CZ231797A3 - Process for preparing clavulanic acid and/or salts thereof - Google Patents
Process for preparing clavulanic acid and/or salts thereof Download PDFInfo
- Publication number
- CZ231797A3 CZ231797A3 CZ972317A CZ231797A CZ231797A3 CZ 231797 A3 CZ231797 A3 CZ 231797A3 CZ 972317 A CZ972317 A CZ 972317A CZ 231797 A CZ231797 A CZ 231797A CZ 231797 A3 CZ231797 A3 CZ 231797A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- fermentation
- soluble phosphate
- phosphate
- medium
- culture
- Prior art date
Links
- HZZVJAQRINQKSD-UHFFFAOYSA-N Clavulanic acid Natural products OC(=O)C1C(=CCO)OC2CC(=O)N21 HZZVJAQRINQKSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 34
- HZZVJAQRINQKSD-PBFISZAISA-N clavulanic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1C(=C/CO)/O[C@@H]2CC(=O)N21 HZZVJAQRINQKSD-PBFISZAISA-N 0.000 title claims description 34
- 229960003324 clavulanic acid Drugs 0.000 title claims description 34
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 36
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 88
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 88
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims abstract description 68
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 63
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims abstract description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 45
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 241000424942 Streptomyces clavuligerus ATCC 27064 Species 0.000 claims abstract description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 28
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 19
- 229940043430 calcium compound Drugs 0.000 claims description 5
- 150000001674 calcium compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 4
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 229940085991 phosphate ion Drugs 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 abstract description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 abstract description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 60
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 26
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 14
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 12
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 12
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 12
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 12
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 9
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 7
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 6
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 5
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 4
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical class [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- -1 glycerol Chemical class 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 4
- 241000187433 Streptomyces clavuligerus Species 0.000 description 3
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 3
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 3
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 3
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 3
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N po4-po4 Chemical compound OP(O)(O)=O.OP(O)(O)=O QVLTXCYWHPZMCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108020004256 Beta-lactamase Proteins 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N Trioleoylglycerol Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011609 ammonium molybdate Substances 0.000 description 1
- 235000018660 ammonium molybdate Nutrition 0.000 description 1
- APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P ammonium molybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 1
- 229940010552 ammonium molybdate Drugs 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 description 1
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L calcium carbonate Substances [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000002542 deteriorative effect Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 150000003109 potassium Chemical class 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 229930010796 primary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000024053 secondary metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229940078499 tricalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000391 tricalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019731 tricalcium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 description 1
- 229940117972 triolein Drugs 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 150000003952 β-lactams Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Je popsán způsob produkce kyseliny klavulanové a/nebo jejich soli pomocí fermentace s vybranými kmeny Streptomyces clavuligerus s přísnou kontrolou koncentrace rozpustného fosforečnanu přítomného během fermentace a s případným použitím uhlíkových zdrojů jako jsou lipidy, výhodně triglyceridy.
Dosavadní stav techniky
Kyselina klavulanová je molekula vzorce
jejíž použitelnost je založena na její schopnosti inhibovat enzymy nyzývané beta-laktamasy, které jsou vlastní některým Gram-pozitivním a Gram-negativním patogenním mikrobům jako je Escherichia coli. Klebsiella aerogenes a podobně; a které, díky svému působení, jim udělují odolnost k některým beta-laktamovým antibiotikům. Výsledkem je, že kyselina klavulanová smísená s uvedenými antibiotiky zvyšuje jejich antibakteriální spektrum.
Je známo, že produkce kyseliny klavulanové se provádí některými kmeny, patřícími do rodu Streptomyces, jako je, například, Streptomyces clavuligerus ATCC 27064, Streptomyces j umonj inens i s NRRL 5741 a podobně.
Jak již bylo popsáno v předchozích patentech (evropský patent 0182522 Bl), produkce kyseliny klavulanové může být zvýšena ve vsádkové fermentaci, když se asimilovatelný zdroj uhlíku jako je, například glycerol nebo maltosa, přidává také během fermentace místo přidávání pouze na počátku. Nicméně zvýšení produkce tímto způsobem je velmi nízké. V souladu s tím je objektem předloženého vynálezu nalezení způsobu pro získání kyseliny klavulanové a/nebo jejich solí s produkcí, které je významně vyšší než ta, které bylo dosaženo postupy známými v oboru.
Mnoho autorů demonstrovalo inhibiční účinek fosforečnanů na produkci antibiotik (Martin J.F., 1977, Adv.Biochem.Eng. 6:105:127). Specificky, byla zjištěna inhibice syntézy cefalosporinů Streptomyces clavuligerus fosfáty (Lubbe C. a spol 1985, Arch.Microbiol. 140:317-320 a Lubbe C. a spol.1984, FEMS Microbiol.Lett. 25:75-79; Aharonowithz ¥. a spol. 1977, Arch. Microbiol. 115:169-173; Jhang J. a spol. 1989, FEMS, 57:145-150) a také inhibiční vliv fosforečnanů na syntézu kyseliny klavulanové stejným mikroorganismem (Lebrihi A. a spol. 1987, Appl.Microbiol.Biotechnol. 26:130-135; Romero J. a spol. 1984, Appl. Microbiol.Biotechnol. 20:318-325). Avšak na rozdíl k poznatků uváděným ve výše zmiňovaných článcích, bylo nyní zjištěno s překvapením, že místo negativního účinku fosforečnanů na produkci kyseliny klavulanové a/nebo jejich solí, dosahuje-li koncentrace rozpustného fosforečnanu v kultivačním mediu optimálního rozmezí a je v tomto rozmezí udržována, zvyšuje se produkce kyseliny klavulanové a/nebo jejich solí. Navíc bylo nalezeno, že přísná kontrola koncentrace rozpustného fosforečnanu v kultivačním mediu má větší vliv na zvýšení produkce systému než aktuální přídavek živin. Vsádkový nebo po 1o-kontinuální (fed-batch) kultivace Streptomyces clavuligerus byla použita pro produkci kyseliny klavulanové jakož i jiných antibiotik nebo molekul typicky sekundárního metabolismu. Pro účely tohoto popisu výraz vsádková kultura označuje fermentaci, ve které jsou živiny zaváděny do kultivačního media pouze na počátku a půda je extrahována z fermentačního tanku pouze na konci procesu. Výraz polo-kontinuální (fed-batch) kultura označuje fermentaci, ve které jsou živiny zaváděny do kultivačního media nejen na počátku ale také během fermentace a půda je extrahována z fermentačního tanku pouze na konci procesu. Způsob vsádkové nebo fed-batch produkce kyseliny klavulanové vykazuje některé speciální rysy fermentace a to, že významně na počátku stoupá viskozita, s výsledkem obtížného udržování přijatelné koncentrace rozpuštěného kyslíku pro prodloužení produkční fáze po delší časové periody. Následkem toho se objevují fragmentace mycelia, snížení viskozity a redukce produkce, což je na konci procesu nežádoucí.
Kontinuální kultura se výhodně aplikuje pro získání biomasy, aminokyseliny a jiných primárních metabolitů (Hospodka J. 1966, Theoretical and Methodological Basis of Continuous Culture of Microorganisms, str. 493-645; Málek J a Fencl Z. vyd. Academie Press New York). Avšak použití kontinuální kultury pro získání sekundárních metabolitů (antibiotik) nebylo skutečně popsáno nebo bylo provedeno s omezenou účinností (Vu-Trong K. a Grey, 1982 Biotechnol. Bioengineering 24; 1093-1103; Trangott C.S. a spol. 1993 Apol.Microbiol.Biotechnol. 39:433-437; Noack D. 1988,
J.Bas.Microbiol. 28:101-106). Pro účely předloženého popisu označuje výraz kontinuální kultura fermentaci, ve které jsou živiny zaváděny do kultivačního media jak na začátku tak také během fermentace a některé podíly půdy jsou extrahovány z fermentačního tanku během fermentace a nejen na jejím konci. Nyní bylo nalezeno, že přidáním rozpustného fosforečnanu do kultivačního media a/nebo řízením a zachováváním jeho koncentrace během fermentace, je možné a výhodné získat kyselinu klavulanovou a/nebo její sole v kontinuální kultuře s vysokou produkcí. V kontinuálním procesu pomocí vhodného ředění kultury, se viskozita postupně snižuje během procesu, což umožňuje, aby byla koncentrace rozpuštěného kyslíku udržována (> 40 %) po delší časová období bez zvýšení míchání, s vyloučením fragmentace mycelia a s prodloužením periody produkce kyseliny klavulanové. Důsledkem přídavku živin a vody je dosaženo kompletního naplnění kapacity zařízení, což vyžaduje kontinuální extrakci půdy během fermentačního procesu, bud občasně nebo kontinuálně, za účelem udržení vhodného pracovního objemu. Tímto způsobem a řízením procesu přídavkem rozpustného fosforečnanu ke kultivačnímu mediu během procesu se dosáhne prodloužení fermentačního cyklu a zvýšení celkové produkce, zvýšení vzhledem k výtěžku produkce na geometrickou kapacitu zařízení.
Podstata vynálezu
V souladu s tím poskytuje předložený vynález způsob produkce kyseliny klavulanové a/nebo jejich solí, kultivací vybraných kmenů Streptomyces clavuligerus ATCC 27064 a/nebo jejich mutantů, v submerzní fermentaci s provzdušňováním a mícháním, ve vsádkové, polokontinuální nebo kontinuální kultuře, ve které koncentrace rozpustného fosforečnanu přítomného v kultivačním mediu na počátku a během fermentace je fixována a/nebo udržována v rozmezích, v závislosti na každém použitém typu kultury, 500 až 4000 mg/1 na počátku fermentace ve vsádkových kulturách nebo v případě polokontinuální (fed-batch) nebo kontinuální kultury, a 600 mg/1 na počátku fermentace a mezi 20 a 150 mg/1 posledně uvedené.
mezi 150 během
Způsob produkce kyseliny klavulanové a/nebo jejich solí podle předloženého vynálezu se provádí za přítomnosti zdrojů asimilovatelného C a N a popřípadě anorganických solí. Fermentace se provádí za podmínek provzdušňování a v submerzní kultuře.
Optimální fermentační teplota výhodně leží mezi 20 °C a 40 °C, zejména mezi 22 °C a 30 °C.
Zdroje C mohou být přidány jako jednoduché nebo komplexní živiny, pouze na počátku (v případě vsádkově kultury) nebo v průběhu fermentace pomocí střídavého nebo kontinuálního přidávání, v případě polo-kontinuální (fed-batch) nebo kontinuální kultury. V závislosti na použitém kmenu zahrnují tyto zdroje C karbohydráty (dextrin, škroby, maltozu a podobně), polyoly jako je glycerol, například, lipidy (hlavně triglyceridy, bud přírodní nebo syntetické) a, obecně, jakýkoliv jiný zdroj C, který umožňuje růst mikroorganismů. Bylo zjištěno specificky, že lipidy a specifičtěji přírodní nebo syntetické triglyceridy, mohou být považovány za jeden z preferovaných zdrojů pro provedení způsobu podle vynálezu, přičemž ze známého stavu techniky není tento efekt znám. Ve skutečnosti bylo nalezeno, že při použití takových zdrojů uhlíku, stejně jako bez pomoci jediného počátečního přídavku ke kultivačnímu mediu (vsádková kultura), může být produkce kyseliny klavulanové a/nebo jejich solí výrazně zvýšena jednoduše sledováním toho, aby koncentrace rozpustného fosforečnanu zůstala v mezích definovaných předloženým vynálezem.
Kultivační medium by mělo také obsahovat asimi1ovatelny zdroj organického nebo anorganického N, jako je, například, moučka ze sojových bobů, výluh z kukuřičných stonků, rozpustné destilátové zbytky, kvasničné extrakty, moučku z bavlníkových semen, pepton, kasein nebo síran amonný.
Různé anorganické sole, jako jsou chloridy, sírany a fosforečnany sodné, draselné, amonné, sole železa, vápenaté a hořečnaté, mohou být také začleněny do kultivačního media.
Koncentrace kyseliny klavulanové může být stanovena mikrobiologicky za použití mikrobiální produkce beta-laktamasy, jako je, například, Klebsiella aerogenes, i když je výhodné provádět stanovení pomocí vysoce účinné kapalinové chromatografie.
Extrakce kyseliny klavulanové nebo jejich solí z půdy může být provedena způsobem, jakým se jiná antibiotika, specificky jiné beta-laktamy, extrahují, za použití iontovýměnných pryskyřic nebo rozpouštědel nebo jakýmikoliv jinými známými běžnými metodami.
Rozpustný fosforečnan v počátečním mediu může být stanoven jednoduchým a rychlým postupem, například pomocí komerčího kitu (Boehringer Mannheim Automated Analysis for BM/Hitachi System 704). Principem metody je reakce anorganického fosforu s molybdatem amonným. Tento anorganický fosfor je pak vyjádřen jako fosforečnan. Pro analýzu rozpustného fosforečnanu by měl být vzorek (odebrán homogenně z kultivační půdy) filtrován předem přes Millipore filtr o velikosti pórů 0,45 pm nebo podobně, z účelem odstranění pevných látek. Tento vzorek by měl být odebrán po sterilizaci kultivačnho media, protože koncentrace rozpustného fosforečnanu se může měnit podle sterilizace procesu. Vzorky mohou být také odebírány během fermentačního procesu.
Zkouška celkového fosfátu se provádí odehráním 1 ml celkové půdy a přídavkem 1 ml kyseliny sírové a 5 ml kyseliny dusičné. Tento roztok se odpařuje zahříváním až má konečný objem 1 ml transparentního roztoku. Tento konečný objem se upraví na 25 ml destilovanou vodou a zkouší se výše uvedenou metodou pro rozpustný fosforečnan.
Jestliže se fermentace provádí vsádkově bylo zjištěno, že optimální koncentrace rozpustného fosforečnanu na počátku fermentace by měla být mezi 500 a 4000 mg/1 a výhodně mezi 800 a 1600 mg/ml.
Jestliže vzhledem k charakteru použitých výchozích materiálů a jejich koncentraci je hladina rozpustného fosforečnanu nad nebo pod těmito hranicemi, měla by být upravena. Proto se může, je-li hladina pod spodní hranicí, přidat více anorganického fosforečnanu před nebo po sterilizaci, například ve formě draselné nebo sodné soli, až je dosaženo požadované koncentrace. Alternativně může být část rozpustného fosforečnanu vysrážena, je-li jeho koncentrace velmi vysoká přídavkem jakéhokoliv srážedla, například pomocí sloučeniny vápníku jako je hydroxid nebo octan vápenatý, nebo jakýmkoliv jiným systémem, který zajistí, že je dosaženo tohoto cíle.
V souladu s předloženým vynálezem bylo pozorováno až 5-násobné zvýšení produkce v porovnání s fermentačním systémem bez řízení počátečního rozpustného fosforečnanu v mediu ve vsádkové kultuře. Tabulka I ukazuje výsledky několika fermentací prováděných s optimální koncentrací rozpustného
| fosforečnanu a | mimo tuto koncentraci. | |||
| Tabulka I | ||||
| Fermentace | rozpustný fosforečnan | kyselina | klávu lanová | |
| č. | mg/1 | 72 h pg/ml % | 96 h pg/ml | % |
| 1 (srovnávací) | 18 | 311 100 | 420 | 100 |
| 2 (srovnávací) | 100 | 560 180 | 790 | 188 |
| 3 | 900 | 1410 453 | 2210 | 526 |
| 4 | 1580 | 1550 495 | 2240 | 533 |
| 5 | 3000 | 1410 453 | 1750 | 416 |
| 6(srovnávac í) | 7000 | 410 131 | 780 | 186 |
| Zvýšení v | procentech (%) znamená | produkci kyseliny |
klavulanové a/nebo jejich solí, vyjádřenou jako výsledek vynásobení konečné hodnoty v pg/ml 100 a podělením tohoto výsledku 311 (v případě 72h inkubace) nebo 420 (u 96 h), což představuje výsledky fermentace, ve které koncentrace rozpustného fosforečnanu leží mimo optimální rozsah.
Tento fosforečnan by měl být rozpustný ve fermentační břečce, jak je zřejmé z následujících výsledků v tabulce II, kde podobné koncentrace celkového fosforečnanu vedly k fermentacím s velmi rozdílnými výsledky v závislosti na tom, zda rozpustný fosforečnan leží nebo neleží v optimálních hranicích.
Tabulka II
Fermentace
č.
rozpustný celkový fosforečnan fosforečnan mg/1 mg/1 kyselina klavulanová
Pg/l (96 h)
1580 (srovnávací) 230
2380
2265
2240
920
Rozdíl v růstu mikroorganismu při různých fosforečnanových koncentracích se nejeví být zodpovědný za rozdíl v produkci, alespoň jako hlavní faktor. V tabulce III je možno pozorovat, že jsou různé hladiny produkce pro podobn růsty, takže se fosforečnanová hladina jeví opět zase jako způsobující zvýšení v produkci. Myceliální objem byl stanoven v odstředivce při 2500 g po 10 min (g znamená gravitační sílu).
Tabulka III
Fermentace rozpustný f os f orečnan mg/ml % myceliál. obj emu h 96 h kyselina klavulanová h
h pg/ml
| 1 (srovnávací) | 18 | 23 | 22 | 311 | 420 |
| 2(srovnávac í) | 100 | 22 | 22 | 560 | 790 |
| 3 | 900 | 30 | 30 | 1410 | 2210 |
| 4 | 1580 | 30 | 30 | 1550 | 2240 |
| 5 | 3000 | 30 | 30 | 1410 | 1750 |
| 6(srovnávac í) | 7000 | 27 | 28 | 410 | 780 |
Během fermentační periody je možné provádět způsob fed-batch přídvkem fosforečnanu a také zbytku živinm distribuovaných celou fermentací. Bylo nalezeno, že optimální koncentrace celkového rozpustného fosforečnanu (počátečního a přidaného) je mírně menší než koncentrace ve vsádkovém způsobu a leží mezi 400 a 2000 mg/1.
Tento vstup by měl být proveden takovým způsobem, že počáteční koncentrace je mezi 150 a 600 mg/1 a že koncentrace rozpustného fosforečnanu ve fermentaci je mezi 20 a 150 mg/1. Proto je třeba provádět vstup rozpustného fosforečnanového iontu nebo jakékoliv srážecí vápenaté sloučeniny, jako v případě vsádkové fermentace, v závislosti na tom, zda je vyžadováno zvýšení nebo snížení fosforečnanové koncentrace, za účelem jejího zachování v daných hranicích. Tabulka IV představuje výsledky několika polo-kontinuálních fermentací provedených při různých koncentracích rozpustného fosforečnanu, přítomného na počátku a přidaného.
Je pozorováno, že celkové množství přidaného fosforečnanu je žádoucím způsobem vyšší bez zhoršení produkce, když se uvedený přídavek provádí během fermentace místo na jejím počátku. Všechny pokusy udržují koncentraci rozpustného fosforečnanu ve fermentaci na uvedené koncentraci s výjimkou fermentací č. 8, 9 a 10, ve kterých byla koncentrace nižší než je požadováno a č. 16, kde koncentrace je vyšší.
Tabulka IV
Fermentace rozpustný fosforečnan kyselina klavulanová (mg/1)
| č . | počáteční | celkový | pg/ml | % |
| 8 | 80 | 0 | 990 | 33 |
| 9 | 265 | 0 | 1230 | 41 |
| 10 | 520 | 0 | 2400 | 80 |
| 11 | 990 | 0 | 2080 | 69 |
| 12 | 1530 | 0 | 1920 | 64 |
| 13 | 228 | 618 | 3000 | 100 |
| 14 | 510 | 570 | 4020 | 134 |
| 15 | 722 | 594 | 3270 | 109 |
| 16 | 950 | 603 | 2730 | 91 |
| 17 | 278 | 1710 | 3600 | 120 |
| 18 | 230 | 2280 | 3360 | 112 |
| V kontinuální kultuře | se pomocí | vhodného ředění | kul tury | |
| během procesu | kont inuálně | redukuje viskozita, což umožňuje | ||
| udržení koncentrace rozpuštěného kyslíku (> 40 %) po | delší | |||
| časová období | bez zvýšení | mí cháni, s | vyloučením fragmentace |
mycelia a prodloužení periody produkce kyseliny klavulanové. Jako následek přídavku živin a vody je dosaženo úplné naplnění instalované kapacity, což vyžaduje kontinuální extrakci půdy za účelem udržení vhodného pracovnío objemu. Tímto způsobem a kontrolováním způsobu přidáváním rozpustného fosforečnanu ke kultivačnímu mediu během procesu, se dosáhne prodloužení fermentačního cyklu a zvýšení celkové produkce, zvýšení pokud jde o produkční výtěžek na geometrickou kapacitu zařízení.
V kontinuální kultuře, jako v předchozích případech, ve vsádkovém a polo-kontinuálním provedení se provádí počáteční přídavek rozpustného fosforečnanu. Tento přídavek je obecně menší než pro vsádkové a polokontinuální kultury a je řádově 150 až 600 mg/1, výhodně na počátku 200 až 400 mg/1, následující koncentrace v břečce stejného řádu, 20 až 150 mg/1 se udržuje po delší dobu (50 až 100 hodin).
V kontinuálních kulturách, jako je vsádková nebo po 1o-kontinuální fermentace, se vstupy rozpustných fosforečnanových solí nebo vápenatých sloučenin nebo jiných účinných sekvestračních činidel provádějí za účelem ustavení potřebných počátečních koncentrací v každém případě a pro udržení požadované koncentrace během fermentace. Přídavek všech rozpustných fosforečnanových solí je podobný nebo mírně vyšší než ten, který se použije v polo-kontinuální fermentaci.
Navíc se přidává voda ke kultivačnímu mediu od 32 hodin dále, s cílem udržení viskozity břečky na hodnotách pod 700 cP, které umožňují zvýšení množství živin přidaných ve tradičních systémech, udržení hladiny rozpuštěného kyslíku pod 40 % a prodloužení produkce kyseliny klavulanové až na 150 až 170 hodin.
Během celého procesu se dosáhne celkového ředění 1,5 až
1,6, proti 0,9 až 1,1 pro tradiční kultury, co činí geometrickou kapcitu zařízení ekonomicky životaschopnou.
Způsob se provádí přídavkem živin k počátečnímu mediu kontinuálně během fermentace. Tyto živiny jsou hlavním zdrojem uhlíku. Od 100 hodin dále se provádí kontinuální nebo přerušovaná extrakce břečky v poměru 2,5 až 14 % objemu fermentoru na den za účelem udržení konstantního objemu a viskozity media pod 700 cP. Způsob může být prodloužen až na 160 až 170 hodin.
Příklady 19 až 25 jsou reprodukovány v tabulce V s fed-batch a kontinuálními kulturami, s různými živinami a různými koncentracemi nebo vstupy rozpustných fosforečnanů
Tabulka 5
| c. | fermentace | doba (h) | rozpustný mg/1 počáteční | f osf orečnan přídavek |
| 19 | polo-kont inuální | 132 | 150 | 720 |
| 20 | II | 135 | 241 | 550 |
| 21 | kontinuální | 172 | 495 | 625 |
| 22 | II | 150 | 475 | 1080 |
| 23 | n | 172 | 500 | 1120 |
| 24 | II | 155 | 445 | 1145 |
| 25 | II | 150 | 260 | 1560 |
tabulka 5 (pokrač.) přídavek ředění extrakce živin 100 h % den (O.P.S) klavulanová pg/ml aktivita
K/m3g
| Weichol- | 0,96 | — | 3150 | 1,63 |
| 92 | ||||
| olej sojo- | 1,10 | — | 3710 | 2,20 |
| vých bobů | ||||
| Priol. 1 | 1,32 | 2,5 % | 3890 | 2,77 |
| + glycerol | ||||
| II | 1,40 | 9 % | 2445 | 1,85 |
| fl | 1,61 | 14 % | 2870 | 2,49 |
| 11 | 1,57 | 14 % | 2680 | 2,27 |
| Priolube | 1,42 | 9 % | 2660 | 2,06 |
Weichol-92R - syntetický triglycerid
INDUSTRIA QUIMICA LASSEM
PriolubeR - g1ycery1tri o 1eát
UNICHENTA (Holandsko)
O.P.S - objem po sterilizaci
Pro ilustraci slouží následující příklady.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 (srovnávací)
Připraví se inokulační medium následujícího složení:
- rybí moučka - 2 g
- glycerol - 1,5 g
- rozpustný škrob - 1,5 g
- uhličitan vápenatý - 0,2 g
- destilovaná voda q.s. 100 ml pH se upraví na 6,7 a medium se rozdělí do 250ml Er1enmeyerových baněk v množství 40 ml na baňku. Baňky se uzavřou a sterilizují při 121 °C 20 minut.
Takto připravené medium se inokuluje se suspenzí spor mutantního kmene, který nadměrně produkuje kyselinu klavulanovou, získaného pomocí stupně mutace Streptomyces clavuligerus ATCC 27064 s
N-methy1-N'-nitro-N-nitrosoguanidinem a několika stupni mutace s ultrafialovým zářením. Tato suspenze se připraví šikmá nebo plochá se živným mediem umožňujícím růst a sporulaci.
Po inokulaci se medium inkubuje 2 dny při 25 °C na rotační míchačce s excentrici tou 5 cm při 250 ppm.
Takto připravená kultura se použije pro inokulaci v podílu 5 % fermentačního media následujícího složení:
- moučka ze sojových bobů - 4 g
- kukuřičný dextrin - 1 g
- MOPS pufr - 1 g (3-[N-morfolino] propansulfonová kyselina
| - chlorid vápenatý | - | 10 mg |
| - chlorid sodný | - | 10 mg |
| - chlorid hořečnatý | - | 10 mg |
| - octan sodný | - | 0,1 g |
| - olej sojových bohů | - | 2 g |
| - destilovaná voda | q.S. | 100 ml |
| pH media se upraví na 7,0 | a medium | se rozdělí do 250-ml |
| baněěk v poměru 30 ml na baňku. | Baňky se | uzavřou a sterilizují |
minut při 121 °C. Po sterilizaci se měří rozpustný fosforečnan najednou v baňkách, získá se hodnota 100 mg/1.
Jako příklad a za účelem ilustrace výsledků fermentace č. 1 uvedené v tabulce I bylo do každé baňky přidáno 0,5 ml 0,5% roztoku hydroxidu vápenatého. Po přídavku byla opět hodnocena koncentrace rozpustného fosforečnanu v jedné z baněk, nyní byla získána hodnota 18 mg/1, a při této koncentraci byla provedena uvedená fermentace č. 1.
Takto připravené a inokulované fermentační medium se inkubuje při 25 °C v rotační třepačce s excetricitou 5 cm při 250 ppm. Po 96 hodinách inkubace byla produkce získané kyseliny klavulanové 420 pg/l HPLC.
Příklad 2 (srovnávací)
Postup je stejný jako v příkladu 1, ale přídavek hydroxidu vápenatého není proveden. Výsledkem je, že se fermentace provádí v mediu se 100 mg/1 rozpustného fosforečnanu. Po 96 hodinách inkubace byla produkce kyseliny klavulanové 790 pg/ml HPLC (viz fermenace č. 2 z tabulky I).
Příklad 3
Postup je stejný jako v příkladu 1, ale přídavek hydroxidu vápenatého není proveden a 0,12 % fosforečnanu monodraselného přidaného před úpravou pH je zahrnuto ve složení fermentačního media. Rozpustný fosforečnan se hodnotí z jedné baňky po sterilizaci a je stanoveno, že fermentace se provádí v mediu s 900 mg/1 rozpustného fosforečnanu. Po 96 hodinách inkubace bl yla produkce kyseliny klavulanové 2210 pg/ml HPLC (viz fermentace č. 3 z tabulky I).
Příklad 4
Postup je stejný jako v příkladu 3, ale v tomto případě 0,21 % fosforečnanu monodraselného je zahrnuto ve složení. Rozpustný fosforečnan se hodnotí z jedné baňky po sterilizaci a je stanoveno, že fermentace se provádí v mediu s 1580 mg/1 rozpustného fosforečnanu. V tomto případě se také stanoví celkový fosforečnan a byla získána hodnota 2380 mg/1, jak je zřejmé z tabulky II. Po 96 hodinách inkubace byla produkce kyseliny klavulanové 2240 pg/ml HPLC (viz fermentace č. 4 z tabulky I).
Příklad 5
Postup je stejný jako v příkladu 3, ale v tomto případě 0,4 % fosforečnanu monodraselného je zahrnuto ve složení. Rozpustný fosforečnan se hodnotí z jedné baňky po sterilizaci a je stanoveno, že fermentace se provádí v mediu s 3000 mg/1 rozpustného fosforečnanu. Po 96 hodinách inkubace byla produkce kyseliny klavulanové 1750 pg/ml HPLC (viz fermentace č. 5 z tabulky I).
Příklad 6
Postup je stejný jako v příkladu 3, ale v tomto případě 0,95 % fosforečnanu monodraselného je zahrnuto ve složení. Rozpustný fosforečnan se hodnotí z jedné baňky po sterilizaci a je stanoveno, že fermentace se provádí v mediu se 7000 mg/1 rozpustného fosforečnanu. Po 96 hodinách inkubace byla produkce kyseliny klavulanové 780 pg/ml HPLC (viz fermentace č. 6 z tabulky I).
Příklad 7
Postup je stejný jako v příkladu 3, ale v tomto případě 0,245 % fosforečnanu troj vápenatého je zahrnuto ve složení (není zahrnut fosforečnanmonodraselný). Rozpustný fosforečnan se hodnotí z jedné baňky po sterilizaci, výsledek je 230 mg/1 rozpustného fosforečnanu. V tomto případě se také stanoví celkový fosforečnan, výsledek je 2265 mg/1 (viz fermentace č.
z tabulky II). Po 96 hodinách inkubace byla produkce kyseliny klavulanové 920 pg/ml HPLC.
Příklady 8 až 18
Připraví se inokulační medium stejného složení jak je popsáno v příkladu 1 a je rozděleno do 2000-ml Erlenmeyerových baněk s 500 ml media. Baňky se uzavřou a sterilizují při 121 °C po 20 minut.
Po provedení inokulace se sporami suspenze podobné té, která byla použita v příkladu 1 se medium inkubuje 2 dny při 25 °C na rotační třepačce s excentricitou 5 cm při 250 ot.min-1.
400 ml této kultury se odebere a použije k inokulaci tanku se 150 litry následujícího media:
| - moučka sojových bobů | - | 2 | g | |
| - dextrin | - | 2 | g | |
| - fosforečnan monodraselný | - | 0,04 | g | |
| - olej sojových bobů | - | 0,1 | g | |
| - UCON protipěnící činidlo | - | 0,1 | g | |
| (polyalkylenglykol | - | |||
| - voda | q. s . | 100 | ml | |
| pH media se upraví na | 7,3 a | medium | se sterilizuje při 121 | |
| °C 20 minut. Inkubace se provádí | při 28 | °C po | asi 30 hodin za |
míchání při 115 ot.min-1, provzdušňování 0,5 obj./obj./min a tlaku v kopuli 1 kg/cm2.
litrů kultury inkubované za výše uvedených podmínek se odebere a přenese do tanku se 450 litry následujícího media:
- moučka sojových bobů - 4 g
- dextrin - 2 g
| olej sojových bobů | - | 0,1 |
| UCON protipěnící činidlo | - | 0,1 |
| chlorid hořečnatý | - | 0,02 |
| chlorid železitý | - | 0,003 |
| chlorid vápenatý | - | 0,01 |
| voda | q. S . | 100 ml |
pH media se upraví na 7,0 a medium se sterlizuje při 121 °C 20 minut. Po sterilizaci se měří rozpustný fosforečnan, v tomto případě se získá výsledek 200 mg/1 až 300 mg/1. Je-li to nezbytné, s ohledem na získání různých koncentrací, upraví se tato hodnota přídavkem vhodných objemů 1% roztoku fosforečnanu monodraselného (příklady 10, 11, 12, 14, 15 a 16), nebo sloučeninou vápníku (příklad 8, kde se přidává vhodný objem Ca(OH)2 roztoku). Když byl upraven rozpustný fosforečnan, provede se přenos 45 litrů inokulační kultury a provede se fermentace. Tato se provádí při udržování konstantní teploty 25 °C, 115 ot.min'1, 0,5 obj./obj./min po prvních 24 hodin a 1,5 obj./obj./min po 25 hodin až do konce fermentace a za tlaku v kopuli 0,5 kg/cm2.
Různé koncentrace rozpustného fosforečnanu během fermentace byly získány přídavkem různých objemů sterilního 1% roztoku fosforečnanu monodraselného (příklady 13 až 18).
Automatická kontrola pH se provádí za účelem udržení této hodnoty mezi 6,8 a 7,2. Provedou se také následující přídavky:
- olej sojových bohů: 100 ml/h od 10 do 120 hodin.
- 33% glycerol: 400 ml/h od 32 do 120 hodin.
- 1% fosforečnan monodraselný: 400 až 1400 ml/h od 0 do 25 hodin a 1500 až 5000 ml/h od 25 do 50 hodin.
Po 120 h inkubace se produkce kyseliny klavulanové mění mezi 900 a 4020 pg/ml v souladu s tabulkou IV.
Příklad 19
Příprava media a ustavení fermentačních podmínek se provede jako v příkladech 8 až 18 (tabulka IV), ale koncentrace 34 g/l dextrinu je zahrnuty v počátečním cyklu. Přídavek glycerolu je vynechán a byly doplněny pouze WEichol-92 (syntetický triglycerid se 60% kyselinou olejovou, vyráběný Industria Química Lassem) a 1% fosforečnan monodraselný byly dodávány s následujícími programy přidávání:
Weichol-92 100 ml/h od 10 h do 120 h fosforečnan monodraselný (1%) 400 až 1400 ml/h od 0 do 25 h a
1500 až 5000 ml/h od 25 do 50 h
Příklad 20
Postup je stejný jako v příkladu 19, ale přídavek syntetického triglyceridů Weichol-92 se nahradí olejem sojových bobů.
Příklad 21
Postup je stejný jako v příkladu 19, ale fermentace je prodloužena až na 172 h, kontinuální systém se ustaví extrakcemi celkové břečky od 100 hodin pokračování fermentace v podílu 2,5 % břečky extrahovanými každých 24 h vzhledem k počátečnímu objemu fermentoru po sterilizaci.
Přídavky glycerolu (33 %), Priolube (glyceryltrioleát, vyráběný Unichenta) a fosforečnanu monodraselného (1%) se provádějí podle následujících programů:
| Priolube | 100 | ml/h od | 10 | h | do | konce |
| glycerol (33%) | 400 | ml/h od | 32 | h | do | konce |
| fosforečnan | ||||||
| monodraselný (1%) | 400 | až 1400 | ml/h | od | 0 do 25 h a |
1500 až 5000 ml/h od 25 do 50 h
Příklad 22
Postup je stejný jako v příkladu 21, ale fermentace se prodlouží pouze na 150 h a extrakce břečky se provádí v podílu % každých 24 h
Přídavky jsou modifikovány podle programů:
Priolube glycerol (33%) f osf orečnan monodraselný (1%) sterilní voda
| 100 | ml/h | od | 10 h i | do | 100 h |
| 200 | ml/h | od | 100 h | do | konce |
| 420 | ml/h | od | 32 h i | do | 100 h |
| 780 | ml/h | od | 100 h | do | konce |
| 400 | až L | 400 | ml/h | od | 0 do 25 h a |
| 1500 až : | 5000 ml/h | od | 25 do 50 h | ||
| 312 | ml/h | od | 32 do | 10 | 0 h |
| 625 | ml/h | od | 100 h | do | konce |
Příklad 23
Postupuje se jako v příkladu 22. Fermentace se prodlouž na 172 h s extrakcí 14 % každých 24 hodin. Je také zahrnut přídavek sterilní vody za účelem udržení nízké hladiny vi skoz i ty.
| Priolube | 130 ml/h od | 10 h do | 100 h konce | |||
| 240 ml/h | od | 100 h | do | |||
| glycerol (33%) | 515 | ml/h | od | 32 h | do | 100 h |
| 960 | ml/h | od | 100 h | do | konce | |
| fosforečnan | ||||||
| monodraselný (1%) | 400 | až 1400 | ml/h | od | 0 do 25 h a |
1500 až 5000 ml/h od 25 do 50 h 300 ml/h od 50 h do konce sterilní voda 630 ml/h od 32 do 100 h
1260 ml/h od 100 h do konce
Příklad 24
Postupuje se jako v příkladu 23, ale počáteční fermentační medium se zvýší o 30 % vzhledem ke všem jeho výchozím materiálům. Fermentace probíhá 155 h a extrakce se provádí každých 24 h. Použité programy přidávání jsou nás 1eduj ící:
| Priolube | 130 ml/h od 240 ml/h od | 10 h do 100 h 100 h do konce | |||
| glycerol (33%) | 515 | ml/h | od | 32 h do | 100 h |
| 960 | ml/h | od | 100 h do | konce | |
| fosf orečnan | |||||
| monodraselný (1%) | 400 | až 1400 | ml/h od | 0 do 25 h |
1500 až 5000 ml/h od 25 do 50 h 300 ml/h od 50 h do konce sterilní voda 630 ml/h od 32 do 100 h
1260 ml/h od 100 h do konce
Příklad 25
Postupuje se jako v příkladu 21. Fermentace se prodlouží na 150 h a extrakce se provádějí v rozsahu 9 % každých 24 h. Přídavek glycerolu je plně vynechán a přídavek triglyceridu Priolube je zvýšen. Přídavky fosforečnanu a sterilní vody jsou stejné s přídavky v příkladu 22. Přídavek Priolube je podle následujícího programu:
Priolube 320 ml/h od 10 do 100 h
590 ml/h od 100 h do konce
Claims (10)
1. Způsob produkce kyseliny klavulanové a/nebo jejích solí kultivací Streptomyces clavuligerus ATCC 27064 nebo jeho mutantů z něj získaných, v submerzní fermentaci s provzdušňováním a mícháním, ve vsádkové, polo-kontinuání nebo kontinuální kultuře, ve které jsou koncentrace rozpustného fosforečnanu určeny na počátku a/nebo udržovány během fermentace v daných hodnotách.
2. Způsob podle nároku 1,vyznaču jící se tím, že přítomná koncentrace rozpustného fosforečnanu přítomného v mediu na počátku fermentace, ve vsádkové kultuře, je pevně stanovena v rozmezí mezi 500 a 4000 mg/ml.
3. Způsob podle nároku 1,vyznaču jící se tím, že přítomná koncentrace rozpustného fosforečnanu přítomného v mediu na počátku fermentace, v po 1o-kontinuální nebo kontinuální kultuře, je pevně stanovena v rozmezí mezi 150 a 600 mg/ml a/nebo je udržována v daném rozsahu, výhodně od 20 do 150 mg/ml, během fermentace.
4. Způsob podle nároků 1 až 3,vyznačuj ící se t í m, že přítomné koncentrace rozpustného fosforečnanu přítomného v kultivačním mediu jsou pevně stanoveny na počátku a/nebo udržovány během fermentace přídavkem rozpustného fosforečnanového iontu, v jakékoliv z jeho forem, k uvedenému kultivačnímu mediu.
5. Způsob podle nároků 1 až 3, vyznačující se
Ů -X ' CO cr:
rc t í m, že přítomné koncentrace rozpustného fosforečnanu přítomného v kultivačním mediu jsou pevně stanoveny na počátku a/nebo jsou udržovány během fermentace srážením uvedeného rozpustného fosforečnanu, jestliže tento přestupuje požadované hráni ce.
6. Způsob podle nároku 5,vyznačuj ící se tím, že se uvedený rozpustný fosforečnan sráží přídavkem vápenaté sloučeniny ke kultivačnímu mediu.
7. Způsob podle kteréhokoliv z předchozích nároků, vyznačující se tím, že se použije zdroj uhlíku, který obsahuje jeden nebo více přírodních nebo syntetických triglyceridů, které se přidávají na počátku fermentace a/nebo během ní.
8. Způsob podle kteréhokoliv z předchozích nároků, vyznačující se tím, že se jako výlučný zdroj uhlíku použije jeden nebo více přírodních nebo syntetických triglyceridů, které se přidávají na počátku fermentace a/nebo během ní.
9. Způsob podle kteréhokoliv z předchozích nároků, vyznačující se tím, že se fermentace provádí při teplotě 20 až 40 °C.
10. Způsob podle kteréhokoliv z předchozích nároků, vyznačující se tím, že se fermentace provádí při teplotě 22 až 30 °C.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES09502300A ES2101658B1 (es) | 1995-11-23 | 1995-11-23 | Nuevo procedimiento de produccion de acido clavulanico y sus sales. |
| PCT/ES1996/000215 WO1997019187A1 (es) | 1995-11-23 | 1996-11-15 | Procedimiento de produccion de acido clavulanico y/o sus sales |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ231797A3 true CZ231797A3 (en) | 1997-12-17 |
Family
ID=8292259
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ972317A CZ231797A3 (en) | 1995-11-23 | 1996-11-15 | Process for preparing clavulanic acid and/or salts thereof |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6100052A (cs) |
| EP (1) | EP0811689B1 (cs) |
| JP (1) | JP3313730B2 (cs) |
| KR (1) | KR19980701615A (cs) |
| CN (1) | CN1113965C (cs) |
| AR (1) | AR004342A1 (cs) |
| AT (1) | ATE219145T1 (cs) |
| AU (1) | AU729094B2 (cs) |
| BG (1) | BG101788A (cs) |
| BR (1) | BR9606930A (cs) |
| CA (1) | CA2211207A1 (cs) |
| CO (1) | CO4700346A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ231797A3 (cs) |
| DE (1) | DE69621780T2 (cs) |
| DK (1) | DK0811689T3 (cs) |
| ES (2) | ES2101658B1 (cs) |
| HU (1) | HUP9800343A3 (cs) |
| MX (1) | MX9705555A (cs) |
| PL (1) | PL321456A1 (cs) |
| PT (1) | PT811689E (cs) |
| RU (1) | RU2187556C2 (cs) |
| SI (1) | SI0811689T1 (cs) |
| SK (1) | SK97997A3 (cs) |
| TR (1) | TR199700679T1 (cs) |
| UY (1) | UY24374A1 (cs) |
| WO (1) | WO1997019187A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA969734B (cs) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SI9400107A (en) | 1994-03-02 | 1995-10-31 | Lek Tovarna Farmacevtskih | New process of the isolation of clavulanic acid and its pharmaceutical salts from fermented broth of streptomyces sp.p 6621 ferm p 2804. |
| SI9500265A1 (en) | 1995-08-28 | 1997-02-28 | Lek Tovarna Farmacevtskih | Process for purification of the aqueous fermented broth filtrate of streptomyces sp. p 6621 ferm p 2804 by ultrafiltration |
| AR015825A1 (es) * | 1997-05-28 | 2001-05-30 | Gist Brocades Bv | Produccion fermentativa de acido clavulanico bajo condiciones controladas de fosfato |
| PT102181A (pt) * | 1998-07-20 | 2000-01-31 | Dsm Nv | Processo melhorado para a producao de acido clavulanico |
| EP1026236A1 (en) * | 1999-02-04 | 2000-08-09 | Dsm N.V. | Auxotrophic strains for secondary metabolite biosynthesis |
| CN100355895C (zh) * | 2004-12-17 | 2007-12-19 | 天津科技大学 | 棒状链霉菌lat基因缺失的质粒、衍生物及其构建方法 |
| WO2006128342A1 (en) * | 2005-05-31 | 2006-12-07 | Northwest Sci-Tech University Of Agriculture & Forestry | Lactam antibiotic, its production fungus and use |
| CN1872854B (zh) * | 2005-05-31 | 2010-04-07 | 西北农林科技大学农药研究所 | 一种内酰胺类抗生素及其制备方法 |
| EP2589663A1 (en) | 2011-11-04 | 2013-05-08 | LEK Pharmaceuticals d.d. | Process for production of clavulanic acid |
| WO2016179249A1 (en) * | 2015-05-05 | 2016-11-10 | Logos Technologies, Llc | A semi-continuous process for the production of rhamnolipids at high yield and titer |
| CN109913392A (zh) * | 2019-03-30 | 2019-06-21 | 山东睿智医药科技有限公司 | 高产克拉维酸的棒状链霉菌菌株、其胁迫选育方法及其用途 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1508977A (en) * | 1974-04-20 | 1978-04-26 | Beecham Group Ltd | Beta-lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus |
| US4110165A (en) * | 1974-04-20 | 1978-08-29 | Beecham Group Limited | Process for the production of clavulanic acid |
| IT1152277B (it) * | 1982-06-30 | 1986-12-31 | Istituto Biochimico Italiano | Procedimento per la produzione di acido clavulanico |
| ES8602943A1 (es) * | 1984-10-27 | 1985-12-16 | Antibioticos Sa | Procedimiento para la mejora de la fermentacion de acido clavulanico y sus sales |
| MX7417E (es) * | 1984-10-27 | 1988-10-14 | Antibioticos Sa | Metodo para la preparacion de acido clavulanico y sus derivados |
| AT400846B (de) * | 1994-02-25 | 1996-03-25 | Fermic S A De C V | Verfahren zur gewinnung und reinigung von alkalimetallsalzen der clavulansäure |
| SI9600120A (en) * | 1996-04-12 | 1997-12-31 | Lek Tovarna Farmacevtskih | New and improved fermentative procedure for the production of clavulanic acid and its salts |
-
1995
- 1995-11-23 ES ES09502300A patent/ES2101658B1/es not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-11-15 SI SI9630508T patent/SI0811689T1/xx unknown
- 1996-11-15 HU HU9800343A patent/HUP9800343A3/hu unknown
- 1996-11-15 CZ CZ972317A patent/CZ231797A3/cs unknown
- 1996-11-15 DE DE69621780T patent/DE69621780T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-15 ES ES96938223T patent/ES2178721T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-15 TR TR97/00679T patent/TR199700679T1/xx unknown
- 1996-11-15 SK SK979-97A patent/SK97997A3/sk unknown
- 1996-11-15 AU AU26122/97A patent/AU729094B2/en not_active Ceased
- 1996-11-15 JP JP51941397A patent/JP3313730B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-15 DK DK96938223T patent/DK0811689T3/da active
- 1996-11-15 RU RU97114101/13A patent/RU2187556C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-11-15 CO CO96060301A patent/CO4700346A1/es unknown
- 1996-11-15 CA CA002211207A patent/CA2211207A1/en not_active Abandoned
- 1996-11-15 AT AT96938223T patent/ATE219145T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-11-15 WO PCT/ES1996/000215 patent/WO1997019187A1/es not_active Ceased
- 1996-11-15 PT PT96938223T patent/PT811689E/pt unknown
- 1996-11-15 CN CN96192509A patent/CN1113965C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-15 PL PL96321456A patent/PL321456A1/xx unknown
- 1996-11-15 BR BR9606930A patent/BR9606930A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-11-15 US US08/875,189 patent/US6100052A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-15 EP EP96938223A patent/EP0811689B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-15 MX MX9705555A patent/MX9705555A/es unknown
- 1996-11-20 ZA ZA969734A patent/ZA969734B/xx unknown
- 1996-11-21 UY UY24374A patent/UY24374A1/es not_active IP Right Cessation
- 1996-11-22 AR ARP960105302A patent/AR004342A1/es unknown
- 1996-11-23 KR KR1019970705008A patent/KR19980701615A/ko not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-07-25 BG BG101788A patent/BG101788A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2178721T3 (es) | 2003-01-01 |
| SK97997A3 (en) | 1998-05-06 |
| RU2187556C2 (ru) | 2002-08-20 |
| UY24374A1 (es) | 1996-11-28 |
| JPH11501822A (ja) | 1999-02-16 |
| DK0811689T3 (da) | 2003-01-27 |
| ES2101658B1 (es) | 1998-03-01 |
| SI0811689T1 (en) | 2003-04-30 |
| CA2211207A1 (en) | 1997-05-29 |
| AU729094B2 (en) | 2001-01-25 |
| AR004342A1 (es) | 1998-11-04 |
| WO1997019187A1 (es) | 1997-05-29 |
| ATE219145T1 (de) | 2002-06-15 |
| BR9606930A (pt) | 1997-11-11 |
| US6100052A (en) | 2000-08-08 |
| HUP9800343A3 (en) | 1999-04-28 |
| KR19980701615A (ko) | 1998-06-25 |
| EP0811689B1 (en) | 2002-06-12 |
| BG101788A (en) | 1998-07-31 |
| CN1178556A (zh) | 1998-04-08 |
| DE69621780D1 (de) | 2002-07-18 |
| PL321456A1 (en) | 1997-12-08 |
| ZA969734B (en) | 1997-06-10 |
| AU2612297A (en) | 1997-06-11 |
| PT811689E (pt) | 2002-11-29 |
| DE69621780T2 (de) | 2003-02-06 |
| EP0811689A1 (en) | 1997-12-10 |
| MX9705555A (es) | 1998-02-28 |
| ES2101658A1 (es) | 1997-07-01 |
| HUP9800343A2 (hu) | 1998-05-28 |
| CO4700346A1 (es) | 1998-12-29 |
| CN1113965C (zh) | 2003-07-09 |
| TR199700679T1 (xx) | 1997-11-21 |
| JP3313730B2 (ja) | 2002-08-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4814272A (en) | Process for the biotechnical production of rhamnolipids including rhamnolipids with only one β-hydroxydecanoic acid residue in the molecule | |
| EP0182522B1 (en) | Preparation of clavulanic acid and its salts and esters | |
| CA1168999A (en) | Method for preparing 2,5-diketo-d-gluconic acid | |
| CZ231797A3 (en) | Process for preparing clavulanic acid and/or salts thereof | |
| US4774179A (en) | Process for preparing a 7-aminocephalosporanic acid compound | |
| DK165124B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af en 5-hydroxy-s541-macrolidforbindelse | |
| CA2032658A1 (en) | Process for the production of 6-hydroxynicotinic acid | |
| US5043275A (en) | Process for the fermentative oxidation of reducing disaccharides | |
| DE10315376B4 (de) | Verfahren zur Kultivierung des Nitrilhydratase-produzierenden Stammes RHODOCOCCUS RHODOCHROUS M33 | |
| RU2188868C2 (ru) | Способ получения клавулановой кислоты | |
| US4369251A (en) | Method for the production of sisomicin | |
| KR910004371B1 (ko) | 미생물에 의한 세팔로스포린c의 제조방법 | |
| US2886490A (en) | Process of producing cobalamines by fermenting culture media with nocardia rugosa | |
| KR100317901B1 (ko) | 글루탐산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루탐산의제조방법 | |
| EP1945786A2 (en) | Fermentation processes for the preparation of tacrolimus | |
| SI9800144A (sl) | Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4' | |
| KR100317902B1 (ko) | 글루탐산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루탐산의제조방법 | |
| MXPA01000653A (es) | Proceso mejorado para la produccion de acido clavulanico. | |
| WO2007029082A2 (en) | An improved fermentation process for preparing ascomycin | |
| KR900007942B1 (ko) | 글루타민산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루타민산의 제조방법 | |
| KR900007941B1 (ko) | 글루타민산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루타민산의 제조방법 | |
| GB2114978A (en) | Microbiological process for preparing nebramycin-2, nebramycin-5' and nebramycin-4 | |
| KR960004037B1 (ko) | 세팔로스포린 c를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린 c의 제조방법 | |
| US3901972A (en) | Antibiotic xk' 33' f' 2 'and process for producing same | |
| JPH0789906B2 (ja) | ミルディオマイシン生産菌 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |