *' - možno uskutečnit s řadou dávek, podávaných například podkožně, perorálně, intraperitoneálně nebo nitrožilně myším nebo krysám, jimž byl naočkován kmen Candida albicans. Neošetřená zvířata uhynou v rozmezí 3 až 9 dnů, hodnotí se dávka, při níž sloučenina poskytuje 50% ochranu proti uhyVzhledem ke své účinnosti bude možno sloučeniny obecného vzorce I využít při řadě infekcí, způsobených houbami u různých živočichů, včetně člověka. Může jít o infekce povrchové, kožní, podkožní nebo také o systemické mykotické infekce, například infekce dýchacích cest, zažívací soustavy, srdečního a cévního systému, močových cest, CNS, včetně candidiázy a chronické mucocandidiázy, zejména také v pochvě, zejména jde o kožní infekce způsobené houbami, infekce pokožky a sliznic, vyvolané kvasinkami candida, o různé dermatofytozy, včetně onemocnění vlasové pokožky hlavy, onemocnění nohou, nehtů na nohou, o pityriasisi versicolor, arythrasma, intertrigo, prchavé vyrážky houbového původu, candidiázu zevního genitálu, balanitidu a také záněty zevního zvukovodu houbového původu. Uvedené látky je možno použít také k prevenci systemického i místního onemocnění uvedeného typu.. Při prevenci mohou být sloučeniny podle vynálezu použity jako část složek pro selektivní dekontaminaci střev k prevenci infekcí zejména u nemocných s„nedostatečně fungujícím imunitním systéme, například v případě AIDS, u nemocných, léčených na zhoubné nádory nebo po transplantaci.. Prevence růstu hub může být' vhodná také při použití některých typů antibiotik nebo při iatrogenních onemocněních.

λ V

Při svrchu uvedeném použití.je,možno využít sloučeniny podle vynálezu jako chemické látky, je však výhodnější je však zpracovat na farmaceutické prostředky. Podstatu vynálezu proto tvoří také farmaceutické prostředky, které jako svou účinnou složku obsahují cyklické deriváty obecného vzorce I nebo jejich fyziologicky přijatelné soli spolu s nejméně jedním farmaceutickým nosičem a popřípadě s pomocnými látkami a/nebo dalšími účinnými látkami. Nosič musí být přijatelný v tom smyslu, že je kompatibilní s ostatními složkami a nemá škodlivý účinek na nemocného.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu zahrnují lékové formy, upravené pro perorální, bukální, parenterální, rektální nebo místní podání, pro podání ve formě implantátu, do oka nebo do pohlavního a močového ústrojí nebo ve formě, vhodné pro podání inhalací nebo insuflací.

Tablety a' kapsle pro perorální podání mohou obsahovat běžné pomocné látky, například pojivá, jako sirupy, akaciovou gumu,' želatinu, sorbitol,. .tragakant, škrobový sliz nebo polyvinylpyrrolidon, plniva, jako jsou laktosa, cukry, mikrokrystalická celulosa, kukuřičný škrob, fosforečnan vápenatý nebo sorbitol, kluzné látky, jako jsou stearan hořečnatý, kyselina stearová, mastek, polyethylenglykol nebo oxid křemičitý, desintegrační činidla, například bramborový škrob, sodnou sůl glykolátu škrobu nebo sodnou sůl zesítěné karmelosy nebo smáčedla, jako laurylsíran sodný. Tablety mohou být žvýkací, dispergovatelné nebo efervescentní a mohou být povlékány známým způsobem. Kapalné prostředky pro perorální podání mohou mít například formu suspenzí ve vodě nebo v oleji, roztoků, emulzí, sirupů nebo elixírů, nebo může být účinná látka dodávána v suché formě a určena pro smísení s vodou nebo jiným vhodným nosným prostředím těsně před použitím. Tyto kapalné prostředky mohou obsahovat běžné přísady, jako suspenzní Činid la, například sorbitolový sirup, methylcelulosu, sacharosový sirup, želatinu, hydroxyethylcelulosu, karboxymethylcelulosu, gel stearanu hlinitého nebo hydrogenované jedlé oleje, dále emulgační činidla, jako jsou lecithin, sorbitan monooleát nebo akaciovou gumu, nebo mohou tyto prostředky obsahovat nosné prostředí nevodné povahy, včetně jedlých olejů, jako jsou mandlový olej, frakcionovaný kokosový olej, estery typu olejů, propylenglykol nebo ethylalkohol a konzervační prostředky, například methyl- nebo propyl-p-hydroxybenzoáty nebo kyselinu sorbovouPro podání ústní sliznicí mohou mít farmaceutické prostředky formu tablet nebo kosočtverečných tablet, vyrobených obvyklým způsobem.

Pro parenterální podání je možno vyrobit farmaceutické prostředky v injekční formě nebo ve formě kontinuálních infuzí. Pro injekční podání je možno prostředky uložit do ampulí nebo do lahviček, které obsahují větší počet dávek spolu s konzervačním činidlem. Takové prostředky mohou mít formu suspenzí, roztoků nebo emulzí v olejovém nebo vodném prostředí a mohou obsahovat pomocné látky, jako suspenzní, stabilizační nebo dispergační činidla. Účinná látka může být dodávána také ve formě prásku, určeného ke smísení s vhodným nosným prostředím, například se sterilní bezpyrogenní vodou těsně před použitím.

Pro podání inhalací se sloučeniny podle vynálezu zpracovávají na aerosoly, podávané z tlakového balení při použití vhodného hnacího plynu, například dichlordifluormethanu, trichlorfluormethanu, dichlortetrafluorethanu, oxidu uhličitého· nebo jiného vhodného plynu, nebo se. už.ije jednoduchého rozprašovače. V případě tlakového balení, je možno nádobku opatřit odměrným- ventilem pro podání předem určené dávky.

Pro podání inhalací mohou však mít prostředky po.dle vynálezu také formu suchého prášku, například práškové směsí účinné látky s inertní látkou, například laktosou. nebo Škrobem, nebo může jít o modifikovanou fyzikální formu účinné látky. I v tomto případě je možno účinnou látku dodávat ve formě, obsahující jednotlivou dávku, například ve formě želatinových kapslí nebo ve formě blistru, z nějž je možno práškový materiál podávat pomocí inhalačního nebo insulflačního přístroje.

Sloučeniny podle vynálezu je možno zpracovávat také na Čípky, které obsahují kromě účinné látky běžný základ pro výrobu Čípků nebo obdobně na pesary.

Účinné látky mohou být také zpracovány na prostředky pro místní podání, jako jsou mazání, krémy, gely, lotiony, šampony, práškové materiály a pudry, pesary, tampony, spreje, koupele, kapky, například do oka, ucha nebo do nosu. Mazání a krémy mohou obsahovat například vodný nebo olejový základ s vhodnými zahustovadly nebo gely. Pro podání do oka mohou být tyto prostředky sterilní. Mazání ve zcela kapalném stavu může být určeno například pro použití ve veterinárním lékařství, vhodným základem může být olej s obsahem, organického rozpouštědla, popřípadě s obsahem pomocných látek, jako jsou stabilizační a solubilizační'činidla. Pesary a tampony pro aplikaci do pochvy je možno vyrábět běžným způsobem, tyto prostředky mohou obsahovat efervescenční nosné prostředí a popřípadě ještě další účinné složky, například kortikosteroidy, antibiotika nebo látky proti parazitům.

Kapalné prostředky pro podání do nosu mohou mít formu roztoku nebo suspenze a mohou obsahovat běžné pomocné látky/ například prostředky pro úpravu osmotického tlaku, jako chlorid sodný, dextrosu nebo mannitol, konzervační látky, jako benzalkoniumchlorid, thiomersal nebo fenylethylalkohol a další pomocné látky, například pufry, suspenzní, stabilizační ^ nebo dispergační činidla a/nebo látky pro úpravu chuti.

Transdermální prostředky mohou být upraveny tak, že obsahují systém, podporující vstřebávání účinné látky pokožkou a mohou obsahovat bázi, nanesenou ve formě náplasti, popřípadě obsahující krycí filmy, membrány a izolační mezivrstvy nebo vrstvy, podporující uvolnění účinné látky. Jako látku, podporující vstřebávání, mohou tyto prostředky obsahovat například álkoholy^_nebó látky, vyvolávající iontoforézu.

Prostředky podle vynálezu mohou být také zpracovány jako depotni prostředky, tyto prostředky s dlouhodobým účinkem jsou například implantáty, například pod kůži nebo do svalu, nebo*může jít o nitrosvalové injekce. Takové prostředky obvykle obsahují vhodné polymerní nebo hydrofobní materiály, například ve formě emulze ve vhodném oleji nebo iontoměničové

.. ..pryskyřice ,_n ebo.. jnůže jít o nesnadno, rozpustné deriváty, například o málo rozpustné soli.

V případě, že prostředek má obsahovat v určité lékové formě dávku pro jednotlivé podání, bude tato jednotka obsahovat 0,001 až 1000 mg, s výhodou 0,01 až 400 mg účinné látky v případě perorálního podání. Denní dávka pro dospělého Člověka se bude pohybovat v rozmezí 0,001 až 5000 mg účinné látky, s výhodou 0,01 až 2000 mg účinné látky při podání 1 až 4x denně, v závislosti na způsobu podání, na stavu nemocného a na léčeném onemocnění.

^- T* p

Účinná látka může být podána ve formě nitrožilní infuse, například až 50 mg/kg denně účinné látky. Doba léčení bude závi.set spíše na rychlosti odpovědi než na časovém úseku, pokterý je látka podávána.

Sloučeniny podle vynálezu, je možno použít také.v kombunaci s jinými, účinnými látkami, vynález se týká také kombinací sloučenin podle vynálezu spolu s další účinnou látkou.

Sloučeniny podle vynálezu je například možno použít v kombinaci s jednou nebo větším počtem látek s antifungálním účinkem, například ze skupiny polyenových derivátů, jako jsou Amphotericin B, Nystatin, nebo prostředek, obsahující Amphoteritin B v tukovém základu, dále azolové deriváty, jako jsou Fluconazole, Intraconázole, Ketoconazole, Míconazole, Clotrinazole, ZD-08070, UK-109496, dále může jít o kombinaci s 5-fluorcytosinem nebo pneumocandinem nebo s deriváty echinocandinu, jako jsou cilofungin, LY-303366, L-733560 a/nebo spolu s imunomodulačními látkami, jako jsou interferon, například IGN-gamma, interleukiny, například IL-1, IL-2¹, IL-3 a IL-8 a faktory, stimulující tvorbu kolonií, například (G)-CSF, (M(-CSF a (GM)-CSF a látky, podporující obranu organismu. Zvláště výhodnými látkami pro tyto kombinace jsou intraconazole, flucytosine, fluconazole a amphotericin 6.

V případě, že jsou sloučeniny podle vynálezu podávány v kombinaci s další antifungální látkou, je možno obě ^složky podávat v doporučené maximální klinické dávce nebo v nižších dávkách.

Uvedené kombinace je možno zpracovat na farmaceutické prostředky, které budou obsahovat tuto kombinaci spolu s farmaceutickým nosičem. Jednotlivé složky kombinace je však možno podávat také současně nebo následně ve formě oddělených farmaceutických prostředků.

L r

V případě, že se sloučenina podle vynálezu použije v kombinaci s další látkou, účinnou proti témuž onemocnění, může se dávka obou látek lišit od dávek, v nichž se sloučeniny podávají jednotlivě. Příslušnou dávku určí každý odborník.

Podstatu vynálezu tedy tvoří cyklické deriváty obecného vzorce I nebo jejich fyziologicky přijatelné soli pro použití k léčebným účelům, zvláště pro léčení houbových infekcí u živočichů, zvláště u člověka.

Podstatu vynálezu tvoří také použití cyklických derivátů obecného vzorce I a jejich fyziologicky přijatelných solí pro výrobu farmaceutických prostředků, určených k léčení houbových infekcí u lidí i u jiných živočichů.

._ . Je» zře imé-.-ževvvnř/ípadě _; _že.,„,se. uvádí léčění houbových infekcí, znamená toto léčení také preventivní použití a nikoliv pouze léčení již vzniklé infekce.

Cyklické deriváty, podle vynálezu je možno připravit celou řadou obecných postupů, které budou dále podrobněji uvedeny.

.....Podle-obecného- postupu A pro výrobu- s-loučenin obecné- ho vzorce I, v němž 2 znamená skupinu a) se uvede do reakce sloučenina obecného vzorce II

kde

4

R a R mají význam, uvedený ve vzorci I, rP znamená ochrannou skupinu na karboxylové skupině,

X a Y mají význam, uvedený ve vzorci I s tou výjimkou, Že 9 10

X a/nebo Y neznamenají skupinu CR R , tak, aby se vytvořil cyklický systém, s následným odstraněním ochranné skupiny na karboxylové skupině.

Podle prvního provedení postupu A je možno připravit 1 4 cyklické deriváty obecného vzorce la, v nichž R až R mají význam, uvedený ve vzorci I, n=0aXaY znamenají atomy kyslíku tak, že se na diol obecného.vzorce III

kde

R¹ a R⁴ mají význam, uvedený ve vzorci I a rP znamená ochrannou skupinu na karboxyskupině, působí sloučeninou obecného vzorce (l)₂cr²r³ , kde 2 3

R , R mají význam, uvedený ve vzorci la a

L znamená odštěpitelnou skupinu, s následným odpstraněním ochranné skupiny na karboxyskupině.

3

V případě, že R a R znamenají atomy vodíku, je mozno uskutečnit uzavření kruhu působením bihalogenmethanu, například dibrommethanu na sloučeninu vzorce III v přítomnosti silné baze, například hydroxidu alkalického kovu, jako hydroxidu sodného, s. výhodou .za podmínek pro přenos fáze, například při použití tetraalkylamoniové soli, jako tetrabutylamo-“ niumbromidu, přibližně při teplotě místnosti. V případě, že T 2 3 alespoň jedna ze skupin R a R je alkyl o 1 az 6 atomech uhlíku nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v každé části 2 3 nebo v případě, že CR R znamená cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, je možno kruh snadno uzavřít tak, že se na sloučeninu obecného vzorce III působí ketalem obecného vzorce (R0)₂CR R , kde R znamená alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, například methyl, s výhodou v přítomnosti vhodné kyseliny, například kyseliny p-toluensulfonové nebo pyridinium-p-toluensulfonátu ve vhodném rozpouštědle, například ketonu, jako acetonu, nitrilu, jako acetonitrilu nebo halogenovaném uhlovodíku, například dichlormethanu přibližně při teplotě místnosti. Sloučeniny obecného vzorce la, v nichž X a/nebo Y znamená atom síry je podobně možno připravit z meziproduktů, které odpovídají sloučeninám obecného vzorce III, v nichž jsou jedna nebo obě diolové hydroxylové skupiny nahrazeny thiolovými skupinami.

3 .V. .případě, že CR R . .znamená jC--= -O nebo-C-= S , je-možno reak-·ci, vedoucí k vytvoření kruhu snadno uskutečnit tak, že se sloučenina vzorce III nechá reagovat s karbonyldiimidazolem nebo thiokarbonyldiimidazolem ve vhodném rozpouštědle, například v uhlovodíku, jako toluenu nebo v etheru, jako tetrahydrofuranu při teplotě varu pod zpětným chladičem. Také v případě, že CR R znamená C = S, je možno reakci, vedoucí k uzavření kruhu uskutečnit tak, Že se na sloučeninu vzorce III působí oxidem cínu, například oxidem dibutylcínu v uhlovodíkovém rozpouštědle, například při teplotě varu v toluenu'pod zpětným chladičem, s následným přidáním halogenthionmravenčanu, například fenylchlorthionmravenčanu'v uhlovodíkovém rozpouštědle, například toluenu přibližně při. teplotě místnosti..

?odle dalšího provedení postupu A je možno sloučeniny 1 4 obecného vzorce I, v nichž R a R mají význam ze vzorce I, ? 3 jedna ze skupin R^- a R je alkyl o 1 az 6 atomech uhlíku a druhá znamená vodík, alkyl o 1 až 6 atomech, uhlíku,, nebo alko5 S xyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v každé, části, (CR R ) znamená skupinu CR°R , kde R³ a R° mají význam, uvedený ve vzorci

I a X a Y znamenají atomy kyslíku připravit tak, že se na diol vzorce III působí oxidem cínu, například oxidem dibutylcínu v uhlovodíku, například v toluenu při teplotě varu pod zpětným chladičem, načež se přidá allylhalogenid HalCR^R⁵CR²=CHR¹⁴, kde R je vodík nebo alkyl o 1 az 6 atomech uhlíku a Hal je halogen, například brom a fluoridem, například tetrabutylamoniumf luoridem v rozpouštědle, například etheru, jako tetrahydrofuranu se zahřátím směsi na 40 až 80 °C za získání sloučeniny obecného vzorce IV

tuto látku je pak možno převést na požadovanou sloučeninu _p obecného vzorce la cyklizaci, zahrnující intramolekulární elektrofilní adici působením měďnaté soli, například triflu.or acetátu měďnatého s následnou redukcí hydridem, například· hydridem trialkylcínu, jako tributylcínu, nakonec se odstraní ochranná.skupina na karboxylové skupině. Reakci je možno snadno uskutečnit přibližně při teplotě místnosti v prítom-r nosti vhodného rozpouštědla, například etheru, jako tetrahydrofuranu.

V dalším možném provedení postupu A je možno slouce14ninu obecného vzorce la, v němž R až R mají význam, uvedený ve vzorci I, n = 0 a jeden ze symbolů X a Y znamená atom

10 » kyslíku.a druhý znamená skupinu CR.R ., kde jeden ze symbolů g 'io ...... - R a R znamena alkyl o 1 az 6 atomech uhlíku a druhý znamená vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v každé části nebo skupinu CR R znamená C = CHR^^·, připravit tak, že se na sloučeninu obecného vzorce III působí oxidem cínu, například oxidem dibutylcinu v uhlíkovém rozpouštědle, například toluenu, při teplotě' varu pod zpětným chladičem a popřípadě v přítomnosti fluoridu, jako tetrabutylamoniumfluoridu, načež se přidá allylhalogenid HalCR²R³CR⁹=CHR¹⁴ nebo alkinylhalogenid HalCR²R³C=CR^1L, kde la

R , R a Hal mají svrchu uvedený význam, nebo se přidá allylhalogenid nebo alkinylhalogenid po zavedení ochranné skupiny na jednu ze dvou diolových hydroxylových skupin za vzniku sloučeniny obecného vzorce V

kde

X znamena skupinu OH a

Y¹ znamená 0CR²R³CR⁹=CHR¹⁴ nebo OCR²R³C=CRⁿ , nebo

X^I znamená 0CR²R³CR⁹=CHR¹⁴, nebo OCR²R³C=CR^1L a

Ϋ'“ znamená ochrannou skupinu na hydroxylové skupině.

Cyklizaci je možno dovršit tak, že se nejprve odstraní případně přítomná ochranná skupina na hydroxylové skupině a pak se volná hydroxylová skupina aktivuje například tvorbou S-alkyldithiokaroonátu, například S-methyldithiokarbonátu, načež se kruh uzavře za podmínek radikálové reakce, například tak, Že se n a roztok aktivovaného meziproduktu v uhlovodíkovém rozpouštědle, například toluenu při teplotě varu pod zpětným chladičem působí donorem vodíku, například redukčním činidlem typu hydridu, jako hýdridem trialkylcínu, například hýdridem tributylcínu v přítomnosti aktivačního činidla, například azobis(isobutyronitrilu). Nakonec se odstraní ochranná skupina na karboxylové skupině. Tvorbu S-alkyldithiokarbonátu je možno snadno uskutečnit tak, že se na sloučeninu obec1 i ného vzorce V, v nichž jedna ze skupin X a Y” je hydroxysku239 14 ⁵ 3 ll pina a druhá znamená OCR R CR =CHR nebo OCR~R C=CR působí silnou baží na bázi alkalickéhokovu, například hydridem sodíku v přítomnosti imidazolu ve vhodném rozpouštědle, například etheru, jako tetrahydrofuranu při nižší teplotě, například 0 °C a pak se přidá sirouhlík a alkyihalogenid, například methyl jodid přibližně při teplotě, mísznosti.

Při dalším možném provedení způsobu.A je možno připravit sloučeninu obecného vzorce I, v němž Y znamená kys2 · 3 , .

lik, n = 0, R a R jsou atomy vodíku a X znamena skupinu

Q 10

CR*R tak, že se uvede do reakce sloučenina obecného vzorce V, v němž X“ znamená hydroxylovou skupinu, s trifenylfosíinem, jodem a imidazolem ve vhodném rozpouštědle, například tetrahydrofuranu za.vzniku derivátu vzorce Va, obsahujícího atom jodu v poloze 4. Uzavření kruhu je pak možno uskutečnit za podmínek radikálové reakce, například stejně jako reakci s hydridem trialkylcínu v uhlovodíkovém rozpouštědle za současného zahřívání.

V dalším možném provedení způsobu A je možno připravit sloučeniny obecného vzorce I, v němž Y znamená atom kyslíku,

23 ' .

X znamena NR a skupina CR R znamena C = O tak, ze se jedovaná sloučenina obecného vzorce Va uvede do reakce s hydri12 dem sodíku a isokyanátem vzorce R NCO v aprotickém rozpouštědle, například v tetrahydrofuranu s následným odstraněním ochranné skupiny na karboxylové skupině.

V dalším možném provedení způsobu A je možno připravit sloučeninu obecného vzorce I, v němž R a R mají význam, uve2 3 děný ve vzorci I, R a R nezávisle znamenají vodík, alkyl o I až 6 atomech uhlíku nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech 'uhlí2 3 ku v každé části nebo skupina CR R znamená cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku,„n.= 0 a_tajeden ze symbolů X a Y.znamená

12 skupinu -NR kde R ma význam, uvedeny ve vzorci I a druhý z těchto symbolů znamená atom kyslíku, N-acylací sloučeniny obecného vzorce VI

kde jeden ze symbolů X^ a Y^ znamená hydroxyskupinu a druhý znamená aminoskupinu, nebo chráněného derivátu této sloučeniny, například při použití acylhalogenidu, jako acylchioridu za obvyklých podmínek, načež se na vzniklý amid působí 2 3 aldehydem nebo ketonem R R C=0 nebo dialkylacetalem vzorce 2 3

R R CCOAlkyDg v přítomnosti vhodné kyseliny, jako kyseliny p-toluensulfonové nebo pyridinium-p-toluensulfonátu ve vhodném rozpouštědle, například halogenovaném uhlovodíku, jako

- 28 * dichlormethanu přibližně při teplotě místnosti, načež se odstraní jakákoliv pří“omná.ochranná, skupina--------- . .

V dalším možném provedení způsobu A je možno připravit sloučeninu obecného vzorce la, v němž R¹ a R⁴ mají význam, _w 2 3 2 3 uvedený ve vzorci I, η = 0, -X - CR R nebo -Y - CR R zna3 3 mená - N = CR , kde R znamená alkyl o 1 až ž atomech uhlíku nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v každé Části a zbývající symbol Y nebo X znamená atom kyslíku tak, že se na sloučeninu obecného vzorce VI působí iminoesterem vzorce R C(=NH)OR, kde R znamená alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, například. methyl.

Podle dalšího postupu S je možno připravit sloučeninu obecného vzorce I, v němž 2 znamená skupinu a) a Y znamená atom kyslíku, n = 0, R a R znamenají atomy vodíku a X znamená CH tak, že se uvede do reakce sloučenina obecného vzorceVII

kde

R znamená skupinu CHO nebo její chráněný derivát a

R^p znamená chráněnou karboxylovou skupinu, s dialkyldiazomethylfosfonátem v přítomnosti baze, například terč.butoxidu draselného v aprotickém rozpouštědle, například v- -etheru, --jako-tetrahydrof.uranu. s._následným odstraněním_ ______ ochranné skupiny R^ na karboxylové skupině a popřípadě ochranné skupiny na aldehydové skupině.

' 4-ketotetrahydropyranový derivát obecného vzorce Vil je možno připravit oxidací odpovídajícího 4-hydroxyderivátu běžným způsobem, například Swernovou oxidací.

Podle obecného způsobu C je možno připravit sloučeniny obecného vzorce I, v němž Z znamená skupinu b) a W znamená atom kyslíku cyklízací sloučeniny obecného vzorce VIII'

kde

R^^3a, R^^3, _a R^^7a mají význam, uvedený pro R^^-3, R¹® a R^⁷ ve vzorci I nebo jde o chráněné derivácy těchto skupin, rP znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu na karboxylové skupině,

L znamená odštěpitelnou skupinu, napříkLad alkyl- nebo arylsulfonyloxyskupinu a

R znamená atom vodíku nebo znamená OR stejnou skupinu, jako ve významu L, s následným případným odstraněním jakékoliv přítomné ochranné skupiny.

CyklizaČní reakci je možno uskutečnit tak, že se na sloučeninu obecného vzorce VIII působí silnou baží, například hydridem alkalického kovu, jako hydrodem sodíku ve vhodném rozpouštědle, například dimethylformamidu, nebo v etheru, jako tetrahydrofuranu, reakce dobře probíhá při teplotě místnosti. Je také možno použít sodík v alkoholovém rozpouštědle, například v methanolu, zvláště v tom případě, kdy skupina OR je skupina ve významu, uvedeném pro L. V tomto případě se base přidává k roztoku sloučeniny obecného vzorce VIII ve vhodném rozpouštědle, například v halogenovaném uhlovodíku, jako dichlormethanu a reakce se provádí při teplotě místnosti až teplotě varu reakční směsi pod zpětným chladičem.

Podle obecného postupu D je možno připravit sloučeniny obecného vzorce I, v nichž W znamená atom síry tak, že se na sloučeninu obecného vzorce IX

kde R^⁵, R^1-® a R¹⁷ mají význam, uvedený ve vzorci I, působí donorem síry. Reakci je možno sandno uskutečnit tak, že se na sloučeninu obecného vzorce IX působí 5,5-dimethyi-2-thiolo-2-thioxo-l,3,2-dioxafosforinanem v rozpouštědle, například v dimethylformamidu, s výhodou v přítomnosti vhodné baze, například trialkylaminu jako triethylaminu při vyšší teplotě, například v rozmezí 80 až 120 °C.

Sloučeniny obecného vzorce IX je možno snadno připravit žes loučeňiný obecného vžóree VIII, v ’nenižL znamená hydroxyskupinu a skupina OR znamená vhodnou odštěpitelnou skupinu, například alkyl- nebo arylsuifonyloxyskupinu při použití podmínek, popsaných u postupu C s případným následným odstraněním jakékoliv přítomné ochranné skupiny.

Podle dalšího obecného postupu E je možno získat sloučeniny obecného vzorce I z odlišných' sloučenin obecného vzorce I nebo jejich chráněných derivátů.

Podle prvního provedení způsobu E je možno derivát slou ceniny obecného vzorce I s chráněnou karboxylovou skupinou, v němž. Z znamená skupinu a) a R¹ znamená hydroxylovou skupinu převést na odpovídající derivát obecného vzorce I, v němž.. R^ znamená atom vodíku tak, že se i) vytvoří S-alkyldithiokarbonát svrchu popsaným způsobem a ii) uvedená skupina se odstraní tak, že se na roztok'uvedeného meziproduktu v uhlovodíkovém rozpouštědle, například v toluenu, působí při vyšší teplotě, například v rozmezí 80 až 120 °C redukčním činidlem typu hydridu, například hydridem trialkylcínu, jako hydridem tributylcínu, načež se odstraní ochranná skupina na karboxylové skupině. ,

V dalším možném provedení způsobu E je možno připravit sloučeninu obecného vzorce I, v němž Z znamená skupinu a), R^ znamená alkoxyskupinu a/nebo R⁴ znamená alkoxymethylovou skupinu vždy o 1 az 4 atomech uhlíku v alkoxylové části tak, že se podrobí alkylaci chráněný derivát sloučeniny obecného vzorce I, v němž R znamená hydroxyskupinu a/nebo 4

R znamená hydroxymethylovou skupinu, přičemž jakékoliv labilní skupiny, například karboxylové a hydroxylové skupiny jsou chráněny a ochranné skupiny se po ukončení reakce opět odstraní. Alkylaci je možno snadno uskutečnit počáteční reakcí se silnou baží alkalického kovu, například hydridem sodíku a pak reakcí s alkylhalogenidem, například methyljodidem. Reakci je možno provést ve vhodném rozpouštědle, například etheru, jako tetrahydrofuranu při'teplotě v rozmezí 0 až 30 °C.

V dalším možném provedení způsobu E je možno připravit derivát obecného vzorce I, v němž R¹ znamená acyloxysku4 8 pinu a/nebo R znamená skupinu CH-OCOR acylaci chráněného derivátu sloučeniny obecného vzorce I, v němž R znamená hydroxylovou skupinu a/nebo R⁴ znamená skupinu CHgOH a jakékoliv labilní skupiny, například karboxylové a hydroxylové skupiny jsou chráněny, s následným odstraněním jakékoliv pří tomné ochranné skupiny. Acylační reakci je možno uskutečnit při použití běžných postupů, například působením karboxylo^ vou kyselinou v přítomnosti aktivačního činidla, jako dicyklohexykarbodiimidu a vhodné baze, například dimethylaminopyridinu nebo při použití halogenidu kyseliny, například chloridu kyseliny, popřípadě v přítomnosti vhodné baze, jako pyridinu nebo 4-dimethylaminopyridin.

Podle dalšího možného provedení způsobu E je možno připravit derivát obecného vzorce I, v němž R¹ znamená hydroxylovou skupinu v equatoriální konfiguraci z chráněného derivátu sloučeniny obecného vzorce I, v němž R^ znamená hydroxylovou skupinu v axiální konfiguraci a jakákoliv labilní skupina, například karboxylové nebo hydroxylové skupina nebo skupina CHO je chráněna, s následným odstraněním jakékoliv přítomné chráněné skupiny. Isomerační reakci je možno snadno uskutečnit ve dvou stupních tak, že se i) oxiduje 2'-axiální skupina OH na oxoskupinu působením vhodného oxidačního systému, například oxidu chromového v přítomnosti pyridinu v rozpouštědle, například v halogenovaném uhlovodíku, jako dichlormethanu s obsahem anhydridu kyseliny octové, načež se ii) redukuje oxoskupina na equatoriální skupinu OH při použití vhodného redukčního činidla, například typu hydroborátu, jako hydroborátu sodného. Redukci je možno snadno uskutečnit ve vhodném rozpouštědle, jako alkoholu, napři-” klad ve vodném methanolu při teplotě v rozmezí 0 až 10 °C.

V dalším provedení způsobů E je možno připravit deriváty obecného vzorce I, v nichž R³ znamená atom halogenu z chráněného derivátu sloučeniny obecného vzorce I, v němž R¹ znamená hydroxylovou skupinu s následným'odstraněním jakékoliv přítomné ochranné skupiny. Reakce probíhá současně s přeměnou konfigurace. Je tedy například možno axiální skupinu

OH snadno převést na equatoriální atom jodu tak, že se jod přidá k roztoku výchozí látky ve vhodném rozpouštědle, například uhlovodíku, jako toluenu v přítomnosti trifenylfosfinu a jodu a pak se směs zahřeje, například na teplotu varu pod zpětným chladičem.

Podobným způsobem je také mošno zavést atom fluoru působením vhodného fluoračního činidla, například trifLuoridu diethylaminosíry (DAST) ve vhodném rozpouštědle, například halogenovaném uhlovodíku, jako dichlormethanu, nebo aromatickém uhlovodíku, jako toluenu, přibližně při teplotě místnosti

V dalším provedení způsobu E je mošno sloučeninu .obec1 2 ného vzorce I, v němž Y znamena atom kyslíku, n = 0, R a R znamenají atomy vodíku a X znamená skupinu CH nebo chráněný derivát této sloučeniny převést na odpovídající sloučeninu, v níž X znamená CH^ redukcí vodíkem v přítomnosti vhodného katalyzátoru, například paladia na aktivním uhlí ve vhodném rozpouštědle s následným odstraněním ochranné skupiny na karboxylové skupině.

V jiném provedení způsobu E je možno sloučeninu obec2 3 ného vzorce I, v němž Y znamená atom kyslíku, n = 0, R a R znamenají atomy vodíku a X znamená skupinu C=CH₂ převést na odpovídající sloučeninu, v níž X znamená skupinu C = 0 oxidací, například při- použití oxidu osmičelého a jodistanu sodného.

Podobně je možno sloučeninu obecného vzorce I, v němž

Y znamená atom kyslíku, n = 0, R a R jsou atomy vodíku a

X znamená skupinu C = CH_p převést na odpovídající sloučeninu ^2 3 obecného vzorce I, v němž R a R tvoří spolu s atomem uhlíku, na nějž jsou vázány, skupiny C = 0 oxidací, například působením oxidu chromového v pyridinu.

Podle dalšího možného provedení způsobu E je možno derivát sloučeniny obecného vzorce I s chráněnou karboxylovou skupinou, v němž R^ znamená hydroxylovou skupinu převést na 15 odpovídající derivát vzorce I, v němž R znamená atom halogenu standardní reakcí, při níž se hydroxyskupina nahradí atomem halogenu, načež se odstraní ochranná skupina na karboxylové skupině. Například náhradu hydr.oxylové skupiny atomem fluo...... Λ ru je možno snadno uskutečnit inverzí'konfigurace tak, že sé k roztoku výchozí látky přidá DAST v rozpouštědle, například

V.

v halogenovaném uhlovodíku, jako dichlormethanu. Reakce dobře v

probíhá přibližně při teplotě místnosti.

Při dalším provedení způsobu E je možno sloučeninu 15 obecného vzorce I, v němž R znamená alkoxyskupinu o 1 az 17 atomech uhlíku, popřípadě substituovanou a/nebo R znamená. alkoxvmethylovou skupinu_s_alkoxylovou Částí_o 1 až 4 atomech uhlíku připravit alkylaci chráněného derivátu slou-15 17 ceniny obecného vzorce I, v němž R a/nebo R obsahuje volnou hydroxylovou skupinu, současně se jakékoliv labilní skupiny, například karboxyskupiny nebo hydroxylové skupiny chrání a ochranné skupiny se po ukončení reakce opět odstraní. Alkylaci je možno snadno uskutečnit počáteční reakcí se silnou baží alkalického kovu, například hydridem sodíku a pak reakcí s alkylhalogenidem, například methylbromidem. Reakci je možno uskutečnit ve vhodném rozpouštědle, například v e'theru'jako'' tetrahydrof uranu při ťep'10'tě ’ v rozmezí '0' áž ' °C. V případě potřeby je možno reakci provádět v přítomnosti amoniové soli, například tetraalkylamoniumhalogenidu, jako tetrabutylamoniumjodidu.

Je také možno zavést alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem ve dvou stupních'tak, že se v prvním stupni uskuteční alkenylace působením vhodného alkenylhalogenidu v přítomnosti baze, například uhličitanu, jako uhličitanu česného v rozpouštědle, například dimethylformamidu přibližně při teplotě místnosti a ve druhém stupni se provádí π · * — -r . » -A - Xhydrogenace v přítomnosti katalyzátoru na bázi paladia, například. 10% paladia'na aktivním uhlí, postup se provádí přibližně při teplotě místnosti.

Podle dalšího možného provedení způsobu E je možno ' „ „ 15 -U připravit sloučeninyobecného vzorce I, v němž R znamená on ]_ iq skupinu CK-OCOR nebo R znamená skupinu OCOR acylaci chráněného derivátu sloučeniny obecného vzorce I, v nemž.R znamená CH^OH nebo R znamená hydroxylovou skupinu a jakékoliv labilní skupiny, například karboxylové skupiny a hydroxyskupiny-jsou chráněny a ochranné skupiny se po ukončení reakce opět odstraní. Acylační reakci je možno uskutečnit běžným způsobem, například při použití karboxylové kyseliny v přítomnosti aktivačního činidla, jako dicyklohexylkarbodiimidu a vhodné baze, například dimethylaminopyridinu nebo při použití halogenidu, například chloridu kyseliny, popřípadě v přítomnosti vhodné baze, jako pyridinu nebo dimethylaminopyridínu.

Podle dalšího možného provedení postupu Σ je možno 15 16 připravit sloučeninu obecného vzorce I, v němž CR R znamená skupinu C = 0 oxidací chráněného derivátu sloučeniny obecného vzorce I, v němž R^ znamená hydroxylovou skupinu, přičemž j.akékoliv labilní skupiny, například karboxylové sku36 piny a hydroxyskupiny jsou chráněny a jakékoliv přítomné ochranné skupiny se po ukončení reakce opět odstraní·. Oxidační reakci je možno Snadno uskutečnit přidáním vhodného oxidačního Činidla, například dimethylsulfoxidu v přítomnosti anhydridu kyseliny trifluoroctové. Oxidaci je možno provést ve vhodném rozpouštědle, například halogenovaném uhlovodíku, jako dichlormethanu při vyšší teplotě, například 40 až 80 °C.

16

Sloučeniny obecného vzorce I, v němž CR R znamenají skupinu CH = CH^, je možno připravit reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce .1 nebo jejího chráněného de15 16 rivátu, v němž CR R znamená skupinu C = 0, s alkyltrifenylfosfoniumhalogenidem a alkyllithiem v apřotickém rozpouštědle, například tetrahydrofuranu.

„ „ 15

Sloučeniny obecného vzorce I, v nemz R znamena azidoskupinu, j.e možno připravit z., odpovídající sloučeniny obec' ' 15 něho vzorce I, nebo'jejiho'chráněného derivátu, v němž R znamená hydroxylovou skupinu reakcí s toluensulfonylTialoge-nidem, výsledný toluensulfonátový derivát se pak uvede ďo . reakce s azidem alkalického kovu, například azidem lithia v apřotickém rozpouštědle, například dichlormethanu.

V řadě svrchu uvedených postupů je nutno odstranit v konečném stupni jednu nebo větší počet ochranných skupin lf τι «Vání .Aró-e. 1 ůdnvAh Ί-ρ-holz δ . T /41 a 4 o 1 5 1 U

... ----” — J ----------W X- Χ-K K 4 postupu -F je možno odstranit ochranné skupiny z chráněného derivátu sloučeniny vzorce I. Vhodné ochranné skupiny na karboxylové skupině a hydroxylové skupině zahrnují běžně užívané skupiny, popsané například v Protective Groups in Organic Chemistry, Ed. J. F. W. McOmie, Plenům Press, 1973 nebo Protective Groups in Organic Synthesis, Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, 1991. Jako příklady vhodných ochranných skupin na karboxyskupině je možno uvést arylalkylové skupiny, j ako.. dif enylmethylovou ,.~p-mj? thoxybenzy lovou _a si ly lovou.........

skupinu^ například trimethylsilylethyl nebo terc.butyldimethylsilyl. Jako příklady vhodných ochranných skupin na hydroxyskupině je možno uvést arylaikylové skupiny, například p-methoxybenzylové a esterové skupiny, jako benzyloxykarbonylovou skupinu. Aldehydové skupiny je možno chránit ve formě cyklických acetalů.

Ochranné skupiny je po ukončení reakce možno odstranit běžným způsobem. Například difenylmethylovou skupinu' je možno snadno odstranit působením kyseliny trifluoroctové nebo hydrogenolýzou v přítomnosti katalyzátoru na bázi paladia, například 10% paladiem na aktivním. uhlí.. .Benzyloxykarbony.lovou skupinu je možno snadno- odstranit- rovněž hydrogenolýzou v přítomnosti katalyzátoru na. bázi. .paladia, .například 10% paladiem na aktivním uhlí. Další skupiny, například p-methoxybenzylovou skupinu je možno snadno odštěpit.působenímn2,3-dichlor-5,6-dikyano-l ,4-benzochinonu.- Silylové skupiny,· například trime.thylsilylethylovou skup.inu nebo terč.butyldimethylsilylovou skupinu je možno snadno- odstranit působením fluoridových iontů. Cyklické acetalové skupiny je možno snadno převést na aldehydové skupiny adicí vhodné kyseliny, například kyseliny chlorovodíkové.

Výchozí látky obecného vzorce II je možno připravit tak, že se uvede do reakce sloučenina obecného vzorce X

CHj

CHO

CH,0H (X)

00/ kde R znamená ochrannou skupinu na karboxylové skupině, se sloučeninou obecného vzorce XI

4 kde R , R , X a Y mají vyznám, uvedený ve vzorci II, nebo s chráněným derivátem této sloučeniny, s následným případným odstraněním jakékoliv přítomné ochranné skupiny. Reakci je možno snadno uskutečnit tak, že se sloučeniny obecné, ho vzorce X a XI zahřejí na teplotu v rozmezí 40 až 80°C ve' vhodném rozpouštědle, například v uhlovodíku, jako toluenu v přítomnosti kyseliny, například směsi kyseliny bromovodí-; kové a trífenylfosřinu. .

V případe, Že ve vzorci XI znamenají skupiny XH a YH.. hydroxylové skupiny, je možno tyto skupiny chránit jako acyl oxyskupiny, například acetoxyskupiny a ochranné skupiny pak po ukončené reakci opět odstranit. Acetoxyskupinu ’je možno odstranit přidáním vhodné baze, například alkoxidu, jako methoxidu sodíku ve vhodném rozpouštědle, například alkoholu, jako methanolu přibližně při teplotě místnosti,'

Svrchu uvedená reakce je zvláště výhodná pro přípra* - ^4 vu sloučenin obecného vzorce II, v nichž R má význam, odlišný od methylové skupiny. V případě, že R⁴ znamená methylovou skupinu, může být vhodnější připravovat sloučeniny obecného vzorce II z 4*-demethylsordarinu vzorce XIÍ

Například sloučeniny obecného vzorce III, v němž R~' znamená methyl, je,možno připravit tak, že.se karboxylové skupina ve sloučeninách obecného vzorce XII chrání běžným způsobem, načež se převede 2-axiální hydroxyskupina na jinou skupinu ve významu R^ svrchu uvedenými postupy. Při manipulaci s 2'-axiální hydroxylovou skupinou může být nezbytné chránit hydroxylové skupiny v polohách 3- a 4 T.ú.to ochranu je možno uskutečnit tvorbou isopropylidenové skupiny způsobem podle prvního provedení způsobu A. Tuto skupinu je pak k vytvoření diolové funkce možno odstranit působením kyseliny, například anorganické kyseliny, jako kyseliny chlorovodíkové .

V případě, že se karboxylové skupina ve sloučenině . obecného vzorce XII má chránit difenylmethylovou skupinou, je možno působit na roztok sloučeniny obecného vzorce XII v alkoholovém rozpouštědle, například v methanolu a/nebo v halogenovaném uhlovodíku, jako dichlormethanu difenylazometha nem, který se přidává ve formě roztoku v halogenovaném uhlovodíku, například v dichlormethanu.

Sloučeniny obecného vzorce II, v němž X a Y znamenají atom kyslíku nebo síry, je možno také připravit dekarbonylací odpovídajícího chráněného derivátu sloučeniny obecného vzorce

--23

I, v nemz CR R znamená C = 0 a n = 0. Dekarbonylaci je možno snadno uskutečnit přidáním alkoxysloučeniny, například. CH^ONa ve vhodném rozpouštědle, například alkoholu, jako methanolu.

Sloučeniny obecného vzorce X je snadno možno připravit ze sordericinu při použití běžných ochranných skupin na karboxylové skupině. Například v případě, že R^p ve sloučenině obecného vzorce X znamená trimethylsilylethyl, je možno tuto skupinu zavést tak, že se na sordericin působí 0-/2-(trimethyl silyl)ethyl/-N,N-diisopropylisomočovinou, běžně ve vhodném rozpouštědle, například etheru, jako tetrahydrofuranu při zvýšené teplotě, například za varu pod zpětným chladičem. V případě, že R^p znamená difenyImethylovou skupinu, je možno tuto skupinu navázat svrchu uvedeným způsobem.

V případě., že ..hydroxylovou. skupinu v derivátu sordarinu s chráněnou- karboxy,lovou·-skupinou nebo ve sloučenině obecného vzorce XII je zapotřebí chránit při použití p-methoxybenzylové skupiny, je možno tuto skupinu zavést reakcí s oxidem cínu, například s oxidem dibutylcínu v uhlovodíkovém rozpouštědle, například v toluenu, při teplotě varu pod zpětným chladičem, s následným přidáním p-methoxy'oenzylhalogenidu v přítomnosti fluoridu, například tetrabutylamoniumfluoridu.

V případě, že ochrannou skupinou má být benzyloxykarbonylová skupina, je možno tuto skupinu zavést reakcí s benzylhalogenmravencanem v pritofíiňoscl vhodného aminu, například 4—di — methylaminopyridinu v rozpouštědle, například v halogenovaném rozpouštědle, jako dichlormethanu nebo v acetonitrilu.

Zavedení skupiny L do vzorce VIII, v němž L znamená 22 alkyl·- nebo arylsulfonyloxyskupinu a/nebo skupiny R 0, která znamená alkyl- nebo arylsulfonyloxyskupinu, je možno uskutečnit, reakcí vhodně chráněného derivátu sordarinu nebo sloučeniny vzorce XII s alkyl- nebo arylsulfonylhalogenidem v přítomnosti vhodného rozpouštědla, například pyridinu, popřípadě obsahujícího amin, například 4-dimethylaminopyridin nebo v halogenovaném uhlovodíku, jako dichiormeťfiánu 'v přítomností vhodného aminu, jako 4-dimethylaminopyridinu. Reakci je možno snadno provádět přibližně při teplotě místnosti. Další skupiny je možno podobně zavést při použití běžných postupů.

Je zřejmé, že může být zapotřebí převést hydroxylovou 15 skupinu na požadovanou skupinu R před cyklizací podle způsobu C. V tomto případě je možno příslušně chráněný derivát

- 15a

-demethylsordarinu nebo sloučeniny vzorce II, v němž R znamená hydroxylovou skupinu, uvést do reakce tak, aby došlo k přeměně 4 -hydroxylové skupiny na požadovanou skupinu .R¹ běžnými postupy.. Například, přeměnu na alkoxyskupinu. o .L.až 6 atomech uhlíku,, alkoxy alkoxy skup inu. nebo arylalkoxyskupinu... o 1 až 4 atomech uhlíku v alkoxylových částech uskutečnit běžnou alkylaci, například některým ze svrchu uvedených po- - 15 stupů. Hydroxylovou. skupinu k získání , sloučeniny., v níž. R znamená atom vodíku, je. možno snadno odstranit ve dvou. stupních..tak, že se i) vytvoří’S-alkyldithiokarbonát působením silné baze alkalického kovu, například hydridu sodíku v přítomnosti imidazolu ve vhodném rozpouštědle, například etheru jako tetrahydrofuranu při nižší teplotě, například 0 °C a pak se přidá sirouhlík a alkylhalogenid, například methyljodid při teplotě místnosti, načež se ii) uvedená skupina odstraní tak, že se na roztok meziproduktu v uhlovodíku, například toluenu, při vyšší teplotě, 'například SO až 120 °C působí redukčním činidlem typu hydridu, například hydridem trialkylcínu, například tributylcínu, popřípadě v přítomnosti aktivačního činidla, jako azobis(isobutyronitrilu). Přeměnu na alkylovou skupinu o 2 až 6 atomech uhlíku je možno uskutečnit tak, že se i) vytvoří S-alkyldithiokarbonát svrchu uvedeným způsobem, ii) tato skupina se nahradí alkenylovou skupinou reakcí s trialkenylcínem za podmínek, uvedených svrchu pro odstranění S-alkyldithiokarbonátové skupiny a iii) alkenylová skupina se redukuje na alkylovou skupinu, například hydrogenaci v přítomnosti vhodného katalyzátoru na bázi paladia, jako 10% paladia na'aktivním uhlí.

Soli sloučenin obecného vzorce I s bázemi je možno snadno vytvořit tak, že se na sloučeninu obecného vzorce I působí příslušnou solí nebo baží. Je například možno působit na sloučeninu obecného vzorce I hydroxidem sodným nebo draselným, hydrogenuhliČitanem, uhličitanem nebo octanem sodným nebo-draselným, například hydroxidem sodným, hydrogenuhliČitanem draselným, hydrogenuhliČitanem sodným nebo octanem draselným, dále octanem amonným nebo vápenatým nebo L-lysinem.

Sůl je možno připravit například tak, že se příslušná sůl nebo baze, v případě potřeby ve vodném roztoku přidá k roztoku nebo suspenzi sloučeniny obecného·vzorce I ve vhodném roz-? pouštědle, například alkoholu, jako methanolu nebo v dioxanu při teplotě v rozmezí 0’až 80 °C, běžriě přibližně při teplotě místnosti.

'4,

Farmaceuticky přijatelné soli je možno také připrav-íít z jiných solí včetně jiných farmaceuticky přijatelných solí sloučenin obecného vzorce I běžnými postupy.

Metabolicky labilní estery sloučenin obecného vzorce I je možno vytvořit na karboxylové skupině některým z obvyklých postupů. Podobně je možno metabolicky labilní estery vytvořit také na kterékoliv volné hydroxylové^skupině v molekule.

Nové sloučeniny obecného vzorce XII je možno připravit dále uvedenou fermentaci nebo také demethylací sordarinu při použití biologické přeměny.

Fermentační postup spočívá v tom, že se pěstuje mikroorganismus, produkující sloučeninu vzorce XII a tato látka se pak ze živného prostředí izoluje.

Mikroorganismem, schopným produkovat sloučeninu obecného vzorce XII může být mutovaný kmen Sordaria araneosa, který je možno snadno identifikovat tak, že se sledují kmeny, přežívající po tvorbě mutace a analyzují se vzorky živného prostředí těchto kmenů běžným způsobem. Příslušný mutovaný kmen Sordaria araneosa byl uložen ve stálé veřejné sbírce kul· tur CAB International Mycological Institute, Genetic Resource Reference Collection, Bakeham Lané, Egham, Surrey TW20 9TY, Anglie. Kmen byl uložen 10. června. 1994 pod č. IMI 362 184 a jeho životaschopnost byla ověřena 13. a 21. června 1994. Sbírka je uznávána, podle Budapestské úmluvy. Vlastnosti kmene IMI 362 184 -jsou uvedeny, v příkladu- 74.

Uvedený- mikroorganismus IMI 362 184 rovněž, tvoří, součást podstaty vynálezu.

/

Mutanty kmene IMI 362 184 mohou vznikat samovolně, nebo je možno je vytvořit řadou postupů, uvedených například v souhrnné publikaci. Techniques for the Development of Microorganismus,. Η. I. Adler, Radiation and Radioisotopes for Industrial Microorganisms, Proceedings of the Symposium, Vídeň 1973, str. 241, International Atomic Energy Authority. Postupy pro tvorbu mutací zahrnují působení ionizačního záření., chemické metody, například působení N-methyl-N -nitro-N-nitrosoguanidinu NTG, působení tepla, genetické postupy, jako jsou rekombinace a transformace a selektivní techniky pro vznik spontánních mutant.

Sloučeniny obecného vzorce XII je možno pripraviít fermentaci běžným způsobem, například pěstováním vhodného organismu v přítomnosti využitelných zdrojů uhlíku, dusíku a anorganických solí s následnou izolací požadovaného výsledného produktu.

Využitelnými zdroji uhlíku, dusíku a anorganických solí mohou být jednoduché nebo komplexní látky. Zdrojem uhlíku je obvykle glukosa, maltosa, škrob, glycerol, melasa, dextrin, laktosa, sacharosa, fruktosa, galaktosa, myoinositol, D-mannitol, sojový olej, karboxylové kyseliny, aminokyseliny, glyceridy, alkoholy, alkany a rostlinné oleje. Zdroje uhlíku budou obvykle tvořit 0,5 až 10 % hmotnostních fermentačního prostředí. Výhodnými zdroji uhlíku jsou zejména fruktosa, glu kosa a sacharosa.

Ze zdrojů dusíku je možno uvést například sojovou mouku, kukuřičný výluh, lihovarské výpalky, extrakt z kvasnic, mouku z bavlníkových semen, peptony, mleté ořechy, sladový extrakt, melasu, kasein , směs aminokyselin, plynný nebo kapalný amoniak, amonné soli a dusičnany. Použít je možno také močovinu a jiné amidy. Zdroje dusíku budou obvykle tvořit 0,1 až 10 % hmotnostních fermentačního prostředí.

Živné anorganické., soli je možno zařadit do živného pro středí jako běžné' soli,, schopné dodávat sodík, draslík, amonné ionty, železo, hořčík, zinek, nikl, kobalt, mangan, vanad, chrom, vápník, měď, molybden, bor, fosfátové, sulfátové, chlo ridové a karbonátové ionty.

Organismus se obvykle pěstuje při teplotě 20 až 40, s výhodou 20 až 35 a zvláště při teplotě 25 °C, je žádoucí živné prostředí provzdušnit a míchat, například protřepáváním nebo přímým mícháním. Na počátku pěstování je možno živné prostředí naočkovat malým množstvím myceiia a/nebo spor. Získaný vegetativní očkovací materiál je možno přenést do fermetačního prostředí nebo je možno’jej ještě pomnožit před přenesením do hlavního fermentačního prostředí. Fermentace obvykle probíhá při pH v rozmezí 3,5 až 9,5, s výhodou 4,5 až 7,5. Může být zapotřebí přidávat k fermentačnímu prostředí bázi nebo kyselinu k udržení pH v žádoucím rozmezí. Vhodnými bázemi pro tento účel jsou hydroxidy alkalických kovů, například vodný roztok hydroxidu sodného nebo hydroxidu draselného”. Vhďdhýml kyselinami 'jsou'áhOTganické· 'kyseliny, například kyselina chlorovodíková, sírová nebo fosforečná.

Fermentací je možno provádět 4 až 30 dnů, s výhodou 5 až 15 dnů. Proti příliš velkému pěnění je možno přidávat protipěnivé látky v příslušných intervalech. Ve vhodných intervalech je podle potřeby možno do fermentačního prostředí přidávat, také zdroje uhlíku a/nebo dusíku.

Sloučeniny obecného vzorce XII je po fermentací převážně spojena s buněčným materiálem a je možno ji uvolnit do roztoku přidáním kyseliny a s vodou mísitelného organického rozpouštědla, nebo S' výhodou .přidáním ..baze, například .hydroxidu. sodného. Buněčný-materiál je z roztoku možno Oddělit odstředěním, běžnou filtraci nebo filtrací s použitím membrán. Výsledný roztok je pak možno okyselit, například kyselinou sírovou až do pH nižšího než 6, například 4,5.

Sloučeninu, obecného .vzorce XII je možno izolovat a čistit různými frakcionačními postupy, například kombinací adosrpce a eluce, srážením, frakční krystalizací, extrakcí rozpouštědlem nebo dělením mezi různými rozpouštědly, tyto postupy je možno různým způsobem kombinovat.

Bylo prokázáno, že pro izolaci a čištění sloučeniny obecného vzorce IX je zvláště vhodná adsorpce na pevný nosič s následnou elucí.

Vhodným pevným nosičem je například oxid křemičitý, makroretikulární adsorpční pryskyřice bez funkčních skupin, například zesítěná pryskyřice na bázi polymeru styrendivinylbenzenu, například CG151, Amberlit XAD-2, XAD-4, XAD-16 nebo XAD-1180 (Rohm a Haas Limited)· nebo Kastell S 112 (Montedison), dále substituovaný styrendivinylbenzenový polymer, například

Diaion SP2O7 (Mitsubishi), aniontoměnič, například IRA-958 nebo MacroPrep Hugh Q (BioRad), s organickým rozpouštědlem kompatibilní zesítený dextran, například Sephadex LH2O (Pharmacia UK Limited), nebo materiál v reverzní fázinapříklad oxid křemičitý, vázaný na uhlovodík, například C^g-vázaný oxid křemičitý.

. Sloučeninu obecného vzorce XII je také možno izolovat a čistit při použití kapalného aniontoměniče, například LA 2.

Vhodným rozpouštědlem pro eluci sloučeniny obecného vzorce XII bude rozpouštědlo, závislé na povaze adsorpčního prostředku. Při použití polymerní pryskyřice, například XAD-16 je zvláště vhodné použití rozpouštědel, mísitelných f™· vodou, jako jsou methanol, aceton, isopropanol nebo aceto- ; nitril ve směsi s různými podíly vody. *

Přítomnost sloučeniny obecného’ vzorce XII v průběhu extrakce a izolace je možno sledovat běžnými postupy, například pomocí HPLC nebo UV-spektroskopií nebo při využití optické otáčivosti nebo.jiné vlastnosti výsledné látky.

V případě, že se .sloučenina obecného vzorce XII získá ve formě roztoku v organickém rozpouštědle, například po čištění absorpcí a elucí, je možno rozpouštědlo odstranit běžnými postupy, například odpařením a tak získat požadovanou sloučeninu. V_DřÍDadě potřeby je_;. možno, výslednou' látku dále čistit chromatograficky, například protiproudovou chromatografií při použití spirálových extrakčnich materiálů, například s větším počtem vrstev nebo také pomocí HPLC nebo při použití kapaliny v superkritickém stavu a různých adsorpčních materiálů, jako jsou uhlík, oxid hlinitý, vanad, polymerní pryskyřice nebo oxid křemičitý, popřípadě s další navázanou fází. Vhodné systémy rozpouštědel a elučních činidel pro chromatografické čištění nebo dělení sloučeniny obecného vžór'ce'Xriod jinýchlátek-budou- samozřejmě· zá-v-iset-na pova- - ze použitého adsorpčního Činidla. V případě, že se užije C8-vázaný oxid křemičitý, je zvláště vhodným systémem směs acetonitrilu a vody. Sloučeninu je možno dále čistit extrakcí rozpouštědlem, například vhodným organickým rozpouštědlem, jako je keton, například aceton nebo methylethylketon, halogenovaným uhlovodíkem, alkoholem, jako methanolem, diolem, jako propan-1,2-diolem nebo butan-1,3-diolem nebo esterem, například methylacetátem nebo ethylacetátem. V dalším možném provedení je možno roztoky sloučeniny obecného vzorce XII dále čistit při použití adsorpčních činidel, která selektivně

X. * odstraní nečistoty po přidání ve vhodném množství, například při použití DEAE-celulosy nebo také krystalizací, například ze směsi acetonitrilu a vody, nebo při použití kombinací, svrchu, uvedených postupů.

·. I·'.’·'Biologickou transformaci sordarinu na 4 -demethylsordarin, sloučeninu vzorce XII je možno uskutečnit' tak, že se sordarin inkubuje v kultuře vhodného organismu spolu ,se. zdrojem uhlíku a dusíku a pak se sloučenina vzorce XII z kultury izoluje.

*

Mikroorganismy, schopné demethylovat sordarin v poloze 4' je možno snadno identifikovat při použití testu v malém měřítku s následnou analýzou vzorku, s použitím běžných postupů, například HPLC. Jako příklady mikroorganismů, schopných demethylovat sordarin je možno uvést Streptomyces capreolus ATCC 31963, Streptomyces avermitilis ATCC 31272, Streptomyces armentosus NRRL 3176, Streptomyces antibioticus ATCC 31771, Streptomyces rimosus ATCC 23955, Streptomyces platensis ATCC 29778, Streptomyces mashuensis ATCC 23934, Streptomyces eurythermus ATCC 14975, Nocardia orientalis ATCC 43491 a Cunninghamella echinuata var. elegans ATCC 36112.

Mikroorganismus se obvykle pěstuje při teplotě 20 až 40, s výhodou 20 až 35 a zvláště 28 °C, žádoucí je provzdušnění a míchání živného prostředí, například protřepáváním nebo pomocí míchadla. Živné prostředí může být na začátku naočkováno malým množstvím mycelia a/nebo spor. Získaný vegetativní očkovací materiál může být přenesen přímo do hlavního fermentačního prostředí nebo může být dále pomnožen v jednom nebo více stupních, například v průběhu 1 až 3 dny před přenesením do hlavního fermentačního prostředí. Hlavní . fermentační prostředí bude také obsahovat sordarin, fermentace bude obvykle prováděna při pH 3,5 až 9,5, s výhodou 4,5 až 7,5. V průběhu fermentace může být zapotřebí k fermen· tažnímu prostředí přidávat kyseLinu nebo bázi k udržení pH v požadovaném rozmezí. Vhodnou baží je například hydroxid

Ví· alkalického kovu, například vodný roztok hydroxidu sodného rt nebo hydroxidu draselného. Vhodnou kyselinou může být anorganická kyselina, například kyselina chlorovodíková, sírová nebo fosforečná. Fermentace může. probíhat 2 až 5 dnů, s výho dou přibližně 3 dny. K zábraně pěnění je možno přidávat ve''

7' ^! vhodných intervalech protipěnové činidlo. Do fermentačního¹' ft prostředí je možno podle potřeby přidávat také zdroje uhlíku a/nebo dusíku.

Oddělení a izolaci sloučeniny vzorce XII z živného prostředí je možno uskutečnit běžnými postupy, které byly svrchu popsány. V případě, že je žádoucí snížit pH směsi na hodnotu nižší než 6, například 2,5, je toho možno snadno dosáhnout přidáním kyseliny, například kyseliny orthofosforeČné.

Je zřejmé, že biologickou transformaci je možno uskutečnit celou řadou různých postupů. Je například možno buňky vypěstovat a oddělit před přidáním k roztoku sordarinu například pufru, odděleném živném prostředí nebo ve vodě. Je také možno příslušné enzymy izolovat a pak použít, popřípadě s příslušnými koenzymy, nebo enzymy klonovat a dosáhnout jejich zvýšené exprese.

Jak již bylo svrchu uvedeno, sordarin a sordaricin jsou známé látky, které je možno získat způsoby, které již byly popsány. Například příprava sordarinu kultivací Sordaria araneosa NRRL 3196 (také ATCC 36386) byla popsána v britském patentovém spisu č. 1 162 027, kde jsou popsány specifické příklady pro přípravu sordarinu,

Sordaricin je možno snadno připravit za podobných fer-, mentačních podmínek, jaké byly popsány .pro sordarin při -použití Sordaria araneosa NRRL, 3.196. nebo vhodné mutanty š. následnou izolací, požadované sloučeniny vhodnými chromatogra- fickými postupy. Jedna z takových mutant byla uložena ve stálé veřejné sbírce kultur, CAB International MycologicačL Institute, Genetic Resour.ce Reference Collection., Bakeham·Lané, Egham, Sur.rey TW20. 9TY, Anglie.. Kmen byl do sbírky uložen 11. srpna 1994 pod číslem IMI. 3.629.47 á jeho životaschopnost byla potvrzena 19. srpna 1994. Uvedená sbírka je uznávána Budapeštskou úmluvou. Vlastnosti kmene IMI 362947 budou podrobněji uvedeny v příkladu 75.

Mikroorganismus IMI 362947 a jeho případné mutanty tvoří rovněž součást podstaty vynálezu.

Způsob získávání mutant tohoto kmene a genetického materiálu bude obdobný jako v případě IMI 362184 svrchu.

Sordaricin je také možno připravit ze sordarinu biologickou transformací. Tuto transformaci je možno snadno uskutečnit tak, že se sordarin inkubuje v kultuře vhodného organismu a vzniklý sordaricin se pak z kultury izoluje.

Mikroorganismy schopné přeměnit sordarin na sordaricin je možno snadno identifikovat jednoduchými zkouškami a analýzou získaných vzorků běžnými postupy, například při použití HPLC. Jeden z těchto mikroorganismů byl identifikován a uložen ve veřejné sbírce kultur National Collections of Industrial and Marině Bacteria Limited, NCIMB, 23 St. Machar Drive, Aberdeen AB2 IRY, Skotsko. Kmen byl uložen do sbírky 4. srpna 1994 a tentýž den byl určen jako životaschopný a schválen pro účely patentové ochrany. Jde o čeleď Coryneformis, vlastnosti jsou uvedeny v příkladu 76, mikroorganismus byl označen číslem NCIMB 40675. Sbírka je jednou ze sbírek, uznávaných podle.Budapešťské úmluvy.

Mikroorganismus NCIMV 40675 a jeho případné mutanty rovněž tvoří součást podstaty vynálezu.

Podle vynálezu je také možno připravit genetický materiál kmene NCIMB' 40675' pro účely biologické přeměny sordarinu na sordaricin,' ' ' - ' -¹'

Způsoby získávání mutant kmene NCIMB 40675 a genetického materiálu tohoto kmene budou obdobné jako v případe svrchu uvedeného kmene IMI 362184. _t

Kmen NCIMB 40675 se obvykle pěstuje při teplotě v rozmezí 20 až 40, s výhodou 20 až 35 a zvláště přibližně 23 °C, žádoucí je provzdušnění a. míchání živného prostředí. Prostředí je možno na začátku naočkovat malým množstvím mycelia a/nebo spor. Získaný vegetativní očkovací materiál je možno přenést do fermentačníého prostředí nebo ještě dále množit v jednom nebo několika stupních, například 1 až 3 dny a pak teprve jej přenést do hlavního fermentačního prostředí. Hlavní fermentační prostředí bude také obsahovat sordarin a jeho pH se bude pohybovat v rozmezí 3,5 až 9,5, s výhodou bude přibližně 7,5. K udržení pH v požadovaném rozmezí může být zapotřebí přidat bázi neboi kyseliřiúŮ Vh'o'dnou'^_baz'í’-j-e· napřiklad hydroxid alkalického kovu, jako vodný roztok hydroxidu sodného nebo hydroxidu draselného. Vhodnými kyselinami mohou být anorganické kyseliny, například kyselina chlorovodíková, sírová nebo fosforečná. Fermentaci je možno provádět 4 až 8 dnů, s výhodou přibližně 6 dnů. K zábraně příliš velkého pěnění je možno v příslušných intervalech přidávat protipěnivé činidlo. Do fermentaČního prostředí je možno podle potřeby přidávat také zdroje uhlíku a/nebo dusíku.

Je zřejmé, že biologickou přeměnu je možno uskutečnit řadou různých postupů. Je například možno buněčný materiál vypěstovat a oddělit před jeho přidáním k roztoku sordarinu například v pufru, odděleném živném prostředí nebo ve vodě. Je také možno izolovat příslušné enzymy nebo enzymy klonovat a dosáhnout jejich zvýšené exprese.

Sordaricin je možno oddělit a izolovat z'fermentacního prostředí svrchu popsanými obecnými postupy. V případě, že je zapotřebí snížit pH pod hodnotu 6, je možno přidat kyselinu, například kyselinu orthofosforečnou.

je zřejmé, že fermentace a biologická přeměna pro pří právu sordaricinu, tak jak byla svrchu popsána, tvoří rovněž součást podstaty vynálezu.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají v žádném směru sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

- ·52

Příklady provedeni vynálezu

Příprava 1

Příprava sordarinu

Kultura Sordaria araneosa NRRL 3196 (ATCC 36386) se pěstuje na agarovém prostředí až do zralosti. Vyříznuté části agaru s průměrem 6 mm, obsahující mikroorganismus, se přenesou do sterilní vody nebo do živného prostředí s bujónem z mozku a srdce (Oxoid) s 10% glycerolem a pak se skladují při teplotě místnosti nebo -140 °C. Suspenze ze dvou takových částí agaru se pak užije k naočkování Erlenmeyerovy baňky s objemem 250 ml, obsahující 50 ml prostředí FS.

Λ

Prostředí FS g/1

pepton (Oxoid L34)	10
sladový extrakt' (Oxoid L39)	21
glycerol (Glycerine CP)	40	T
Jun.lon 110 (Honeywell a Stein)	1	v
destilovaná voda

Kultura se inkubuje 5 dnů při teplotě 25 °C na rotační třepačce při 250 otáčkách za minutu s výkyvem 50 mm. Podíly 2 ml tohoto prostředí se pak užijí k naočkování další Erlenmeyerovy baňky s objemem 250 ml, opět obsahující 50 ml prostředí FS a prostředí se inkubuje stejně jako svrchu. 80 ml takto získaného očkovacího materiálu se užije k naočkování každého ze dvou fermentorů s objemem 7 litrů a s obsahem 5 litrů prostředí FS. Fermentace se nechá probíhat při teplotě 25 °C. Kultura se míchá při 400 ot/min za provzdušnění 2 litry/min. Po třech dnech se 10 litrů prostředí užije k naočkováni fermentorů s objemem 780 litrů s obsahem 500 litrů prostředí SM55VAR.

SM55VAR g/1

Glucidex 32D (Roquette Frere) 74

Pepton (Oxoid L37) 10

Proflo (Traders Protein) 30 řepná melasa 15

MgS0₄.7H₂0 (BDH) 5 uhličitan vápenatý (BDH) 5

FeS0₄.7H₂0 (Sigma) 2 .

ZnS0₄.7H₂0 _(BDH) 0,04

L-tryptofan (Sigma) 2 •PPG2000 (K a K Greef) . . , ' , 0,5

Silicone 1520 (Dow Corning) 0,04 destilovaná voda

Fermentace se nechá probíhat při teplotě 25 °C'. Prostředí se míchá, rychlostí 300 až 350 ot/min za proyzduš- . není 200 litrů za minutu.. Do kultury se přivádí 70% roztok prostředku Meritose (Tunnel Refineries) k udržení positivní residuální koncentrace glukosy. Destilovaná voda se přidává k udržení objemu kultury na hodnotě 500 litrů. Protipěnivé činidlo PPG2000 se přidává ke snížení pěnění. Extrakty Živného prostředí ve vodném acetonitrilu s 1 % kyseliny trifluoroctové se analyzují na přítomnost sordarinu pomocí HPLC v reverzní fázi. Kultura se pěstuje 11 dnů, po této době je možno prokázat obsah sordarinu 0,6 g/1. FermentaČní prostředí se upraví 0,1 M hydroxidem sodným a po uložení přes noc při teplotě místnosti se zfiltruje přes Dicalite na rotačním filtru za odsávání (1% Dicalite se přidá jako pomocný prostředek pro filtraci). Pak-se filtrát upraví na pH 6 až 7 přidáním koncentrované kyseliny sírové a roztok se nanese na pryskyřici XAD16 (10 objemů filtrátu na jeden objem pryskyřice). Pryskyřice se promyje vodou a směsí acetonu a vody v poměru 1:3a pak se vymývá sordarin při použití dvou objemů sloupce směsi acetonu a vody v poměru 3:1. Rychlost průtoku je 1 až 2 objemy sloupce za hodinu. Eluát se odpaří na 8,5 litrů a koncentrát se upraví na pH 3 přidáním kyseliny fosforečné a nechá se stát přes noc při teplotě místnosti k usazení vysráženého sordarinu. Supernatant se slije a pak odstředí, supernatant po odstředění se odloží. Usazenina a sraženina se rozpustí v 75% vodném acetonitrilu, získá se 3,9 litrů tmavěhnědého roztoku. K tomuto roztoku se přidá 1 litr 0,2 M dihydrogenfosforečnanu amonného za míchání a roztok se upraví přidáním kyseliny fosforečné na pH 4,0', konečný objem roztoku je 5 litrů, přibližné složení je 60% acetonitril s 0,1 M dihydrogenfosforečnanu amonného. 5 litrů surového roztoku sordarinu se pak podrobí preparativní HPLC po 10 podílech s objemem 450 až 550 ml na sloupci s rozměrem 15 x 25 cm , 7 mm Kromasil 08mobilní fáze 50% acetonitril a 0,1 M dihydrogenfosforečnan amonný o při 4 (5o litrů acetonitrilu se doplní, na 100 litrů vodou, obsahující 575 g dihydrogenfosforečnanu amonného a .40 ml kyseliny fosforečné), rychlost průtoků 600 ml/min, detekce v UV světle při 210 nm.

Shromáždí se frakce s dobou retence 15,4 až 19,2 minut. Frakce z 10 podílů (celkem 23 litrů) se zředí vodou na 50 litrů a roztok se čerpá zpět přes sloupec Krmasilu rychlostí 28 litrů za hodinu. Sloupec se promyje 25 litry vody a pak se vymývá 10 litry 90% acetonitrilu. Eluát se odpaří na 1300 ml a roztok se lyofilizuje,'čímž se získá 105,6 g špiněvě bílého práškového materiálu. Hmotové spektrum a NMR produktu jsou v souladu s analýzou vzorku sordarinu.

Příprava 2

Příprava draselné soli sordarinu

Sordaria araneosa NRRL 3196 (ATCC 363861-)-:-56 udržuje v ži-vném-prostředí - s- bujónem -z--mozku .a .srdce.. (.Oxoid.). ,.s..,10%_........

glycerolem při teplotě -140 °C stejně jako v přípravě 1. Suspenze s obsahem dvou vyříznutých úseků agaru se užije k naočkování Erlenmeyerovy baňfejUs objemem 250 ml a obsahem 50 ml prostředí FS. Kultura se inkubuje 5 dnů při teplotě 25 °C na rotační třepačce při 250 ot/min a výkyvem '50 mi. Podíly 2 ml očkovacího materiálu se užijí k naočkování další Erlenmeyerovy baňky s.objemem 250 ml a obsahem 50 ml prostředí FS a živné pi-ostředí se inkubuje stejně' jako svrchu.

ml takto získaného očkovacího materiálu se užije k naočkování každého ze dvou fermentovů s objemem 7 litrů a obsahem 5 litrů prostředí FS. Fermentace se provádí při teplotě 25 °C'. Kultura se míchá rychlostí 40C ot/min při provzdušnění 2 1/min. Po třech dnech·, se 10 litrů této kultury užije k naočkování fermentoru s objemem 780 litrů a- obsahem 500 litrů živného prostředí SD1.

mw

SD1 g/1

Meritose (Tunnel refineries) laktosa

Glucidex 32D (Roquette Frere) Arkasoy (The British Arkády Co.) CSL

FeCl₃.6H₂0 nh₄h₂po₄

ZnS0₄.7H₂0 (BDH)

PPG2000destilovaná voda

0,05

0,1

0,5

Fermentace se nechá probíhat při teplotě 25 °C.

Živné prostředí se míchá při 350 ot/min a provzdušnění

200 litrů za minutu. Destilovaná voda se přidává k udržení objemu 50C· litrů. Extrakty živného prostředí se zkouší na přítomnost sordarinu pomocí HPLC v reverzní fázi. Kultura se pěstuje 6 dnů, po této době je možno prokázat obsah sordarinu 1,3 g/1. Vzorek s objemem 50 litrů se upraví na O,1M hydroxidu sodného a uloží přes noc při teplotě 4 °C. Buněčný materiál se oddělí filtrací za odsávání přes vrstvu prostředku Dicalite, další 2 % Dicalitu se přidají k živnému prostředí jako pomocný prostředek pro filtraci. Filtrát se upraví na pH přibližně 6 koncentrovanou kyselinou sírovou. Extrakt živného prostředí se přečerpává přes vrstvu pryskyřice Ambercgrom CG161 rychlostí 320 ml/min, 0,64 objemu sloupce za minutu. Frakce se sledují pomocí HPLC. Po 45 minutách, to znamená po průchodu objemu 14,4 litrů se objeví sordarin a čerpadlo se odpojí. Adsorpční prostředek se pro-_:, myje 2 litry vody a pak 2 litry acetonu s koncentrací 25 % objemových ve vodě. K eluci sordarinu se užije 1,5 litru acetonu s koncentrací. 75 % objemových ve vodě. Eluát se odpaří na objem přibližně.200 ml.na rotačním odpařovači při teplotě 40 °C. Přidá se 200 ml butan-l-olu a směs se odpařuje až dozískání viskosního oleje, který obsahuje malé množství butan-1-olu. Tento olejovitý materiál se extrahuje 2 x 500 ml horkého methanolu. Extrakty se spojí, zfiltrují přes papír Whatman č. 1 a pak odpaří při teplotě 40 až 45 °C na viskosní olej. Tento olej se extrahuje 2 x 500 ml horkého acetonu. Acetonové extrakty se spojí, zfiltrují a odpaří na viskosní olej. K oleji se přidá při teplotě 45 °C celkem 350 ml propan-2-olu, čímž vznikne čirý hnědý roztok. Roztok 2-ethylhexanoátu draselného (39% roztok v propan-2-plu, % hmotnostní, 54 g) se naváží do konické lahve s objemem 500 ml. Pak se do této lahve vlije roztok sordarinu v propan-2-olu, obsah se promísí a nechá se 4 hodiny stát při teplotě místnosti. Pak se roztok naočkuje přibližně 5 mg krystalků draselné soli sordarinu a uzavřená nádoba se uloží na 3 dny při teplotě 4 C. Špinavě bílá pevná látka, která se vysráží, se odfiltruje ve vakuu (nálevka se sintrem Č, 4), filtrační koláč se promyje přibližně 20 až 30 ml propan-2-olu, Pevný podíl se přene s e-do-kry s t-a-l-i-z aě n-í- nádobky-a-suší-.16.. hodin... .ve . vakuu... nad oxidem fosforečným, čímž se získá 10,5 g produktu.

Příprava 3

Příprava draselné soli sordarinu

500 litrů živného prostředí se připraví stejným způsobem jako v přípravě 1. Roztok se upraví na obsah 0,1 M hydroxidu sodného a po 4 dnech stání při teplotě 0 °C se zfiltruje .přes Dicalite na rotačním filtru za odsávání. 1 % Dicalitu se přidá k živnému prostředí jako pomocný prostředek pro.filtraci. Pak se pH filtrátu upraví z' 9,6 až 7,5 přidáním končen trované kyseliny sírové. 10 litrů filtrátu se upraví až na pH 6 přidáním kyseliny fosforečné a nanese se na 200 ml pryskyřice XAD-16 ve vodě, rychlost průtoku je 1 až 1,5 objemů vrstvy za hodinu. Pak se pryskyřice promyje jedním objemem vody a 2,5 objemy 25% vodného ísopropanolu, k eluci se užije čistý isopropanol. Nejprve se- nechá projít. 50 ml isopro.panolu a pak se odebírají frakce po 100 ml. Frakce 2.až 6, které jsou bohaté na sordarin, se spojí a odpaří na polovinu svého objemu. Přidá se isopropanol k doplnění objemu na 500 ml a pak se směs odpaří na polovinu svého objemu opakovaně k odstranění zbytku vody azeotropní destilací. Po třetím odpaření na polovinu objemu se směs zfiltruje a filtr se promyje isopropanolem. Filtrát a promývací kapalina se spojí a přidá se roztok 8 g 2-ethylhexanoátu draselného ve 100 ml isopropanolu. Směs se naočkuje krystalky draselné soli sordarinu a nechá se stát několik dnů při teplotě 4 °C, v průběhu této doby dojde' k pomalé krystalizaci. Krystalky se odfiltrují při použití simtru č. 3, promyjí se malým množstvím ledově chladného ísopropanolu a suší ve vakuu, čímž se získá 4,85 g produktu ve formě světle hnědého prášku.

Příprava 4

Příprava 4'-demethylsordarinu

i) Kmen IMI 352184 se uloží v bujónu ze srdce a mozku (Oxoid) s 10 % glycerolu při teplotě -140 °C, jak je popsáno v přípravě 1. Suspenze s obsahem dvou vyříznutých úseků agaru s obsahem kultury mikroorganismu se užije k naočkování Erlenmyerovy baňky s objemem 250 ml, obsahující 50 ml prostředí FS. Kultura se inkubuje 5 dnů při teplotě 25 °C na rotační třepačce s rychlostí protřepávání 250 ot/min při výkyvu 50 mm. Podíly 2 ml očkovacího materiálu se užijí k naočkování další banky s objemem 250 ml a obsahem 50 ml prostředí FS a materiál se inkubuje stejně jako svrchu. Pak se 80 ml výsledného očkovacího materiálu užije k naočkování každého ze dvou fermentorů s objemem 7 litrů a obsahem 5 litru prostředí FS. Fermentace se nechá probíhat při teplotě 25 °C. Kultura se míchá při 400 ot/min a při provzdušnění 2 1/min. Pb'třech dnech fermentace se 10 litrů kultury použije k naočkování fermentorů s objemem 780 litrů a obsahem 500 litrů prostředí SM55VAR, které bylo popsáno v přípravě*·

1. Fermentace se opět nechá probíhat při teplotě 25 °C. Prostředí se míchá při 350 ot/min a za provzdušnění 500 1/min.

Do kultury se přidává 70% roztok prostředku Meritose (Tunnel Refineries) k udržení positivní koncentrace glukosy. Destilovaná voda se přidává k udržení objemu 500 litrů. Extrakty kultury se zkouší na přítomnost 4-demethylsordarinu pomocí HPLC v reverzní fázi. Po 10 dnech pěstování obsahuje prostředí 4 -demethylsordarin.v množství 0,8 g/1. Prostředí se upraví na 0,1 M hydroxidu sodného a po jedné hodině stání při teplotě místnosti sé zfiltruje přes Dicalite na rotačním filtru za odsávání, 1 % Dicalitu se přidá jako pomocný prostředek pro filtraci. Filtrát se upraví na pH 4,5 koncentrovanou kyselinou sírovou a roztok se nanese na pryskyřici XAD16 (20 g produktu/1 pryskyřice. Adsorpční prostředek se promyje 0,1% kyselinou fosforečnou '{TO objemů ' sloup ce)'· a'směsí^-acefonltri- '' lu a vody v poměru 1 : 4 ¢6 objemů sloupce), k eluci produktu se užije směs acetonitrilu a vody 1 : 1 (2 objemy sloupce). Rychlost průtoku v průběhu celého postupu je 1 až 2 objemy sloupce za hodinu. Eluát se odpaří do sucha za přidání butan-1-olu a pevný podíl se extrahuje nejprve 12 litry methanolu a pak 10 litry acetonu při teplotě 60 °C. Nerozpustný materiál se vždy odfiltruje přes skleněný sintr č. 3 a extrakty se odpaří do sucha. Pevný podíl se nechá krystalizovat ze směsi acetonitrilu a vody v poměru 3:7a pak se nechá překrystalovat z téhož rozpouštědla a pak se suší do stálé hmotnosti nad oxidem fosforečným, čímž se získá 244,0 g produktu, NMR prokazuje, shoduvs. autentickým-vzorkem 4 -demthylsordarinu.

ii) Opakuje se postup podle odstavce i), po úpravě materiálu na koncentraci 0,1 M hydroxidu sodného se směspodrobí ••-i'' r” * ultraf iltraci, pres membránu ETNA 10A (oddělí se materiál, od molekulové hmotnosti 10; 000) . P.o diafiltraci. proti vodě se získá čirý roztok.. Po úpravě pH na 5,2 při použití koncentrované kyseliny sírové se permeát nanese na sloupec pryskyřice XAD16 rychlostí dva objemy sloupce za hodinu, výsledné zatížení je 32 g 4'-demethylsordarinu na litr pryskyřice. Sloupec se promývá rychlostí dva objemy sloupce za hodinu nejprve kyselinou fosforečnou s koncentrací 0,1 % objemové a pak deseti objemy sloupce při použití směsi acetonitrilu a vody s koncentrací acetonitrilu 20 % objemových. K eluci se užije 65% acetonitril ve vodě při rychlosti dva objemy sloupce za hodinu. První podíl 0,75 objemů sloupce se odloží. V následujících 1,6 objemech sloupce se v eluátu získá 85 % 4 -demethylsordarinu, naneseného do sloupce. Tento eluát se 5 minut míchá s DE52-celulosou v koncentraci 2 % hmotnostní, celulósa se odfiltruje. Podíl takto zpracovaného eluátu se pak zahustí na 62 % původního objemu (43 % acetonitrilu) při použití rotačního odpařovače. Koncentrovaný eluát se udržuje 15 hodin na teplotě 4 °C a vykrystalizovaný materiál se odfiltruje přes skleněný sintr. Krystalky se promyjí čtyřmi objemy vultračního koláče, k promytí se užije směs acetonitrilu a vody s 30 % objemovými acetonitrilu a produkt se suší při 30 °C ve vakuu. Získá se 1,94 g výsledného produktu ve formě světle šedé pevné látky.

Příprava 5

Sledování mikroorganismů, schopných demethylovar sordarin v poloze 4'

Mikroorganismy, schopné demethylovat sordarin v poloze . 4* je možno identifikovat tak, že se pěstují při teplotě 28°C v případě bakterií nebo 25 °C v případě hub v 10 ml prostředí SB1 v případě bakterií nebo FBI v případě hub v 50 ml konických lahvích, protřepávanýchrychlostí 250 ot/min. Po dvou dnech se přidá sordarin do koncentrace 0,5 mg/ml (ze zásob ' . .. ... >! ního roztoku 200 mg/ml v 80% ethanolu) a lahve se pak inkubují ještě tři dny. Pak se vzorek kultury s objemem 500 mikrolitrů smísí s Eppendorfově zkumavce s 500 mikrolitry 80% acetonitrilu s 2 % kyseliny trifluoroctové, extrakce probíhá 30 minut při teplotě místnosti. Supernatant, získaný odstředěním vzorku v mikroodstředivce se zkouší pomocí isokratické HPLC na přítomnost.4*-demethylsordarin. Tato látka se vymývá po 3,35 minutách při použití 35%'acetonitrilu ve vodě při rychlosti průtoku 2 ml/min a při použití sloupce Spherisorb Cg (5 mikrometrů, 15 cm x 4,6 mm). Tímto způsobem byly následující mikroorganismy identifikovány jako organismy, schopné demethylovat sordarin:

Streptomyces capredus	ATCC 31963
Streptomyces avermitilis	ATCC 31272
Streptomyces arměntošus	......NRRL-3176--
Streptomyces antibtoticus	ATCC 31771
Streptomyces rímosus	ATCC 23955
Stieptomcyes platensis	ATCC 29778
Streptomyces mashuensis	ATCC 23934
Streptomyces euiythermus	ATCC· 14975
Nocardia orientaiis	ATCC 43491
Cunninghameila ecninufata var eíegans	ATCC 36112

Prostředí SB1	g/i
Arkasoy	25
extrakt z kvasnic	. 5
kh2po4 .	5
glukosa	20
destilovaná voda
pH 7
Prostředí P31	g/i

sojový olej 30 Arkasoy LO extrakt z kvasnic 5 K₂HP0₄ 5 glukosa 20 destilovaná voda pH 5,5

Příprava 6

Příprava 4^>-demethylsordarinu biologickou transformací sordarinu

0,3 ml suspenze spor Streptomyces capreolus ATCC 31963 po skladování při teplotě -20 °C v 15% glycerolu se užije k naočkování 30 ml prostředí SB1 v Erlenmeyerově baňce s objemem 250 ml, čímž se získá očkovací kultura, která .se inkubuje při teplotě 28 °C a 250 ot/min na rotační třepačce. Po 4 dnech se 0,5 ml tohoto materiálu užije k naočkování 35 ml prostředí SB1 v baňce s objemem 250 ml a materiál se opět pěstuje při teplotě 28 °C a 250 ot/min celkem 48 hodin. Pak se kultura rozdělí po podílech 10 ml do Erlenmeyerových baněk s 50 ml živného prostředí a 5 mg sordarinu (ze zásobního roztoku 200 mg/ml v ethanolu). Směs se inkubuje ještě 3 dny, pak se přidá ke 14 ml prostředí 14 ml 80% acetonitrilu ve vodě a směs se nechá stát při teplotě místnosti za-občasného promíchání. Po 30 minutách se buněčný materiál, odstředí, acetonitril se odpaří a pH vodného podílu se upraví na 2,5 kyselinou orthofosforečnou. Roztok se nechá projít sloupcem pryskyřice Amberlit XAD-16 (objem vrstvy 5 ml). Pryskyřice se postupně promyje 10 ml vody, 20 ml 10% acetonitrilu ve vodě, 10 ml 30% acetonitrilu ve vodě, 20 ml 50% acetonitrilu ve vodě a 10 ml 90% acetonitrilu ve vodě, ve · všech případech jde o. % objemová. Frakce se.sledují pomocí HPLC. 4*-demethylsordarin se nachází v eluátu s použitím 50% acetonitrilu ve vodě. Tato frakce se odpaří do sucha ve vakuu při teplotě místnosti a odparek se znovu rozpustí v 15 ml 35% acetonitrilu ve vodě. 4 -demethylsordarin se pak čistí preparativní HPLC za následujících podmínek:

sloupec rychlost průtoku detekce mobilní fáze

Spherisorb, 5 mikrometrů C_c 25 x 2,5 cm O ml/min

UV při 210 nm

350 ml acetonitrilu se doplní na 1000 ml 0,05 M dihydrogenfosforečnanem amonným ve vodě a pH se upraví na 2,5 kyselinou orthofosforečnou

4,5 ml.

vstřiknutý objem

..........Za-těchto podmínek..:do jde. k.eluci 4_'-demethylsordarinu po LO minutách. Frakce ze čtyř vzorků po analýze HPLC se spojí, zředí se vodou v poměru 1:1a pak se materiál nechá znovu projít oxidem křemičitým po promytí acetonitrilem a znovu uvedeným do rovnovážného stavu ve vodě. Adsorpční prostředek se promyje 200 ml vody, k eluci se užije 200 ml 95% acetonítrí lu ve vodě. Tento eluát se odpaří k odstranění organického rozpouštědla a vodný roztok se lyofilizuje, Čímž se získá 1,5 mg 4'-demethylsordarinu ve formě bílého prášku.

δ (’H,CDCI₃); 9.74(s,1H); 6.08(brd,3,1H); 4.70(d_r1.5,1H); 4.08(dd,4.5,3.5,1H); J3.38(dd,4.5,1.5,1 H); 3.75(dq,8.5,6_r1H); 3.88(dd,3.5,3.5,1H); 2.6S(m,1H); 2.34(m,1H); 1.32(d,6,3H); 1.23(m,1H); 1.04(d,7,3H); 0.99(d,7,3H); 0.81(d,7,3H)

4.16(d.9.5,1H);

3.62(d,9.5,1H);

l.'30(d,12.5_r1H);

Příprava· 7

Příprava sordaricinu ‘ Postupuje se stejně jako v přípravě 1, včetně preparativní HPLC. Frakce, která se vymývá v rozmezí 21,4 a 25,0 minut se oddělí a tyto frakce se spojí z 10 vstřikovaných vzorků. Tímto způsobem se získá-celkem 22 litrů materiálu, který sé zředí stejným objemem vody a roztok se nechá znovu projít sloupcem s prostředkem Kromasil rychlostí 28 1/h. Sloupec se promyje 20 litry vody a pak se vymývá 4,5 litry 90% acetonitrilu. Tento eluát se spojí se 4,5 litry odpovídající frakce z jiné fermentace. Pak se spojené eluáty odpařují na rotačním odpařovači až do začátku krystalizace, k níž dojde při snížení objemu na přibližně 1,5 litrů. Pak se roztok zahřívá na vodní lázni na 60 °C s přidáním malého množství acetonitrilu k získání čirého roztoku. Roztok se zchladí a uloží při teplotě, 4 °C. Krystalky se odfiltrují na sintru Č. 3a suší ve vakuu, Čímž se získá hnědá pevná látka, která se nechá překrystalovat ze- směsi acetonu a vody v poměru 40 : 60, produkt se zfiltruje, promyje 25% acetonitrilem a suší ve vakuu, čímž se získá 10,7 g produktu. Hmotové spektrum a NMR jsou v souladu s hodnotami pro autentický vzorek sordaricinu.

Příprava 8

Biologická přeměna sordarinu na sordaricin

0,2 ml suspenze NCIMB 40675 se užije k naočkování Erlenmeyerovy baňky s objemem 250 ml, obsahující 50 ml živného prostředí (Oxoid), doplněného 0,2 % extraktu z kvasnic. Kultura se inkubuje 29 hodin při teplotě 28 °C na rotační . třepačce při 250 ot/min a výkyvu 50 mm. Podíly očkovacího materiálu po 1 ml se užijí k naočkování další baňky s obje- . mem- 250 ml a obsahem 50 ml dvojnásobné koncentrace živného prostředí (Oxoid), doplněného 0,1 % extraktu z kvasnic. Kultury se inkubují 24 hodin, 62 kultur se pak spojí, čímž se získá 2,65 litrů materiálu, který se přidá ke 30 litrům filtrátu fermentačního prostředí s obsahem sordarinu, pH se upraví na 7,5, je možno užít filtrát z přípravy 1. Reakce se provádí ve fermentoru s objemem 70 litrů při teplotě 30 °C, míchání 200 ot/min, provzdušnění 0,5 objemu za minutu. Současně se pH udržuje na 7,5 přidáváním 1 N kyseliny chlorovodíkové.

Po šesti dnech se přibližně 16 g sordarinu přemění na sordaricín. Směs- se zfiltruje přes Dicalit za odsávání a ádsořpční' materiál se promyje vodou, čímž se získá 31,5 litrů filtrátu o pH 8,2. Po úpravě pH na 6,0 kyselinou fosforečnou se materiál nechá projít vrstvou pryskyřice Amberchrom CG161 rychlostí 290 ml/min. Užije se vrstva 25 x 5 cm. Tato vrstva se pak promyje 2 litry 0,1% kyseliny fosforečné a 4 litry 25% acětonitrilu, k eluci se užijí 2 litry 60% methylkyanidu. Eluát se odpaří na rotačním odpařovači až do začátku krystalizace, zahuštěný zbytek se zahřívá na 60 °C na vodní lázni s přidáváním malého~'množství- acetonitrl-lu- k-dos-ažení- ě-i-rého roz-· toku. Tento roztok se zchladí a uloží přes noc při teplotě 4 °C. Pak se vytvořené krystalky odfiltrují, promyjí se 25% acetonitrilem a suší ve vakuu, čímž se získá hnědý prášek, který se nechá překrystalovat z 1 litru směsi acetonitrilu a vody 40 : 60, pak se krystalky odfiltrují, promyjí a suší jako svrchu, čímž se získá -6,15 g sordarícinu ve formě světle hnědých jehlickovitých krystalků.

Příprava 9

Biologická transformace sordarinu na sordaricin

Materiál, odebraný bakteriologickou kličkou z agarové kultury NCIMB 40675 se užije k naočkování Erlnemeyerovy baňky o objemu 250 ml s obsahem 50 ml živného prostředí (Oxoid), doplněného 0,2 % extraktu z kvasnic. Kultura se inkubuje 26 hodin při teplotě 25 °C. na rotačním odpařovaěi při 250 ot/min a výkyvem 50 mm. Vždy 1 ml vyvinuté, kultury se užije- k naočkování dalších baněk s objemem 250 ml svrchu uvedeným způsobem. Do baněk se přidá Čistý sordarin v 80% ethanolu do konečné koncentrace 1,25 mg/ml. Baňky se inkubují stejně jako svrchu 8 dnů a pak se jejich obsah spojí, čímž se získá 365 ml živného prostředí s obsahem sordarícinu. Směs po biologické přeměně se odstředí k odstranění buněk NCIMB 40675 a 350 ml supernatantu se odloží. K supernatantu se přidá 5 ml prostředku Whatman Partisil P40 ODS-3, předem zvlhčeného acetonitrilem a pH se upraví kyselinou fosforečnou na 4,0. Pak se Partisil odfiltruje na Búchnerově nálevce, k eluci se užije 100 ml acetonitrilu a pak 100 ml 75% acetonitrilu. Eluáty se spojí, odpaří na vodný zbytek s objemem 10 až 15 ml a tento zbytek se zahřívá na vodní lázni s teplotou 60 °C a současně se přidává acetonitril až do vzniků Čirého roztoku, pak se přidává voda až do zakalení roztoku. Pak se směs zchladí a uloží na několik dnů při teplotě 4 °C. Vzniklé krystalky se odfiltrují při použití sintru č. 3, promyjí se vodou a-suší ve vakuu nad oxidem fosforečným, čímž se získá 92 mg sordaricinu ve formě bílých jehličkovítých krystalků.

Příprava 10

Příprava sordaricinu

Zmrazená ampule kmene IMI 362947 se užije k naočkování 50 ml prostředí FS v Erlenmeyerově baňce s objemem 250 ml. Naočkované prostředí se inkubuje 6 dnů při teplotě 25 °C na rotační třepačce při 250 ot/min a při výkyvu 50 mm. Pak se užijí podíly po 1 ml k naočkování čtyř baněk s obsahem 250 ml, obsahujících 50 ml produkčního prostředí SM55/A.

SM55/A g/1

Maltodextrin MD30E (Roquette Frere) 120 řepná melasa 15 pepton (Oxoid L37) 10

Proflo (Traders Protein) 30

L-tryptofan (Sigma) 2

ZnSo₄.7H₂0 (BDH) 0,04

FeS0₄.7H₂0 (Sigma) 2

CaC0₃ (BDH) 5

NgS0₄.7H₂0 (BDH) 5

Směs se doplní destilovanou vodou a sterilizuje 120 minut v autoklávu při teplotě 121 °C.

Kultura se inkubuje svrchu uvedeným způsobem celkem dnů. Pak se obsah baněk spojí a ke 40 ml obsahu se přidají 4 ml IN hydroxidu sodného a směs se míchá 45 minut při

- 67 teplotě místnosti. Pak se buněčný materiál odstraní odstředěn-ím 20 -minut -při - 3000 o-t/min-.-,- superna-tant- se-oddělí- a jeho pH se upraví na hodnotu 3 přidáním 1 N kyseliny chlorovodíkové. Pak se roztok nechá projít přes sloupec Bond Elut (1 g, C18) a adsorpční prostředek se promyje 20 ml vody a pak se k eluci užije 15 ml 90% acetonitrilu ve vodě. Získaný eluát se odpaří do sucha při teplotě místnosti a odparek se rozpustí v 9 ml 50% acetonitrilu ve vodě (% objemová). Sordaricin se pak čistí pomocí HPLC za následujících podmínek:

sloupec rychlost,p růtoku mobilní, fáze ,

Spherisorb, 5 mikrometrů 0DS-2 (25 x 2,lom)

25' ml/min > 550 ml acetonitrilu se doplní na 1000 ml vodou, načež se přidá 1 ml kyseliny trifluoroctové na 1 litr mobilní fáze detekce 210 nm vstřikovaný objem 4,5 ml.

Za těchto podmínek se sardaricin .vymývá po době retence 6,0 minut. Frakce, které sordaricin obsahují' se spojí, acetonitril se odstraní odpařením na rotačním odpařovači při teplotě místnosti a vodný roztok se pak lyofilizuje, čímž se získá 8,9 mg produktu ve formě bílého prásku.

Meziprodukt 1

Příprava dif eny Ime thyles teru kyseliny /IR-(lalfa, 3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(6deoxy-beta-D-altropyranosyloxy)-methyl/-4-formyl4,4a, 5,6,7,7a, 8,Sa-oktahydro-7-methy1-3-(1-me thylethyl)-1,4-methan-s-indecen-3a-(lH)-karboxylové

Kx roztoku 10,0 g 4-demethylsordarinu ve 200,0 ml methanolu bylo přidáno po kapkách při teplotě místnosti 90,0 ml 0,35 M roztoku difenyldiazomethanu v dichlormethanu a vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 6,0 hodin·

Po odpaření rozpouštědla do sucha byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylácetát (3 : 1), jako elučního Činidla«

Bylo získáno 12,60 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě slabě žlutě zbarvené pěny.

¹H-NMR (CDC1₃):

delta 9,73 (a.; IH; CHO); 6,98 (s.; 1H; CHPhp; 6.,05 (d.d.; ih; h-2; ,j= 1,50 a 3,60 Hz); 4,65 (d.jMHjH1'; J = 1,50 Hz); 4,09; 3,76 (2d; 2Η*, 8a-CH₂; J = 9,0 Hz ); 4,01 (m.; ih; Η-a'); 3,84 (m·;. 1H‘,. H-3'); 3,75 (m.; ih;h-5'); 3,69 (m.; ih; h-4'); 2,73 tt.; ih; h1; j = 4,20 Hz ).

Meziprodukt 2

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3 abe ta, 4be ta, 4a be ta, 7be ta, 7aalfa, 8abe ta) /-8a-/( 6-de ozy3,4-O-isopropyliden-be te-É-ártropyranóšyioxy )-méťhyI74-formy1-4, 4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3-(1me thyle thy 1) - (1H) -1,4-me than-s-inda c en-3a- (1H) -karboxylové kyseliny

Ku roztoku 650,0 mg Meziproduktu 1,(připraveného v předcházejícím stupni), ve 15,0 ml směsi dimethoxypropan-aceton (1 : 2), bylo přidáno 10,0 mg kyseliny p-toluensulfonové.Potá, co byl vzniklý roztok míchán při teplotě místnosti po dobu 1,5 hodiny, byl přidán 1 ,0,g. uhličitanu draselného a reakční směs byla míchána po dobu dalších 30,0 minut.

Po odpařeni rozpouštědla do sucha byla surová směs vytřepána· mezi 50,0 ml ethylacetátu a 25,0 ml vody a vodná fáze byla poté vytřepána 2 .x 50,0 ml ethyl acetátu. =j organická fáze byla promyta solankou, vysušen^síranem hořečnatým a poté byla odpařena do sucha.

Zbytek byl zpracován urychlenou chromatografii na silikagelu za použití směsi ethylácetát-hexan(l : 3)

Bylo získáno 600,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

^-NMRÍCDCip:

delta 9,73 (s.; 1HJ CHO); 7,45 - 7,24 (m.; WH; 2Ph);

6,98 (a.; 1H* CHPh₂); 6,06 (d.d.; 1H; H-2; J = 1,50 a 3,30 Hz); 4,57 (d.· 1Ηζ H-1*; J = 3,0 Hz); 4,30 ( a.d..; íh;. h-3'; j = 3,eo a 5,70 Hz); 4,07 (a.; íh; 8aCH₂; J * 9,0 Hz ); 3,95 - 3,93 ( uu*_ř 1H; H-2*>; 3,85 ( d.d.; íh; h-4'; j = 5,70 a 9,30 h_z ); 3,75 (d.; íh; 8aCH₂J J = 9,0 Hz ); 3,44 (d.k.;, ÍH; H-5'í Jd - 9,30 Hz; Jk = 6,30 Hz); 2,73 (tj 1H‘_f H-1; J = 3,60 Hz).

Meziprodukt 3

Příprava difenylmethylesterů kyseliny /1H-(1alfa,3 abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8aalfa)/-Sa-/(6-deoxy3,4-0- (2-pe ntyliden) -be ta-D-a l tropyranosyloxy) -me thyl4,48,5,6,7,78,8,8a-oktahydro-7-me thy1-3-(1-me thyle thyl) - 1,4-methaa-s-indacen-3a-(1H)-karbonylové kyseliny

Ku suspenzi 500,0 mg M_ezip_ročluktu 1, jehož příprava je popsána výše, a 5,0 mg p-toluensulfonové kyseliny v 5,0 ml dichlormethanu, byly přidány 2,0 ml 2,

2-dimethoxypentanu a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 2,0 hodin. Poté bylo přidáno 150,0 mg uhličitanu draselného a směs byla míchána dalších 30,0 minut.

Po odpaření rozpouštědla do sucha byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu,za použití směsi ethylacetát-hexan( 15 : 85) a (30 : 70), jako elučního činidla.

Syio získáno 474,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny. * ’η-ΜΜΒ (CDCIj):

delta 9,73 (s.J 1HJ CHO); 7,45 - 7,24 (m.J 10H;2Ph);

6,98 (s.; 1HJ CHPh₂); 6,0$ (d.d.; ih;h-2; j = 1,50 a

3,30 Hz ); 4,57 (d.J IH; H-1'*, J = 2,10 Hz)·;4i30 (d.d.; ih; h-3*; j = 3,90 a 6,0 Hz ); 4,04 (d.; ih; 8sch₂,j = 9,0 Hz); 3,94 - 3,91 (a.; IH*, H-2');. 3,86 (d.d.; 1H*, H-4*; J = 6,30 a 9,60 Hz); 3,73 (d.J 1H; 8aCH₂,J =

9,0 Hz); 3,45 (d.k.; 1HJ H-5; J_d= 9,0 fflzj J_k = 6,0 Hz);

2,72 (t.; Ίη; H-1;. J = 3,6O Hz).

Meziprodukt 4

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3abete, 4beta ,4-abeta ,7beta, 7aalfa, 8a beta )/-8a-/(6-deexy-3,4-0(4-me thoxy-2-butyliden)-be ta-D-a itřópyranosýloxy) -methyl’/ - 4-forný1-4,48,5,6,7,78,8,8a-oktahydro-7-methyl-3(1-methylethyl)-1 ,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku suspenzi 350,0 Meziproduktu 1, jehož příprava je popsána výše, a 5,0 mg p-toluensulfoaové kyseliny ve 4,0 ml dichlormethanu/byl přidán 1,0 ml 2,2, 4-trimethoxybutanu a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny. Poté bylo přidáno 150,0 mg uhličitanu draselného a směs byla míchána dalších 30,0 minut.

* *

Po odpařeni rozpouštědla do sucha byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylácetát-hexan( 3 : 7) a (4 : 6), jako elučního činidla.

Bylo získáno 290,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, v poměru epimerů 3:1.

¹H-NMR (CDCl^)- signály pro hlavní složku;

delta 9,73 (s.; 1HJ CHO); 7,45 - 7,20(m.; 10H;2Ph);

6,98 ( s.; ih; cHPh₂);6,06 (a.a.; ts; h-2; 1,50 a'3,60 Hz); 4,57 (d.; 1H* H-Γ; J = 2,10 Hz); 4,31 ( d.d.; ih; h-3'; j = 3,90 a 6,0 Hz); 4,05 (a.; ih;

8aCH₂í J = 9,0 Hz); 3,95 - 3,90 <m.; 1H; H-2')J 3,88 ( d.d.; ih; h-4'; j = 6,o ₈ 9,30 Hz); 3,73 (a.; ih;

8aCH₂; j = 9,0 Hz); 3,5i (t.; 2h; ch₂o;j * 7,20 Hz);

3,50 - 3,45 (m.; íh;. h-5'); 3,33 (s.; 2h;ch₃o); 2,72 ( t.; ih; h-i;j = 3,60 Hz).

Meziprodukt 5

Příprava difenylaethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3abets,

4be ta,4abe ta,7beta,7aa lf a,8abe ta)/-8a-/(6-de oxy-3,4-0cyklopentyliden-beta-D-eltr0pyranosyloxy)/-4-forayl4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methy1-3-(t-ae thylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-( 1H)-karboxylové

Ku suspenzi 160,0 ag Meziproduktu 1, jehož příprava je popsána výše, ve směsi 4,0 ml dichlormethaa1,1-dimethoxycyklopentan (3 : 1), bylo přidáno 5,0 mg kyseliny p-toluensulfonové a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 2,0 hodin.Poté byl přidán 1,0 g uhličitanu draselného a směs byla míchána po dobu dalších 30 minut.

Po odpařeni rozpouštědla do sucha byl zbytek zpracován urychlenou chromatografíí na silikagelu za použití směsi ethylacetát-hexan( 1 í 4) , jako elučního činidla·

Bylo získáno 142,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMH (CDClj):

delta 9,73 (s.; 1H; CHO); 7,45 - 7,25 ( a.; 10H;2Ph); 6,98 (s.; ih; csph₂); 6,06 (a.a.; ih; h-2;j = 1,50 a

3,60 Hz); 4,55 (a.; ih; η-Γ; j - i,so Hz ); 4,i7(a. a.; ih; h-3*; j = 3,0 a 5,10 Hz); 4,08 (a.; ιη;8θοη₂; σ= 9,o Hz ); 3,95 (a.t.; ih; h-2*'>; J_d= 1,80 Hz;j_t = 3,0 Hz ); 3,81 (a.d.; jh; h-4'; j = .5,10.a 9,30 Hz);

3,76 (a.; ih; 8aCH₂; j * 9,0 Hz); 3,42 (a.k.; ih;h5'; 4_d= 9,30 Hz; J_k - 6,30 Hz)J2,73 (t.*1H;H -1; J =

3,90 Hz ).

Meziprodukt 6

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3abeta 4b_e ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta) /-8a-/ (6-de axy-3,4-0isopr®pyliden-2-0-(^ethylthio)-thiokarbonyl-bětá-Daltropyranosyloxy )-me thy l/-4-f ormy 1-4, 4a, 5,6,7,7a, 8, 8a-oktahydro-7-methy1-3-( 1 -«ethylethyl)-1,4-methana- indacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku, připravené* rozpuštění* 100,0 mg Meziproduktu 2, jehož příprava je popsána výše, a 1,0 mg imidazolu,v atmosféře dusíku, ve 4,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu, bylo přidáno 5,0 mg hydridu sodíku a , vzniklá suspenze byla míchána při teplotě místnosti po dobu 0,50 hodiny.Poté byl ku vzniklé reakční směsi přidán sulfid uhličitý ( 27,0 ^ul) a po 20minutobém míchání bylo ku směsi přidána 18,0 /ul methyl jodidu.

Po 2,0 hodinách byla reakce přerušena přidání*.

20,0 ml 1N roztoku chloridu amonného a směs byla vy třepána 3x s 25,0 ml ethylacetátu.Organická fáze byla promyta solankou, vysušena síranem hořečnatým a potébyle rozpouštědlo odpařeno do sucha.

Zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát-hexan ( J : 9), jako elučního činidla.

Bylo získáno 110,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR (CDClj):

delta 9,71 (s.; IHJCHO ); 7,44 - 7,25 («.*, 10H*,2Ph);

6,96 (a.; 1H; CHPh₂); 6,01 (d.d.; 1H; H-2.;.J = 1,20 a

3,60 Hz ); 6,90 (d.d.; 1H;H-2'í J « 2,40 a 5,40 Hz); 4,85 (d.; ιη;η-Γ; j - 2,40 h_z); 4,53 (d.d.; ih;h-3'); j - 5,40 a 6,30 Hz); 4,00 (d.a.; ih;h-4*; J = 6,30 a

8,70 Hz); 3,93 (d.; 1H;8aCH₂;j = 9,30 Hz); 3,65 (d.k.; ih; h-5'; J_d= 8,70; J_k = 6,30 Hz );2,6s (t.; ih;h-í;

J = 3,90 Hz); 2,59 (3.; 3H; CH₃S).

Meziprodukt 7

Příprava difenylme thy lesteru kyseliny /IR—(1alfa,3abeta, 4be ta,4abeta,7be ta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(2,6-dideoxy-3,40-Í3opropyliden-bet8-D-allopyranoayloxy)-®ethyl/-4~ formy1-4 ,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydr o-7-me thy 1-3- (1 -me thyl ethyl)-1, 4—methan—s—indacen—3a—(1H)—karboxylové

V 5,0 ml vysušeného toluenu byl v atmosféře dusíku rozpuštěn Meziprodukt 6 (95,0 mg), jehož příprava je popsána výše , a jvzniklý· roztok- byl„zahříváni; ha' teplotu 110°GT. Po 1,50 hodině míchání byl k tomuto roztoku přidán po kapkách roztok 64,0 ^ul tributylatanniumhydridu v 5,0 ml vysušeného toluenu a reakční směs byla zahřívána po dobu další 1,50 hodiny, poté byly přidány 2,0; ml methanolu a rozpouštědlo bylo odpařeno do sucha.

Urychlenou chromatografií zbytku na silikagelu za použití směsi ethylacetát-hexan( 1:9), bylo získáno 42,0 m^ žádaného, v nadpise uvedeného produktu.

¹MEB (GDC1₃); * delta 9,73 (a.; 1H;CH0);7,44 - 7,25 (m.; 10aj2Ph);.6,98 * ( 1H; 3.; CHPh₂);6,05 (d.d.;iHJH-2;j - 1,20 a 3,30 Hz); 4,54 (d.d.;is;H-r; J = 2,70 a 9,30 Hz); 4,39 (d.t.; ih; h-3*; 2,70H_Z;j_t= 3,60 Hz ); 4,04 (a.; ιη;θθ

CH₂;j = 9,0 Hz )J3,67 (d.;1H;8aCH₂;j = 9,0 Hz)j3,65 ( d.d.;1H;H-4';j =.3,60a. 8,70 Hz);3,44- (d.k.; 1Η;Η-5'*,

J_d = 6,30 Hz;u_k = 8,70 Hz); 2,75 (t.j 1H; J = 3,90 Hz).

Hoztok 5,50 ml tributylatanniumhydridu ve 150,0 ml vysušeného „toluenu b.yl po dobu 1,0 hodiny odplynován y práhu argonu a poté byl zahříván za refluxu pdd zpětným chladičem.Po 2,0 hodinách byl k tomuto roztoku přidán po kapkách roztok Meziproduktu 6 (6,0 g) ve 50,0 ml vysušeného toluenu.a v zahřívání reakční směsi se —pokračovalo, dokud -nebyla- reakce skončena- (-1,-50- hodi=__.

ny). Po odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku byl zbylý surový produkt zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan a hexan-ethylacetát ( 20 ϊ 1 ,až 15 : 1), jako elučního činidla.

Byly získány 4,0 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

Meziprodukt 8 • I F ..

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3abet9, 4be ta,4abeta,7be ta,.7aalfa,8abeta) /-8a-/(2,6-dideoxy-3,40- (4-me thoxy- 2-butyliden)-be ta-D-s llo pyra no sy 1 oxy) me thyl/-4-formyl-4, 4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thyl3- (1 -me thy le thyl)-1,4-me than-s-indacen-3a- (1H) -karboxylové

Ku roztoku 600,0 mg Meziproduktu 4, jehož příprava je popsána výše, v 10,0 ml vysušeného tetrajjydrof uranu, bylo přidáno při teplotě 0°C v atmosféře dusíku 30,0 mg hydridu sodného a 5,0 mg imidazolu.Po lOminutovém míchání byl ku zmíněnému roztoku přidán sulfid uhličitý(147 /ul ) a po dalším 20minutovém míchání methyljodid(127 ^ul ) a tato reakční směs byla míchána ještě dalších 30,0'iminut. Po přidání 20,0 ml 1N roztoku chloridu amonného byla směs vytřepána 3x se 25,0 ml ethylacetátu a oddělená organická fáze byla promyta solankou a vysušena síranem hořečnatým.

Po odpaření rozpouštědel do sucha byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetát-hexaní 15 : 85), jako elučního činidla.

Získaná, bíle zbarvená látka ve formě pěny, byla rozpuštěna v 10,0 ml vysušeného toluenu ( v atmosféře dusíku ) a po dvouhodinovém zahřívání při teplotě 115°G byl ku směsi přidán po kapkách roztok 0,46 ml tributylatanniumhydridu v 10,0 ml toluenu a aměs byla zahřívána po dobu dalších 2,0 hodin.

Po odpaření rozpouštědla do sucha byl zbytek přečištěn urychlenou chromatografii na silkagelu za použití směsi ethylacetát-hexan ( 15 : 85), jako elučního Činid-r la.

Sylo získáno 260,0 mg Žádané, v nadpise uvedené sloučeniny , v poměru epimerů 4:1.

^H-NMR (CDCl-j):

delta 9,63 (s.pHJCHO ); 7,44— 7,20; (m.J10H; 2Ph )J

6,99 .( a.; 1HJ CHPh₂); 6,06 ( d.d.; ih; H-2J J = 1,20 a 3.,30 Hz ); 4,53 (d.d.; 1HJ H-Γ; J - 2,70 a 8,70 Hz);.

4,42 (a.t.; íh; h-3'; J_d = 3,0 Hz; j_f= 4,20 Hz); 4,03 ( d.; 1H; 8aCH₂; J % 9,0 Hz )J 3,68 ( d.d.; 1H; H-4';

J = 5,10 a 9,30 Hz )J 3,66. (d.; IH; 8aCH₂; J = 9,0 Hz ); 3,52 (t.; 2h;ch₂o; j = 7,20 Hz ); 3,40 (a.k.; ih;h-5*; j_d = 9,30 Hz; J_k = 6,30 Hz ); 3,34 ( s., 3h; ch₃o );

2,74 (t.; ih; j = 4,20 Hz ).

Μ e z i p r o d„u k t 9

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3abeta, 4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-/(6-de oxy-3,4-0thi okarbony1-be ta-D-altropyranosyloxy)-me thyl/-4-formyl4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thy1-3-(1-me thyle thyl)1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Směs 0,500 g Meziproduktu 1, jehož příprava je ·’· popsána výše-, a -0,270 g--thiokarbonyldiimidazolu,_.v___........

10,0 al tetrahydrofuranu byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 6,0 hodin. Poté byla rozpouštědlo za vakua odpařeno a získaný, žlutě zbarvený 2bytek, byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát ( 3 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 0,263 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

Jh-NMR (CDC1₃):

delta 9,71 ( s.; 1H*CH0)* 7,44 - 7,26 (m.J 10H;2xPh);

.6,97 (s.;. ih; co₂cHPh₂); 6,06 (a.d.; ih;h-2;j = 1,50 a 3,30 Hz ); 4,93 (d.d.; 1H;H-3'J J = 3,90 a 7,20 Hz )| 4,63 (d.; ιη;η-Γ; j = 2,10 Hz ); 4,61/a.d.; ih;h-4';

J = 7,20 a 9,30 Hz ); 4,12 (m.; 1HJ H-Žl, 4,08 (a.; ih;

8aCH₂; J_AB = 9,30 Hz }; 3,74' ( d.* 1H; 8aCH₂; J_AB =

9,30 Hz ); 3,64 Cm.; ΪΗ^β,Η-5'); 2,69 ( m.; ih; H-1 ).

Meziprodukt 10

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3abeta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalfa, 8abe ta) /-8a-/ (2,6-dideoxybe ta-D-allopyrsnosyloxy )-me thyl/-4-formyl-4,4a, 5,6,7,

7a ₁8,8a-oktahydr o-7-me thy 1-3- (1 -me thyle thyl)-1,4-me thans4indacen-3a-(1H)- karboxylové

Ku roztoku 1,50 g Meziproduktu 7, jehož příprava je popsána výše, ve směsi 30,0 ml tetrahydrofuranu a 15,0 ml methanolu, bylo přidáno po kapkách při teplotě místnosti a za intenzivního míchání 15,0 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové. ^Jakmile byla reakce skončena, ( kontrola pomocí chromatografie na tenké vrestvě) , bylo ku směsi přidáno 50,0 al nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 200,0 ml ethylacetátu a směs byla vytřepána a vodná a oiganická fá2e byly odděleny. Poté byla organická fáze promyta 2x se 100,0 ml vody a vysušena síranem hořečnatým.

Po odstranění rozpouštědla byl zbytek zpracován urychlenou chromátografií ne silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetátí 5 : 1) a { 2 : 1), jako elučního činidla.

Bylo .získáno 1,10 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle zbarvené pěny.

(CDC1₃):

delta 9,73 (s.; 1HJCH0); 7,50 - 7,20 ím.; 10H;2Ph );

6,99/(d.d.; 1H;H-2; J = 1,20 a 3,30 Hz), 4,64 ( d.d.; ιη;η-Γ; j = 2,10 _a 9,60 Hz ); '4,11 (m.; ih; h-3');

4,06 íd.; 1H; 8aCH₂,ď_ÁB = 9,30 Hz ); 3,70 (m.; 2Η*,Η5*; a 8aCH₂); 3,34 (m.; ίη;η-4'); 2,75 (t.; ih; h-i;

J = 3,60 Hz

Meziprodukt 11

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3abeta, 4be te,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-/(2,6-dide oxy3,4-0-thi okarbonyl-be ta-D-allopryranosyloxy)-me thyl/4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl-3- O— methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-{1H)-karboxylové

Suspenze 160,0 mg Meziproduktu 10, jehož příprava je popsána výše, a 124,50 mg dibutylstanniumoxidu v

15,0 ml vysušeného toluenu byla zahřívána za refluxu -pod -zpětným -ch-l-ad-i č em - v - baňce, opa třené. Dean-Starkovým _ kondenzátorea po dobu 2,0 hodin a poté byla ponechána stát v klidu v atmosféře dusíku při teplotě místnosti.

K takto připravenému roztoku bylo přidáno 69,0 /Ul fenylchlorthionformiátu v 5,0 ml vysušeného toluenu..

Kontrolou chromá tografií na tenké vrjřstvě bylo prokázáno, že reakce byla dokončena po 6,0 hodinách.

Po odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku byla suro vá směs zpracována urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát (20 : 1) a ( 15 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno'150^0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bezbarvé, olejovité látky.

’η-ΝΜΡ (CDCLj):

delta 9,72 (a.; IHJCHO); 7,50 - 7,20 (m.; 10H*,2Ph.);

6,97 (s.; ιη; GHPh₂); 6,05 (a.a.; ih; h-2;j = 1,50/ a 3,60 Hz ); 5,10 (m.; ih;h-3*); 4,61 (d.d.;ιη;η-<<

J = 2,40 a 8,40 Hz ); 4,44 ( d.d.; 1H; H-4';j-= 6,60 a 9,0 Hz )*_r 4,04 a 3,67 (2d.J 2H;8aCH₂ ,J_AB ^e 9,0 Hz); 3,62 ( m.; ih; h-5'); 2,70 (t.; ih;h-i; j = 2,0 Hz ).

Meziprodukt 12

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aelfa,8abeta)/-8a-/(4-0-allyl2,6-dideoxy-beta-D-allopryranosyloxy)-methyl/-4-formyl4,4a, 5,6,7,7a., 3,Sa-oktahydro-7-me thy 1-3- (1 -me thyle thyl) -1,4-methsn-s-indacen-3a-( lH)-karboxylové

Suspenze 400,0 mg Meziproduktu 10, jehož příprava je popsána výše, a 240,0 mg tributyIstanniumoxidu v 50,0 ml vysušeného toluenu,byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem v baňce opatřené Dean-Starkovým kondenzátorem a poté byla ponechána stát v klidu v atmosféře dusíku při teplotě místnosti( bylo odstraněno přibližně 10,0 ml azeotropické směsi). Poté bylo k reakční směsi přidáno postupně 71,0 ^ul allylbromidu a 0,95 ml tetraměthylamoniumfluoridu ( 1M roztok v tetrahydrofuranu) a vzniklá reakční směs byla zahřívána při teplotě 50°C po dobu 24,0 hodin.

Po odstrahění rozpouštědla byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití smě si aceton-hexan ( 1 : 20) a (1 : 15), jako elučního či nidla.

^/lo získáno 300,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bezbarvé, olejovíté látky.

¹H-NMR (COCl^): .

delta 9,72 (s.J 1HJ CHO); 7,52 - 7,20 (m.; 1OH;2Ph);

6,98 ( s.;. h; 0HPh₂); 6,05'( a.a.;, ih; h-2;j = 1,50 a

3,60 Hz ); 5,89 (m.; 1H; CH=CH₂); 5,30 - 5,20 (m.;2H; CH=CH₂); 4,64 ( d.d.*, 1H; H-Γ; J = 2,10 a 9,60 Hz);

4,19 tm,; 1H;H-3'); 4,15 - 3,95 tm.; 3H; CH₂CH=CH₂+ 8aCH₂); 3,80 - 3,60 ( m.‘, 2H;H-5 '+8aCH₂); 3,06 (d.d.; ih; h-4'; j = 3,30 a 9,30 Hz ); 2,75 (t.;iH; h-i;j =

3,90 Hz ); 2,38 t š.d.J IHJOH).

Meziprodukt 13

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1 alfa,3a .beta,4beta.,4-abeta,7beta, 7aa_lf_a,8abeta)/-8a-/(2,6 dideoxy-4-Q-(2-me thyl-2-propenyl )-be ta-D-allopyranosyloxy )-methyl/-4-formyl-4,4θ,5,6,7,7e,8,8a- oktahydro7-methy 1-3-( 1 -methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a(1H)-karboxy1ové

Suspenze 500,0 mg Meziproduktu 10, jehož příprava je popsána výšé, a 300,0 mg tributylstanniumoxidu v 50,0 ml vysušeného toluenujbyla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem v baňce opatřené Dean-Starkovým kondenzátorem a poté byla ponechána stét v klidu v atmosféře dusíku při -teplotě místnosti ( bylo odstraněno .přibližně 10,0 ml azeotropické směsi). Poté bylo k reakční směsi přidáno postupně.202,0 /ul 3-brom2-methylpropenu a. 0,90' ml te tra buty lamoniumfluoridu.

( 1M roztok v tetrahydrofuranu) a vzniklá reakční směs· byla zahřívána při teplotě 50°C po dobu 24,0 hodin.

Po odstranění rozpouštědla byl zbytek zpracován, urychlenou chromatografií ns silikagelu.za použití směsi aceton-hexan., ( 1 : 20) a ( 1 : 15), jako elučního činidla.

Bylo získáno 340,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bezbarvé, olejovité látky.

^H-NMR ( CDClj):

delta 9,73 (s.J 1H;CHO )J7,5O - 7,20 (m.;i0H;2Fh );

6,98 (s.;iH;CHPh₂); 6,05 ( d.d.j 1HJ H-2*,J = 1,50 a

3,60 Hz ); 4,96 a 4,91 (2ti; 2H;-CH₂); 4,65 ( d.d.;

1H; H-1'í J - 1,80 a 9,60 Hz ); 4,20 ( m.*, IH; H-3*); 4,05 a 3,68 (2d; 2HJ 8aCH₂; J_AB= 9,30 Hz );. 4,00 a 3,87 ( 2&; 2h;och₂;j_ab= 12,0 Hz); 3,75 (m.; ih;h-5'); 3,06 ( d.d.; ih; Η-4'ί J = 3,0 a 9,60 Hz); 2,75 ( t.; ih;h-i;j = 3,60 Hz ); 2,37 (s.d.; ih;oh);i,76 (š.s.;

3h; ch₃c=ch₂).

Meziproduktu

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1elfa,3a beta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abeta)/-8a-//1S,7R,.

9R/-2,5,8-trioxa-3,7-dime thyl-ci s-bicyklo/-4.4.0/dek-9-yl-oxy-methyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8aoktahydro-7-me thy 1-3-(1-methyle thyl)-1,4-methan-sindacen-3a-(1H)- karboxylové

Ku roztoku 200,0 mg Meziproduktu 12, jehož příprava je popsána výše, v 10,0 ml bezvodého tetrahydro* ‘ furanu, bylo přidáno v atmosféře dusíku při teplotě místnosti a po malých dávkách 213,0 mg pevné formy trifluoracetátu rtutnatého. Poté, co byla vzniklá reakční směs ponechána stát v klidu při teplotě místnostl po dobu 30 minut, bylo k ní za intenzivního mícháI Č ní přidáno 135,0 /ul tributylstanniumhydridu. Po 30,0 minutách bylo přidáno k reakční směsi 50,0 ml ethylacětátu a vzniklá suspenze byla zfiltrována přes celit a byl získán bezbarvý roztok, který byl promyt 3x se ý

100,0 ml vody a poté vysušen síranem hořečnatým.

Po odstranění rozpouštědla byla zbylá látka ole-’ jovité konzistence zpracována urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi aceton-hexaní 1 : 15), jako elučního činidla.

Bylo získáno 120,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny , ve formě směsi epimerů 1 : 1 na C-3*.

¹H-NMR (CDCl^)zahrnuje:

delta 4,73 ( d.d.;, 1H*H-9*; J. = 3,0 a 6,30 Hz )J4,62 ( d.d.; 1H;h-9'; J - 2,10 a 9,90 Hz ).

Meziprodukt 15

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1 alfa,3a beta,4be ta,.4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-//1S,7R,

9S/-2,5,8-trioxa-3,3,7-ťrime'thýl'^ciš-bicyklo'-/4.4vO/-......

dek-9-y 1-oxy-me thyl/-4-f orný 1-4,4a,5,6,7,7a, 8,8aoktahy dro-7-methy 1-3-(1-methylethyl)-1,4-methan- sindacen-3a-( tH)-ka^.bqxylové

Ku roztoku 325,0 mg Meziproduktu 13, jehož příprava je popsána výše, v 10,0 ml bezvodého tetrahydrofuranu, bylo přidáno v atmosféře dusíku při teplotě místnosti a po malých dávkách 303,0 mg-pevné fony trifluoracetátu rtulnatého. Poté, co byla reekční směs ponechána.stát v klidu při teplotě místnosti po dobu 30,0 minut, bylo k ní za intenzivního míchání přidáno 192,0. /Ul. tributylstanniumhydridu. Po 30,0 minu-r tách.bylo k reakční směsi přidáno. 50,0 ml. ethylacetátu a vzniklá suspenze byla zfiltrována přes celit a byl získán bezbarvý roztok, který byl promyt 3x se 100,0 ml vody a poté byl vysušen síranem hořeSnatým.

Po odstranění, rozpouštědla byla zbylá látka olejovité konzistence zpracována· urychlenou chromatografií na silikagelu ža použití směsi aceton-hexan(1 : 20) a ( 1 : 15 ), jako elučního činidla.

Bylo získáno 210,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bezbarvé olejovité látky.

H-NMR (CDC1₃):

£.a,οβν«2» ^wAB~ ' ^JAB ^{= Π}»⁷° ^{Hz 3}

10,20 Hz ); 2,75 (t

1,16 (2s.*,2CH₃).

,25 ( d.d.; IH; H-6*;. J = 3,3O~a ih; h-i;j = 3,30 Hz); 1,25 a

Meziprodukt 16

Příprava difenyImethylesteru kyseliny /IR—(lalfa,3a be ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7e alfa,8abe ta)/-8a-/2,6-dideoxy-4-O-p-methoxybenzyl-beta-D-allopyranosyloxy)me thyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktshydro-7-me thyl

3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-(IH)- karboxylové

Suspenze 500,0 mg Meziproduktu 10, jehož příprava je popsána výše, a 374,0 mg tributylatanniumoxidu v 50,0 »1 vysušeného toluenu, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem v baňce opatřené Dean-Starkovým kondensátorem a ραΐφνίβ ponechána stát v klidu v atmosféře dusíku při teplotě místnosti ( bylo od stra- něno přibližně 10,0 ml azeotropické směsi). Poté bylo k reakční směsi postupně přidáno 135,0 ^ul p-methoxybenzylchloridu a 1,50 ml tetrabutylamoniuafluoridu ( ÍM roztok v tetrahydrofuranu) a vzniklá reakční směs byla zahřívána při teplotě 60°C po dobu 24,0 hodin.

Po odstranění rozpouštědla byl zbytek zpracován v urychlenou chromatografií na silikagelu za použití smě si aceton-hexan ( 1 : 20) a (1 : 15), jako elučního činidla.

Bylo získáno 300,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bezbarvé látky olejovíté konzistence.

¹H-NMR (CDC1₃):

delta 9,72 ( s.; 1H;CHO);7,5O - 7,20 ( m.;i2H;2 Ph a 2H ortho); 6,97 ( a.*, HJ CHPhg); 6,88 ( m.J2H; 2H meta );. 6,04 ( d.d/, 1H', H-2;j = 1,50 H_Z;j - 3,60 Hz);

4,64 ( d.d.;iH;H1J = 2,40 a 9,90 Hz )J 4,55 a 4,50 ( 2d.; 2H; CH₂Ph; J_AB= 11,20 Hz ); 4,18 ( m.;iH;H-3'); 4,04 a 3,66 (2d.;2fí;8aGH₂;J_AB = 9,0 Hz);3,8O (s.JJH;

ch₃q); 3,74 ( o.;ih; h-5*);.-3,.i2 ( a.a.; ih;h-4'^;

J = J,°0 a 9,30 Hz ); 2,75 ( t.JIHJH-IJJ = 3,90 Hz).

Meziprodukt 17

Příprava difenylmethylesteru jkyseliny /1R-(1alfa,3a heta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aslfa,8abe ta)/-8a-/(3-0-allyl2,6-dide oxy-4-0-p-me tjoxybenzyl-be ta°D=allopyranosyloxy) -methy l/-4-f ormy 1-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydno-7-me thyl3- í 1 -ae thyle thyl) -1,4-me than-s-inda c en-3s- (1H) -karboxylové

Ku .intenzivně míchanému .roztoku Meziproduktu. 16 ( 400,0 mg), jehož příprava je popsána výše, bylo přidáno v atmosféře dusíku, při teplotě 0°C a v míjaých. dávkách 48,0 mg hydridu sodného. Po skončení tát,© operace byla reakční směs ponechána stát v klidu při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny a poté k ní bylo přidáno. 191,0 /Ul allybromidu.

Po 24,0 hodinách byla reakce přerušena, přidáním 100,0 al 1N vodného roztoku chloridu amonného a reakční směs byla poté vytřepána se 200,0 ml ethylacetátu.

Odělená organická vrstva byla promyta Ix ae 100,0 ml vody, vysušena síranem hořečnatým a po zahuštění do sucha byla získána látka olejovité konzistence, která byle zpracována urychlenou chromátografií na silikagelu za použití směsi ethylacetát-hexaní 1 : 20) a (1 : 15), jako elučního činidla.

Bylo získáno 400,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bezbarvé látky olejovité konzistence.

¹H-OTEl (CDCK):

delta 9,47 ( 3.; 1HJCH0 ); 7,50 - 7,20 ( m.;.12H;

2Ph a 2H ortho);6,98 ( a.; h; CHR^); 6,86 ( m.J 2H;2H aeta);.6,04 ( d.d.; 1H*É2; J ~ 1,20 a 3,30 Hz); 5,95 ( m.; ih;ch=ch₂); 5,28 a 5,15 ( 2a.; 2h;ch-ch₂);

4,60 ( m.;2H; H-1*; a CH₂Ph ); 4,42 ( d.;iH;CH₂Ph ; J_A3 = 11,40 Hz ); 4,13 ( m.*,2H; CH₂-CH= )-,4,02 a

3,68 ( 2d.;2H;8aCH₂;j_AB = 9,60 Hz ); 3,89 ( m.;2H; h-5'; a h-3'); 3,80 ( s.;3h;ch₃o ); 3,09 ( d.d.;is; H-4'; J = 3,00 a 9,30 Hz ); 2,73 ( t.;tH;H-i;j = 3,90 Hz ).

Meziprodukt 18 &

* - . i .¾ β -3

Příprava difenylmethyleateru kyseliny /1H-(1alfa,3a ® beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(3-0-allyÍ'2,6rdideoxy-beta-D-allopyranosyloxy)-methyl/-4*for®yl4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3- (1 -me thyle thyl) \’J'

-1,4-aethan-s-indacen-3a-( 1H)-karboxylové ^H

...

Ku roztoku 2,30 g Meziproduktu 17, jehož příprava je popsána výše, ve 200,0 ml dichlormethanu a míchanému se 20,0 ml vody, bylo přidáno 0,79 g 2,3-dichlor5,6-dikyanchinonu. Po celonočním míchání při teplotě místnosti byla reakční smis zfiltrována přes vrstvu celí tu při použití většího množství dichlormethanu.

Dichlormethanová fáze byla promyta nejprve a vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a poté s roztokem chloridu sodného , poté byla vysušena síranem sodným;.bezvodým , zfiltrována a zahuštěna do sucha.

Získaný zbytek byl zchromátografován na silikagelu za použití směsi dichlormethan-methanolí 49 : 1 )^ jako elučního činidla.

$rlo získáno 1,95 g žádané, v nadpise uvedené slou- |

Čeniný, ve formě bíle zbarvené pěny. I ¹H-NBER (CDC1₃):

delta 9,75 (s.JIHJCHO 7,45 - 7,24 ( m7; 1 ÓHfPhg)'*,

6,99 ( a.; ih; cHPh₂); 6,05 ( d.d<;iH;.H-2;j = 1,50 a 3,30 Hz ); 5,95 ( m.; 1H;GH=CH₂) ;5,26. ( m.;2H*, ch=ch₂); 4,53 ( a.d.; = i,eo a 9,60 Hz);

4,19 a 3,96 ( 2m.J 2H; CH₂CH=CH₂);4,03 a 3,69 ( 2d.; 2H;8a-CH₂;j = 9,30 Hz ); 3,80 ( k.;iH;H-3';j = 3,30 Hz ); 3,60 ( d.k.;iH;H-5';j = 9,60 a 6,30 Hz )’,3,23 ( d.d.d.;iH·· H-4'JJ = 10,80,. 9,60 a 3,30 Hz )*,2,74 ( t.;,iH;H-i;j = 3,60 Hz )52,25 ( a.;iH; oh;j = 10,eo Hz).

Meziprodukt 19

Příprava d if eny lme thy le steru kyseliny /1R-(1alfa,3a beta,4be ta,4abeta,7be ta,7aalfa,8abeta)/8a-/(3-0-allyl2,5-dideozy-4-O- (me thylthio )-thiokarbonyl-be ta-D-ellopyranoayloxy )-me thyl/-4-formyl-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-methy 1-3-( 1-methyle, thyl.)-1,4-methan-s-indacen3a-(1H)-karboxylové

Ku chlazenému roztoku Meziproduktu 18 ( 1,90 g ), jehož přípravě je popsána výše, v 50,0 ml bezvodého tetrahydrofuranu, bylo přidáno v atmosféře dusíku po malých dávkách 240,0 mg hydridu sodného a katalytické množství imidezolu, Po odstavení ledem chlazené lázné byla reakční směs míchána po dobu 1,0 hodiny při teplotě místnosti. Poté bylo ku směsi přidáno postupně 1,50 ml sulfidu uhličitého a 1,25 ml methyl jodidu.

Jakmile byla reakce ukončene ( kontrola pomocíchromatografie na tenké vréstvě), byla surová směs nalita do 500,0 ml ethylacetátu a přerušena přidáním 250,0 ml 0,1N vodného roztoku chloridu amonného.

Oddělená organická fáze byla poté promyta 1x ae

500,0 ml solanky a 1x s 500,0 ml vody, vysušena a bezvodým síranem sodným a byla zahuštěna k suchu.

Zbytek olejovité konzistence byl zpracován urychlenou chromatografii na silikagelu za použití směsi hexan-dichlormethan (3:5), jako elučního Činidla.

§ylo získáno 1,85 g Žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-NMR (CLC1₃):

delta 9,74 ( s.JIHJCHO )J7,45 - 7,24 ( m.JlOH.JPhp·

6,99 ( s.;iH;CHPh₂);6,06 ( d.d.; 1H;H-2$J = 1,20a

3,30 Hz );. 5,88 ( m.; 1H;CH=CH₂);5,41 ( d.d.;iH;H-4';

J = 2,70 a 9,60 Hz ); 5,22 ( m. J. 2H;CH=CH₂);4,70 (d.d.; ih;h-i';j = 2,10 a 9,30 Hz ); 4,20 - 4,02 ( m?,5H;H-5f; CH₂-CH=CH₂; H-3; a 8a-CH₂(1H)); 3,71 ( d.;iH;8a-CH₂;„

J = 9,30.Hz ); 2,75 ( t.j IHJH-IJJ = 3,90 Hz ); 2,58 ( s.;3h;sch₃).

Meziprodukt 20

a) Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa, 3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-//1S,4S,6R,8R/-2,7-dioxa-4,6-dime thyl-cis-bicyklo/3.4.0/-non-8-yl-oxy-me thyl-/-4-formy1-4,4a,5,6,7, 7a,8,8a-oktahydro-7-me thy1-3-(ř-me thyle thyl)-1,4me than-s-inda cen-3a-(IH)-karboxylové

b) difenylmethylesteru kyselinu /1R-(1alfa,3abeta,.4 beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-//1S,4R,6R,8R/ -2,7-di oxa-4,6-dime thy1.ci s-bi cyklo-/3.4.0/-non-8yl-Qxy-methyl-/-4-formy1-4, 4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3-( 1-me thy lethyl)-1,4-methan-aindacen-3a-(1H)-karboxylavé

Roztok 1,80 g Meziproduktu 19, jehož příprava je popsána výše, ve 250,00 ml vysušeného toluenu, byl během 1,0 hodiny odplyněn v proudu argonu é’pót~ěbýl “za- '' hřát za refluxu pod zpětným chladičem.Poté bylo během zahřívání v průběhu cca 2,0 hodin přidáno v proudu argonu pomocí injekční stříkačky katalytické množství azobis(isobutyronitrilu) a 0,95 ml tributylstanniuahydridu, rozpuštěného v 50,0 ml vysušeného toluenu.

Jakmile byla reakce skončena, reakční směs byla dále zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem ještě po dobu 1,0 hodiny a poté byla ochlazena, zahuštěna k suchu a zpracována urychlenou chromatografií na silikagelu za použití hexanu a poté směsi hexan-ethylacetát (9:1), jako elučních činidel.

gylo získáno

680,0 mg Meziproduktu 20 ( a) ve formě bíle zbarvené pěny ( Rf - 0,3i; hexan-ethylacetát /4 : 1/) ''-¹ a dále bylo získáno

180,0 mg Meziproduktu 20 (b) ve formě bíle zbarvené, pevné látky ( Rf = 0,25J hexan-ethylacetát /4 : 1/)

a) (CDCl^):

delta 9,73 ( s.;iH;CH0 );.7.,45 - 7,28 (m.J 10H;Ph₂)J

6,99 ( 3.; 1H;CHPh₂);6,05 ( d.d.;iH;H-2*,J = 1,20 a 3,60 Hz ); 4,46 ( d.d.; ÍH»H-8,' J = 2,40 a 9,60 Hz ); 4,14 - 4,05 ( rn.*, 3H;8a-CH₂ (1H);H-I 'a CH₂-3' ( IH)); 3,67 ( d.; 1H; 8a-CH₂;j = 9,30 Hz );3,36 - 3,25 ( m.;2H;H-e/ a CH₂-3’*(1H).); 2,77. ( t.; ih; H-1JJ = 3,90 Hz );· 1,05 ( d.; 3H',4-CH₃;j s 6,90 Hz).

b) ¹H-NMR ( CDCl^):

delta 9,72 ( s.;iH;CH0 ); 7,45 - 7,24 (m.;i0H;Ph₂>; 6,99 ( s.; ih;chpii₂); 6,05 ( a.a.; ih;h-2;j = 1,50 a 3,60 Hz ); 4,42 ( d.d.J 1H;H-8*;j = 2,10 a 9,60 Hz ); 4,20 ( m.; 1Η·,Η-Γ);, 4,07 a 3,67 ( 2d.;3H;8ach₂;j = 9,30 Hz ); 3,97 ( t.; ih;gh₂-3';j = 8,40 Hz ); 3,54 ( m.;iH;H-6'); 3,46 ( d.a.;iH;cH₂-3';j = 10,50 hz ); 2,77 ( t.;ih;h-i;j * 3,90 Hz );s,53 ( *.;ι·η; h-4');. 1,02 ( a.; 3h;6-ch₃).

Meziprodukt 21

Příprava difenylme thy le steru kyseliny /1R-(1alfa,3a he ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-/(4-0allyl-2,6-dideoxy-3-0-(methylthio)-thiokarbonyl-beta-_y D-allopyranosyloxy)-methyl/-4-formyl-4-4a,5,6,7,7a, ,;

8,8a- oktahydro-7-methy 1-3-í 1 -methylethyl)-1,4-methans-indacen-3a-(IH)- karboxylové

Ku roztoku 380,0 mg Meziproduktu 12, jehož příprava je popsána výše, v 10,0 ml bezvodého tetrahydrofuranu, bylo přidáno v atmosféře dusíku, při teplotě 0°C a po malých dávkách 48,0 mg hydridu sodného a katalytické množství imidazolu. Po skončení této operace byla ledem chlazená lázeň odstavena a reakční směs byla ponechána při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny v klidu. Poté byl postupně přidán sulfid uhličitý( 300 /ul ) a methyljodid ( 250 ^ul). Po 4,0 hodinách byla reakční směs nalita do 100,0 ml ethylacetátu a reakce byla přerušena přidáním 50,0 ml 1N vodnéhp roztoku chloridu amonného.

Oddělená organická fáze byla poté promyta Ix se 100,0 ml solanky a Ix se 100,0 ml vody, vysušena síranem hořečnatým a následně byla vysušena do sucha.

Získaná žlutě zbarvená látka olejovíté konzistence. byla. _zpracována,uty.chlenou chromatografii ne silikagelu za použití směsi ethyleceté£-hexan( 1 : 25) a (1*. 20 ), jako elučniho činidla.

Bylo získáno 350,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-m (CLC1₃):

delta. 9,73 ( s.; IHJCHO ); 7,50 - 7,20 (m.; 10HJ2Ph)*,

6,98 ( a.;H;CHPh₂); 6,24 ( m. j 1 H;H-3')*6,05 ( d.d.; 1HJ H-2JJ = 1,50 a 3,60 Hz ); 5,85 ( m.;iH;CH=CH₂); ,5,30-.5,20 ( m.;2H;CH=GH₂); 4,56 (_d.d.*1HJH-1 J = 1,80 a 9,30 Hz ); 4,15 - 3,75 (®.;4H;CH₂CH=CH₂ +8aCH₂+H-5'); 3,69 ( d.J 1H;8aCH₂;J = 9,30 Hz )J3,21 ( d.d.; 1H*,H-4';j = 3,3O a 9,30 Hz )*_ř2,72 ( t.; 1H;

H-1 ;.J = 3,89 Hz ); 2,5.9 ( s.pHJSCHp.

Meziprodukt 22

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(íalfa,3a beta ,4beta,4abeta ,7beta ,7aalfa ,8a beta )/-8a-/(2,6-dide oxy-3-0-(me thy Ithio) -thiokarbony1-4-0- (2-me thyl-2propenyl)-beta-D-allopyranosyloxy )-me thy l/-4-f ormy 14,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-okt ahydro-7-me thy 1-3- (1 -me thy le thyl) - 1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)- karboxylové ‘

Ku chlazenému roztoku 700,0 mg Meziproduktu 13, jehož příprava je popsána výše, ve 30,0 ml bezvodého tetrahydrof uranu, bylo přidáno v atmosféře dusíku po malých dávkách 85,0 mg hydridu sodného a katalytické množství imidazolu. Po odstavení ledem chlazené lázně byla reakční směs míchána při teplotě místnosti pomocí magnetické míchadla po dobu 1,0 hodiny.Poté bylo ku směsi postupně přidáno 0,54 ml sulfidu uhličitého a 0,45 ml methyljodidu.

Jakmile byla reakce ukončena( kontrola pomocí ehromatografie na tenké vrstvě) , byla surová směs ne lita do 200,0 ml ethylacetátu a^poteVpre rušena přidáním 120,0 ml O,1N vodného ro2toku chloridu amonného.

Oddělená organická fáze byla poté promyta 1χ·se 200,0 ml solanky a poté lx se 200,0 ml vody, vysušena bezvodým síranem sodným a následně byla zahuštěna k suchu.

Zbytek olejoví té konzistence byl zpracován dále chromatografií na silikagelu za použití směsi hexanethylacetát ( 19 : 1) , jako elučního činidla,.

Sylo získáno 600,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

’η-ΝΜΗ (CDC1₃):

delta 9,73 (s.JIH’, CHO); 7,45 - 7,26 (m.;i0H,Ph₂);

6,98 ( s.; 1H;CHPh₂); 6,24 ( m.; '); 6,05 ( d.d.; ih; H-2;j = 1,50 a 3,60 Hz )J4,92 a 4,S8 ( 2a.; 2h;c=ch₂); 4,55 ( d.d.; ih;h-i';j = 2,10 a

9,60 Hz ); 4,03 a 3,69 ( 2d,J 2H;8a-CH₂;j = 9,30 Hz);

3,95 a 3,82 ( 2d.; 2H; CHg-C=CH₂; J = 12,.30 Hz);3,86 ( m.;in; h-5'); 3,19 ( d.d.; ih;h-4'; j = 3,0 a 9,30 Hz ); 2,72 ( t.;iH;n-i;j·= 3,90 Hz )-,2,58 ( s.;3h; sch₃);i,70 ( s.;3H;cH₃c=eH₂).

Meziprodukt 23

a) Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(lalfa,

- 3abe ta._r4-be tá ,.4.a.be.ta.,.7-b.e.ta ,,7.aalf a_, 8abe ta) /-Sa-//

1S,4R,7R,9R/-2,8-di oxa-4,9-dime thy1-ci s-bicyklo/3.4.0./-non-7-y 1-oxy-me thy l/-4-f ormy l-4-4a ,5,6,

7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thyl-3- (1 -me thy le thyl)-1,

4-me than-s-inda cen-3a- (1H) -karboxylové 8

b) difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3abeta,4 beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-//1S,4S_í7R, 9R/-2,8-di oxa-4,9-dime. thy 1-ci s-bicyklo-/3 ^4.0./non-7-y 1-oxy-me thy 1/-4-f ormy l-4‘, 4a, 5,6,7,7a, 8,8aoktehydro-7-me thyl-3- ti -me thyle thy 1)-1,4-me than-s -indacen-3a-(1H)-karboxylové Postup £

Roztok 1,50 g Meziproduktu 21, jehož příprava je popsána výše, ve 150,0 ml vysušeného toluenu,, byl odplyňován v proudu argonu po dobu 90,0 minut a poté byl. zahřát pod zpětným, chladičem k ref luxu. £ tomuto- vroucímu roztoku bylo přidáno 847,0 ^ul tributyl stanní ua> hydridu a 33,0 mg azobis-(isobutyronitrilu) a tato re·» akiSní směs byla zahřívána po dobu dalších 30,0 minut.

. Po odstranění rozpouštědla byla zbylá surová směs zpracována 2x urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi'hexan-ethylacetát ( 20 : 1), jako eluč ního činidla.

Bylo získáno 150,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny a).

( Rf = 0,60; hexan-ethylacetát /4:1/) a

260,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny b).

( Rf = 0,40; hexan-ethylacetát /4:1/), přičemž obě sloučeniny byly získány ve formě bezbarvé^.

látky olejovíté konzistence.

a) ^H-OTSB (CDC1₃):

9,75 ( a.; ih; cho); 7,50 - 7,2© (m.; ioh;2Hi);

6,99 ( s.; ih; čHPh₂); 6,06 ( d.d*; ih;h-2;j =

1,50 a 3,60 Hz ); 4,46 ( d.d.; 1HJH-7'; J - 3,0 a 7,50 Hz);. 4,06 - 3,95 ( m.J 2HJ a 8aCH₂);

3,78 - 3,60 ( m.; 2HJ H-1'* a 8aCH₂); 3,38 - 3,26 ( m.; 2H; H-9*a H-3'); 2,75 (· t.; 1HJH-1 * J = 3,60 Hz ); 0,98 ( a.; 3h;ch₃ch; j = 6,90 Hz ). a

b) ’ί-ΒΕ ( CDC1₃)í delta 9,74 ( a.; 1H;CH0); 7,50 - 7,20 ( m.JlOH;

2?h ); 6,99 ( s; iH;cHPh₂); 6,04 (d.d.;ih;h-i;

J = 1,50 a 3,60 Hz ); 4,74 ( t.;iH;H-7';j = 3,0 . Hz ); 3,94 a 3,61 ( 2d..; 2H;.8aCH₂;.J_Ag= 9,30 Hz);

3,88 a 3,76 (. 2d.J 2H;H-3');3,66 .( m.;iH; H-9') í , 3^43 ( t.; ιη;η-Γ; j, = 7,80 h_z ); 2,72 ( t.;in; H-1; .J. = 3,60, Hz ); 2.,46.,( 2a.; 2H; CHGH₂-0 a h-5'); 0,97 ( a.;. 3h; ch₃gh;. j = 6,90 Hz ). £

P o s t u ρ B

Roztok 685,0 mg Meziproduktu 98, jehož příprava je popsána dále, v 15,0 ml o-xylenu, byl odplynován 60,0 minut v proudu argonu a poté byl zahřát pod zpětným chladičem k refluxu. K tomuto roztoku bylo přidáno 379,0 /Ul tributylstanniumhydridu a tato reakční směs byla zahřívána po dobu dalších 15,0 minut. Po ochlazení byla směs vytřepána me2i 150,0 ml diethyletheru a 100,0 ml vody a po oddělení byla organická fáze promyta s nasyceným vodným roztokem fluoridu draselného a promývání pokračovala tak dlouho, dokud bylo pozorováno srážení tributylstanniumfluoridu. Po zfiltrování a odpaření organické fáze do sucha byl získán zbytek, který byl dále zpracován 2x urychlenou chromatografií na silikagelu’ za použití aměsi—hexan-ethylsce-tát- ( 20- :....1 )_,.jako elučního činidla.

Bylo získáno 103,0 mg žádané, v nsdpiae uvedené sloučeniny, označené a) a

235,0 mg žádané, v nsdpiae uvedené sloučeniny,označené b ).

Postup C

Roztok 684,0 yul tributylstanniumhydridu ve 25,0 ml vysušeného toluenu byl odplynován v proudu argonu # po dobu 60 minut a poté byl zahřát pod zpětným chladila k refluxu. Po 2,0 hodinách zahřívání byl.?, k uvedenému roztoku přidán pomocí injekční stříkačky roztok

Meziproduktu 98, jeho příprava je popsána dále (610,0 mg), ve 30,0 ml vysušeného toluenu a reakční směa byla zahřívána po dobu dalších 3,50 hodiny.

Po odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku byl ,.i získaný surový produkt zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití nejprve, hexanu a poté směsi hexan-ethylacetát ( 10 : 1 ) až ( 8 : 1 ), jako elučního Činidla,

Bylo získáno 357,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, označené a ).

Meziprodukt 24

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a beta,4beta ,4abeta ,7beta,7aalfa ,8abeta )/-8a-//1S,7R, 9R/-2,8-dioxa-4,4,8-trime thyl-cis-bicyklo-/3.4.0./non-7-y1-oxy-methyl/-4-formyl-4, 4a, 5,6,7,7a, 8,8a oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-sindacen-3a-(1H)- karboxylové

Roztok 580,0 mg Meziproduktu 22, jehož příprava je popsána výše, ve 150,0 ml vysušeného toluenu, byl odplyňován v proudu argonu po dobu 60 minut a poté byl zahřát pod zpětným chladičem k refluxu. Po 2,0 hodinách zahřívání byl za stálého uvádění proudu argonu do směsi přidán pomocí injekční stříkačky azobis ( isobutyronitril) v katalytickém množství a poté 0,27 al tributylstanniumhydridu,rozpuštěného ve 20,0 ml vysušeného toluenu. Jakmile byla tato operace dokon čena, reakční směs byla dále zahřívána po dobu 3,0 hodin. Poté byla ochlazena: a zahuštěna.

Zbytek byl chromatograficky zpracován ne silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát ( 4 : 1),jako elučního činidla.

Bylo získáno 100,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-NMR (CDC1₃>:

delta 9,74 (a.J 1H;.CH0); 7,45 - 7,26 (m.;10H;ph₂);

6,99 (s.;ih; CHPh₂); 6,04 ( d.d.; ih; h-2;j = 1,50 a 3,60 Hz ); 4,71 (t.;. ih;h-7'; j = 3,30 Hz );3,93 a 3,61 (2d.; 2HJ 8a-CH₂,J = 9,30 Hz ); 3,85 ( t.; ιη;η-Γ; j = 8,70 Hz ); 3,56 ( m.; ih;h -9'); 3,55 a 3,43 (2d.; 2H; 0Η_?-3'; J - 8,40 Hz ); 2,73 ( m.; ih; η-d; i,os a 0,99 ( 2s.; 6h; 4'-ch₃).

Meziprodukt 25

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a beta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-/(6-deoxybeta-D-altropyranosyloxy)-methyl/-4-(1,3-dioxolan-2-yl) -4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thy1-3-(1-me thyle thyl) -1,4-«ethan-s-indacen-3a-(1H)- karboxylové

Za stálého míchání bylo ku 2,50 g Meziproduktů 1, jehož příprava je popaáh® výše, rozpuštěného ve 100,0 vysušeného acetonitrilu, přidáno při teplotě místnosti postupně 30,0 ml ethylenglykoluj. 2,0 ml trimethylorthoformiátu a katalytické množství kyseliny p-toluensulfonové, Vzniklá reakční- směs-byla míchána, po dobu 3,0. hodin, poté byla naředěna se 300,0 ml ethylacetátu a postupně promyta s 5%ním vodným roztokem.hydrogenuhličitanu sodného a solankou. . tc.

Oddělená organická fáze byla vysušena bezvodým síranem, sodným a zahuštěna.

Zbytek byl přečištěn chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát( 3 : 1), jako elučního činidla, . Bylo získáno 2,60 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

^-NMS ( CDC1₃):

delta 7,46 - 7,24 (a.; 10H*,Ph₂);6,94 (s.; IHJCHPhp;

5,83 ( d.d.; = 1,20 a 3,60 Hz); 5,07 (s.;

1H; ch beta); 4,65 ( d.j 1H*H-1 *· J - 1,80 Hz )*_ř4,07 - 4,04 ( m.J 2H; 8a-CH₂-(1H) a H-3'); 3,88 - 3,69 (m.; 8H; 0CH₂CH₂0; 8a-CH₂(1H); H-2'; H-4'a H-5'); 2,51 (t.; ih; h-i; j = 4,50 Hz );· 2,37 ( <í.;ih;oh;.j = 2,70 Hz); 2,28 ( d.; ih;.oh;.j =. 3,60 Hz ); 2,04 (a.;ih;oh,j = 5,70 HÉ ).

Meziprodukt 26

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1 alfa,3a be ta,4be ta, 4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-/(6-de oxy3,4-O-isopropyliden-beta-D-altropyranosyloxy)-methy1/4—(1,3-dioxolan-2-yl)-4_f4a,5,6,7,7a,8,8a- oktahydro-7metlayl-3-í 1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)karboxylové

Roztok 200,0 mg Meziproduktu 25,jehož příprava je popsána výše, v 6,0 ml vysušeného acetonitrilu,byl v atmosféře dusíku smíchán s 0,60 ml 2,2-dimethoxypropanu a poté bylo přidáno katalytické množství pyridinium p-toluensulfonatu. Po 4,0 hodinách, kdy vzniklá reakční směs byla ponechána stát v klidu při teplotě / místnosti, bylo přidáno 20,0 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs byla vytřepána ^T 2xs 20,0 ml ethylacetátu.Spojené organické fáze byly promyty· s vodou a solankou, vysušeny síranem hořečnatým, zfiltrovány a poté byly odpařeny do sucha.

Zbytek byl přečištěn urychlenou chromátografií 4 na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát( 4:1), jako elučního činidla. Příslušné frakce byly spojeny a poté odpařeny.

Bylo získáno 205,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny/ve formě bíle zbarvené pěny.

^]H-NMR (CDCip:

delta 7,47 - 7,20 ( m.;. 10H*,2Ph ); 6,93 ( S.;1H;

CHPh₂); 5,83 ( d.d.; 1H;H-2; J = 1,20 a 3,60 Hz);

5,08 ( s.,1H; 1,3-dioxolan )| 4,56,( d.f1H;H-1ÍJ ~

2,10 Hz );. 4,30 ( d.d.; 1H; H-3';J = 3,60 a 5,70 Hz); 4,04 ( d.J. ΙΜΙΑ část z 8aCH₂;j_Ag= 9,0 Hz ); 3,95 3,75 ( m.; 7H;H-2'*,H-4';0CH₂CH 0 a B část z 8aCH₂);

3,44 ( d.k.;, 1HJH-5'; J = 6,0 a 9,0 Hz ); 2,65 (m.;

.1.H; _CHMe₂)_;..2.,.51...( 8,A,í .=_3,60 _H2.);.2,_35 ( d.; ih; 0H2'); 1,47;.1,36 ( 2s;6H;.2CH₃ isopropyliden ketal).

Meziprodukt 27

Příprava difenylme thyle steru kyseliny /1B-(lalfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(6-deoxy3,4-0-isopropyliden-beta-D-allopyranosyloxy) -methy 1/4-0,3-dioxolan-2-yl)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a- oktahydro 7-me thy 1-3- (1 -me thyle thy 1 )-1,4-me than-s-inda cen-3a- (1H) karboxylové

Ku směsi 412,0 mg oxidu chromového ve 25,0 ml. dichlormethanu bylo přidáno při teplotě 0°C 0,67 ml, pyridinu a po 15,0 minutách stání bylo přidáno 0,40 ml an=hydridu kyseliny octové a po dalších 10,0 minutách byl při uvedené teplotě 0°C přidán roztok 750,0 mg Meziproduktu 26, jehož příprava je popsána výše,ve 25,0 ml dichlormethanu. Vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 2,0 hodin a poté byla zfiltrována přes sloupec silikagelu, opatřeném v horní části vrstvou'síranu hořečnatého a získaný filtrát byl za sníženého tlaku odpařen do sucha·

Získaná látka sirupovité konzistence byla rozpuštěna ve směsi(11,0 ml ) methanol-voda ( 10 : 1) a k tomuto roztoku bylo přidáno při teplotě 0°C 40,0 mg tetrahydroboritanu sodného. Tato směs byla udržována při teplotě 0°C po dobu 2,0 hodin, poté byla okyselena s IN roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH 6,0 - 7,0 a následně byla za sníženého tlaku odpařena do sucha.

Byla získána bíle zbarvená*pevná látka, která byla

100 urychlené

2x přečištěna pomocíVsloupcové chromatografie na silikagelu, za postupného promývání směsí hexan-ethylacetát ( 6 : 1) a poté (2:1),

Frakce, obsahující žádaný produkt, byly spojeny a za vakua odpařeny.

Bylo získáno 585,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR ( CDCl^):

delta 7,24 - 7,46 ( m.J 10H;2Ph); 6,92 (a.;iHJCHPh₂);

5,87 ( d.d.; ih;k-2;j = 3,90 a 1,50 Hz);5,09 ( s.;ih; CH-dioxolan); 4,52 ( t.; 1HJ H-3'jJ = 4,50 Hz ); 4,45 ( a.; ih; h-1';j = 7,sohz;4,o7 ( a.; in;8aCH₂;j = 9,0 Hz ); 3,74 - 3,36 ( m.; 6HJ 2CH₂-dioxolan;H-4';8aCH₂); 3,67 ( m.; ih;h-2'); 2,65 ( m,; ih;h-14);2,58 ( t.;iH; H-11 ).

Meziprodukt 28

V

Příprava 2-(tritmethylsilyl)-ethylesteru kyseliny /1R(1 alfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta ,7aalfa,8abeta)/-4f ormyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydr o-8a-hydroxyme thyl7-methy 1-3-( 1-methyle thyl )-1,4-methan-sl·- indacen-3a (1H)-karboxylové

Roztok 6,60 g sordaričinu a 9,30 g 0-/2-(tri* Ú methylsilyl)-ethyl/-N_>N-diisopropylisomoČoviny ve 150,0 ml bezvodého tetrahydrofuranu byl zahříván za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 3,0 hodin. Poté byla reakční směs ochlazena na teplotu místnosti,zfiltrována a zahuštěna k suchu.

Zbytek byl rozpuštěn ve 750,0 ml ethylacetátu a poté byl postupně promyt a 1N roztokem kyseliny

101 chlorovodíkové ;5%nía vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou.Oddělená organická fáze byla vysušena bezvodým síranem sodným, a poté byla za vakua zahuštěna.

Zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií na silikagelu za použití 10sního ethylacetátu v hexanu, jako .elučního činidla.

É^lo získáno 6,80 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-NMR (GDC1₃)í delta 9,67 ( a.J.IH; CHO ); 6,07 (d.d.; 1H;H-2;j = 1,50 a 3,60 Hz ); 4,272H;CH₂CH₂0 ); 3,93 a 3,49 (2a; 2h; 8a-cH₂); 2,75 ( s.s.; ih;oh. ); 2,54 ( t.; ih;h-d; 1,05 (a.; 2h;ch₂ch₂sí ); 0,07 ( a.; 9h; (ch₃)₃sí;

¹³O^ŇMR (CDC1₃);

204,90 (CHO); 173,60 ( COOTMSE ); 148,2, (C-3); 1-30,60 (0-2); 66,90 ( 8a-CH₂0); 64,0 (CH^O ); 177,70 (CH₂ CH₂Si); 1,60 ( CH₃)₃Sl.

¹^Mathias L.J.J Synthesis,561(1979).

Meziprodukt 29

Příprava trimethylsilylethylesteru kyseliny /IR—(lalfa, 3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(3,4,6 tri-o-aee tyl-2-de oxy-be ta-D-allopyranosyloxy) -me thyl/4-formy1-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydEO-7-me thy 1-3- ( 1. aethylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-( 1H)-karboxylové

Ku roztoku 63,0 mg Meziproduktu 28, jehož příprava je popsána výše, a 20,0 mg 3,4,6-tri-O-acetyl102

D- allalui¹ ^v 1,0 ml vysušeného toluenu, bylo přidáno 9,0 mg kyseliny'bromovodí kové-trif eny lf osf inu a vzniklé reakční směs byla zahřívána po dobu 2,0 hodin na teplotu 60°G a poté byla nalita do 100,0 ml 1M roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po přidání 100,0 ml ethylacetátu byla oddělená org^ícká vrstva promyta s vodou,vysušena bezvodým síranem hořečnatým a zfiltrována, a poté byla odpařena do sucha.

Zbytek byl přečištěn urychlenou sloupcovou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát ( 10 : 1 ).

Bylo získáno 16,0 mg žádané, v nadpise_Tuvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-NMR (CDCl^):

delta 9,73 ( s.; 1H;CHO);6,O3 ( d.d. ;ih;H-2‘, J = 1,50 a 3,60 Hz ); 5,48 ( m., 1Η*,Η-3')J4,89 ( d.d.*_ř1H;H-4 J = 3,30 a 9,60 Hz )*, 4,65 ( d.d.; 1H;H-TJ = 2,40 a 8,70 Hz ); 4,23 ( m.; 4H;H-6'; COÓCH₂CH₂Sí );.4,02 ( d.d.d.; 1H;h-5';J = 3;5,4O ; a 9,6O Hz 3,92 a

3,69 ( 2d.; 2H;8aCH₂;j = 9,60 Hz ); 2,75 ( t.JIH;

H-1 ); 2,28 ( m.; IHJCHtCH^).

. * ¹ Wittmaň M.D.; Halcomb R.L. a Banishefsky S.J.; J.Org.Chem.^55,1979-1981/1990/.

Meziprodukt 30

Příprava 2-(trimethylsilyl)-ethylesteru kyseliny /1R(1alfa,3abeta,4beta,5abeta,7beta,7aalfa,8abeta)-/(2 deoxy-3,4-0.isopropyliden-6-0-methyl-beta-D-allopyranosyloxy)-me thyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro 7-me thy1-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a(IH)- karboxylové

103 'Ku stále míchanému roztoku 275,0 mg Meziproduktu 29, jehož příprava je popsána výše, v 10,0 ml absolutního methanolu, byly přidány 2 něbo^_3 kapky1M roztoku methoxidu sodného v methanolu. Vzniklá reakční směs byla poté po dobu 1,50 hodiny míchána následně byla zahuštěna a zředěna s 10,0 ml toluenu. Po zahuštění byla /získána látka ve formě žlutě zbarveného sirupu, který byl rozpuštěn v 5,0 ml acetonu a k tomuto roztoku bylo přidáno 60,0 /ul 2,2-dimethoxypropanu a 75,0 mg monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové. Poté byla reakční směs míchána při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny, poté byla zneutralizována s uhličitanem sodným, zfiltrována a filtrát byl zahuštěn do sucha.

Zbytek, ve formě látky, olejovité konzistence,byl rozpuštěn ve 20,0 ml ethylacetátu, promyt vodou a solankou, vysušen a zahuštěn na látku olejovité konzistence, která byla po rozpuštění v 5,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu reagována při teplotě 0°0. s 10,0. mg hydridu sodného , poté byla směs po dobu 30,0 minut‘mí chána a následně bylo přidáno 100,0 /ul methyl jodidu.

Tato reakční směs byla postupně během 3,0 hodin vytemperována na teplotu místnosti a po přerušení reak ce-přidáním 1,0 ml methanolu byla směs zahuštěna.

Zbytek byl přečištěn 3x urychlenou sloupcovou chromatografií za postupného promývaní směsí hexanethyláce tát ( 10 : 1 ); ^6 i 1 ) a ( 4 : 1) y jako elučních činidel.

Příslušené frakce byly spojeny a rozpouštědla byla odpařena.

Bylo získáno 50,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bezbarvé látky olejovité konzistence.

104 ¹ H-NMR ( CDC1₃):

delta 9,73 ( s.;ih;cho ); 6,04 (d.d.; ih;h-2;j = 1,20 a 3,60 Hz ); 4,61 (d.d.; 1Η*,Η-1 ';j = 2,40 8 8,40 Hz ); 4,43 ( m.; 1H;H-3')‘, 4,34 - 4,10 (m.;2H’_řCH₂-SEM chránící skupina); 3,66 a 3,89 (2d.;2H; 8aCH₂;j = 9,30 Hz );

3,87 ( a.;1H? H-4')*, 3,48 - 3,64 (m.; 3H; 2H-6'a H-5?,

3,24 ( a.; 3H; 6'0Me ); 2,73 ( t.j 1H;H-1;J = 3,60 Hz );

1,34 a 1,35 ( 2s;6H‘, me thy 1 skupiny isopropylidenu).

Meziprodukt 31

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /IR—(1 alfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(4-O-((Ξ) -2-butenyl)-2_l6-dideoxy-beta-D-allopyrsnosyloxy)-methyl/ -4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methy 1-3-(1methylethyl)r1,4-methan-s-indaaen-3a-(1H)-karboxylové

Suspenze 1,50 g Meziproduktu 10, jehož příprava je popsána výše, a 0,90 g dibuiylstanniumoxidu ve 150,0' ml vysušeného toluenu, byla zahřívána za refluxu pod zpětným ehlsdičem v baňce opatřené Dean-Starkovým kondenzátorem po dobu 2,0 hodin, a poté byla ponechána stát v klidu při teplotě místnosti v atmosféře dusíku ( bylo odstraněno přibližně 20,0 ml azeotropické směsi). Poté bylo ku směsi přidáno postupně 0,37 ml krotylbromidu ( přednostně trans-f orma) *, 3,60 ml 1M roztoku tetrabutylamoniumf luoridu v tetrahydrofuranu a 4& molekulové síto ( aktivovaná látka ve formě prášku) a vzniklá reakční směs byla zahřívána na teSplotu 60°C po dobu 24,0 hodin.Po odfiltrování molekulového síta bylo rozpouštědlo odstraněno.

Zbytek byl zpracován urychlenou chromátografií na silikagelu,.za použiti^směsi hexan-aceton ( 95 : 5 ), jako elučního činidla.

-/ .105

Bylo získánc· 1,0 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny. ' ^H-NMR ( CDClj):

delta 9,73 (s.,1HJCH0);7,44 - 7,23 (m.;iQH*,2Ph );6,98 ( s.;ih;.chri₂); 6,05 (a.a.; ih;h-2;j = 1,50 a 3,60 hz); 5,75 - 5,52 ( m.; 2h;gh=ch);.4,64 (dd.; ih;h-i*;j = 2,10 a 9,60 Hz ); 4,16 ( m.;.1H;H-3');4,98 ( m.;3H;8a-CH₂( 1H) a CH₂CH=CH(2H)); 3,74 ( m.;1fí;H-5'); 3,67 ( d.;iH;8ach₂(ih); j = 9,30 Hz ); 3,05 ( a.d.; ih;h-4';j = 3,0a 9,60 Hz ); 2,75 ( t.;iHJ H-i;j = 3,60 Hz ); 2,40 (d.; ih; oh; j = 2,10 Hz ); 1,72 ( ,m.;3H;cH₃cH=cH ).

Meziprodukt 32

Příprava difenylme thy le steru kyseliny /1R-( Islfajja be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7a alf a, 8a beta) /-8e-/ (2,6 -dideoxy-4-0-propargyl-bets-D-allopyranosyloxy)-methyl/4-f ormyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahy dro-7-me thy 1-3- (1 — methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Suspenze 2,0 g Meziproduktu 10, jehož příprava \ je popsána výše, a 1,20 g dibutylstanniumoxidu ve 150,0 ml vysušeného toluenu, byla zahřívána ze refluxu pod zpětným chladičem v baňce opatřené Dean-Starkovým kondenzátorem po dobu 2,0 hodin, a poté byla ponechána stát při teplotě místnosti a v atmosféře dusíku v klidu ( bylo odstraněno přibližně-20,0 ml azeotropické směsi) Poté bylo ku směsi postupně přidáno 0,55 ml 8O%ního roz toku (hmotnostní %) propargylbromidu; 4,80 ml 1M roztoku te tra butylamoniumfluoridu a 4Ž molekulové síto ( aktivovaná látka ve formě prášku) a vzniklá reakční směs byla zahřívána na teplotu 60°C po dobu 24,0 hodin.

106

Po odfiltrování molekulového síta bylo rozpouštědlo odstraněno.

Zbytek byl zpracován 2x urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-aceton( 96 : 4), jako elučního činidla.

Bylo získáno 1,25 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny,ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-OE (CDCl-j):

delta 9,73 Cs.J IHJCHO ); 7,44 - 7,26 (m.; 10H;2Ph);

6,98 ( s.; ih; cHPh₂); 6,05 (d.a.; ih;h-2;.j = 1,20 a 3,30 Hz ); 4,65 ( d.d.; 1H;H-l';J = 2,10 a 9,60 Hz*,);

4.29 ( m.; ih;h-3'); 4,24 a 4,22 (2d.;2h;ch₂c=ch; J =

2,40 Hz ); 4,05 a 3,68 ( 2d.;2H;8a-CH₂;J = 9,30 Hz ); 3,75 ( m.; 1H;H-5');. 3,25 (d.d.; 1h;H-4,' J = 3,0 a

5.30 Hz ); 2,75 ( t.;1H;H-1;J = 3,90 Hz );2,46 ( t., ih; c=ch; j = 2,40 Hz ).

Meziprodukt 33

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1H-(1alfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(4-0-(3methyl-2-butenyl)-2,6-dideoxy-beta-D-allopyranoayloxy)me thyl/-4-f ormy 1-4, 4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thyl3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Suspenze 1,0 g Meziproduktu 10, jehož příprava je popsána výše, a 600,0 mg tributyIstanniumoxidu, ve 150,0 ml vysušeného toluenu, byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem v baňce opatřené Dean-Starkovým kondenzátorem po dobu 2,0 hodin ( bylo odstraněno 25,0 ml azeotropické směsi) . Po ochlazení reakční směsi na

- '107 teplotu místnosti bylo postupně přidáno 276,0 ^ul

2-methyl-4-brom-2-butenu a 2,40 ml 1M roztoku tetra'butýlambhiúmflubridú^- v tetrahydrof uranu a' vzniklá' ' ' reakční směs byla zahřívána na teplotu 50°C po dobu 24,0 hodin. Po odpaření rozpouštědel byla získána surová látka, která byla zpracována urychlenou chromatografií za použití směsi ethylacetát-hexany (ΐ : 20ζ 1 : 15 s 1 : 10), jako elučního činidla.

Bylo získáno 770,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě pěny ( výtěžek 69% ).

¹H-N5ÍR (CDČ1₃):

“ delta 9,73 ( s,*_t 1HJ' CHO);. 7,50 - 7,20 ('m.;i0H;2Ph );

6,98 ( a.;iH;CHPh₂); 6,05 ( d.d.;iH;H2; J = 1,50 a 3,30 Hz ); 5,33 ( a.; ih; och₂gh= ); 4,64 ( d.a.;ih;hi J = 2,10 a 9,60 Hz ); 4,20 ( m.; 1H*,H-3'); 4,25- 3,95 ( m.; 3H;0CH₂C= +8aCH₂); 3,75 - 3,65 ( m.;2H;H-§í+8a GH₂); 3,03 ( d.d*.; 1H;H-4'; J = 3,30 a 9,60 Hz ).;3,75 ( t.;iH;Hi;j = 3,90 Hz ); 2,44 ( d.;iH;oH;j = 2,10 Hz).

Meziprodukt 34

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(4-0-((E)

- 2-butenyl-)-2,6-dideoxy-3-0- (methylthio)-thiokarbonyl-be ta-D-allopyranoay loxy )-me thy l/-4-f ormyl-4,4a, 5,6, 7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-( 1-methylethyl)-1,4methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku chlazenému roztoku 1,0 g Meziproduktu51, jehož příprava je popsána výše, ve 20,0 ml bezvodého tetrahydrofuranu, bylo přidáno v atmosféře dusíku po malých

Částech 0,156 g hydridu sodného a katalytické ,množství

108 imidazolu. Po odstranění ledem-chlazené lázně byla vzniklá reakční směs míchána při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny. Poté bylo ku směsi přidáno postupně

0,58 ml sulfidu uhličitého a 0,80 ml methyljodidň.

Jakmile byla reakce ukončena ( kontrola pomocí chromátografie na tenké vr\stvě), byla surová směs nalita do 400,0 ml ethylacetátu 8 poté byla\^erušena přidáním 500,0 ml 1N vodného roztoku chloridu amonného. Oddělená organická fáze byla poté postupně promyta s 200,0 ml 1N roztokem kyseliny chlorovodíkové; 5%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a se 200,0 ml solanky, poté vysušena bezvodým síranem sodným, zfiltrována a za vakua byla zahuštěna.

Zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi dichlormethan-hexan ^kí (6:4), jako elučního činidla.

Bylo získáno 1,04 g žádané^ v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě, bíle, zbarvené pěny, ¹H-NMR (CDC1₃):

delta 9,73 ( s.;iH;CHO ); 7,45 - 7,26 (m.;i0H; 2Ph);

6,98 ( s.;ih; cHPh₂ ); 6,23 ( d.d.; ih;h-3';j = 3,00 a 6,30 Hz ); 6,05 ( d.d.; 1HJH-2; J = 1,50 a 3,30 Hz);

5,75 - 5,40 ( m.J 2H',CH=CH )*,4,55 ( d.d.; 1Η*,Η-Γ;

1,80 a 9,30 Hz ); 4,05 - 3,80 ( m.', 4H*,8a-CH₂( 1H)*,

CH₂CH=CH(2H) a H-5*); 3,75 (d.JIH; 8a-CH₂( 1H);J 9,30

Hz );. 3,20 ( d.d.; 1H; H-4';J = 3,00 a 9,30 Hz )-,2,72 ( t.; ih;h-t;j = 3,90 Hz ); 2,58 ( s.; 3H );cHjs);i,68 ( m.;3H- CH₃CH=CH )..

Meziprodukt 35

109 Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1H-(1alfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(2,6-diděoxy-3-0- (mě thylthíó')-th'i okarbony 1-4-O-propargyl-be ta- D-allopyranosyloxy )-me thyl/-4-formy1-4, 4a, 5,6,7,7a ,8,8aoktahydro-7-me thy 1-3-( 1-methylethyl)-1,4-methan-sindacen-3a-( 1H)-karboxylové

Ku chlazenému roztoku 1,25 g Meziproduktu 32, jehož příprava je popsána výše, ve 25,0 ml bezvodého tetrahydrofuranu, bylo přidáno v atmosféře· dusíku po malých částech 0,20 g hydridu sodného a katalytické množství imidazolu. Po odstranění ledem chlazené lázně byla vzniklá reakční směs míchána při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny.Poté bylo ku směsi přidáno postupně 0,60 ml sulfidu uhličitého a 0,75 ml methyljodidu.

Jakmile byla reakce ukončena ( kontrola chromatograf ií na tenké vrstvě) , byla surová směs nalita do 400,0 ml ethylacetátu a reakce byla poté přerušena přidáním 500,0 ml 1N vodného roztoku chloridu amonného. Oddělená organická fáze byla poté postupně promyta se 200,0 ml 1N roztoku kyseliny chlorovodíkové; 200,0’ml 5%ního vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a se 200, 0 ml solanky,'poté byla vysušena bezvodýrn síranem sodným, zfiltrována a za vakua byla zahuštěna.

Zbytek byl zpracován urychlenou chromatografii na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát( 97 : 3 a 95 : 5 ) , jako elučního Činidla.

Bylo získáno 1,20 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-WS ( CDC1₃):

delta 9,73 ( s.; ΙΗ’,ΟΗΟ )*, 7,45 - 7,26 ( m.;iOH;2Fh);

6,99 ( 3.; 1H;CHPh₂); 6,28 ( k.;iH*,H-3';j = 3,30 Hz ); 6,06 (d.d.; 1H;H-2;j = 1,50 8 3,60 Hz ).;. 4,57 < d.d.;

110 ih; h-i';j = 1 ,βο a 9,30 Hz ); 4,19 a 4,17 (2d.;2^ CH₂C=CH;j = 2,40 Hz ); 4,03 a 3,70 (2d.J 2H;8a-CH₂;

J = 9,30 Hz ); 3,86 ( d.k.; ih;h-5'; J =6,30 a 9,30 Hz ); 3,50 ( d.d.; 1H; h-4';j = 3,00 a 9,30 Hz ); 2,73 ( t.; ih;h-i; j = 3,90 Hz ); 2,58 ( ₃.; 3h;ch₃s );2,42 ( t.; ih; οξ ch ).

Meziprodukt 36

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /IR—(1 alfa,3a be ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(4-0-(3taethyl-2-butenyl)-2,6-dideoxy-3-0-( methylthio)-thiokarbonyl-beta-D-allopyranosyloxy)-methyl/-4-formyl - $· 4,4a,5,6,7,7a,8,8s-oktahydro-7-me thy1-3-(1-me thylethyl) -1,4-methan-s-indacen-3e-(1H)-karboxylové

Ku rozt.oku 770,0 mg,Meziproduktu 33, jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu, bylo přidáno při teplotě 0°C v atmosféře du- v. siku 105,0 mg hydridu sodného a 30,0 mg imidazolu.Poté',.. co byla reakční směs míchána po dobu 1,0 hodiny při teplotě místnosti, bylo postupně přidáno 300,0 ^ul sulfidu uhličitého a 311,0 yul methyljodidu.Poté byla směs ještě 1,0 hodinu míchána a reakce byla ukončena přidáním 50,0 ml 0,1N roztoku chloridu amonného, a směs byla vytřepána 2x se 200,0 ml ethylacetátu,poté byla vysušena síranem hořečnatým a následně zahuštěna.

Získaný zbytek ve formě látky olejovíté konzistence byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetét-hexany ( 1 :25 a 1 i 20), jako elučního činidla.

Bylo získáno 780,0 mg žádané, vrjiadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny( výtěžek 90%).

111 ¹H-NMR (CDCl-j):

-------delta -9,-7-3 --(- s.; THjGHO );--7,-50 - 7,-20-( m.; 10H; 2 -PM)-;.......

6,26 ( m.; 6,06 ( d.d.; = 1,20 8 3,30

Hz); 5,26 ( a.; 1HJ OC^GH^ ); 4,54 (¹ d.d.; ih;h. Γ;

J - 1,80 a 9,60 Hz ); 4,10 - 3,75 (. m.;4H;8aCH₂+0CH₂C +H-5*)*, 3,69 ( a.; íh; 8aCH₂;j = 9,60 Hz ); 3,18^-(d.d.; íh; h-4*; j = 3,00 a 9,30 Hz ); 2,72 ( t.; íh; hi;j =

3,90 Hz); 2,58 ( a.; 3h;sch₃). '

Meziprodukty 37 a 38

I*

a) Příprava difenylmethylesteru kyseliny., /1R-( 1alfa._ř

3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-//1S,

4E, 7R, 9R/ - 2,8-di oxa -4-e thy1-9-me thy 1-ci s-bi cyklo/3.4.0./-non-7-y 1-oxy-me thy l//-4-f ormy 1-4.4a, 5,6,7,

7a, 8,8a-oktahydro-7vme thy 1-3- (1 -methylethyl)-1,4me than-s-inda cen-3a- (1H) -karboxylové

b) difenylmethylesteru kyseliny /1R-( 1a,3ab,4b,4ab,

7b,7aa,8ab)/-8a-//1S,4S,7R,9R/-2,8-dioxB-4-ethyl9-me thy 1-ci s-bi cyklo-/3.4.0. /-non-7-y1-oxy-me thyl//

- 4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3(1 -methyle thyl )-l, 4-me than-s-inda cen-3a-( 1H)-karboxylové

Roztok 1,04 g Meziproduktu 34, jehož příprava je popsána výše, v 50,0 ml vysušeného toluenu, byl odplynován v proudu ^argonu po dobu 60 minut a poté byl zahříván za refluxu pod zpětným chladičem po dobu 1,0 hodiny. Poté bylo k reakční směsi přidáno 0,55 ml tributylstanniumhydridu a katalytické množství azobis(isobutyronitrilu) reakční směs byla dále zahřívána za refluxu pod zpětným

112 chladičem dalších 20,0 minut.Poté byla směs ochlazena a zahuštěna.

Zbytek byl zpracován 2x urychlenou chromatografií na silikagelu nejprve za použití hexanu a poté směsi hexan-ethylacetát ( 94 : 6 ), jako elucních činidel.

Bylo získáno

220,0 mg Meziproduktu 37, ve formě bíle zbarvené pěny ( Rf = 0,32; hexan-ethylacetát /4 : 1 a dále bylo získáno

444,0 mg Meziproduktu 38, ve formě bíle zbarvené,pevné látky ( Rf - 0,27, hexan-ethylacetát /4:1/)

Meziprodukt 37 ¹H-NMR (CDC1₃):

delta. 9,75 ( s.| IHJCHO ); 7,45 - 7,26 (m.JlOHjZ Ph);

6,99 ( s.; ih; CHPh₂); 6,06 (d.d.; 1H; H-2;J = 1,50 a

3,60 Hz ); 4,50 ( d.d.; 1HJ H-7'; J = 2,70 a 6,90 Hz); 4,06 a 3,38 ( 2 d.d.; 2H;CH₂-3'; J = 8,40 a 7,50 Hz); 4,01 a 3,65 ( 2d.J 2HJ 8a-CH₂;j = 9,00 Hz ); 3,71 (d.d; ih;h-i';j = 7,50 a 9,00 Hz ); 3,34' (ui.;ih;h-9'); 2,75 ( t.; ih; h-i ); 0,93 ( t,; 3h;ch₃'ch₂ ; j = 7,50 hz ).

Meziprodukt¹ 38 ¹H-NMR (CDC1₃):

delta 9,74 ( s.J1H; CHO);7,45 - 7,26 ( m.;i0H;2Fh);

6,99 ( s.JIH; CHPh₂);6,04 ( d.d.; 1H;H-2JJ = 1,20 a

3,60 Hz ); 4,73 ( t.j 1HJH-7';j = 3,0 Hz )J 3,92 (n.J.

113

2h;8s-ch₂(ih) s ch₂-3'(ih); 3,75 (m.; 2h;h-9^zs h-i );

3,62 ( a.; ih; 8s-ch₂;j = 9,30 Hz ); 3,48 ( m.; ih;

ch₂-3'(ih); 2,71· (-tT; th; h-i;,j-= 3,60 h_z-·);.....2,55 a - -2,23 ( 2m.; 3H;h-4'; H-5'a 3-CH ); 0,96 (m.;3H;CH₃CH₂).

Meziprodukty 39 a 40

Příprava difenylme thyle steru kyseliny /1R- (1 a _f3íÉfl?í4b.

4a b, 7b, 7aa, 8ab) /_r8a-/ (1S, 4R, 7B, 9R)-2,8-dioxa-4- (1 me thyle thyl)-9-me thyl-cis-bycyklo-/3»4.0. /-non-7-yloxyme thyl) /-4-f ormy 1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7methyl-3-d- methyle thyl)-1,4-aethán-s-indacen-3a-(1H)karboxylové a

difenylme thy lesteru kyseliny /1R-( 1a,3ab,4b,4ab.,7b,7aa, 8ab) /-8a-/ (1S,4S,7P,9P)-2,8-dioxa-4- (1 -me thy le thyl)-9me thy1-ci s-bicyklo-/3.4.0, /-non-7-yl-oxyme thyl/-4-formy1 -4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7 -methy 1-3- (1 -me thyle thyl) -1,4-methan-s-indacen-3a-(IH)- karboxylové

Roztok 780,0 mg Meziproduktu 36, jehož příprava je popsána výše, v 50,0 ml vysušeného toluenu, byl odplyňován v proudu argonu po dobu'1,0 hodiny, a poté byl zahříván za refluxu pod zpětným chladičem. Poté bylo k reakční směsi přidáno 367,0 /Ul tributylstanniumhydridu a katalytické množství ( 20,0 mg) a,a'- azoisobutyronitrilu a reakční směs byla dále zahřívána pod zpětným chladičem ještě 2,0 hodiny. Poté byla směs ochlazena na teplotu místnosti a rozpouštědlo bylo odstraněno»

Získaný zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití aměsi hexan-ethylacetát ( 25 i 1 J 20 : i; 18 : i; a 15:1).

114

Bylo získáno

280,0 mg Meziproduktu 39'( výtěžek 41%) a

dále bylo získáno

300,0 mg Meziproduktu 40 ( výtěžek 44% ),

Obajaeziprodukty byly získány ve formě látky olejoví tě konzistence.

Rf Meziproduktu 39-0,50 a

Rf Meziproduktu 40 =0,30 ( za použití směsi hexany-ethylácetát/objem/objem/ : l)

Meziprodukt 39 •H-NMR (CDCI₃)-: ......

delta 9,75 (s.J IH; OHO ); 7,50 - 7,20 (m.JlOH; 2Ph );

6,99 ( s.; 1H;CHPh₂); 6,05 ( d.d./IH; H2; J = 1,20 a,

3,60 Hz )*_ř 4,57 (d.d.; 1H;H-7*/j = 2,70 a 5,70 Hz ); 4,05 - 3,90 ( m.; 2HJH-3't 8aCH₂); 3,73 ( d.d.; 1HJ H1*; J = 8,10 a 9,30 Hz ); 3,62 ( d.; IH* 8aCH₂J J = 9,0 Hz ); 3,50 - 3,45 ( m.J 2H;H-3*+ H-9'); 2,74 ( t.;iH; Hi; j = 3,90 Hz ).

Meziprodukt 40 ¹ H-NMR (CDCip?

delta 9,74 ( s.J IHJCHO ); 7,50 - 7,20 ( m.;i0H;2 Ph);

6,99 ( s.; 1H;CHPh₂); 6,03,( d.d.; 1H;H2;j = 1,50 a 3,30 Hz ); 4,74 ( t.; ih;h-7';j = 3,00 Hz ) ; 4,00 -3,80 (m.; 8aCH₂+H-9'+ H-3'); 3,73 < d.d.; 1H;H-1,' J = 3,30 a 4,50

115

Hz 3,63 ( a.;. ih;8sch₂; j = 9,60 Hz ); 3,52 (d.d.; ih; h-3';j - 8,10 a 10,50 Hz ); 2,70 ( t.;in;Hi;j =

........-- 3-,-90- -Hz-).- —.....- -------------------—......- -.............

Meziprodukt 41

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1slfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-//lS,7R,9R/2,8-di oxa-4-me thylen-9-me thy 1-c i s-bi cyklo-/3.4.0./-non7-yl-oxy-me thyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro7-me thyl-3-O-methyle thyl )-1,4-methan-s- indacen-3a(1H)-karboxylové ‘ , - - Roztok 1,02 g Meziproduktu 35, jehož příprava je popsána výše, ve;· 50y0*mlil7yaušenéhO'(toluenu, byl odplyňpván v proudu argonu za použití refluxu po dobu 1,0 hodiny. Poté bylo k reakční směsi přidáno 0,55 ml tributylstanniumhydridu a katalytické množství azobís ( isobuyronitrilu), a reakční směs byla dále zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem ještě 1,0 další hodinu. Poté byla směs ochlazena a zahuštěna.

Zbytek byl zpracován22x urychlenou chromatografií na silikagelu za použití nejpr^ve hexanu a poté směsi hexan-ethylacetát ( 94 : 6), jako elučního činidla.

V nadpise uvedenáj žádaná, čistá sloučenina, byla získána v množství. 380,0 mg ve formě bíle zbarvené pěny. ^-NMR ( CDCl^):

delta-9,75 ( s.; IHJCHO 7,44 - 7,28 ( m.*, 1OH^e,2Ph ); 6,99 ( s.; ih; chph₂); 6,05 ( d.d.; ih;h-2;j = 1,50 a

3,60 Hz ); 5,05 a 5,02 ( 2 d.d.; 2HJ CH₂=C; J = 2,40 a

4,80 Hz ); 4,49 - 4,31 ( m.; 3HJH-7'a CH₂-3');3,95 a

116

3,66 (2d.; 2H; 8a-CH₂;j = 9,30 Hz ); 3,80 (d.d.; IHJ Η-Γ;σ = 7,50 a 9,30 Hz ); 3,26 ( m.; 1h;H-9'); 3,02 ( m.; ih; h-5'); 2,76 ( t.; ih;h-i;.j = 3,90 Hz );

¹³C-m· (CDC1₃):

delta 204,40 ( CHO); 171,00 ( COODPM ); 148,80 a 148,30 (C-3 a C-4')J 139,50 a 139,40 ( 2 CIV Ph); 130,70 (C-2); 128,60; 128,50*, 128,20; 128,00; 127,70 a 127,00 (2x 5 CH(pH)) J 103,90' (CH₂=C); 98,30 ( C-7'); 80,40 a 69,50 ( 0-1'a 0-9'); 78,50 (CfíPh₂); 73,90 a 70,60 (C8a-C a C-3'). .

Meziprodukt 42

Příprava difenylmethyleateru- kyseliny /1R-(1alfa,3a he ta,4be ta,4abe ta,7beta,7aalfa,Sebe ta)/-8a-//1S,7E,9R/ -2,8-dioxa-9-methyl-4-methylen-3-oxo-cis-bicyklo-/3.4.

O./-non-7-y1-oxy-me thyl/-4-formy 1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a- _; oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-sindgcen-3a-(1H)- karboxylové

Ku roztoku 0,23 g oxidu chromového a 0,37 ml vysušeného pyridinu ve vysušeném dichlormethanu (20,0 ml)^ bylo přidáno za stálého míchání při teplotě 0°C 0,15 g Meziproduktu 41, jehož příprava je popsána výše, ve 3,0 ml vysušeného dichlormethanu. Vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě místnosti.ještě po dobu 6,0 hodin a poté byla přímo zpracována urychlenou chromatografií na silikagelu za použití dichlormethanu jako elučního činidla.

Bylo získáno 65,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle ..zbarvené pěny.

117 ¹H-NMR (CDCl-j):

- delta 9,74- '·(-3·.-;·-1η;-·0ΗΟ'')';'7;44-' 7’,25^_(m.-; ΊΟΗ; 2ΡΕ) ;’

6,98 ( s.; ih; CHPh₂);. 6,37 a 5,64 (2d.J 2H*_r CH^C );.

6,04 (d.d.; 1H;H-2;j = 1,20 a 3,30 Hz ); 4,47 ( d.d.;

ih; h-7');j = 3,60 a 6,0 Hz ); 4,29 (m.; ih;h-i*); 4,00 a 3,64 ( 2d.; 2H; 8a-CH₂; J = 9,30 Hz ); 3,40 (a.; 1H;

h-5');. 3,30 ( a.; ih; H-9'); 2,73 ( t.; ih;h-i;j = 3,90 Hz ).

Meziprodukt 43

Příprava difenylme.thyle.s-teru.kyseliny·/1R-(lalfa,3a beta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8ebe ta.) /-8a-//1S, 7R, 9R/-2,8- dioxa-9-methyl-4-oxo-cis-bicyklo-/3.4,0/-non7-yl-oxy-me thyl/-4-formy1-4.4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro7-me thyl-3- (t-ae thy le thyl) -1,4-me than-s-indacen-3a- (1H ) karboxylové

P o s t u ρ A

Ku ledea chlazené směsi 105,0 mg Meziproduktu ·

41t jehož příprava je popsána výše, a 43,0 ag Nmethylmorfolin-N-oxidu ve směsi aceton-voda ( 9,0 ml), poměr 8 : 1, bylo přidáno 0,075 ml 2,5%ního roztoku ( hmotnostní procenta) oxidu osmičelého ve 2-methyl2-propanolu. Po odstavení ledem chlazené lázně byla reakční směs míchána při teplotě místnosti po dobu 24,0 hodin. Reakce byla poté ukončena bisulfitem sodným a reakční směs byla míchána po dobu 1,0 hodiny. Po skončení této operace bylo rozpouštědlo odpařenoa získaný surový zbytek byl neředěn še 100,0 ml ethylacetátu a poté byl postupně promyt se 30,0 ml vody; 30,0 al

118 roztokem kyseliny chlorovodíkové; 30,0 ml nasyseného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a nakonec se 30,0 ml vody, poté byl roztok vysušen a odpařen.

Surový produkt byl rozpuštěn v 6,0 ml směsi dioxan-vodaí 2 : 1 ) a poté byl ochlazen na teplotu 0°C. Po přidání 0,13 g jodistanu sodného ( po malých částech) byla reakční směs míchána po dobu 6,0 hodin při postupném zvyšování teploty z 0°C na teplotu místnosti. Poté byla směs zahuštěna a surový produkt byl vytřepán mezi 60,0 ml vody a 60,0 ml ethylacetátu.

Po oddělení byla organická fáze vysušena a zahuštěna a takto získaný zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát ( 85 : 15), jako elučního činidla.

Bylo získáno 0,045 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

P o s t u p BKu roztoku 0,43 ml anhydridu kyseliny trifluoroctové ve 2,50 ml vysušeného dichlormethanu byl přidán v atmosféře dusíku při teplotě minus 60°C a za intenzivního míchání dimethylaulfoxid ( 0,22 ml ). Po 10,0 minutách byl k tomuto roztoku přidán roztok 470,0 mg Meziproduktu 79, jehož příprava je popsána dále, ve 2,50 ml vysušeného dichlormethanu a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě minus 60°C po dobu 2,0 hodin,Poté bylo přidáno během 10,0 minut ku směsi 1,40 ml triethylaminu ( po kapkách) a teplota byla ponechána, aby samovolně vystoupila ns minus 20°C. Po přidání 20,0 ml vody byla reakční směs míchána při teplotě míst nosti po dobu 1,0 hodiny a poté byla vy třepána, a.í vodné vrstva byla extrahována se 100,0 ml dichlormethanu.

119

Spojené organické fáze byly promyty se 100,0 ml

1N naztoku kyseliny chlorovodíkové; se 100,0 ml naeycenéh.'o~'vodného - roztoku- -hydr ogenuhli č i-tanu- sodného-a-----se 100,0 ml solanky, poté byly vysušeny síranem hořečnatým a zahuštěny do sucha na produkt olejovité konzistence, který byl rozpuštěn v dichlormethanu a přes noc byl reagován s 1,0 ml triethylaminu.

Po odstranění rozpouštědel byla výsledná látka olejovité konzistence zpracována urychlenou chromátografií na silikagelu, 2a použití směsi ethylacetáthexan ( 1 : 25 J 1 : 20 a 1 : 15), jako elučního činidla.

Bylo získáno 400,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ( výtěžek 86%').

¹H-NMR (ODCIZÍ delta 9,71 (s.;1H;CH0 ); 7,44 - 7,26 (m.;i0H;2Ph ); 6,97 ( s.; ih; chp&₂); 6,06 ( d.d.; ih; h-2;j =±,5o a 3,60 Hz );· 4,18 - 4,11 (m.; 3H; H-7';H- 1'; a H-3' ( IH); 4,00 a 3,62 ( 2d.; 1H; 8a-CH₂;j = 9,30 Hz );' 3,91 (d.; 1HJH-3'; J = 18 Hz ); 3,30 ( m.; ih;

2,85 ( s.t.; ih; h-5*;j = 7,so Hz ); 2.,75 (ϊ.;ιη;η-ι; H-T,J = 3,90 Hz).

Meziprodukt 44

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(talfa,3abeta,

4beta,4abe ta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-//4-0-( trans-2butenyl)-6-de oxy-be ta-D-altropyranoayloxy/-me thyl/-4formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydno-7-me thy1-3-(1-methyl ethyl)-1,4-methan-s-indaden -3a-(lH)- karboxylové

120

Suspenze 5,0 g Meziproduktu 1, jehoslpříprava je popsána výše, a 2,30 g dibutylstanniumoxidu ve 300,0 ml vysušeného toluenu^byly zahříváng zar.refluxu pod zpětným chladičem v baňce opatřené Dean-Starkovým kondenzétorem v atmosféře dusíku po dobu 3,0 hodin.Po ochlazení reakční směsi na teplotu 60°C byly postupně přidány: molekulové síto (ve formě prášku; 4& );2,40 ml krotylbromidu a 23,0 ml 1M roztoku tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu,Ta to směs byle zahřívána na teplotu 60°C po dobu 1,0 hodiny a poté ještě 12,0 hodin ponechána stát v klidu při teplotě místnosti.

Po odpaření rozpouštědla byl zbytek chromBtografován na silikagelu za použití směsi počínaje hexanem až ku směsi hexan-aceton (9:1), jako elučního Činidla, Lij Bylo získáno 3,20 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle zbarvené pěny.

^]Η-ΝΜΡ ( CDCl-j):

s,73 ( s.;ih;cho ); 7,45 - 7,20 ( m.; ioh; 2?h);6,98 ( s.; ih; cHPh₂); 6,05 ( d.d.; ih;h-2;j = 1,50 a 3,60 Hz ); 5,80 - 5,6.5 ( m.', 1H*,CH=CH); 5,65 - 5,50 ( m.J ih; ch=ch); 4,63 (d.;iH;H-r;j = 0,90 Hz); 4,20 - 3,80 Ga.; 5H; H-2';h-3 8aCHa a O-CH₂-C=C); 3,80 - 3,65<m.*, 2H‘, h-5'); 8aOHb ); 3,6O ( d.d.; 1HJH-4,'j = 3,0 a 9,30; Hz); 2,74 ( t..; ih;h-i;j = 3,90 h_z ); 1,71 (a.a.;3H; GH₃-C=C ; J = 1,20 a 6,30 Hz ).

Meziprodukty 45 *,46 a 47

121'

a) Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa, _____3abe ta, 4be ta., 4'abe ta, 7beta., Tsalf a, .8abeta.)./-8a-//2,...

3-anhydro-4-0- C trans-2-butenyl )-6-deoxy-beta-Dmannopyranosy loxy/-me thyl/-4-f ormyl-4, 4a, 5,6,7,7a,

8,8a-oktahy dro-7-me thy 1-3- (1 -me thy le thy 1)-1,4-methan-s-indacen-3a-( 1H)-karboxylové a

b) difenylmethylesteru kyseliny /1R-( 1alfa,3abeta,4 beta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta) /-8a-/ (1S, 4S, 6S,

7R,9R)-2,8-dioxa-4-e thyl-6-hydr oxy-9-me thy1-cis.JT * biuyklo-/3.4.0/-non-7-yl-oxy-me thyl/-4-formyl-4,

4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7 -me thy1-3- (1 -me thylethyl )—1,4-methan-s-indacen-3a- (1H) -karboxy lové a

c) difenylme thy le steru kyseliny ./1R-(1a,3ab.,4b,4ab, ·

7b, 7aa, 8ab) /-8a-/ (1S, 4R, 6S, 7R, 9R) -2,8-di oxa-4e thy1-6-hydroxy-9-me thyl-cis-bicyklo-/3.4.0/-non7-yl-oxy-me thy l/-4-f ormyl-4,4a,5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3- (1 -me.thyle.thyl) -1-, 4-me than-sindacen-3a-(1H)-karboxylové

Meziprodukt 44 (1,225 g),jehož příprava je popsána výše;1,38 g trifenylfosfinu a 0,36 g imidazolu byly za stálého míchání zahřívány za refluxu pod zpětným chladičem ve 35,0 ml toluenu. K této reakční směsi byl během 2,0 hodin přidán po kapkách roztok 0,89 g jodu v 15,0 ml toluenu a poté je Stě 0,20 g te trabutylamonium jodidu, a reakční směs byla zahřívána za refluxu pod zpětným chla dičem ještě další 1,0 hodinu; poté byla ochlazena a vytřepána mezi 100,0 ml ethylacetátu a 50,0 ml 1N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové.

Oddělené organická fáze byla poetupně promyta s 1N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, vodným roztokem disiřičitanu sodného, vodou a solankou

122 a poté byla vysušena síranem sodným, zfiltrováif/a za vakua byla zahuštěna.

Zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát (7:1), jako elučního činidla.

Byla získána směs 1,08 g dvou sloučenin v poměru 2 : 1, s velmi podobným Rf, t.j, 0,40 (hexan-ethylacetát/ 4:1/).

Výše zmíněná směs dvou sloučeniny byla rozpuštěna ve 25,0 ml vysušeného toluenu a vzniklý roztok byl po dobu 1,0 hodiny odplyňován v proudu argonu a poté byl zahřát k refluxu pod zpětným chladičem.Poté bylo k roztoku přidáno 0,36 ml tributylstanniumhydridu a směs byla zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem ještě 20,0 minut.Po ochlazení byly k reakční smě,si přidány 2,0 ml tetrachlormethanu a směs byla míchá-,·, na při;teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny.Poté byl ku směsi* přidáván-roztok.- jodu v etheru tak dlouho,pokud přetrvávalo sotva patrné zabarvení.

po odstranění rozpouštědel za vakua byl zbytek vyjmut do diethyletheru a poté několikráte promyt s nasyceným vodným roztokem fluoridu draselného, až už nebylo patrné vysrážení tributylstanniumfluoridu.

Oddělená vodná fáze byla vysušena a odpařena a zbytek byl zpracován 2x urychlenou chromatografií na silikagelu, za použití směsi dichlormethan-ethylacetát 95 : 5) a ( 9 : 1), jako elučního činidla.

I3ylo získáno . ,

230,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny,označené a), t.j. Meziprodukt 47 ( Rf = 0,80 J dichlormethan-ethylacetát /9:1/) a

123

275,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny,označené b), t.j. Meziprodukt 45__ ( S£ - 0,50; dichlormethan-ethylacetát /9 : 1/) a

200,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny,označené c), t.j. Meziprodukt 46 ( Rf - 0,40J dichlormethan-ethylacetát /9 : 1 /)*

Meziprodukt 45 (GDC1₃): ...

9_r72 ( s.JIHJCHO ); 7,46 - 7,23 ( m.| 10HJ 2Ph);.6,98 ( 3..;.ih; οηρη₂).; 6,05.( d.d.j. ih;h-2*j - 1,20 a 3,30 Hz ); 4,61 ( d.; ih;h-7';j= 3,30 Hz); 4,03 (d.jiHj 8a-CHaJJ - 9,30 Hz); 3,90 (d.d.;iHJHa-3J = 6_f9O a 8,70 Hz )J3,82 - 3,69 (m.J3HJH-6'jH-l'; a H-9'^) J

3,66 (d.J1H; 8a-CHb;j = 9,60 Hz )J3,61 (d.d.JIHJHb3';J = 6,60 a 8,40 Hz)J2,69 ít.J1H;H-1 ;j = 3,90 Hz)y

Meziprodukt 46 ¹H-NSR (CDC1₃):

delta 9,74 (s.JIHJCHO )J7,45 - 7,22 (m.J 10H;2Ph)J

6,99 ( 3.;iH?CHPh₂); 6,06 (d.d.;ih;h-2;J = 1,50 a

3,60 Hz); 4,50 ( d.; ih;h-7'j j = 2,10 Hz );4,io 4,02 ( m.;2H‘, 8aCHa a Ha-3')J 3,84 (d.d.; IHJ.H-Γ; J = 7,50 a 8,70 Hz )J 3,76 - 3,66 ( m.J 2H; 8aCHb a H-6'); 3,50 - 3,38 ( m.J 2H;H-9'a Hb-3'); 2,72 ( t.;iH; h-i;j = 3,90 Hz );o,94 (t.;3H;cH₂-cH₃;,j =

7,50 Hz ).

124

Meziprodukt 47 ¹H-NMR ( CDC1₃): .

delta 9,75 (s.;ih; CHO ); 7,45 - 7,20 (m.;i0H;2Ph);

6,99 ( a.;iH;CHPh₂);6,08 ( d.d.; 1H*,H-2; J = 1,50 a

3,60 Hz ); 5,85 - 5,70 ( m.;iH;CH=CH )J5,65 - 5,50 ( ®.;ih;ch=ch ); 4,67' (s.;ih;h-i'); 4,20 - 4,05 (m.; 2H;0CHa-G=C a 8aCHa ); 4,05 - 3,90 (m.J1H;0CHb-C=C)J

3,78 ( d>; 1H;8aCHb;j * 9,0 Hz); 3,30 - 3,15 (m.; 3H;H-3*;H*-4*a H-5'); 3,12 (d.; 1HJH-2';J « 3,90 Hz );

2,86 ( t<;1H;H-1 ;.ď = 3,9O Hz).

' *>

Meziprodukt 48 ,· ^?Λί·

Příprava.difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a beta.,4beta ,Aabeta,7be ta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(6-deoxy4-0-me thy 1-b e t a -D-a 11 r opy r a no sy 1 oxy) -me thy 1 /-4 -f ormy 1-^· 4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thy 1-4- (1 -me thyle thy l_f) -1 ,,4-methan-a-indacen-3a-( 1H)-karboxylové

Roztok 10,0 g sordarinu ve 150,0 ml dichlormethanu byl reagován s roztokem 85,0 ml difenyldiazomethanu ( 0,35 M )^ ^i^^sn^to¹⁸?^kapkách. Vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 24,0 hodin. Po odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku byl získaný zbytek přečištěn urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát (4 : 1 ) a ( 2 : 1 ), jako elučního činidla.

Spojené frakce byly odpařeny a bylo získáno 11,80 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

125 ¹H-NER (GDCLj):

del-t-a -10-,00- (-3 éý1 HyGHO—)-J -7,63-(--m.· ;1 OHJ2Ph -);7;26-----( ₃.;iH;cHPh₂); 6,30 ( d.d.;, ih;h-2;j = 1,20 a 3,30 ' Hz )*4,92 ( d.;iH; H-ť;j = 0,90 Hz );4,84 ( t.;iHJ H-3\; J = 3,30 Hz );4,03 a 4,35 ( 2d;.2H;8aCH₂;J =

9,00 Hz ); 3,88 ( β.;ιη;η-2*;_:);. 3,7o ( a.k.;iH;H 5';j = 6,30 a 9,30 Hz )-,3,41 ( s.;3H; 4'- 0M'e);3,20 ( d.d.;iH;,H-4';j = 3,30 a 9,00 Hz )-,2,75 ( t.;iH;H-1).

Meziprodukt 49

a) Příprava difenylmethylesteru'. kyseliny /1R-G alf a, 3abe ta, 4be ta, 4sbe ta, 7be ta, 7aa lf a ,.8abe ta) /-8a-/ (6de.oxy-4-0-me thyl-2,3-di-0-t osy 1-be ta-D-altropyranosyloxy) -me thyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8aoktahydira-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1,4-me thans-inda cen-3a-( 1H)-karboxy.lové a

b) difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3abeta,_r 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta) /-8a-/ (6-deoxy-4-0-me thy1-2-0-tosy1-be ta-D-altropyranosyloxy)me thy l/-4-f ormy 1-4.4a, 5,6,7,7a,8,8a-oktabydro-7me thy 1-3- (1 -me thyle thyl) -1,4-me than-s-indecen3a-(1H)-karboxylové

Va 30,0 ml vysušeného pyridinu byly rozpuštěny

2,0 g Meziproduktu 48, jehož příprava je popsána výše, a 500,0 mg 4-dimethylaminopyridinu a k tomuto roztoku byli přidán po kapkách další roztok, připravený rozpuštěním 960,0 mg tosylchloridu ve 20,0 ml vysušeného . pyridinu.Vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 4,0 dní. Po odpaření rozpouštědla

126 za vakua zbyl žlutě zbarvený zbytek, který byl dále zpracován chromatografií na sloupci silikagelu, za použití směsi hexan-ethylacetát ( 4 : 1 ) a (1 : 1)/ jako elučního činidla.

Bylo získáno

1,65 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, označené a), ve formě bíle zbarvené pěny, o vyšším Rf a

1,17 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, označené b), ve formě bíle zbarvené pěny , o nižším Rf

Sloučenina, označená a).

'h-NMR (CDC1-):

delta 9,71 í a.J 1H;CHO);.7,85 - 7,91 (m. μπι ortho-Ts); _;i. ,

7,26,.--7,41 ( m.; . 14H;.me.ta-Ts a 2Ph ); 6,95 (a.JIH; . ?

CO₂-CHPh₂.);· 5:,87-.( d.d.;iH;H-2*,J = 1,20 a 3,30 Hz);

4,92 (d.d.;iH;H-3';.J = 3,30 a 4,20 Hz )*,4,65 (d.d.; ...

1H;H-2'Í J = 1,20 a 4,50 Hz )J4,61 (d.;1H;H-1';J - 1,20:

Hz )J 3,50 a 3,94 ( 2d.j2H; 8aCH₂;j = 9,00 Hz )J3,88 ( d.k.pH; H-5';.J = 6,6O a 9,00 Hz )p,16 ( d.d.JIH;

H-4'f J = 3,00 a 9,00 Hz )*2,7Q ( a.; 3HJ4-OMe )J2,45 a 2,47 ( 2s.;6HJ2T3 ).

Sloučenina, označená b) ¹H—NMBS ( CDCIj):

delta 9,71 (s.JIHJCHO )^e,7,85 (m.;2H;ortho-Ts);7,26 - 7,41 ( m.;12H;meta-Ts a 2Ph )J 6,95. (s.;iH;CHPh₂);

5,87 (d.d.;iH;H-2JJ = 1,50 a 3,30 Hz); 4,61 (diJIH; Η-Γ;σ = 1,50 Hz )J4,55 (d.d.;iHJH-2';J = 1,20 a 4,20

JHz )J. 4,37 ( m.;iH; H-3'); 3,5O a 3,95 (2d.;2H;8aCH₂;

127

J = 9,00 Hz ); 3,70 ( d.k.;iH;H-5';j = 8,40 a 6,30 Hz); 3_, 23 _(d.d.; 1_H;H-4_'J = _3 ,_3.0 a 0,70. Hz JJ2.,_42,..(β._;.3Ημ... Ta’).

Meziprodukt 50

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /IS—(1alfa,3a beta, 4be ta, 4abeta, 7beta, 7aalfa, 8abeta) /-8a-/(2,3anhydro-6-de oxy-4-0-me thy 1-be ta -D-mannopyranosy loxy) me thy1-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktehydr o-7-me thyl3- (1 -me thyle thyl )-1., 4-me than-s-indacen-3a- (1H )-karboxylové

Ku 50,0 ml. bezvodého .-methanolu byl při chlazení na teplotu 0°C přidán sodík ( 0,50 g ) a poté roztok 670,0 mg Meziproduktu 49a) ve 20,0 ml vysušenéhÓ'í'dichlormethanu. Vzniklá reakční. směs^byla-poté míchána při teplotě, místnosti. po dobu 5,0' dní a poté. ještě 4,0 dny zahřívána za. refluxu;pod .zpětným' chladičem.Poté byla aměs zfiltrována a rozpouštědlo bylo odpařeno.Získaný zbytek byl· přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexan-ethylacetát ( 3 : 1),jako elučního činidla.

Bylo získáno 330,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR (CDC1₃):

delta 9,75 (s.;.1H;CHO);7,26 - 7,44 ( m. J 10H*,2Ph);6,99 ( s.;iH;C0₂CHPh₂);6,08 ( d.d.;iH;H-2;j = 1,50 a 3,00 Hz ); 4,68 ( 3.;ιη;Η-Γ);3,78 a 4,11 ( 2d.;2H;8aCH₂; J= 9,00 Hz );3,49 ( s.;3H; 4'-OMe )J3,26 (d.;iH;H2'); j = 3,90 Hz );3,18 h-5');3,i2 ( d.;a.;

128 = 3,60 Hz );3,08 ( mZ, 1HJH-4'V,2,86 ( m.;.1H; H-1*). Meziprodukt 51

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1fí-(lalfa,

3abe ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-/ (2,3anhydro-6-deoxy-4-0-methyl-beta-D-allopyranosyloxy)me thyl-/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7methy1-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a( 1H)- karboxylové

V 5,0 ml vysušeného dimethylformamidu byla nasuspendováno 25,90 mg suchého hydridu sodného a k

JTtakto vzniklé suspenzi bylo přidáno po kapkách 470,0 mg Meziproduktu: 49 b),jehož^příprava je popsána výše, ve vysušeném,dimethylformamidu a vzniklá reakční směs_ř[ byla míchána po dobu 40,0 minut při teplotě místnosti.^ Poté byla směs nalita Sza stálého míchání do 20,0 ml „, ledem vychlazené vody a vzniklý roztok byl vytřepán 3x se 20,0 ml ethylacetátu.

Oddělené organické fá2e byly spojeny a vysušeny bezvodým síranem hořečnatým a poté byla rozpouštědla odpařena.

Zbytek, ve forií-^Smovité konzistence, byl přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexan-ethylacetát (5:1), jako elučního Činidla.

Bylo získáno 332,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

’η-ΝΜΡ (CDC1₃):

- 129 delta 9,73 (s.;'1H;,CH0 )J7,26 - 7,44 ( m.;i0H;2Ph);

6,98 ( 3,;iH;C0₂CHPh₂); 6,08 ( d.d.;iH;H-2;J = J__,.5o_ _ a 37ÓOHz^_);4,'6b'('s7; Ίη·’η-Γ’);’3,76 a 4,03 ( 2d.; 2H;8aCH₂;j = 9,30 Hz ); 3,51 ( nr.;4H; H-4'a 4-OMe ); 3,33 ( m.;3H;.H-2*; H-3'a H-5'); 2,80 (m,;iH;H-1 ).

M'e ziprodukt 52

Příprava /1R-(1 alfa,3abeta,4beta,4abeta,7be ta,7aalfa, 8abeta) /-8a-/ (2,3-anhydro-6-deoxy-4-0-methyl-beta-Da ltropyranosy loxy) -me thyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8aoktahydr o-7-me thy 1-3- (1 -me thyle thyl)-1,4-me than-sindacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny;

f

Ku roztoku 100,0 mg Meziproduktu 51,jehož příp» -ΛΑτ rava je popsána výše, v 15,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno v atmosféře dusíku. 100,0 mg 10%ního . palladia, .na aktivním uhlí a vzniklá reakční’ směs byla míchána v Parrově autoklayú za. tlaku. 0,105 MPa vodíku při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny. Po odfiltrování katalyzátoru byla rozpouštědla odpařena do sucha a zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií ne silikagelu, za použití směsi hexan-ethylacetát (3 : 1) a směsi dichlormethan-methanolí 15 : 1 ), jako elučních činidel.

Příslušné frakce byly spojeny a rozpouštědla byla odpařena.

Bylo získáno 70,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny , ve formě pěny.

¹H-NMR ( <mci₃):

delta 9,77 ( s.JIHJCHO )J6,09 (d.d.;iH;H-2;J = 1,20 a 3,60 Hz )J 4,67 (d.J 1H;H-l';.J = 0,90 Hz );3,58 a

130

4,17 (2d.; 2H;8aCH₂;j = 9,60 Hz )*,.3,51 ( *♦ ;.4h;h-3 a 4'- oífc ); 3,38 ( ih; h-5'); 3,34 ( d.; ih;h2'; j - 4,20 Hz );. 3,30 ( d.d.; ih;h-4*;. J = 9,00 a

1,50 Hz );. 2,65 ( t.; ih;h-i; j = 3,90 Hz ).

Meziprodukt 53

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(lalfa,3a beta,4bet8,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(4-0-allyl6-deoxy-beta-D-altropyranosyloxy)-methyl/-4-formy1-4,

4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thy1-3-(1-me thyle thyl)1,4-methan-s-indacen-3a-(IH)-karboxylové

Suspenze 2,0 g Meziproduktu 1, jehož příprava je * popsána výše, a 870,0 mg dibutylstanniumoxidu ve 25,0 ml vysušeného toluenu* byla zahřívána za refluxu pod ^r zpětným.chladičem;v“baňce, vybavené Dean-Starkovým kondenzátorem, po dobu 2,0 hodin v prostředí dusíku al lf poté byla reakční směs ponechána stát v klidu při te- & plotě místnosti. Poté bylo ku směsi postupně přidáno B

0,30 ml allylbromidu a 3,50 ml 1M roztoku tetrabutylamoniumf luor i du a reakční směs byla poté zahřívána v atmosféře dusíku na teplotu 40°C po dobu 24,0 hodin.

Po odpaření rozpouštědla do sucha byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi hexan-racetoní 10 : 1) a ( 9 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 1,70 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-NMRÍ CDCl-j):

delta 9,73 (a.;iH;CH0);6,98 (s.;iH;CHFh₂);6,O5 (d.d, J

131 ih;h-2;j = 1,50 ₈ 3,60 Hz ); 5,89 ( a.;ih;ch=ch₂);

5,25 ( m.; 2h;ch=ch₂);4,64 ( a.;ih;h-i';j = 1,50 Hz\;

._3ÍÍ;-čh”.čh%ch^ a 8a-CH₂); 3,87 ( tn.; 1H;H-2');3,74 ( m.;2H;H-5'a 8aCH₂); 3,38 ( d.d.; 1H;H-4Í ^{j 3} 3,30 a 9;00 Hz );2,74 ( j = 3,90 Hz ).

Meziprodukt 54

Příprava difenylmethylesterů kyseliny /1R-(1 alfa ,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(4-0-benzyl6-deoxy-be ta-rD-altropyranosyloxy)-methy l/-4-formy 1-4,

4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydxro-7-me thy 1-3- (1 -me thy le thyl )1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Intenzivně míchána...směs. 6,0 g Meziproduktu^!, je.-. hoŽ příprava je popsána, výše , a 3,55 g dibutylstannium-.. oxidu, .v 80,0 ml. vysušeného; .toluenu.,...byla,. zahřívána’...za.. refluxu pod zpětným chladičem v baňce opatřené DeanStarkovým kondenzátorem, v atmosféře dusíku, po dobu 3,0 hodin.Poté byla reakční směs ochlazena na teplotu 0°G. a poté reagována s 1,20 ml benzylbromidu a 10,0’ ml 1M roztoku tetrabutylamoniumf luoridu v tetrahydrofuranu. Po zahřívání směsi v atmosféře dusíku při teplotě 40°C po dobu 18,0 hodin, byla směs za snížedéh tlaku zahuštěna a získaný'zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexan-ethylacetát( 6 :

a ( 4 : 1), jako elučního činidla.

'Příslušné frakce byly spojeny a rozpouštědla byla poté odpařena.

Bylo získáno 3,73 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny...

132 ¹H-NMR ( CDCip:

delta 9,73 ( s.; 1H;CHO >J7,24 - 7,44 (mv* 15H;3Ph)

6,98 (a.;iH;CO₂GHFh₂ );6.,05 ( d.d.; 1H;.H-2‘,J = 1,50 a 3,60 Hz ); 4,65 ( d.;,1H; H-Γ; J = 1,20 Hz'); 4,57 ( AB systém ; 4-0CH₂Ph JJ = 11,10 Hz ); 4,21 (a. JIH*, H-3');.3,76 a 4,07 (2d.;^s2H;8sCH₂;J = 9,0 Hz )J3,87 ( a.; ih; h-2'); 3,76 (a.; ih; h-5'); 3,49 ( d.d.;

1H ; H-4'; ď = 3,30 a 9,00 Hz );2,74 ( t.J1H;H-1;

J = 3,60 Hz ).

Meziprodukt 55

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-Galfa,3a be ta, 4be ta, 4a.be ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta )-8a-/ (2-0benzyloxykarbonyl-6-deoxy-4-0-methyl-beta-D-altropyranosylóxy)-methyl/-4-formy1-4_f4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3-( 1-me thy lethyl)-1,4-methan-s-indacen -3a-(!H)-karboxylové

Ku roztoku 3,0 mmolu Meziproduktu 48, jehož příprava je popsána výše, ve 15,0 ml vysušeného dichlormethanu, bylo přidáno v atmosféře dusíku 6,30 mmolu

4-dimethylaminopyridinu. Po uplynutí 15 minut byla reakční směs vychlazena na -teplotu minus 20°0 a byl:;· k ní přidánopockapkách roztok (3,60 mmolu) benzylchlorformiátu v 15,0 ml vysušeného dichlormethanu. Po uplynutí 2,0 hodin \ bylo rozpouštědlo odpařeno a zbytek byl přečištěn urychlenou chromátografií za použití směsi hexan-ethylácetát ( 3 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 1,20 g žádané,.v nadpise uvedené sloučeniny.

133 ¹h-nmr (cdci₃)j 'delta’ 9,70'(si;ΊΉ; “CHO “) * 7,35 Tm J Ί 5Η;3x ^_Ph );?6,96 ( a.; ih; οηρη₂); 5,99 ( d.d.; ih; h-2;j = 1,50 a 3,60 Hz )J 5,18 ( AB syatemi 2H; OCH₂Ph ; J - 12,00 Hz );

5,00 ( d.d.; ih; H-2'jJ = 1,50 a 4,20 Hz );4,70 (d.; . ih; η-Γ; j= ι,βο Hz ); 4,13 (m.; ih; h-3'); 4,01 a

3,66 ( d.d.; ih; ih; 8₈-ch₂;j = 9,00 Hz ); 3,75 (m.; ih; h-5'); 3,40 ( 3.; 3H;oMe ); 3,17 ( d.a.;iH;H-4';

J = 3,30 a 8,40 Hz .); 2,62 ( t.;. 1.H;j = 3,60. Hz..); . 2,43 ( d.;in; oh; j = 2,40 H2 ); 2,21 ( m.; ih;ch(ch₃)₂).

Meziprodukt 56

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta )/-8a-/(4-0's-ellyl2-0-benzyloxykarbonyl-6-deoxy-be ta-D-altropyrenosyloxy) - me thy l/-4-formyl-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahy drobme thy 1-3-(1-methyle thyl)-1 ,4-methan-a-rindacen-3a(1H)-karboxylové

Ku roztoku 1,40 g Meziproduktu 53, jehož příprava je popsána výše, ve 30,0 ml vysušeného dichlormethanu, bylo přidáno při teplotě Q°C 513,0 mg dimethylaminopyridinu a vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 15,0 minut, a poté k ní bylo přidáno 0,35 ml benzylchlorformiátu v 15,0 ml vysušeného dichlormethanu tak ,aby přidávání probíhalo po kapkách během 15 minut. Poté byla reakční směa naředěna s 1,0 ml methanolu a s 20,0 ml dichlormethanu a promyta s vodou; IN roztokem kyseliny chlorovodíkové a solankou.Oddělená organická fáze byla vysušena bezvodým síranem hořečnatým,zfiltrováňa a rozpouštědla -byla odpařena d® sucha.

134

Zbytek byl přečištěn urychlenou chromátografií za použití směsi hexan-ethylacetát ( 7 i 1) a (5 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 1,10 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NME (CDC1₃):

delta 9,70 ( s.J IHJCHO ); 6,96 ( s.;iH;CHPh₂);5,99 ( d.d.; 1H; H-2J J = 1,50. a 3,60 Hz ); 5,88 (m,; 1H; CH=CH₂ );. 5,20 í m.; 4H; Ph-CHg-Oj CH₂-CH=CH₂ )J4,99 ( d.d.; ih; h-2'; J = 1,50 a 4,20 Hz ); 4,70 ( d.; ih; η-Γ; j = 1,50 Hz ); 4,12 ( ®.;ih; h-3'); 4,03 ( m.; 3H; CH₂-CH=CH₂ a H-8a-CH₂); 3,76 ( m.;iH;H-3'); 3,64 ( d.J 1H;8a-GH₂; 8,70 Hz ); 3,34 ( d.d.;iH;R-4,'

J = 3,30 a 8,70 Hz ); 2,61 ( t.j 1H*,H-i; J = 3,90 Hz).,

M e ž i p r o d ú k t ' ‘ 57 .? .

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /IR—(1 alfa,3a fy ' be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta)/-8a-/(4-0benzyl-2-0-be nzy loxy karb ony1-6-deoxy-be ta-D-a1tropyranosyloxy)-me thy1/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen -3a-(1H)-karboxylové ►

Ku roztoku 3,70 g Meziproduktu 54, jehož příprava je popsána výše, ve 25,0 mí vysušeného dichlormethanu, bylo v atmosféře dusíku a při teplotě 0°C přidáno

1,85 g 4-dimethylaminopyridinu. Vzniklá reakční směs byla po dobu 15 minut míchána, poté byla ochlazena na minus 20°C a byl k ní po kapkách přidáván roztok 0,68 ml benzylchlorformiátu v 10,0 ml vysušeného'dichlormethanu tak dlouho, dokud nebyl detegován produkt

135' pomocí chromátografie na tenké vrstvě ( hexan-ethylacetát /4 : 1/).

Po odpaření rozpouštědla do sucha byl zbytek přečištěn urychlenou chromatografií za použiti směsi hexan-ethylácetát( 6 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 3,60 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-NMR (CDC1₃):

delta 9,70 (s.*, IHJCHO )J 7,26 - 7,42 ( m.;20H*,4Ph);

6,96 ( s.; 1H;C0₂CHPh₂ ); 5,99 ( d.d.; ih;h-2; j =

1,20 a 3,30 Hz )J 5,18 (AB ,systém*, 2'- 0CO₂CH₂Ph;

J = 12,30 Hz ); 5,00 ( d.d.; ΙΗ’,Η-2'; J = 1,50 a 4,20 Hz ); 4,71 ( d.; IH; H-1'; J = 1,50 Hz );4,56 (AB systém; 4-OCH₂Ph ;j = 11,10 Hz )4,15 (m.;iH;H-3 '*,); 3,66a 4,00 ( 2d.J 2H;8aCH₂;j = 9,00 Hz. ); 3,81 (d.k.; ih; h-5'; j = 6,60 a 9,00 Hz ); 3,43 ( d.d.; ih;h-4';

J = 3,30 a 9,00 Hz ); 2,60 ( t.j 1H;H-i;j = 3,6O'Hz).

Meziprodukt 58

Příprava dif eny Ime thyles teru kyseliny /1R-( lalfa, 3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(2-0benzyloxykarbonyl-6-deoxy-4-0-methyl-3-0-tosyl-betaD-altropyranosyloxy) -methyl/-4-formy1-4, 4a ; 5,6,7,7a, • . · í .

8,8a-ok tahy dr o-7-me thy 1-3- (1 -me thy le thyl) -1,4-me than-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Roztok 3,0 mmolu Meziproduktu 55, jehož příprava je popsána výše, a 5,10 mmolu 4-dimethylaminopyridinu v 60,0 ml vysušeného dichlormethanu, byl reagován s roztokem 4,50 mmolu tosylchloridu, ve 20,0 ml vysušeaého

136 dichlormethanu, přidávaného po kapkách. Po 24,0 hodinách bylo rozpouštědlo odpařeno a zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografii za použití směsi hexanethylacetát (5:1), jako elučniho činidla.

Bylo získáno 1,80 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

’Η-ΝΜΗ (CDC1₃):

delta 9,70 ( s.JIHJCHO ); 7,84 a 7,32 ( d.Jmi* 2HJ 17H; Ar ); 6,96 ( s.J 1H; CHPhj )J 5,94 (d.d.;iH;

H-2;J = 1,50 a 3,60 Hz ); 5,17 ( AB system;2H;1HJ CHPh₂); 5,94 ( d.d.; 1H; H-2;j = 1,50 a 3,60 Hz )J

5,17 ( AB systém ; 2H; OCHgPh; J = 12,00 Hz )*,5,10 ( m.; iH;. h-3'); 4,88 ( d.a.; ih;h-2'; j= 3,00 a

5,40 Hz ); 4,68 ( d.; 1H; H-Γ; J = 2,10 Hz3s; 3,97 a 3,63 ( 2d.2H; 8a-CH₂ ;j = 9,00 Hz )J 3,76 (d.d.J j íh; Ht5';j = 6,30 a 8,10 hz ); 3,18 ( d.d.; ih;h-4'; ^x J .=.:3,00 a 8,10 Hz ); 3,Ό5 ( s.JJHjOMe )J2,51 ( t.; íh; h-i;j = 3,60 Hz ); 2,43 ( a.; 3η;οη₃α_γ ); 2,oi ( m.; íh; ch(ch^)₂).

Meziprodukt 59

Příprava difenylmethylesteru kyseliny 1R-Cíalfa,3a be ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-/(4-0allyl-2-0-benzyloxykarbonyl-6-deoxy-3-0-tosyl-betaD-altropyranosyloxy )-methyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thy1-3-(1-me thyle thyl)-1,4-methans-inda cen-3a-(1Η)-karboxy1ové

Ku roztoku 1,10 g Meziproduktu 56, jehož příprava »

je popsána výše, a 300,0 mg dimethylaminopyridinu, ve

137

40,0 ml vysušeného dichlormethanu, byl přidán po kapkách roztok 400,0 mg tosylchloridu ve 20,0 ml vysušeného dichlormethanu a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 3,0 dnů»

Po odpaření rozpouštědla do eucha byl zbytek, zpracován urychlenou chromatografií na 3loupci silikagelu za použití směsi hexan-ethyláce tát ( 9 : 1), a (6 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 820,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny. . ....... ......

¹H-NMH ( CBCl^):

delta 9,70 ('s.JIHJCHO )J 6,95 ( s.; IHJCHPI^)’,5,94 ’( d.d.; 1HJ H-2JJ = 1,50 a 3,90 Hz. ); 5,61 ( rn.JIHJ CH=CH₂)J 5,12 ( m.J 4H;Ph-CH₂-OJCH₂-CH=CH₂).J 4,84 ( d.d.; 1HJ H-2'JJ = 3,00 a 5,10 Hz ); 4,69 ( d.;

1H; H-1'; J = 1,80 Hz )*, 3,96 a 3,63 (2d.J 2H;8a> ch₂;j = 9,00 Hz ); 3,76 ( □.; 4η;η-3';®-5';οη₂-οη=οη₂);

3,38 ( d.d.; 1H; H-4'; J = 3,00 a 8,10 Hz ); 2,50 ( t.; ih; j = 3,90 Hz,. h-1 i; 2,42 ( s.;3®;oH₃-Ph)..

Meziprodukt 60

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /IR—<1 alfa,3a' beta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-/£4-0benzyl-2-0-benzyloxykarbonyl-6-deoxy-3-Q-tosyl-betaD-altropy ranosy loxy) -me thyl/-4-formyl-4,4a, 5,6,7,7a,

8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3- (1 -me thy le thyl) -1,4-me than-s-i nd a c e n-3 a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku 3,50 g Meziproduktu 57, jehoa[příprava je popsána výše, a 1,-30 g dimethylaminopyridinu,

138

-2* v 80,0 ml vysušeného dichlormethanu, byl přidán po kapkách roztok 2,0 g tosylchloridu v 50,0 ml vysušeného dichlormethanu a vzniklá reakční směs byla míchána pří teplotě místnosti po dobu 3,0 dnů.

Po odpaření rozpouštědla do sucha byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, za použití směsi hexan-ethylacetát (9 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 3,14 g Žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR ( CDCljí:

delta 9,70 (a.;. 1H;CHO); 6,95 ( a.; 1H;CHPh₂);5,95 ( d.a.; ih;h-2;j = 1,20 a 3,30 Hz ); 5/6 ( m.;3H; Ph-CH₂-O;H-2'); 4,93 ( d.d.;iH;H-3';j = 3,00 a 4,80 Hz ); 4,71 ( d.;iH;H-r;j = 1,80 hz ); 4,25 (ab systém; 2H;o-CH₂Ph ;j>= 11,50 Hz ); 3,96 ;3,63;(2d;2H;8a-CH₂;

J = ^OOŤHz;)·; 3,83 ( .m.;i‘H; H-5');3,45 ( d.d.;iHJ H-4'; J = 3,00 a 8,40 Hz ); 2,51 ( t.;iH;H-i;j = 3,90 Z Hz ); 2,35 < s.;.3H;CH_vPh ).

Meziprodukt 61

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3abeta, 4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,Sabe ta)/-8a-/(6-de oxy-4-0methyl-3-0-tosyl-beta-D-altropyranosyloxy)-methyl/-4f ormy 1-4.4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thyl-3- (. 1 methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku 1,90 mmolu Meziproduktu 58, jehož příprava je popsána výše, v 60,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno v atmosféře dusíku 100,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla třepána

- 139 v Parrově autoklávu za tlaku 0,105 MPa vodíku při .... te.plo.tě-místnosti-po-dobu-1-,0--hodi-ny .-Po-odfiltrová-··^-’' ní katalyzátoru byl roztok reagován s 20,0 ml 0,35® . roztoku difenyldiazomethanu.

I ·

Po 2,0 hodinách bylo rozpouštědlo odpařeno a zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexan-ethylacetát (3.: 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 1,30 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

^H-NMR (GDC1,):

J.. * ,·..:· felta_ 9_?72: (s.;iH;CH0 ); 7,85 a 7,32 ( d.;,m. ;2h;i2h; ’ Ar T; 6,98^_(-s.; ih;chph₂); 6,06 ( d.a.; ih;h-2;j = Ť'2Ó“a^;3,30 šz‘)<4,é4 ( d.d.;iH;H-3';j = 3,00 a 4,20 Hz ); 4,64 ( d.;ih;h-i *;j = 1,50 Hz ); 4,06 a 3,7.5, ( 2d.;.2H; 8a-CH₂; J = 9,30 Hz ); 4,02 ( m.;iH;H-2');

3,70 ( m.; ih;h-5'); 3,16 ( d.d.;in;H-4';j = 3,00‘m9,00 Hz ); 2,93 ( s.;3h; OMe ); 2,69 ( t.;iH;H-i;j =

3,90 Hz ); 2,45 ( s.; 3H;CH₃Ar .)*,2,30 (d.JIHJOHJ.J = 3,00 Hz ); 2,23 ( m.;iH.; CH(CH₃)₂).

Meziprodukt 62

Příprava difenylmethylesteru kyseliny 1R-(1alfa,3a be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta) /-8a-/ (6-d e oxy4-Q-propy1-3-0-tosy1-be ta-B-a Itropyranosyloxy) -me thyl-/ -4-f ormyl-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thy 1-4- (1 me thyle thy 1) -1,4-me than-s-inda c en-3a- C1H) -karboxylové

Ku roztoku* 800,0 mg Meziproduktu. 59, jehož -.příp- . rava je popsána výše, ve 200,0 ml ethylacetátu, bylo

140 přidáno v atmosféře dusíku 300,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla třepána v Parrově autoklávu za tlaku 0,105 MPa vodíku při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny.Po,odfiltrování katalyzátoru bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha a ku zbytku, rozpuštěnému v 50,0 ml dichlormethanu, byl po kapkách přidán roztok O,35M difenyldiazomethahu (6,0 ml) a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 3,0 hodin.

Po odpaření rozpouštědla-byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát ( 8 : 1) a (3 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 630,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny. , ** ¹ H-NMR (CDCIj): . <

delti- 9,72'(s.í 1H*,CH0 )J6,98 (s.; 1H;CHPh₂) ;6,06 (d.a.; ih;h-2;j = 1,20 a 3,30 Hz ); 4,84 ( d.a.;iH;

H-2'; J = 3,00 a 4,20 Hz )J 4,64 ( d.J1HJH-1 ';j = í

1,50 Hz); 4,05 ( m.;2H;H-3'a H-8a-CH₂); 3,73 ( a.;

2H; H-5'e H-8a-CH₂); 3,29 ( d.d.; 1H;H-4';J = 2,70 a 9,oo.Hz ); 3,01 ( t.; 2h;och₂ch₂gHj ;j = 7,00 Hz);

2,68 ( t.;iH; h-1; j = 3,90 Hz ); 2,44 ( s.;3h;p-ts).

Meziprodukt 63

Příprava /1R-(1 alfa,3abe ta,4beta,4abeta,7be ta,7aalfa,

8abeta)/-8a-/(4-0-benzyl-6-deoxy-3-0-tosyl-beta-Daltropyranosyloxy)-me thyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,

8a-oktahydio-7-methy1-3-(1-me tyle thyl)-1,4-me than-sindacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

141

Ku roztoku 1,0 g Meziproduktu 60,. jehož přípra. — -ve -je- -popsána--výše-, -v-70^0-m-l--e-thylacetátu; -bylo“'při--------------^- dáno v atmosféře dusíku 600,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla třepána v Parrově autoklávu za tlaku 0,105 MBa vodíku při teplotě místnosti po dobu 4,0 hodin. Po odfiltrování katalyzátoru bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha a zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát { 3 : 1) a .

( 1 : 1), jako elučního činidla.

Příslušné frakce byly spojeny a rozpouštědla byla odpařena..

Bylo získáno 530,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹ Ξ-NME ( CDC1₃);

delta 9,70 ( s.;iH;,CH0 );7,81 a 7,10-7,30 (2m;.9H·.;?

Ts a Ph ); 6,08 (d.d.J1HJH-2; J = 1,50 a 3,30 Hz );

4,91 ( d.d.; 1H;H-3J = 3,3O a 4,50 Hz ); 4,68 ( d.; ih; h-i';j = 1,50 Hz ); 4,12 ( (m.;3H;cH₂Ph a H-2'í; 4,06 a 3,64 ( 2d.;.2H;8aCH₂;J = 9,30 Hz);

3,46 ( a.; 1H;h-4'); 2,65 (m.; 1H;H-1 );2,36 (s.;

( s.; 3h; ts).

Meziprodukt 64

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a beta,4be ta,4abe te,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-/(2,3anhydr o-6-de oxy-4-0-me thy 1-be ta-D-ma nnopyranosyloxy) me thyl/-4-formyl-4.4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl - 3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-( 1Ή)karboxylové *

142

Suspenze 3,20 mmolu hydridu sodného v 6,0 ml vysušeného dimethylformamidu byla v atmosféře dusíku reagována sé 6,O^rS$i®£$iproduktu 61, jehož příprava je popsána výše, ( 1,60 mmolu)ve vysušeném dimethylformamidu. „Po 40,0 minutách bylo přidáno 60,0 ml směsi voda-ethylacetát ( 1 : 1) a oddělená organická fáze byla poté odpařena a zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografíí za použití směsi hexanethylacetát (4:1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 960,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

NMR protonové spektrum bylo identické jako u sloučeniny Meziproduktu 50.

M e Z’i produkt 65

Příprava difenylmethylesteru kyseliny 1R-(1alfa,3a be ta,4be ta,4abe ta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(2,3anhydro-6-deoxy-4-O-propyl-beta-D-mannopyranosyloxy) -me thy 1/-4»' formy 1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7methyl-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a(IH)-karboxylové

Ku suspenzi 35,0 mg hydridu sodného v 10,0 ml dimethylformamidu byl přidán po kapkách roztok 600,0 mg Meziproduktu 62, jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml vysušeného dimethylformamidu.Vzniklá reakční směs byla míchána v atmosféře dusíku při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny a poté bylo k ní přidáno 50,0 ml 1N roztoku chloridu amonného a 70,0 ml ethylacetátu. Organická fáze byla promyta s vodou a solankou, vysušena bezvodýrn síranem hořečnatým a poté byla

143 do sucha odpařena.

------Zbytek “byl^_ zpracován^-Urychlenoú^-chromatografii na sloupci silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát ( 8 : 1) a ( 6 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 450,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

’η-ΝΜΗ (CDCip:

delta 9,75 (s.;IHJCHO )*,6,99 (s.“;iH;CH?h₂); 6,08 ( d.d.; 1H;H-2;j = 1,50 a 4,80 Hz ); 4,68 ( s.;1HJ Η-Γ); 4,11 a 3,79 (2d.; 2H;8a-CH₂;j = 9,00 Hz ); 3,68 ( m.*_ř -1HJH-5'); 3,45 ( m.; 1H;H-4'); 3,24 a 3,i2 ( 2a.; 2h;h-2';h-3';j = 3,90 hz); 3,19 ( t.; 2h; och₂ch₂ch₃ ;j = 7,0 Hz ); 2,86 ( ϊ.;ιη;η-ι;

J = 3,90 Hz ).

Meziprodukt 66

Příprava /1 Η-(1 alfa, 3abe ta,4be ta,4abeta,7be ta,7aalfa, 8abeta)/-8a-/(6-deoxy-3-0-tosyl-beta-D-altropyranosyloxy)-me thyl/-4-formy1-4.4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7methy1-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a- ¹ (IH)- karboxylové kyseliny <

Ku suspenzi 800,0 mg lO&ního palladia na aktivním uhlí v 60,0 ml ethylacetátu v hydrogenSční nádobě byl přidán v atmosféře dusíku roztok 1,0 g Meziproduktu 60 Jjehož příprava je popsána výšej ve 30,0 ml ethylacetátu a .4.^0 ml směsi methanol-1N kyselina chlorovodíková (3 · 1 )*. Nádobka byla třepána v Parrově hydrogenačním autoklávu při tlaku 0,21 MPa vodíku po dobu 18,0 thodin. Poté byla reakční směs zfiltrována’

144 a filtrát byl odpařen do sucha.

Zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormathan -methanol ( 20 : 1), jako elučního činidla..

Příslušné frakce byly spojeny a rozpouštědla byla odpařena.

Bylo získáno 380,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹ H-NMR (CDC1₃Í:

delta 9,70 (s.;iH;CH0 );7,84 a 7,38 (2d.;4H;Ts );6,O6 ( d.d.; 1H;H-2:J = 1,50 a 3,60 Hz ); 4,75 ( d.d.JIH; H-3'; J = 3,30 a 4,50 Hz 4,61 ( d.; 1H;H-l';j =

1,20 Hz );. 4,05 ( d.J 1H;H-8aCH₂a; J = 9,.30 Hž.);3,92 ( d.d.; ih; H-2f; J = 1,20 a 4,50.Hz ); 3,65 ( m.;

3H; a H-8aCH₂b. ); 2,63 (m.J 1H*,H-1 )J2,46 ( s.; 3H; Ta).

Meziprodukt 67

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1Ř-(1 alfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(2,3 anhydro-6-deoxy-beta-D-mannopyranosyloxy)-methy1/4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,Sa-oktahydro-7-methyl-3 ( 1-methylethyl)-1,4-methan-s-ind8cen-3a-(1H)-karboxylové

Roztok (585,0 mg) sloučeniny, připravené v rámci Příkladu 55, popsaném dále, ve 20,0 ml dichlormethanu, byl reagován d nachově zbarveným a po kapkách přidávaným roztokem difenyldiazornéthanu v dichlormethanu ( 0,35 M;8,0 ml ).Výsledná reakční směs byla poté míchána při teplotě místnosti po,dobu 14,0

145 hodin.

___________,—P-O -ods.tranění-r-ozpouštědla -za sníženého--tlaku— ^j---------------— byl zbytek přečištěn urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát( 6 : 1) a (4:1), jako elučního činidla.

Příslušné frakce byly spojeny a odpařeny.

Bylo získáno 764,0 mg žádané, v nadpise uvedená sloučeniny ve formě bíle zbarvené pěny, ^ΊΗ-ΝΜΒ ( CDC1₃):

delta 9,75 (s.;iH;CHO ); .7,26 - 7,44 ( m.;i0H;2Ph );

7,00.( s.; jH;co₂cHPh₂);.6,09. < d.d.; ih;h-2;j - 1,20 a 3,60 Hz ); 4,71 ( s.; ih;h-i'í; 3,79 a 4,12 (2d.;

2H;8aCH₂;j = 9,30 Hz.); 3,63 (d.d.; 1Η’,Η-4'; J = 5,70 a

8,70 Hz ); 3,21 ( m.; 1HJ H-5*); 3,15 a 3,24 (2d.;2H;

H-2'a H-3'?; J = 3,60 Hz ); 2,86-( t.j 2H;H-1;J = 3,90 Hz ).

Meziprodukt 68 ,

Příprava difenylmethyle steru kyseliny /1R-(1alfa,3a i be ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(2,3- ’* anhydr o-4.6-dide oxy-4-fluor-be ta-D-talopyranasy loxy)me thyl/-4-f ormy 1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl3- (1 -me thyle thyl) -1,4-me than-s-inda cen-3a- (1H) -karboxylové

Roztok 300,0 mg Meziproduktu 67, jehož příprava je popsána výše, ve 25,0 ml dichlormethanu, byl smíehén a 0,16.ml diethylaminosulfurtrifluoridu a výsledireakční směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Poté byla ochlazena na teplotu 0°C a po rychlém

- 146 přidání 15,0 ml methanolu byla za sníženého tlaku zahuštěna.

Urychlenou chromatografií abytkůina^ailikagelu, za použití směsi hexan-ethylacetát (6 : 1) a (4 : 1), jako elučního činidla, byla získána žádaná, v nadpise * uvedená sloučenina v množství 160,0 mg.

¹H-NMR (CDCl^):

delta 9,73 (s.JIHJCHO ); 7,45 - 7,26(m»;i0H;2Ph );

6,98 ( s.;1H; CHPh₂); 6,09 ( d.d.;iH;H-2;j = 1,50 a

3,90 Hz ); 5,09 ( d.;iH;H-1J s 1,50 Hz )J4,75 a 4,58 ( 2 d.k.;1HJH-5 'iJ₅*,P = 48,60 HzJJ = 6,60 HzJJ = 3,90

Hz ); 4,18 a 4,11 (2d/_y ih;h-4'; J₄'_F= 23,10 Hz );

J = 3,90 Hz ); 3,97 a 3,81 (2d.J 2H;8aCH₂ JJ = 9,30 Hz.)*,

3,75 a 3,70 (2m.J 2HJH-2'a H-3'); 2,84 (t.JIHJH-1. ).. > 4 ’·? ' i

Meziprodukt 69

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /13-(lalfa,3s be ts, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8a beta) /-8a-/ (2,3anhydro-6-de oxy-4-0- (2-me thoxye thyl) -be ta-D-mannopyr snosy loxy) -me thyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-( 1 -methyle thyl)—1,4-me than-s-inda cen —3a—ί1H)-karboxylové

Ku suspenzi 24,0 mg hydridu sodného ve- 20,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu b.ylo přidáno při teplotě 0°C v atmosféře dusíku 300,0 mg Meziproduktu 67,jehož příprava je popsána výše, a tato směs byla míchána po dobu 30,0 minut. Poté bylo ku směsi přidáno 300,0 mg beta-bromfanetolu a 2,0 ml IN tetrabutylamoniumjodidu a reakční směs byla poté zahřívána ha teplotu 40°C po dobu;2,O dnů. Poté byla reakcejukončena přidáním ‘

147

10,0 ml 1N roztoku chloridu amonného a směs byla na. ... -.-^ředěna-se -30,0 ml-ethylacetátu.-Oddělená- organická-------fáze byla promyta s vodou a soibsnkou , vysušena bezvodým síranem hořečnatým a rozpouštědla byla poté od-ů pařena do sucha.

Zbytek byl zpracován urychlenou chromatografii ^: na sloupci silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát (5:1), jako elučního činidla.

Byla získána Žádaná, v nadpise uvedená sloučenina '( množství neuvedeno)/ve formě bezbarvé látky olejoví té konzistence.

(CDC1₃):

delta 9,75 (s.;iH; CHO. ); 6,98 ( s.; IHJCHPh^ J6,08 .

( d.d.'_r1H;H-2;j. = 1,20 a 3,30 Hz ); 4,67 (a.;.1H; H-1');.4,1O a 3,78 ( 2d.; 2H*,8a-CH₂;j = 9,00 Hz .);..

4,09 - 4,00 ( m.; 2H;H-4';H-5'); 3,90 - 3,53 (m..;

4h; och₂gh₂och₃ ); 3,40 ( s.;3h;ch₃och₂ch₂);3,29 ' a 3,11 (2d.;2H;H-3'a H-2';J = 3,90 a 3,90 Hz. );

2,86 (t.;iH;H-i;j = 3,70 Hz ).

Meziprodukt 70

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /IR—(1 alfa,3a beta,4beta,4abeta,7bets,7aalfa,8abeta)/-8a-/£2,3 anhydro-6-de oxy-4-0- (2-me thy lpr op-2-.enyl) -be ta-Dmannopyranosy loxy) -me thy l/-4-f ormy 1-4,4a, 5,6,7,7a, 8, 8a-oktahydro-7-me thy 1-3-( 1-me thyle thyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

F

Směs 0,30 mmolu Meziproduktu 67,jehož příprava / je popsána výše; 0,30 mmolu uhličitanu česného a 0,50

148

3-brom-2-methyl-propenu v 1,50 ml vysušeného dimethylformamidu byla míchána při teplotě místhosti po dobu 3,0 dnů. Po naředění se 30,0 ml diethyletheru byla poté reakční směs promyta vodou, rozpouštědla byla odpařena a zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát (4 : 1 ), jako elučního činidla.

Bylo získáno 62,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR (CDCip:

delta 9,75 ( s.;iH;CHO ); 7,35 (m.;i0H',2x Ph )*,6,99 ( 3.;ιη;οηρη₂);6,ο6 ( d.d.;m;H-2;j = 1,50 a 3,60 Hz)$ 5,00 a 4,93 ( mj π.;ιη;ιη; ch₂=c);4,70 ( s.; ιη;η-Γ);_:. 4,12 a 3,79 ( 2d.;2H; 8a-CH₂;j = 9,30 Hz ); 4,12 a 3,96 ( d.d.;ih.; ih.; ch₂o;j = 12,0 hz ); 3,26 ( m.;3H;H-3'; H-4';„ a. H-5'); 3,13 .( d.;iH;H-2';j = 3,90 Hz );2,86 ( t.; ih;h-i;j = 3,90 Hz )72,23 ( m.;iH;cH(cH₂)₂). ’

Meziprodukt 71

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a8abe ta) /-8a-/ (2,3anyhydro-6-deoxy-4-0-( 1 -methylethyl)-karbonyl-betaD-mannopyranosyloxy)-methyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,

8,8a-oktahydro-7-methyl-3-( 1 -methyle thyl·)-1,4-methans-indacen-3a-(1H)-kerboxylové

Ku roztoku 160,0 mg Meziproduktu 67,jehož příprava je popsána výše, v 5,0 ml vysušeného dichlormethanu bylo,přidáno,70,0 mg 4-dimethylaminopyridinu a 60,0 y-ul isobutyrylchloridu. Vzniklá reakční směs

- 149 byla při teplotě místnosti přes noc míchána a poté byla zahuštěna.

Zbytek, vé formě žlutě zbarvené látky olejovité konzistence, byl zpracován dále urychlenou chromatografií ns sloupci silikagelu za použití směsi hexanethylacetát ( 5 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 162,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny, ¹H-NMR ( CDC1₃): ........

delta 9,75 < s.;iH;CH0 )*,7,26 - 7,44 ( m.;i0H;2Ph )*,

6,99 ( 8/, ih; CHPh₂); 6,08 ( d.d.; 1HJH-2 )J5,75 ( s.;ih; η-Γ); 4,68 ( a.;iH; h-4';j= 9,00 Hz );

4,12 a 3,80 ( 2d.;2H.;8aCH₂ ;j = 9,00 Hz );3,43 (d.k.; 1H*,H-5';J = 6,60 8 9,00 Hz ); 3,15 (s.;2H;H-2'a H-3')J

2,86 ( m.; 1H;H-11);2,59 ( m.;iH; 4'-0C0CHMe₂).

. Ww ,·. ΐίίΗ'ν Meziprodukt 72

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /lR-(1 alfa,3a be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta) /-8a-/ (2,3áahydro-6-deoxy-4-0-(2,2-dimethylpropionyl)-beta-D- q, mannopyranosyloxy) -me thyl/-4-formy1-4. 4a, 5,6,7,7®, 8 8a-oktahydro-7-methy1-3-( l-methylethyl)-1,4-methans-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Směs 0,30 mmolu Meziproduktu 67, jehož.příprava je popsána výše, a 0,60 mmolu 4-dimethylaminopyridinu v 15,0 ml vysušeného dichlormethanu^byla smíchána se 0,45 mmoly pivaloylchloridu a po 2,50 hodinách byla tato reakční směs promyta s vodou. Oddělená organická fáze byla odpařena a zbytek byl přečištěn urychlenou chromátografií za použití směsi hexan-ethylacetát

150 ( 5 : Π, jako elučního činidla.

Bylo získáno 190,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ¹H-NMR (CDC1₃):

delta 9,76 (s.;iH;CH0 ); 7,83 ( m.;_:10H;2x Ph)J7,00 ( s.; iH;cHPh₂); 6,08 ( d.d.; ih;h-2;j = 1,50 a 3,30 Hz ); 4,77 ( s.;ih;h-i'); 4,67 (a.; ih; h-4*;j = 9,00 Hz );. 4,13 a 3,81 ( d.d.; 1HJ 1H;8a-CH₂;J = 9,00 Hz);

3,43' Cm.J1HJH-5*)J 3,13 ( m.; 2H;H-2*a H-3*)$2,86 (t.j ih; h-i; j = 3,90 Hz );. 2,24 ( m.;iH»cH(CH₃)₂).

Meziprodukt 73

Příprava < dif enylme thy les teru kyseliny /1R-(1 alfa,3a beta, 4be ta, 4abe ta,7be ta;.7aalfa, 8ebe ta) /-8a-/ (2,3anhydro-4-O-benzyloxy-karbonyl-č-deoxy-beta-D-mannopyranosyloxy)-me thyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8aoktahydro-7-me thyl-3-(1-methyle thyl)-1,4-me than-sindacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku 0,30 mmolu Meziproduktu 67, jehož příprava je popsána výše, a 0,80 mmolu 4-dimethylaminopyridinu, ve 15,0 ml dichlormethanu, bylo po kapkách přidáno 0,70 mmolu benzyloxykarbonylchloridu a vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 3,0 hodin.

Po promytí s vodou a solankou bylo rozpouštědlo odpařeno a zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexan-ethylacetát (5 :.1), jako elučního Činidla.

Bylo získáno 185,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

151 (GDC1₃):

delta 9,75 (s.JIH; CHO); 7,32 ( m.;i5H ;3z Ph);6,99 ( s.;iH;.CHPh₂ ); 6,os (d.d.; íh; h-2;j = 1,20 a 3,30 hz ); 5,20 ( ®.; 2h;och₂pii );4,72 ( 3.;ih;h-i');4,57 ( d.; 1H; H-4'jJ = 8,40 Hz )*,4,1.1 a 3,79 (2d.;2H;8ach₂ ; j = 9,00 Hz); 3,43 ( m.;. íh; h-5'); 3,27 a 3,15 ( 2d.; 2H; h-2*; a H-3',J = 3,60 Hz ); 2,85 (t.;iH; H-r_řJ = 3,90 Hz )J 2,24 ( m.J 1HJ CHÍCH^).

Meziprodukt- 74

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1H-(1 alfa,3a be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta) /-8a-/_2,3anhydro-6-deoxy-4-oxo-beta-D-mannopyranosyloxy)-m_rethyl/ -4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl-3(1-methylethyl)-1,4-me than-s-inda cen-3a-(,lH).-karboxylové

Ku roztoku 0,10 ml anhydridu kyseliny trifluoroctové v 5,0 ml vysušeného dichlormethanu bylo při- . dáno při teplotě minus 60°C po kapkách 0,06 ml dimethyl sulfoxidu a roztok 0,39 mmolu Meziproduktu 67,· jehož příprava je popsána výše, v 5,0 ml vysušeného dichlormethanu. Po 60,0 minutách bvl k této reakční směsi přidán triethylamin ( 0,24 ml ) a směs byla míchána při teplotě minus 20°C po dobu 2,0 hodin.

Po odstranění rozpouštědla byl zbytek přešištěn urychlenou chromatografii za použití směsi hexanethylacetát ( 4 : 1), jako elučniho činidla.

Bylo získáno 171,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

i

152 ¹H-NMR (CDCIj):

delta 9,76 (s.JJH; CHO); 7,36<m.;i0H;2xPh );6,59<s.*, lH;CHPh₂):6,09 (d.d.;iH; H-2;j = 1*50' a 3,60 Hzi4,84 ( a.; 1H; h-1'); 4,11 a 3,84 (2d.;2HJ 8a-CH₂;j = 9,00 Hz );. 3,92 ( k.; ih; h-5';j = 6,90 h_z ); 3,59 a 3,37 ( 2d.;. H-2'; a H-3';j = 4,20 Hz ); 2,86 (t.j ΙΗ’,Η-1'

J = 3,90 Hz ); 2,26 ( m.; 1H; CH(CHj)₂).

Meziprodukt. 75 í

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abeta. ) /-8a-/( 2-0benzoyl-6-deoxy-4-0-methyl-beta-D-altropyranosyloxy)- - ^J methyl/-4-formyl-4.4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl ' *

-3-(1-methyle thyl ).-1,4-methan-3-indacen-3a-( 1H)-kar- i boxylové

Ku roztoku 15,88 g Meziproduktu 48, jehož příprava je popsána výše, a 8,83 g dimethylaminopyridinu, ve 200,0 ml vysušeného dichlormethanu, byly přidány po kapkách při teplotě minus 25°C v atmosféře dusíku 2,0 ml benzoylchloridu v 10,0 ml vysušeného dichlormethanu. Vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 45,0 minut, poté byla chladící lázeň odstavena a bylo přidánqfvelmi opatrně 10,0 ml 1N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Po oddělení obou fází byla organická fáze neředěna se 600,0 ml dichlormethanu a promyta postupně a 500,0 ml IN roztokem kyseliny chlorovodíkové*, 500,0 ml 1Q%ního roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 500,0 ml solanky.

Po odstranění rozpouštědla k suchu hyl zbytek ve formě látky olejovíté konzistence zpracován

153 pomocí urychlené chromátogrsfie na silikagelu, za použití směsi ethylácetát-hexany( ob jem/ob jemí_ 1 j ;2.0... a 1 : 7), jako elučního činidla.

Bylo získáno 8,75 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě pěny( výtěžek 48% ).

’η-ΝΜΗ (CDCIj):

delta 9,66 ( s.JIHJCHO )J8,15 - 8,05 J7,6O - 7,20 ( 2m.; i5H;.3Ph ); 6,95 (s.; ih; cHPh₂);.5,93 (š.d.; ih; h-2;.j = 2,10 Hz ); 5,35 ( d.d,; ih;h-2';j = 1,50 a 4,80 Hz ); 4,82 ( d.J 1HJ H-1'* J = 1,80 Hz)J4,25 ( m.J 1H; H-3'); 3,99 Í d.; 1H; 8eCH₂; J= 9,00 Hz );

3,86 ( d.k.; 1H; H-5';’j = 6,3θ'β 8,10 Hz^); 3,68 (d.; ih; 8aCH₂; j = 9,00 Hz ); 3,43 ( s.; 3h; och₃); 3,22 ( d.d.; ih; h-4'; j = 3,00 a 8,10 Hz ); 2,62 ( t.;in; h-1 ; j = 3,90 ); 2,45 ( d.; ih; oh;j = 2,40 Hz );

2,19 ( m.; 1H; CH(CH₃)₂).

Meziprodukt 76

Příprava difenylmethyle steru kyseliny /1R-(1 alfa, 3.8 beta, 4be ta, 4aalfa,7beta, 7aalfa,8abeta)/-8a-/ (2-0- * benz oy 1-3,6-dideoxy-4-0-me thyl-3-oxo-be ts-B-allopyranosyloxy )-methyl/-4-formyl-4, 4a, 5,6,7,7a, 8,8a oktahydro- 7- methyl-3-( 1-methylethyl)-1,4-methans-indacen-3a-(1H)- karboxylové

Ku roztoku 1,29 ml anhydridu kyseliny trifluoroctové v 15,0 ml vysušeného dichlormethanu, bylo přidáno po 10,0 minutách,při teplotě minus 60°C a v atmosféře dusíku, 0,66 ml dime thy lsulf oxidu. Ku vzniklé suspenzi byl přidán roztok 3,45 g Meziproduktu 75, jehož.příprava je popsána výše, ve 30,0 ml vysušeného

154 dichlormethanu a tato směs byla míchána při teplotě minus 60°C po dobu 1,0 hodiny. Poté bylo ku směsi , přidáno po kapkách 5,76 ml triethylaminu a teplota byla. samovolně vytemperována na minus 20°C a byl# přidáno 6,0 ml vody k výsledné, Žlutě zabarvené reakční směsi, která byla poté míchána při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny.

Po přidání 200,0 ml dichlormethanu a 200,0 ml vody se utvořily 2 fáze. Organická fáze byla po oddělení vysušena síranem hořečnatým a zahuštěna k suchu.

Získaný surový zbytek byl rozpuštěn v 10,0 ml dichlormethanu a reagován se 2,0 ml triethylaminu přes noc.

Po odpaření rozpouštědel byla zbylá látka olejovité konzistence zpracována urychlenou chromatografii na silikagelu, za použití směsi ethyláce tát-hexany (. objem/objem; 1. : 15 a 1 : 10), jako elučního činidla.

Bylo stískáno. 2,60 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě pěny( výtěžek 76% ).

¹H-NMR (CDCl^):

delta 9,68 ( s.; 1H;CH0 ); 8,20 - 8,00;7,60 - 7,20 ( 2m: 15HJ3Ph ); 6,96 ( s.JIH; CHPh₂ )J 5,76 (d.d.·' ih; h-2; j = 1,20 a 3,30 Hz ); 5,77 ( a.d.; ih;h-2;

J = 1,20 a 3,30 Hz ); 5,39 ( d.d.; 1H;H-2*; J = 1,20 a 8,10 Hz ); 4,53 ( d.J. 1HJ H-1 '* J = 8,10 Hz );4,09 ( d.; ih; 8aCH₂; j = 9,00 Hz ); 3,75 (a.;iH; 8acn₂;

J = 9,00 Hz );. 3,70 - 3,40 ( m.; 5Ή; H-4'+QCH₃+H-5); 2,63 ( t.; ih;h-i;j = 4,20 Hz ).

Meziprodukt 77

L55

Příprava difenylmethyleateru kyseliny /IH—(1alfa,3a beta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7.aalfa ,8abe ta) /-8a-/ (2-,3,-6------tride oxy-4-0-me thy1-3-oxo-be ta-D-allopyranosyloxy) me thyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a- oktahydro-7-me thyl -3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku dobře odplyněnému roztoku ( argon;15 minut)

5,96 ml tributylgtanniumhydridu ve 120,0 ml vysušeného toluenu byl přidán pomocí injekční stříkačky při teplotě 90°C po 1,0 hodině roztok 5,70 g Meziproduktu 76 a 420,0 mg a,a'- azoisobutyrpňitrilu v 50,0 ml vysušeného toluenu, a zahřívání směsi pokračovalo, dokud nebyla reakce ukončena. Poté byla reakční směs ochla- * zena na teplotu místnosti a po přidání 40,0 ml vody a 1,50 g fluoridu draselného byla přes noc míchána.

Po odpařeni rozpouštědla byl surový znycek míchán

(.í-í ;

s diethyletherem po dobu 1,0 hodiny a pevné složky 'byly poté odfiltrovány.

Eherický roztok byl zahuštěn do sucha a získaná látka olejovíté konzistence byla zpracována urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetát-hexany (1:15 a 1 ϊ 10), jako elučního činidla, *

Bylo získáno 2,22 g Žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ( po vysušení ve vakuu), ve formě pěny.

Výtěžek 61%.

* ^]Η-ΝΜΕ (CDC1₃):

delta 9,73 (s.;1H; CHO); 7,50 - 7,20 (m.;iOH;2Ph );

6,98 (s,;iK;.CHPh₂); 6,04 ( d.d.;iH; H-2JJ = 1,50 a

3,60 Hz); 4,45 (d.d.;, 1HJ H-Γ; J = 2,70 a 8,70 Hz); 4,06 (d.JÍH; 8aCH₂;J ='9,00 Hz)J3,70 (d.;iHJ8aCH₂;

J = 9,00 Hz); 3,52 (a.; 2H;oCH₃);3,5O - 3,30 <m.;2H; H-4'+H-5'); 2,70 - 2,50 (m.;3H; H-1 + H-2)J2,24 (m.J ih; ch(gh₃)₂).

156

Meziprodukt 78

Příprava difenylmethyleateru kyseliny /1R-(1alfe,3a be ta,4be ta,7be ta,7aalfa,Sabe ta)/-8a-/(1S₁7R,9R)-2,8dioxa-9-me thyl-bieyklo-/3.4.0/-non-4-en-7-y1-oxyme thy l/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl -3-( 1- methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-(1H) karboxylové

Ku intenzivně míchenému roztoku 260,0 mg Meziproduktu 77, jehož příprava jé popsána výše, a 110,0 mg diethyldiazorné thylfosfonatu ve vysušeném tetrahydrofuranu, byla pomalu přidána při teplotě 0°C v atmosféře dusíku kaše připravená ze 112,0 mg tercrbutoxidu draselného ..v 1,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu ( bezprostředně byl pozorován vývoj plynu ), Po 10,θ' minutách byla směs neředěna se 100,0 ml dichlormethanu a promyta:2x ise 100,0,ml 1N roztoku kyseliny chlorovodíkové, poté 2x' se 100,0 ml hydrogenuhličitanu sodného a 2x se 100,0 ml solanky, a poté byla vysušena sirenevp hořečnatým.

Po odstranění rozpouštědel byla získána látka olejovité konzistence, která byla zpracována dále urychlenou chromatografií na silikagelu,za použití směsi ethylacetát-hexan( ob jem/ob jem;.1 : 15 a 1 : 12),jako elučního činidla.

Bylo získáno 200,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě pěny. Výtěžek 77% .

¹H-NMR(CDC1₃) :

delta 9,75 (s.;iH‘, CHO )*, 7,50 - 7,20 (m.; 10H;2Ph);

6,99 ( s.; ih; cHPh₂); 6,05 (d.a.; ih; h-s; j = 1,20 a 3,30 Hz ); 5,45 (m.; 1H; H-4')*, 4,65 (>.; 2h;h-3');

4,25 - -4,.15 (m.; 2H, H-7'+ H-1'); 4,07 (d.; 1H*,8aCH₂;

J = 9,00 Hz ); 3,17 ( d,; 1H*,8aCH₂ ;j = 9,00 Hz )*,

157

3,i9 ( a.k.; ih;h-9'; j = 6,00 a 8,40 Hz);2,77 (t..;

ih;.-H-t;..J-=--3-,-90-Hz-)- ----------------------- -----------Meziprodukt 79

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /IR—C1 alfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aelfa,8abeta )/-8e-/(1S,4R, 7R,9R )-2,8-di oxa-4-hydroxy-9-me thy1-ci s-bicyklo-/3»

4.0/-non-7-y1-oxyme thy l/-4-hydr oxy me thyl-4,4a,5,6,7,

8,8a-oktahydro-7-me thyl-3-(1-me thylethyl)-1,4-methans-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku 620,0 mg Meziproduktu 78 , jeho£_ příprava je pop3óna výše, v 5,0 ml bezvodého tetra- hydrofuranu, byl přidán v atmosféře duísku 0,50 Mi roztok 9-borabicyklo-/3.3.1./-nonanu ( 6,0 ml) a.^vznik lá reakční směs byla zahřívána po dobu 1,0 hodiny na teplotu 50°C.Po přidání dalšího objemu roztoku 9borabicyklo-/3.3.1./-nonanu při teplotě 50°C/.byla reakce během 3,0 hodin ukončena a reakční směs byla poté míchána* při teplotě místnosti ještě další 1,0 hodinu. Poté byly ku směsi přidány opatrně 2,0 ml ethylalkoholu ( vývoj plynu) a směs byla míchána opět po dobu 1,0 hodiny.-íPo skončení této operace bylo ku směsi přidáno 5,0 ml 3N roztoku hydroxidu sodného a 5,0 ml 35%ního ( objem/objem) peroxidu vodíku při teplotě 0°G. a směs byla míchána při teplotě místnosti, při teplotě 0°C a při teplotě 7O°C přes noc ( smysl nejasný).

Výsledná reakční směs byla ochlazena na teplotu místnosti a zahuštěna na polovinu stávajícího objemu, .poté neředěna se 100,0 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové, a vytřepána 2x se 100,0 ml ethylacetátu.

153

Oddělená organická fáze byla promyta postupně:-se

100,0 ml 1N roztoku kyseliny chlorovodíkové;, 2x se

100,0 ml roztoku hydrogenuhličitanu sodného a se 100,0 ml solanky.

Po vysušení síranem sodným a zahuštění byla z organické fáze získána látka sirupovité konzistence, která byla dále zpracována urychlenou chromatografií za použití směsi aceton-hexan (1 : 10 a 1 : 5), jako elučního činidla.

Bylo získáno 475,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě pěny. Výtěžek 74% .

^-NMHCCDCl-j):

delta 7,50 - 7,20 ( m.;i0H; 2Ph); 7,04 í s.;1H;CHPh₂)J

5,90 ( d.d.;, ih; H-2; J = 1,50 a 3,60 Hz); 4,75 (d.J ih; hogh₂; j = 10,50 Hz ); 4,62 ( d.d.; ih;h-7'; σ =

2,70 a 5,10. Hz.:.); 4,27 ( m.; 1.Η; H-4'); 4,16 ( d.;.1H; . 8aCH₂; j-- -9,00..Hz.,).; 4,09 -( d.d.; ih;h-3';j = 6,00 8

9,60 Hz ); 3,91 ( t.; ih;h-3';j = 6,90 Hz); 3,70 - 3,50 ( m.; 3H;8aCH₂+H-r, +G-9')J 3,35 ( d.J 1H;H0GH₂;j =

11,50 Hz ); 3,22 ( d.d.; 1H; HOCH₂ ; ď = 11,10 a 12,00 Hz ); 2,57 ( t.;ih; h-i;j = 4,50 Hz )52,48 (m.;H-5');

2,30 ( a.;iH.; CH(CH₃)₂).

Meziprodukt 80

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /lR-(1elfa,3e be ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aálfaζ 8abe ta )/-8a-/(1S,7H, 9R)-2,8-dioxa-9-bicyklo-/3.4.0/-non-4-en-7-yl-oxyme thyl/-4-/terc.-buty1-dime thylsilyl-oxymethyl/-4,4a 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-®e thyl-3- (1 -methyle thyl) 1,4-me than-s-indace n-3a-(1H)-karboxylové !

i

- 159 Ku roztoku 200,0 mg Meziproduktu 78, jehož pří________prává-, je ..popsána_vý.Se._x.-v—5,0-ml· te-trahydr-of uranu·, by-----lo přidáno 18,90 mg pevné formy tetrahydroboritanu sodného a 1,0 ml vody, a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 30,0 minut a poté ještě 1,0 hodinu při teplotě místnosti. Poté byly ku směsi přidány opatrně 2,0 ml vody při teplotě 0°C a směs byla vytře pána mezi 100,0 ml ethylacetátu a 100,0 ml vody. Oddělená· organická fáze byla vysušena síranem hořečnatým a zahuštěna do sucha.

Zbytek, ve formě látky sirupovité konzistence, byl rozpuštěn v 5,0 ml dimethylformamidu a reagován v atmosféře'dusíku při teplotě místnosti se 204,0'mg ’ imidazolu a 316,0 mg terc.-butyldimethylsilylchloridu přes noc. Poté byla reakční směs nalita do 100,0 ml ? směsi IN roztoku chloridu amonného a ethylacetátu (objem/ objemj 1 : 1 ), a míchána po dobu 1,0 hodiny.

Oddělená organiek£ fáze byla postupně promytag; se 100,0 ml IN roztoku chloridu amonného a se 1.00,0 ml solanky, poté byla vysušena síranem hořečnatým a za- , huštěna do sucha.

Zbytek, ve formě pěny, byl zpracován urychlenou < chromatografíí na. silikagelu, za použití směsi ethylacetát-hexany( objem/objem; 1 : 2O>, jako elučního činidla.

fiýlo získáno 215,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ('.Celkový výtěžek 92% ).

^H-NMR (GDC1₃):

delta 7,50 -.7,20 (m.;iOH;2Ph ); 6,94 ( s.; 1H*,CHPh₂);

5,96 ( d.d.; 1H; H-2;. J = 1,20 a 3,60 Hz ); 5,54 (m.f ih; h-4'); 4,65 ( m.; 2h; h-3'); 4,25 - 4,15 (m^2H;

Si0CH₂+H-7,'+H-r); 4,10 ( a.; 1H; 8sCH₂;j = 9,30 Hz);

3,69 ( d.; ih; síoch₂;j = 9,00 Hz ); 3,30 (a.; iH;‘8a

150 ch₂; j - 9,30 hz ); 3,19 ( a.k,;iH;H-9';<r = 6,00 a 9,00 Hz ); 2,68 ( d.d.*, IHJ H-6'j J = 2,00 a 13,20 Hz ); 2,57 ( t*;. ih; h-i; j = 4,20 ); 2,30 ( m.;2H; CH(CH₃)₂+H-6*); -0,017 a 0,031 ( 2s.;6H; (CH₃)₂Sí)..

Meziprodukt 31

Příprava difenylme thyle steru kyseliny /IR—(1 alfa ,3a beta ,4beta ,4abeta,7beta ,7salfa ,8abeta )/-8a-/( 1S,4R, 7Ř,9R)-2,8-dioxa-4-hydroxy-9-methyl-cis-bicyklo-/3. 4.0/-non-7-yl-oxymethyl/-4-/terc.-butyldimethylsilyloxymethyl/-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3( l-methylethyl)-l,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové ' Ku.roztoku 700,0 mg Meziproduktu 80, jehož příprava je popsána výše, v 5,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu, byl přidán 0,50M roztok 9-borabicyklo-/3.3.1/- < nonanu (6,0 ml) v atmosf/eře dusíku a vzniklá reakční směs byla zahřívána po dobu 1,0 hodiny na x teplotu 50°C. Po přidání dalšího objemu roztoku 9-borabicyklo /3.3.1/-nonanu při teplotě-50°C, byla reakce během 3_h0 hodin ukončena a reakční směs byla poté míchána při teplotě místnosti ještě poté, co ·? byly opatrně přidány 2,0 ml ethylalkoholu, 1,0 hodinu. Po skončení této operace bylo ku směsi přidáno 5,0 ml roztoku 3N hydroxidu sodného a poté 5,0 ml 35%ního (objem/ objem) peroxidu vodíku při teplotě O⁰© a směs byla míchána při teplotě místnosti 1,0 hodinu a poté při teplotě 70°C přes noc.

Výsledná reakční směs byla ochlazena na teplotu místnosti a zahuštěna na polovinu stávajícího objemu, poté byla naředěna se 100,0 ml 1N roztoku kyseliny

161 chlorovodíkové a vytřepána 2x se 200,0 ml ethyl- acetátu. _____________________ ____________________ _________ ______________ —.....

Oddělená organická fáze byla poatupně promyta ae 100,0 ml 1N roztoku kyseliny chlorovodíkové, poté se 100,0 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a se 100,0 ml solanky, vysušena síranem hořečnatým a po zahuštění k suchu byli; zbytek ve formě látky sirupovité konzistence zpracován pomocí urychlené chromátografie , za použití směsi aceton-hexany ( 1 : 20 a 1 : 15),' jako elučního činidla.

Bylo získáno 550,0 mg žádané, v nadpise uvedené „sloučeniny, ve«formě bíle zbarvené pěny.Výtěžek 77%ě ¹H-NMR (CDC1₃):

delta 7,50 - 7,20 ( m.JlOH; 2Ph); 6,94 ( s.;IHJCHPhJ;

5,95 ( m.; 1H; H-2); 4,57 (d.d.; 1H;H-7';j = 3,Q0 a

5,10 Hz ); 4,30-4,15 ( m.; 2HJH-4'+CH₂0Si );4/Í0 ’ 3,95( m.*, 2HJ H-3+8aCH₂); 3,87 ( t.;iH;H-3,'J « 6,90 Hz ); 3,70 » 3,50 ( m.;3H; H-r+8aCH₂+H-9'); 3,30 (d.; ih; ch₂osí; j = 9,30 Hz )* 2,53 ( t.; ih; h-i;j = 3,90 Hz ); 2,46 ( m.; ih; h-5'); 2,32 ( m.; ih;ch(ch₃)₂); -0,016 a -0,029 ( 23.; 6HJ (CH^Si). _y

Meziprodukt 82

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(lalfa; 3abe ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta) /-8a-/ (1S,

4R, 9R) -2,8-dioxa-4-me thoxy-9-me thyl-cis-bicyklo-/3.

· 0/-non-7-yl-oxyme thyl/-4-formy1-4,4a, 5,6,7,7a, 8, 8a- oktahydwo-7-methy1-3-( 1-methylethyl)-1,4-methan-3-indacen-3a-(1H)-karboxylové

162

Ku roztoku 537,0 mg Meziproduktu 81, jehož příprava je popsána výše, v 5,0 ml bezvodého tetrahydrofuranu, byl při teplotě 0°C přidán v atmosféře dusíku po malých částech hydrid sodný (75,0 mg). Vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 10,0 minut a poté bylo k ní přidáno 374,0 ^ul methyljodidu a směs byla ponechána při teplotě místnosti, dokud nebyla reakce ukončena.Poté bylo ku směsi rychle přidáno 100,0 ml vody a směs byla vytřepána se 100,0 ml ethylacetátu.

Oddělená organická fáze byla promyta se 100,0 ml solanky a po zahuštění do sucha byla získaná látka pěnovité konzistence, která byl8 rozpuštěna v 5,0 ml· ‘bezvodého tetrahydrofuranu a poté reagována při teplotě 40°C 24,0 hod.s 2,0 ml 1,1M roztoku tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Výsledná reakční směs byla zahuštěna do sucha a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu , promyt .2. x se ^00,0 ml vody, vysušen síranem horečnatým'a po.„zahuštění bylaozískána látka sirupovité konzistence, která byla rozpuštěna v 85,0 ml vysušeného dichlormethanu.

K této směsi bylo přidáno 215,0 mg pyridinium- »· chlorchromanu a směs byla míchána při teplotě místnosti, pokud nebyla reakce ukončena,Poté byla suspenze nalita do intenzivně míchané směsi dichlormethanu a 1O%ního vodného roztoku disiřičitanu sodného.

Po oddělení byla organická fáze promyta se 200,0 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové a 200,0 ml 1N roztoku hydroxidu sodného, vysušena síranem hořečnetým a zahuštěna do sucha.

Zbytek ve formě látky olejovíté konzistence byl zpracován pomocí urychlené chromatografie na silikagelu, za použití směsi ethylacetát-hexan (i : 15J 1 : 10 a 1 : 8 ), jako, elučního činidla.

Bylo získáno 255,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě látky olejovíté konzistence. Celkový výtěžek 57%.

- 163 ’η-ΝΜΒ (CDCI-j):

------delta' 9,74 -('3. ;ϊη;~ CHO V~r, 50' -'7,20 ’Γβ.;ΊOHfŽPh)*'

6,99 ( a.*, 1HJCHPh₂ ); 6,04 ( d.d.; 1HJH-2;j - 1,20 a 3,60 Hz ); 4,60 ( tn.; 4,10 - 3,95 ( m.J

2H; H-4'+8aCH₂); 3,90 - 3,65 ( m.; 3H;H-3>H-1 *)J3,65 - 3,55 ( tn.*, 2H; 8aCH₂+H-9*); 3,35 ( s.J, 3H;OCH₃);

2,73 ( t.; 1HJH-1J J = 3,60 Hz )*, 2,54 ( m.;iH;H-5l; 22,4 ( m.; ih; ch(ch₃)₂)..

Meziprodukt 83

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a be ta, 4be ts, 4abe ta,7be ta ;7aelfa, 8abe ts) /-8a-/(6-de oxy4-0-me thy 1-be ta-D-a 1 tro pyr a nosy loxy) -tne thyl/-4- (Γ,3dioxolan-2-yl)-4,4a ,5,6,7,7a ,8,8a- oktahydro-7-meíthyl3-0 -methylethyl)-1, 4-methan-s-indacen-3a-( 1H)-karbor xylové

Roztok 9,70 mmolu Meziproduktu 48, jehož přip-r rava je popsána výše, ve 40,0 ml vysušeného methano-ř lu, byl smíchán se 110,0 ml ethylenglykolu;3,25 ψΐ trimethylorthoformiátu a kei^ytickým množsvím kyseliny p-toluensulfonové a vzniklá reakční směs byla zahřívána při teplotě 40°0 po dobu 3,0 hodin. Po ochlazení byla směs nalita do 500,0 ml směsi ethylacetátvodný roztok hydrogenuhličitan sodný( 1 : 1) a oddělená vodná fáze byla důkladně extrahována a ethylacetátem.. Spojené organické' fáze byly promyty s vodou a solankou a vysušeny.

Po odstranění rozpouštědel byl zbytek přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexanethylacetát (6:1), jako elučního činidla.

164

Bylo získáno 6,10 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR (GDClj):

delta 7,43 a 7,30 4H;6H',2x Ph); 6,94 (a.;

1H;CHPh₂); 5,83 ( d.d.; IH; H-2JJ = 1,20 a 3,60 Hz); 5,07 ( 3.; ih; 4-ch ); 4,63 ( d.; ih;h-i';j = 1,50 Hz ); 4,20 ( t.; ih; h-3'; j = 3,30 Hz 4,07 (a.· ih; 8a-CHa;_:J = 9,30 Hz ); 3,84 ( m.*_ř6H;H-2'jSe-CHb a 0CH₂CH₂0 ); 3,71 ( m.J 1H;H-5'); 3,42 ( s.;3H;0CHj);

3,21 ( d.d.; ih; H-4';j = 3‘,00 a 9,00 Hz.); 2,63 ( a.; ih; ch(ch₃)₂); 2,54 ( t.;H-t;in; j = 3,90 Hz).

Meziprodukt 84

Příprava'difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1 a,3ab,

4b,4ab,7b,7aa,8ab)/-8a-/(2-0-benzoyl-6-deoxy-4-0me thy 1-beta-D-altropyranosy loxy) -methy 1/-4-/1 ,3dioxolan-2-yl//-4,4a, 5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl -3-( 1 -methyle thyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-( 1H)-karboxylové

Ku roztoku 12,12 g Meziproduktu 83, jehož příprava je popsána výše, a 6,30 g dime. thy laminopyridinu ve 155,0 ml vysušeného dichlormethanu,bylo přidáno v atmosféře dusíku při teplotě minus 20°C po kapkách

1,40 ml benzoylchloridu v 50,0 ml vysušeného dichlormethanu. Vzniklá reakční směs byla poté po dobu 2,0 hodin míchána , poté ponechána samovolně vytemperovat na teplotu místnosti a následně byla promyta postupně se 500,0 ml 0,1N roztoku kyseliny chlorovodíkové; 500,0 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a s 500,0 ml solanky.

165

Po odstranění '.rozpouštědla byl zbytek zpracován. .pomocí..urychlené, chromatografie- na·-silikagelu— za použití směsi ethylacetát-hexahy ( ohjem/objemj 1 : 4 ), jako elučního činidla.

Bylo získáno 5,89 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle zbarvené pěny.Výtěžek 42%.

^H-NMR (CDC1₃):

delta 8,14 - 8,05;?,60 7,20 (2®; 15H;3Ph -)^β,6,91 ( s.; ιη;οηρϊι₂); 5,70 (s.d.;ih;h-2; j = 2,10 Hz );

5,34 ( d.d.7 = 2,10 a 5,10 Hz ); 5,Ota.;

ih; ocho);4,82 ( a.7 ih;h-i';j = 1,so Hz );4,26.(m.; ih;h-3'); 3,98 (a.; ih;8sch₂;j = 9,30 Hz ); 3,92 3,74 ( m. 7 5h;.h-5';+och₂ch₂o ); 3,72 ( d.;iH;saCH₂7 J = 9,30 Hz ); 3,42 ( s.*,3H; 0CH₃)7 3,23 ( d.d.*, 1H7H-4'; J = 3,30 a 8,10 Hz )J 2,5.7 ( m.;iH*,CH(CH₃)₂;

2,44 - 2,38 ( m. ;,2H;OH+H-1 ).

Meziprodukt 85

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1H-(1 alfa,3a be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta,7aalfa,8a be ta)/-8a-/(2-0- benz oyl-3,6-dide oxy-4-0-me thy 1-3-oxo-beta-D-allopyranosyloxy) -me thyl/-4-/1,3-dioxolan-2-yl/-4,4a, 5,6,

7,7a, 8,8a-oktahy dno-7 -me thy 1-4- (1 -me thyle thyl )-1,4methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku 0,45 ml anhydridu kyseliny trifluoroctové v 5,0 ml vysušeného dichlormethanu bylo přidáno v atmosféře dusíku při teplotě minus 60°CT během 10,0 minut 0,23 ml dimethylsulfoxidu. Ku vzniklé aus< penzi byl poté přidán roztok 1,20 g Meziproduktu 84 připraveného v předcházejícím stupni, v 5,0 ml vysu166

Seného dichlormethanu a tato reakční směs byla míchána při teplotě minua 60°C po dobu 1,0 hodiny.Poté bylo po kapkách přidáno 1,24- ml triethylaminu a teplota aměai byla vytemperována na minua 20°C a ku vzniklému žlutě zbarvenému roztoku byly přidány 2,0 ml vody a tato aměa byla poté míchána při teplotě místnosti 1,0 hodinu.

Po přidání 200,0 ml dichlormethanu a 200,0 ml vody se reakční směs rozdělila na dvě fáze,Oddělená organická fáze byla vysušena síranem hořečnatým a po zahuštění do sucha byl získaný surový zbytek rozpuštěn.v 10,0 ml dichlormethanu a reagován se 2,0 ml triethylaminu přes noc,

Pď odpaření rozpouštědel byla získána látka olejovité konzistence, která byla dále zpracována urychlenou chromatografii na silikagelu, za použití směsi ethylácetát-hexanyí objem/objemj1 : 15 s 1 : 10) jako elučního. Činidla,,..

Bylo získáno 1,10 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě,( po vysušení ve vakuO),pěny. Výtěžek 92%.

^H-NMR (CDCl^):

delta 8,20 - 8,00;7,60 - 7,20 (2m.J 15ÍT,3Ph );6,9O ( _a.; iH;cHPh₂); 5,57 ( d.d.; ih;h-2;j = 1,20-a 3,60 Hz )’ 5,37 ( d.d.; IH’, H-2*; 1,50 a 8,10 Hz)J

5’,05 ( s.;ih; ocho ); 4,52 ( d.;iH;H-i';j = 8,10 Hz); 4,08 ( d.; IH* 8aCH₂;j = 8,70 Hz )J3,9O - 3,70 (m.; 5H;0CH₂CH₂0+8aCH₂ ); 3,60 - 3,40 ( m.; 5H;H-4'+QCH₃ +h-5'); 2,62 ( m.;iH;cH(cH₃)₂ ; 2,43 ( ϊ.;ιη;η-ι;

J » 3,90 Hz ).

Meziprodukt 86

167

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalfa, 8a beta) /-8a-/ (2,3_, 6tride oxy-4-Ó-me thy í-3-oxo-bet a-D-allopyrano sy loxy) me thyl/-4-/1,3-di oxolan-2-yl/-4,4a, 5,6,7,7β, 8.8aoktahydr o-7 -me thy 1-3- (1 -me thy le thy 1) -1,4-me than-sindacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku dobře odplyněnému roztoku ( argon;15 minut) 263,0 /ul tributy la stanní umhydridu v 10,0 ml vysušeného toluenu byl přidán pomocí injekční stříkačky při teplotě 90°Q po 1,0 hodině roztok 250,0 mg Meziproduktu 85, jehož příprava je popsána výše a 16,0. mg a,a'- a z ois obuty r oni triku v 5,0 ml vysušeného toluenu a zahřívání směsi pokračovalo, dokud nebyla reakce ukončena,Poté byla reakční směs ochlazena na teplotu místnosti a po přidání 5,0 ml vody a 100,0 mg fluoridu draselného byla přes noc míchána.

Po odpaření rozpouštědla byl surový zbytek míchán s. diethyletherem po dobu 1,0 hodiny a pevnésložky byly odfiltrovány.

Etherický roztok byl zahuštěn do sucha a získaná látka olejovíté konzistence byla zpracována urychlenou chromatografií na silikagelu_;za použiti směsi ethylacetát-hexany (1 : 15 s 1 : 10), jako elučního,, činidla.

Bylo získáno 168,0 mfe žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ( po vysušení ve vakuu), ve formě pěny. Výtěžek 80%.

^-NMR (GDC1₃):

delta 7,60 - 7,10 (m.J 10H;2Ph)J 6,92 ( s.;1H;CHPh₂)J

5,80 ( d.d.; IH* H-2J.J = 0,90 a 3,60 Hz ); 5,Q8 ( s.J 1H; OCHO )» 4,44 ( d.d.; 1H;H-1';J = 2,70 a 8,70 Hz ); 4,05 (d.; ih; 8aCH₂; J = 9,30 Hz ); 3,90 - 3,70 (m.; 5H;.0CH₂GH₂0+8aCH₂ ); 3,50 - 3,3© (m.; 2H;H-5*H-4*);

168

2,50 - 2,to ( m.; 3h;h-2'+ch(ch₃)₂); 2,50 ít.; ih; H-i; J = 4,50 Hz ),

Meziprodukt 87

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1H-(1 alfa,3a betá,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/-1S,7E,

93-)-2,8-dioxa-9-me thyl-bicyklo-/3·4·0/-non-4-en-7y1- oxyme thy1/-4-/1,3-di oxolan-2-y1/-4,4a,5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1,4-methan -s-indacen-3a-(1H)-karboxylové .

Ku intenzivně.míchanému roztoku.Meziproduktu 86, jehož příprava je popsána_:výše, (160,0 mg) a 63,0 mg diethyldiazomethylfosfonátu ve vysušeném tetrahydrof uranu: byla přidána pomalu v atmosféře dusíku a při' teplotě.. 0 C( kaše připravená ze 100,0 mg terc.butoxidu draselného ve 2,30 mí vysušeného tetrahydrofuranu ( bezprostředně byl pozorován vývoj plynu ).

Po 10,0 minutách byla reakění směs naředěna se 100,0 ml dichlormethanu a promyta postupně 3 2x 100,0 ml IH roztoku kyseliny chlorovodíkové J 2x se 100,0 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 2x se 100,0 ml solanky a následně byla vysušena se síranem hořečnatým.

Po odstranění rozpouštědel byl zbylá látka olejovité konzistence zpracována urychlenou chromátografií na silikagelu, za použití směsi ethylacetát-hexan ( objem/objem; 1 : 15 a 1 : 12 ), jako elučního Činidla.

Bylo získáno 110,0 mg žádané, v. nadpise uvedené sloučeniny ve formě pěny.Výtěžek 70%.

>- 169 ^ΊΗ-ΝΜΒ. ( CDCl/:

-del-t-a—7,-50- --7y20H-mv;TQH;2Ph—) J 6,94 a;*ΤΗζ'ΟΗ Ph₂ )-,.5,83 ( d.d.; IH; H-2; J = 1,20 a 3,30 Hz);

5,53 ( m.J ih; Η-4Ί; 5,06 (s.JIH; OCHO ); 4,65 (m.J 2Η·,Η-3*); 4,25 - 4,10 ( m.; 2H; H-7*+H-l');4,05 (d.; ih; 8bgh₂;;J = 9,30 h_z ); 3,90 - 3,70 (m.;5H; och₂c^o:· +8aCH₂); 3,18 ( d.k.J IH* H-9*;. J = 6,00 a 8,70 Hz );

2,75 - 2,50 ( m.J 3HJ H-6'+CH(CH₃)₂+H-1 ).

NF e z i p r o d u k t 88 , ₊ , _v i. M· · ·· J · * '

Příprava difenylmethyleateru kyseliny /1R-(1alfa,3a bet§,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(4-O-allyl -3,6-dideoxy-3-jod-beta-D-mannopyranosyloxy)-methyl/4-formyl-4, 4a, 5,6,7,7a, 8,8a- oktahydro-7-methy 1-31-(1 methyle thyl· )-1,4-methan-s-indscen-3a-( IH)-karboxylové

Roztok 103,0 mg Meziproduktu 53 (GM-2GQ8), jehož příprava je popsána výšej 197,0 mg trif enylfosfinu a 51 ,0 mg imidazolu v 5,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu, byl reagován s 95,0 mg, po Částech přidávaného jodu. Po jednohodinovém míchání přis teplo těí.míatnos ti byla reakční směs zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem tak dlouho, pokud nebyl všechen výchozi|materiál spotřebován ( kontrola chromatografií na tenké vrstvě; směs hexan-ethylacetát /4:1/).

Poté byla reakční směs ochlazena a vytřepána mezi 50,0 ml ethylacetátu a 30,0 ml 1# vodného roztolu kyseliny chlorovodíkové .Oddělená organická fáze byla postupně promyta s 1N roztokem kyseliny chlorovodíkové; vodou, vodným roztokem disiřičitanu sodného,vodou a solankou a poté byla vysušena síranem sodným,zfiltrována a zahuštěna.

170

Zbytek byl zpracován pomocí urychlené chromatograf ie na ailikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát (9:1) , jako elučního činidla.

Bylo získáno 70,0 mg Žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR. (CDC1₃):

delta 9,73 ( s.*, 1HJCH0 ); 7,46 - 7,22 ( m.;l0H;2Ph)*,

6,98 ( 3.; IH; CHPh₂); 6,03 ( d.d.; 1HJH^2;j = 1,50· a

3,60 Hz ); 6,02 - 5,90( m.J1H;0-0-CH=C); 5,35 - 5,15 ( m.; 2h; o-c-och₂ ); 4,40 - 4,32 ( m.;iH;o-CHa-c=c);

4,35 ( a.; ιη;η-Γ; J = 0,60 Hz ); 4,18 - 3,96 ( m.·

4H; O-CHb-e=C;H-2';H-3';8aCHa ); 3,75 (d.;..1H*_ř8a-CHb; j = 9,00 Hz );. 3,45-(d.a.; ih;h-4-';j = 90 a 10,20 Hz);v 3,34 ( d.k.;. 1H;H-5';j = 5,70 a 8,70 Hz )*,2,72 (t.;

1H;. H-1;J = 3,90 Hz ).

Me ziprodukty 89a a 89b ;

•i

a) Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,

3abe ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-/(1S,

4S,63,9R)-2,8-dioxa-4,9-dime thyl-6-hydroxy-cis-bicyklo-/3.4.0/-non-7-yl-oxy-methyl/-4-formyl-4,4a,

5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl-3-(1-me thyle thyl) -1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové a difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3abeta,4 bé ta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-A1S,4R,6S, 7R,9R,7-2,8-dioxa-4,9-dime thyl-6-hydroxy-cis-bicyklo-/3.4.0/-non-7-yl-oxy-me thyl/-4-formy1-4,4a,

5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl-3-(1-me thyle thyl) -r,4-methan-s-indacen-3a-(IH)- karboxylové

171

Roztok 80,0 mg Meziproduktu 88, jehož příprava . je _.p o p sána —výš e -,-ve - 2 ,-O -m-1 - vys uš e-n ého - to lue nu , -by 1- - od plynován v proudu argonu po dobu 60,0 minut a poté byl zahřát za refluxu pod zpětným chladičem.EC tomuto roztoku bylo přidáno 41,0 ^ul tributylstanniumhydridu a vzniklá reakční směs byla zahřívána za refluxu pod zpět ným chladičem ještě po dobu 15 minut. Po odstranění rozpouštědla za vakua byl zbytek vyjmut do 50,0 ml diethyletheru a tento roztok byl několikráte promyt s nasyceným vodným roztokem fluoridu draselného tak, až nebylo pozorované žádné srážení tributyIstanniumfluoridu. Organická fáze byla vysušena a odpařena do sucha.

Zbytek byl přečištěn ..preparativní ?chrómatografií na tenké vrstvě za použití silikagelu a směsi dichlormethan-ethylacetát ( 95 : 5) , jako elučního činidla. Bylo získáno

35,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, označené a)_r t.j. Meziprodukt 89a);

( Rf = 0,40 J dichlormethan-ethylacetát;9 : 1) a

24,0 mg Žádané, v nadpise uvedené slouččniny, označené b), t.j. Teziprodukt 89b);

(Rf = 0,30 í dichlormethan-ethylacetát;9 : 1 )

Meziprodukt 89a ¹H~NWR ( CDCl-j):

delta 9,73 ( s.JIHJCHO )J 7,46 - 7,22 (m.JjOHj2Ph)J

6,99 ( S.J1HJ CHPh₂); 6,05 ( d.d.; 1HJ H-2JJ = 1,20 a 3,30., Hz ); 4,63 ( d.JIHJH-7'jJ - 3,30 Hz )-,4,02 (d.J 1Hj8aCHaJJ = 9,00 Hz); 3,86 (d.d.j 1HJHa-3')J J = 6,60 a 8,70'Hz )J 3,83 - 3,60 ( m.J 4HJH-6'’ H-l'jH-9'j a

172

8a-GHb); 3,52 (d.d.,; 1H;Hb-3*;j = 5,70 a 8,70 Hz );

2,69 ( t.; ih;h-i; j = 3,90 Hz ).

Meziprodukt 89b ¹H-NMR (CDC1₃):

delta 9,74(3.;ΐΗ;0Η0 );7,45 - 7,22 (m.;iOH;2Ph);6,99 ( 3.; ih; cHPh₂); 6,06 ( d.d.; ih;h-2; j = 1,20 a 3,60 Hz )J4,48 ( d.;iH;H-7';J = 2,10 Hz )J 4,10.- 4,00 ( m.; 2H;8a-CHa a Ha-3');3,85 ( d.d.;1H;H-1';J = 7,80 a 9,00? Hz ); 3,76 - 3,68 ( m.J 2H;8a-CHb. a H-6');3,46 - 3,30 ( tn.; 2H;H-9'a Hb-3.')J 2,73 (t.;H-i;j = 3,90 Hz ).

M e z i p r, o d u k.t .90

Příprava difenylme thyle steru kyseliny /IR—( 1 alfa,3a be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalfa, 8a be ta) /-Sa-/ (6 -de oxybe ta-D-altropyranosyloxy)-me thy l/-4-formy1-4, 4a, 5,6,7,. 7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl-3-(1-me thyle thyl) -1,4-me than -s-indacen-3a-(IH)— karboxylové

Ku roztoku 10,0 g 4- demethylsordarinu ve 20,0 ml methanolU/bylo přidáno při teplotě místnosti po kapkách 90,0 ml- roztoku difenyldiazomethanu v dichlormethanu a vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 6,0 hodin.

Po odpaření rozpouštědla k suchu byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát (3:1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 12,60 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě slabě žlutě zbarvené pěny.

173- ¹H-NMR ( EDCl-j):

delta 9,73 la^JHJCHO. .6,5.8. .(..s,.; ..IHJOHPhg.) J.6,05- ( d.d.; íh; h-2; J = 1,50 a 3,60 Hz);4,65 ( d.JIH; h-1'; J = 1,50 Hz ); 4,09 ;3,76 ( 2d.;2H;8a-CH₂;j = 9,00 Hz ); 4,01 ( m.· ih;h-2');. 3,84 ( m._t ih;h-3');

3,75 ( m.; 1H; H-5'); 3,69 ( m.; 1H; h-4'); 2,73 (t.; ih;h-i;j = 4,20 h₂ ).

Meziprodukt 91 .Příprava difenylmethylesteru kyseliny*/1R-(íalfa,3a beta ,4beta,4abeta,7beta ,7aalfa ,8abeta)/-8a-/_6-deoxyr

3,4-O-isopropyliden-beta-D-altropyranosyloxy )-me thyl/ -4-f ormyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-okt8hydro-7-me thyl-3- (1 methyle thyl)-(1Η)- 1,4-methan-s-indacen-3a-( 1H).₃karboxylové

Ku roztoku 650,0 mg Meziproduktu 90, jehož příprava je posána výše, v 15,0 ml 2,2-dimethoxypropanuacetonuí 1 : 2), hvlo^přidáno 10,0 mg kyseliny p-tolaen sulf onové a po 1,50 hodině míchání při teplotě místnosti byle k reakční směsi přidán. 1,0 g uhličitanu draselného a směs byla míchána dalších 30,0 minut. ;

Po odpaření rozpouštědel do sucha byla zbylá surová směs vytřepána mezi 50,0 ml ethylacetátu a 25,0 ml vody a oddělená vodná fáze byla vytřepána 2x s 50,0 ml ethylacetátu. Oddělená organická fáze byla promyta solankou, vysušena síranem hořečnatým a poté byla odpařena· do sucha.

Zbytek byl zpracován urychlenou chromatografii na silikagelu za použití směsi ethylacetát-hexan (1 : 3), jako elučniho činidla.

I

Bylo získáno 600,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

174 ^H-NMR (CDClj):

delta 9,73 (a.JIH? CHO )*,7,45 - 7,24 ( m.;iOH;2Ph );

6,98 ( s.; ih; cHPh₂);6,06 ( d.d.; ih; h-2;j = 1,50 a 3,30 Hz ); -4,57 ( d.; 1H; H-Γ; J = 3,00 Hz );4,30 ( d.d.; ih; H-3'; J = 3,6O a 5,70 Hz ); 4,07 ( d.J ih; 8aCH₂; J = 9,00 Hz ); 3,95 - 3,93 ( m.; 1HJH-2');

3,85 ( d.d.; 1HJ H-4';j = 5,70 a 9,30 Hz ); 3,75 Cd.;

ih; 8aCH₂; J = 9,00 Hz 3,44 ( d.k.; ih; H-5';J_d =

9,30 Hz );. 2,73 ( t.;iH;H-i; j = 3,60 Hz )..

Meziprodukt 92

Příprava difenylmethyle steru kyseliny /lR-(1alfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(6-deoxy3_f4-o-i'sopropylidéii-2-0—(methylthio )-thiokarb.onylbe ta-D-a l.tropyranosy loxy )>me thyl/-4-f ormyl-4, 4a, 5,6,7, 7a,8,8a- oktahydro-7-methyí-3-(1-methylethyl)-1,4me than-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku 100,0 mg Meziproduktu 91, jehož příprava je popsána výše, a 1,0 mg imidazolu, rozpuštěných ve 4,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu v atmosféře dusíku, bylo přidáno 5-,0 mg hydridu sodného a vzniklá suspenze byla míchána při-teplotě místnosti po dobu 0,50 hodiny. Po skončení této operace byl k suspenzi přidán sulfid uhličitý ( 2,70 ml) a reakční směs byla míchána dalších 20,0 minut, kdy k'ní bylo přidáno 18,0 ml methyljodidu.

Po 2,0 hodinách byla reakce ukončena přidáním 20,0 ml IN roztoku chloridu amonného a reakční směs byla vytřepána 3* a 25,0 ml ethylacetátu.Oddělená orger nická fáze byla promyta solankou, vysušena síranem

- 175 hořečnatým a poté byla rozpouštědla odpařena do sucha. Zbytek byl zpracován urychlenou chromatografíí ns^ sloupe i^-_silikag'e lu Zá”pbuž'iVí’ šmeši ě thy la c e t áthexan (1 : 9), jako elučního činidla.

Bylo získáno 110,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹ H-NMR (CDCl-j):

delta 9,71 (a.J 1HJCH0 ); 7,44 - 7,25 ( m.}10H;2Ph)J

6,96 (a.;ih; CHPh₂ ); 6,01 ( d.d.; ih;h-2;j = 1,20 a

3,60 Hz ); 6,9® (d.d.; lH;H-2'; J = 2,40 a 5,40 Hz );

4,85 ( d.; ιη;η-Γ; j = 2,40 h₂ ); 4,53 ( d.e.;iH*,H3'; J - 5,40ψθ· 6,30 Hz ·);-4,00· ( d.d.; 1H;H-4';j = 6,30 a 8,70 Hz ); 3,93 ( d.; 1H;8aCH₂;j = 9,30 Hz. ); 3,65 ( d.k.;iH; h-5J_d = 8,70 ;j_k = 6,30 Hz ); 2,68 (t.; 1H-; H-1; J = 3,90 Hz ); 2,59 ( s.; 3h;ch₃s )_r

Meziprodukt 93.

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-0alfa,3a be ta, 4be tá, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta)/-8a-/ (2,6 dideoxy-3,4-0-isopropyliden-beta-D-allopyranosyloxy )me thyl/-4-formyl-4, 4a, 5,6,7,7a, 8,8a- oktahydro-7methy1-3-í1-methylethyl)-!,4-methan-s-indacen-3a(1H)- karboxylové

V 5,0 ml vysušeného toluenu bylo rozpuštěno 95,0 mg Meziproduktu 92, jehož příprava je popsána výše, v atmosféře dusíku a vzniklý roztok byl zahřát na teplotu 110,0°C' . Po 1,50 hodině míchání byl k roztoku přidán po kapkách roztok 64,0 ml tributylstanniumhydridu v 5,0 ml vysušeného toluenu a reakční směs byla míchána při zahřívání další 1,50 hodiny.

176

Po přidání 2,0 ml methanolu ku směsi hyls rozpouštědla odpařena do sucha a zbytek byl zpracován chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetát-hexan ( 1 : 9), jako elučního činidla.

Bylo získáno 42,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

^H-NMft (GDCl-j):

delta 9,73 (s.jIHJ CHO ); 7,44 - 7,25 ( m.;10H’,2Ph );

6,98 (ih;s.; cHPh₂ ); 6,05 ( d.d.; ih;h-2;j = 1,20 a

3,30 Hz ); 4.,.54 ( d.d.; 1 Hj H-Γ; J = 2,70 a 9,30 Hz);

4,39 ( a.t.; ih;h-3'; J_d = 2,70 H_Z;j_t = 3,60 h₂);4,04 ( d.; ih; 8eCH₂; J = 9,00 Hz )J3,67 ( d.; 1H;8aCH₂;

J = 9,00 Hz ); 3,65 (d.d.; 1HJ H-4'JJ = 3,60 a 8,70 Hz ); 3,44 ( d.k.; 1H;J_d = 6,30 Hz; J_k = 8,70 Hz;);

2,75 ( t.;iH;j = 3,90 Hz ).

Meziprodukt 94

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(lalfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7abeta,7aalfa,8abeta)/-8a /(2,6-dideoxy-beta-D-allopyranosyloxy)-methyl/-4-formy1 -4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7 -me thy 1-3- (1. -me thy 1ethyl)-l,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Za intenzivního míchání byl k roztoku 1,50 g Meziproduktu 93, jehož příprava je popsána výše, ve směsi 30,0 ml tetrahydrofuranu a 15,0 ml methanolu přidán po kapkách při teplotě místnosti IN roztok kyseliny chlorovodíkové ( 15,0 ml). Jakmile byla reakce ukončena ( kontrola chromatografií na tenké vrstvě), bylo k reakční směsi přidáno 50,0ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhiičitanu sodného a 200,0 ml ethylacetátu

- 177 a po této operaci ae reakční aměs rozdělila na vodnou a organickou fázi, která byla promyta 2x ae 100,0 ml vody^-a“ vysušena “šíraném hořečnatým.

Po odstraěni rozpouštědel byl zbytek zpracován urychlenou chromatografii na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát ( 5 : 1) a ( 2 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 1,10 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

’η-ΝΜΗ· ( GDC1₃):

delta 9,73 ( s.;1H;CH0 ); 7,50 - 7,20 ( m.$ 10HJ2Ph);

6,99 ( s.;iH;CHPh₂); 6,05 '( d.d.·/ 1H;H-2;J = 1,20 a ’

3,30 Hz ); 4,64 ( d.d.; ΙΗζΗ-Ι'; J = 2,10 a 9,60 Hz );

4,11 (m.; ih; h-3'); 4,06 (a.· iH;saCH₂;j_AB = 9,30 h_z);

3,70 (m.; 2H;H-5 'a 8aCH₂); 3,34 ( m.; ΙΗ’,Η-4');2,75 ( t.; ih; h-i;j = 3,60 Hz ).

Meziprodukt 95

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a be ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-/_2,3,6 tr ide oxy-3-jod-be ta-D-glukopyrano sy loxy)-me thyl/-4 ·f ormyl-4,4a,5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7^me thy 1-3- (1 me thyle thyl) -1,4-me than-s-indacen-3a- (1H)-karboxylové

Ku roztoku 2,0 g Meziproduktu 94, jehož příprava je popsána výše’ 3,40 g trifenylfosfinu a 186,0 mg imidazolu, který byl zahříván za refluxu pod zpětným chladičem za stálého míchání s 50,0 ml toluenu, bylo po malých částech přidáno 610,0 mg jodu a reakční směs byla poté zahřívána za refluxu pod zpětným chladičem ještě dalš í 4,0 hodiny. Poté byla směs ochlazena,

178 a převedena do přebytku vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a thioaíranu sodného v dělící nálevce. Poté byla reakční směs třepána tak dlouho,dokud nebyl jod spotřebován, Oddělená toluenová fáze byla poté promyta s vodou, vysušena síranem hořečnatým s zahuštěna.

Zbytek byl přečištěn urychlenou chromstografií za použití směsi hexany-ethylacetát ( 15 : 1) a (5 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 1,65 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

(CDC1₃):

delta 9,73 ( s.;iH;CHO ); 7,26 - 7,44 (m.J 10H*,2Ph); a

6,98 ( s.; 1H; CHPh₂í; 6,04 (d.d.; 1H;H-2;j = 1,20 a i;

3,30 Hz ); 4,25 ( d.d.; 1H; H-Γ; J = 1,80 a 9,30 Hz);/ 4,08 ( m.J. 1H;H-4'); 3,67 a 4,01 (2d.; 2H;8aCH₂;j = ,

9,00 Hz ); 3,40 ( m.;iH;.H-3');3,32 ( m.;iH;H-5');2,74 ( t.; 1HJH-1 ;.J = 4,20 Hz);2,32 a 2,53 (2πΓ,2Η;2Η-2').

Meziprodukt 96

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1H-(1alfa,3a beta;4b^ei^a,4abeta,7beta,7aalfs,8abeta)/-Sa-(((2,3,6trideoxy-3-ethylamino-3-fí^4- O-karbonyl-beta-D^allopyranosy 1) -oxy )-me thyl )-4-formy 1-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a oktahydr o-7-me thy 1-3-(1-methyle thy1)-1,4-me than-sindacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku 200,0 mg Meziproduktu 95, jehož příprava je popsána výše, v.15,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu, který byl reagován po dobu 15,0 minut s 24,0 mg

- 179 ( 1,00 mmol ) hydridu sodného , bylo přidáno 0,04 ml ethylisokyanátu a tato re^kční_směs_byla^míchán8 _za_______ refluxu pod zpětným chladičem po dobu 6,0 hodin. Po ukočení reakce přidáním 3,0 ml vody, byla směs vytřepána 3x 3 5,0 ml ethylacetátu a spojené organické extrakty byly promyty -fx a 5,0 ml solanky, poté byly vysušeny síranem hořečnatým, zfiltrovány a za vakua zahuštěny na zbytek sirupovité konzistence, který byl přečištěn urychlenou chromatografií na 3loupci sili-kagelu, za- použití směsi hexan-ethylacetát ( 3 '· 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 75,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny v Čisté formě. .

¹H-NMH (CDCIj):.

delta 9,74 (s.; 1H;CH0); 7,44 - 7,26 (m.; lOH;2Ph)*,.

6,95 (s.;iH;cHPh₂); 6,03 (a.a.;iH;H-2;j = 3.,30 a

1.20 Hz ); 4,60 ( d.d.;iHJH-i; J = 5,10 a 3,90 Hz);

4.12 ( m.; 2H;H-3'; H-4'); 4,01 ( d.;iH;H-8a;j = 9,30 Hz ); 3,64 ( d.;iH;H-8s;j = 9,30 Hz ); 3,61 (d.k.J ih; h-5'; j = 8,70 a 6,30 Hz ); 3,49 (®.;ιη;οη₂-οη₂);

3.13 ( m.; ih; ch₂-ch₂); 2,701 (t.; ih;h-i;j = 3,90: Hz); 2,24 ( m.| 1HJ CHtCHj)^; 1,14 (t.;3H;CHj,J =

7.20 Hz ,

Meziprodukt 97

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /lR-,(lalfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7sbeta,7aalfa ,8abeta )/-8a / (1S, 4R, 6S, 7R, 9R)-2,8-dioxa-4,9-dime thy 1-6- (me thylthio)-thiokarbonyloxy-cis-bicyklo-/3.4.0/-non-7-aloxy-me thyl/-4-formyl-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro 7-me thy 1-3- (1 -me thy le thyl)-1,4-me than-s-indacen-3a(1H)-karboxylové

180

V 10,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu bylo rozpuštěno v atmosféře argonu 250,0 mg Meziproduktu 89b) , jehož příprava je popsána výšej^: a katalytické množství imidazolu. K takto připraveném roztoku bylo přidáno 45,0 mg hydridu sodného a vzniklé suspenze byla míchána při teplotě místnosti pa dobu 20,0 minut.Poté bylo k reakční směsi přidáno 140,0 /-ul sulfidu uhličitého , a po 20minutovém míchání bylo ftu směsi přidáno ještě 150,0 /Ul methyljodidu. Po 2,0 hodinách byla reakce ukončena přidáním 10,0 ml ethylacetátu a poté po kapkách přidávanou vodou ( 5,0 ml).

Reakční směs byla poté vytřepána mezi 50,0 ml ethylacetátu a 50,0 ml vody a oddělená organická fáze byla promyta vodou a solankou, poté byla vysušena a odpařena.

Zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát < . C ( 10 : 1) a ( 8 : 1.) , jako elučního činidla.

Bylo získáno 211,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny. */.

?»· .i, _ .. >

¹ H-NMR (CDCl-j):

delta 9,72 (s. J 1H;CHO);7,46' - 7,22(m.J10fí;2 Ph)J6,97

Ca.; 1H;CHPh₂);6,02 ( d.d.; 1H;H-2*,J = 1,20 a 3,30·

H5 ); 5,80 ( d.d.; 1H;H-6':j = 2,10 a 6,30 Hz);4,72 ( d.; ih;h-7';j = 2,10 Hz ); 4,05 ( a.d.;ih;hs-3 ';

J = 7,20 a 8,40 Hz ); 3,98 - 3,86 (m.;2H;8aCHa a

H-1'); 3,66 - 3,55 ( m.;2H;8aCHb a H-9');3,34 (t.;

1H;Hb-3';j = 8,40 Hz )J2,73 (t.;iH;H-i;j = 3,90 Hz);

2,59 ( s.;,3H;SCH₃).

Meziprodukt 98

181 Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1slfa,3a be ta, 4be ta ,.4abe ta_, 7be ta , 7aalf a. ,.8abe ta )/-8a-Z.(4.-0.-,_____ a lly 1-3-jod- 2,3,6-tride oxy-b-D-glukopyrano syloxy) methyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7me thyl-3- (1 -me thyle thyl) -1 ^4-me than-s-indacen-3a(IH)-karboxylové

Roztok 67,0 mg Meziproduktu 12, jehož příprava je popsána výše; 105,0 mg trifenylfosfinu a 28,0 mg imidazolu v- 5,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu býl/ reagován s 51,0 mg, po Částech přidávaného jodu.Vzniklá reakční směs byla poté míchána při teplotě místnosti po dobu 1,50 hodiny a následně vytřepána mezi 30,0 ml ethylacetátu a 30,0 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové.

Oddělená organická fáze. byly postupně promyta s IN roztokem*kyseliny chlorovodíkovéjvodným roztokem disiřičitanu sodného;'vodou a solankou, poté byla vysušena, zfiltr.ována :a zahuštěna...

Zbytek byl zpracován pomocí urychlené chromatograf ie na silikagelu,.za použití směsi-hexan-e.thy 1acetát (9:1), jako elučního Činidla.

Sylo získáno 68,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹ H-NMR (CDCl-j):

delta 9,73 ( s.; 1H;CH0); 7,45 - 7,22 ( m.;iOH;2Ph);

6,97 ( S.;1H; CHPh₂); 6,07 5,90 ( m.; 2H;H-2 a

0C-CH=C ); 5,37 - 5,14 ( m.;2H;O-G-O»CH₂);4,45 - 4,35 ( m.; 1H;0-CHa-C^G); 4,25 - 4,10 ( πι.;2Η;Η-Γ; a O-OHb-OC ); 4,10 - 3,95 ( m.;2H;H_3'; a 8a-CHa );

3,66 ( d.;m; 8a-CHb;j = 9,00 Hz);3,29 (d.k.;iH;H-5;

J = 6,00 a 8,700 Hz ); 3,15 ( d.d.;iH;H-4';J = 8,70 a 9,90 Hz );2,73 ( t.;iH‘,H-i;j - 3,90 Hz ).

182

Meziprodukt 99

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /IR—(1 alfa,3a be ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8a be ta)/-8a-/(2,3“ anhydro-6-deoxy-beta-B-mannopyranosyloxy)-methy 1-4( 1,3-dioxolan-2-yl)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a- oktahydro7-methy1-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a(1H)-karboxylové

Roztok Meziproduktu 67 (3,20 mmolu), jehož příprava je popsána výše, ve 40,0 ml vysušeného acetonitrilu, byl smíchán se 39,0 ml ethylenglykoluj 1,10 ml trimethylformiátu a 30,0 mg kyseliny p-toluensulfonové. Po 5,0 hodinách byla tato reakční směs důkladně vytřepána s ethylacetátem.

Po odstranění rozpouštědla byl zb7^teic přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexan-ethylacetát (3:1), jako elučního činidla.

' Bylo získáno 2,08 g Žádané, v nadpise uvedené slou-r čeniny. gií k*' ¹H-NMR ( CLG1₃):

delta 7,43 a 7,29 ( m.*,m.;4H;6H;2x Ph)’,6,95 (s.JIH; cHPh₂);5,86 ( d.;iH;H-2;j = 3,30 Hz )75,os ( s.;ih; 4-CK )74,69 ( S.;1H;H-1')7 4,11 ( d.;iH}8a-CHa;j =

9,30 Hz ); 3,81 ( m.;5H;8a-CHb a O-CH^-O)*,3,63 ( β.;ιη;η-5'); 3,23 a 3,15 ( d.d.; ih; ih;h-2*8 h-3';

J = 3,60 Hz ); 3,20 ( ®.;iH7H-4')7 2,63-(m.;2H;H-1 β CH(CH₃)₂).

Meziprodukt 100

-183 Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1 alfa,3a beta._r4be.ta..,.4ab.e_ta.,.7.b.eta.,7aalfa-,-8abeta-)-/-8a-(--2-j3—— anhydro-4-oxo-6-de oxy-be ta-B-mannopyranosyloxy) me thy 1-4- (1,3-di óxolan-2-y.l)-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8e oktahydm-7-me thy 1-3- (1 -me thy le thyl) -1,4-me than-sindacen-3a-(1H)-karboxylové

Roztok 23.0,0 /Ul anhydridu kyseliny trifluoroctové v 10,0 ml vysušeného dichlormethanu byl při teplotě minus 60°0 smíchán še 138,0^1/po( kapkách přidávaného^dimethylsulfoxidu a roztokem 0,90 mmolu Meziproduktu 99, jehož příprava je popsána výše,· ve vysušeném dichlormethanu ( 10,0'ml). Ku vzniklé reakční směsi bylo po 60 minutách, přidáno 554,0 ^ul triethylaminu a směs byla míchána při teplotě minus 20°C po dobu 2,0 hodin.

Po ukončení uvedené operace byla směs naředěna dichlormethanem a promyta s vodou.PQ odstrahění roz pouštědel byl zbytek přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexan-e thyla.ce tát (4:1), jako: elučního činidla..

Bylo získáno 214,0 mg žádané, v nadpise uveené sloučeniny.

^]H-NMR (CDCl-j):

delta 7,44 a 7,30 ( m.Jm.J 4HJ6HJ2X Ph)j6,94 ( s.; 1H;CHPh₂')J5,87 ( d.d.j 1HJH-2JJ - 1,50 a 3,60 Hz)J

5,10 ( s.J1HJ4-GH)j 4,81 ( s.JIHJH-Γ)J4,09 ( d.J 1HJ 8a-CHaJJ = 8,70 Hz )J 3,88 ( m. J5HJ8a-CHb.a 0CH₂CH-₂-0 )J 3,58 a 3,36 ( d.d.;,1HJ1H.J H-2*; a H-3'JJ = 3,90 Hz )J 2,65 ( m.J2HJH-1 a CHÍCH^h

Meziprodukt 101

184

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /13—(1 alfa ,3a be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalfa, 8abe ta) /-8a-/ (2,3 anhydro-4,6-dide oxy-4-me thylen-be ta-D-mannopyrayloxy)methy1-4-(1,3-dioxolan-2-yl)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a -oktahy dro-7»me thy1-3-(1-me thyle thyl)-1,4-me than-s-inda ce n3a-(1H)-karboxylové

Roztok 0,30 mmolu methyltrifenylfosfoniumbromidu v 10,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu byl reagován v atmosféře dusíku při teplotě minus 78°C s 0,15 ml

2,44 ffi n-butyllithia. Po 15,0 minutách byl k této reakční směsi přidán Meziprodukt 100' (0,21 mmolu), jehož příprava je popsána výše, v 5,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu tak, aby přidávání probíhalo pomalu, a i

tato reakční směs byla pomalu vytemperovana na teplotu.,

-l’’ místnosti.Poté byla směs zředěna ethylacetátem a promyta 3 1N roztokem chloridu amonného a solankou.

Po odstranění rozpouštědla byl zbytek přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexan-ethyl•jí acetát (4:1), jako elučního činidla. *

Bylo získáno 91,0 mg .žádané, v nadpise uvedené ’’ sloučeniny.

^!N-NMR( CDG1₃):

delta 7,45 a 7,29 ( m.;m.; 4H;6H; 2x Ph)*,6,95 < a.;, ih; CHPh₂);5,87 ( m.; 1HJH-2 )‘, 5,35 a 5,22 ( d.d.; ih; ch₂=c ;j = 2,40 h_z ); 5,08 ( s.;ih;4-ch ); 4,68 ( s.; ih; H-1'): 4,10 ( m.J 2H;8a-CHa a H-5')*, 3,82 ( m.; 5H, 8a-CHb a O-CO₂-CH₂O ); 3,57 a 3,35 ( d.d.; ih; H-2'a H-3';J = 3,90 Hz ); 2,63 ( m.*, 2HJH-1 a ch<ch₃)₂).

Meziprodukt 102

185

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-Í1slfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(2,3 ^--anhydro-6-deOxy-be'ta-D-tál'o^'rándsy loxy)-methy 1-4C 1,3-di oxolan-2-y 1)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro7-me thyl-3- (1 -me thyle thyl) -1,4-me than-s-inda cen-3a{ IH)- karboxylové

Ku roztoku 1,13 mmolu Meziproduktu 100, jehož příprava je popsána výše, ve 45,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu, bylo přidáno v atmosféře.dusíku při teplotě minus 78°C 2,0 ml 1N L-selektridu. PO uplynutí 1,0 hodiny byla výše uvedená reakční směs neředěna se 100,0 ml ethylacetátu, vytemperována na te _T ►- * » » A. · W * plotuuaístnosti, a poté promyta s IN-roztokem chloridu amonného, vodou a solankou. .

Po odstranění rozpouštědel byl zbytek přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexan ethylacetát (3 : 1), jako elučního činidla, t

Bylo získáno 431,0 mg žádané, v nadpise uvedené, sloučeniny.

¹H-NMR (CDC1₃):

delta 7,44 a 7,31 ( m.;a.;4H;6H; 2x Ph )*, 6,95 ( s.*, ih; CHPh₂);5,85 ( d.d.; ih; H-2JJ = 1,20 a 3,60 Hz); 5,08 ( s.;ih;4-ch );4,92 ( s.;ih;h-iΊμ,ι 1 ( a.;iH; 8a-GHa;j = 9,30 Hz ); 3,83 ( m.;5H*,8a-CHb 9 OCH^H^);

3,62 ( m.;iH;H-4'); 3,54 ( d.d. J 1H',H-3''J = 3,60 a

5,10 Hz ); 3,40 ( m.;iH;H-5'); 3,24 ( d.;iH',H-2';j =

3,90 Hz )„

Meziprodukt 103

186

Příprava difenylmethyleateru kyseliny /IR—(lalfa,3a beta, 4be ta, 4a be ta , 7be ta, 4aa lf a, 8a be ta ) /-8a- (2,3> anhydro-4-0-terč.-butylkarbony1-6-deoxy-beta-D-talopyranosyloxy)-me thyl-4-(1,3-dioxolsn-2-yl)-4,4a,4,6,7,

7a,8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3-(1-me thylethyl)-1,4methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové ..

Směs 0,20 mmolu Meziproduktu 102,jehož příprava je popsána výše, a 0,40 mmolu 4-dimethylaminopyridinu, v 15,0 ml vysušeného dichlormethanu, byla reagována s 0,30 mmolu pivaloylchloridu.

Po 30,0 minutách byla reakční směs promyta s vodou a přečištěna urychlenou chromatografií za použití směsi hexan-ethylacetát (5:1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 95,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny. .

^]H-NMR (CDCl-j):

delta 7,44 a 7,30 ( m.; m. J 4H;6H;2x Ph); 6,95 (s.J ih; οηρη₂); 5,85 (d.a.;ih; h-2;j = 1,20 a 3,60 Hz );

5,08 ( s.; ih; 4-ch ); 4,82 ( t.; ih;h-4';j = 3,90 Hz ); 4,60 ( s.; ih; h-Γ); 4,i2 ( a.; iH;se-cHa;j =

9,60 Hz ); 3,83 ( m.j 5H*, 8a-CHb a 0-CH₂-CH₂-0 );

3,65 ( m.; ih; h-5'); 3,53 ( t.; ih; h-3';j = 4,20 Hz);

3,17 ( d.; ih; h-2';j = 4,20 Hz ); 2,63 ( m.; 2h;h-i a CH(CH₃)₂).

Meziprodukt 104.

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(lalfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-(4-0-allyl 2,3-anhydro-6-deoxy-beta-K-talopyTanosyloxy )-me thyl-4· (1,3-di oxolan-2-yl)-4,4a,5,6,7,7a,8,8s-oktahydro-7me thy 1-3- (1 -methyle thyl)-1,4-me than-s-indacen-3a- OH) karboxylové

-187'Ku roztoku 0,30 mmolu Meziproduktu 102, jehož příprava je popsána výše, v 10,0 ml vysušeného tetra-_ hyďrbfuranu, bylo v atmosféře dusíku přidáno 0,60 mmolu hydridu sodného a katalytické množství tetrabutylamoniumjodidu. Po 10,0 minutách byl k takto připravené reakční směsi přidán allylbromid (0,90 mmolu) a směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Poté byla naředěna se 10,0 ml ethylacetátu a promyta s 1N roztokem chloridu amonného a solankou.

Po odstranění rozpouštědla-byl zbytek přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexan-ethylácetát (4 : 11, jako elučního činidla.

Bylo získáno 1.63,0 mg žádané, v nadpise, uvedené sloučeniny.

¹ H-NMR. (CDCl^):

delta 7,44 a 7,29 ( m.; m.J 4H*,6H;2x Ph); 6,95 C-s.; is;cHPh₂); 5,96 ( m.; ih;h-2}; 5,85 ( d.d.; ih;h2;,ď = 1,20. 8 3,60 Hz );. 5,30 a 5,12 ( m.; m.; ih;ih; ch₂-3); 5,06 ( s.; ih;4-ch); 4,58 ( ₃.;ιη;η-Γ);

4,31 ( nt.; 1H;H-4'); 4,10 ( m.J 2H;H-5'a 8a-CHa);3,81 ( nr.; 5H; 8a-CHb a 0-CH₂CH₂-0 ); 3,53 ( m.; 2H;CH₂O);

4,23 ( t.;iH.;· h-3';j = 4,20 hz ); 3,19 ( d..;m;H-2'; J'« 4,20 Hz '); 2,65 ( t.JIHJH-l; J = 4,20 Hz);2,61 ( m.;iH; GH(CH₃‘)₂).

Meziprodukt 105

138

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfe,3a be ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa,8abe ta)/-8a-(2,3anhydro-6-deoxy-4-0-tosyl-beta-D.-talopyranosyloxy )methyl-4-(1,3-dioxolen-2-yl)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a. oktahydEO-7-methy1-3-(1-methylethy1)-1,4-methan-sindacen-3a-(1H)-karboxylové

Roztok 0,45 mmolu Meziproduktu 102, jehož příprava je popsána výše, v 7,0 ml vysušeného dichlormethanu, byl smíchán s 1,35 mmolu 4-dimethylaminopyridinu a 0,90 mmolu. tosylchloridu a vzniklá reakční směs byla v

míchána při teplotě místnosti přes noc, Pq skončení této operace byla směs promyta s vodou a se solankou.

Po odstranění rozpouštědla byl zbytek přečištěn chromatografii za použití směsi hexan-ethylacetát(3 :1)J jako elučního činidla.

Po odpaření příslušných frakcí bylo získáno 277,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

^H-N5ffi (CDClJ: ' ·’·

Λ delta 7,86; 7,42 a 7,29 ( m.J m.; lOHJAr ); 6,93 ( s.J*' iH;cHph₂ ); 5,82 ( m.; ih;h-2); 5,06 ( s.;.ih; 4-CH);

4,6fi ( u.;ih; h-3';j = 4,20 h_z);4,55 ( s.; ιη;ή-Γ);

4,07 ( d.; 15;8a-CHa; J.= 8,70 Hz ); 3,81 ( m.; 5H;

8a-CHb a 0-CH₂CH₂-0); 3,62 ( m.J 1HJH-5'); 3,30 ( t.;

ih; h-2'; j = 4,20 Hz ); 3,15 ( a.; ih; h-4'; j = 3,90.

Hz ); 2,61 ( m.; 2H; H-1 a CHtCH^k

Mieziprodukt 106

- 189 Příprava difenylmethyleateru kyseliny /1R-(1 alfa ,3a be ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aslfa,8abe ta)/-8a-/(2,3 anhyďřo-4-a ziďo-4,6-dide oxy-be ta -D-mannopyranosy loxy ) methy 1-4-(1 ,3-dioxolan-ř2-yl)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a- oktahydro-7-me thyl-3- (1 -me thyle thyl) -1,4-me then-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Roztok 0,15 mmolu Meziproduktu 105, jehož- příprava je popsána výše, a 0,45 mmolu lithiumazidu;ve .3,0 .ml vysušeného .dimethylformamidu;byl zahříván při teplotě 10Q,0°C přes noc.Poté byla reakční směs neředěna s 20,0 ml ethylacetátu a promyta s vodou a solankou. Po odstranění rozpouštědla byl zbytek přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi hexanethylacetát ( 4 : 1), jako elučního činidla.

Po odpaření příslušných frakcí bylo získáno 53,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

- ‘^;·· ¹H-NMR ( CDCl-j):

delta 7,46 - 7,23 ( m.;iOHJ Ph₂); 6,94 ( s.;iH;

CHPh₂); 5,86 ( d.d.; IH; H-2;j = 1,20 a 3,60 Hz )*

5,08 ( 3.; ih; 4-CH); 4,67 ( s.; ιη;η-Γ); 4,·ιο (d.; 1H;8a-GHa;j = 8,70 H_z ); 3,83 ( m.; 4H;8a-CHb a 0-CH₂ ch₂-o); 3,40 ( d.; ih;h-4'; j = 9,30 h_z ); 3,31 a 3,15 ( d.d.; H-2'a H-3';j = 3.,60 Hz ·)*,3,23 ( m.;iHJ H-5');2,65 ( m.J 2HJH-1 a CH(CH₃)₂).

Meziprodukt 107

190

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfs,3a beta,4beta ,4abeta ,7beta,7aalfa ,8abeta )/-8a-/(4-0allyl-2,3-anhydro-6-deoxy-beta-D-mannopyranosyloxy)me thy 1-4-f ormyl-4,48,5,6,7,78,8,88- oktahydr o-7-me thyl -3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-( 1H)-karboxylové

Postup A.

Ku roztoku 650,0 mg Meziproduktu 21, jehož příprava- je popsóús výše, v 50,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu, bylo při teplotě 0°C přidáno 90,0 mg hydridu sodného a vzniklá reakční směs byla míchána v atmosféře dusíku při teplotě 0°C po dobu 30,0 minut.Poté bylo; ku směsi přidáno 875,0 mg allylbromidu a katalytické , množství ( -50,0 mg) te tra buty lamoni um jodidu, Reakce byla ukončena po 5hodinovém míchání při teplotě místnosti. Ku surovému materiálu byl přidán 1N roztok chloridu amonného a ethylacetát a organická fáze byla promyta s vodou a solankou, vysušena bezvodým síranem hořečnatým a poté byla odpařena, do sucha.

Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu za použití směsi n-hexan-ethylacetát (7:1) ,jako elučního činidla, *

Bylo získáno 590,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

P o s t u ρ B.

Ku roztoku 3,OgMeziproduktu 53, jehož příprava je popsána výše, ve 200,0 ml vysušeného dichlormethanu, bylo při teplotě místnosti přidáno 2,35 g dimethylaminopyridinu a poté ještě za stálého míchání byl přidán

- 191 pomalu roztok 3,66 g tosylchloridu ve 100,0 ml dichlormethanu. Poté byla reakční směs míchána při teplotě místnosti po dobu 3,0 dnů, dokud nebyla reakce ' ukončena. Surový materiál,byl promyt s 1N roztokem kyseliny chlorovodíkové; nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou.

Oddělená organická fáze byla vysušena s bezvodým síranem hořečnatým, zfiltrována a filtrát byl reagován se 20,0 ml roztoku methoxidu sodného v methanolu (25% hmotnostní procenta).· Tato reakční směs byla poté míchána při teplotě místnosti 1,0 den a surový materiál byl zpracován s 1N roztokem kyseliny chlorovodíkové a ,pbté byl promyt s vodou a solankou.Oddělená organická fáze byla vysušena bezvodým síranem horečnatým a odpařena.

Zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografii za. použití směsi n-hexan-ethylacetát (8:1), jako elučního činidla. *'

Byla získána, žádaná, v nadpise uvedená sloučenina ( množství nespecifikováno), ve formě bíle zbarvené pěny. Celkový výtěžek 45%.

^]Η-ΝΜΗ, ( CLC1₃):

delta 9,75 (s.; IHJCHO )J6,99 ( s.; 1HJ CHPh₂);6,08 ( d.d.J 1H; H-12; J - 1,20 a 3,30 Hz ); 5,90 ( m.J ih;ch=gh₂); 5,28 ( m.; 2h; ch=ch₂);4,69 ( $.;ιη;η-ι;

1,20 Hz ); 4,23 ( m.; íh; h-5'); 4,11 ( <3.;ih; H-19a;J « 9,00 Hz ); 4,06 ( m.; 1HJH-4'); 3,79-:( d.J íh; h-i9t; j = 9,oohz); 3,26 ( a.; íh; h-2'; j = 3,90 Hz );. 3,21 ( m.; 2h; ch₂-ch=ch₂); 3,13 ( a.; íh; h-3,' j = 3,90 Hz ); 2,86 ( t.; ih;h-i1; j = 3,60 Hz).

Meziprodukt 108

192

Příprava difenylmethylesteru kyseliny /IR—<1 alfa,3a beta,4beta,4abeta,7beta,7ealfa,8abeta)/-8e-/(2,3a nhy dr o-6 -de oxy-4-0- (2,3-dihydroxypropyl) -be ta-Dmannopyranosyloxy)-me thyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8, 8a-oktahydro-7-methyl-3-O-methylethy1)-1,4-methans-indacen-3a-(IH)-karboxylové

Ku roztoku 2,0 g Meziproduktu 7, jehož příprava je popsána výše, v 50,0 ml acetonu a 5,0 ml vody, byl při teplotě 0°C přidán 1,0 g N-oxidu N-methylmorfolinu a ku vzniklé reakční směsi bylo pomelu přidáno 0,20 ml roztoku oxidu osmičelého ( 2,5O%( hmotnostní). v isobutanolu) a hydroxylace látky GM-218045X byla dokončena po třídenním míchání při teplotě místnosti.

Surový materiál byl smíchán s hydrogensiřičitanem sodným , zfiltrován přes Selit a odpařen do sucha.

Zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt s vodou a solankou. Oddělená organická fáze byla vysušena bezvodým sírane^ hořečnatým, odpařena do sucha a poté byl zbytek chromatografován na sloupci silikagelu za použití směsi hexan-ethy láce tát (1:1), a směsi * J dichlormethan-methanol ( 50 : 1), jako elučních činidel.

Byla získána žádaná, v nadpise uvedená sloučenina ( 1,75 g ), jako směs enanciomerú 50 : 50, ve formě bíle zbarvené pěny, ¹ H-NMR (CDGl-j):

delta 9,75 ( a.; 1HJCH0 ); 6,99 ( s.; 1H*.CHPh₂);6,O8 (d.d.;. ih;h-i2;j = 1,50 a 3,60 Hz ); 4,69 ( s.;ih;· h-1 '); 4,10 ( d.; 1H; H-19a; J = 9,30 Hz ); 3,90 3,58 ( m.; 5H; CH₂OH; CHOŘ; 0CH₂-GH0H: ve 4'); 3,79 ( a.; ih; η-i9t.; j = 9,30 Hz ); 3,27 ; 3,13 (a.;a.; ih; ih; h-2'a H-3 'j J = 3,9O Hz );3,23 - 3,22(m.;2H; h-4'a H-5'); 2,85 ( t.; 1H; H-1 T,J = 3,60 Hz ).

- 193 Meziprodukt 109

Přípreva difenylmethylesteru kyseliny /1R-(1alfa,3a be ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta )/-8a-/ (2,3 anhydro-6-de oxy-4-0-/ (2,3-0-isopropyliden)-2,3-dihydroxypropyl/-be ta-D-mannopyranosyloxy) -me thy1/-4f ormy 1-4, 4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thyl-3- (1 methylethyl)-1,4-methen-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku 350,0 mg Meziproduktu 108, jehož příprava je popsána výše, ve 20,0 ml vysušeného acetonu, bylo přidáno 250,0 /Ul 2,2-^dimethoxypropanu a katalytické množství ( 30,0 mg) kyseliny p-toluensulfonové a vzniklá reakční směs byla míchána, v atmosféře dusíku při teplotě místnosti po dobu 2,0 hodin.

Surový materiál byl odpařen do sucha a zbytek byl opět rozpuštěn v 70,0 ml ethylacetátu a vzniklý roztok byl promyt s vodou a solankou. Po zahuštění^- organic ké fáze byl získaný zbytek přečištěn chromatografií na sloupci, silikagelu, za použití směsi hexan-ethylacetát (6:1), jako elučního Činidle.

Bylo získáno 290,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, jako směs isomerů 50 : 50, ve formě bíle zbarvené pěny.

( CDC.l₃):

delta 9,74 ( s.JIHJCHO );' 6,99 ( s.;IHJCHFhg)*, 6,08 ( d.d.; ih; H-12;J = 0,90 a 3,30 Hz ); 4,67 ( d.; 1 h; H-Γ; J = 2,10 Hz ); 4,32 - 4,22 ( m.J 1H; CHOH ve 4');

4,12 - 4,03 ( m.; 2H*,H-19a a 0CH₂ ve 4'); 3,82 - -3,51 ( m.; 4H;.H-19b; 0CH₂-CH0H-CH₂0 ); 3,29 a 3,12 ( d.d.; ih; ih; h-2's h-3'; j = 3,90 Hz ); 3,26 - 3,20 ( m.; 2H;H-4'a h-5'); 2,85 ( t.; ih;h-ii;j =. 3,90 Hz );i,42 a 4,36 ( d.d.; 3HJ 3H*, (CH₃)₂-C isopropy lide nu ).

194

Příklad 1

Příprava /1R— (1alfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, Sabeta)/-8a-/(6-de oxy-3,4-0-isopropyliden-be ta-D-altropyranosyloxy)-me thyl/-4-formy1-4.48,5,6,7,78,8,8a-oktahydro-7-methy1-3-Ο-methylethýl)-!,4-methan-s-indacen 3a-(1H)- karboxylové kyseliny

Ku suspenzi I0%ního palladia na aktivním uhlí ( 80,0 mg) v 10,0 ml ethylacetátu^byl v atmosféře dusíku přidán roztok 180,0 mg Meziproduktu 2, jehož příprava je popsána výše, v 10,0 ml ethylacetátu a vzniklá reakční směs byla hydrogenována při teplotě místnosti a tlaku 0,21 MPa vodíku po dobu 1,0 hodiny. Potě byl _fn* katalyzátor odfiltrován a rozpouštědlo bylo odpařeno d,o sucha. ...

Zbytek byl zpracován urychlenou chromá tografií na; silikagelu..za použití směsi dichlormethan-methanol ( 20 :: 1 ), jako elučního činidla.

Bylo získáno 128,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR (CDQl^):

delta 9,73 ( s.;iH‘, CHO )J 6,08 ( d.d.*, 1H;H-2;j =

1,50 a 3,30 Hz ); 4,61 ( d.; 1H*_r H-1'; J = 2,10 Hz);.

4,30 ( d.d.; ih; H-3'*, J = 3,60 a 5,40· Hz )J 4,04 (d.; ih; 8óch₂; j = 9,30 Hz ); 3,95 ( d.d.; ih; h-2'; j =

2,10 a 3,60 Hz Ϊ* 3,85 ( d.d.; 1H*,H-4'*, J = 5,40 a 9,0 Hz ); 3,66 ( d.; Ίη; j = 9,30 Hz ); 3,49 ( d.k.; ih; H-5'; J_d * 9,00 Hz; J_k = 6,30 Hz); 2,69 (t.⁹, 1H;*H-1 J J = 3,60 Hz );

¹³C-NMR. (CDC1₃):

delta 204,80 (CHO); 175,40; (C0₂0) ); 148,30 (C-3);

M·

A?

- 195 130,70) (C-2^Z); 109,30 ( Ck.isop); 98,9© (C-Γ)-,76,90 ..(. _C-4.').; _7.5. ,.80...( ...C- 2.' ).;._74., 2Q_(-. 8a.CH₂).;.. 71,7-0 (0-3');

68,60 (0-5'); 65,60 ( G-8a); 58,9© (C- 4),

Příklad 2

Příprava sodné aole kyseliny /1R-(1alfa,3abeta,4beta, 4abe'tá,7béta,7aalfá,8abetá)/-8a-/(6_deoxy-3,4-0-Í3opropyliden-beta-D-altropyranosyloxy)-methyl/-4-forwyl4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3- (1 - me thyle thyl) -1,4-methan-s-indacen-3a-(-1H)-· karboxylové“·* * Ku roztoku 246,0 mg .sloučeniny., připravené , v rámci výše popsaného Příkladu 1, ve 2,0 ml dioxanu,. byl přidán 0,50 M roztok hydrogenuhličitanu sodného ( 0,99 ml) a vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 15 minut,

Pg vymře žení. bylo získáno .256,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

^H-NMR (ODCip:

delta 9,88 (s.J 1H;CH0); 5,95 (d.d.; 1H;H-2;j'= 1,50; a 3,30 Hz )J4,51 ( d.; ΙΗζΗ-l'JJ = 1,80 Hz);4,26 (d.d.; ih; H-3'; J = 4,80 a 6,00 Hz); 4,01 ( d.;iH; 8aCH₂;

J = 9,60 Hz' ); 3,87 - 3,80 ( m,J 2HJ/H-2',a H-4');

3,74 (d.; 1H;8aCH₂; J = 9,60 Hz); 3,50 - 3,42(m.;iH; H-5');2,66 ( t,;iH;H-i;j = 3,90 Hz' ).

Příklad 3

196

Příprava /1 Η-(1 alfa,3abe ta,4beta,4abe ta,7be ta,7aalfa,

8abeta)/-8a-/(6-deoxy-3,4-0-(2-pentyliden)-beta-Ua1tropyranosyloxy)-me thyl/-4-formy1-4,48,5,6,7,73,8,

8a-oktahydro-7-me thy 1-3- (1 -me thy le thyl) -ΐ, 4-me thans-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Kú suspenzi 30,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí v 10,0 ml ethylacetátu,byl v prostředí dusíku přidán roztok 140,0 mg Meziproduktu 3; jehož příprava je popsána výše; v ethylacetátu a vzniklá reakční směs byla hydro genována 2a tlaku 0,21 MPa vodíku po dobu 45,0 minut. Poté byl katalyzátor odfiltrován a rozpouštědlo bylo odpařeno do sucha.

Urychlenou chromatografií zbytku na silikagelu za použití směsi dichlormethan-methanol( 30 : 1),jako elučního činidla, bylo získáno 75,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě epimerů 26 :: 74.

(CDClj):

delta 9,82 ( s.JIH', CHO )£ 6,08 (d.d.; 1H;H-2;j 1,50 a,.3,30 Hz );4,6o ( d.;iH;H-ij = i,so Hz );

4,30 ( d.d.; ih; h-3';j = 4,20 a 6,00 Hz)’3,98 ( d.; iH;8aCH₂; j = 9,30 Hz); 3,94 ( d.d.; ih;h-2';j = 1,80' a 4,20 Hz );3,87 ( d.d.·/ 1H;H-4'jJ = 6,00: a 9,30 Hz); 3,65 ( d.; 1H;8aCH₂ ; J = 9,30. Hz ); 3,47 (d.k.JIHJ H-5'; JLp 9,3O)Hz;j_k = 6,30'Hz ); 2,7a ( t.; 1HJH-1;

J = 3,90 Hz );

¹³C-NMB (CDC1₃):

delta 204,50 (CHO);176,5O (CO₂H ); 148,2O(C-3);13O,6O'· (C-2 );11O,8 (C_k acetal);98,8Q) (C-1');76,6O (C-4'5; 75,60Í (C-2');-73,90 (SaCH^; 71,30) (C-3'); 68,90 (C5'); 65,50 ( C8a); 58,8(3 (C-4).

197

Příklad 4

Příprava /1R-(1 alfa,3abeta,4beta,4abeta,7be ta,7aalfa, 8abe ta) /-8a-/ (6-de oxy-3,4-0- (4-me thoxy-2-butyliden) be ta-D-altrapyranosyloxy )-me thy l/-4-f ormyl-4,4a,5,6,7 7a ,8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3-( 1-methylethyl)-1,4methan-a-indacen-3a-( 1H)-karboxylové kyseliny

Ku suspenzi 100,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí,v'15,0 ml ethylacetátu, byl přidán roztok 260,0 mg Meziproduktu 4, jehož příprava je popsána vý Še, v 10,00 ml ethylacetátu, a vzniklá reakční směs byla hydrogenována za tlaku’0,21 MPa vodíku po dobu' 45 minut.. Poté byl katalyzátor odfiltrován a rozpouštědlo bylo odpařeno.do sucha.

Urychlenou chromatografii zbytku na silikagelu za použití směsi dichlormethan-methanol (30 : 1),jako elučniho činidla, bylo získáno 172,00 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H=.NMH (ODCIZÍ delta 9,71 ( s.; ih;cho); 6,08 ( d.d.; ih;h-2;j =

1.50 a 3,60 Hz );. .4,605'( d.; 1H;H-1 *;j = 2,40 Hz );

4,31 (d.d.; lH;H-3';j = 4,20 a.6,00 Hz); 3,98 (d.;

1H$ 8aCH^; J = 9,30 Hz )’ 3,94 ( d.d.; 1H;H-2'jJ =

2,40 a 4,20 Hz ); 3,88 ( d.d.; 1H;H-4';j - 6,00 a

9,30 Hz )*, 3,65 ( d.;iH;8aCH₂ ;j = 9,30 Hz );3,5O ( t.; ih;cif₂o; j = 7,20 Hz ); 3,50 - 3,40 (m.; íh* H-5'); 2,69 ( t.; 1HJH-1;j = 3,90 Hz);

¹³G-NMS (CDC1₃):

délta 204,50) (CHO); 176,20- (CQ^H)· 148,20 (C-3)

130,60 (C-2); 109,80- (C-2); 98,80) (C-1 '); 76,70 ( C-4'); 75,70 (C-2*);73,8O (8aC^); 71,20 (C-2');

68,80 (C-5'); 68,40(CH₂0); 65,6O(G8a);58,9O(C-4);

58.50 (CH₃0).

198

Příklad!»

Příprava /1R-(1 alfa,3abeta ₁4be ta,4abeta,7beta,7aalfa,

8abeta)/-8a-/(6-deoxy-3,4-0-cyklopentyliden-beta-Baltropyranosy loxy )-me thyl/-4-f ormyl/-4. 4a, 5,6,7,7a, 8,

8a-oktahydro-7-měthyl-3-O -methyle thyl )-1,4-methan-sindacen-3a-(1H)- karboxylové kyseliny

10%ního

Ku suspenzi 50,00 mgVpalladia na aktivním uhlí v 10,0 ml ethylacetátu, byl přidán roztok 232,00; mg Meziproduktu 5, jehož příprava je popsána výše, v ethyl acetátu, a vzniklá reakční směs byla hydrogenovéna při teplotě místnosti a tlaku 0,245 M$a vodíku po dobu 1,5 hodiny,Poté byl katalyzátor odfiltrován a rozpouštědlo bylo odpařeno do sucha,

Urychlenou chromatografií zbytku na silikagelu za použití směsi dichlormethan-methanol (30 : 1),jako^; elučního činidla, bylo získáno 67,0 'mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR (CDCIj):

delta 9,71 ( ₃.;ih;cho );6,07 ( d.d.;1h;h-2;j = 1,50 a 3,30 Hz )J 4,59 (d.;1HJH-1J = 2,10 Hz )* 4,17 (d. d.; ih; h-3'; J = 3,60* a 5,4O Hz )J4,54 ( d.J 1H;8a CH₂; J- 9,30-Hz )J3,97 ( d.d.;iH,;H-2';j « 2,10 a 3,60 Hz i; 3*81 ( d.d.; ιη;η-4';8βοη₂; j = 9,30 h_z)J3,97 ( d.d.; 1H;H-.2';j = 2,.10 a 3,60 Hz ); 3,81 (d.d.JIH; B-4'; J = 5,40 a 9,00 Hz )J 3,70 (d.J 1HJ8aCH₂;j =

9,30 Hz ); 3,44 (d.k.J 1H;H-5'jJ_d = 9,00 HzJJ_k = 6,30 Hz ); 2,69. ( t.; ih; h-i;j = 3,30: h_z ).

Příklad 6 ‘

- 199 Příprava /1R-(1 alfa,3abe ta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, „ 8abe.ta.)..Z-8a-/ (2.,.6-didaoxy-*3 ,-4-O.-isopr-opy-liden-be-ta-D— a llopyranosyloxy) -me thyl/-4-formyl-4, 4a, 5,6,7,7a, 8,8aoktahydro-7-me thy 1-3- (1 -mé thy le thyl) -1,4-me than-sindacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 1,20 g Meziproduktu 7, jehož příprava je popsána výše, v 60,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno 600,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí v' atmosféře dusíku á vzniklá reakční směs byla míchána v Parrově autoklávu při teplotě místnosti při tlaku ' 0,280: MPa vodíku po dobu 1,0 hodiny. Rotě byl katalyzátor odfiltrován a promyt s větším množstvím ethylacetátu.Poté bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha.

Zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikage.lu. za. použití směsi-dichlormethan-methanol ( 25 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 0,79 g Žádané, v nadpise uvedené’ sloučeniny.

¹H-NBffi. (CmCl-j):

delta 9,81 ( s.J 1HJ CHO); 6,05 ( d.d.; 1H;H-2;j =

1,20 a 3,30 Hz ); 4,63: ( d.d.; 1H; H-Γ; J = 2,.40 a

8,40 Hz )J 4,38 ( d.t.J 1H;H-3';J_d = 3,OOHzJJ_t =

5,10 Hz ); 4,29 ( d.; 1H;8aCH₂;j = 9,30 Hz); 3,64 ( d.d.; 1H;H-4';j = 5,10 a 9,30 Hz); 4,43 (d.k.;iH;

' H-5'; 9,3O)Hz;j_k = 6,00 Hz);.3,40: (d.; 1H;8aCH₂;

J = 9,301 Hz. ); 2,53 ( t.j 1H,J H-i; J = 3,90 Hz ); ¹³C-NMR (CDfil^):

delta 204,70 {OHO); 174,60 (CO₂H);148,2O (C-3);130,60 (C-2); 108,90' CCťC^)^); 98,30 (C-l');76,6O (C-4'); 73,70; (8aCH-₂); 72,50 (C-3*); 71,70 (C-5')J67,00(C8a); 65,20; 59,00 (C-4).

200

Příklad 7

Příprava /1H-(1alfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,

8abe ta)/-8a-/(2,6-dideoxy-3,4—0&·(4-me thoxy-2-butyliden) -be ta-Il-a llopyrano sy loxy) -me thy 1/-4-f ormy 1-4 ,.4a, 5,6,7,

7a, 8,8a-oktahydro-7-me thy1-3-(1-me thyle thyl)-1,4-me than -s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku suspenzi 300,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí v 10,0 ml ethylacetátu byl přidán roztok 246,0 mg Meziproduktu 8, jehož příprava je popsána výše, ve 10,0 ml ethylacetátu a vzniklá reakční.směs byla hydrogenována při teplotě místnosti a tlaku 0,315 vodíku po dobu 1,0 hodiny. Poté byl katalyzátor odfiltro. , I ván a rozpouštědlo bylo odpařeno do sucha.

Zbytek byl^přáčištěn .urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi dichlormethan-tmethanol ( 30 : 1) ,jako elučního Činidla.

Bylo získáno 182,00 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, jako směs epimerů 4 : 1, ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-NME (CDCl^):

delta 9,81 ( s.J ΙΗ’,ΟΗΟ); 6,06 (d.d.J IH.; H-2;j‘= 1,50 a 3,60 Hz ); 4,62 ( d.d., 1H; H-1 ';j = 2,70 a 8,10 Hz);

4,41 ( d.t.; 1H;H-3';.J_d = 3,30'Hz;j_t = 2,50 Hz );4,24 ( d.; 1H;8aCH₂; J = 9,00 Hz); 3,68 (d.d.; 1H;h-4*;.J =

5,70 a 9,00 Hz ); 3,50 ( t.; 2H;Cít₂;j = 7,50 Hz); 3,.46 - 3,38 ( m.;iH;H-5'); 3,33 (a.; 3H; CH-jQ' ); 2,54 ( t.; 1HJH-1;J = 4,20 Hz );.

(CDCl^):

delta 204,50 (GHO); 175,10 (C0₂H); 148,20 (C-3); 130,70 (c-2);i09,40 íc-2;); 98,30 (c-i')_? 76,40 (c-4');?3,6o (8aCH₂); 71,90 (C-3^Z); 71,40 (0-5'); 68,60 (CH-₂0); 65,20 (08a); 58,90 (C-4); 58,60 (CH^).

201

P ř í k 1 a d 8

Příprava. sodné. .sole.. kyseliny.-/-1.R--(-1-alf a.,.3abe-ta-,-4be ta-,------ - - 4abe ta, 7be ta, 7aalf a ,8abe ta) /-8a-/ (2,6-dideoxy-3,4-0isopropyliden-bet8-D-allopyranosyloxy)-methyl/-4-formyl4,4a, 5,6,7,7a ,8,8a- oktahydro-7-me thyl-3-(1-me thyle thyl)

-1,4-methan~s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku, připraveném rozpuštěním 376,0 mg sloučeniny, připravené v rámci Příkladu 6, ve 3,0 ml dioxa-nu; bylpřidán 0,5N roztok hydrogenuhličitanu sodného (l,5ml)

Výsledná reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 30 minut a poté vymražena.

Bylo získáno 392,00 mg žádané,^-v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMH (CDCl-^):

delta 9,84 ( s.*, IHJCHO ); 5,94 ( d.d.; 1H;H-2; =

1,50 a 3,60 Hz ); 4,52 (d.d.; IH; H-Γ; J = 2,40'a 9,00 Hz ); 4,41 - 4,37 ( m.; 1H*, H-3'); 4,02 (d.JIH;

8a0H₂; J = 9,6a Hz ); 3,74 ( d.; IH; 8aGH₂ 9,60

Hz ); 3,57 ( d.d.; 1HJ h-4'; J = 5,40 a 10,00 Hz);

3,42 ( d.k.; ih; H-5';. J_d = 6,30 Hz; J_k = 6,30 Hz);

2,56 ( t.; ih;h-i;.j = 3,60 Hz ).

Příklad 9

Příprava /1P-(lalfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abe ta )/-8a-/ (6-de oxy-3,4-0-thi onkarbony1-be ta-D-a ltropyranosy loxy )-me thyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl-3-(1 -methyle thyl)-1,4-me than-s-inda cen 3a-(1H)-karboxylové kyseliny

202

Ku roztoku 0,220 g Meziproduktu 9_f jehož příprava je popsána výše, v 5,0 ml dichlormethanu, byl při teplotě 0°C přidán 2%ní roztok trifluoroctové kyseliny v di chlormethanu (20,00 ml).Vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 1,0 hodiny a poté byla promyta 2x se 20,0 ml vody a vysušena sírane^ hořečnatým.

Po odpaření rozpouštědla byl získán zbytek, který byl chromatografován na sloupcid-.silikagelu za použití směsi dichlormethan-methanol ( 40 : 1 až 20 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 0,10 g žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

jf ^-NME (GDC1₃):

delta 9,68 ( s.JIHJCHO )*, 6,09 ( d.d.; 1H;H-2;j = 1,50 a 3,60 Hz ); 4,94.( d.d.; 1HJ H-3'*, J = 3,90 a 7,20 Hz);.

4,62 ( m.; 2η;η-Γ; a-H-4'); 4,14 ( d.d.; 1H;H-2';j =

2,10 a 3,9CDHz ); 4,00 ( d.; ÍH;8aCH₂; J_A& = 9,30 Hz); 3,72 ( d.;iH; 8aCH₂; J_AB = 9,30?· Hz); 3,68 ( m..; IH;

H- 5'); 2,71 ( rn.; ih;h-i );

¹³C-NM£ (GDG1₃):

delta 204,40 (QHO); 190,20 (OS); 176,40’ (CO^ );148,4O (C-3 )J 130,60 (C-2);98,2O (0-1 '); 82,30’ a 80,10 (C-3'a C-4'); 74,50 (8aGH₂); 71,70 (C-3a ); 69,20 a 66,40 (GL-2'β 0-5'); 65,50 (C-8a); 58,80 (C-4);46,00’·' ( C-1 ).

Příklad 10

203

Příprava /1R-(1alfa,3abeta,4beta,4abeta,7bete,7aalfa, 8abeta)/-8a-/(2,6^didep?X.r3.., 4-0-ksrbony_l.rb.e.t.8-D-allo- . pyranosyloxy)-methyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a oktahydro-7-methy1-3-( 1 -methyle thyl)-1,4-methan-sindacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 125,0 mg Meziproduktu 10, jehož příprava je popsána výše, v 15,00 ml toluenu zahřívanému za refluxu pod zpětným chladičem, byl přidán v atmosféře dusíku po’malých částechpřebytek karbonyldi-’ imidazolu. Jakmile byla reakce ukončena ( kontrola chromatografií na tenké vrstvě) , bylo rozpouštědlo za sníženého -tlaku odstraněno a zbylý surový mateři-' ál byl rozpuštěn ve 200,0 ml dichlormethanu,.a postupně promyt 3x se 1.00,0 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové * 1 x 100,0 ml solanky, a 1 x 100 ml vody.

Po vysušení síranem hořečnatým a zahuštěním do sucha byla získaná látka olejovíté konzistence použita dále bez dalšího.čištěni a po rozpuštění v 15,0 ml. ethylacetátu byla třepána v Parrově autoklávu za ' tlaku 0,14 MPa.vodíku za přítomnosti 50,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí, při teplotě místnosti a po dobu 1,0 hodiny.

Po odfiltrování katalyzátoru a odstranění rozpouštědla byla získána látka sirupovité konzistence, která byla přečištěna prepara\tivni chromatografií na tenké vrstvě, za použití směsi methanol-dichlormethan ( 1 : 15), jako elučního činidla.

Bylo získáno 50,00 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny z frakce o fif = 0,50, ¹ H-NMR (CDC1₃):

delta 9,70 ( a.; 1H;CH0 ); 6,07 ( d.d.J 1H;H-2;J ~

1,20 a 3,30 Hz ); 4,93 ( m.*, 4,63 ( d.d.;

ιη;η-Γ; j = 2,40 a 7,80 h_z); 4,24 ( d.d,; ih;h-4*,

204 <1 - 6,60 a 9,30 Hz ); 4,05.a 3,57 (2d. ;2Η;88θΗ₂;<Γ_Α& = 9,00 Hz );3,63 ( m,.; ih;h-5');2,66 (t,; ih;h-i;

J = 3,90 Hz );

¹³C-NMR (CDC1₃):

delta 204,60 (CH0)‘, 176,00' (COOH ); 154,00(000); 148,20? (C-3); 130,70 (G-2); 97,5O'(C-1')‘,76,60 (C-4*); 74,70' (0-3*); 69,90? (05.')', 31,70 tC-2*).

P ř í k 1 a d. 11

Příprava /1R-(1 alfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abeta)/-8a-/(2,6-dideoxy-3,4-0-thiokarbonyl-beta-nallopyranosyl)-methyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a oktshyd2ro-7-me thyl-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s- in-’ dacen-3a-(IH)- karboxylové kyseliny

Ku roztoku 130,0 mg Meziproduktu 11, jehož příprava je popsána výše, v 5,0 ml vysušeného dichlormetha nu^bylo přidáno při teplotě 0°G 250,0 yul kyseliny trifluoroctové. Po·=2,0 hodinách byla vzniklá reakční směs naředěna s 50,0 ml dichlormethanu a postupně promyta 2x 100,0 ml vody, vysušena síranem hořečnatým a zahuštěna do sucha.

Zbytek ve formě plátky olejovité konzistence byl přečištěn preparativní chromatografií na tenké vrstvě^ za použití silikagelu a'směsi methanol-dichlormethan ( 1 : 15), jako elučního Činidla,

Bylo získáno 68,00 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny z frakce o Rf - 0,60, ¹H-NMR (CDGl^):

205 delta 9,70/ (a.; 1H;CH0 )*, 6,07 (d.d.*, 1H*,H-2*,J ⁵’⁰⁸ _< ®ό^ΊΑ/Η-3_'); 4,63_(d.d.;_

1HJ H-ϊ'; J = 2,70 a 8,40 Hz ); 4,45 (d.d.*, 1H*,H4';j = 6,60 a 9,00 Hz ); 4,03i a 3,59 (2d.*, 2H;8a CH₂; 9,30 Hz ); 3,64 ( m.*, 1HJH- 5')ζ 2,67 ( t.; ie; h-i; j = 3,οσ h_z );

¹³C-NMH ( CDCl^):

delta 204,50 (CHO)J 190,90 (CS); 176,3O(C0OH)*,148,20 ( c-3); 130:,70/-(0-2^,97,50 (c.-t);so,3o (c-4'η 79,60: ( C-3'); 69,50 (C-5'); 31,30 (C-2').

Příklad 12

Příprava /1R-(1 alfa, 3abe ta,4be ta,4abeta,7be ta,7ealfa, 8a be ta)/-8a-/ (2,6-dide oxy-3,4-0-me thylen-beta-D-a llopyranosyloxy)-methyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a. oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1,4-methan«r a indacen-3a-(1H)- karboxylové kyseliny

Ku roztoku 450,0 mg Meziproduktu 10, jehož příprava je popsána výše, v 10,0 ml dibromethanu, bylo za intenzivního míchání přidáno 40,0 mg tetrabutylamoniumbromidu a 100,0 ^1^vodného, 50%ního roztoku hydroxidu sodného. Po 12,(X5yle k reakční směsi rychle přidáno 100,0 ml 1N roztoku kyseliny chlorovodíkové a směs byla vytřepána se 100,0 ml dichlormethanu. Oddělená organická fáze byla promyta 1x se 100,0 ml 1N roztokem kyseliny chlorovodíkové ,vysušena síranem hořečnatým a zahuštěna do sucha.

Zbytek, ve formě bíle zbarvené látkyy byl použit dále bez dalšího čištění a po rozpuštění v 15,0 ml ethylacetátu byl třepán v Parrově autoklávu za tlaku 0,14MPa

206 vodíku za přítomnosti 50,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí při teplotě místnosti a po dobu 1,0 hodiny.

Po odfiltrování katalyzátoru a odstranění rozpouštědla, byl získán zbytek ve formě látky olejovité konzistence , který byl dále zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití sra^si acetonhexan ( 1 : 1Q),e.;L1 :..5.)_T:.'.jako elučního činidla.

Bylo získáno 130,0 mg žádané, v nadpise uvedené slouččniny, ve formě látky olejovité konzistence.

¹H-NME( CDC1₃):

delta 9,80 (a.; IHJCHO ); 6,05 (d.d.; 1Η*,Η-2; J =

1,20 a 3,30 Hz ); 5,12 a 4,86 (2m.; 2H; ΟΟί^Οήμ,80 ( d.d.; 1H;H-1';J = 2,40 a 8,70 Hz )J4,2O a 3,44 (2d.; 2H; 8aCH₂; J_ÁB = 9,30 Hz ); 4,13 (m.; 1HJH-3');3,67 ( d.d.; 1H; H-4';j = 5,IP a 8,70 Hz ); 3,38 (m.;iH; H-5'); 2,58 ( t.; 1H.; H-1; J = 3,90 Hz );

¹³G-MB( CDC1₃):

delta 204,60 (CHO); 174,80 (COOH); 148,30 (C-3)130,6ď (c-2); 98,io (c-Γ); 94,90 (och₂o); 75,40(0-4); 73,9a ( C-3'); 70,30 <C-5'); 32,30 ( C-2').

Příklad 13

Příprava sodné sole kyseliny /1R-(1alfa,3abeta,4beta, 4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/(2,6-dideoxy-3,4-0me thy len-be ta-D-allopyranosyloxy)-me thyl/-4-formy1-4, 4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl-3-(1-me thylethyl) —1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

- 207 Ku roztoku sloučeniny, připravené v rámci Příkladu 12 (200,0 mg) v 5,00 ml methanolu, byl přidán “po“ kápkách O’’TO6N’roztok hydroxidu sodného v 3,98 ml vody. Po 30 minutách bylo rozpouštědlo za sníženého tlaku odstraněno a zbytek byl rozpuštěn v 5,0 ml dioxanu a poté lyofilizován.

Bylo získáno 209,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NME(Cj₃0D): .....

delta 9,87 (s.J IHJCHO); 6,54 (d.d.;1H;H-2;J = 1,50 a 3,60 Hz ); 5,10 a 4,82 (2m.J 2HJ OCH₂O )J 4,51 (d.d.; ih; H-Γ; J = 2,40'e 8,70 Hz); 4,12 (m.< 1HJ H-3.');

4,03 a 3,73 (2d.J 2HJ8aCH₂,J_AB = 9,90; Hz ); 3,61 (m.J ih;h-4'); 3,35 ( m.; ih; h-5'); 2,56 ( t.; ih;h-i): ¹³C-NMR(CI1jOD):

delta 200,20- (CHO); 169,00 (COOH); 142,90 (C-2)* 120,6a íc-2); 90,30 (c-Γ); 86,40 (och₂o); 67,50; (c-4); 66,2a CC-3'); 61,80 (C-5').

PříkladU

a) Příprava /1R-/1alfa,3abeta,4beta,5abeta,7beta, 7salfa,8abe ta)/-8a-//1S,3R,7R, 9R/-2,5,8-trioxa3,7-dimethyl-cÍ3-bicyklo-/4.4.Q/-dek-9-yl-oxy me thy l/-4-f or.myl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro 7-me thy 1-3-( 1-methy lethyl )-1 ,4-methan-s-indacen -3a-(1H)-karboxylové kyseliny

208

b) /1R-(1alfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,

8abe ta)/-8a-//1S,3S,7R,9R/-2,5,8-tri oxa-3,7dime thy1-ci s-bicyklo-/4.4.0/-dek-9-y1-oxyme thyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro7-methy1-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-s-indácen -3a-(1H)-karboxylové kyseliny V Parrově autoklávu bylo za přítomnosti 50,0 mg lOífeního palladia na aktivním uhlí třepáno při tlaku 0,.14 MPa vodíku při teplotě místnosti 120;0 mg Meziproduktu 14, jehož příprava je popsána výše, v 15,0; ml ethylacétáty,po dobu.1,0 hodiny,<£o odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku bylá získána látka sirupovité konzistence, která byla dále zpracována urychlenou chromatografií na silikagelu_zza použití směsi aceton-hexan ( 1 10);

( 1 : 7) a ( 1 : 5), jako elučního činidla.

Sylo získáno

35,0 mg sloučeniny, označené a)

Rf ³ 0,50 (směs hexan-acetonj 4 :: 1) a

40,0 mg sloučeniny, označené b)

Rf - 0,40 ( směs hexan-acetonj 4:1)

Obě zmíněné sloučeniny byly získány ve formě bezbarvé látky olejovité konzistence.

a) (CDCl-j):

delta 9,80 ( s.; IHJCHO); 6,04 (d.d.JIH,; H-2JJ ³ 1,20 a 3,30 Hz )J 4,62 ( d.d.; IHJ H-9'j J ³ 2,10 a 9,90 Hz);

- 209 4,20 (a.; 2Η; 8aCH₂+H-7'); 3,97 (m.J 1HJ H-l');3,73 _.(_m.-ih;--ochcHj );-3,40 (^-;-2η;- 8aCH₂+ocH-j; -3,27- ” ( a.; ih; och₂; j_ab = ιο,βσ,Ηζ ); 3_ři8 (a.d.; ih;h- ’ 6';j = 3,30 a 10,20' Hz );

¹³C-N3Sa(CDGlj)::

delta 204,60 (CHO); 174,60 (COOH); 148,30 (C-3);13O,6O (o-2); 97,9a (c-9'); 73,50 <och₂); 73,2a (c-6); 72,10 (c-Γ); 71,90; (ochcHj); 65,40 (c-7'); 31,90? (c-10');

22,70 (OCHCHj).........................

b) ’ ~ ~ ' .' ’ ’ ' ' ¹H-NMa(CHCl₃):

delta 9,79 (s.JIHJCHO); 6,05 (d.d.; 1H;H-2;j = 1,5.0 a 3,60 Hz); 4,73 ( d.d.; 1HJ H-9'', J = 3,00 a 6,3.0:

Hz ); 4,26 ( m.; ΙΗζΗ-Γ); 4, i 5 (m.; 2H; 8aCH₂+H-7'); 3,98 ( o.; ih; ochcHj); 3,79 (d.d.;ιη;οογ₂ ;j = 3,1a a 11,40’ Hz); 3,41 (d.;iH;8aGH₂; J = 9,60 Hz ); 3,35 ( a.; ih; och₂ ; j = 3,10 a 6,30 h_z); 3,27 (d.d.;iH; H-6';j =5,70 a 11,70 Hz ); 2,55 (t.j 1HJH-1 ); ¹³C-NMR(CDC1₃):

delta 204,60 (CHO); 174,60 (COOH); 148,30(0-3)J130,60· (C-2); 99,20 (C-9')J74,70 (OCHCHj,); 73,60 (OGH₂);69,3O (c-6'); 66,30 (C-Γ); 65,40 (C-7'); 31,90 (c-10');

22,60 (OCHGHj).

Příklad 15

210

Příprava /13-(1 alfa,3abeta,4beta,4abe ta,7be ta,7aaífa,

8a b e ta) /-9a - //1S, 7R-, 9R/-2,5,8. t r i oxa -3,3,7 -1 ri me thy 1cis-bicyklo-/4.4.0/-dek-9-yl-oxy-me thyl/-4-formy1-4,4a , 5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1,4 -methan-s-indacsn-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 200,0 mg Meziproduktu 15, jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno 50,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí v prostředí dusíku a vzniklá reakční směs byla třepána v Parrově autoklávu za tlaku 0,14 MPa vodíku při teplotě místnosti pp dobu 1,0 hodiny.

Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi aceton-hexan ( 1 : 10) a ( 1 : 15), jako elučního činidla.

Bylo získáno 140,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle zbarvené pěny.

¹ H-SKB( GUCl-j):

delta 9,81 (s.;iH;CHO); 6,03 (d.d.;iHJH-2;J - 1,50 Hz);

4,62 ( d.d.;1HJH-1';j = 2,10 Hz; J = 9,60 Hz );4,35 4,15 (m.J 3H;8aCH₂; H-7'a Η-Γ); 3,40 ( m.;2H; 8aCH₂ a 0CH₂); 3,25 - 3,15 (m.; 2H;H-6'a OCH₂ ); 2,52. ( t.j ih; H-1); 1,33 a 1,13 Í2sJ 2CH₃.);

¹³C-NMB(CLO1₃):

delta 204,70 (COH);174,10 (COOH); 148,30(0-3); 130,60 (c-2); 98,og ;c-9'); 73,40 (och₂); 73,30 <c-6'); 65,10 (c-D; 64,70 (c-7 ); 31,90 (c-10'); 21,10 (2ch₃).

Příklad 16

211

Příprava /1R-(1 alfa,3abe ta, 4beta,4abeta, 7beta,7beta, __8afc)e_ta_)_/-8a-//íS, 4S, 6R._r8R l-2-,7-dioxa-4č-dime-thyl-c-i-s------bicyklo-/3.4.Q/-non-8-y1-oxy-me thyl/-4-formy1-4,4a,5,

6,7,7a,8,8a-oktahydr0-7- me thy1-3-(1-me thyle thy1)-1,4methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 680,0 mg Meziproduktu 20Éa)_z jehož příprava je popsána výše, ve 100,0 ml ethylacetátu, bylo v atmosféře dusíku přidáno 200,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a'vzniklá reakční směs byla předložena do Parrova autoklavu, kde byla při tlaku 0,175 MPa vodíku při teplotě místnosti po dobu 1,0

-hodiny třepána. Po odfiltrování katalyzátoru^odpaření rozpouštědla do sucha byl získaný zbytek přečištěn urychlenou chromátografií_zza použití směsi dichlormethan-methanol (49 : 1) , jako elučního činidla.

Bylo získáno 450,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

¹ Ξ-NMR(CDC1₃):

delta 9,86 ( s.JIHJCHO); 6,04 (d.d.JlH;H-2;J = 1,50 a 3,60 Hz ); 4,57 (d.d.; 1H;H-8';' J = 2,40 a 9,30 Hz);

4,40 (d.; 1H;8a-CH₂ ; j = 9,60 Hz ); 4,08 (m.;2H; ΗΓ; a CH₂-3'(1H)); 3,27 (m.; 3H;.H-6';GH₂-3 (1H);8a- ch₂(ih)); 2,47 (t.; ih;h-i; j = 3,90 Hz); 1,02 (a.;

3HJ 4*-CI^; J = 6,60 Hz);

¹³O-NMR(CDCL1₃):

delta 204,70(CH0); 173,80 (C0QH); 148,40(0-3); 130,50;

( C-2); 98,$0 (C-8'); 75,20- (C-Γ); 74,30 (Ss-CH₂);

73,30 (C-3*); 71,90 (C-6')J 51,20 (C-5'); 36,OOÍC-4');

32,90 (C-9'); 19,40 (4'-CH₃).

212

Přikladl?

Příprava aodné sole kyseliny (1fi-(1alfa,3abeta,4beta, 4abeta,7beta,7aalfa_ř8abeta)/-Sa-//1S,4S,6R,8R/- 2,7 dioxa-4,6-dimethyl-cis-bicyklo-/3.4.0/-non-8-yl-o2y me thyl/-4-f ormyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thy 13-(1-methylethyl)-1,4-methan-a-indacen-3a-(1H) karboxylové

Ku roztoku 450,0 mg sloučeniny, připravené v rámci výše popsaného Příkladu 16, ve 100,0 ml methanolu, byl přidán po kapkách 0,099 N vodný ...roztok hydroxidu sodného ( 9,50 ml). Rozpouštědlo bylo za sníženého tlaku odstraněno a zbytek byl rozpuštěn v 80,0 ml vody a poté byl lyofilizován.

'1

Bylo získáno 470,00 mg Žádané, v-nadpise uvedené sloučeniny.

¹Η-ΝΊΗ2.(0Ός0Π):

3) delta 9,86 (s.JJHJCHO); 5,94 (d.d. *, 1HJH-2; J = 1,50 a 3,60 Hz); 4,43 ( d.d.; 1H;H-8*; J = 2,10 a 9,30 Hz);

4,13 a 4,02 ( m.J 3H;8a-CH₂(1H);H-1CH₂-3'(1H))J3,74 ( d.; ih; 8θ-οη₂; j = 9,90 Hz ); 3,34 - 3,23 ( m.;2H; ch₂-3*;(ih);h-6'); 2,56 ( t.; ih;h-i;j = 3,90 Hz);

2,34 (m.; ih;h-4'); 0,99 ( a.; 3h; 4'-ch₃; j = 6,90 hz );

¹³C-NMR( CD₃OD):

delta 209,70 (GHO); 178,40 (C00*Na⁺); 152,40. (C-3)J

130,10 (c-2); 100,10 (c-8'); 77,20 (c-Γ); 77,00 (c3'); 75,30' (8a-CH₂); 73,00 (C-6')J 52,80 (C-5'); 37,20 ( e-4');34,5O <C-9'); 19,60 (4'-CH₃).

213

Příklad 18

Příprava /1R-(1 alfa,3abeta,4beta,5abeta,7beta ,7aalfa, 8abe ta)/-8a-//1S,4R,6 R,8R/-2 , 7-di oxa-4,6-dime thy1-ci a -bicyklo-/3.4.0/-non-8-y 1-oxy-me thy l/-4-f ormyl-4,4a,5, 6,7,7a,8,8a- oktahy dr o-7-me thyl-3- (1 -me thyle thyl) -1,4 -methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 180,0 mg Meziproduktu 20(b), jehož — příprava je popsána výše, v 60,0 ml ethylácetátu,bylo.

přidáno v atmosféře dusíku 100,0 mg 1Q%ního palladia na aktivním uhlí. Vzniklá suspenze byla po předlože.. ní do Parrova autoklavu třepána za tlaku 0,175*MPa vodíku při teplotě místnosti po dobu 2,0 hodin. Po odfiltrování katalyzátoru bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha.

Zbytek byl 2x zpracován urychlenou chromatografii na silikagelu za použití směsi dichlormethan-methanol ( 49 : 1 ) a poté ještě směsi hexan-aceton( 4 ; 1)~,“ jako elučních Činidel.

Bylo získáno·.90,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle zbarvené pěny.

^-NffiRÍ CDCÍ^): ' .

delta 11,50 ( š.s.;ih;cooh ); 9,87 (s.;ih;cho);6,O4 ( d.d.; 1HJH-2; J = 1,20 a 3,30 Hz); 4,53 (d.d.JIH; H-8';j - 2,40 a 9,90 Hz ); 4,45 a 3,26 (2d.; 2H;8agh₂ ; j = 9,30 Hz ); 4,19 ( k.; ih;h-i^z;j = 3,30 Hz);

3,96 ( t.;iH;CH₂-3'l J = 8,40 Hz); 3,58 ( m.JIHJH-ó');

3,43 ( d.d.; ih;ch_?-3';j = 10,20 Hz ); 2,55 (m.;iH; H-4');

¹³C-NMR(CDC1₃):

delta 204,60 (CHO); 174,40 (COOH); 148,30(C-3);130,60

214 (C-2); 97,90; (0-8'); 78,70 (C-Γ); 73,30 (C-3');72,9O ( 8a-CH₂); 68,70 (C-6'); 46,10 (C-5');36,6O (C-4')‘,

34,02 (G.-9'); 21,80 (6- CH/; '13,60 (4*-CH/.

Příklad 19

Příprava /1R-(1 alfa,3abe ta,4beta,4abe ta,7be ta,7aalfa, 8abe ta)/-8a-//1S, 4R,7R,9R/-2,8-dioxa-4,9-dimethyl-cis -bi cyklo-/3 «4.0/-non-7-yl-oxy-methyl/-4-formyl-4,4a,5, 6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-methy1-3- (1 -me thyle thyl)-.1,4methán-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 150,0 mg Meziproduktu 23(a), jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno ,v atmosféře dusíku .50,0 mg 10%ního palladia na aktivním..„uhlí·..a; vzniklá .reakční směs byla třepána v Parrově autoklávu při tlaku 0,14 MPa^a teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny.Po odfiltrování katalyzátoru bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha.

Zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií za použití směsi aceton-hexan( 1 : 3), jako elučního Činidla.

Bylo získáno 100,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě pevné, krystalické látky.

¹H-NMR( CDCl/í delta 9,86 ( a. JIH.; CHO); 6,05 (d.d.; 1H;H-2;J = 1,20 a 3,30 Hz )J 4,63 (d.d.; 1H;H-7r';j = 3,30 a 6,60 Hz); 4,37 (d.; 1H; δβΟΗ/ J_AB = 9,60 Hž ); 3,98 a 3,67 ( 2 d.d.; 2HJH-3'; J = 6,60 a 8,10 Hz ); 3,40 - 3,2CE ( m.; 3H;saCH₂;H-9'a h-Γ); 2,46 ( t.; ih;h-i;j = 3,90 Hz ); 1,04 ( a.; 3h;ch₃ch ).

215 Příklad 20

Příprava sodné sole kyseliny /lR-(1alfa,3abeta,4beta, 4abe ta,7be ta,7aslfa,8abe ta)/-8a-//1S,4R,7R,9R/-2,8dioxa-4,9-dime thy1-ci s-bicyklo-/: 3.4.0/-7-y1-oxy-me thyl/ -4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thy1-3(1 -methyle thyl )-1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové . ., Ku rozioku -100-,0 mg sloučeniny,-'připravené v ‘ rámci Příkladu 19, popsaného výše, v 5,0 ml methanolu, byl přidán po kapkách 0,106N vodný roztok hydroxidu sodného ( 1,88 ml ). P.o 30 minutách bylo rozpouštědlo za sníženého tlaku odpařeno a zbytek byl rozpuštěn ve 3,0 ml vody .a poté-lyofilizován.

Bylo získáno 104,0 mg Žádané, v nadpise uvedené sloučeniny..

¹H-NMR) CIXjOD): 9,88 (s „J ΙΗ’ΟΗΟ) J.

delta 5,93 (d.d.; 1H’,H-2; J = 1,20 a 3,30 Hz);4,49 (m.*_ř 1Η;Η-7Ί; 4,02 (m.; 2Η*,Η-3' a 8aCH₂); 3,72 ( d.;iH;

880¾ ;J_AB. = 9,30 Hz );2,56 (t.J1H; H-1JJ = 3,60 Hz); ¹³C-NMR(eD₃OD):

delta 209,70 (CHO); 178,40 (COOH); 152,40 (C-3); 130,10 (C-2); 99,90 (C-7'); 82,10 (C-Γ); 76,50 (880¾)J72,20 (C-9'); 37,5010-5'); 15,20 (CH^-CH).

Příklad 21

216

Příprava /1R-(lalfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abe ta)/-8β-//1S,4S,7R,9R/-2,8-dioxa-4,9-dime thy1-ci a -bi cyklo-/3.4. Q/-non-7-y1-oxy-me thyl/-4-f ormy 1-4,4a,5, 6,7,7a, 8,8a-oktahy dro-7-me thyl-3- (1 -me thy le thyl )-1,4methan-s-indacen-3a-( 1H)- karboxylové kyseliny .

Ku roztoku 260,0 mg Meziproduktu 23 (b),. jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno 50,0 mg lO%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla třepána v Parrově autoklávu za tlaku 0,14 MPa vodíku při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny. Po odfiltrování katalyzátoru bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha a zbytek byl přečištěn preparativní chromatografií na tenké vrestvě za použití silikagelu a směsi methanol-dichlormethaní 1 : 20), jako elučního činidla.

Bylo získáno 185,0 mg. žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě látky, olejovité konzistence..

Rf = 0,60.

¹ H-NMR (CDC1₃): ¹ delta 9,85 ( S.;1H;CHO); 6,04 ( d.d.; 1H;.H-2;j = 1,56D a 3,60 Hz ); 4,88 ( t.j IH; H-7'; 2,70 Hz ); 4,27 a

3,28 (2d.; 2H; 8sCH₂;j_ab = 9,90 Hz); 3,85 a 3,73 (2m.; 2h; och₂); 3,60 ( m.; ih; h-9'); 3,37 ( a.a.; ih;h-i'; JJ = 7,20 a 8,40 Hz ); 2,47 (m.J 3HJ H-5'+CHCH₃+H1);

¹³ C-NMR( CDCl-j) delta 204,40 (CH0);i73,70 (COOH); 148,20 (C-3); 130,50 (C-2); 98,70 (C-7')J 81,20 (C-Γ); 72,80 (8aCH₂+OGH₂);' 69,90(0-9'); 25,40 (C-6')J 12,40 (CH₃GH).

Příklad 22

217

Příprava /1R-Cl alfa ,3abeta ,4beta ,4abeta,.7beta ,7aalfa, 8abe ta) /-8a-/ /1S,7R, 9R/-2,8-dioxa-4,4,9-trimethyl-cis -b“icykró-/3’í4707-nón-7-yl-oxy-me thy Í/-4-f ormy 1-4,4a, 5, 6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thyl-3- (1 -me thyle thyl )-(1,4methan-s-indacen-3a-(1H)- karboxylové kyseliny

Ku roztoku 100,0 mg Meziproduktu 24, jehož příprava je popsána výše, ve 40,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno v atmosféře dusíku 50,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí 8 vzniklá, reakční. směs byla -třepána · v Parrově autoklávu při tlaku 0,175 MPa vodíku,při ' teplotě místnosti, po dobu 2,0 hodin. Po odfiltrování katalyzátoru bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha.2.

Zbytek byl zpracován 2x urychlenou chromatografií za postupného použití 1,5O%ního methanolu v dichlormethanu a 15%ního acetonu v hexanu, jako elučních Činidel. Bylo získáno 40,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-NMR( CDCl-j):

delta 9,35 (a.; ih;cho); 6,o5 ( d.d.; ih;h-2;j =

1,20 a 3,60 Hz ); 4,84 ( t.j 1H;H-7'*,J = 3,00 Hz);

4,23 a 3,29 (2d.; 2H¹, 8a-CH₂; J = 9,60 Hz); 3,81 (t.* ih; η-Γ; j = 8,70 Hz ); 3,52 ( d.k.; ih.; h-9';j =

9,30 a 6,30 Hz ); 3,50 a 3,42 (2d.*,2H; CH₂-3';j = 8,40 Hz ); 2,48 ( t.;iH;H-i;j = 4,20 Hz ); 1,09 a 0,98 ( 2s.; 6h; 4'-ch₃).

¹³O-NMR-(CTC1₃):delta 204,50 (CHO); 174,00 (COOH); 148,20 (C-3);

130,50 (0-2); 98,70 (C-7'); 81,01 (C-Γ); 78,80 ( 0-3'); 72,70 (8a-CH₂); 70,20 (C-9'V, 41,30 (C-4'V,

40,40 (C-5')*, 27,30 (4^#- CH₃); 26,50 (C-6'); 22,80 ( 4'- 0H₃).

218

Příklad 23

Příprava /1R-(lalfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abeta)/-8a-/(6-deoxy-3,4-0-isopropyliden-beta-D-allopyranoayloxy)-methyl/-4-formyl-4,48,5,6,7,78,8,88 oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-a- — indacen-3a-(IH)— karboxylové kyseliny

Ku roztoku 125,0 mg Meziproduktu 27, jehož příprava je popsána výše, ve 25,0 ml methanolu, bylo přidáno v atmosféře dusíku 100,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla třepána v Parrově autoklávu při tlaku 0,105 MPa vodíku a při teplotě místnosti po dobu 1,50 hodiny. Po odfiltrování katalyzátoru bylo při teplotě 0°C přidáno k filtrátu 0,50 ml 1N roztoku kyseliny chlorovodíkové.Vzniklá směs byla míchána po dobu 1,0 hodiny a poté byla zněutralizována.s 10%ním.roztokem, hydrogenuhličitanu sodr ného.

Po odpaření rozpouštědla do sucha byl zbytek^ve formě látky olejovité konzistence^ přečištěn urychlenou chromatografií.za použití směsi hexan-ethyláce tát ( 4 : 1) a poté směsi dichlormethan-methanolí 20 : 1), jako elučních činidel.

Bylo získáno 62;0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

^lH-NMR(GDCl₃):

delta 9,73 (s.JIHJ CHO); 6,10 (d.d.; 1H;H-2',J = 1,20 a 3,30 Hz ); 4,51 (t.; 1H*, H-2'; J = 4,50 Hz); 4,48 ( a.; ih; h-ij = 7,50 Hz); 3,65 a 4,07 (2d.; 2h; 8aCH₂; J = 9,30 Hz ); 3,78 ( d.d.; IH; H-4';j = 9,00 a 5,10 Hz ); 3,69 ( d.d.; 1HJH-3'JJ = 7,50 a 5,10 Hz);

3,50 ( m.J ih; H-5';j = 6,O a 9,0 Hz ); 2,59 ( t.j IH; H-i;j = 3,90 Hz ); 2,32 (m.; 1H; CHMe₂);

- 219 ¹³C-NMR( CDC1₃):

delta-204;60- (GHO) ;~1'76/ΙΌ’TCOjHJ); Í48';2O (C-3)*,

130,80 (C-2); HO,40 ( kvartérní G isopropyliden);

100,90 (C-1 '); 78,34 (C-4')*,75,10 (0-2*); 74,70(8a CH₂); 72,50 (O4a);71,70 (0-3*)*, 69,30 (C-5*); 65,60 ( C-8a); 58,90 (C-4); 46,30 ( C-1). '

Příklad 24

Příprava /1R-(1 alfa, 3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abeta)/-8a-/(2-deoxy-3,4-0-isopropyliden-6-Q-methylbe ta-D-allopyranoayloxy)-me thyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,

7a ,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-( 1 -methyle thyl )-1,4-methan -s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny vi Roztok 50.0 mg Meziproduktu 30, jehož příprava je popsána výše, v 5,0 ml tetrahydrofuranu, byl při teplotě místnosti reagován s 1,0M roztokem tetrabutylamoniumfluoridu-v. tetrahydrofuranu ( 200,0 yul). Po 24,0 hodinách byla reakční směs zahuštěna do sucha a zbývající ..žlutě zbarvená látky olejovité konzistence, byla přečištěna urychlenou chromatografií, za použití směsi dichlormethan-methanol ( 15 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 18,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR( GDC^):

delta 9,80 (s.J 1H;CH0 )*, 5,98 (d.d.; 1H;H-2;j =

1,20 a 3,30 Hz )J 4,64 ( d.d.; IH*, H-1 'JJ = 2,70 a

8,10 Hz ); 4,42 ( m.J 1HJ H-3')', 3,68 a 4,01 (2d.'_ř 2H; 8aCH₂; J = 9,00 Hz); 3,90? ( ®.*,·1Η; H-4')*,3,45

220

- 3,65 ( m.J 3H; H-5^#‘, a 2H-6');. 3,22 ( s.‘, 3H‘, 6 0CH₃); 2,60 ( m.; 1Η;Η-Γ); i,34 a 1,35 (23.; 6H‘/ methylové skupiny isopropylidenu);

¹³C-NSR ÍCDC1₃):

delta 206,30^>: (CHO); 175,7® (CO₂H); 149,7® (C-3)‘,129,70 ( C-2); 108,90 ( kvarterní C isopropylidenu);98,20 ( C-Γ); 74,80; (C-3a)J 74,80 (C-4); 74,40 (8aCH₂);

72,60 (C-3'); 71,30 (C-5')J 65,10 (C-8a); 61,10 (C-6')‘,

58,40 (C-4);48,40 (6'-0Me); 46,10(0-1); 32,80 (C-2').

Příklad 25 řz

Příprava /1R-(1 alfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abe ta)/-8a-//1S,4R,7R,9R/-2,8-di oxa-4-e thy1-9-me thyl -ci s-bi cyklo-/3.4. 0/-non-7-y 1-oxy-me thyl/-4-formy1-4,

4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-(1-me thylethyl)

-1,4-methan-s-indacen-3a-(lH)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 200,0 mg Meziproduktu 37, jehož příprava je popsána výše, ve 40,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno 50,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí v atmo3feře dusíku a vzniklá reakční směs byla předložena do Parrova autoklávu, kde byla třepána při tlaku 0,21 MPa vodíku a při teplotě místnosti po dobu 2,0 hodin. Po odfiltrování katalyzátoru bylo rozpouštědla odpařeno do sucha a získaný zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi dichlormethan-methanol (98 : 2), jako elučitího Činidla.

Bylo získáno 125,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

- 221 ¹H-NMR (CDC1,):

* 3 —ďe-i-ta---97S6-(-s-i;-i-H·;·--CHO-)-;--6,05 C ď.d.; TH;H-2;J = '

1,50 8 3,30 Hz )J 4,66 (d.d.; 1H;H-7';j = 3,00 a 6,00 Hz ); 4,32 a 3,29 ( 2d.; 2HJ 8a-CH₂; J = 9,60 Hz );. 4,02 ( d.d.; IH; CH₂-3'(1H);j = 7,20 a 8,40 Hz);

3,67 (d.d.; ih;h-i ';j = 7,80 a 9,30 Hz);. 3,41 - 3,22 ( m.J 2H; H-9'a CH₂-3 ' (1H)); 2,48 (t.j 1HJ H-i;j =

3,90 Hz ); 0,92 ( t.; 3h; ch₃ch₂ ;j = 7,50 Hz );

¹³C-NMR(CDC1^):

delta 204,50) (CHO); 174,20 (COOH); 148,30 (C-3);t3O,5O (C-2); 98,50. ÍC-7'); 80,30 (C-l'.);./73,OO a 73,00 (8a0 a C-3'); 70,90 (0-9').

Příklad 26

- .x^;;

Příprava sodné sole kyseliny /1H-(1alfs,3abeta,4beta, 4abeta,7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-//1S,4R,7R,9R/-2,8 di oxa-4-e thyl-9-methyl-cis-bicyklo-/3 ,4.0/-non-7-yloxy-me thyl-/-4-f ornyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahy dro-7methyl-3-( 1 -methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-( 1H)karboxylové

Ku roztoku 88,0 mg sloučeniny, připravené a po- psané v rámci Příkladu 25,. v 10,0 ml methanolu, bylo přidáno po kapkách 1 ,80 ml 0,099H1 vodného roztoku hy-r droxidu sodného. Po odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku,byl získaný zbytek rozpuštěn v 50,0 ml vody a lyofilizován.

Bylo získáno 92,00 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

222 ¹H-NMB (DMSO-dg):

delta 9,77 ( a.; IHJCHO)', 5,78(m.;iHJH-2); 4-,40( S. d.d.J, 1HJH-7'); 3,92 ( m.J 1HJ.H-3 *); 3,87(d. J1HJ8acíf₂.(ih);j = 9,60 Hz ); 3,50 (m.;2H;sa-CH₂(iH) a Η-Π; 3,38-3,21 ( m.J 2HJH-3' a H-9').

Příklad 27

Příprava /1R-( 1alfa,3abeta^4beta,4ebeta,7beta,7a . alfa,8abe ta)/-8a-//1S,4S,7R,9R/-2,8-di oxa-4-e thyl-9methyl-cis-bicyklo-/3.4,0/-non-7-yl-oxy-methyl/-4formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,Sa-oktahydro-7-methy 1-3-(1methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku ,420,0’mg. Meziproduktu 38, jehož příprava je popsána výše, v 80,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno 100,0 mg 1O%ní&o palladia na aktivním uhlí v at-, mosfeře dusíku a vzniklá reakční-směs byla po předlo- žení do Parrova autoklavu třepána za tlaku 0,21 MPa vodíku a při teplotě místnosti po dobu 1,50 hodiny.

Po odfiltrováhí katalyzátoru a odpaření rozpouštědla do sucha byl získaný zbytek přečištěn urychlenou chromatografíí na silikagelu^za použiti směsi dichlormethan-methanol ( 98 : 2), jako elučního činidla.

Bylo získáno 280,0 mg Žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

^H-NMELÍCDCl-j):

delta 9,86 ( s.JIHJCHO); 6,05 ( d.d.J1HJH-2JJ = 1,50' a 3,60 Hz )J 4,89 ( m.J 1HJ H-7');4,29 a 3,29( 2d. J 2H;8a-CH₂;j = 9,90 Hz )J3,9O ( d.d.J1HJH-3'j J = 7,50

- 2~23 a 8,70 Hz ); 3,75 ( a.; 1HJH-1 '); 3,64 (m.; lH;H-9 *);.

2,46 ( j « 3,60 Hz ); 0,93 ( t.;3H; ch₃~ch₂;j= 7,20 hz); ¹³C-NMR(eLGl₃):

delta 204,40 (CHO);173,7O (COOH)J 148,20(0-3)JI30,50 (C-2); 98,803 (C-7*); 81,30 (C-Γ); 72,80-a 70,90 (8aC a C-3'); 69,80 (C-9').

Příklad 28

Příprava sodné sole kyseliny /1R-(1alfa_r3abeta,4beta, 4a be ta _r7be ta, 7aalf a, 8a be ta) /-8a-//1S,4S,7R, 9B/-2,8 dioxa-4-ethyl-9-methyl-cis-bi«ykle/3.4.0/-non-7-yl-oxy -me thyl-/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7me thy 1-3- (1 -me thyle thyl) -1,4-me than-s-inda cen-3a-( 1H) karboxylové

Ku roztoku 262,0 mg sloučeniny, připravené a popsané v Příkladu 27, uvedeném výše,, ve 20,0 ml methanolu, byl přidán po kapkách 0,099® vodný roztok hydroxidu sodného (5,30 ml).,Po odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku byl získaný zbytek rozpuštěn ve 100,0 ml vody a poté byl lyofilizován.

Bylo získáno 272,00 mg Žádané, v nadpise, uvedené sloučeniny.

¹H-NMS (DffiSO-dg):

delta 9,77 ( s.JIHJCHO);. 5,79( d.d.; 1H;H-2JJ = 1,20 a 3,60 Hz.); 4,57 ( a.; 1 H;H-7'); 3,83 a 3,45 (2d.;

2H; 8a-GH₂; J = 9,60 Hz ); 3,76 a 3,33 (2m.J 2H;CH₂3'); 3,52 ( a.; 2H; H-Γ, a H-9').

224

Příklad 29

Příprava /1R-(1 alfa, 3abeta,4be ta,4abeta,7be ts,7aalfa, 8abe ta)/-8a-/(1S,4R,7R,9R)-2,8-d i oxa-4-(1-me thyle thyl)

- 9-methyl-cia-bicyklD-/3.4.0/-non-7-yl-oxy-me thyl) /4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-(1 me thyle thyl) -1,4-me than-s-inda cen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 280,0 mg Meziproduktu 39, jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml ethylacetátu, .bylo přidáno v atmosféře dusíku 50,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla po předloženi do Parrova autoklávu třepána při tlaku 0,14 MPa_z při teplotě místnosti, po dobu 1,0 hodiny. Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření do sucha byl získaný zbytek přečištěn urychlenou chromatografií na silikagelu_zza použití . směsi hexany*a'ce.ton( objem/objem;iO : 1 a 5 : 1 ), jako : elučního: činidla..

Bylo získáno 180,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě látky olejovité konzistence. Výtěžek 84%.

¹H-NMR( GDCl-j):

delta 12,0 - 11,0 (S.;iH; C00H)*_f 9,88 (s.JIHJCHO);

6.053 (d.d.; 1H;H-2*,J = 1,50 a 3,60 Hz); 4,77 ( m.J ih; H-7'); 4,37 (d.J ih; 8aCH₂; J = 9,30 Hz); 3,95 ( d.d.; ih;h-3';j = 7,20 a 8,70 Hz); 3,67 (d.d.;.ih; Η-Γ;σ = 8,70 a 9,00 Hz); 3,50 - 3,36 (m.;2H; H-3* H-9'); 3,23 ( d.J ih; 8aCH₂;.J = 9,30 Hz);2,43 ( t.; ih;hi; j = 3,90 Hz ).

Příklad 30

225

Příprava sodné sole kyseliny /1R-(1alfa,3abeta,4be'ta, 4a_bet8_, 7be ta., 7aalf a, 8abe ta) A.8a-/(_1Sj 4R, .7H»..W-2_, 8_-. di oxa,4-(1 -me thyle thyl)-9-me thy l-cis-bicyklo-/3.4.0/non-7-y 1-oxy-me thyl) /-4-f ormyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a- . oktahydro-7-me thyl-3-(1 -methyle thyl)-1,4-methan-sindacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku sloučeniny, připravené a popsané v rámci Příkladu 29 ( 170,0 mg), v 15,0 ml methanolu, bylo přidáno 3,45 ml 0,0956® roztoku hydroxidu sodného· Po jednohodinovém míchání vzniklé reakční směsi, bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha a získaná pevná látka byla rozpuštěna ve 3,0 ml vody a poté byla do sucha lýofilizována. Údaje o množství neuvedeny, ¹H-NMB(DMSO-dg).::.

delta 9,78 ( s.; IHJCHO); 5,80( d.d.*, 1HJH2;j =^1,20 a 3,60 Hž ); 4,46 ( d.d.; 1H* H-7'j J = 2,70 a 5; 10 Hz ); 3,90 - 3,80 (m.J 2H;H-3'+8aCH₂); 3,54 (d.d.;, ih;h-i';j = 8,10 a 9,00. Hz); 3,47 (d.; iH;8aCH₂;.j-=

9,30 Hz );

¹³C-NMR( DMSO-dg):

delta 206,40 (CHO); 174,30 (COO*)J 151,30 (C-3)*,

127,60 (C-2); 97,10(0-7')*, 80,70 (C-l').

Příklad 31

226

Příprava /1R-(1 alfa,3abeta,4beta,4abeta,7be ta,Taalfa, 8abeta )/-8a-/ (1 S,4S,7R, 9R)-2,8-dioxa-4-( 1 -methyle thyl) -9-me thy1-ci s-bi cyklo-/3.4.O/-non-7-y 1-oxy-me thyl) /-4formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydr o-7-me thy 1-3- (1 -me thy 1ethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)— karboxylové kyseliny

Ku roztoku 280,0 mg Meziproduktu 40, jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml ethylacetátu,. bylo v atmosféře dusíku přidáno 50,0 mg lO%ňího palladia na.aktivním„uhlí a vzniklá reakční směs byla po předložení do parrova autoklávu třepána při tlaku 0,14 MPa_z při teplotě místnosti^ po dobu 1,0 hodiny. Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla byl získaný zbytek zpracován pomocí .urychlené chromatografie na silikagelu za použití směsi hexany-aceton( objem/ objem! 10 : 1 a 5 : 1), jako elučního Činidla. Bylo získáno 190,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny,.ve. formě ..pevné·, krystalické látky.

Výtěžek 89%. ·;, ¹ H-NMR ( CDCl/:

delta 9,88 ( s.; ih;cho); 6,05 (d.d.; ih; H2;J = 1,50 a 3,30 Hz ); 4,92( t.j 1H;H-7';J = 2,70 hz); 4,33 (d.; ih; 8aCH₂ ; J = 10,20 Hz); 3,94 (t.;iHJH-3';j = 8,10 Hz ); 3,80 - 3,70 (m.J 2H; Η-Γ+Η-9'); 3,47 (d.d.;iH; H-3'; J = 8,40 a 10,80 Hz); 3,29 (d.J IH; 8a CH/ J =

10,50 Hz ).

Přikrad 32

- 227 Příprava sodné sole kyseliny /1R-dalfa,3abeta,4beta, _____4.a.be.t.a..,.7.b.e ta./fes lfs., 8ab.e t_a I/r8a-/ (AS, 4.S., 7R,9B)-2,8 _-___ dioxa-4-(1-methylethyl)-9-methyl-cis-bicyklo-/3.4.Q/non-7-y1-oxy-me thyl)/-4-formyl-4,48,5,6,7,73,8,8aoktahydro-7-methy1-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-sindacen-3a-(1H)- karboxylové

Ku roztoku 165,0 mg sloučeniny, připravené a popsané v rámci Příkladu 31, v 15,0 ml methanolu,bylo přidáno 3,35 ml O,O956N; roztoku hydroxidu sodného.Po jednohodinovém míchání bvlo z reakční směsi odstraněno rozpouštědlo k suchu a získaná pevná látka byla roz' ’ puštěna ve 3^0 ml vody a poté lyofilizována.Údaj o množství, případně kvalitě a ani výtěžku v nadpise uvedené: a žádané:,, sloučeniny...není „uveden..., ¹H-NMR (CDGl^): ' . < · delta 9,77 ( s.;iH;CHO)‘, 5,79 ( d.d. ;iH;H2;j. = 0,90 a 3,30 Hz ); 4,58 ( š.s.; 1E,*H-7')*, 3,85'- 3,72( m..;

2H; H-3'+8aCH₂); 3,71 - 3,56 ( nr.; 2Η*,Η-9'+Η-Γ)-,3,45 ( d.; ιη;8θοη₂; j = 9,90 Hz );

¹³C-NMR(CDC1₃):

delta 206_ř30 (CHO); 174,30 (COO*); 151,4O(C-3); 127,50) (c-2); 96,70 (c-7');so,8Q (c-Γ).

Příklad 33

228

Příprava /1R-(lalfa,3abeta,.4beta ,4abeta,7beta,7aalfa,. 8abe ta) /-8a-//1S, 7R, 9R/-2,8-di oxa -9-me thyl-4-me thy lencia-bicy klo-/3.4.0/-non-7-y 1-oxy-me thyl/-4-formyl-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahy dro-7-me thy 1-3- (1 »me thy le thyl )-1,4 -methan-s-indacen-3a-( 1H)-karb oxy lové kyseliny

Ku ledem chlazenému roztoku 330,0 mg Meziproduktu 41, jehož příprava je popsána výše, ve 4,0 ml dichlormethanu, bylo přidáno 0,20 ml trifluoroctové kyseliny a vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 20 minut a poté byla naředěna, se^

150,0 ml dichlormethanu,. a následně byla promyta 3x se 100,0 ml vody.

Organická fáze byla po oddělení vysušena síranem sodným bezvodým a zahuštěna do sucha. Získaná látka olejovité konzistence byla zpracována urychlenou chro-^· matografií na silikagelu_;za použití směsi dichlormethan -methanol ( 98 : 2), jako elučního činidla.

Příslušné frakce byly shromážděny a RP-18.''· a chromatografovány při použití středně silného tlaku * ( cca 1,0 MPa),za použití lineárního gradientu aceto- nitrilu ( 60-70%)j ve vodě.

Byla získána v nadpise uvedená, žádaná sloučenina. Údaje o množství ani výtěžnosti neuvedeny.

¹H-NMH( CDG1₃):

delta 9,87 ( a.;iH; CHO); 6,04 (d.J 1H;H-2;J = 3,301 Hz );. 5,08 a 5,02 (2m.; 2h; h₂g= ); 4,50 (d.d.; ih; H-7';. J ' 2,70 a 8,40 Hz )J 4,48 - 4,29 (m.‘, 2H‘,CH₂ -3* a 8a-CH₂(1H)'); 3,76 ( d.d.; IH*,. Η-Γ/j = 7,20 a 9,30 Hz ); 3,27 (a.; ih;h-9');. 3,02 (m.; ih;h-5');

2,45 ( m.; 1H; h-1);

¹³C-NMR( CDCl^):

- 229 delta 205,10 (CHO); 176,ΟΟ(ΟΟΟΗ);148,60 (C-3)*,13O,4O (c-2); 104,20 (ch₂= ); 98,20(0-7'); βο,ιο(ο-Γ); 73,40 a~7Ó\lÓ~r8r-^₂ ^_a“ Č-3”'yfl97so“'(Č-9”')’. ..... '

Příklad 34

Příprava sodné sole kyseliny /1R-(1alfa,3sbeta,4beta, 4abeta _r7be ta, 7aalf a, 8abe ta) /-8a-//.1 S, 7R, 9R/-2., 8-di oxa9-methyl-4-methylen-cis-bicyklo-/3.4.Q/-non-7-yl-oxy me thyl/-4-formy1-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktehydro-7-me thyl -3-( 1 -me thyle thyl )-1,4-methan-s-indacen-3a- (1 H)-karboxylové

Ku roztoku· sloučeniny.,, připravené .a.·popsané/.v. Příkladě 33 ( 140,0 mg), v 15,0 ml methanolu, bylo po kapkách přidáno 3,06 ml O,945I£ vodného roztoku hydro' ‘‘'S xidu sodného. Po odstranění .rozpouštědla, z reakční.....

směsi za sníženého. ..tlaku, .byl zbytek rozpuštěn v 60,0 ml vody a lyofili zov.án.

Bylo získána^145,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NME-.( DHFSO-dg):

delta 9,76 (s.;iH; CHO ); 5,76 ( d.; 1H;H-2;j = 3,30' Hz); 5,04 ( m.;-2HJ H₂e= ); 4,34 - 4,20 (m.;3H;H-7'; a CH₂-3'); 3,84 a 3,50 (2d.; 2H; 8a-CH₂,J = 9,90 Hz);

3,62 ( d.d.; 1H; H-1';j = 7,50 a 9,30’Hz); 3,15 (m.; ih; h-9'); 2,89 ( m<; ih; h-5').

Příklad 35

230

Příprava /1R-/1alfa,3abe ta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfa, 8abeta)/-8a-//1S,7R,9R/-2,8-dioxa-9-methyl-4-methylen3-oxo-cig-bicyklo-/3.4·0/-non-7-y1-oxy-methyl/-4-formy1 - 4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1 ,4-methsn-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyse== liny

Ku roztoku 62,0 mg Meziproduktu 42, jehož příprava je popsána výše, v 1,10 ml vysušeného dichlormethanu, bylo přidáno 0,05 ml kyseliny trifluoroctové .„Vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu .20,0 minut , poté byla zředěna s 50,0 ml dichlormethanu a následně byla promyta 3x se 25,0 ml vody.

Oddělená organická fáze byla vysušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna' na látku olejoví té konzistence,která byla zpracována 2x urychlenou chromato- ·>?. grafií na silikagelu ze. použití směsi dichlormethanmethanol .( 98 .: 2), jako. elučního činidla.

Bylo získáno. 25,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě slabě žlutě zbarvené pěny. ¹H-NMR(£DC1₃):

delta 9,75 ( s.;iH;CHO 6,35 a 5,63 (2d.*,2H;h₂C=C;

J = 3,30 Hz >; 6,04 ( d.d.; 1H;H-2*,J = 1,20 a 3,30 Hz); 4,52 ( t.; ih; h-7';.j = 4,so Hz); 4,24 (t.;.ih; h-4';

J = 8,70 Hz ); 4,09 a 3,46 (2d.; 2H;8a-CH₂; J = 9,30 Hz ); 3,38 ( m.; ih; h-5'); 3,30 ( m.; ih;h-9'); 2,59.

( t.; ih; h-i; j = 3,90 hz );

¹³C-NMR( CDC1₃):

delta 204,50(CHO); 175,30 (COOH); 169,70 ( 0-3*1; 148,20 ( C-3); 136,80 (C-4 ') J130,6OÍC-2)’, 122,40 (C=CH₂);

97,70- (C-7'); 77,80 (C-Γ) a 71,20(C-9').

231 Příklad 36

Příprava sodné sole kyseliny /ÍR-(1alfa,3abeta,4beta, 4abe ta, 7be ta,7aalfa, 8abe ta) /-8a-//1S, 7R, 9R/-2,8-dioxa 9-me thyl-4-me thylen-3-oxo-ci s-bi cyklo-/3.4.0/-non-7yl-oxy-me thyl/-4-formyl-4,4a, 5,6,7,7s ,8,8a-oktahydro7-methy 1-3-( 1 -methy le thyl) -1,4-methan-s-indacen-3a(IH)— karboxylové

Ku roztoku 25,0 mg sloučeniny, připravené a po-, psané v rámci Příkladu 35, uvedeného výše, v 10,0 ml methanolu, bylo po kapkách přidáno 0,53 ml 0,0945N vodného roztoku hydroxidu sodného. Po odstranění rozpouštědla z reakční směsi za sníženého tlaku,byl zbytek rozpuštěn ve 25,0 ml vody a poté lyofilizován.

Bylo získáno 26,0 mg Žádané., v nadpise.uvedené . sloučeniny.

’η-ΝΜΕΧ DMSO-dg):

delta 9,75 (s.;iH;CH0 )*, 6,15 a 5,82 (2d.;2H;H₂C=C;

J = 3,30 Hz); 5,76 ( š.d.; 1HJ H-2)J4,31 (d.d.JlH; H-7'; J = 2,40 a 7,80 Hz); 4,24 (t.;iH;H-l';j ~ 8,70 Hz); 3,84 a 3,52 (2d.*, 2H; 8a-GH₂; J = 9,90 Hz);3,38 ( m.; ih; h-5'); 3,21 ( m.; ih; h-9').

Příklad 37

232

Příprava /1R-(1 alfa, 3abe ta, 4beta, 4abeta, 7beta,7aalfa ,

8abe ta)/-8a-//1S,7R,92/-2,8-di oxa-9-me thy1-4-oxo-ci s

-bicyklo-/3.4.0/-non-7-y1-oxy-methyl/-4-formy1-4, 4a, 5,

6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methy1-3-(1-methylethyl)-1,4

-methan-s-Índacen-3a-( 1.H)- karboxylové kyseliny.

Ku roztoku Meziproduktu 43(45,0 mg), jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno v atmosféře dusíku 25,0 mg 1Q%ního palladia na aktivním uhlí .Vyniklá reakční směs byla předložena do Parrova autoklávu ,kde byla- třepána při tlaku 0,175 MPa vodíku a teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny.Po odfiltrování katalyzátoru bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha a zbytek byl přečištěn urychle- . , nou chromatografií na silikagelu^za použití směsi y . './?

hexan-ethylacetát ( 65 : 35, jako elučního činidla. ·.

Bylo získáno 25,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny..

¹ H-NMR ( CLC1₃):

delta 9,77 (a.; IHJCHO); 6,05 (d.d.; 1HJH-2;j - 1,50 ’ * a 3,60 Hz); 4,17( m.J 4H;H-3'(IH);8a-CH₂(1H);H-7'a h-Γ); 3,9a (d.;ih;h-3'(ih); j = 17,70 Hz); 3,42(3.;

1H; 8a-CH₂(1H);j =. 9,00 Hz); 3,3.1 (m.; 1H;H-9*); 2,85 ( m.; ih; h-5'); 2,58 (t.; ih; h-3;j = 3,90 Hz);

^{1 3}C-NMS.(CDC1₃):

delta 214,40 (C-4); 204,80' (CHO); 148,30 (C-3)J130,60?

(C-2); 98,90 (C-7*); 78,60 a 70,30 (C-Γθ C-;9');

73,60 a 69,10. (C8a-C.a C-3').

Příklad 38

233

Příprava /1R-(1 elfa, 3abe ta,4beta,4abeta,7be ta,7aalfa, 8ab®_t?. 1S, 43 ,_6S, 7H-,_9S/-2,8-dioxa-4-e thy1-6hydroxy-9-me thy 1-cis-bi cyklo-/3.4.0/-non-7-y 1-oxyme thyl/-4-formyl-4, 4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7me thy1-3-( 1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a(1H)— karboxylové kyseliny

Ku roztoku 123,0 mg Meziproduktu 45, jehož příprava je popsána výše, v 50,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno v atmosféře dusíku 65,0-mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla hydrogenovóna při tlaku 0,105 MPa vodíku při. teplotě místnosti po-dobu 1,0 hodiny. Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla do sucha byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií:. na silikagelu...za použití směsř dichlormethan-methanol( 19 : -1) až (18 : 2), jako elučního činidla.^j

Bylo získáno 90,0 mg žádané, v nadpise uvedené’ sloučeniny.

(CDOl^)::

delta 9,67 (s.; IHJCHO); 6,07 (d.J 1HJ H-2J J = 3,30 -Hz,); 4,64 (d.J τη; H-7'j J= 3,60 Hz ); 4,02 (d.J 1HJ 8aCHs; J = 9,90 Hz); 3,89 (d.d.J 1HJHa-3';j =

6,90 a 9,00 Hz); 3,85 - 3,70 ( m.J 3H*, H-6'j Η -1';J a H-9'); 3,68 - 3,50 (m.J 2H;'Hb-3'a 8a-CHb);2,65 (t.; ih; h-i;j = 3,60 hz );

¹³O-NMR(CDfil₃):

delta 204,90 (CHO); 176,30 (CO^H·); 148,90(0-3); 130,10 C-2 );. 99,20 (C-7'); 80,50; 70,10 a 65,50· (C-6'jC-1 ' a C-9'); 73,70 a 71,00 (8a-CH₂ a C- 3'); 13,40,(0^-0^)

234

Příklad 39

Příprava /1R- (1 alfa,3abe ta,4beta,4abeta,7be ta,7aalfa, 8abeta)/-8a-/(1S,4R,6S,7R,9R/-2,8-dioxa-4-ethyl-6-hydroxy-9-me thy 1-ci s-bi cyklo-/3.4.0/-non-7-y 1-oxy-me thyl/ -4- formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a- oktahydro-7-methyl-3( 1-methylethyl)-1,4-methan-s-indacen-3a-(IH)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 102,0 mg Meziproduktu 46, jehož příprava je „popsána výše, ve 25,0 ml ethylacetátu,. bylo přidáno v atmosféře dusíku 60,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla hydrogenována za tlaku 0,105 MPa vodíku^při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny.

Po odfiltrování katalyzátoru bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha a zbytek byl zpracován urychlenou chromatografií. na.silikagelu, za použití směsi dichlormethan-methanol. (25 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 75,0 mg Žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NKR(SmCl₃):

delta 9,73 (s.;iH;CHO ); 6,08 (d.d.;, 1H;H-2;j = 1,20’ a 3,60. Hz); 4,53 (d.; 1H; H-7'; J .= 1,80 Hz); 4,05 ( d.d.; 1H; Ha-3';j = 7,20 a 8,40 Hz); 4,02 (d.;iH; 8a-CHaJJ = 9,30 Hz ); 3,83 (d.d.; 1HJ H-Γ» J = 7,20 a 8,70 Hz ); 3,72 (d.d.; 1H;H-6'; ď = 2,10 a 4,80 Hz); 3,64 (d.;iH;8a-CHb;j = 9,30 Hz); 3,54 - 3,36 (m.;2H;

H-9'a Hb-3'); 2,68 (t.;ih;H-1;j = 3,90Hz );o,96 (t.;

3h; ch₃-ch₂ ; j = 7,50 Hz );

¹³O-NMH(CD£1₃):

delta 204,70 (CHO); 176,10 (CO₂H);. 148,50(C-3); 130,50

- 235 (C-2); 98,80 (C-7'); 79,20;70,70 a 69,10(C-6';C-1'^{8 c}-³');12,7Q (CH₂-CH₃).

Příklad 40

Příprava sodné sole kyseliny /1B-(1alfa,3abeta,4beta, 4abeta,7beta,7aalfa ,8abeta)/-8a-/(1S,4R,6S,7H,9R)-2,9dioxa-4-ethyl-6-hydroxy-9-methyl-cis-bicyklo-/3.4.0'/ non-7-y 1-oxy-me thy l/-4-f.ormy 1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-(1 -me thyle thyl )-1,4-methan-s-indacen -3a-(1HÚ- karboxylové .„

Ku roztoku 490,0 mg sloučeniny, připravené apopsané v rámci Příkladu 39, uvedeného výše,, v 50,0 ml methanolu, bylo přidáno po kapkách 10,0 ml 0,095® yodného. roztoku hydroxidu sodného. Po 30 minutách:;bylo rozpouštědlo z reakční směsi, za sníženého, tlaku., odstraněno a získaný zbytek byl rozpuštěn v 10,0. ml. vody a po.té lyiofilizován.

Bylo získáno 475,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

CD-^-SO):

delta 9,77 (s.J 1h;CH0); 5,80 (d.; 1H;H-2;j = 2,40 Hz ); 4,.41 (š.s.;. ih;-oh); 4,31 (d.; ih;h-7';j = 2,10 Hz j; 3,94 - 3,82 (m.; 2H;8aCHa a Hs-3')*, 3,66( t.; ih; η-Γ; j = 8,10 Hz ); 3,54 - 3,34 (m.; 3E;8aCHb; H-6'a H-9'); 3,24 (t.j 1H;Hb-3';J = 8,10 Ηζ)*,2,55 ( t.; ih; h-i;j = 3,60 Hz ).

Příklad 41

236

Příprava sodné sole kyseliny /1R-(1alfa,3abeta,4beta, 4abe ta ,.7be ta, 7aalf a, 8abe ta) /-8a-//1S, 7R, 9R/-2,8-dioxa9-me thyl-4-oxo-cis-bi cyklo-/3.4.0/-non-7-yl-oxy-me thyl/ -4-formyl-4, 4a, 5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl-3-(1 methylethy 1)-1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové

Ku roztoku 350,0 mg Meziproduktu 43, jehož příprava je popsána dále, v 15,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno v atmosféře dusíku 50,0 mg 1O%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla po předložení do Parrova autoklávu třepána při tlaku 0,175 MPa při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny.Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla do sucha byl zbytek zpracován urychlenou chromatografií na silikagelu;za použití směsi dichlormethan-metha- X nol ( objem/objemj 100 : 1; 70 : 1 a 50 : 1), jako elučního činidla..

Bylo .získáno. 200,0 mg.látky ve formě pěny, která byla rozpuštěna v 10,0 ml methanolu a poté reagována s 4,54 ml O,O947M roztoku hydroxidu sodného. n

Po odstranění rozpouštědla za vakua byla zbylá pevná látka rozpuštěna v 15,0 ml vody a lyofilizováaa.

Nejsou uvedeny žádné údaje o množství, ani formě žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

^-NMRÍDMSO-dg):

delta 9,76 (s.JIHJCHO); 5,80' (d.d.;· 1H;H-2;J = 0,90 a 3,30 Hz 4,20 - 3,95 ( m.;4Η’,Η-7'*,+Η-Γ; +H-3')ζ

3,89 ( d.J ih; 8aCH₂ J J = 9,60 Hz); 3,47 (d.;iH;8a CH₂; J - 9,60 Hz ); 2,92 ( m.; 1H;H-5').. .

.«v «iv .·$

Příklad 42

237

Příprava sodné sole kyseliny /1R-(1alfe,3abeta,4beta, -4abe-ta ,-7-be-ta.,7.a alf a.,fia.be ta_) /-8a -/.0 S, 4R, 7R,_9R )-2,8 di oxa-4-me thoxy-9-me thyl-ci s-bi cyklo-/3.4.0/-non-7-y1 -oxy-me thyl/-4-formyl-4,43,5,6,7,78,8,8a-oktahydro 7-methy 1-3-( 1 -methylethyl·)-1,4-methan-s-indacen-3a- (IH)— karboxylové

Ku roztoku 250,0 mg Meziproduktu 82, jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml ethylacetátu,. bylo přidáno v atmosféře dusíku 50,0 mg-10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla po předložení do Parrova autoklávu třepána při teplotě místnosti a' tlaku 0,175 MPa-vodíku po dobu 1,0 hodiny.Po. odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla .byl zbytek zpracován, urychlenou chromatografii.na, silikagelu za použití směsi dichlormethan-methanol( 100 : .1 70 : 1 í 50 : 1 a 40 : 1), jako elučního činidla.^

Bylo získáno 120,0 mg látky sirupovité konzistence, která byla rozpuštěna v 15,0 ml methanolu ..a reago vána s 2,51 ml 0,0947 M’roztoku hydroxidu, sodného.

Po odstranění rozpouštědla byla získána polotuhá látka, která byla rozpuštěna v 15,0 ml vody a poté by la lyofilizavána.

Nejsou uvedeny žádné údaje o množství, ani formě žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NME(DMSQ-dg):

delta 9,77 (s.;ΙΗ’,ΟΗΟ); 5,80 (d.d.;iH;H-2’,J = 1,20 a 3_r3O Hz); 4,47 (t. ;ΐΗ’,Η-7'; J = 3,90 Hz);3,96 - 3,84 ( m.*_r 2H;H-3'+8aCH₂); 3,80 (a.; 1H;H-4')*,3,65 -'3,40 ( m.;.4H; H-9'+8aGH₂+H-3'; +Η-Γ); 3,23 (s.; 3h;och₃)

2,46 - 2,20 (m.j 4H; ΗΓ,+Η-S·'; +H-5'+01(0¾½^ ¹³C-NM5 (DMSO-dg)c

238

206,40. (CHO); 174,40 (C00T, 1 51 ,30(0-3)*, 1 27,60 (C-2);

96,90 (C-7'); 84,10 (C-4');' 56-,60 (OCH₃).

Příklad 43

Příprava /1 Η-(1 alfa,jabeta,4beta,4a*oe ta,7beta,7aalfa, 8sbeta)/-8a-/(1S,7R,9H)-2,8-dioxa-9-methyl-bieyklo/3.4.0/-non-4-en-7-y1-oxy-me thyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7, 7a,8,8a-oktahydro-7-methy1-3-(1-methylethyl)-1,4methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 120,0 mg Meziproduktu 87,jehož příprava je popsána výše, ve 20,0 ml vysušeného dichlor- ^v methanu, bylo přidáno v atmosféře dusíku a při teplo- tě 0°C- 100,00 /Ul kyseliny trifluoroctové.Vzniklá re- akční směs byla.po 5,0 minutách zředěna se 100,0 ml dichlormethanu a-promyta postupně se 100,0 ml vody a a 3e 100,0 ml solanky a poté byla vysušena síranem horečnatým a zahuštěna.

Získaný surový materiál byl rozpuštěn v 15,0 ml ^v‘'*

I * směsi tetrahydrofuran-methsnolí ob jem/ob jem; 2 : 1 ) a reagován s 5,0 ml 1N roztokem kyseliny chlorovodíkové. Po ukončení reakce byla směs naředěna vodou (100,0 ml ) a vytřepána 2x s dichlormethanem.

Oddělená organická fáze byla vysušena síranem hořečnatým a získaná látka olejovité konzistence byla přečištěna preparaci vní chromatografií na tenké vrstvě za použití silikagelu a směsi aceton-hexany(1 : 3), jako elučního Činidla.

Bylo získáno 62,0 mg žádané, v nadpise. uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny. Výtěžek 73/«.

iá ; v a .A»·

’η-ΝΜΕ; (CHC1₃):

239 s,79 (s.;ih;cho); 6,06 (d.d.; ih;h-2;j = 1,20 a 3,30

Hz—) -;-5y5€· -Cm·.-;· - 1-H*-H-4 <-)-;- -4-,65 - - -4,6-5- ím.-*,-2Η.; H-.3 - __________________

4,30 - 4,00 ( *.;3η;η-7'+880η₂+η-Γ); 3,5o ( a.; ih;

8aCH₂);j ³ 9,00 Hz );3,1S ( d.k.*, 1H*,H-9'; J = 6,30 a 9,00 Hz );2,72 (β.;ιη;η-6');2,62 ( t.; ih;h-i;j ³ 3,00 Hz );

¹³ C-NMR (CHC1₃):

delta 204,60 (CHO); 1-75,20 (COOH); 148,30(C-3)* 136,30 ( C-5'); 130,60: (C-2) J1Ϊ9,1 5 (C-4');'101,50 (C-7');

86,50 ( C-1 ').

P ř í k 1 a d 44

Příprava sodné sole kyseliny /1R-/Ialfa ,3abeta ,4.beXa,

4a be ta, 7be ta,7aalfa, 8abe ta) /-8a-/ (1S, 7R, 9R) -2, S-di,oxa9-methy 1-bicyklo-/3.4.O/-non-4-en-7-y 1-oxy-methyl/-4 formy 1-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-okt ahydr o-7-me. thy 1-3 - (1 - me thyle thy 1) -1,4-me than-s-inda c en-3a- (1H) -karboxylové

Ku roztoku 50,0 mg sloučeniny, připravené a pop?? sáné v rámci výše uvedeného Příkladu 43, v 5,0 ml methanolu, bylo přidáno 1,09 ml 0,0966N roztoku hydroxidu sodného a vzniklá reakční směs byla po dobu 15 minut míchána a poté bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha. .

Zbytek byl rozpuštěn v 1,0 ml vody a poté lyofilizován.

Nejsou uvedeny žádné údaje o množství, ani formě, žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR (DMSO-dg): * delta 9,78 ( s.JIHJCHO); 5,80* (š,d.; 1H*,H-2;J = 3,60

4’

240

Hz);5,64 (š.s.; ih; H-4')*,4,60 - 4,40 ( m.; 2H',H-3';

4,10 ( d.d.; 1H; H-7'JJ = 2,70 a 9,30 Hz)J4,O5 - 3,9® ( m.J 2H; H-r+8aCH₂); 3,56 (d.JIH; 8aCH₂JJ = 9,60Hz); 3,06 (a.k.; ih;h-9';j = 6,30 a 8,70 Hz);

¹³G-NMR(DMSO-dg):

delta 215,90 (CHO); 183,90 (COO’)J 160,90(C-3)J146,10 ( C-5'); 137,20 ( C-2); 128,3®(C-4')Jí10,90 ÍC-?');

95,70 ( ®-1 '),

Pří kl ad 45

Příprava /1R-(1 alfa,3abe ta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8a beta )/-8a-/ (1S,7R,9R)-dioxa-9-methyl-cis-bicyklo/3.4.0/-non-7-y 1-oxy-me thylP-4-f ormyl-4, 4a, 5,6,7,7a,

8,8a-oktahydro.-í7-me thy Ir 3.- (1 -me thy le thyl)-1,4-me than - s-inda;cen-3a-:(.1H:) karboxylové kyseliny

Ku roztoku 100,0 mg Meziproduktu 87, jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml ethylacetátu, bylo přidáno v atmosféře dusíku 50,0 mg 1O%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla po předložení do Parrova autoklávu třepána při tlaku 0,140 MPa-vodíku při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny. Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla byl získaný zbytek rozpuštěn ve 15,0 ml směsi tetra.hydrofuran-methanol ( objem/objemJ2 : 1 ) a poté reagován s 5,0 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové.

, Po dokončení'reakce bylo ku směsi přidáno 100,0 ml dichlormethanu a 100,0 ml vody a organická a vodná fáze byly odděleny.

Organická fáze byla vysušena síranem hořečnatým a zahuštěna až na látku olejovité konsistence,která ^w5í < w* f?.·

241 byla přečištěna za pomoci prepara)?tivní chromatografie na tenké vrstvě;za použití směsi hexany-acstoní objem/ o b j e m *_t 3 : 1) , 3 a Ičo e luč ní ho^-čí ni3'lT; .

Bylo získáno 20,0 mg žádané, v nadpise uvedené . sloučeniny/ve formě průhledné látky olejovité konzistence; Celkový výtěžek 30%.

¹H-NMR(CHCl₃):

delta 9,86 (s.JIHJCHO )J 6,05 (d.d.J1HJH-2JT = 1,50 a 3,60 Hz)j4,07 (d.d. J1HJH-7J = 3,00 a 5,40 Hz)J 4,33 (d.;iH;3aCH₂;j = 9,60’Hz)J3,90 (m. J1HJH-3');

3,69 ( m. J1HJH-3'); 3,61 (ά.ά.;ΐΗ*,Η-Γ; J = 8,10 a 9,00 Hz )J 3,39 ( d.k.J 1HJH-9'jď = 6,00 a' 9,00 Hz)J

3,28 (d.;iHJSaCH₂; J = 9,60 Hz);.2,60 - 2,40( m.;2HJ H-5'+H-1)J2,32 (rn.JIHJ CH(CH₃)₂).

Příklad 46

Příprava /1R-(1 alfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abe ta)/-8a-/(1S,4R,6S,7R,9R)-2,8-di oxa-4,9-dime thyl6-hydroxy-cis-bicyklo-/3.4.0/-non-7-y 1-oxy-me thyl//-'4-f ormyl-4,48,5,6,7,78,8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3- (7-me thy le thy 1)-1,4-me than-s-indacen-3a- (1H) -karboxylové kyseliny

Ku roztoku 90,0 mg Meziproduktu 89(b), jehož příprava je popsána výše, ve 25,0 ml·ethylacetátu, bylo v atmosféře dusíku přidáno 50,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla hydrogenována za tlaku 0,28 MPa vodíku^při teplotě míst- . nosti; po dobu 45,0 minut.

Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouš242 tědla do sucha byl získaný zbytek zpracován urychlenou chromátografií na silikagelu,za použití směsi dichlormethan-ethylacetát (10 : 1 ), jako elučního činidla.

Bylo získáno 60,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹ H-NMR (CDCl-j):

delta 9,74 (s.;iH;CH0 );6,08 ( d.d.;1H;H-2;J = 1,50 a 3,60 Hz-); 4,53, (^d.;iH; H-7';. J = 2J0 Hz); 4,09 ( d.; 1H; 8a-CHa;/= 9,60 Hz ύ;4,02 (d.d.; 1H*;Ha-3';

J = 7,50 a 8,40 Hz )J3,84 (d.d.; 1HJH-1'; J = 7,80 a 9,00 Hz );3,74 ( d.d.; 1H;H-6';j = 2,10 a 5,10 Hz);

3,60 (d.;iH;8a-CHb;j - 9,30 Hz );3,42 (d.k.;1H;H-9'j J - 6_tQQ a 9,00 Hz ); 3,34 ( t.; 1H;Hb-3'',J = 8,70 Hz ); 2,66 (t.;in;H-1;j = 3,90 Hz ).

Příklad 47

Příprava sodné sole kyseliny /1R-(1alfa,3abeta,4beta, 4abeta_ř7beta,7aalfa,8abeta)/-8a-/( 1S,4R,6S,.7R,9R)-2,8 -dioxa-4,9-dime thy1-6-hydroxy-c i s-bi cyklo-/3.4.0/-non -7-y1-oxy-methyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,Sa-oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-!,4-methan-s-indacen 3a-( 1H)-karboxyloV'é

Ku roztoku 258,0 mg sloučeniny, připravené a popsané v rámci výše uvedeného Příkladu 46, ve 20,0 ml methanolu, bylo po kapkách přidáno 4,98 ml 0,103N vodného roztoku hydroxidu sodného. Po 15,0 minutách bylo^ze vzniklé reakční směsi odstraněno za sníženého tlaku rozpouŠtědlo)a zbytek byl rozpuštěn v 10,0

243 4 ml vody a poté byl lyofilizován.

___Bylo_získáno 250,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny» delta 9,77 (s.;iHj CHO )J 5,79 (d.;iH;H-2*,ď = 3,60 Hz ); 4,29 (ά.;ΐΗ·,Η-7'; J = 1,80 Hz )J3,94 - 3,80' ( m.J 2HJ8a-CHa a Ha-3'); 3,67 ( t.; 1HJH-1';j = 8,40 Hz )‘,3,55 -.3,25 ( m.J 3H*,8a-CHb; H-6';H-9');3,14 (t.’, 1H; Hb-3';j = 8,40 Hz );. 2,54 ( t,; 1HJH-1 JJ = 3,60 Hz).

Příklad 48

Příprava /1R-(1alfa.,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abeta)/-8a-((( 2,3,6-trideoxy-3-ethylamino-3-N,4-0karbony1-be ta-D-allopyranosyl)-oxy)-me thyl)-4-formyl4,4a ,5,6,7,7a ,8,8e-oktahydr.or7-methyl-3-( 1-methyle thyl) -1,4-me than-s-inda cen-3a,-( 1H)-karboxylové kyseliny.

Ku roztoku 180,0 mg Meziproduktu 96, jehož pří- . prava je popsána výše, v 15,0 ml ethylacetátu, bylo v atmosféře dusíku přidáno 30,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla po předložení do Parrova autoklávu třepána při teplotě místnosti a tlaku 0,140 MPa po dobu 2,0 hodin.

Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla do sucha byl získaný zbytek přečištěn urychlenou chromatografii na sloupci silikagelu^za použití směsi hexan-ethylácetát( 1 : 1), jako elučniho činidla.

Bylo získáno 70,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny( v čisté formě), označené GM-233039X.

244 ¹ H-NMR-.Í CDCl-j):

delta 9,76 (s.JIHJCHO ); 6,05 (d.d.; a 1,20 Hz ); 4,64 (d.d.; ih;h-i';j = 4,11 ( m.; 2h;k-3';h-4'); 4,04 ( d.;. Hz ); 3,62 (d.k.; 1K;H-5';J = 8,40 a ( d.; 1H;H-3a;j = 9,30 Hz); 3,49 < m

3,13 ( m.; ih; CH_r0H₃); 2,62 ( t.; Hz ); 2,32 ( m.; ih; ch(ch₃)₂);i,i5

7,20 Hz );.

ih;h-2*,j = 3,00 5,70 a 3,30 Hz); 1H;H-8a‘J =9,30 6,00 Hz);3,51 .; ih;ch₂-ch₃);

TT · TT 1 * τ z* Λ ιπ,π- I _řu = ( t.; 3h;ch₃;j = ¹³C-NMR( CEClj): - - · - - - · delta 204,40 (GHO); 175,70 (COOH); 157,60(N-COO)ζ

148,30 (C-3); 130,50 (C-2); 97,20 (C-Γ); 74,20 (C4'); 73,40 (8a-CH₂); 69,40 (C-5'); 51,20 (C-N).

P ř í. k..l .a .d . 49........... - ,<

A . . λ’ ^r>*

Příprava /IR—(1 alfa ,3abeta,4bet8 ,.4abeta ,7beta ,7aalfa,

8abe ta) /-8a-/(2,3-anhydro-6-deoxy-4-0-me thy 1-be ta-Dmannopyranosyloxy )-methyl/-4-formyl-4,4a ,5;,6,7,7a ,8,

8a-oktahydro-7-methyl-3-(l-methylethyl)-1,4-methan- s-indacen-3a-(lH)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 140,0 mg Meziproduktu 50, jehož příprava je popsána výše, ve. 20,0 ml ethylacetátu, bylo v atmosféře dusíku přidáno 100,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí. Vzniklá reakční směs byla po předložení do Parrova autoklávu třepána při tlI£Gv&Yl05 MPa a teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny. Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla do sucha byl získaný zbytek přečištěn urychlenou chromatografií na silikagelu za použití směsi hexan245 ethylacetát ( 20. : 1 ), jako elučního činidla* __Pří_slušné_ frakce hyly spo jeny. a rozpouštědlo bylo poté odpařeno.

Bylo získáno 85,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě pěny.

¹H-NMR (CDCly):

delta 9,76 (s.;ih;cho ); 6,08 (d.d.;ih;H-2JJ = 1,20 a 3,30 Hz )J4,74 ( s.;. 1Η;Η-Γ); 3,63 a 4,13 (2d.; 2H;8aCH₂;j = 9,30 Hz )*, 3,48 ( m. ;4HJ'H-4'' a 4-0Me)f

2,26 Cd.; ih; h-2';j = 3,90 h_z ); 3,19 ( m.;iH;H-5'); 3,13 (d_T; ih;h-3';j = 3,90 hz); 3,06 (ú.;ih;h-4';j =

8,70 Hz );’2,74 (tj;'ih;h-i;j = 3,60'Hz);

¹³e-NMR (GLC1₃):

delta 204,80 (CHO);175,60 (COjH); 148,20(0-3);130,30 (0-2)198,00( C-Γ); 76,50 (C-4'); 74,30 (8aCHj;74,40 (C-3a); 72,50 (C-5'); 65,60 (C-8a ); 59,00(C-4 );5.8',20 ( 4'-0Mě)J 53,60 (C-2');50,30 (C-3')', 46,40(0-1 }.

P ř í k 1 a d 50

Příprava sodné sole kyseliny /1S-/1alfa,3abeta,4beta, 4abeta, 7beta, 7aalfa, 8abeta )/-8a-/( 2,3-anhydro-:6-deoxy4-0-me thyl-be ta-D-mannopyranosy loxy) -me thyl/-4-formy14,4a, 5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl-3-(1-me thyle thyl) -l,4^methan-s-indacen-3a-(1H) -karboxylové

Ku roztoku, připraveném rozpuštěním 310,0 mg sloučeniny,připravené a popsané ve výše uvedeném Příkladu* 49, v 10,0 ml methanolu, bylo přidáno 6,69 ml ’ 0,0976 N vodného roztoku hydroxidu sodného a vzniklá'

246 reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 2,0 hodin.

Po odstranění rozpouštědla byl zbytek rozpuštěn ve 2,0 ml vody a následně lyofilizován.

Bylo získáno 324,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle zvarvené, pevné látky.

¹H-m. (CDC1₃):

delta 9,87 ( s.JIHJCHO); 5,98 (d.d.;ih;h-2;J = 1,50 a 3,60 Hz ); 4,69 ( s.J 1HJ H-1 ')*, 3,85 a 4,07 (2d.J 2H; 8aČH₂; J = 9,6o’hz ); 3,47 ( s.; 2H;4'-0Me )’,3,26 ( d.; ih;h-2'; j = 3,90 Hz ); 3,19 ( d.k.; ih;h-5';

J - 5,70 a 9,00 Hz ); 3,12 ( d.; 1H*,H-3';J = 3,90Hz);

2,97 ( d.d.; ih; H-4';j = 0,60 a 8,70 Hz); 2,66. (t.j ih; h-i;j = 3,60 Hz );

¹³G-NMR(Cm₃) :·.

delta .„209,60. (CHO); 178,60 (C0₂ÍP ) ; 1 5 2,40 (C-3);i3O,2O (c-2);ioo,io (c-Γ); 78,20 (c-4'); 77,90. (8ach₂);73,so·. (C.-3a); 73,90; (C-5');65,60 (C-8a); 59,2O(C-4); 58,20 ( 4'-0Me ); 54,60 (C-2^Z); 51,90 (C-3');46,4O (C-l).

Příklad 51

Příprava /1R- (1 alf a, 3abe ta, 4be ta, 4abe ta, 7be ta, 7aalf a, 8abe ta)/-8a-/(2,3-epithio-4-0-me thyl-2,3,6-trideoxybeta-D-mannopyranosyloxy)-methyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7, 7a,8,8a-oktahydro-7-me thy1-3-(1-me thyle thyl)-1,4-me than· s-indacen-3a-(IH)-karboxylové kyseliny

Směs 0,67 mmplu Meziproduktu 52,jehož příprava je popsána výšej 3,37 mmolu 5,5-dimethyl-2-thiol-2247 thioxo-1,3,2- dioxafosforinam? a 4,02 mmolu triethylaminu/ v 5,0 ml..vysušené_ho_djme_thylf_qrmamidu/_by-^_ la zahřívána při teplotě 100,0°C po dobu 48,0 hodin,; Po ochlazení byla tato reakční směs nslita do vodného etheru.Organická fáze byla odpařena a zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií/ za použití směsi dichlormethan-methanol (30 *. 1), jako elučního Činidla.

Bylo získáno 180,0 mg žádané, v nadpise uvedené: sloučeniny.

¹ H-NMR. (CDCl-j):

delta 9,77J3.;ih; cho); 6,08 (d.d.; ih;h-2;.j = J,20~ a 3,30 Hz); 4,95- ( d.; 1 H;H-1 'JJ = 1,80 Hz )*,4,15 a 3,65 (d.d.; ih; ih; sa-cn ); J= 9,30 Hz );3,33 ( d.; ih; H-4';j = 8,70 Hz ); 3,18 (m.; IH; h-5'); 3,14 (m.; 2H; H-2'a H-3'); 2,70 ( m.; 1HJ H-1); 2,30 (m.JIH.;, ch(ch₃)₂); .l::.

^{1 3}C-NMS.(eDC.l₃ ):

delta 204,70 (CHO); 175,60(00^)J 148,30 (C-3) J130,70. (C-2); 98,50- (c-Γ); 79,10' (C-4'); 74,10 (9a-CH₂); 73,50: (C-5'); 46,60' (C-1); 35,60 (C-2');35,20 (C-3');

27,50 (CH(CH₃)₂). j

1) = R.S,Edmundson;Tetrahedron,2^,2379(¹965) příklad 52

Příprava /1B-(1 alfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abe ta)/-8a-/(2,3-anyhydro-6-deoxy-4-0-propyl-beta-D -mannopyranosyloxy)-me thyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,8a,8, áa-oktahydro-7-me thyl-3-(1-me thyle thyl)-1,4-me than-s⁺indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

248

Ku roztoku 400,0 mg Meziproduktu 65, jehož příprava je popsána výše, ve 100,0 ml ethylacetátu,bylo přidáno v atmosféře dusíku 200,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla třepána po předložení do Parrova autoklávu při tlaku 0,140 MPa vodíkuypři teplotě místnosti/po dobu 1,0 hodiny. Po odfiltrování katalyzátoru bylo rozpouštědlo odpařeno

Hn annbo ** v w φ

Zbytek byl přečištěn urychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, za použití .?ně jdříve dichlormethanu a poté směsi dichlorme than-me thanol ( 25 r. 1), jako

.. . , ®. ..«-Τ I H· I.' L * J>· « ** ' ' . ‘ elučních Činidel.

Bylo získáno 300,0 mg Žádané, v nadpise uvedené sloučeniny/ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-NMH(GDG1₃):.

delta 9,76 . (s. J IHJCHO); 6,08 (d.d.J 1k;H-2JJ = 1,50 ' a 3,60 Hz ); 4,72 (s.J 1Η;Η-Γ); 4,13 a 3,65( 2d.J2HJ Sa-CH₂.J =-9,00 Hz ))3,67 ( m.J 1HJH-5')J 3,44 (m.J 1HJH-4'); 3,25 a 3,12 (2d. J2HJH-2'jH-3'j J = 4,20 Hz );’ 3,20: (m. J2HJ OCH^CH^) J 2,74 , (t. J1HJH-1; J = 3,90Hz);⁵'¹³C-NMR(CDC1₃):

delta 204,80 (CHO)J 175,80 (C0₂H)J 130,80(C-2)J148,20 (C-3); 98,00(0-1 '); 74,90; (0- 4'); 74,30' (C-8a-CIF₂);

72,60; (C-5') )72,40 (OCH^^CH^ ;£-4')j 65,60· (C-8a)j 59,00 (C-32);54,2O (C-2')J5O,3O (C-3')* 18,60 (C-6').

Příklad 53

- 249 Příprava sodné sole kyseliny /1R-(1alfa,3abeta,4be-ts, 4abeta,7beta ,7aalfa ,8abets)/-8a-/(2,3-anhydro-6-deoxy4-0-propyl-beta-D-mannopyrenosyloxy )-methyl/-4-formyl -4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahydro-7-me thyl-3- (1 -me thyl- *“ ethyl)-!,4-methan-s-indacen-3a-( 1H)-karboxylové

Ku roztoku 400,0 mg sloučeniny, připravené a popsané v rámci výše uvedeného Příkladu 52, ve 30,0 ml vysušeného methanolu, bylo po kapkách přidáno 8,15 ml Q-,0976N roztoku hydroxidu sodného při teplotě místnosti a vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 1,0 hodiny. Po odpaření rozpouštědla do sucha byl získaný zbytek ve formě pevné „látky,, rozpuštěn, v minimálním množství vody( 10.0 - 15,0 ml) a tekto připravený roztok byl poté lyofilizován, .

Bylo získáno 417,0 mg žádané, v nadpise uvedené' sloučeniny, ve formě bíle zbarvené, pevné látky. ¹H-NMEí(CDG.l₃):

delta 9,89 (s.JIHJCHO )J 5,97 (d.d.J1HJH-2JJ = 1,50. a 3,60 Hz )J 4,70 ( s.J 1HJ H-1 ')J 4,09 a 3,86. (2dJ 2HJ 8a-GH₂; J = 9,70 Hz )J 3,70 (m. J1HJH-5') J3,44(m. J 1HJ H-4'); 3,24 a 3,12 (2d.J 2HJ H-2'a H-3'jJ = 4,00 Hz );. 3,20; ( m.; 2H* ogh₂ch₂ch₁ ); 2,65 (ϊ.;ιη;η-ι;

J = 3,90'Hz );

¹³C-NMR( CHC1₃):

delta 209,60. (CHO); 178,38 (GOjNa); 152,40- (C-3);

130,10 (C-2);1OO,1O (C-Γ); 77,9σ (OGH₂CH₂CH₃ ah g - 4'); 76,60 <C-4')J 73,50 (C-5')J 73,10' (C-8a-GH₂)

66,60 (C-3')J 18,901 (C-6').

Příklad 54

250

Příprava /1 Η- (1 alfa,3abeta,4be ta,4abe ta,7beta,7aalfa, 8abe ta)/-8a-/(2,3-anhydro-4-0-benzyl-6-de oxy-beta-Dmannopyranosyloxy)-me thyl/-4-formyl-4, 4a, 5,6,7,7a, 8, 8a-oktahydro-7-methy1-3-(1-methylethyl)-1,4-met£ans-indacen-3a-(1H)- karboxylové kyseliny

Ku suspenzi 22,0 mg hydridu sodného v 5,0 ml vysušeného dimethylformamidu^ byl přidán po kapkách roztok 200,0 mg Meziproduktu 63, jehož příprava je popsána výše, v 7,0 ml vysušeného dimethylformamidu.Vzniklá reakční,směs,byla,míchána při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny a po neutralizaci s 1N roztokem 1N kyseliny chlorovodíkové bylo.přidáno 30,0 ml ethylacetátu.

Organická fáze byla po oddělení promyta vodou a solankou,, vysušena síranem hořečnatým. bezvodým a poté byla zfiltrována a vysušena do sucha.

Zbytek byl .zpracován'urychlenou chromatografií na sloupci, silikagelu za použití směsi dichlórmethanmethanol (50 : 1) a (35 : 1), jako elučního řinidla..

Bylo získáno 150,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-NMBí(ClDC1/:

delta 9,86 ( s.JIHJCHO); 7,3t (m.JSHJghCH/)J 6,08 ( d.d.; ih; H-2JJ = l,20 a 3,30' Hz); 4,75 (d.JÍH; OCH/h ; J = 11,40 Hz ); 4,73 (a.; ιη;η-Γ);4,56.

( d.; iH;ocH₂Ph ;j = 11,40 Hz ); 4,17 a 3,,62 (2d.;

2HJ 8a-CH₂; J = 9,00 Hz )J 3,32 a 3,14 (2d.;2HJ H-3'a H-2'jJ = 3,70 Hz )J 3,30; ( m.J 2H;H-4*;h-5')J

2,71 ( t.;iH; η-d;

¹³C-NMH( CDC1₃):

delta 204,90 (CHO); 175,8O(C00H)J 137,20; 1 28,14*,

128,11 (6G.-Ph); 148,30 (C-3); 130,80 (C-2)J98,00 +

- '251 (C-1');74,4O (G8a-CH₂); 74,30' (0-4')J 72,60(0CH₂Ph)J

7.2,.5oj.c-_5í)_;._ Á5,jojc-8a);..2S_⁰.9í£-2^z?»...⁵⁰j.³9Í^c-³/ 18,60 (C-6').

Příklad 55

Příprava /1R-Í1 alfa ,3abeta,.4beta ,4abeta,7beta,7aalfa, 8abeta )/-8a-/(2,3-anhydro-6-deoxy-beta-D-mannopyrano- syloxy)-methyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a- oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1 ,4-methan-s-indacen- , 3a-(1H)-karboxylové kyseliny ..... _r

Ku suspenzi 75,0 mg vysušeného hydridu sočného v 5,0 ml vysušeného dimethylformamidu/byl přidán v atmosféře dusíku roztok 500,0 mg Meziproduktu 66,.jehož příprava je popsána výše, v 5,0 ml vysušeného dimethylformamidu. Vzniklá reakční směs byla míchána v atmosféře dusíku, po dobu 3,0 hodin a poté byla reakce ukončena , přidáním vody a zneutra li z ováním směsi . 0,50 M vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH. 6,6 - 7,0 ..

Poté byla reakční směs zahuštěna a získaný zbytek byl vytřepán ve směsi(100,0 ml) . voda-ethylacetát,' ( 1 : 1). Po oddělení obou fází byla vodná fáze vytřepána 2x ae 20,0 ml ethylacetátu a organické, fáze byly spojeny a po zpracování se solankou byly vysušeny síranem hořečnatým, zfiltrovány a za vakua zahuštěny na látku sirupovité konzistence, která byla přečištěna urychlenou chromatografií na sloupci silikagelu/za použití směsi dichlormethan-methanol(40 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 172,0 mg žádané, v nadpise uvedené,, sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

252 ¹ H-NMR.( C.DC1₃):

delta. 9,76 (s.;ih;cho )*,6,O9 (d.d.; ih;h-12;j = 1,50 a 3,60 Hz ); 4,77 (s.JIHJH-Γ); 3,61 a 4,21 (2d.J2H; 8sCH₂;j = 9,oo Hz ); 3,60 (d.; ih;h-4';j - 8,70 Hz);

3,21 td.k.J 1H;H-5';j = 9,00 a 6,00 Hz); 3,16 a 3,27 ( 2d.J 2HJ H-2';. a H-3'; J = 3,60 Hz- );/2,70 (t.JIH;

U 1 )·

11— l / · ¹³C-NMB:(CDC1₃):

delta 205,50 (CHO); 174,60 (CO^); 148,40 (C-3)J 130,80 (C-2); 97,80 (C-l ')J74,10 (8aCH₂)J73,90 (C-4') *,73,701 ( C-3a )J67,2O (C-5'); 65,50 (C-8a)J59,00 (C-4)J56,5O (C-2')J 50,401 (C-3')J 46,50 (C-1).

P ří. k 1 a d- 56

Příprava /1R-(1alfa,38beta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abeta)/-8a-/(2,3-anhydro-4,6-dideoxy-4-fluor-beta-D- talopyranosyloxy)-methyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-^s oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1,4-methan-a indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 130,0 mg Meziproduktu 68, jehož příprava je popsána výše, ve 30,0 ml ethylacetátu,bylo přidáno v atmosféře dusíku 100,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí a vzniklá reakční směs byla po předložení do Parrova autoklávu: třepána při tlaku vodíku 0,105 MPa_?při teplotě místnosti; po dobu 1,0 hodiny.

Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla do sucha byl'zbytek zpracován urychlenou chromatografií na sloupci slikagelU; za použití směsi hexanethylacetát (4 :1 ) a směsi dichlormetha-methanol ( 20 . 1), jako elučních činidel.

-- 253

Bylo získáno 82,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

^H-NMK (CDCl-j):

delta 9,79 ( s.; 1H;CH0);6,08 (d.d.; 1Η*,Η-2; J = 1,20 a 3,60 Hz); 5,13 (a.;. 1H;H-D; 4,75 a 4,58 (2 d.k.; ih; h-5'; j = 5';f - 48,30,h_z ); j = 6,50 hz;j = 3,90 Hz); 4,18 a 4,11 (2d.; 1H‘_r H-4'; J = 3,90 Hz a J = 4,'

F = 23,10 Hz ); 4,07 a 3,61 (2d.; 2H;8aCH₂J J = 9,30 Hz ); 3,77 ( m. J 2H; H-2'; a H-3 '); 2,67 (ϊ.;ιη;η_ι );

¹³ C.-NMSÍ CDCl-j):

delta 204,60 (CHO); 175,30 (CO₂H); 148,20(C-3);.-130,70 (c-2); 101,70 (c-Γ); 90,20 ( a.; ^-4';·^*^= 157,00 Hz ); 80,30 ( d.; C-5';J_C5^ 21,40 Hz ); 74,30(C-8a CH₂); 73,40( C-3a);65,40 (C-8a); 58,90 (C-4); 55,90 ( C-2'); 55,10 (d.; C-3';J_C32_F = 6,30 Hz); 16,40ja.; ^C“⁶ » ^JC6-F^{= 21,0} *

P ř í k Ί a d 57

Příprava /1R—(1 alfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abe ta) /-8a-/ (2,3-anhydro-6-de oxy-4-0- (2-me thoxye thyl) -be ta-D-mannopyranosyloxy) -methy l/-4-f ormy 1-4,4a, 5,6,7, 7a, 8,8a-oktahydro-7-me thyl-3- (1 -me thy le thyl)-1,4-me than -s-indacen-3a-(1H)- karboxylové kyseliny

Ku roztoku 140,0 mg Meziproduktu 69, jehož příprava je popsána výše, v 50,0 ml ethylacetátu £ylo přidáno v atmosféře dusíku 70,0 mg,10%ního palladia > na aktivním uhlí. Vzniklá reakční 'směs byla poté po předložení do Parrova autoklavu třepána při tlaku 0,140 MPa vodíku a^;Jpři teplotě místnosti po dobu 1,0

254 hodiny. Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla do sucha/byl získaný zbytek přečištěn urychlenou chromatografii na sloupci silikagelu/za použití ne.jpr/ve dichlormethanu a poté směsi dichlormethan-methanol ( 4-0 : 1), jako elučních činidel.

Bylo získáno 74,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny, ve formě bíle zbarvené pěny.

¹H-NME(CDC1):

delta 9,78 (s.;IHJCHO)J6,08 íd.d. ;.1H;h-2; J = 1,20 a 3,30 Hz ); 4,74 ( s.; ÍHJH-I'); 4,23*3 3^60 (2dJ 2H.; 8a-GH₂;j = 9,00 Hz );. 3,86 - 3,50 (m.; 4HJ OCH₂OH₂OGH₃); 3,38 ( s.;3H;CH₃OCH₂CH₂O );3,3O a

3,13 (2d.; 2H; h-2'; a H-3*; j - 3,90 Hz )J3,26 3,22' ( or.; 2H; H-4'; a H-5')J. 2,68 ( t./HJH-IJJ =

3,70 Hz);

^{1 3}C-MR( CI>C1₃):

delta 204,80; (CHO); 175,20 (COOH) J.148,30 (C-3);

130,80 (C-2); 97,90 (C-Γ); 74,20 (C-8aCH₂)J72,40 (C-5') ;71,70; a 69,90:(00^0^0^)154,10 ( C-2');

50,30 (C-3'); 46,50- (ΟΗ^ΟΉ^Ώ^); 18,50 (C-6').

Příklad 58

Příprava /1R-(1 alfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abe ta) /-8a-/ (2,3-anhydro-6-de oxy-4-0-.(2-me thylpropyl) -be ta-D-mannopyranosy loxy) -me thyl/-4-formyl-4,4a, 5,6, 7,7a,8,Sa-oktahydro-7-methyl-3-(Γ-methyle thyl )-l,4 methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

- 255

Ku roztoku 0,14 mmolu Meziproduktu 70, jehož . příprava je popsána výše, ve 30,0 ml ethylacetátu,bylo v átmóšf éře’dusíku 'př'Ídáňd^-5’0',OHng“lO%ního^-paTl'adi’a~na^------------aktivním uhlí. Vzniklá reakční směs byla poté po předložení do,Parrova autoklávu třepána při tlaku 0,175'

MPa vodíku a při teplotě místnosti po dobu 30,0 minut.

Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouŠ-. tědla do sucha^byl získaný zbytek přečištěn urychlenou chromatografiíf za použití směsi dichlormethan-methanol (.40 : -V), jako. elučního činidla..

Bylo získáno 49,0 mg Žádané, v nadpise uvedené ; sloučeniny.

¹H-NTO- (GDC1₃):

delta 9,76 (s.; IHJCHO); 6,09 ( d.d.;1HJH-2;J = 1,20 a 3,30 Hz); 4,73 ( s.; 1HJ H-Γ); 4,12 a 3,65 (2d.;

2H; 8a-CH₂;j = 9,30 Hz )J 3,49 ( m.*, 1HJH-5') ;3,22'.

( m.J 3HJ H-2'; a CH₂-0 ); 3,13 ( m.; 2H;H-3'; a>·⁴');

2,75 (t.; ih; h-i;j= 3,90 Hz); 2,33 (m.; ih;ch(ch'₃)₂);

¹³C-NMR(CDeip:

delta 204,80 (CHO); 176,00 (CO-H); 148,20 (C-3)*,' 130,80 (C-2); 98,00 (C-1');77,6O (0-Γ');75,20 (C-4')J 74,30 ( 8a-CH-₂); 72,901 (C-3a ); 72,60 (C-5'); 65,60 ( C-8a);

59,00 (C-4); 54,10 (C-2*); 50,40, (C-3')*, 46,40 (C-1 )‘ J

41,70 (C-4a); 41,30 (C-7a ).

Příklad 59

256

Příprqva /1R-( 1 alfa ,3abeta ,4-beta ,4abeta ,7beta,7aalfa, 8abe ta)/-8a-/(2,3-anhydro-6-de oxy-4-0-(1-me thyle thy1)karbony1-beta-D-mannopyranosyloxy)-methyl/-4-formyl 4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-oktahyóro-7-me thy 1-3- (1 ,-me thyle thyl) -1,4-methan-s-indscen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 140,0 mg Meziproduktu 71, jehož, příprava je popsána výše, ve 20,0 ml. ethylacetátu, bylo v atmosféře dusíku přidáno 120,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí.Vzniklá reakční směs byla poté po předložení do Parrova autoklávu třepána při tlaku 0,140

MPa vodíku a při teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny.

Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla do sucha*byl získaný zbytek přečištěn urychlenou chromatografií na sloupci silikagelu/ za použití směsi hexan-ethylacetát( 4 : 1) a směsi dichlormethanmethanol ( 20 : 1), jako elučních činidel.

'Bylo získánoJ03,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeninyve formě bíle- zbarvené pěny.

CDCl-j):

delta 9,74 (s. J1HJCHO. ) J6,09 (d.d.; 1H;H-2*,J - 1,50 a 3,60 Hz ); 4,78 (s.; ΙΗ’,Η-Γ); 4,66 ( d.;iH‘,H-4';

J = 9,00 Hz); 4,10 a 3,60 (2d.;2H;8aCH₂;J -9,00Hz); 3,42 (d.k.; 1H; = 9,00 a 3,0 Hz ); 3,15 <s.,;

2H; H-2*a H-3'); '2,78 (m. J.1 H;H-1 ); 2,58 (m.; 1H;4'OCOCHMe₂);

¹³C-NMR(CDC1₃):

delta 204,90 (CHO);. 176,10 ; 175,90(C0₂H a 4'0C0R);

148,20 (C-3)’, 130,90 (C-2)J 97,90 t C-Γ); 74,50 (C8aCH₂); 72,60 (C-3a );71,4O (C-4'); 67,8O(C-5')j 66,0 ( C-8a);59,0 (C-4); 18,50 a 18,80 (2CH₃ ze vzorce 40G0CHMe₂).

257

Příklad 60

Příprava /1R— (1 alfa, 3abeta ,4beta,4abeťa, 7bětá’,’7aarfa, 8abe ta) /-8a-/ (2,3-anhydro-6-de oxy-4-0- (2,2-dime thylpropionyl)-beta-D-mannopyranosy loxy )-methy l/-4-formy1 -4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a -ok tahy dro-7 -me thyl-3 - (1 -me thy 1ethyl)-1, 4-me than-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

.....Ku roztoku 0,21 mmolu Meziproduktu 72,. jehož příprava je popsána výše, v 60,0 ml ethylacetátu, bylo v atmosféře dusíku přidáno 50,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí.Vzniklá reakční směs, předložená do Parrova autoklávu, byla třepána při tlaku 0,140 MPa vodíku a teplotě místnosti, po dobu 30,0 minut.

Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědle do sucha^byl získaný zbytek přečištěn urychlenou chromatografii, za použití směsi dichlormethan-methanol ( 40 : 1), jako elučniho činidla.

Bylo získáno 101,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny..

^H-NMRÍ CDCl^):

delta 9,75 ( s.JIHJCHO );6,10 (d.d,;iH;H-2;J = 1,20’ a 3,30 Hz ); 4,80 (s.;1HJH-1')J 4,64 (d.;iHJH-4';

J = 9,00 Hz ); 4,11 a 3,70 ( 2d.;2H;8a-CH₂;J = 9,30 Hz ); 3,43 ( m.; 1H;H-5');3,13 (m.;2H;H-2'a H-3');

2,78 (t.; ih;h-i; j = 3,90 Hz ); 2,34 ( m.;iH;cH(CH₃)₂) ¹³C-NME( CDC1₃):

delta 204,90 (CHO);177,30 a 176,50 (2x CO₂);148,2O (C-3);13O,9O (C-2); 98,oo (C-1')J74,50 (8a-CH₂)J72,60 (c-2); 71,30 (c-5'); 67,90'(c-4'); 65,70 (c-sa);59,oo (C-4)J54,3O (C-2'); 50,10 (C-3'); 46,30 (C-1)J41,80 t ^(C-4a); 41,30 (C-8);38,8O (C^Bu);32,00(C-5)ζ 30,¼ (C-7)*, 18,50 (*Bu).

258

Příklad 61

Příprava /1R-(1 alfa,3abe ta,4beta, 4abeta,7beta,7aalfa,

Sabe ta)/-8a-/(2,3-anhydro-4-O-benzyloxykarbony1-6deoxy-be ta-D-mannopyranosyloxy)-me thyl/-4-formyl-4,4a,

5,6,7,7a ,8,8a-oktahydro-7-methyl-3-( 1 -methyle thyl )-1,

4-methan-3-indacen-3a-( 1H)-karboxylové kyseliny

Roztok 0,22 mmolu Meziproduktu 73, jehož příprava je popsána výše, v 10,0 ml dichlormethanu, byl reagován při teplotě 0°C s 0,10 ml kyseliny trifluoroctové. Po 2,0 hodinách byla takto připravená reakční směs promyta s vodou a oddělená organická fáze byla odpařena.

Zbytek byl přečištěn urychlenou chromátografií,. za použití směsi dichlormethan-methanol( 40 : 1), jako elučního činidla.

;Bylo získáno; 60,00 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

^-NMR-Í CDC1₃):

delta 9,74 (s.;iH;CHO ); 7,37 (m.;5H;Ph )’, 6,09 ( d.d.; ih;h-2;j = 1,50 _a 3,60 Hz); 5,20 (m.;2H; cH₂Ph ); 4,75 ( 3.;ιη;η-Γ); 4,55 ( č.;ih;h-4';j = 9,00 Hz); 4,08 a 3,70 <2d.; 2H;8a-CH₂;j = 9,00Hz);

3,47 ( m.; 1H;h-5'); 3,28 a 3,16 ( d.d.;iH;iH;H-2'; a H-3'’', J = 3,60 Hz ); 2,79 (t. JI H;H-1 * J = 3,90Hz); ' 2,33 ( m.; ih; ch(ch₃)₂):

¹³C-NMR(CDC1₃):

delta 204,80 (CHO);176,4O (CO₂H); 154‘, 10(00₃) *,148,10 (C-3); 134,60 (Cipao); 130,90 (C-2); 128,8O;128,7O; 128,50; 128,40 (Ph);97,80 (C-1');74,5O (8a-CH₂)J72,5O (C-3a); 71,60 (C-5'); 71,10 8C-4');70,30 (CH^h); 65,70c (C-8a); 58,90 (C-4)J53,9O (C-2Í; 50,00 (C-3')*,46,20' (C-1); 41,70 (C-4a);4l,30 (C-7a).

- 259 Příklad 62

Příprava /1R—(1 alfa, 3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,

8abe ta)/-8a-/(2,3-anhydro-6-de oxy-4-oxo-be ta-D-mannopyranosyloxy)-me thyl/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,8,8aoktahydro-7-methy1-3-( 1-me thyle thy?&)-1,4-methan-aindacen-3a-(1H)-kar’ooxylové kyseliny

Ku roztoku 0,26 mmolu Meziproduktu 74,jehož příprava je popsána výše, .ve 30,0 ml ethylacetátu, bylo. v atmosféře dusíku přidáno 50,0 mg lO%ního palladia na aktivním uhlí. Vzniklá reakční směs byla ,po předložení do Parrova autoklávu třepána při tlaku 0,175 MPa vodíku a teplotě místnosti, po.dobu 1,50 hodiny.

• i“ '

Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpoušA tedla do sucha_zbyl získaný zbytek přečištěn urychlenou chromatografií/ za použití směsi dichlormethanmethanol ( 40 : 1), jako elučního Činidla.

Příslušné frakce byly shromážděny a odpařeny.

Bylo získáno 38,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

^H-NMfi (CDC1₃):

delta 9,72 (s.;1HJCHO);6,12 (d.d.;1H;H-2;J = 1,50 ' a 3,60 Hz ); 4,87 (3.;1Η;Η-Γ)^β, 4,10 a 3,76 (2d.J 2H;eaCH2;j = 9,00 Hz ); 3,83 ( k.;.iH;H-5';j = 6,60 Hz ); 3,60 a 3,38 ( d.d.; 1H;iH; 3'a 2'jJ = 3,90 Hz); 2,82 (t.;iHJH-i;j = 3,60 Hz);2,36 (m.;iH;cH(CH3)2); ¹³C-NME (CDC13):

delta 204,90 (CHO);2O2,9O (GO-4');176,20 (CO₂H);

148.20 <C-3);13O,9O (C-2);96,10 (0-Γ);76,60( C-5')*

74,70 (8aCH₂);72,10< C-3a);65,7O (C-8a);58,90(0-4):;

54.20 a 53,50 (C-2'a C-3')*,46,1O (C-l);41,80 (C-4a);'

41,30 (C-7a).

260

Příklad 63

Příprava /1R-(1 alfa,3abeta,4be ta,4abe ta,7be ta,7aalfá,

8abe ta)/-8a-(2,3-anhvdro-4,6-diede oxy-4-me thylen-betaD-mannopyranosyloxy)-me thyl-/-4-formyl-4,4a,5,6,7,7a,

8,8a-oktahydro-7-me thy1-3-(1-me thyle thyl) -1,4-me thans-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Roztok 0,17 mmolu Meziproduktu 101, jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml dichlormethanu, byl reagován při teplotě 0°G s 0,15 ml kyseliny trifluoroctové. Po 2,0 hodinách bylo ku reakční směsi přidáno 10,0 ml vody a oddělená organická fáze. byla odpařena a získaný zbytek byl rozpuštěn v 15,0 ml ethanolu a 1,50 ml IN: roztoku kyseliny chlorovodíkové a tato ’’ směs byla míchána při teplotě 0°C po dobu 2,0 hodin.

Po odpaření rozpouštědla byl zbytek přečištěn chromatografií. za použití směsi dichlormethan-methanol (20 . 1), jako elučního činidla.

Po odpaření příslušných frakcí bylo získáno- 24,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR.(CBC1₃ ):

delta 9,75 ( s.JIHJCHO )) 6,08 (d.d.J1HJH-2JJ = 1,20 a 3,30 Hz)J 5,20 a 5 JO (a.) a.J 1H)1HJCI^=C ))4,82 ( d.) 1H)H-1JJ = 2,10 Hz ); 4,42 ( m.J 2H;H-5'a H-3');

4,19 a 3,56 ( d.Jd.J 1HJ1HJ 8a-CH₂;j = 9,60 Hz))3,65 ( m.J 1HJH-2')) 2,63 ( t.j 1HJH-1JJ = 3,90 Hz)J 2,36 ( m.; ih; ch(ch₃)₂);

¹³C-NMR(CDC1₃):

delta 204,70 (CHO); 175,00(C0₂H); 148,50 (C-3)J145,6O (C-4*)J 130,50 (C-2); 112,10 (CH₂=C); 99,50 (C-Γ); 74,00 (8a-CH₂); 73,00 (C-5')) 72,80 (C-3a)J 72,20 a 71 ,60 (C-2'a C-3').

261

Příklad 64

Příprava /1Ř- (1 slfa~3aběta ,4’beta,'4abě'f8 ,7běta77ea'l'fa^-,^-

8abe ta)/-8a-(2,3-anhydro-4-0-terc.-butylkarbony1-6de oxy-be ta-D-talopyranosyloxy)-me thy1-4-formyl-4,4a,

5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thy1-3-(1-me thyle thyl)1,4-methan-3-indacen-3a-(1H)-karboxylové'kyseliny

Směs 0,10 mmolu Meziproduktu 103, jehož příprava je- popsána výše, ve .2,0. ml vody, byla reagována při teplotě 0°G se 3,0 ml kyseliny trifluoroctové. Po uplynutí 90,0 minut b.yla výše zmíněná směs nalita do 30,0 ml směsi ethylether-voda( 1 : 1).Oddělená organická fáze byla odpařena a získaný zbytek byl přečištěn chromatograficky za použití směsi dichlormethan-^; methanol ( 40 : 1), jako elučního Činidla.

3ylo získáno 32,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny. .

'tfV'* ^-NMEÍCBCl-j):

delta 9,77 (s.;iH,*CH0); 6,08 ( d.d.; 1HJH-2;J = 1,50’ ' a 3,60 Hz); 4,75 (d.d.;1H;H-4';J = 3,60 a 4,80 Hz); 4,69 <3.;ιη;η-Γ); 4,i? ( d.;iH;sa-cH_a;j = 9,30 Hz);

3,66 ( m.;2H;8a-CHb a H-5'); 3,57 ( ϊ.;ιη;η-3';J = 4,.20 Hz );. 3,17 ( d.‘,1H;H-2';J = 3,60 Hz); 2,73 (t.j ih;h-i: j = 3,90 Hz ); 2,33 ( m.; ih;ch(ch₃)₂); ¹³C-NME(GIíC1₃):

delta 204,80 (CHO); 178,50 a 175,7O(2x C0₂);i48,30 (C-3); 130,80 (C-2); 97,90. (C-D; 74,10 (8a-GH₂); 73,00 (C-3a); 71,50 (C-5')', 66,00(0-4'); 65,60 (C8e); 59,00..( c- 4); 51,30 (c-2'); 50,70(0-3').

262

Příklad 65

Příprava /1R-(lalfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, .

8abeta)/-8a-//2,3-anhydro-4-0-(trans-2-butenyl)-6-deoxy-beta-D-mannopyranosyloxy/-me thyl/-4-formyl-4,4a,

5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-ae thyl-3- (1 -me thyle thyl) -1,

4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny /

Roztok 103,0 mg Meziproduktu 47,jehož příprava je popsána výše, v 5,0 ml vysušeného dichlormethanu, „byl reagován při teplotě 0°Cl· se__100,0 /Ul kyseliny trifluoroctové. Po uplynutí 1,0 hodiny byla uvedená reakční směs vytřepána mezi 50,0 ml ethylacetátu a 50,0 ml nasyceného vodného roztoku síranu sodného.Oddě- a lená organická fáze byla promyta nasyceným vodným roz- *. tokem síranu sodného, vodou a solankou a poté byla vysušena a odpařena.

Zbytek. byl„.2x chromatografován na silikagelu za použití směsi hexan-ethylacetát (2 : 1) až ( 1 :1),jako elučního činidla.

Bylo získáno 50,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹ H-NMR (ODCl-j):

delta 9,76 ( s.J IH; CHO); 6,08 (d.d.; ih;h-2;j =

1,50 a 3,60 Hz ); 5,82 - 5,68 ( m.; 1H;CH=CH); 5,62

- 5,48 ( m.; ih; ch=ch); 4,72 (s.; ιη;η-Γ);4,20 4,10 ( m.; 2H; 0-CHa-C=C a 8a-CHa); 4,0,2 - 3,92(m.; 1H;oCHb-C=C ); 3,63 (d.; 1H;8a-GHb;j = 9,30 Hz);3,30'

- 3,15 ( m.; 3H; h-3';h-4' a h-5'); 3,12 (d.;iH;H-2 j = 3,90 Hz); 2,73 (t.; ih;h-i;j = 3,90 h_z);i,72 (d.d.; 3H; H^C-C^CJJ = 1,20 a 6,60 Hz);

¹³C-NMB(CDG1₃)::

delta 204,80 (CHO); 175,60 (CO^H);i48,20 (C-3);13O,8O

- 263 (C-2); 131,10 a 126,60 (0-CH^-C=C-CH₃)* 97,9® (C-Γ); 7_1ι.²⁰_ίθ^θ^2λ» ll·^{20 (}°-CH₂-C=C-C2F₂ ); 73,50 a 72,50 (C-4*a C-5').” “

Příklad 66

Příprava /1R—(1 alfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aelfe, Sabeta)/-8s-(2,3-enhydro-6-deoxy-4-0-propyl~beta-D - . talopyranosyloxy )-me thyl-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,8aoktahydro-7-methyl-3-O-methylethyl)-1,4-methan-s indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 150,0 mg (0,21 mmolu) Meziproduktu 104_r jehož.příprava je popsána výše,v 50,0 ml ethanolu; 10,0 ml ethylacetátu a 1,0 ml 1 Ν' roztoku kyseliny chlorovodíkové, bylo v atmosféře dusíku přidáno 30,0 mg I0%ního palladia na ektivním uhlí.Vzniklá-řeekční směs byla po předložení do Parrova autoklavu * třepána při tlaku 0,245 KPa a teplotě místnosti po dobu 3,0 hodin. Po odfiltrování katalyzátoru bylo ros-pouŠtě:dls‘.:odpářeňodGtšncha a zbytek byl přečištěn chromatografií^ za použití směsi dichlormethan-methanol ( 30 : 1), jeko elučního činidla.

Bylo získáno 60,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMB.(GLC1₃):

delta 9,83 (s.;ih;cho);_:6,o6 (d.d.;ib;h-2;J = 1,20 a

3,60 Hz ); 4,75 (3.;ιη;η-Γ); 4,44 a 3,42 (a.d.;2H; 8a-CH₂; J = 9,30 Hz ); 4,37 (t.*, 1H;H-3';j = 2,70 Hz ); 4,10 (m.; ih; h-4');.3,74 - 3,65 (m.;2H;cH₂o); 3,91 (m.;. ih; h-5'); 3,19 (m.; ih; h-2'); 2,51 (t.;

264 ih; h-i;j = 3/0 h_z);

¹³C-MR(GDC1₃):

delta 204,70 (CHO);. 174,90 (COjH); 148,60 (C-3)J.130,40 (C_2); 97,90 (C-Γ);. 78,70 (C-4');. 73,90 (8a-CH₂);

73,30 (CH₂O );.69,80 ÍC-5'); 69,30 (C-3'); 65,30 (C-8a); 59,oa (C-4); 54,60 (C-2');47,00 (C-1),

P ř.í k 1 a d ...67 · '

Příprava /1R-(Islfa,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,

8abe ta)/-8a-(2,3-anhydro-4-azid-4,6-dide oxy-be ta-D mannopyranosyloxy )-me thy 1-4-f ormyl-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-. oktahydr o-7-me thy 1-3- (1 -me thyle thy 1) -1,4-me thsn-sindacen-3a-( 1H)-karboxylové kyseliny i

Roztok 0,06 mmolu Meziproduktu 106, jehož příprava je popsána výše,, v 5,0 ml vysušeného dichlormethanu, byl při teplotě 0°C reagován se 70,0 ^ul kyseliny-j trifluoroctová. Po uplynutí 2,0 hodin byla výše uvede- « ná reakční směs promyta a vodou a solankou.

Po odpaření rozpouštědla byl zbytek přečištěn *

chromatografií za použití směsi dichlormethan-methanol ( 30 : 1), jako elučního činidla. . . · »

Hylo získáno 12,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny.

¹H-NMR(CDC1₃):

delta 9,73 (a.| IHJCHO) ;.6,09 (d.;iH;H-2JJ = 3,60 Hz);

4,73 (s.; ih; η-Γ);4,12 a 3,67 (d.d.; ih;ih;88-ch₂ ; j = 9,0 Hz ); 3,39 ( d.; ih;h-4';j = 9,0 Hz)J 3,33 a

3,17 (d.d.;. ih; ih; H-2'a H-3';j = 3,60 Hz ); 3,22

265 (m.; ih;_:h-5');.2,76 (t.; ih;h-i;j = 3,60 Hz); 2,34 . c.h(.gh₅).₂í;______________________ ¹³C-NMR(CDC1₃):

delta 205,10 (CHO); 175,30 (C0₂H);148,4O (C-3);i30,80 (C-2)37,.80 (C-Γ); 74,60' (8a-CH₂);72,7® (C-5'); 68,00 ’( C-3a); 65,7® (C-8a); 59,00' (C-4); 58,70 (C-4*);54,40 ( c-2*);. 5o_ri® (®-;J); 46,3® (®-D.

Příklad 68

Příprava /1R-(1 alfa, 3abe.ta,4beta _ř4abeta,7beta,7aalfa, 8abe ta)/-8a-/(4-0-allyl-2,3-anhydro-6-de oxy-be ta-Dmannopyranosy laxy )-me thyl/-4-f ormyl-4,4a ,5,6,7,7a,8,8a -oktahydr o-7-me thyl-3-(1 -me thy le thyl) -1,4-me than-sindacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Roztok 250,0 mg Meziproduktu 107, jehož příprava je popsána výše, v 10,0 ml dichlormethanu a 0,20 ml kyseliny trifluoroctové, byl míchán při teplotě 0°C po dobu 4,0 hodin. Reakční směs byla odpařena poté do ~ sucha a zbytek byl přečištěn urychlenou chromá tografii za použití šměhi dichlormethan-methanol (50 :' 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 140,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle zbarvené pěny.

¹ H-NMR. (CDd_T):

i delta 9,77 (s.; IKJQHO); 6,08 (d.d.; 1H;fí-12;j = 1,20 a 3,30 Hz); 5,90 (m.; ih; ch=ch₂); 5,28 (m.j 2h;ch=ch₂); 4,75 ( a.; ih; η-Γ); 4,28 (m.; ih; h-5'); 4,2Ka.;iH; H-19aJ J = 9,60 Hz); 4,05 ( m.J 1Η; H-4'); 3,60(d.;1H; h-i9b.; j = 9,60 Hz); 3,27;3,i4 (d.d.; ih;ih; h-2';h3'; J- 3,9® Hz ); 3,25 ( m.; 2H;CH₂-CH=CH₂); 2,68

266 (t.;.ih;.h-1 i;.j = 4,20 Hz);

¹³e-NSR(GDCl₃):

delta 205,07 (GHO); 174,60 (CO₂H); 148,40 (C-13);

133,70 (GH=CH₂); 129,70 (C-12); 118,,00 (Cffi>=GH );

97,80 (C-1*); 74,17 ( C-19); 74,04 (C-4')*, 72,50 (c-5'); 71,00 (o-cíf₂-ch=ch₂); 54,10 (c-2*); 50,20 (σ-3'Ί; 27,5a (£-14); 22,7a (c-20); 21,2σ(α-Ί5); 18_Γ6Ο (C-6 *);i 7,40 (C-17 ).

Příklad 69

Příprava /1R-(1 alfa,3abeta,4be ta,4abeta,7beta _ř7aalfa 8abe ta)/-8a-/(2,3-anhydro-6-de oxy-4-0-1erc.-butoxykarb ony lne thy 1-be ta -D-mannopyr anosyldxy) -me thy 1/-4-f ormy 1 -4,4a, 5,6,7,7 a, 8,8a-okta.hydro-7-me thyl-3- (1 »me thylethyl)-1 ,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 200,0 mg Meziproduktu 21, jehož příprava je popsána výše, v 15,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu , byl přidán při teplotě 0°C hydrid sodný(30,0 mg )· Vzniklá reakční směs byla poté míchána při teplotě 0°C v prostředí dusíku po dobu 30,0 minut a poté bylo přidáno 260,0 /ul terč.-butyIbromacetátu a směs byla míchána v atmosféře dusíku při teplotě místnosti po dobu 3,0 dnů.Poté byla surová směs reagována s IN roztokem chloridu amonného a přidán ethylacetát. Oddělená organická fáze byla promyta s vodou a solankou a odpařena do sucha.

Zbytek byl yhydrogenován a poté zpracován standardními postupy,Surový materiál byl přečištěn urychlenou chromatogafií 2a použití směsi dichlormethan267 methanol ( 50 : 1), jako elučního činidla.

Bylo získáno 140,0 mg Žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ve formě hile zbarvené ~pěňyi

H-NHR (CUGI-j):

delta 9,74 (3.; IHJCHO); 6,08 (d.d.; IHJH-UJď = 1,50 a 3,9®Hz ); 4,74 (s.; ιη;η-Γ); 4,21 (d.d.; ih;h-4'; J = 3,60 a 6,0 Hz); 4,16 ( d.; 1H;H-19b;.J = 9,00Hz):; 4,12 (a.; 2h;ch₂-co₂c(ch_3:)₃); 3,63 ( d.;iH;H-i9b;j = 9,0 Hz );. 3,36; 3,1-4 (d.d·.; 1HJ1H-; H-2'; H-3';j =

3,9® Hz ); 3,3® ( m.; ih;h-5'); 2,71 (t.; ih;h-i1;

J = 3,9®Hz);

¹³C-NMH(CBC1₃) :

delta.'205,70' (GHO); T74,9® (CC^CtGS^);168,8® (C0₂H); 148,4® (C-13); 130,80 (C-12); 97,80 (0-D; 82,20 (C , (cH-p^); 75,60.) (c-4*);. 72,40(0-5'); 68,20 (och₂-c®); 59,00 (C-3); 53,90' (C-2*); 50,3® (C-3*); 27,50 (C-14);

22,70 (C-20);.21,20 (G-15);18,6O (c-6*); 17,40 (c-17).

Příklad 70

Příprava /1R-(1 elfa,3abeta,4beta,4abeta ,7beta,7aslfa, 8abe ta)/-8a-/(2,3-anhydro-6-de oxy-4-0-e thyl-be ta-Dmannopyranosyloxy)-me thy1/-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-oktahydro-7-me thyl-3- (1 -me thyle thy 1) -1,4-me than-s-indacen -3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 290,0 mg Meziproduktu 21, jehož příprava je popsána výše, v 5,0 ml vysušeného dimethylformamidu, bylo přidáno v atmosféře duaíku a při teplotě O°C;25,O mg hydridu sodného.Vzniklá reakční směs byla poté míchánapři teplotě 0°0 po dobu 30,0 minut a poté

258 byl k ní přidán 1,0 mmol ethyljodidu.Po 16,0 hodinách i

mícháni při teplotě místnosti byla reakce ukončena a k surové směsi byl přidán 1N roztok chloridu amonného a ethylacetát.

Po oddělení byla organická fáze promyta s vodou a solankou, vysušena bezvodým síranem hořečnatým a odpařena do sucha. Zbytek byl po hydrogenací zpracován standardními postupy a surový materiál byl přečištěn urychlenou chromatograf i í^ za použití směsi dichlormethan-methanol ( 50 : 1), jako elučního činidla.

• Bylo získáno 180,0 mg žádané,^J v nadpise uvedené sloučeniny ve formě bíle zbarvené pěny.

^-NMR.Í GDC1₃)::

delta 9,71 (s.J 1H;CH0); 6,08 (d.; IH; H-12JJ» 3,30 hz ); 4,73 ( s.; ih;h-D; 4,ie (d.;iH;n-i9a; j = 9,30 Hz );3,78; 3,5ft (m.;m.; ih;ih; o-gh₂-gh₃J;3,63 (a.; ih; H-i9b'v J =9,30 Hz); 3,25; 3,13 (d.ď.; ih;ih;h2'; h-3'; j = 3,90 Hz ); 3,19 ( m.; 2h;.h-4';.h-5');

2,71 (t..; ih„; h-ii;;:.j = 3,30 Hz );

¹³C-NHR( CLG1₃):

delta 201,80 (CHO); 175,00 (CO₂H) ‘,148,20 (C-13);13O,7 (C-12);97,9O (C-Γ); 74,60 (C-4'); 74,30 (C-19)J72,5O (C-5');54,.3O (C-2'); 50,30 (C-3'); 27,50 (0-14);22,70 (C-2O);21,2O (C-15); 18,60(C-6'); 17,40 (C-17).

Příklad 71

269

Příprava /1R- (1 alfa ,3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa, 8abe ta) /-8a-/ (2,3-anhydro-6-de oxy-4-0- (2,3-dihydroxypropyl')-ITě’t^-n^'ma'ňhopyřano3yToxy)-methyl//-4-formy 1’ 4,4a ,5,6,7,7a ,8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3-( 1-me thyle thyl) — 1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 700,0 mg Meziproduktu 108, jehož příprava je popsána výše, ve 40(7,0-ml ethanolu, bylo přidáno v atmosféře dusíku 350,0 mg 10%ního palladia na aktivním uhlí, a vzniklá reakční směs byla po předložení do,Parrova autoklávu třepána při teplotě místnosti a tlaku 0,140 MPa vodíku po dobu 1,0 hodiny.Po odfiltrování katalyzátoru bylo rozpouštědlo odpařeno do sucha a zbytek byl přečištěn chromatografii ha sloupci silikagelUj za použití dichlormethanu, a směsi dichlorme than^-methanol( 25 : Γ), jako elučních činidel.

Bylo získáno .425,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ( směs isomerů 50 : 50. ve formě bíle&zbarvené..·:látky{ve formě prášku).

delta 9,75 ( s.; ÍHJCHO); 6,08- (d..a.;iíF,H-1 2*, J = 1,2 a 3,60 Hz );4,7l· (s.;1 HJH-1 '); 3,98 (d.*, 1H;H-19a; j = 9,60 Hz); 3,81 (a.; ih;h-i9b;j = 9,60 Hz); 3,si

- 3,68 ( m.;. 2H; -OGH^-CHOÍE ve V-4'); 3,55 - 3,.31 (m.; 3H; -CH0H-CH₂0H ve C-4'); 3,3G- 2,11 (m.;4H;H2';h-3';. h-4';h-5'); 2,76 ( t.; ih; h-ii;j = 3,60' hz);

¹³©-NMR.(CmCl₃) delta 207,70 (CHO); 178,20(C0₂E); 150,49(0-13);

131,44 (C-12); 99,81 (C-Γ); 77,07 a 76,96 (CH-CHgOH ve C-4'); 76,57 (C-19)J73,55 (C-4'); 72,86 a 72,69 (0-CH₂-CHOH ve C-4'); 72,24 (Ο-5')Γ, 55,01 (0-3')’,

51,89 (C-2'); 23,20 (C-20 )’,21 ,60 <G~15>J19,40 (C6'); 17,9(7 ( C-17).

270

Příklad 72

Příprava /1R-(1 a lf a,3abe ta, 4be ta, 4 abe ta, 7be ta,. 7aa lf a, Sabeta) /-8e-/ (2,3-anhydro-6-deoxy-4-0- (2.,3-dime thoxypropyl)-be ta-B-mannopyranosyloxy )-methyl/-4-f ormyl-4, 48,5,6,7,73,8,8a-oktahydro-7-me thy 1-3- (1 -me thy le thyl) -1,4-methan-s-indacen-3a-(1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku 350,0 mg Meziproduktu 108, jehož příprava je popsána výše, ve 20,0 ml vysušeného tetrahydrofuranu, bylo v atmosféře dusíku a při teplotě-0°C přidáno 40,0 mg hydridu sodného. Ku vzniklé směsi, která byla míchána 'po dobu 30,0 minut, bylo poté přidáno 0,50 ml methyljodidu a směs byla míchána v atmosféře dusíku při teplotě místnosti po dobu 2,0 dnů»

KH surové směsi byl poté přidán 1N roztok chloridu amonného a ethylacetát.

Oddělená. organická, .vrstva byla promyta s vodou a solankou a poté byla. vysušena do sucha.Zbytek byl po hydrogenaci zpracován standarními postupy a bez dal Šího předběžného čištění bylo získáno 225,0 mg žádané, v nadpise uvedené sloučeniny ( směs isomerů 50 : 50), ve formě bíle zbarvené pěny.

^-W.tCDCly):

delta 9,75 ( s. ’_ř IHJCHO); 6,08 (d. J1HJH-12J J =. 3,30? Hz)*_ř 4,73 (d.*,1HJH-r;j = 1,5Q'^:Hz )*, 4,18 (d.;iHJH19b; J-9,0 Hz ); 3,62 ( d.J 1HJH-1 9bJJ = 9,0 Hz)J3,48 a 3,47 í s.;s.;3H;3H.;CE20Me JCHOSfe ); 3,36 - $,20?

( m.; 4h;h-2'jh-3';h-4'; h-5'); 2,70? ( ϊ.;ιη;η-ιi;j =

3,60 Hz );

¹³C-NMRÍGBC1₃):

delta 205,20 (CHO); 174,70’ (CO₂Ef) J148,40 (C-11);

- 271 130,7® (C-12) ;97,9® (C-Γ); 79,.00(CH0Mě ve 0-4')*,'

7_5_,.60_a_7.5.,7P_ .(.C-4'); .72,40...(0-5 Ί7_1,60 a_ 71,50_______ (0CH₂-GH0BTe ve C-4'); 70,1® a 69,8® (-CH^Ífe ve C-4?; 59,20; 57,90 a 57,8® (-CHOMe a -CH^Offié ve C-4')*,53,9 a 50,2® (C-2'a C-3'); 22,7® (C-20); 21,20 (0-15); 18,6® (C-6');i7,40 (C-17).

Příklad 72

Příprava /1R- (1 elfa,3abeta ,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,

Sabe ta )/-8a-/ (2 ,.3-anhydro-6-de oxy-4-0-/ (2,3-0-isopropyliden)-2,3-dihydroxypropyl/-be ta-D-mannopyranosyloxy/me thyl/-4-formy1-4,4a, 5,6,7,7a, 8,8a-ok.tahydro-7-me thyl -3- (1 -me thyle thyl) -1 ,4-me than-s-indB cen-3a- (1H)-karboxylové kyseliny

Ku roztoku-250,0 mg Meziproduktu 109, jehož příprava je popsána výše, v 50,0 ml ethylacetátu, bylo v atmosféře dusíku přidáno, 100,0. mg 10sního, palladia . na aktivním uhlí.Vzniklá reakční směs byla po předložení do Parrova autoklávu třepána při tlaku 0,140 MPa vodíku a teplotě místnosti po dobu 1,0 hodiny.

Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření rozpouštědla do sucha* byl zbytek přečištěn urychlenou chromatografií* za použití směsi n-hexan-ethylacetát (1 : 1) a dichlormethanr.methanol( 50 : 1 ), jako elučních činidel.

Bylo získáno 150,0 mg Žádané, v nadpise uvedené sloučeniny (směs isomerů 50 : 50), ve formě bíle zbarvené pěny.

^H-NMR (CDCl^):

272 delta 9,75 (s.) IHJCHO)) 6,08 (d.d.) 1HJH-12J.J = 1,50 a 3,60 Hz)J 4,71 (d.J 1HJ.H-1'j J = 0,90 Hz )J 4,29 4,24 ( tn.J 1HJCH0H ve 4')· 4,15 - 4,01 (ta.) 3HJH-19S a -0CH₂ )) 3,82 - 3,49 ( tn.J 4HJH-19b;0CH₂-CH0H-CH₂0);

3,29 a 3,.13 ( d.) d.J 1HJH-2'; a H-3';J = 3,90 Hz);

3,27 - 3,18 ( tn.; 2HJH-4'a H-5')J 2,74 (t.j 1HJH-1 1J J = 3,60 Hz )) 1,41 a 1,35 ( d.d.J 3HJ.3H; (OH-^C isopropylidenuK ) ¹³C-NSH( CDCl^):

delta 204,80'(CHO))165,70) (00^); ’ U8,20, (0-11 ))130,8 ( 0-12))97,9α (C-Γ); 75,70 a 75,60) ( -CH0-CH₂0) ve C4')) 74,40 (C-4*); 72,80 a 72,40 (0-5')J72,OO a 71,60 ( 0-CH₂-0 ve C-4')) 54,00 a 53,80 (Č-3')) 50,30 (C-2')J

22,60 (C-20)) 21,10) (C-15)) 18,6® (C-6 ')) 17,40 (C-17)'.

Příklad 74

Charakteristiky mikroorganismu označeného 1141-362.184' • Ar,

Označení Ώ4Ι-362.184 je použito pro mutant mi- kroorganismu Sordaria araneosa (ATTC 36.386JNRRL 3196 ), izolovaného po mutagenezi askospor tohoto kmene s N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidinem.

Charakteristiky mikroorganismu IMI-362.184 jsou v podstatě podobné jako u mikroorganismu NRRL-3196 ;

popsané ve specifikaci Britského patentu číslo 1,162.027 s tím rozdílem, že mikroorganismus IMI362.184 produkuje jako hlavní produkt 4'-demethylsordarin za stejných podmínek, které byly použity při produkci sordarinu dle NRRL-3196.

273

Příklad 75

Charakteristiky mikroorganismu označeného IMI-362.947

kroorg8nismu Sordaria araneosa (ATTC 36.386;NRRL 3196 ); izolovaného po mutagenezi aksospor tohoto kmene s N-methyl-NÚnitro-N-nitrosoguanidinem.

Charakteristiky mikroorganismu IMI-362.947 jsou v podstatě podobné jako.u mikroorganismu NHRL-3196, popsané ve specifikaci Britského patentu číslo 1,162.027 s tím rozdílem, že mikroorganismus IMI> 362.947 nevytváří‘na agaru snadno spory.-Tento kmen .

se také.liší. od mikroorganismu.NRKL-3196 tím, že produkuje jako hlavní produkt sordaricin za stejných podmínek, použitých při produkci sordarinu.mikroorganismem NRHL-3196.

Příklad 76

Charakteristiky mikroorganismu označeného NCIMB 40.675

Mikroorganismus označený NCIMB-40.675, je aerobický, gram-pozitivní, nepohyblivý mikrob, ve tvaru nepravidelných tyčinek,který vytváří žlutě zbarvené, průsvitné, kulaté a nedělené konvexní kolonie o průměru 0,50 mm až 1,0 mm v případě, že roste po dobu 48,0 hodin při teplotě 28°C na tryptickém sojovém agaru, doplněném s 2%ním'kvasnicovým extraktem(hmotnost/objem).

Zmíněný mikroorganismus roste dobře až do teplot 37°C ,nikoliv ale při teplotě 45°C.Ňebyla pozorována

274 žádná meta chromatická okrouhlá tělíska a zmíněný kmen. je vůči kataláze pozitivní, vůči oxidáze negativní a nemetabolizuje fermentačně glukosu.

Tento kmen může využívat následující zdroje uhlíku:

alfa-D-glukoseJ D-fruktosa; kyselina p-hydroxyfenyloctovál E-manitoi; methvluvruvátí laktamid! D-třebaf Z “ « M f f losa a sacharósa.

Zmíněný mikroorganismus může jen v malé míře využívat jako jediný zdroj uhlíku kyselinu D-glukonovoujkyselinu pyrohroznovou a salicin.

Morfologie kolonií a mikroskopická morfologie? je podobná jako u forem corynobakterií. Rod Corynobacterium byl vyloučen na základě poznatků, že pepti- ... doglykan mikroorganismu NCIMB-40.675 obsahuje ornithiny spíše než meso-isomer kyseliny SiůKdiaminopimelové/ nebo diaminomáselné.* Tento mikroorganismus obsahuje také směs mastných kyselin s rozvětveným řetězcem, atypických pro druhy Corynobacetriům, jmenovitě kyselinu 12-methyltetradekanovou; 14-methylhexadekanovou a 14methylpentadekanovou.

Přítomnost alfa-rozvětvených-beta-hydroxylovaných kyselin nebyla potvrzena.

Na základě těchto zjištění se mikroorganismus velmi blízce podobá jednomu z následujících rodů aktinobakterií 5 'Aurebbacterium; Curtobacterium nebo Cellulomonas.

Pro objasnění taxonomických poloh mikroorganismu NCIMB-40.675, byly srovnávány 1100 párované base částečné sekvence 163 rRNA genu s 24 dalšími druhy, reprezentovanými skupinou aktinobakterií a podobných rodů.

Výsledky těchto analys naznačují blízkou příbuznost

27S mezi mi kro organismem NCIMB-4O.675 a rody Auneobacterium a Curtobacterium, nikoliv ale s rody Cellulomonas .nebo Corynobacterium.

Mnohem přesnější identifikace kmene by mohla být získána provedením srovnávacích 'fylogenetických analys různých oblastí 16S rRHŽŘ genu u druhů Aureobacterium a Curtobacetrium, kromě dalších chemotaxonomických a fyziologických testů.

Claims (15)

Příkladý_farmaceutických_gro3tředků

1 Q 1 O . UU— znamena skupiny CH^R*’, v niz R~ znamena atom,.· vociki nyα r o xy s kup inu nebo skupinu OCOR 4 atomech uhlíku a alkoxvskucinu o 1 až 1= acomech uhlíku

20 -,20 . ,, , , , v niz R znamena aixyl o 1 az

W znamená atom kyslíku nebo síry nebo skupinu CH^ ^a přerušovaná čára ve skupině a) znamená případnou přítomnost další vazby.

- - ¹ ~ 18 o 3 as S atomech uhlíku, skupinu OCOR“ <kde R znamená arylaikoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku v alkylové části nebo alkyl o 1 až 10 atomech'uhlíku, popřípadě obsahující jednu nebo dvě dvojné vazby) nebo alko xykarbonylalkoxyskup inu o i až 6 atomech uhlíku v a 1 až 4 atomech uhlíku ve druhé alkoxylové čászi a znamená atom vodíku nebo tvoří R~ ⁼ a R“ spolu s atomer uhlíku, na nějž jsou vázány, skupinu 0=0 nebo C=CH,, .17 vm

1. Cyklické deriváty obecného vzorce I kde Z je tetrahydropyranoskupina a) nebo o) “ « ν,Η·

R R’ y .

X^(CR⁼R> I ' r:

w j ako ž i hydrázy farmaceuticky přijaté těchto sloučenin nebo deriváty, v nichž né soli a solváty, například jejich metabolicky labilní

R' znamená atom vodíku nebo halogenu, hydroxyskup inu.

alkcxyskup inu o 1 až 4 atomech uhlíku nebo acyloxy skuoinu, . - .....

282

1. Konvenční tablety určené pro orální aplikaci

Účinná substance léčiva 100,0 mg

Mikrokrystalická,celulosa 160,0 mg

Sodná sůl křížově sítované karboxycelulosy 20,0 mg

Magnesium stearát __ 5,0. mg

Účinná složka léčiva byla promíchána s mikrokrystalickou celulosou, sodnou solí křížově sítované karboxycelulosy a magnesium stearátem-, a poté byla slisována do tablet

2 3 znamená skupinu a) a Y znamena atom kyslíku, n = 0, R a R znamenají atomy vodíku a X znamená skupinu CH se uvede do reakce sloučenina obecného vzorce VII

287

O kde

71 *· - »

R“ znamená skupinu CHO nebo její chráněný derivát a.

R^p je ochranná skupina na karboxylové skupině, s dialkyidiazomethylfosfonátem, nebo se

c) při přípravě sloučenin obecného vzorce I, v němž Σ znamená skupinu b) a W znamená atom kyslíku, cyklizuje sloučenina. obecného vzorce VIII kde

R^15a, R^Loa a R^17a mají význam, uvedený pro R¹⁵, R^° a R¹⁷ ve vzorci'I nebo jde o chráněné deriváty těchto skupin,

R^p znamená atom vodíku nebo ochrannou skupinu na karboxylové skupině, ' - 2SŠ znamená odštěpítelnou skupinu, například alkyl- nebo arylsulfonyloxyskupínu a

22 - - 22 R je atom vodíku nebo znamená OR tutéž skupinu jako symbol L, s následným odstraněním jakékoliv případné ochranné skupiny, nebo se

d) při přípravě dloučenin obecného vzorce I, v němž W znamená atom síry působí na sloučeninu obecného vzorce ÍX kde R¹”', R^ _a h¹⁷ mají význam, uvedený ve vzorci I, donorem síry, načež se popřípadě uskuteční jeden nebo vetší počet následujících stupňů:

i) odstraní se· jakákoliv ochranná skupina, ii) sloučenina obecného vzorce I nebo její chráněný derivát .se převede na jinou sloučeninu vzorce I, iii) cyklický derivát obecného vzorce I se izoluje ve formě své farmaceuticky přijatelné soli.

2 3 v nichž X a Y znamenají atomy kyslíku a R a R nezávisle znamenají atom vodíku nebo alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku.

2. Cyklické deriváty podle nároku 1, v nichž Z znamená skuoinu i

284 kde jeden ze symbolů X nebo Y znamená atom kyslíku a druhý 9 10 znamena skupinu CR R *

2 3

R a R nezávisle znamenají atom vodíku, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v každé části nebo tvoří společně s atomem uhlíku, na nějž jsou vázány, skupinu C-0, C=S nebo cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku,' ' 7 7 znamená atom vodíku nebo skupinu CH^R , v níž R je atom vodíku, hydroxyskupina nebo alkoxyskupina o 1 až 8 8

2. Žvýkací. forma: tablet;určená pro orální aplikaci

Účinná substance léčiva 100,0 mg Xylitol 865,0 mg Chutové aroma máty peprné 5,0 mg Aspartam 10,0 mg Póly vinyIpyrollidon 15,0 mg Magnesium stearát 5,0 mg Účinná substance léčiva, xylitol, aspartam a

polyvinylpyrrolidon byly dohromady smíchány^poté byly zpracovány na granulát, který byl vysušen.

Takto připravené granule byly smíchány s chuto vým aroma máty peprné a s magnesium stearátem, a poté byly slisovány do tablet.

- 277 -

Vodný roztok určený pro orální aplikaci. Účinná substance léčiva 100,0 Hydroxypropylmethylceluloaa 150,0 mg Propylhydroxybenzoát sodný 1,0 mg Chutové pomerančové aroma 101,0 mg Methylhydroxybenzoát sodný 2,0 mg Sodná sůl sacharinu 5,0 mg Sacharoaa 800,0 mg Vhodný tlumivý roztok(pufr) - pokud stačí Přečištěná voda do objemu 5,0 ml

Účinná substance-léčiva a všechny pomocné .složky se rozpustové větší části přečištěné vody a poté se promíchá jí.Následně'se upraví-objem na požadovanou velikost a směs se znovu promíchá.

Vhodným pufrem může být dodatečně upraveno^pH na rozmezí maximální stability.

3. Cyklické deriváty podle nároku 1 nebo 2, v nichž n = 0.

4 i B

4. Cyklické deriváty podle některého z nároků 1 až 3,

4 atomech uhlíku nebo skupina OCOR , v níž R je alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku nebo aryl,

UM q

4. Nevodná suspenze určená pro orální aplikaci

Účinná substance léčiva 100,0 mg Aspartam ' 50,0 mg Chutové grapefruitové aroma 25,0 mg Manitol 800,0 mg Koloidní forma oxidu křemičitého 10,0 mg Frakčně destilovaný kokosový olej 5,0 ml

Disperze účinné substance léčiva a manitolu byla připravena ve větší Části frakcionovaného kokosového oleje pomocí vysoko obrátkového, nůžkovými noži opatřeného mixéru. Poté byly přidány zbývající pomocné složky a aměs byla znovu rozmíchána.

273

Poté byl objem upraven kokosovým olejem na požadované parametry a směs byla znovu promíchána.

5. Cyklické deriváty podle některého z nároků 1 až 3, v nichž jeden ze symbolů X nebo Y znamená atcm kyslíku a druo : 0 hy znamena skupinu CR R* .

„ 9

δ. Cyklické deriváty podle nároku 5. v-nichž R znamená atom vodíku nebo alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku a R¹⁰

5 6

R a R nezávisle znamenají atom vodíku, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v každé části nebo tvoří spolu s atomem uhlíku, na nějž jsou vázány, skupinu C=0, C=S nebo cykloalkyl o 3 až 3 atomech uhlíku, n znamená, celé'Číslo 0 nebo 1,

X a Y nezávisle, znamenají atom kyslíku nebo síry nebo skupinu q iq α ίο

GF/R ' (kde R' a R nezávisle znamenají vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkoxyskupinu o 1 až azomecn uhlíku nebo alkoxyalkyl o 1 až 4 atomech uhlíku v každé části nebo tvoří spolu s atomem., uhlíku, na nějž jsou vázány, skupinu C=0, C=S, cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku nebo skupinu C=CHR^\ v níž R^ je atom vodíku nebo alkyl o 1 až 4 atomech, uhlíku), nebo v případě, že X nebo Y znamená atom kyslíku a n = 0, mohou ’3 2 3 skupiny -Y-CRR nebo -X-CR R znamenat také skupiny -N=Cr3- nebo -NR^-CR^R^- (kde CR² a R^ znamenají skupinu C=0 a r1² znamená alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku

5. Mast určená pro povrchovou aplikaci

Účinná substance léčiva 200,0 mg

Měkký bílý parafin 9800,0 mg

Měkký bílý parafin se roztaví, přidá se účinná substance léčiva a tato-směs‘se rozmíchá. Poté se směs ’ míchá tak dlouho, pokud nezačne tuhnout.

6» Injekce určené pro parenteráiní aplikaci

Účinná.substance léčiva 40,0 mg

Vhodný tlumivý. roztok(pufr) pokud stačí

Vhodný 'antioxidant (q.d.) pokud: stačí

Vhodné chelatační agens pokuá stačí

Voda pro injekce do objemu 2,0 ml ,,

Po rozpuštění účinné substance léčiva ve větší části vody pro injekce lze přidat vodný ústojný roztok ( pufr) tak, aby rozmezí pH zaručovalo optimum stability. Pro zlepšení stability injekcí lze přidat vhodné antioxidans a chelatační agens. Poté se injekční roztok doplní na požadovaný objem vodou pro injekceVnáplní se do ampulí nebo lahviček, a poté se v autoklavu vysterilizuje.

Alternativně lze provést sterilizaci filtrací a poté injekční roztok asepticky rozplnit.

279 Antifungální aktivita

Sloučeniny dle vzorce (I) byly testovány na antifungální aktivitu standardními metodami in vitro a byla stanovena pro každou sloučeninu minimální inhibiční koncentrace (MICJ. /Ug/ml) pro různé, klinicky příbuzné pathogeny .Výsledky získané u reprezentativních sloučenin, zahrnutých do vynálezu, jsou uvedeny dále.

Sloučeniny uvedené v předloženém vynálezu, jsou v therapeuticky použitelných dávkách v podstatě ne-, toxické. Na přiklad sloučenina z Příkladu 8, byla v .. účinná v dávce 50 mg/kg (orální aplikace) při ochraně myŠSích samců/infikovaných s pathogenní plísní Candida aibicans 4711B.

Hodnoty Ι^θ-, Ó^{30U u} sloučeniny z Příkladu 8,,, při orální aplikaci u myšších samců /> 1000 mg/kg. J sloučenina z příkladu 'V>

7. Cyklické deriváty podle nároku 5 nebo 6, v nichž X znamená atom, kyslíku.

8. · Cyklické deriváty podle některého z nároků 1 až 7 , v nichž R¹ znamená atom vodíku nebo hydroxylovou skupinu a 4

R znamena methylovou skupinu.

9. Cyklické deriváty podle nároku 1, v nichž Z. znamená skupinu kde W znamená atom kyslíku.

285 ____

9 10 znamena atom vodíku .nebo, skupina CR R znamena CO, nebo ...

C = CHR .

v

10. Cyklický derivát podle nároku 1, _ kyselina /IR-(Íalfa.3abeta,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,Babeta)/ /IS , 7R,9R/-2,8-dioxa-9-me thyl-4-me thyl sr.-c i s-bicyklo/3.4.0/-non-7-yioxyme thy 1/-4-formy l-d ,4a, 5,5,7,7=,8,8a-ok~ahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-1,4-methano-s-indacsn-3a( 1H) -karboxyiová^ a její farmaceuticky přijatelné soli.

11. Cyklické deriváty podle nároku 1, ze skupiny kyselina /1R-(Íalfa, 3 abe ta, ^be ta, Babeta. beta, 7aalfa,8abeta) / 8a-/(2,S-dideoxy-3,4-o-isopropyliden-betarO-allocyranosyloxy) methyl/-^-formyl—i ,4a,5,6,7,7a,8, 8a-oktahydro-7-methyl-3-( 1-methylethyl)-1,4-meíhano-s-indacsn-3a(ÍH)-karbcxylová, kyselina /1=1-( Íalfa, ^aoeta, 4beta, dabeoa, 7beoa, 7aaifa, Babeta)/ 3a-//IS,4R,7R,9R/-2,3-dioxa-4,9-dimethyl-cis-bieyklo/3.4.0/-non-7-yloxyme thy1/-4-formy1-4,4a,5,o,7,7a,3,8a-oktahydro-7-methyl-3-(l-mechyieíhyl)-1,4-methano-s-indacen-3a(ÍH)- . karboxyiová, kyselina / lR-( Íalfa,Babeta, 4beta,4a’oeta,7beca,7aalfa,Sabeta) / 8a-//lS,4S,SR,8R/-2,7-dioxa-4,6-dime thy l-cis-b ieyklo/3.4.0/non-3-yloxymethyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,3,8a-oktahydro-7-methyl-3-(1-methyleohy1)-1,4-methano-s-indacen-3a( ÍH)-karboxylová, kyselina /lR-(Íalfa,3aalfa,4beta,4abeta,7beta,7aalfa,7abeta)/ 3a-/ (2,3-anhydro-S-deoxy-4-0-propyl-beta-D-mannopyranosyloxy) methyl/-4-formy1-4,4a,5,6,7,7a,8,Sa-oktahydro-7-methyl-3-(1-methylethyl)-!,4-methano-s-indacen-3a( 1H)-karboxyiová, kyselina /lR-( Íalfa,3abea, 4beta,4abeta-,7beoa, 7aaifa,3abeta)/

3a-/ (2,3-anhydro-3-deoxy-4-0-methy 1-be ta-D-manr.opyranosyΙο xyme thy 1/-4-f ormy 1-4 ,4a,5,5,7,7a,8, Sa-ckt ahyc.ro-7-methy i -3-( l-methylethyl)-1,4-_;-nethano-s-indacen-3a( ÍH) -karboxyiová,

286 jakož i farmaceuticky přijatelné soli těchto kyselin.

12. Způsob výroby cyklických derivátů obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se tím, že se

a) uvede do reakce sloučenina obecného vzorce II kde

R^ a R⁴ mají význam, uvedený ve vzorci I, rP znamená ochrannou skupinu na karboxylové skupině a

X a Y mají význam, uvedený ve vzorci I s tou výjimkou, že q iq

X a/nebo Y neznamenají skupinu CR^WR za vzniku požadovaného cyklického systému s následným odstra něním ochranné skupiny na karboxylové skupině, nebo )

b) při přípravě sloučenin obecného vzorce I, v němž Z

13. Cyklické deriváty podle některého z nároků 1 až 11 pro použití k léčebným účelům.

- 289

13 13 nebo acyl vzorce COR , kde R znamena alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku) nebo v případě, že Y znamená atom kyslíku a n - 0, může X znamenat skupinu CR^ (kde R^ má svrchu uvedený význam) , vázanou na pyranový kruh dvojnou vazbou,

283 “R“ zn«mená-a-tom--vod-í-ku-Rebo-halogenu.,..-az.i.dcs.k?4p.inu,.. alkyl· o L až S atomech uhlíku, hydroxyskupinu. alkoxyskupinu o 1 až δ atomech uhlíku (popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma hydroxyskupinami nebo její acetai nebo substituovanou jednou nebo dvěma alkoxyskupinami o 1 až 3 atomech uhlíku), arylaikoxyskupinu o 1 až atomech uhlíku v alkoxyLové části, alkenyioxyskupinu

14. Použití cyklických derivátů podle některého z náý^ol5._L_ l.k..P_£°. .YÝrpby—farmaceutického., prostředku pro lécení__ houbových infekcí.

15. Farmaceutický prostředek pro léčení houbových infekcí, vyznačující se tím, že jako svou účinnou složku obsahuje cyklický derivát podle některého z nároků 1 až 11 spolu s nejméně jedním fyziologicky přijatelným nosičem nebo pomocnou látkou.

—Způsob, léčení houbových infokoí, vyznač u-^?^ jící se t í m , že se nemocným podává účínnéjDHtfzství cyklických derivátů podle některého z nárojsů-d**až 11.