CZ22499A3

CZ22499A3 - Držák vedení s upínací oblastí k oboustrannému nastrkování na svorník se závitem

Info

Publication number: CZ22499A3
Application number: CZ1999224A
Authority: CZ
Inventors: Emmanuel Battie; Philippe Wandels
Original assignee: A. Raymond & Cie
Priority date: 1996-08-24
Filing date: 1997-08-02
Publication date: 2000-05-17
Also published as: DE59710278D1; CZ293831B6; CN1226308A; EP0918943B1; US6070836A; EP0918943A1; DE19634309A1; KR20000067885A; PT918943E; KR100500801B1; ES2201319T3; AR008074A1; WO1998007996A1; ATE242847T1; JP4102442B2; BR9711825A; CN1096579C; JP2000516694A

Description

Vynález se týká složení biokompatibi 1 ních hydrogelů pro lékařské použití a které mohou být použity:

v endoprotetické praxi cestou funkčních injekcí pro výhodné napravení těch defektů, u lidí, které jsou následkem traumatických, vrozených nebo stářím způsobených deformací tvaru a rozměrů nebo následkem ztráty tvarové stálosti některých orgánů, tvořených měkkými tkáněmi, např.:

- v plastické chirurgii na korigování tvaru a rozměrů obličeje a ostatních částí těla a specificky v plastické chirurgii prsu (výhodné v případě aplazie nebo hypomástie), — v otolaryngologické praxi pro ošetřování larynxu při nápravě tvaru a objemu hlasivek,

- v mužské sexuologii (v případě chabé erekce) pro zlepšová— ní potence pomoci injikování elastického média do houbovité vaskulární tkáně penisu;

v endoprotetické praxi kombinované s kožní chirurgií, při předtvarování endoprotetických pomocných produktů a při jejich implantaci na operované místo;

v dlouhodobé terapii (např. abscesů nebo nádorů) pro poskytnutí místa uvnitř těla pro ukládání dlouhodobě působících léků uvnitř nebo blízko léčeného orgánu;

pro tamponáž kavit, vzniklých po různých onemocněních (např. tuberkulózové kaverny) nebo zraněních;

jako fyziologicky neutrální elektrovodivé imerzní médium mezi pacientovou tkání a elektrodami v případě:

- dlouhodobého monitorování systémových elektroíyziologických proměnných (např. kardiakální a cerebrální aktivity), - perkutánních elektroforetických injekcí léčiv;

jako základ pro zejména medicinální masti, jejichž disperzním médiem je voda.

- 2 Dosavadní stav techniky

Požadavky na zlepšení tvaru tělesných orgánů a funkčnosti, tak jak bylo uvedeno shora a i v jiných podobných případech, se _n staly široce rozšířenými a jsou často zdůvodňovány jen pacientovým přáním. Rovněž rozšířené jsou požadavky na elektrofyzio— ’ έ logickou diagnostiku, léčbu léky, včetně míst pro ukládání léku a na konzervační fyziologicky efektivní tamponáž různých kaveren.

Z toho důvodu by měly biokompatibilni materiály pro shora uvedené aplikace vyhovovat určitým požadavkům, které jsou jenstěží slučitelné. Mezi nejdůležitější požadavky patří:

dlouhodobé (výhodně po celý Život) zachování tvaru a rozměrů orgánu, do kterého byla endeprotéza vložena, nehledě na stáří operovaného pacienta.

maximálně možná biokompatibilita, t.j absence karcinogeni— ty, alergických reakcí (včetně krátkodobých, následujících ihned po injikování vybraného materiálu do těla nebo po jeho aplikaci na kůži a, zejména, slizovou membránu), absence tvrdých pouzder nebo odmítání endoprotéz, tamponů nebo míst pro ukládání léků, aby bylo uvedeno jen několik příkladů, zajištění ničím nezatížených metabolických pochodů na místě, kde je biokompatibilni materiál umístěn;

minimální výskyt traumatu a nejkratší možné zavádění biokompatibi1 ního materiálu, zejména ve velkých aplikačních dávkách (až do 1000 ml).

Pro odborníka není problém vyhovět těmto požadavkům, jsou-li kladené jako samostatné nebo u některých kombinacích.

Tak fluoroplastová (teflonová) pasta na bázi glycerolu jako biokompatibilni materiál pro léčení larynxu dává značně stabilní klinický efekt (viz: Beck C.L. Unsers Erfahrungen mit • > I.

' ’ z · ¹ ..

/ * ' · · - 3.-. ; „ _x ’ ** - . ‘ . - * der intralaryngealen Tefloninjektion — Naše ’zkušenosti s intra—

- -> .laryngeáln 1 m - in j i kování m-te f Ϊ phu--~^Lary n^ol.-Iihinol.. Q 1981 > _ / ’ ^s' ·' ’¹ ·> * ¹ ' sv. 59, č: il, str. 715-718; Lewy R.B. Teflon injection of the fl , vocal cord: Complications,'errors and precautions.- Teflonová ; :, . Λ . .,, .:, .-. . '.····'-,./· . . * -.--. ____ . . ______ _ . . ., .

injekce'hlasivek: komplikace, chyby a příčiny - .Ann.Otol.-1983,^; _Sv. 52', č. 5 str. 1',- 473-474;' Be^ghans A. Verfahren zur ^x Unteríitterung von Stimmlippen -> Postup léčení hlasivek >

-H.N.0 - 1987, sv. 35, č. 6., str. 223-3) .‘Λ , ... ‘ l^T - 0 glycerolu je známo, že’má vyšší -viskózitu než voda -- - a z toho důvodu je pasta při skladování· dosti stabilní. Ale je-li iňjikováň, tak glycerol působí.'? jako mazivo..

Jelikož je dobře rozpustný, ve vodě a v kapalinách s • . I . · ¹ J '“· obsahem vody' tak je v krátké době (během několika^;hodin až jednoho dne) odstraněn z operovaného místa; A dále, není nemožné.·,, aby teflonové mikročástečky byly--odtamtud-, postupně odplaveny lymfatickým a krevním oběhem. Takovéto odstraňování má za následek zmenšení objemu protézy a podstatně malou terapeutickou účinnost. Proto, ačkoliv teflon je biochemicky neaktivní, tak by operace, kterými jsou vkládány endoprotézy z teflonu, musely být v klinicky stanovených intervalech ... opakovány.

Rovněž částečky teflonu, protože jsou tvrdé, mechanicky poškozují tkáň, která je v kontaktu s endoprotézou a vyvolávají, prakticky ve všech případech, mániíestační aseptickou. zánětlivou reakci a případně, laryngoetenózu s naléhavě nutnou tracheotomi í .

Z důvodu vyhovět shora uvedeným požadavkům, je praktické používat gelující biokompatibilní materiály.

Skutečně minimální výskyt traumatu a nejkratší možné zavádění biókompatibiíního materiálu, absence karcinogenity a minimální alergická reakce jsou dosaženy použitím ve vodě rozpustného hovězího kolagenu, který je vysoce vyčištěným a částečně

- 4 depolymerizovaným produktem, manícím se při teplotě pod 37°C na elastický a mechanicky stálý hydrogel, injikovaný do ošetřova- y něho orgánu, aby tak vytvořil žádaný tvar a objem (viz Ford Ch., Martin D.M., Warner Th.F Injactable collagen in laryngeal rehabilitation - Injikovatelný kolagen v laryngeální léčbě - LARYNGOSCOPE, 1984, 94, str. 513-518).

Jelikož kolagen je protein, tak se však v poměrně velmi krátké době (za méně než pěl roku) v pacientově těle zcela resorbuje.

Z toho důvodu je proto jeho použití vhodné v endoprotetické praxi zejména v případech, kdy je přijatelná kompletní substituce endoprotézy spojovací tkání nebo jestliže pacient, podle lékařská indikace, potřebuje jen dočasnou endoprotézu.

Rovněž je třeba poznamenat, že hovězí kolagenový roztok, následkem své resorbční schopnosti a intra- a intertkáříové migrace, není účinný pro ukládání léčebných preparátů a ježto _ je náchylný k enzymovému ataku a má nízkou elektrickou vodi vost, je prakticky nevhodný pro aplikace jako imerzní médium.

Po zvážení shora uvedeného vyplývá, že gelovací biokompatibilní materiály, založené na syntetických polymerech jsou výhodnější.

Tak biokompatibilní gelovací materiál ve íormě hydrofilních esterů polyglykolŮ a kyseliny methakrylové je známý pro aplikaci v endoprotetické praxi (Kresa L., Rems T., Wichterle O. Hydron gel implantát in vocal cord - Hydrogelový implantát pro hlasivky - Otoilaryngol. Hed Neck Surg. - 1988 , sv. 98, Č. 3, str. 242-245).

Požadovaná dávka takovéhoto suchého materiálu se sekcí implantuje do oblasti kosmetického nebo funkčního ošetření a potom se operativní rána saturuje. Následně materiál nabotná .5 absorbcí vody z okolní tkáně: a tak se- zajistí ^objemu' - korigovaného- orgánu, >--např ...«.hl asi vek. » _? .. . α.Ί. ' lokální zvětšení

Ti.t»· 7;-rn? . *

T-ento biokompatibilní materiál je charakterizován vysokou r biochemickou stálostí*. , . ,'·.⁴⁸“ ’ ‘

Při aplikaci je však trvalý terapeutický efekt, dosažen na r ' ·> — ...·-» , ---- .-.------ ·,-- r. -ς -d·-. ' ' úkor traumatického, chirurgického zásahu,, spojeného s edémy

·.. a aseptickými· záněty; ‘jeho použití pro místo4’pro inťratkáhové ‘ 'ukiádánr 1^ přinášVznačné obt;ížě-ačjeho 'nepoužitelný jakó> základ přo vodivé imeřzní médium . .. · , t -*

Próto pro endbprotetickóu praxi á pro jiné shora uvedené aplikace jsou nejslibnějšíokomerční' injikovatelrié^kapalné ' “ ' v ' * . biokompatíbi ini’ gélovácí materiály iJako^P-říklád může ·. pqs1-.ouž-ít- k-lokompatibilni.^ek^^ materiál jako roztok obsahující’ ve vodě rozpustné polymery, mezi nimi nezesíťovane akrylonitrilové polymery nebo jejich kopolymery, polyvinylacetaty a lineární nebo nízce rozvětvené polymery nebo kopolymery 2—hydroxyethy 1-akry latu a, methyl akry latu, poly-n-yinyliminokarbonylU ,a ’ dimethyl sul í oxidu nebo jiná poláí ní, s vodou

US Patent Č být využity tuovaného) , dobře mísitelná rozpouštědla (Stoy V., Čhvapi1 M.

· . il

4,631,198; 1986)., Při získávání kopólymerů mohou . . . . .

další monomery jako akrylamid (včetně >N-substiakryIhydrazid (včetně N-subetituovaného), kyselina í ·' , akrylová a akrylaty, glutarimid a vinylsulfon; a polárně s .vodou ochotně mísitelná rozpouštědla mohou být glycerol a jeho mono- nebo diacetaty, methanol, ethanol, propanol a 2-propanol, dimethylformamid, glykoly a jiná vhodná rozpouštědla.

Tento materiál je velmi efektivní při ošetřování menších __i kosmetických-nebo—f unkční ch defektů, speciálně _rtů_ a j iných částí obličeje, shora zmíněných hlasivek, atd.

Avšak při tamponáži objemných kaveren·nebo při korekci prsních tvarů a objemů pomocí endoprotéz může být potřeba až litr materiálu. V takových případech množství organického 7¾

-M Mí rozpustidla, injikovaného spolu s gelovacím polymerem podstatné překračuje fyziologicky přípustné minimum s následkem erytému $ a v některých případech i alergického Soku. Rovněž následkem J lineární struktury použitého gelovacího polymeru se zjiSťuje, že endoprotézy mají nízkou stálost tvaru, větší objemovou, menší co do jakosti.

Proto nejvýhodnější jsou takové komerční hydrogely, které neobsahují alergeny.

Mezi nimi, nejúžeji se dotýkající vynálezu, je biokompatibilní hydrogel, který obsahuje 3,0 % hmotnostní polymeru na bázi akrylamidového produktu při použití volnoradiálového póly — merizačníhá* iniciátoru (specificky persulfat amonný) v disperz--,, ním médiu, jako je apyrogenická redestilovaná voda (vynálezecký certifikát SSSR 1,697,756). _L.

Tento hydrogel je ve skutečnosti plně biokompatibilní _?s lidskými tkáněmi a kapalinami ve všech shora uvedených aspek-_;tech a proto mOže být aplikován ve značných (až do 1 litru) -¾ množstvích, přičemž nepůsobí vyloženě negativní biochemické a biologické následné efekty. V oblasti injikování (vkládání endoprotéz, tamponování atd.) vytváří strukturu ochotně propustnou nejenom pro vodu, ionty; kyslík, ale rovněž i pro nízkomolekulární metabolity. Hydrogelové implantáty jsou napadány značně velkou rychlostí (za 5-6 měsíců) mladou vláknitou tkání příjemce. Tento důsledek je zejména cenný v (mikro)alloplastii larynxu.

Tento hydrogel však má nízkou viskozitu a proto nízkou pružnost a vysokou pohyblivost. Voda obsažená v hydrogelu je volně vázaná š makromolekulami polyakrylamidu a je snadno odstranitelná z implantátů, což se projevuje jejich smršťováním a značným snížením kosmetického nebo terapeutického efektu. Proto v případě vkládání objemných (např. vnitroprsních) endoprotéz, tamponovaných kaveren a při poskytování dlouhodo— bých intra-tkáňo^ých*mlstukládáníléčiv vykazuji implantáty ifj .,.,sr, -,,1^-. ,,1,,. .. -I j.¹. .- ' 4- .. - . . . ί. .. _·' -n - Λ . · ... f.: _rJ, ·-; I---_ř - ,/ . :-.-4 . ' **·ζ- - - - '·' Λ* •-,.ι-Χ^.ι 3-. - - -^,—

Α^ηί zkou^ odolnost. J. vůči ^ně^ ideí. onná$nímjsátí žením „a. smrštité1nost na 'jejich původní objem. / < , - '»’ >

*1^.....

Po svou vysokou tekutost je tento hydrogel máto efektivní jako elektřovodivé imerzní médium pró .vnější aplikace

Podstata vynálezu . - - '/ .

? Proto je předmětem vynálezu.poskytnout biokompatibilni hydrogel, který byzlepšením pólyakry1amidového prostředku „ zajišťoval~'pružnost, udržování .tvaru a stálost objemných implantátů'a nabízel lepší terapeutické akosmetické výsledky* výhodně-: v pří pádě vkládání-réndoprotéz ΐ·

-V

Shora/.uvedený problém, byl...vyřešen posky.tnutím..b.iokompatiV ’ · .ř·· ··- ” _v . . , i „ . - · * - ·*..' ·—« · bilniho hydrogelu, obsahujícího polymer na bázi^: .akrylaminu, připravený s použitím iniciátoru radikálové polymerizáce· v apyrogenické vodě jako disperzním médiu, ve kterém,v souladu s vynálezem .řečený polymer je zesilovaný polyakrylamid, připravený pomočí biokompatibilniho zesíťovacího činidla.

Pro vodu, inohty, kyslík a nízkomolekulární metabolity 'J propustný a pro aplikace injikoyáním vhodný hydrogel podle vynálezu má pravidelnější a výhodnější strukturu vázající vodu, následkem Čehož může poskytovat objemné, vysoce pružné a tvar udržující implantáty (např. vnitroprsní endoprotézy, podpůrná tělesa v houbovité vaskulární tkáni penisu, tampony v plicních kavernách), které jsou napadány měkkou vysoce vaskularizovanou propojovací tkání extrémně pomalou rychlostí (měsíce až roky). Zásluhou strukturálních, biochemických, anatomických a fyziologických výhod, tak_jak .byly popsány shora, je existence podstatné kosmetického a/nebo rovněž terapeutického efektu v endoprotetické praxi á při tamponačních aplikacích a zvýšení trvanlivosti takovýchto efektů.

- 8 ' '<4 Podle prvního dále charakterizujícího rysu vynálezu obsahuje biokompatibilni hydrogel zesíťované polyakry1amidy, při- | pravené použitím methylen-bis-akrylamidu jako zesíťovacího činidla a směsi persulfatu amonného a tetramethylendiaminu jako j iniciátoru polymerizace. Methylen-bis-akrylamid je analogem základního monomeru (akrylamidu) jak svým složením, tak biokompatibilitou, zatímco použití směsi polymerizačních iniciátorů je příznivé pro zcela pravidelné zasíťování polyakrylamidových řetězcových molekul pro zajištění pružné prostorové sítě, vhodné pro injikování hydrogelu.

Podle druhého dále charakterizujícího rysu vynálezu obsa* huje biokompat i bil ní hydrogel od. 3,5 do 9,0 % hmotnostních ze-, síťovaného polyakrylamidu. Toto rozmezí koncentrací poskytuje maximum terapeutického a kosmetického eíektu v injekční endo-_; ’ _rprotetické praxi nebo tamponování. Koncentrace pod 3,5 % hmotnostních činí hydrogel nestabilní, použitelný jen jako základpro medicinální masti nebo elektrovodivé imerzní médium pro . , kardio- a enceíalograíi i, zatímco koncentrace nad 9 & hmotnostních snižují tekutost hydrogelu praktický na nulu, použitelnou, pro použití, v některých případech, pro předpřípravu endopro-,., téz, které vyžadují operační přístup do oblasti vložení takovéto endoprotézy.i

Podle třetího dále charakterizujícího rysu vynálezu obsahuje biokompatibilni hydrogel íyziologicky neutrální, ve vodě rozpustnou sůl, néjvýhodněji použitelnou jako elektrovodivé imerzní médium.

Podle čtvrtého dále charakterizujícího rysu vynálezu obsahuje biokompatibilnl hydrogel komerčně dostupný chlorid sodný jako íyziologicky neutrální, ve vodě rozpustnou sůl.

Vynález t í m t o_todha1úje .» ‘ popis výchozích reagencií, způsobu přípravy nového biokom patibilníhó hydrogelU/ příklady provedení_;způsobu a výsledky.

laboratorních zkoušek hýdrogelu;

7;· ' příklady formulaci >,biokompatibilního hydrogelu;

popis zpúsobb a výsledky chemických/ biochemických • í .

lékařských studií nového biokompatibiIhíhb.’ hýdnogelu;

popiš cest nápravy kosmetických a funkčních defekte • J ÍV Í . r lidského těla pomocí funkčních injekcí s .novým biokompatibiIním l ύ F ' - * _u . t.

. w»·,, “ Λ- ‘ *-. Λ ,.i .'Λ . 'fr ft hydrogelem a. ' . ' informace o jeho'praktických aplikacích.

Příklady provedení vynálezu

Pro přípravu použití nového biokompatibiIního hydrogelu byly použity reagencie, uvedené v Tabulce 1.

Tabulka 1

reagencie a empirický vzorec	1 .1 \|spotřeba v g\| \| na 100 g 1 \| hydrogelu 1	kontrolovatelné
jednotky T	a meze
akrylamid	ω tn Ί o	teplota tání:	84,5 ± 0,5 °C
C₃ Hs NO	1· 1	hustota:	1,222 g/cm³
4	\| \|	základní součást:	ne menší než 98 % hmotnostních
methy1en-bis-	Ιο,οι - 1,00 1	teplota tání:	184 ± 1,0 °C
akrylamid Cs Hi o N₃ Oz	i i i \|	základní součást:	ne menší než 96 56 hmotnostních
TMED	1 .....Γ Ιο,οοι - 1, 001	hustota:	0,78 g/cm³
tetramethylethylendiamin C₆ Hi 6 Nz	i . 1	základní součást:	ne menší než 98 & hmotnostních
persulíat	Ιο,οοι - ι,οοΙ	hustota:	1,98 g/ cm³
amonný	1 1	teplota rozkladu:	120 oC
(NH4 ) z Sz Og (peroxodisí- ran amonný	1 1	základní součást:	ne menší než 98 hmotnostních
redest i1ováná apyrogenická voda	1 dováženo \| 1 ! 1_____________________________L	i ndex 1omu:	1,3329

. .., ' - 11 - < . ' < · . . \ \ ' i . . _t. · */

Kromě redestilované vody byly v'pokusech.použity pod obchodním^zXm REANAL (Maďarsko) komerčně dostupné reagencie

-i=4S--=---=í^x^j=Í^=-=44S=.7í , - - -< · 7 — -—- 4η, ,,),τ-ι· ιπ--ι- ,η·/τ r-an-, ·. y-ij-í-=-=^.-,- .-χ-γ^π r - ,- .-4.μ \ a to: akrylamid a methylen-bis-akřylamid vé formě bílých krystalů, tertramethylethylendiamin jako bílá olejovitá kapali-A— _na a”’persul'f at ’amonný-ve—formě bezbarvých-krystalů..—,....—_;y-_^ .

•I , ” ^ · _ * . %* \ / . . · . · ^? . . ^:· * ' *

Λ Obecně se nový biokómpatibilni; gel 'připravuje následujícím · . -» , ·* 4-.' 4 ^ . . . -J...... *, - . t .*2, -._ik_ — 4 ..-_n; . .·.,. . *... i. η - -_s,. .. . _ .. ... _ . - .. .

. .. způsobem: . ...... . v · ..... -* - r . K.. F.

- . . .-.-Za-*asepťických._.l.ab.or,átorních. ppdmlneX^se vloží do sterilní skleněné’ nádoby vypočítaná množství akry1amidu a zředěných vod— ιΤφ1ΞηΠ^Ε^1Τ5Κύ^ΡΊ3ίνον3θί^ο-ίτηί^1-3—Cmet43y-l-~bis-ak^a iniciátoruipolymerace (persulíatu amonného a TMED). Tyto rea‘ ‘ íencie 'έβ.důkladně .promíchali',: potom se zředí vodpw _: (a|terná- <

tivně fyziologickým roztokem,'alternativně jiným zředěným vodným roztokem fyziologicky neutrální soli-, napřy octanem sodn:>m); směs se potom Přefiltruje a filtrát se nechá stát až

----------- (nadále^-zde—oznáčpv.aněho jako CL ΡΑΆ).

U připraveného CL PAA hydrogelu’se kontrolují následující hodnot·'/:, ’.. „ , , _t.. .. '

- vzhled (hydrogel. by měl být transparentní,‘ bezbarvý, bez nečistot);

- index lomu (má být v mezích 1,334 až 1,350);

- pH (má být v mezích 7,0 až 9,0);

- obsah těžkých kovů (má být meněí než 0,001 * hmotnostních) a

- sterilita.

Vynález bude snadno pochopen po přečtení následujících příkladů.

- '12 Příklad 1; Příprava biokompatibiIního hydrogelů o nízké koncentraci

X

20,3 g akrylamidu, 3,7 ml methylen-bis-akrylamidového vodného roztoku.o koncentraci 2 %, 7,5 ml vodného roztoku TMED ' o koncentraci 1 % a 15 ml vodného roztoku persulfatu amonného o koncentraci 4 * se smísí v litrové skleněné nádobě. Potom se Přidá voda do dosažení celkového objemu 580 ml, směs se přefiltruje přes skleněný filtr a filtrát se nechá stát nejméně 20 minut do vytvoření hydrogelů CL PAA o koncentraci 3,5 %.

Příklad 2: Příprava biokompatibilního gelu o vysoké koncentraci ’ · · · · * 34,2 g akrylamidu, 60 ml vodného roztoku methylen-bis akrylamidu o koncentraci 1 %, 6 ml vodného roztoku TMED o kon centraci 1 á 25ml persulfatu amonného o koncentraci 0,48 % se smísí v jednolitrové nádobě. Potom se přidá voda do dosažení celkového objemu 380 ml, směs sé přefiltruje přes skleněný filtr a filtrát se nechá stát nejméně 20 minut do vytvoření hydrogelů CL PAA o koncentraci 9 *

Příklad 3: Příprava biokompatibilního gelu o střední koncentraci g akrylamidu, 50 ml vodného roztoku methylen—bis akrylamidu o koncentraci 1 25 ml vodného roztoku TMED o koncentraci ÍX a 50 ml roztoku persulfatu amonného o koncentraci 1,3 $ se smísí v jednolitrové nádobě. Potom se přidá voda do dosažení celkového objemu 350 ml, směs se přefiltruje přes Skleněný filtr a filtrát se nechá stát nejméně 20 minut, dokud vytvoření hydrogel CL PAA o koncentraci 5 % _t

Příklad 4: Příprava elektřovodivého biokompatibiIního hydrogelu —črnízké^koncemtraci ^—----Hydrogel CL PÁA se připraví jako v příkladu 1 s tou výjim

-kou,-íe^ísto-jzody-_j^e_ použity íj/ziologižký ro^^........... ........' ' . ^{ř 2} _t ' · * . w·.·:.

Příklad

5: Příprava elektřovodivého —- -o ’ vy soké -koncentraci . 4 ** ·ι ϋ ;

biokompatibilniho hydrogelu

Hydrogel''CL PAA'se připraví jako v přikladu *2 s tou vyjím kou, .že místo vody je • * o* koncentraci 9—_T t použit vodný roztok octanu sodného ?#

V Pokusech bylý.Použity, formulace CL PAA biokompatibilniho hydrogelu. ^ále označován BCH) , jak ukazuje Tabulka 2Tabulka 2

PŘÍKLADY SPECIFICKÝCH FORMULACI NOvtnO Bl^vnřndx—HYDROGELU CL PAA

1 ί složky	1 j formulace a	_-----—--- koncemtrace, SS hmotnostní i
1	\| . 1 i i .J jBCH11BCH2I BC.H3	i „ - -i . ^{1 1 1} . \|BCH4!BCH5 ÍBCH6i BCH7\|BCH8\|BCH9I \| ]------1 i 1-----j----H—H
\| CL PAA	UJ v O ω O' ,· σ> =	1^,5 (4,0 \|7,0 !b,o \|s,0 1 1--1——}——!----l·“—h--1
\| chlorid sodný		1 _ 1 - 1 - 1 - 10,9 \|o,9 ΐ i i______l------i-----ί------1—-d
] octan sodný	' - ! - i -	1 ! 1 i ^{1 1} I - j - ]θ,9 ΐ 0,9 1 - 1 - 1 r t i ----1—----i-------¹-----—j
\| voda 1 _____-	j ___________________t 1 _J__ ' —-------	dováženo ’ '__________________________________________________ 1

Jak je možno vidět z Tabulky 2, tak formulace BCH2, BCH3 a BCH4, BCH6, BCH7 BCH8 a BCH9 mají v hydrogelu výhodné končen trace CL PAA, BCH2 a BCH4 jsou ve shodě s výhodnými mezemi kon

- 14 centrad CL PAA v hydrogelu. zatím co vSechny ostatní formulace odráželi mezilehlé Koncentrace a neJvyhodnéJSI koncentrace. Na rozdíl od toho, formulace BCH1 A BCHS představuji koncentrace CL PAA v hydrogelu, které jsou použitelné ve velmi omezeném počtu aplikacíLaboratorní studie nového hydrogelu byly prováděny ve vztahu k chemickým, biochemickým a lékařským a biologickým vlastnostem. Tyto studie nebyly Přísně vymezeny a prakticky se opíraly o konvenční metody a techniky.

Tak byl studován suchý zbytek, aby se stanovila přesná koncentrace substance v pravém nebo koloidním roztoku.

Potomky 1 suchý zbytek studován ve shodě se státním standardem SSSR GOST 15.013-86 Medical devices - Lékařská zařízení podle techniky stanovené v praktické směrnici, nazvané Metody analiza akrilatov i metakrilatov - Metody analýzy akrylata a metakrylata - ^nakladatelství Chimia, Moskva, 1972Přesná koncentrace CL PAA v hydrogelu je obvykle stanovována ze suchého zbytku. Tato metoda zahrnuje zvážení vzorku hydrogelu a potom sušení vzorku do konstantní hmotnosti (20 hodin při 35 °C a zbytkovém tlaku 12 až 15 mm Hg) a následný kon venční výpočet procent CL PAA v hydrogelu.

Tato metoda byla použita pro vyhodnocení chemické stálosti nového hydrogelu.

Za tím účelem byl připraven hydrogel, obsahující poměrně volně zesíťovaný (použitím 0,25 * methylen-bis-akrylamidu na hmotnost akrylamidu) CL PAA s vypočtenou koncentrací 5 %.

Pět vzorkft, každý o objemu 20 ml, takovéhoto hydrogelu bylo podrobeno čtyřem po sobě jdoucím zkouSkám a to:

./

Zkouška 1

Vzorky se zváží a suší při,35°C a zbytkovém tlaku * · ·.

12'ažl5'mmHg až do dosažen1’konstantní hmotnosti (20 hodin) . -’·

Zkouška—2-t-Vzorky—se—zváží-,—ponoří—se—do_redesti l.ované_w2dy_, vaří'se 15 minut a suší se jako při zkoušce 1.

’‘Zkouška 3 y:

* / ^ř ' Imí * ⁴ * , _j . C Vzorky” se zváží / ponoří^--se· do -redestilované vody - • v_ * ' · ' ^£ > ' ř objem se vždy doplní na 200 „ml u každého vzorku,nechají se nasakovat 7 dňí, . voda se, mění každý děn ------· — .i -.. · --1 ·->- - J- - ·.- · ' ' ' k ’·*·*—·· ^A a suší se jako u zkoušky 1.Zkouška 4. Vzorky se*žváží, nasakuji se vodou po 7 dní jako při - * ₇ ’ · -¹¹ < / v / ' ·1 .

<· _v .zkoušce' 3,. vaří se 15 minut jakp, při\zkoušce 2

-.¾ ^{1 x} r y' , t *- ¹¹ * -> ,T , í *. V «a’potom se suší.jako při\zkoušce ;1 . ‘.'.A,

Procenta polymeru v hrubé hmotě hydrogelu· byla pro všechny vzorky~počí tána—konvenčními·—nietoďami-^7-VýBledký^-jsou^uvédeny„.

v Tabulce 3....

Tabulka 3.

VYHODNOCENÍ CHEMICKÉ STÁLOSTI. NOVÉHO BIOKQMP ATIBI LNI HO . HYDROGELU CL PAA NA ZAKLADE SUCHÉHO ZBYTKU-

1	l ' !	průměrná hmotnost vzorku, g 1 (průměr z stř.odchylka) l
	1 zkouška 1 (	[	P^-ed zkouSkou ·’ X ’	1 i \| po zkoušce ]
	l——------ 1 1 1 1 2 ! 3	4..... i i	rj ru ω o o a . σ> ω i ui é - Λ i 1+ i+ 14 O o o .. CO CO >X> UJ 'J O':-	1 0,983 ± ( 0,951 ± \| 0,923 ±	0,0048 i 0,0076 1 0,0065 1
	! 4	1	20,41 ± 0,63	1 .0,913 ±	0,0095 I

____L___________—

Jak je možno z Tabulky 3 vidět, dokonce ani nasakování _s následným vařením nezpůsobujícím destrukci CL PAA v hydrogelu ukazuje, že může být tepelně sterilizován (kdykoliv tato potřeba vznikne) a charakterizuje stálost, navzdory volnému zasíťování.

Dále byl akrylamíďzkoumán co do své schopnosti migrovat do biotkání, přičemž se vycházelo z chrakteristik stálosti základního (CL PAA) hydrogelu podle vynálezu ve vodném médiu v souladu s P.ukovodjaéČije metodičeskije matěriali po toksikologo-gigijeničeskim ibsledováni jam polimernych matěrialov i izdělij dlja endoprotezipovánija - Směrné metodické materiály pro toxikologicko-hygienická studia polymerních materiálů a výrobků pro endoprotetiku - Ministerstvo zdravotnictví SSSR, 1987, str. ^.8-25Tato schopnost byla stanovována metodou HPLC (highly performance liquid chromatography - vysokoúčinné kapalinové chromatograíie) využitím detekce absorpce UV záření v oboru 190 až 210 nm, typickým pro monomer a s použitím chromatograíu

LIQUOCHROM (Maďarsko).

Za tím účelem byly extrakty z nového hydrogelu získávány nasákáváním vzorku PO dobu 14 až 30 dni Při teplot® 40 = C a Poberu 100 ml extraktantu (redestilované vody) na 1 ml hydrogelu. Vzorky pro metodu HPLC se připravovaly suSenlm podílů 5 ml extraktu Při teplotě místnosti a zbytkovém tlaku 12 - 15 mm Hg a jednou eluovánlm zbytku rychlostí 0,2 ml/min 2 ml směsi 1:1 vody a methanolu ve 150 mm dlouhé koloně o Průměru 4 mm, naplněné sorbentem Separon CIS a zavedením 20 mikrolitrů eluatu do vstřikovací smyčky.

Minimum detekované koncentrace akrylamidu metodou HPLC bylo 0,000001 mg/1, zatím co jeho maximální přípustná koncentrace ve vodném extraktu z materiálu z implantátu byla 0,02 mg/1.

' ' ' - 17 -. .· r ,J. '· . · · . · · · . ., r . ϊ < ' ' ^v.‘- .

Akrylamid nebyl metodou HPLC ve vodných extraktech z hyd' r.ogelu metodou zde popsanou detekováni, což značí, že vcelku jak ,^==:.=^-^=^=^:=.=:^====-^::=--==,==::=====::^==^=^^=^===-===^^.-==^.:===^./'CLPÁA,· tak i~bi ©kompatibilní hydrogel podle vy nálezu ’ jsou * λ _r ™ , * í % chemicky stálé. .' ' _r .. r- , _s. , ' ..' . Ve .vztahu k‘lékařským a biologickým vlastnostem byly ₍ ’ , ·γ | ;

vzorky CL PAA hydrogelů, připravené zde popsanou ’metodou, byly -μ- τ' * ,i , / ! . jj i. Λ * j_ ,

.....' ’ ' žXoúSéný’jV'laboratorních “podmínkách” na; ' '* ‘ ' ^:· ”* ^r, . .· ...... . ’ . -. . ;

• * ¹¹ . * ;

_„.. íi'. „„..j ._b.io.chemi.ckPU_X^h©mo2yticko.u. aktivitu_ť...... .. ' . _r . .

embriotoxickou aktivitu, ...

“•mutagenní’· akti^^ - - ~~ ~

^.-karcinogenní, aktivitu.’ .

i · i H * ' ‘ * Λ · i

Bioclíemi.cká^.aihemoly.t.ická aktivita¹ PAA hydrogelP· byla * · · ^T · ' ' , vyhodnocována z..variaci chemického složení·'plazmy a krevních bunék samečků bílých krys linie Wistar, télesné hmotnosti 300 ,· ... ........... - _r —·- · · · - ·· v 1 · ,: - , ' * 1 ⁷ ·; · 4 · · ; ,· η-ΐη ·

-----*---' ‘3 5'0 ^_g“z k ůš ébní č h^a^kon ť r oin í’c h—s ku p i n -po -‘Ί’δ—ζ ivoč i-š i ch-.- - — - ^J Před pokusem byla do každé krysy ze zkušební skupiny vpravena injekcí intraperitonealné dávka 5 ml 5 %.ního hydrogelu podle, vynálezu.«

Krysy byly normálné krmeny.

Po dvou týdnech byly krysám odebrány vzorky krve a byl zkoumány na obsah iontů Na,· K, Ca a Cl; močoviny, dusíku krevní močoviny a kyseliny močové; kreatininu a enzymů (amylasy, alkalické íosíatasy, alanin- a aspartataminotransíerasy (dále označovaných jako AIAT a AsAT), laktatdehydrogenasy (dále označované jako LDG) a kreatininfosíokinasy) pomocí biochemického analyzátoru KOHNING (Švédsko). V těchto případech byly obsah draslíku a močoviny stanovovány bio-testem LACHEMA (Česká republika). Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 4.

Tabulka	4	□
VLIV IMPLANTÁTU Z BIOKOMPATIBILNÍHO	HYDROGELU	CL PAA	•S’ Λ
NA BIOCHEMICKÉ SLOŽENÍ	KREVNÍ	PLAZMY KRYS
1 ] biochemické veličiny	1 i	Výsledky	t zkoušek i 1 !
\| a jejich jednotky	-----μ	kontrolní	\| zkušební \|
\| sodík, mmol/1	j	151	1 148 i
\| draslík, mmol/1		8,20	Í 6,82 1
1 vápník, mmol/1	1	0, 97	1 0,90 \|
[ chloridy, mmol/1	\|	97, 5	i 102,1 \|
í močovina, mmol/1	1	4,8	] 4,8 [
\| dusík krSvní močoviny, mmol/1	1	2,2	] 2,2 \|
i kreaHtinin, mmol/1	\|	0,05	1 0,05 \|
j amylasa. mg&		89, 1	\| 83,33 i
\| alkalická fosíatasa, mmol/1	!	84,5	i 55,9 \|
í AsAT, mmol/1		133	1 130 !
j AIAT, mmol/1	! i	41	I 51,7 \|
j LDG (celkem), mmol/1		217	\| 189 [
\| kreatinihíosíokinasa, jednotky	1 1	5960	\| 5685 í
\| kyselina močová, mmol/1	1 ______L	0,14	1 0,10' Ί J____________________1

jak je možno vidět z Tabulky 4, tak hlavní veličiny výměny ionta ukazují, Že nedochází k manííestačnímu poškození buněčných membrán. Aktivita ATPasy je rovněž normální.

Stálost veličin dusíkové výměny ukazuje normální metabolismus včetně purinové výměny a, společně s kreatinovou stálostí, funkční stálost urogenitálního systému v přítomnosti CL PAA v lidském těle.

Normální aktivita AlAT a AsAT představují stálost hepatocytO a náležitý stav miokárdu, které, usuzujíce z aktivity kreatinin!osíokinetasy, jenž je normální, nejsou vystaveny měřitelnému přetížení.

_ . * . .( 1 * • H · -ř ·· ·? τ· - ϊ · V ·· ' . _: - 19 Λ ί ' .·

* ,_s - ' , Dostatečná aktivita alkalické íosíatasy je důkazem, že v

- ^-^ěndbthéliu žlučníkových kanálcích není íZánět . . ...

. .... _rl „· . , . . . *

l ; ·/ X' ........ / < ··,· >.«^· >·· - ' ' ^: ·· Λ ζ/^τ

' ^r U těchže krys bylo rovněž provedeno sčítání krevních

buněk, iak je uvedeno v Tabulce 5. ., .

” < V > ' · v X ί . . .. - · ř .* ir : \ ř

.' · . Tabulka 5

\ i b, » , . , ' ΐ ' ’ t , / . ^L*

· VLIV IMPLANTÁTŮ Z BIOKOMPATIBILNIHOHÝDŘOGELU ČL PAA,

NA SLOŽENÍ KREVE KRYS - ..

।-----------_:----------------—---- - । · ,,_t „ ’ | veličiny složení krevních buněk. |. Výsledky zkoušek , 1

| a jejich jednotky 1

I ‘ ¹ * ' .z j kontrolní 1 zkušební !

1 ... . ·' ? . . - * jt?- , ** / < -· . .

I. « · - . ' .... * . 1 ·-----------,------------------- : . - . . ·: ·

Ur---------—------i--. ·. . Ί 1 1 . -i. ...

. 1 , . i · ·' 4 -· ; _t I ·}·-; *

| leukocyty, 10³/mm³ (thsd/mcl) 1 3,5+0,2 1 5,4 í

i erythocyty, lO^/mm³ (mln/mcl) ! 6,86+0,43] 7,02+0,311 1. ϊ

L_.._· ’ ' 1/hem'onlóbin, ’ gZl ‘ __ - -.^1125^-~ .^| l39^- ' _J

i hematokrit, % i J5,0+i,5 ! 36,5+1,3 ,

1 erytrocyty střední průměr, nm 1 51,0+0,2 ] 52,0+1,5 ! í

| hémoglobim průměrný obsah per 1 i i

J. erylrocyt, P3 '. 135,7*0.3 1 38.1-0,5 1 . . ,

| thrombocy ty, . lO³/mm³ (thsd/mcl) 1-992+12. 1.694+50

| throbocyty střední průměr, nm 1 8+1>5 1 14,25+1,6 1 1 . .________________________________________________________________ 1----------------------------------L--i

. 1 - ¹ -------------------------------- ·. - *

Jak je vidět z Tabulky 5, tak leukocyty při pokusu nepodstatně překračují normální obsah, který je 4,5*1000/mm³, zatím co erytrocyty a hemoglobin v erytrocytech naznačují normální okysličování. Z hlediska hematokritu je možno tvrdit, že tekutinová-a-elektrolytová rovnováha je přibližně normální.

Data, která jsou dostupná nepřímo, naznačují, že biochemická^tálost a biokompatibi 1 íta CL PAA jako takové,- jsou dobře přijatelné.

- 20 Embriotoxická aktivita hydrogelů CL PAA byla stanovována podle Rukovodjaěčije metodičeskije material i po eksperimentalnomu i kliničeskomu izučeniju nových lekarstvennych sredstv Směrné metodické materiály pro experimentální a klinické studium nových lékařských prostředků - Ministerstvo zdravotnictví SSSR, 1987.

V pokusu byly použity tři skupiny, každá skupina o 16 zvířatech, samic hybridních bílých krys o tělesné hmotnosti 180 - 200 g.

Krysám v první skupině bylo intraperitoneálně injikováno 2 ml nového 5 %-ního hydrogelů a byly za týden spářeny.

Krysám ve druhé skupině byly rovněž injikovány 2 ml nového 2 S-ního hydrogelů ve třetím dnu březosti.

Březí intaktní krysy tvořily třetí skupinu.

. L dvou krys první skupiny se březost neprojevovala. 14 krys v první skupině a všech 16 krys ve druhé a v třetí skupině vrhlo normální zdravá mláďata jako důkaz, Že nový hydrogel není embrictoxický.

Mutagenní aktivita hydrogelů CL PAA byla zjišťována podle, směrnic ministerstva zdravotnictví SSSR Ocenka mutagennoj aktivnosti chimičeskich veščestv mikrojadernym metodom Vyhodnocení mutagenní aktivity chemických látek mikrojadernou metodou, Moskva 1984, s.14, na retikulocytech z kosterního morku myší linie C3H1 (obou pohlaví) ve stáří dvou měsíců ve dvou skupinách, z nichž v každé bylo 10 zvířat.

Pokusným zvířatům bylo injikováno 0,01 * tělesné hmotnosti z 30-ti denního vodného extraktu, získaného při teplotě 40°C a poměru 100 ml extraktantu na 1 g gelu z 9 ^-ního hydrogelu CL PAA.

Po 24 hodinách .byly pokusné a intaktní myši usmrceny , zlomením' míchy .' V dal š í m byly roztěry í emorálního morku, zřéděné sérem čerstvé néstabilizované lidské krve skupin AB-(IV) konvenčně preparovány pro následný test zbarvení podle . Pa ppe.n helma.

Pod mikroskopem byly v nátěru spočítány retikulocyty

-s mikronukleem . -.Bylo zjištěno, -žel odchylky- v.počtu retikulocy- . tů; napočtených v morkových rozt.ěrech jak experimentálních, tak w’. ^{h 1} · ..

i intaktních myší, v zorných polích, z nichž každé obsahovalo 1000 buněk, nepřekračují 2,3 To je důkaz, že hydrogel CL PAA

-se—neproj ew je- mutagenně-.———-——^:— ---------——_—.——

Karcinogenní aktivita hydrogelu CL PAA bylaívyhodnocována >

. . . . v; - . ' 1 imunodetekcí nedostupných s .nádorem spojených antigenů.*

Tento typ vyhodnocování zahrnuje stanovení elektroíorézní —pohyblivosti—(e-lectrophóre-tic—mobility-^- nadál.e^-j.e.n_EPM.L_stabi_- — lisovaných a taninem ošetřených erytrocytů; které jsou sénzibi- - » lované na s nádorem spojený antigen rhabdomiosarkomu a, kromě toho, na nepřítomný embryonální antigen, kterýžto posledně jmenovaný je indikátorem progresivního nádorového růstu, když. EPH-test je pozitivní. EPM-testy jsou obvykle pozitivní,· jestliže elektroíorézní pohyblivost buněk-indikátorů se sníží

X-nebo vlce.

V pokusu bylo použito 12 neliniových samců bílých krys - o tělesné hmotnosti 180-200 g, tvořících zkušební skupinu a kontrolní skupinu, z nichž každá měla 6 zvířat.

Krysám ve zkušební skupině bylo injekčně při lokální anestezi vpraveno po 4 ml 6 56—ní ho hydrogelu CL PAA do íemorálního svalu. Potom byly krysy obou skupin živeny 18 měsíců normální dietou. Potom byly všemodebrány vzorky krve z ocasní vény, ze vzorků byly,izolovány erytrocyty a senzibilovány shora uvedenými antigeny pro provedení EPM-testŮ. ,_r

- 22 Bylo zjiĚtěno následující snížení EPM senzibilovaných erytrocytů ve srovnání s nesenzibi1ovánými:

4,17±1,58 % pro rhabdómiosarkomový antigen a 1,67+0,95 % pro nepřítomný embrionální antigen u testovaných zvířat a

1,50+0,62 % rhabdomioblastomový antigen a 1,83±1,28 % pro nepřítomný embrionální antigen u kontrolní skupiny.

Z toho důvodu se zkouška EPM jevila jako negativní pro , krysy obou skupin, což ukazuje na skutečnost, Že nový hydrogel CL PAA neprojevuje karcinogenní aktivitu.

Podrobnější lékařský a biologický výzkum použitelnosti nového bi4kompatibilního hydrogelu CL PAA v endoprotetické pra-, xi a pro tamponování byl prováděn na hybridních psích samcích tělesné hmotnosti 25 až 30 kg, starých tři až čtyři roky. Psi >> byli za sterilních podmínek podrobeni zkoušce vložení endoprotéz, následující po deziníekci pokožky kryjící penis 10 «-ní jodovou tinkturou a lokální anestezi, z čehož:

psů dostalo subkutánně jednou injekci 5 ml 3,5 %-ního hydrogelu CL PAA;

rovněž 6 psů dostalo endoíascialně, s vyloučením penetrace pod tunica albuginea, injekce 9 «-ního hydrogelu CL PAA do třech segmentů po délce penisu na protilehlých stranách v množství do 1,5 ml na segment do celkového objemu 8,0 ml a ’ * dalších 6 psů dostalo injekce intrakavernálně, včetně penetrace pod tunica albuginea a hlavně do trabecula corporum cavernósum, ale s vyloučením, poranění močové trubice 6 «-ního hydrogelu CL PAA do třech segmentů podél penisu na protilehlých stranách v množství do 1,5 ml na segment do celkového množství 8,0 ml.

Čtvrtá skupina o třech psech byla jako skupina kontrolní.

·, · ' — - ’ - .....i · - · . · .·* X· 6“ · - . · · * . . . . — ? r: < ; . '. v . '..r?

I ·, , t ‘ < · it 1 'I

L á Í . ._v . W .7η .,· k X. I® i *

- . _L Psi byli -postupně jeden pó druhém utraceni intreavenozní némbuťaÍOVOU-injekcí^takto>-^-V*~~7^— ------- - —/.—— Jií-.ss;;:·.*,·..·=! -v -ΓΤ;-γ^ .,- w jp ·-j-i. ^=?jt-,=-Api--r=--_JTaL. γ-ά-λ*. ,-7--.-,-^- _=&· i—;a,'' M- , u - ,4-sl Λ---v-'9 w --ϋ; φϋ-υ·.,' · — . v-.-· inyj. ·. - -=;:^:4.- = ' ./ · r ' · . ‘ -.' , ’( testovaná zvířata po 1, 7 ;a 14 dnech a 1, 3 a 6 měších' od

- - ' * _Λίΐ- . 7 ' '.

. , implantace hydrogelu CL PAŘ; , ._Ť . ' .... _{: f} . ' ' / - -¹ - kontrolní po 1, - 3 a -6 měsících. - ' ,.-

-. _r . .. ., ,. ......_ . .2. ^T . ^ . z ... ... .., _Λ _._T **- · - - - s .. , >- λ -- ... ._r . . .

’* \ Exc.idováné kousky celoprůřezových plátků penisu, lokální místní uzliny a plíce psft, společně s kontrolními’plátky byly fixovány v 10 a 6 %-ním neutrálním formalinu a v Carnoitově^kapalině, dehydratovány v alkoholu vzréstající koncentrace - a byly * * ...V V -Q· . .

pokryty parafinem. .

I ♦. _¥ b Λ . ₄ i·.. ' ¹ „ ’ ' · ' ^ft' ₄ .... ,

PrepaAáty byly obarveny heniatoxylinem a· eosinem, metodou van Gison pyrófúchsirieni, metodou Weigert· na elasticitu a tuluidinovou modří při různém pH barvicího roztoku pro následnou:, Γ. détekciJglýkosáminogl⁷y'kári~&~ch~emickými^ a', enzymatickými metodami . - .

Glykoproteiny a glykogen byly detekovány McManus- periodickou 'kyselou Schiffovou reakcí (v dalším jako PAS-reakce), soli vápníku byly detekovány von Kóssovou metodou, PNA (nukleové kyseliny) *byly detekpvány Brachetovou metodou (pomocí ribonukleasy)— Studována byla aktivita následujících enzymů:

v.

- malatdehydrogenasy (dále jen MDGj;

—:sukcinatdehydrogenasy (dále jen SDG) metodou Nachlass;

- 1aktatdehydrogenasy (dále jen LDG); .

- glukoso-6-fosfatdehydrbgenasy (dále jen G-6-PDG), NADa NADPdiaíorasy metodami Hesse, resp, Scarpelliho a resp. Pearce;

- alkalické fosfátasý (člálé jen AP) Gomoriho metodou a

- adénosintrifosíatasy (dále jen ATPase) metodou ' -i

Wachste.in-Meieel. . ý

- 24 Nervové tkáně byly impregnovány dusičnanem stříbrným metodou Bielschowsky-Gross.

Histochemické reakce byly prováděny a řízeny podle doporoučení v příručce Pearce E.: Histochemistry - Histochemie (ruské vydání Gistochimija, překlad z anglického, 2. vyd. , Moskva 1962).

Studie odhalily, že:

A. V případě subkutánní injekce hydrogel u. CL PAA;

následující den byl na místě vpichu injekcí pozorován otok tvaru rukávu měkce elastické konzistence s určitým zeslabením kůže (u j4dnoho psa se vyvinul zanedbatelný edém a hyperémie tkání obklopujících implantát s malou lokální hemoragií, která, se rozpouštěla, takže sedmý den byla považovatelná za manipu- . lační zraněni;

po 7 dnech neexistovaly vizuálně znatelné hemodynamické, změnu působící a zánětlivé reakce. Při histologickém zkoumání ... se implantát jevil jako velká světlemoďrá vakuola, obklopená pouzdrem tenké spojovací tkáně, oddělující hydrogel CL PAA a fascii penisu a kožní povlak. Pouzdro se skládalo ze dvou vrstev mladých íibroblastů s jemnými kolagenovými a elastickými vlákny, která byla vidět kolem. Pyroninoíilie a zvýšená aktivita redox enzymů (SDG, MDG, NAD- NADPdiaforás, LDG) a AP jsou typické pro cytoplazmu ve fibroblastech. Zvýšená aktivita G-6-PDG odhalila aktivaci pentosového metabolismu. Volná infiltrace leukocytů a makroíágŮ byla pozorována ve vrstvě blízko povrchu hydrogelu. Pouzdro mělo periferii granulované tkáně mírného počtu nově narostlých cév, pokrytých zduřelými epitelovými buňkami, jejichž 1uměny byly lokálně zvětšené a naplněné krev tvořícími elementy. Proliíerační fibroblasty, histiocyty a osamomocené plazmatické buňky byly detekované v adventicii cév. U žádného z případů nebyla pozorována reakce abnormálně velkých buněk. Při žádné hodnotě pH použitých roztoků nebyla

- 25'r ./

.. .i..

f ' „ po zbarvení toluidinovou modří/detekována žádná metachromatická - i. . . · ^ř ·% ‘ í ' ~_T*-ohni ska. - Malý počet ^ nervových vl áken ^impregnovaných duši čnaném - ..· ... / .a ...........λΑ_________......... ....... . ..^........,^____ : stříbrným. Vykazoval různé změny, jako .lokální žduření axónů * ’'ztrátu jejich vláknité struktury, vakoulizaci', varikózitu, hypo- nebo hyperimpregnaci. Občas by1a pozorována akumu1ace . exoplážmy kolem nervových vláken nebo ná jejich koncích, ' ,· r j ' . ‘

Částečná nerovnoměrnost mýělinové membrány ₍a její rozklad, na > _L r t ' , . ..· ,a '. ' ' dlouhé'-fragmenty .. Ty.to .jzměny - jsou—ty pické—prótnervwá· .vlákna při jejich kompěnzačně-adaptivním*restruktuřování jako ’ “;. .. ’ ’ ' odezva na tlak pouzdra na hydrogel CL PAA;

»L^Tk —; ~ n.ec h.__mi a kr oíágo-1eukocyt oyá _ne akced-V—t ká n í c h—v—okol-limplahtátuíhydrogelu CL PAA nevýznamně vzrostla; byla pozorována vysloveně; fibroblaébóváVreakce/ζvčetně, pokračující\tyorby · '' ?' . v·' ’· < ’*· ·' f w^,;T ···” '-V \ ’’ ' í . \ ¹ ή:' \·' propojovacího' tkáňového póuzdradkolem vakuoly,; pouzdro .se lo- ·^;1 í- ......* -₄ - · . ··' ~ •’ř-j ·.··· - · kálně.· jevilo? jako^? náhodněϊuspořádaná; kolágenová’'a elasťičká' vlákně,> maj ící mladé.’· í ibroblasty' a . mezi., tím nově .vytvořené kaPÍ íáryv^zatiímco^ha... b.gtathí ch m í steč h. Li jakouž řa 1 e’j š í _s pojbvací—i tkáň, skládající se vláken uspořádaných blastů. Obsah. RNA v z několika vedle.sebe cy toplazmě' řad kolagenových a elastických a rovněž proliferačních fibroa nukleu se zvýšil' a rovněž aktivita redox a hydroly.tických enzymů'. Fibroblastovávcytoplaz, - <_-r T-. , .. v t c. . . * - p?v ³ . ma. se. obohatila o met-^ctirojnaLtícké granule·;.^ X^t-Gpó^; jsou snadnou detekpvatelné toluidinovou modří při pH 2,8 jako důkaz zvýšení syntézy glykosaminoglykanů. Počet, nově narostlých cév se ostře _itsníž.il v tkanině obklopující pouzdro a buňky hystiogenního typu, produkující glykošoaminglykany a kolagen, převažovaly. Abnormálně velké buňky se vyskytovaly extrémně málo. Změny nervových·vláken byly takové, jak již bylo shora uvedeno.

jeden měsíc po injekcích se okolo vakuoly hydrogelu CL PAA vyvinulo pouzdro zralé propojovací tkáně, skládající se z kruhově uspořádaných kolagenových a elastických vláken a mezi tím “s dozrálými í ibroblásty”, ’ obsahuj í cími mírné množství RNA a výšších sulfatoglykosaminoglykanů, detekovaných toluidinovou modří při pH 2,8. Aktivita redox a hydrčlytických enzymů ve fibrocytové cytoplazmě byla normální. Občas byla pozorována na povrchu

- 26 k hydrogelu reakce buněk, která se jevila jako volná diluzní infiltrace makroíágu a a plazmatických buněk. Struktura tkáně % obklopující implantát byla zcela normalizována a nebyla roždí 1ná od podobné tkáně intaktních zvířat. Reaktivní změny v citlivých nervových vláknech se začaly snižovat a objevovaly se hlavně jako nepravidelná zvětšení nebo zeslabení axonů a v jejich lokální hypo- nebo hyperimpregnaci.

o 6 měších později zůstávaly tvar a rozměry implantátu prakticky takové, jaké byly během prvních 24 hodin po injikování hydrogelu CL PAA. Histologicky se implantát jevil jako integrálně dobře zapouzdřená tmavomodrá vakuola. Pouzdro se skládalo z jednoho nebo dvou polí fibrocytŮ a řádně uspořádaných kolagenových a elastických vláken, ve kterých nebyly von Kossovou metodou detekovány žádné soli vápníku. Tkáně obklopu- .

jící implantát nejevily Žádné reaktivní, hemodynamické, dystro-, „ λ' “i fické, nekrotickě, zánětlivé nebo jiné změny ani tkáňové a buněčné nepravidelnosti . Po impregnaci dusičnanem stříbrným se _:nervová vlákna jevila jako normální.i

B. V případě endofasciální injekce hydrogelu CL PAA:

i· následující den a po 7 dnech se penis jevil rovnoměrně zduřelý a vykazoval zvýšenou resilienci. Tělesná teplota psů byla normální, zbarvení kůže na místech vpichu injekcí bylo obvyklé, lokální zánět nebyl pozorován. Histologicky se implantáty na místech vpichu injekcí jevily jako světlemodré vakuoly. Po sedmi dnech bylo pozorováno uzavření vakuol hydrogelu CL PAA do ténkostěnných pouzder, skládajících se hlavně z jedné nebo dvou vrstev mladých íibroblastů, a jemných propojujících vláken a stejně nově vytvořených kapilár, obklopujících fibroblastové vrstvy, zatímco leukocyty a makroíágy byly pozorovány na povrchu hydrogelu. Obsah RNA v cytoplazmě a nukleu se zvýšil a rovněž se zvýšila aktivita SDG,' MSG, NAD- a NADTdiaíorásy, LDG a G-6-PDG v cytoplazmě. Granulační tkáň, obklopující pouzdro měla nově vytvořené kapiláry se slabě rozšířenými, krví naplněnými 1uměny a zduřelým endotheliem. V adventicii krevních

I' · · < a * · . p-a ’ ' ' — · · .....- .· ’ _. - . . _v» . .

. - 27 - ¹ ' ' · * , .

>. f V cév byly naleženy pr^lilsrační’ íibřoblasty a některé plazmatic.1 ké buňky. Histochemičké reakce potvrdily, že aystroíické.a, ^^Sdt-d7^n^ změny ve íasciální .tkáni, .obklopující- ' implantát.a'implantátem vytlačené,»nebyly.detekovány^ - Takto, po zbarvení preparátů roztokem toluidinové modři, při libovolném;

'/ . pH) nebyly zjištěny metachromatická ohniska, která by ukazovala

- na destrukci hydrogelů CL PAA-‘ Permeabilita cév zůstala normálJ Z ..Diz.-nebot'igbyJ;^®^, ”‘^A . ' ’bilni vůči amylase a v-perivaskulárních_;proetorech, á rovněž ve » stěnách malých a středně'velkých cév/'kdežto.aktivita AP-.

- Ύ 7' a*ATPasy^ ve ^-štěi^ch“mLkrooběhbvěhó ’ T ůžka zůstával a; ní zká. - - -- ' V některých Případech bylo zjištěno/lže nervgvá vlákna, impreg/ novaná dusičnanem-střibrnýma zkoušená Spielmeyerovou metodou, L· byla vlnevitého nebo spirálovitého tvaru a, v. jiných případech,

‘.byla na kórfcích zdúřelá. Demyelinační místa se vyskytovala málo, stejně- jako řídké bylo.tlokální · rozšíření nervových vláken, tvořících smyčkové struktury. Byla pozorována nečetná pro; _____ -ii-f-eřáce-hypértroíi-ckých.4Schwannových..buněk. Zm^ny^jg LtgQba - . ...

brát jako odezvu nervových vlákeS na tlak, vyvolaný = implantátem;

po 14 dnech .reakce makrofágu poblíž implantátů byla poněkud intenzivnější , ;ale -mimořádně.,velké buňky nebyly pozorované. Byla pozorována zřetelná íibroblastová reakce a růst pouzder propojovací tkáně kolem vakuol; některá pouzdra, skládající se z náhodně uspořádaných kolagenových a elastických vláken s mla _tdými íibroblasty mezi nimi a vysokým obsahem PNA v cytoplazmě a zvýšená redox aktivita enzymů. Na jiným místech byla zjištěna zralejší propojovací tkáň, skládající se z několika polí kolagenových a elastických vláken a buněk íibroblastového typu. V granulační tkáni, sousedící s pouzdry, byl pozorován zvýšený počet histiogenních buněk a snížený Poéet nově‘narostlých cév. Endothelium a střední membránová struktury adventicie cév a hemodymamické faktory- se-nezměníly, -zatímco změny nervových buněk byly takové, jak bylo popsáno v předchozím;

. .it ’ ?

- ²⁸ - J á po měsíci se implantátová pouzdra skládala z buněčných elementů fibroblastových řad, fibrocyty s mírně pyroninofi lni cytoplazmou byly převládající. Obarvení methylenovou modří při _PH 2,3 ukázalo ve íibroblastech mírný počet výše sulfátovaných glycosaminoglykanů. Enzymová aktivita ve fibrocytové cytoplazmě souhlasila s kontrolní. Podpovrchová vrstva hydrogelu CL PAA byla do určitého stupně infiltrována makrofágy a piazmatickými buňkami. Nebylo pozorováno ani porušení krevního toku, zánět, degenerace ani nekróza tkání, sousedících s implantáty. Ještě byly pozorovány změny v nervových vláknech, jak byly zmíněny dříve;

měsíce po injikování bylo pozorováno zvýšení basoíilie hydrogelu CL PAA. Gelové vakuoly byly od fascie dobře definované tenkým pouzdrem propojovací tkáně kolagenových a elastických vláken s fibrocyty mezi tím. Krevní cévy byly normální. Nebyla pozorována žádná odezva tkání penisu (fascie, jako u kontrolnich, se jevila jako kruhovitě uspořádaná, dobře definovaná kolagenová a elastická vlákna bez ztráty integrity a bez kalcifikace mikro- i makrohladin, nervová vlákna byla normální);

po 6 měsících byl penis psů co do tvaru a rozměrů při vi- $ zuální prohlídce podobný tomu, co bylo pozorováno druhý-sedmý den. Histologicky se implantáty jevily jako integrální, dobře' zapouzdřené tmavomodré vakuoly. Pouzdra se skládala z jednoho nebo dvou polí fibrocytů a správně uspořádaného tenkého kolagenu a elastických vláken a nabyly zjištěny žádné soli ani makroskopickou nebo mikroskopickou von Kossovou metodou. Ve tkáni sousedící s implantátem nebyla zjištěna Žádná reaktivní, hemodynamická, degenerativní, nekrotická, zánětlivá nebo jiná změna, ani tkáňové nebo buněčné nepravidelnosti. Nervové tkáně, impregnované dusičnanem stříbrným, byly jak u pokusných, tak u kontrolní zvířat virtuálně identické. V místních lymíatických uzlinách, intra-trabeculárních a trabeculárních místech corpus carvernosum penisu, penisových cévách a v plicích nebyly zjištěny částečky hydrogelu;

_r < · · >

. ι ’· / ί ·. γ j4 ý . .7:·- - _ ₂g _· ...···;--,···. Λ · i ^V * · Í* ; , ... .'c.· v^ří^delntrakaverňových injekcí ‘hydrogelu CL PAA:· , *’’ + .> , ;

₇-_órtěch“oba™eni^hematoxy linem^a. eosinem^^ , * ’ ’ : hydrogel CL PAA, vypadající jako homogenní světíemodré^ ^: ' / které, během sedmi dnů, byly .obklopeny tenkými*· pouzdry propojo. ^cí 'tkáně/ které způsobovaly posunutí' a lehkou' kompresi, t rabe- _f ; culí corporum cavernosum'’penisu^ tuniky >albuginea. Pouzdrase-_ >.. . ζ .skládala ,z .tenkých, větši noúJ ’ ' ' ' ' dvou po/í” fibroblástů. Propojovací tkáně trabeculů cprporum. _t ^V cavernosum penisu 'sousedící s ^pouzdry’ byly obvyklé struktury /7 _ma37^7“7^ deHfdv^é^hí^kétsvály 7s·^'

... vláken bez^jakýchkoliv známek degenerace nebo nekrózy při 'histochemické a histologické fohtroieř Na povrchu implantátů hydrogělu CL PAA bylýpozorovány méně^významné shluhy leukocytů a makroíág^ \ntra-trabe^?culární místa byla vyplněna méně výΓ ‘ znamným množstvím kýve a endothelium bylo lehce, -zduřelé. Menší.

arterie á vény byly mírně naplněny krví a měly lehce zesílené /· -ýtgny (primárně následkem-zduření endothelia.a .prol.il.ggagl . .

íibroblastů/ histiocytea Plastických· ^ membránách) . Bylo zjišťováno/, že pouzdra jsou obklopena, granu’lační tkání/ skládájící.se z malého počtu tenkosténných, nově 7 narostlých cév a různých buněk, hlavně histiogenního původu,

-jako íibroblastů/ histiočytů, Některá-nervoyávlákna po impregnování a zkoumání Spielmeyerovou metodou vykazovala změny axonu, myelinové membrány a Schwannových buněk. Nebyly pozorovány žádné mimořádně veliké, buňky jako následek rozkladu cizí látky. Pozorováno bylo zkroucení, lokální zduření a nepravidelné tloušťky nervových tkání, jakož i varikózita a ztráta vláknité struktury v axonu, sférické a kyjovitá zvětšení na jejich koncích a lokální demyelinace/ Byla zjištěna reaktivní proliferace Schwannových buněk, z nichž některé byly hypertrofované;

po 14 dnech leukocytové a makroíágové reakce kolem implantátů hydřogel u CL PAA poněkud zintenzivněly, ale mimořádně velké buňky, schopné rozkládat cizí látku, jak již bylo zmíněno,

·. nebyly zjištěny. Propojovací tkáně pouzder kolem implantátů by- ly, v některých případech, lehce.porézní a skládaly se z náhod- 30 ně uspořádaného kolagenu a elastických vláken a mladých fibroblastů a některé z nich se jevily jako zralejší a skládaly se hlavně že souběžných kolagenových vláken, včetně elastických vláken a fibroblastických elementů. Periíokální granulační tkáň se skládala z malého počtu zploštěných, nově narostlých cév a fibroblastů, obsahujících mírné množství RNA a granulí vysoce sullaťovaných glykosaminoglykanů. Změny v nervových tkáních probíhaly jako lokálně zduřelé axony, ztráta vláknité struktury v nich, vakuolizace, varikózita, hypo- a hypeimpregnace a,.případně, lokální nahromadění oxoplazmy, buď podél nervových vláken nebo na jejich koncích, částečné zhrubnutí myelinové membrány a její dezintegrace na krátké a dlouhé íragmenty, což lze považovat za kompenzačně-adaptivní odezvu na kompresi. V míst- nich lymíatických uzlinách intertrabeculárních místech corporum cavernosum! vénách penisu a v plicích nebyly detekovány částečky hydrogelu CL PAA; ’ po měsíci byly implantáty hydrogelu CL PAA obklopeny tenkým, zralými pouzdry propojovací tkáně, skládajícími se z kruhově uspořádaných kolagenových a elastických vláken s dozrálými íibroblastovými elementy, které byly zjištěny v jejich polích. Nevýznamná diíúzní infiltrace makrofágů a plazmatických buněk·; byla pozorována ve vrstvách implantátů sousedících s jejich povrchem. Trabecule propojovací tkáně corporum cavernosum nebyly strukturně odliěné od kontrolních a byly pokryty normálním endotheliem. V intei—trabeculárních prostorech bylo možno zjistit malé množství krve. Stěny vén a artérií corporum cavernosum nejevily viditelné strukturální změny. Reaktivní změny v nervových vláknech, ve srovnání s předchozím obdobím, byly méně výrazné a projevovaly se jako nepravidelné zesílení nebo zeslabení axonů a lokální hypo- nebo hyperimpregnace;

po třech měsících byl hydrogel hustější a stal se basoíilním. Implantáty byly odděleny od okolních tkání tenkostěnnými pouzdry souběžných kolagenových a elastických vláken s malým počtem fibrocytů mezi nimi. Na povrchu implantátů nebyly pozorovány buňečné elementy. Sousední tkáně s krevními cévami měly

J — > ' .. - 31 - < ;. ϊ normální etrukturú.Glykosaminoglykanyvzákladní.intersticiál-

- ^V _nísubstanci,' vlákAité-formace a.buněčné elementy., propojovací '» _ident i čk< s kontrol ní mi^ · Změny ^.nervových . , vláknech nebyly pozorovány; r-.’ * ' ý ’ , . ** • po 6 měsících měl penis psů tvar a rozměry podle vizuální-.

*' ' ho pozorování-podobné, jako byl pozorovány druhý-sedmý den,. J ú v/ J ..Histologicky.se.amplantáty^<jeyilyjako.integráln^'' pouzdřené, tmavomodré vakuoly. Ppuzdra se skládala z jednoho nebo dvou polí fibrocytů Ά pravidelně uspořádaných tenkých.ko ......Γ^η^ΐΤΪΓ^^^ a žádné sol i S^pní ku^-iYe^ -77 gjjfetgny ani mahroskopickou, ani mikroskopickou vor. Kossovou ,.

metodou. Ve tkáni sousedící s implantátem nebyly pozorovány' / žádné'reaktivní, hemodynamické, degeneration!, nekrotické, zá- .

'nětl ivé > Ji-né. změny, “'včetně tkáňových a buněčných neprávidelnostl. Po impregnaci dusičnanem stříbrným seinervová vlákna;.

.ukázala být virtuálně identická u pokusných ikontrolních zvímístech cqrporum cavernosum a ve vénách penisu a rovněž.^ plicích nebyl zjištěny Částečky hydrogelu CL ,PM.

Podobná’ moříologická. data byly získána, klinickým pokusem.. .....' * Jako zkušební materiál, -byl použit biotopický vzorek hypodermické buněčné tkáně, odebrané zdravému 4.5-ti letému mužskému dobrovolníku, kterému 6 let před biopsií bylo intradermálně injikováno 10 ml nového hydrogelu o koncentraci 8 * CL PAA.

Biotopický vzorek byl fixován v 10 X formalínu, dehydratován v alkoholu vzrůstájícl.koncentrace a byl vložen do parafinu. Preparáty byly obarveny hematoxylinem a eosinem; kolagenová vlákna byla stanovena van Gisonovou metodou a elastická vlákna resorcin-fuchsinem Weigertovou metodou; glykosaminoglykaný byly stanoveny roztoky toluidinové modři při různých hodnotách _PH ’ - poúži-tíS požádováně^chemické a enzymatické kontroly;-koncentrace glykoproteidu a glykógenu byly^stanovovány pomocí PAS-reakce metodou McManus.

- 32 Makroskopicky byl biotopický vzorek oválného tvaru, měkce elastický, světle růžové barvy, bez jakýchkoliv viditelných změn, které by ho odlisovaly od sousedních tkání.

Při mikroskopickém zkoumání všechny vzorky po obarvení hematoxylinem a eosinem nabyly modrou barvu různého stupně intenzity. Hydrogelový implantát byl prostoupen dobře cévně prokrvenou jemnou propojovací tkání, skládající se hlavně z řádně uspořádaných kolagenových a elastických vláken a základní substance, která obsahovala nevýznamné množství buněčných prvků (zpravidla jako neaktivní fibroblásty, protože při obarvení toluidinovou modří při pH 2,8 žádné stopy metachromasy, prokazované glykosaminglykany. nebyly detekovány v cytoplazmě těchto fibroblastů a například solitérních mononuklearních makroíágů).

< *

Tato propojovací tkáň měla cévy situované jako skupiny a se stěnami nepravidelně tloušťky se zploštělým endotheliem.

Znaky akutního a chronického zánětu, například polymorfonukleární leukocyty, epitheloidní buňky, abnormálně velké buňky, schopné rozrušovat cizí materiál a lymfatické i histiocytové iníiltráty se vůbec nevyskytovaly, absentovaly i příznaky alergických reakcí, například lymíocyty, makrofágy a histiocyty, a rovněž příznaky hemodynamických poruch, jako pletora cév, pre-stáza,*hemostáza, trombóza a malignita, na_Př. buněčné nebo tkáňové nepravidelnosti a buněčná proliferate. Soli vápníku nebyly v preparátech detekované ani makro- ani mikroskopicky. Alterativní, t.zn. dystrofické nebo nekrotické změny nebyly zjištěny.

Nebylo pozorováno vláknité pouzdro, obklopující implantát.

Základní metoda nápravy kosmetických nebo funkčních vady lidského těla s použitím nového biokompatibilniho hydrogelu CL PAA spočívá v následujícím:

J .

' _ . _t._ ' ' + ϊ· * * * j “ ³³ “

-\ ' na základě anamnézy, prohlídek a, je-li třeba, , na základě ' obecně přijatelných pro' pacienty., .-kteří... _ maTí býtošetřeni 'chirurgicky ‘(zejména ria individuální-odezvu na antbiotika), se načrtnou předběžné následující závěry: ’ : ’ - ., l .-.. . ; . ; .’ .

. . I . , , . .·* f , _t- ___________________ ' ’ prvé, ^f definujeme orgán, - který má být ošetřen co. do . · . ,í ^Λ > * - . .

jeho tvaru,^rozměrů a funkční působnosti a' - - . ř.. Λ . .» .. . ,í... , ...* . . . — . .4'—.. . . ... ........ , » ' ' - za dr^uhě, rozsah, takti ka . a’ forma ‘ (ambulantní.nebo

'. ' ; ' ' í _ . A .. ' ' hospitalizace) budoucího ošetřování;

*' t '. . - ; * ' VS- a. , , . \ ...

(zpravidla lokální infiltrace), _+r . a, : . _ύ ^? ♦ ·· . ^Jb ‘

'.Steriϊη’ί 'hydrogel Clí PAA, . doplňkově^;saturovaný antibakteriální preparací, *se vstřikuje pomalu (obvykle.nadvakrát nebo natřikrát) do'místa, které má být ošetřeno, při přibližně, nor-----__Γ^-ΐ-ηί1-+.^ΤθΞΓ^—teplotě.^^ ---2—L,------:—

Tato metoda je nejčastěji aplikovatelná v plastické chirurgii prsu (výhodně v případě aplazienebo, hypomastie) a v plastické chirurgii penisu^ případě ’ impotence..maniíeBtované chabou'erekcí následkem stáří nebo^ po úrazu.. . .. ... ... .

Tak v plastické chirurgii prsu se hydrogel CL PAA, který má výhodně koncentraci v mezích 5,0 až 6,0 % a nejvýhodněji v mezích 5*, 0 až 6,0 %, iňjikuje retromamalně, intrakapsulárně a/nébo subíasciálně ve dvou nebo třech stupních v závislosti na individuální anatomii prsu, obvykle v množství 40 až 160 ml (ale nikoliv více než 200 ml) na jeden prs a stupeň.

V plastické chirurgii penisu se hydrogel, který má výhodně koncentraci 4,5 až 6,0 % a nejvýhodněji 5,0« zpravidla intrakavernálně iňjikuje do třech trabecuiárních segmentů z obou stran'podél penisu. Celkové množství hydrogelu CL PAA, potřebné pro jednu faloplastickou operaci, je výhodně v mezích 40 až 60 ml. Specifické množství hydrogelu, které se má injektovat,

- 34 se vypočítává z kritéria přijatelného objemu a resilience pěnisu, s vyloučením možné komprese močové trubice. ·

Nový biokompatibilni hydrogel byl klinicky vyzkoušen.

Specificky byl aplikován pro kosmetické opravy íaciálních vrozených vad a v plastické chirurgii prsu v případech aplazie a hypomastie u Žen.

Na příkladech jsou předloženy následující zprávy pacientů;

(1) Pacient M. (zpráva o případu č. 15D), nar. 1965.

Diagnóza; Vrozená pravostranná mandibulo-neuro-muskulární * cranioíacialní mikrosomie. _t

Ošetření: (celková anestézie: intravenózně a NLA) λ první stupeň (listopad 1993): dvě injekce 10 ml 3,5 %-ního hydrogelu CL PAA intramuBkulárně; druhý stupeň (Červen 1994): í injekce a hydrogel (15 ml) jako v prvním stupni.

Zaznamenané zlepšení: pravá a levá strana obličeje se jeví ť » symetrické.

(2) Pacientka L. (zpráva o případu č. 12), nar. 1967, rodila

Diagnóza: Symetrická aplasie prsů.

Ošetření: ve třech stupních (lokální anestézie: 0,5 % roztok novokainu, SO ml): první stupeň (leden 1991): intramuskulární, retromammární a subcapsulární injekce 140 ml 6,0 %-ního CL PAA do obou prsů; druhý stupeň (březen 1991): injekce a hydrogel (40 ml) jako v prvním stupni; třetí stupeň (květen 1991): injekce a hydrogel (60 ml) jako v předchozích stupních.

Zaznamenané zlepšení,;

prey pacientky. ma j1tvar a rozměr.odpovídající postavě; jejich pružnost je ’podobná.^přírodním^měkkým tkáním <31 Pacientka N. (zpráva o Případu g,.78) , nar. :1969; nerodila' ’* /. . ( '..,7

Diagnóza; . Symetrická hypomast i e - r' _1H . / -,

•.-OSetření £lokál.n^^

,. první stupeň (únor 1993):' . .. intramuskulárňi: retřomammárňí·· a subcapsulární

—.... .

·. , ...._____druhý stupeň (březen 1993) : ______ injekce a hydrogel (100 ml)' jako v prvním stupni; .· Zaznamenané slepení : prsy .Pacieniky mail tvar arozmér odpo- ’ < * vídající postavě;< jejich. pružnost je v..

. ' podobnápřírodnímměkkým tkáním.· -y .4 ____

1967,. rodila..

Diagnóza: Symetrická hypomastie.

OSetření: (lokální anestézie: 0.5 » roztok novokainn. 30 ml):

první, stupeň, (leden 1994):. , .

./ . intramuskvlární, retromammárníy a. subcapsulární :

, J injekce. Í30 ml 6,0 %-ního CL PAA do obou prsů;

* druhý stupeň (červenec 1994)';

injekce a hydrogel (60 ml) jaXo v prvním stupni; Zaznamenané zlepšení; prsy pacientky mají tvar a rozměr odpovídající postavě; jejich pružnost je podobná přírodním měkkým tkáním.

Eíekt ošetření v tomto případe byl kromě toho vyhodnocován z dat, která byly získána pogítadovov axiální tomograíií hrudi na tomograíu SIEMENS SONkTHON CB ÍNSmeeko) skenováním sekcí JS-V ^ hloubky ošetřeného prsu-v--poloze-vleíe^ mogřamy z mnohých, které byly sejmuty. Jsou zde reprodukovány j ako ;· ^ . · <

^: > i - 36 - ..·%

... d Obr. 1 ilustruje levý prs po ošetřeni malformace a korekce / 3 velikosti;

_Obr ilustruje nápravu tvaru a velikosti pravého prsu. . ,5^

..ζ

Jak je možno na vyobrazeních vidět, oba prsy PO ošetřeni byly shledány v normálním stavu a mají pravidelný tvar. Tloušťka kůže nepřekračuje 2,0 mm, bradavky a areoly jsou normální (nedeformované a nezatažené). Hypoplastická žlaznatá tkáň obou prsů je ventrálně posunuta hydrogelem CL PAA (rozdílná hustota ve srovnání s hustotou tkáně) injikovaným do retromammarního prostoru (hustota žlaznaté tkáně je +3,0 až +4,0, hustota hydrogelu je +4,6 až +7,2 a hustota hypodermní tukové buněčné tkáně je -73 až -95 jednotek Hu).

P.ozměrV glandula mammaria po ošetření jsou následující 7,4 cm. pravostranně a 8,0 cm levostranně, 5,0 cm pravost.ranně a levostranně.

lymfatické uzliny nejsou zvětšené, kostní tkáně prsních kostí a žeber jsou ormálně strukturované.

Laboratorní, pokusná a klinická data umožňují učinit závěr, že nový hydrogel CL PAA je chemicky a biologicky stálý, inertní, biokompatibilni a perfektně vhodný pro implantace endopretéz, pro tamponování kaveren a pro vytváření vnitrotkáňových míst pro ukládání lékařských preparátů s prodlouženou dobou působnosti.

Nový biokompatibilni hydrogel byl zkoušen jako médium pro dlouhodobou kardio- a encefalograíii na vzorcích, majících koncentraci CL PAA v mezích 4,0 až 8,0 % a připravených z 0,9 ?á-ního vodného roztoku chloridu sodného a octanu sodného.

příčně: předozadně:

Místní

Zkoušky zahrnovaly následující:

měřeni elektrického měrného odporu hydrogelu, uspořádaného jako 1 mm vrstva mezi elektrografickou elektrodou deskového ’l J t. -.J . . f · ' · ......- . : _t . ......- i — — . - - - - . ·/ * - 37...

’ · ¹. '' ^v’- · ···.' .Λ· . ' . · ' ' · .·. . t typu (typ. EKMK-6) ó průměru ‘9 mm tloušťce 3 mmjs pocínovanou, poměděnou nebo, poh li ní kovanou kontaktním, plochou, ,._ . Γ. . ; , , ' * .

τγ,-,π, ·τ · jr -gn ·λτ·Λ:.-ι. -p_- -^-=u^nr · j»,.·, vi..:- r;ť~ Ei,'j·,.. i y nr -τ - -jjj - — 1^-,;·»^^. j-ς: —— - ,.-^u > měření elektrického odporu co do jeho '24-hodinové , it ' 4 » . . ·. ·, stability a ’ ., >- -1-1—- ...1.-/- i —1- ,- .—.I--------./ — - .-,1 -j· □------—. ...... .

» , l , .* .«ř · · ₍n stanovení'schopnosti snášet ..prodlouženou (i, '7. a 15 denní .

_v .< pozorování )- aplikaci,.v^bl^ij^^' na skupině dobrovolníkď z lékařského personálu,tskládající se i , * ....¹ .. '. ' / ‘ ,. > . - ze' dvou mužů a dvou žen. ·’ .

··.·'· ‘ -O . .. ·. .* ..

Elektrický měrný odpor byl od 8,0-db 9,0 kOhm/cm u: vzorků.

BCH6 a BCH7 a od 1D, 0 do-2.0,0 kOhm/cm u-vzorků-BCH8 a BCH9;..

. a zůstával nezměněn’u^každého ze vzorků po d6bu~24 hodin, měření byla opakována s komerční^elektrodovou*pastob od firmy? ' SIEMENS AG, která má elektrick<měrný’ odpor '3,0, kOhm/cm. ’ ;

_ ‘ '-yeávšéch^;<5žkbuěkách-;by4;a --poia^kzo>^at.e.l;nost-pocínovaných elektrod 450 mv, .poměděných elektrod 150 mv\ pohl i ní kovaných^' elektrod 700 mV. Při měření elektrického měrného odporu nebyla pociťována parazitní polarizace.

?ři vizuálním’pozorování žádné z- aplikač.ních míst na kůži během sledovaných, časových úseků’ nevykazovalo viditelné podráž dění (zčervenání nebo svědění) a, co více, ani poranění kůže (maceraci). 15-tý den ý jednom případě u jedné ženy kůže kolem náplasti, kryjící hydrogelovou aplikaci, zrŮŽověla.

Spontánní vytěkání hydrogelu CL PAA ε viskozitou 1 až 1,1 Pa.s (10 až 11 poisé), z prostoru mezi horizontálně uspořádanými měřicími elektrodami nebo zpod náplastí nebylo pozorováno.

Tato data ukazují-, že nový hydrogel CL PAA je apl.ikováte 1 ný jako imerzní médium pro monitorování elektrofyziologických parametrů lidského organismu a pro elektroíoretické injikování léků přes kůži.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Biokompatibilni hydrogel obsahující polymer na základě akrylamidu, připravený s použitím iniciátoru radikálové polymerlzace v apyrogenní vodě jako disperzním médiu, vyznačující se tím. Že polymer je zesíťovaný polyakrylamid, připravený s použitím biokompatibilniho zesíťovacího činidla,

2. Biokompatibiini hydrogel jako v nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje zesíťovaný polyakrylamid, připravený s použitím methylen-bis-akry1amidu jako zesíťovacího Činidla a směsi persulfatu amonného a tetramethylendiaminu jako iniciátoru polyáerizace.

3. Biokompatibilni hydrogel jako v nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje od 3,5 do 9,0 35 hmotnostních zesíťovaného polyakrylamidu,

.4 , Biokompatibiini hydrogel jako v nároku 1, vyznačující se tím, že dále obsahuje fyziologicky neutrální ve vodě rozpustnou sůl.

5. Biokompatibilni hydrogel jako v nároku 4, vyznačující se tím, že obsahuje chlorid sodný jako fyziologicky neutrální ve vodě rozpustnou sůl.