CZ22202U1 - Primery na detekci virů OYDV, LYSV, GCLV a SLV v pletivech česneku - Google Patents
Primery na detekci virů OYDV, LYSV, GCLV a SLV v pletivech česneku Download PDFInfo
- Publication number
- CZ22202U1 CZ22202U1 CZ201023447U CZ201023447U CZ22202U1 CZ 22202 U1 CZ22202 U1 CZ 22202U1 CZ 201023447 U CZ201023447 U CZ 201023447U CZ 201023447 U CZ201023447 U CZ 201023447U CZ 22202 U1 CZ22202 U1 CZ 22202U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- seq
- gclv
- pathogen
- oydv
- lysv
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Primery na detekci virů OYDV, LYSV, GCLV a SLV v pletivech česneku
Oblast techniky
Řešení se týká nových primerů pro detekci a případnou kvantifikaci virových patogenů česneku a dalších zemědělských plodin rodu Alliaceae, což má význam v rostl i no lékařství, molekulární biologii a v uchovávání genových zdrojů.
Dosavadní stav techniky
Kulturní rostliny rodu Allium patří mezi nej významnější zeleniny, V České republice se pěstují zejména cibule (Allium cepa var. cepa}, česnek kuchyňský (Allium sativum) a pór (Allium porrum). Výnos a kvalita jejich produkce je každoročně značně snižována komplexem virových chorob, z nichž nejvíce rozšířené jsou: Onion yellow dwarf virus (OYDV), Leek yellow stripe virus (LYSV), Garlic common iatent virus (GCLV), a Stripe latent virus (SLV). V České republice jsou všechny uvedené druhy virů značně rozšířeny jak v komerčně pěstovaných česnecích, tak i v importovaných druzích (Klukáčková et al., 2007, Journal of Plant Diseases and Protection 114: 97-100, „Natural infection of garlic (Allium sativum L.) by viruses in the Czech Republic“; Karlova et al„ 2009, Agriculture 55: 58-60, „Virus diseases in collection of genetic resources of garlic in the Czech Republic“). Všechny jmenované druhy virů jsou přenášeny neperzistentně mšicemi. Vyznačují se úzkým okruhem hostitelů většinou omezených na rod Allium. Nejsou známy diferenciační hostitelé, což značně komplikuje jejich identifikaci zvláště, když se vyskytují ve směsných infekcích. Navíc se některé druhy projevují příznaky, často až když je přítomno více druhů virů v jedné rostlině.
Přesná a včasná diagnostika virových infekci má velký význam v systému ochrany polních plodin. Klasické metody diagnostiky jsou zatížené velkou chybou, neboť se vnější příznaky (symptomy) choroby překrývají, mohou být velmi variabilní nebo se nemusí vyskytovat vůbec. Proto je identifikace virů na základě vizuálního hodnocení rostlin značně nespolehlivá. V současné době je přítomnost vírů nejčastěji stanovována ELIS A testem, avšak pro tento test je nutné značné množství rostlinného materiálu. Test rovněž vykazuje nižší citlivost. Tam, kde je nutno virus detekovat v minimálním množství rostlinné tkáně a kde se virus vyskytuje v nízké koncentraci částic, poskytuje ELISA falešně negativní výsledky.
V současné době se přistupuje k produkci bezvirózních česneků buď jejich pěstováním ze semen nebo ozdravováním rostlin pomocí in vitro kultur. Zde vyvstala potřeba přesné a citlivé metody detekce virů v rostlinných pletivech. Jako nejvhodnější se ukázala metoda RT PCR, kterou už pro detekci virů česneku použili Dovas et al., 2001, J. Phytopathology 149: 731-737, „Comparison of methods for virus detection in Allium spp.“; Lunello P„ et al., 2004, Journal of Virological Methods 118: 15-21, „Ultra-sensitive detection of two garlic potyviruses using a real-time fluorescent (Taqman) RT-PCR assai“. V různých částech světa se vyskytují různé patotypy uvedených druhů virů, které se vyznačují vysokou mírou genetické variability. Je proto velmi obtížné detekovat všechny patotypy daného druhu viru pomocí jedné sady primerů, což je nevyhovující.
Podstata technického řešení
Výše uvedené nedostatky odstraňují primery pro detekci virů OYDV, LYSV, GCLV a SLV v pletivech česneku metodou RT PCR a ELISA testu, podle technického řešení, jehož podstata spočívá v tom, že při detekcí patogena Onion yellow dwarf virus (OYDV) má primer složení
OYDV81F (SEQ ID NO: 1) TTTAGCACGTTACGCATTCGA
OYDV81R (SEQ ID NO: 2) TTACCATCCAGGCCAAACAA, které umožní amplifikaci fragmentu patogena o velikosti 132 bp,
CZ 22202 Ul pro detekci patogena Leekyellow stripe virus (LYSV) má příměr složení
LYSV81-410F (SEQ ID NO: 3) AAGAACACCAGTTAGAGCGCG
LYSV81-535R (SEQ ID NO: 4) TGCCTCTCCGTGTCCTCATC, které umožní amplifikaci fragmentu patogena o velikosti 126 bp, pro detekci patogena Garltc common latent virus (GCLV) má primer složení
GCLV2F (SEQ ID NO: 5) CGACCACCTGCTGGTTGG
GCLV1R (SEQ ID NO: 6) TCAAGTGGCTGCACACAAGC, které umožní amplifikaci fragmentu patogena o velikosti 106 bp a pro detekci fragmentu patogena Stripe latent virus (SLV) má primer složení
SLV81-569F (SEQ ID NO: 7) AACAAAGCAGCGATTCAACC
SLV81-730R (SEQ ID NO: 8) ACATCCGAAGAAACCTCCAGT, které umožní amplifikaci fragmentu patogena o velikosti 160 bp.
Podstatou technického řešení jsou příměrové páry, specificky detekujícími OYDV, LYSV, GCLV a SLV, které byly navrženy na základě sekvencí genu pro plášťový protein daného viru. Metoda RT PCR s těmito příměrovými páry podle technického řešení umožní amplifikaci fragmentu patogena o velikosti 132 bp pro OYDV, 126 bp pro LYSV, 106 bp pro GCLV a 160 bp pro SLV.
Definice některých použitých pojmů je nutné vysvětlit:
Pojem DNA
Molekula DNA slouží u všech ostatních organismů s výjimkou RNA virů k uchovávání a kopírování genetické informace. DNA je tvořena dvěma řetězci. V každém řetězci se střídá pětiuhlíkový cukr deoxyribóza se*zbytkem kyseliny fosforečné (fosfátem). Na deoxyribózu je kovalentní vazbou připojen jeden ze 4 typů heterocyklických sloučenin, tzv. bází. Dvě z nich jsou odvozeny ze struktury purinu - adenin (A) a guanin (G); a dvě od pyrimidinu - thymin (T) a cytosin (C). Trojice deoxyribóza-zbytek kyseliny fosforečné-báze, tzv. nukleotid, tvoří základní jednotku (monomer) DNA. Protože na místě báze se mohou vyskytovat Čtyři různé molekuly (A, T, C nebo G), existují i čtyři různé základní stavební jednotky (nukleotidy) - deoxyadenosinfosfát, deoxytymidinfosfát, deoxyguanosinfosfát a deoxycytidinfosfát. Genetická informace je v DNA zapsána v pořadí bází. Ve dvouřetězcové molekule DNA jsou k sobě oba řetězce vázány vodíkovými můstky mezi tzv. komplementárními bázemi A-T a C-G.
Pojem RNA
Molekula RNA je v případě tzv. RNA virů uzpůsobena pro uchovávání a kopírování jejich genetické informace. Molekula RNA je tvořena jedním řetězcem. V každém řetězci se střídá pětiuhlíkový cukr ribóza se zbytkem kyseliny fosforečné (fosfátem). Na ribózu jsou kovalentní vazbou připojeny báze podobně jako u DNA. RNA je velmi málo stabilní molekula a proto je v laboratorní praxi po extrakci přepisována na DNA pomocí tzv. reverzní transkripce.
Pojem cílová sekvence
Znamená úsek DNA, který má být amplifikován, detekován či jinak analyzován.
Pojem primery
Primery jsou krátké oligonukleotidy (cca 20 nukleotidů), kteréjsou komplementární s templátovou DNA na počátku a na konci amplifikovaného fragmentu, každý s jiným vláknem původní dvouřetězcové molekuly DNA. Tvoří počátek pro zahájení syntézy polynukleotidového řetězce. Unikátní kombinace nukleotidů primeru má za následek amplifikaci pouze požadované sekvence DNA.
, i CZ 22202 Ul
Pojem reverzní transkripce
Reverzní transkripce je přepis RNA na DNA, který je prováděn enzymem reverzní transkriptázou jako syntéza nového řetězce DNA na základě sekvence templátové RNA.
Pojem amplifíkace a PCR
Amplifikace DNA je zvyšování počtu kopií molekul DNA v laboratorních podmínkách. PCR (polymerase chain reaction) polymerázová řetězová reakce je proces, při kterém dochází k amplifikace DNA. Tento proces probíhá ve třech krocích: 1. teplotní denaturace DNA - dojde k uvolnění vodíkových můstků a dvoušroubovice DNA se rozpadne na dvě samostatná vlákna ssDNA;
2. annealing neboli nasednutí primerů na tem plátovou DNA a 3. elongace neboli prodlužování nově vznikajícího řetězce pomocí enzymu DNA-dependentní DNA polymerázy. Tento třístupňový proces se opakuje 30 až 40χ a je prováděn ve speciálním zařízení termocykleru s rychlým ohřevem a chlazením. Běžné techniky molekulární biologie jsou vysvětleny v literatuře, např. Sambrook et al., 2001: Molecular Cloning - a laboratory manual I., Π., III.
Přehled obrázků na výkrese
Na přiloženém výkrese jsou na Obr. 1 znázorněny grafy disociační křivky amplifikovaného produktu a to a) OYDV, b) LYSV, c) GCLV, d) SLV.
Původcem technického řešení byla úspěšně prokázána specifická reakce primerů podle technického řešení s RNA virových patogenů a v následujících tabulkách jsou shrnuty výsledky jeho měření, které bylo provedeno ve Výzkumném ústavu rostlinné výroby, v.v.i, v Praze, CZ. Následný příklad provedení technické řešení pouze dokládá, aniž by ho jakkoliv omezoval.
Příklad provedení
Příklad 1
Ověření funkčnosti a spolehlivosti primerů pro detekci OYDV, LYSV, GCLV a SLV na biologickém materiálu:
Vzorky listových pletiv 50 genotypů česneku byly odebrány na pracovišti v Olomouci (Tabulka 1). 0,1 g rostlinného materiálu bylo rozdrceno v třecí misce v prostředí tekutého dusíku. RNA byla extrahována pomocí komerční soupravy High Pure Víral Nucleic Acid Kit (Roche, Mannheim, Germany).
RT PCR byly provedeny jednostupňově v jedné zkumavce pro každý vzorek. Reakce byly prováděny v reakční směsi za uvedených reakčních podmínek (Tabulka 2 a 3) v přístroji ABI PRISM 7900 fy Applied Biosystems. Ke sběru a analýze dat sloužil program ABI PRISM 7900 Sequence Detection System. Výsledky byly srovnány s výsledky ELISA testu provedeném na témž rostlinném materiálu (Tabulka 1).
Závěr měření:
Měření prokázalo dobrou funkčnost nových primerů OYDV81F (SEQ ID NO: 1), OYDV81R (SEQ ID NO: 2), LYSV81-410F (SEQ ID NO: 3), LYSV81-535R (SEQ ID NO: 4), GCLV2F (SEQ ID NO: 5), GCLV1R (SEQ ID NO: 6), SLV81-569F (SEQ ID NO: 7) a SLV81-730R (SEQ ID NO: 8), které byly schopny prokázat přítomnost DNA patogenů OYDV, LYSV, GCLV a SLV v infikovaném biologickém materiálu s detekovatelnou mírou patogena v pletivu (Obrázek 1). Výsledky prokázaly vyšší citlivost RT PCR ve srovnání s ELISA testem (Tabulka 1).
Vzorky obsahující RNA virů OYDV, LYSV, GCLV či SLV s primery OYDV81F (SEQ ID NO: 1), OYDV81R (SEQ ID NO: 2), LYSV81-410F (SEQ ID NO: 3), LYSV81-535R (SEQ ID NO: 4), GCLV2F (SEQ ID NO: 5), GCLV1R (SEQ ID NO: 6), SLV81-569F (SEQ ID NO: 7) a SLV81-730R (SEQ ID NO: 8) se za uvedených reakčních podmínek vyznačovaly pozitivní ode-3CZ 22202 Ul zvou, tj. pikem při dané teplotě disociace, u negativní kontroly nebyl cílový fragment amplifiko ván - nebyl nalezen žádný pík nebo pík při nižší teplotě disociace.
Tabulka 1 - Analyzované vzorky a výsledky RT PCR a ELIS A testu
| ECN | Název kultivaru | OYDV | LYSV | GCLV | SLV | ||||
| PCR 2010 | ELISA 2010 | PCR 2010 | ELISA 2010 | PCR 2010 | ELISA 2010 | PCR 2010 | EUSA 2010 | ||
| 09H0100019 | Beloretchenskij | + | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| O9HO1OOO20 | Mako | 4 | 4 | - | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100028 | Sukoradsky | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100047 | landrace (Olomouc 1) | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| Q9H0100033 | Řevničan | + | 4 | - | - | - | - | 4 | - |
| 09H0100034 | Kuklenský | + | 4 | 4 | 4 | 4 | ♦ | 4 | 4 |
| 09H0100038 | Poděbradský | + | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100050 | landrace (Olomouc 2) | + | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100051 | Roždalovtcký | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100052 | D'Alsace Freres | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100054 | Severský Paličák | + | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100071 | Král | + | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100074 | Znojemský | 4 | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100080 | Moravan | 4 | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100081 | Ropal | + | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100070 | Bzenecký | + | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100073 | Záhorský | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | - | - |
| Q9H0100069 | Alan | + | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100079 | Prim | + | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09HO100078 | Japo | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | |
| 09H0100030 | Záhorský | + | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100241 | Revničan X-ray | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100253 | novošlechtění | 4 | 4 | - | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100254 | KS-29/8 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100257 | landrace (Dolní Němci 1) | + | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100305 | Bianco Veneto | + | 4 | 4 | 4 | - | 4 | 4 | |
| 09H0100454 landrace (CSK BK 87/19) | + | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | - | |
| 09H0100251 | landrace (Rousinov 1) | 4 | 4 | - | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| O9HO1OO250 | landrace (Olomouc 4) | + | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100802 | landrace (Pavlovce 287) | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100783 | landrace (Kosihy nad Ipetom 13 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | - | - |
| O9HO1OO780 | landrace (Kalonda 1) | + | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100799 | landrace (Rozhanovce) | 4 | 4 | 4 | - | 4 | 4 | - | - |
| 09H0100806 | landrace (Baska 13) | 4 | 4 | 4 | - | - | - | 4 | 4 |
| 09H0100918 | landrace (Djambul 2/64) | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0101180 | Alan Imp, | 4 | 4 | 4 | 4 | + | + | 4 | 4 |
| 09H0101052 | landrace (Dubovy vrch) | 4 | 4 | - | • | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0100986 | landrace | + | 4 | 4 | 4 | 4 | + | 4 | 4 |
| 09H0100989 | landrace | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0101092 | Landrace(Javomíka) | + | 4 | 4 | 4 | - | - | 4 | 4 |
| 09H0101093 | landrace (Prostějovsko) | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0101170 | Slanin | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0101171 | Lukan | 4 | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0101172 | N9A | 4 | 4 | 4 | - | + | 4 | - | - |
| 09H0101175 | landrace (Fiala) | 4 | 4 | 4 | 4 | - | - | 4 | 4 |
| 09H0101167 | (landrace) Karel | 4 | 4 | - | • | + | 4 | 4 | 4 |
| 09H0101190 | Tantal | 4 | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0101191 | Tristan | 4 | 4 | 4 | - | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 09H0101196 | Anton | 4 | 4 | 4 | - | 4 | 4 | - | - |
| 09H0101197 | Antn | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
-4CZ 22202 Ul
Tabulka 2 - Složení reakční směsi
| Chemikálie | Koncentrace | Objem |
| Primer mix | 5 uM | 1,5 ul |
| SYBRgreen Master Mix | 2x | 12,5 ul |
| Multiscribe Reverse Transcriptase | 50 U/ul | 0,125 ul |
| Rnase Inhibitor | 20 U/ul | 0,5 ul |
| H2O (bez RNáz) | 8,375 ul | |
| Templátova RNA | 150 ng/ul | 2,0 ul |
| Reakční objem | 25 ul |
Tabulka 3 - Reakční podmínky
| PCR reakce | 48 °C 95 °C 40 cyklů: 95 °C 60 °C | 30 minut 10 minut 15 sekund 1 minuta |
| Disociace | 95 °C | 15 sekund |
| 60 °C | 15 sekund | |
| 95 °C | t5 sekund |
Průmyslová využitelnost
Nové příměry pro detekci OYDV, LYSV, GCLV a SLV mají využití v rostl inolékařství při diagnostice virů zejména v procesu ozdravování genotypů česneku a dalších zemědělských plodin rodu AUiaceae pro potřeby šlechtění a uchovávání genových zdrojů.
Claims (1)
- NÁROKY NA OCHRANU io 1. Příměry pro detekci virů OYDV, LYSV, GCLV a SLV v pletivech česneku metodou RT PCR a ELISA testu, kdy při detekci patogena Onion yellow dwarf virus (OYDV) má primer složení OYDV81F (SEQ ID NO: 1) TTTAGCACGTTACGCATTCGAOYDV81R (SEQ ID NO: 2) TTACCATCCAGGCCAAACAA,15 které umožní amplifikaci fragmentu patogena o velikosti 132 bp, pro detekci patogena Leek yellow stripe virus (LYSV) má primer složení LYSV8 Ml OF (SEQ ID NO: 3) AAGAACACCAGTTAGAGCGCGLYSV81-535R (SEQ ID NO: 4) TGCCTCTCCGTGTCCTCATC, které umožní amplifikaci fragmentu patogena o velikosti 126 bp,20 pro detekci patogena Gariic common latent virus (GCLV) má primer složení GCLV2F (SEQ ID NO: 5) CGACCACCTGCTGGTTGGGCLV IR (SEQ ID NO: 6) TCAAGTGGCTGCACACAAGC, které umožní amplifikaci fragmentu patogena o velikosti 106 bp a pro detekci fragmentu patogena Stripe latent virus (SLV) má primer složení-5CZ 22202 UlSLV81-569F (SEQ ID NO: 7) AACAAAGCAGCGATTCAACCSLV81-730R (SEQ ID NO: 8) ACATCCGAAGAAACCTCCAGT, které umožní amplifikaci fragmentu patogena o velikosti 160 bp.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ201023447U CZ22202U1 (cs) | 2010-11-10 | 2010-11-10 | Primery na detekci virů OYDV, LYSV, GCLV a SLV v pletivech česneku |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ201023447U CZ22202U1 (cs) | 2010-11-10 | 2010-11-10 | Primery na detekci virů OYDV, LYSV, GCLV a SLV v pletivech česneku |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ22202U1 true CZ22202U1 (cs) | 2011-05-16 |
Family
ID=44041785
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ201023447U CZ22202U1 (cs) | 2010-11-10 | 2010-11-10 | Primery na detekci virů OYDV, LYSV, GCLV a SLV v pletivech česneku |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ22202U1 (cs) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2469948R1 (es) * | 2012-12-19 | 2014-11-17 | Universidad Politécnica de Madrid | PROCEDIMIENTO PARA DETECTAR EN PLANTAS LA INFECCIÓN POR LOS VIRUS DE ARN DE CADENA SENCILLA QUE INFECTAN AL AJO OYDV, LYSV, GCLV, SLV, IYSV y ALLEXIVIRUS. |
-
2010
- 2010-11-10 CZ CZ201023447U patent/CZ22202U1/cs not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2469948R1 (es) * | 2012-12-19 | 2014-11-17 | Universidad Politécnica de Madrid | PROCEDIMIENTO PARA DETECTAR EN PLANTAS LA INFECCIÓN POR LOS VIRUS DE ARN DE CADENA SENCILLA QUE INFECTAN AL AJO OYDV, LYSV, GCLV, SLV, IYSV y ALLEXIVIRUS. |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2725003T3 (es) | Sistema y método de análisis de alta resolución de ácidos nucleicos para detectar variaciones de secuencia | |
| Kesanakurti et al. | Screening for plant viruses by next generation sequencing using a modified double strand RNA extraction protocol with an internal amplification control | |
| Moreno et al. | Reference genes for reliable potyvirus quantitation in cassava and analysis of Cassava brown streak virus load in host varieties | |
| WO2002099129A2 (en) | Designing degenerate pcr primers | |
| JP2013055956A5 (cs) | ||
| Bester et al. | Relative quantitation goes viral: An RT-qPCR assay for a grapevine virus | |
| JP2018516569A (ja) | 次世代ゲノムウォーキングのための方法ならびに関連する組成物およびキット | |
| US10100370B2 (en) | Compositions and methods for detecting huanglongbing | |
| WO2024183691A1 (zh) | 基于时珍法的中药鉴定方法及应用 | |
| Thanarajoo et al. | Detection of Coconut cadang-cadang viroid (CCCVd) in oil palm by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) | |
| JP2008513028A (ja) | マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の二色リアルタイム／エンドポイント定量化 | |
| Galipienso et al. | Cucumber vein yellowing virus isolate-specific expression of symptoms and viral RNA accumulation in susceptible and resistant cucumber cultivars | |
| EP3320113B1 (en) | Methods and kits for the detection of powdery mildew | |
| EP3387149B1 (en) | Isothermal amplification for the detection of influenza viruses in a sample. | |
| CZ22202U1 (cs) | Primery na detekci virů OYDV, LYSV, GCLV a SLV v pletivech česneku | |
| CZ2010818A3 (cs) | Primery na detekci viru OYDV, LYSV, GCLV a SLV v pletivech cesneku | |
| US20220220536A1 (en) | Compositions and methods of using a dna nanoswitch for the detection of rna | |
| KR102944251B1 (ko) | 차세대 염기서열 분석법을 이용한 감악 바이러스 서열 라이브러리 제조 방법 및 전장 게놈 서열 확인 방법 | |
| KR102796423B1 (ko) | 차세대 염기서열 분석법을 이용한 치쿤구니야 바이러스 서열 라이브러리 제조 방법 및 전장 게놈 서열 확인 방법 | |
| KR20260039855A (ko) | 차세대 염기서열 분석을 위한 뎅기바이러스 라이브러리 제조 방법 | |
| KR20260039854A (ko) | 차세대 염기서열 분석을 위한 호흡기세포융합바이러스 게놈 라이브러리 제조 방법 | |
| EP2446061A1 (en) | Method for quantitative pcr amplification of deoxyribonucleic acids from a sample containing pcr inhibitors | |
| US20210172012A1 (en) | Preparation of dna sequencing libraries for detection of dna pathogens in plasma | |
| WO2024058680A1 (en) | Set of primers, composition of the reaction mixture and method for detecting human respiratory syncytial virus types a and b (rsva and rsvb) | |
| Liberti et al. | Biological properties and partial molecular characterization of an apricot strain of CGRMV |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20110516 |
|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20141110 |