CZ238099A3 - Farmaceutický prostředek, lipozóm a způsob dopravování bioaktivní látky do buňky - Google Patents
Farmaceutický prostředek, lipozóm a způsob dopravování bioaktivní látky do buňky Download PDFInfo
- Publication number
- CZ238099A3 CZ238099A3 CZ19992380A CZ238099A CZ238099A3 CZ 238099 A3 CZ238099 A3 CZ 238099A3 CZ 19992380 A CZ19992380 A CZ 19992380A CZ 238099 A CZ238099 A CZ 238099A CZ 238099 A3 CZ238099 A3 CZ 238099A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- liposome
- liposomes
- lipid
- mole percent
- cell
- Prior art date
Links
- 239000002502 liposome Substances 0.000 title claims abstract description 164
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 24
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims abstract description 18
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 78
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 40
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 11
- 239000012867 bioactive agent Substances 0.000 claims description 9
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 8
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 7
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims description 7
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 claims description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 3
- 150000001991 dicarboxylic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 3
- SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 0.000 claims description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 2
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 claims description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940124630 bronchodilator Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000168 bronchodilator agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 2
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 claims description 2
- 229960005015 local anesthetics Drugs 0.000 claims description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims 1
- 239000002637 mydriatic agent Substances 0.000 claims 1
- 229940067605 phosphatidylethanolamines Drugs 0.000 abstract description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 41
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 28
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 27
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 24
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 18
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 16
- GPXQYXMZUPIJMH-XWGUCVLRSA-N N-lauroyl-1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)NCCOP(O)(=O)OC[C@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC GPXQYXMZUPIJMH-XWGUCVLRSA-N 0.000 description 15
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 12
- -1 7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl Chemical group 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N O-phosphoethanolamine Chemical group NCCOP(O)(O)=O SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 6
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 239000002691 unilamellar liposome Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 230000004576 lipid-binding Effects 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 3
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- NWADXBLMWHFGGU-UHFFFAOYSA-N dodecanoic anhydride Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OC(=O)CCCCCCCCCCC NWADXBLMWHFGGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 3
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 3
- WGTODYJZXSJIAG-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine chloride Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O WGTODYJZXSJIAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UMTBGMXFTSIKBH-UHFFFAOYSA-N 1-amino-3-hydroxypropane-2-sulfonic acid Chemical compound NCC(CO)S(O)(=O)=O UMTBGMXFTSIKBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 2
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000815 hypotonic solution Substances 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- XJENLUNLXRJLEZ-UHFFFAOYSA-M lissamine rhodamine Chemical compound [Na+].C=12C=C(C)C(N(CC)CC)=CC2=[O+]C=2C=C(N(CC)CC)C(C)=CC=2C=1C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O XJENLUNLXRJLEZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- YYELLDKEOUKVIQ-UHFFFAOYSA-N octaethyleneglycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO YYELLDKEOUKVIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000002165 resonance energy transfer Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 2-(4-benzylphenoxy)-n,n-diethylethanamine;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1CC1=CC=CC=C1 TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100298295 Drosophila melanogaster flfl gene Proteins 0.000 description 1
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 1
- 108010074105 Factor Va Proteins 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000651439 Homo sapiens Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 240000000528 Ricinus communis Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000145525 Spinach latent virus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 1
- 239000003817 anthracycline antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229940039715 human prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000002911 mydriatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000002459 polyene antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Toto řešení poskytuje lipozómy, obsahujícíjeden nebo více Nacylovaných
fosfatidylethanolaminů, kteréjsou užitečné pro
dopravování bioaktivních látek do buněk na stanovenémmístě.
Description
Oblast techniky
Tento vynález se týká způsobů dopravování léků do buněk pomocí začlenění léků do, nebo spojení léků s lipozómy, obsahujícími nějaký N-acyl-fosfatidylethanolamin („NAPĚ“), a poté setkání se buněk s těmito lipozómy.
Dosavadní stav techniky
Fosfatidylethanolaminy („PE“) jsou přirozeně se objevující fosfolipidy, které mají typicky dva acylové řetězce a fosforyletanolaminovou skupinu, vázané na glycerolovou páteř lipidů. N-acylované fosfatidylethanolaminy („NAPĚ“) jsou PE, na které je vázán další, třetí acylový řetězec, přes aminoskupinu, obsaženou ve fosforyletanolaminové skupině. Některé NAPĚ se také v malých množstvích nachází v biologických membránách.
Většina PE normálně nevytváří dvojvrstvy při neutrální hodnotě pH. Místo toho vytváří ve vodném prostředí šestistěnné (Hn) struktury. Tato schopnost může být spojena se zvýšenou schopností fúzování lipozómů, když jsou tyto lipidy začleněny do lipozomálních dvoj vrstev za vhodných podmínek (Verkleij A. J. (1984) Biochim. Biophys. Acta. 799, 43-63; Cullis P. R. & de Kruijff B. (1979) Biochim. Biophys. 559, 399-420; Ellens H., Siegel, D. P., Alford A., Yeagle P. L., Boni L., Lis L. J., Quinn P. & Bentz J., (1989) Biochemistry 28, 36923703). NAPĚ naopak ve vodných disperzích, v nepřítomnosti přidávaných dvojmocných kationtů, spontáně vytváří dvojvrstvy (Newman J. L., Stiers D. L., Anderson W. H & Schmid Η. H. O., (1986) Chem. Phys. Lipids 42, 249-260.; Akota S., Tellier C., Le Roux C. & Marion D. (1988), Chem. Phys. Lipids 46, 43-50; Lafrance D., Marion D & Pezolet M. (1990), Biochemistry 29, 4592-2599; Domingo J. C., Mora M. & De Madariaga M. A. (1993) Biochim. Biophys. Acta 1148, 308-316.
Žádný z výše uvedených dokumentů nepopisuje studii NAPĚ s ohledem na jejich schopnost usnadňovat fúzi nebo destabilizovat dvojvrstvu v požadovaném místě dopravení, avšak při zachování si schopnosti tvořit lipozómy, které mohou stabilně obalovat materiál. Žádná z • · fc ·
předcházejících studií nepopisuje použití, kde mohou být zahrnuty NAPĚ, pro řízené dopravování lipozomálních léčiv, a žádný nepopisuje vytváření NAPĚ, za účelem vylepšování takovéhoto dopravování, zejména in vivo. Navíc, žádný z nich ani nevytvářel ani nestudoval NAPĚ N-dodekanoyl-diolejoylfosfatidylaethanolamin.
Podstata vynálezu
Tento vynález poskytuje lipozómy, které obsahují destabilizaceschopné množství N-acylfosfatidylethanolaminu („NAPĚ“). Tyto lipozómy jsou užitečné pro fúzi s buněčnými membránami v přítomnosti vhodných koncentrací kationtů, když jsou umístěny v blízkosti těchto buněk. NAPĚ jsou fosfolipidy, založené na glycerolu, které mají na první a druhé pozici glycerolové páteře vázané nasycené nebo nenasycené, 14-24 uhlíků dlouhé acylové řetězce. Třetí pozice je obsazena fosforylethanolaminem, na jehož aminoskupině je vázán třetí acylový řetězec, který je dlouhý 4-24 uhlíkových atomů a je nasycený nebo nenasycený. V současné době je upřednostňovaným NAPĚ N-C12 DOPE (N-dodekanoyldiolejoylfosfatidylethanolamin).
Destabilizaceschopné množství NAPĚ, obsažené v lipidické složce lipozómů je obvykle od asi 10 molárních procent lipidické složky do asi 90 molárních procent. Lipozóm, do kterého je NAPĚ začleněn, může být jednovrstevný, několikavrstevný nebo mnohovrstevný, ale přednostně je jednovrstevný. Lipidická složka lipozómů zahrnuje, vedle NAPĚ, alespoň jeden další lipid. Takovýmito lipidy mohou být, ale ne pouze, jakékoliv druhy lipidů jako jsou např. fosfolipidy, glykolipidy a steroly, které mohou být použity při přípravě lipozómů. Přednostně zahrnuje tento přídavný lipid jeden nebo více fosfolipidů. Ještě lépe, tyto zahrnují fosfatidylcholin („PC“), jako je diolejoylfosfatidylcholin („DOPC“) nebo fosfatidylethanolamin („PE“), jako např. PE, vybraný ze skupiny, obsahující transesterifikovaný fosfatidylethanolamin, dipalmitoylfosfatidylethanolamin, palmitolylolejoylfosfatidylethanolamin a diolejoylfosfatidylethanolamin; nebo PE, spojený s látkou, vybranou ze skupiny, obsahující dikarboxylové kyseliny, polyethylenglykoly, polyalkylethery a gangliosidy.
Lipozómy mohou mít připojenou naváděcí látku a mohou obsahovat, buď v dvoj vrstvě nebo ve vodné části, jednu nebo více bioaktivních látek. Připojení naváděcí látky k lipozómů je zde upřednostňováno, za účelem umístění lipozómů do blízkosti buněk, které jsou cílem dopravení obsahů lipozómů, kde mohou být lipozómy v přítomnosti vhodné koncentrace • · · · » · · · » · · · ··· ··· kationtů lokálně destabilizovány nebo fúzovány s buňkami.
Lipozómy tohoto vynálezu mohou tedy dopravovat aktivní látky do buněk pomocí setkání se těchto buněk s lipozómy za podmínek, ve kterých NAPĚ destabililizují lipozomální dvojvrstvu, za účelem indukce lokálního uvolnění aktivní látky lipozómu a/nebo fúze lipozómu s buňkami. Takovéto dopravení může být prováděno in vitro nebo v těle savce a může být použito např. pro ex vivo transfekci kmenových buněk nebo dopravení protirakovinné léčebné látky.
Následují zkratky a plná jména jimi představovaných sloučenin, které se nacházejí v popisu ; PE, fosfatidylethanolamin; PC fosfatidylcholin; PG, fosfatidylglycerol; PS, fosfatidylserin; DO-, diolejoyl-; NAPĚ N-acyl-fosfatidylethanolamin; NAE, N-acyl-ethanolamin; N-C 12DOPE, N-dodekanoyl-diolejoylfosfatidylethanolamin; NBD-PE, N-(7-nitro-2,l,3benzoxadiazol-4-yl)fosfatidylethanolamin (transesterifikovaný fosfatidylcholin z vejce); RhPE, N-(lissamin-rhodamin B-sulfonyl)fosfatidylethanolamin (transesterifikovaný fosfatidylcholin z vejce); TMR, tetramethylrhodamin; TMR-70kD dextran, s tetramethylrhodaminem spojený 70kD dextran; C^Eg, oktaethylenglykolmonododecylether; RET, rezonanční přenos energie; LUV, velký jednovrstevný lipozóm; TES, N-[tris(hydroxymethyl]-2-aminoethansulfonová kyselina; 'H-NMR, protonová nukleární magnetická rezonance; Hn, šestistěnná II; TLC, chromatografie na tenké vrstvě; BSA, hovězí sérový albumin.
Tento vynález poskytuje lipozóm, jehož lipidická složka obsahuje N-acylfosfatidylethanolamin („NAPĚ“). NAPĚ jsou fosfatidylethanolaminy, které mají tři acylové řetězce, dva přímo vázané na glycerolovou páteř a třetí, vázaný přes aminoskupinu fosforylethanolaminové skupiny. NAPĚ mají tedy následující obecnou strukturu
CH2-O-R1 l
CH-O-R2
CH2-O-P(O)2-O-CH2CH2NH-R3, ·· · ··· • · • · · · kde každý z R1, R2 a R3 je acylový řetězec, který má strukturu : C(O)(CH2)ni(CH=CH)n2(CH2)n3(CH=CH)n4(CH2)n5(CH=CH)n6(CH2)n7(CH=CH)n8(CH2)n9 CH3. nl je celé číslo, rovné od 1 do 22; n3 je celé číslo, rovné od 1 do 19; n5 je celé číslo, rovné od 1 do 16; n7 je celé číslo, rovné od 1 do 13 a n9 je celé číslo, rovné od 1 do 10. Acylové řetězce mohou být nasycené nebo nenasycené; to znamené, že každý z n2, n4, n6 a n8 je nezávisle roven 0 nebo 1.
Acylové řetězce, vázané přímo na glycerolovou páteř NAPĚ, to jest R a R , mají vhodnou délku pro tvorbu stabilní dvojvrstvy. Podle toho je součet nl+2n2+n3+2n4+n5+2n6+n7+2n8+n9, určující délku acylového řetězce v počtu uhlíkových atomů, celé číslo od 12 do 22 a R1 a R2 mají do délky nezávisle od 14 do 24 uhlíkových atomů. Přednostně mají R1 a R2 do délky nezávisle od 16 do 18 uhlíků. Alespoň jeden z R1 a R2 je nenasycený, což napomáhá přechodu NAPĚ z fáze upřednostňující dvoj vrstvu do fáze, která dvojvrstvu destabilizuje, a alespoň jeden z n2, n4, n6 a n8 je tudíž roven 1. Více upřednostňováno je, když jsou oba, R1 i R2, nenasycené, to znamená, že pro R1 i R2 je alespoň jeden z n2, n4, n6 a n8 roven 1. Nejvíce upřednostňováno je, když jsou oba, Rl i R2, kyselina olejová, to znamená, že jsou oba dlouhé 18 uhlíků, obsahují jednoduché i dvojné vazby a mají strukturu C(O) (CH2)7(CH=CH)(CH2)7CH3.
Acylový řetězec, vázaný na aminoskupinu fosforylethanolaminu NAPĚ, může být dlouhý 4 až 24 uhlíků. To znamená, že pro R3 je součet nl+2n2+n3+2n4+n5+2n6+n7+2n8+n9 roven celému číslu od 2 do 22; přednostně je tento součet roven celému číslu od 6 do 20. Přednostně je tento acylový řetězec nasycený. Lépe je R3 nasycený a dlouhý 12 uhlíků. Nejlépe obsahuje NAPĚ, který je začleněn do lipozómu, dva řetězce kyseliny olejové a 12-ti uhlíkový řetězec, vázaný na aminoskupinu, a má takovouto strukturu :
CH2-O-C(O)(CH2)7(CH=CH)(CH2)7CH3
I
CH- O-C(O)(CH2)7(CH=CH)(CH2)7CH3 I
CH2-0-P(0)2-0-CH2CH2NH-C(0)(CH2)ioCH3, • 9
9 9
99 ► 9 9 · » 9 9 9
Ml 9··
9 • 9 9 9 to jest N-dodekanoyl-diolejoylfosfatidylethanolamin; („N-C12-DOPE“).
NAPĚ jsou přirozeně se objevující lipidy, které se izolují z rostlin, mikroorganismů a živočichů (Bombstain R. A. (1965) Biochem. Biophys. Res. Commun. 21, 49-54; Clarke N.
G. , Hazlewood G. P. & Dawson R. M. C. (1976) Chem. Phys. Lipids 17, 222-232; Dawson R. M. C., Clarke N. G. & Quarles R. H. (1969) Biochem. J. 114, 265-270; Ellingson J. S. (1980) Biochemistry 19, 6176-6182; Epps D. E., Schmid P. C., Natarajan V. & Schmid H.
H. O (1979), Biochem. Biophys. Res. Commun. 90, 628-633; Epps D. E., Natarajan V., Schmid P. C. & Schmid Η. H. O (1980), Biochem. Biophys. Acta 618, 420-430; Ganley O. H., Graessle O. E & Robinson H.J. (1958) J. Lab. Cli. Med. 51, 709-714; Gray G. M. & Yardley H. J. (1975) J. Lipids. Res. 16, 441-447; Hargin K. D. & Morrison W. R. (1980) J. Sci. Food. Agric. 31, 877-888; Hazlewood G. P. & Dawson R. M. C. (1975), Biochem. J. 150, 521-525; Kuehl Jr., F. A., Jacob T. A., Ganley O.H., Ormond R. E. & Meisinger M. A, P. (1957) J. Am. Chem. Soc. 79, 5577-5578; MacMurray T. A & Morrison W. R. (1970) J. Sci. Food. Agric. 21, 520-528; Matsumoto M. & Miwa M (1973) Biochem. Biophys. Acta 296, 350-364; Morrison W. R., Mann D. L., Wong S. & Coventry A. M. (1975) J. Sci. Food. Agric.26, 507-521; Natarajan V., Reddy Ρ. V., Schmid P. C. & Schmid Η. H. O. (1982), Biochem. Biophys. Acta 712, 342-355; Natarajan V., Schmid P. C., Schmid Η. H. O., Reddy Ρ. V. & Zuzarte-Augustin M. L. (1985), Biochem. Biophys. Acta 835, 426-433; Reddy Ρ. V., Schmid P. C., Natarajan V., Muramatsu T. & Schmid Η. H. O. (1984), Biochem. Biophys. Acta 795, 130-136; Schmid P. C., Reddy Ρ. V., Natarajan V. & Schmid Η. H. O. (1983), J. Biol. Chem. 258, 9302-9306; Schmid Η. H. O., Schmid P. C. & Natarajan V., (1990), Prog. Lipid. Res. 29, 1-43; Somerhaju P. & Renkonen O. (1979), Biochem. Biophys. Acta 573, 83-89; jejichž obsahy jsou zde zahrnuty odkazem). NAPĚ mohou být také vytvořeny synteticky, například tak, jak je popsáno dále, v příkladu 1. Stručně, tato syntetická příprava zahrnuje rozpuštění fosfatidylethanolaminu („PE“), např. DOPE, v organickém rozpouštědle, např. methylenchloridu. Poté je k roztoku přidán anhydrid mastné kyseliny, která má být navázána na aminoskupinu PE, např. anhydryd kyseliny laurové. Po chromatografické purifíkaci je výsledná sloučenina shromážděna a zakoncentrována ve vakuu; může být charakterizována řadou způsobů, včetně protonové nukleární magnetické rezonance. Lipidická složka lipozómů obsahuje „destabilizaceschopné“ množství NAPĚ, což je takové množství NAPĚ, které, když je začleněno do lipozómové dvojvrstvy, je dostatečné k destabilizaci této dvojvrstvy v přítomnosti vhodné, např. fyziologické, koncentrace kationtů. Zde použitý termín • ·· • « • « • · ·· ·· ·· • · · · ♦ · · • · · · ♦' · · • · ·· · ··· ··· „destabilizace dvojvrstvy“ znamená porušení nebo rozpad lipidického uspořádání lipozomální lipidické dvojvrstvy, za účelem umožnění lokálního uvolnění lipozomálního obsahu a/nebo indukce fúze lipozómu s jinými lipidickými vrstvami, např. buněčnými membránami, když tyto jsou ve spojení s lipozómem. Destabilizaceschopné množství NAPĚ je takové množství NAPĚ, které indukuje vyšší stupeň nestability dvojvrstvy za vhodných podmínek, než jaká by byla v případě, když dvojvrstva NAPĚ neobsahuje. Destabilizaceschopné množství NAPĚ typicky představují alespoň asi 10 molárních procent lipidické složky lipozómu. Přednostně je toto množství od asi 10 molárních procent do asi 90 molárních procent lipidické složky, lépe od 20 molárních procent do asi 80 molárních procent lipidické složky. Nejlépe, v současné době, představuje NAPĚ asi 70 molárních procent lipidické složky.
Má se za to, acylace PE, čímž vznikají NAPĚ, vytváří na PE náboj, který potlačuje sklon PE k vzniku nedvojvrstevných fází; má se tedy za to, že tento náboj umožňuje, aby NAPĚ vytvářely stabilní dvojvrstvy. Přítomnost dostatečné koncentrace, např. fyziologické úrovně, různých kationtů, např. H+, Ca2+ nebo Mg2+, vyrovná tento protipůsobící náboj třetího acylového řetězce a samotné NAPĚ jsou tedy poté nestabilní v konformaci dvojvrstvy. Podle toho zahrnují „vhodné podmínky“, zde popsané pro destabilizaci dvojvrstvy obsahující NAPĚ, přítomnost dostatečných koncentrací jednoho nebo více kationtů, které se mohou nacházet v biologických tekutinách nebo mohou být vytvořeny v kulturách. Měření dodání lipozomálních obsahů je snadné pro běžného odborníka, který má k dispozici popis tohoto vynálezu, za použití rutinních technik. Odborník může například do lipozómů, obsahuj ících/neobsahujících NAPĚ, vložit detekovatelný markér, inkubovat tyto lipozómy ve vhodném buněčném kultivačním mediu a poté určit procento detekovatelného markéru, dopraveného do buněk po inkubaci. Po takovýchto pokusech by odborník pozoroval, že buňky, inkubováné s lipozómy obsahujícími NAPĚ, by obsahovaly větší množství detekovatelného markéru než buňky, inkubováné s lipozómy neobsahujícími NAPĚ.
Měření dopravování lipozomálních obsahů může být snadné pro odborníka v oboru, který má k dispozici popis tohoto vynálezu, za použití rutinních technik. Odborník může například uzavřít detekovatelný markér do lipozómů, které obsahují/neobsahují NAPĚ, inkubovat tyto lipozómy ve vhodném buněčném kultivačním mediu a poté určit procento detekovatelného markéru, dopraveného do buněk po inkubaci. Po provedení takovýchto pokusů by odborník pozoroval, že buňky inkubováné s lipozómy obsahujícími NAPĚ obsahují větší množství detekovatelného markéru než buňky inkubováné s lipozómy neobsahujícími NAPĚ.
ftft· ·!·*··* *··* ·· ·* ··
Ί
Lipidická složka lipozómu zahrnuje, vedle NAPĚ, další lipid. Takovýmito lipidy mohou být jakékoliv z řady druhů lipidů, např. fosfolipidy, glykolipidy či steroly, běžně používaných v lipozómech.
Přednostně zahrnuje tento přídavný lipid jeden nebo více fosfolipidů, např. fosfatidylcholin („PC“), jako je diolejoylfosfatidylcholin („DOPC“). Například, v některých provedeních tohoto vynálezu je přídavným lipidem DOPC; lipidická složka lipozómu obsahuje asi 30 molárních procent DOPC a asi 70 molárních procent NAPĚ, N-dodekanoyldiolejoylfosfatidylethanolaminu.
Přídavným lipidem může také být fosfatidylethanolamin („PE“), jako je např. transesterifikovaný PE („tPE“), dipalmitoyl PE („DPPE“), palmitolyl-olejoyl PE („POPE“), diolejoyl PE („DOPE“); nebo PE, jehož hlavní skupina je spojena s látkou, vybranou ze skupiny, obsahující dikarboxylové kyseliny, polyethylenglykoly, polyalkylethery a gangliosidy. Takovéto látky jsou schopné bránit vazbě sérových proteinů na lipozómy, do kterých byly tyto lipidy začleněny. Podle toho, PE, obsahující takovéto modifikace hlavní skupiny, „lipidy s modifikovanou hlavní skupinou“ mění farmakokinetické chování lipozómů, prodlužují jejich poločasy života a zvyšují poměr původních lipozómů, které dosáhnou určených míst terapeutického nebo diagnostického účinku (viz Blume et al., Biochim. Biophys. Acta. 1149 : 180 (1993); Gabizon et al., Pharm. Res. 10(5) : 703 (1993); Park et al., Biochim. Biophys. Acta. 1108 : 257 (1992); Woodle et al., U.S. Patent No. 5 013 556; a Allen et al., U.S. Patent No. 4 837 028 a 4 920 016, jejichž obsahy jsou zde zahrnuty odkazem).
Mezi upřednostňované lipidy s modifikovanou hlavní skupinou patří fosfatidylethanolaminy-dikarboxylové kyseliny („PE-DCA“) nebo polyethylenglykolové konjugáty. V současné době je upřednostňovaným lipidem s modifikovanou hlavní skupinou diolejoylfosfatidylethanolamin („DOPE-GA“). Množství lipidu s modifikovanou hlavní skupinou, začleněné do lipozómu, záleží na řadě faktorů, které jsou běžnému odborníkovi v oboru dobře známé, nebo které jsou zjistitelné bez nutnosti dělání neobvyklých pokusů. Mezi ně patří, ale ne pouze, : typ modifikace hlavní skupiny, typ a velikost lipozómu a požadované terapeutické použití přípravku. Přednostně jsou lipidy s modifikovanou hlavní skupinou začleňovány do lipozómů v koncentraci alespoň 5 molárních procent lipidické složky lipozómu, lépe asi 10 molárních procent lipidické složky lipozómu.
„Lipozómy“ jsou samostatně se skládající struktury, obsahující jednu nebo více lipidických dvojvrstev, z nichž každá obklopuje vodný prostor, a obsahuje dvě opačně položené vrstvy • · · · • ♦ · · « · · · • ··· ··· ♦ · ·· ·· • ·
amfipatických lipidických molekul. Amfipatické lipidy obsahují polární (hydrofilní) hlavní část, kovalentně spojenou s jedním nebo dvěma nepolárními (hydrofobními) acylovými řetězci. Obecně se má za to, že energeticky nevýhodné kontakty mezi hydrofobními acylovými řetězci a vodným mediem indukují u lipidických molekul změnu uspořádání do takové stavu, že jsou jejich polární hlavní skupiny orientovány směrem k vodnému mediu, zatímco acylové řetězce směřují směrem do vnitřku dvojvrstvy. Je tedy vytvořena stabilní struktura, ve které jsou acylové řetězce účinně chráněny před kontaktem s okolním vodným mediem.
Jednovrstevné lipozómy jsou lipozómy, které mají jednu lipidickou dvojvrstvu. Mohou to být buď malé jednovrstevné lipozómy („SUV“), které mají průměrný průměr 25-50 nm, nebo velké jednovrstevné lipozómy („LUV“), které mají průměrný průměr větší než 50 nm. Několikavrstevné lipozómy mají od 1 do několika lipidických dvojvrstev a mnohovrstevné lipozómy („MLV“) mají mnoho dvojvrstev. Lipozóm tohoto vynálezu může být jednovrstevný, několikavrstevný nebo mnohovrstevný, ale přednostně je jednovrstevný a lépe velký jednovrstevný lipozóm.
Lipozómy mohou být vytvořeny řadou způsobů (souhrn např. viz Deamer a Uster (1983)). Mnohovrstevné lipozómy mohou být vytvořeny například metodou Banghema et al., (1965) a metodou Lenka, Fountaina nebo Cullise pro přípravu MLV s v podstatě rovnoměrným rozdělením rozpuštěné látky mezi lamelami (to jest „SPLV“; viz U.S. Patent No. 4 522 803, 4 588 578, 5 030 453, 5 169 637 a 4 975 282). Několikavrstevné lipozómy mohou být vytvořeny např. Boniho metodou pro přípravu „IF“ lipozómů (interdigitation-fusion liposom) (viz EP Patent No. 510 086), nebo Papahadjopoulovou technikou odpaření převrácené fáze (U. S. Patent No. 4 235 871). Jednovrstevné lipozómy mohou být vytvořeny metodami, jako je vstříknutí ethanolu (viz např. Batzri a Kron 1973), nebo z MLV technikami jako je sonikace (Papahadjopoulos et al., (1968) nebo protlačování (U. S. Patent No. 5 008 050 a U. S. Patent No. 5 059 421). Lipozómy tohoto vynálezu mohou být připraveny kteroukoliv z v oboru obecně přijímaných metod pro přípravu lipozómů, včetně metod, uvedených ve výše citovaných dokumentech (jejichž obsahy jsou zde zahrnuty odkazem).
Lipozómy tohoto vynálezu mohou být dehydratovány, uskladněny a poté znovu složeny tak, že podstatná část obsahů lipozómů zůstane během procesu dehydratace/rehydratace obsažena uvnitř. Dehydratace lipozómů obecně vyžaduje použití hydrofilních vysoušečích ochranných látek na vnitřním i vnějším povrchu lipozomální dvojvrstvy (viz U. S. Patent 4 ·· »·
I · · · > · · · ··* ··· • · ·· ·· • ·· • <
« · · • · · * ·«· ·«·
880 635 jehož obsah je zde zahrnut odkazem). Obecně se má za to, že tyto hydrofilní látky brání změně uspořádání lipidů v lipozómů, takže velikost i obsah zůstane během vysoušecího postupu a následné rehydratace zachována. Nejvíce upřednostňovanými vysušovacími ochrannými látkami jsou disacharidy, např. laktóza, maltóza, trehalóza nebo sacharóza.
Lipozómy tohoto vynálezu mohou obsahovat „naváděcí látku“, to jest nějakou látku, která může být vázána na lipozóm a která poté směruje lipozóm do specifického místa v tele savce. Má se za to, že takovéto směrované dopravení je výsledkem rozpoznání nějaké látky na povrchu cílové buňky naváděcí látkou. Typicky mezi takovéto naváděcí látky patří, ale ne pouze, protilátky, ligandy buněčných receptorů, lektiny apod. Naváděcí látky mohou být na lipozóm vázány jakýmkoliv v oboru obecně přijímaným způsobem pro kovalentní nebo nekovalentní vazbu takových látek a lipozómů. Mezi takovéto způsoby patří například ty, popsané v následujících dokumentech, jejichž obsahy jsou zde zahrnuty odkazem, : U. S. Patent No. 5 399 331 popisuje vázání proteinů na lipozómy za použití vazebných činidel, které mají alespoň jednu maleimidoskupinu a reaktivní amin; v U. S. Patent No. 4 885 172, 5 059 421 a 5 171 578 se proteiny na lipozómy váží za použití glykoproteinu streptavidinu; Sáto a Sunamoto popisují obalování směrovaných lipozómů polysacharidy.
Předkládány jsou zde i prostředky, obsahující lipozómy tohoto vynálezu. Mezi takovéto prostředky patří farmaceutické prostředky, které také obsahují „farmaceuticky přijatelný nosič“, kterým je nějaké medium, obecně přijatelné pro použití ve spojení s podáváním lipozómů živočichům, včetně lidí. Příprava farmaceuticky přijatelných nosičů záleží na řadě faktorů, které jsou v rámci znalostí běžného odborníka,. Záleží, ale ne pouze, na konkrétní použité bioaktivní látce, její koncentraci, stabilitě a zamýšlené dostupnosti; nemoci, poruše nebo stavu léčeného prostředkem; léčeném, jeho věku, velikosti a obecném stavu; zamýšleném způsobu podávání prostředku, např. nosním, ústním, očním, místním, transdermálním, vaginálním, podkožním, intraperitonealním, vnitrožilním nebo intramuskulárním (viz například, Nairn (1985), jehož obsah je zde zahrnut odkazem). Typické farmaceuticky přijatelné nosiče, použité pro parenterální podávání bioaktivní látky, zahrnují například D5W, vodný roztok obsahující 5 % w/v dextrózy, fyziologický solný roztok. Farmaceuticky přijatelné nosiče mohou obsahovat další přídavné složky, jako např. ty, které zvyšují stabilitu lipozómů.
Dále je zde předkládán způsob dopravování bioaktivní látky do buňky. „Bioaktivní látka“, která může být do buněk dopravena lipozómy, je kterákoliv látka nebo skladba látky, která * * a ···· * Σ ζ ϊ**4 * · ί *·«ί · *··♦ ***J
·..· .·· .·’ ··· ίο může být připravena v lipozómech a být podávána živočichům, přednostně člověku. Lipozómy mohou naplněny bioaktivními látkami pomocí rozpuštění této látky v lipidu nebo vodné fázi, použité pro přípravu vezikulů. Jinou možností je naplnění lipozómů ionizovatelnými bioaktivními látkami tak, že jsou nejdříve vytvořeny lipozómy, je ustaven elektrochemický potenciál, např. pomocí pH gradientu, na nejkrajnější lipozomální dvojvrstvě a poté je k vodnému mediu obklopujícímu lipozómy přidána ionizovatelná látka (viz Balí et al., U. S. Patent No. 5 077 056, jehož obsah je zde zahrnut odkazem).
Bioaktivní látky mohou mít léčebnou aktivitu u živočichů a mohou být také podávány pro diagnostické účely. Bioaktivní látky, které mohou být spojeny s lipozómy tohoto vynálezu, zahrnují, ale ne pouze, : antivirální látky jako jsou acylovir, zidovudin a interferony; antibakteriální látky jako jsou aminoglykosidy, cefalosporiny a tetracykliny; antifungální látky jako jsou polyenová antibiotika, imidazoly a triazoly; antimetabolické látky jako jsou kyselina listová a analoga purinu a pyrimidinu; antineoplastické látky jako jsou anthracyklinová antibiotika a rostlinné alkaloidy; steroly jako je cholesterol; uhlohydráty, např. cukry a škroby; aminokyseliny, peptidy, proteiny jako jsou buněčné receptorové proteiny, imunoglobuliny, enzymy, hormony, neurotransmitery a glykoproteiny; barviva; radioaktivní značky jako jsou radioizotopy a radioizotopy značené látky; látky nepropouštějící záření; fluorescenční látky; mydriatické sloučeniny; bronchodilatátory; lokální anestetika; sekvence nukleových kyselin jako jsou mRNA, cDNA, genomová DNA a plazmidy; bioaktivní lipidy jako jsou etherlipidy a ceramidy; apod.
Způsob dopravení bioaktivní látky tohoto vynálezu zahrnuje setkání se buňky s prostředkem, obsahujícím lipozóm tohoto vynálezu. Takovéto setkání je přednostně prováděno v přítomnosti vhodné koncentrace například, ale ne pouze, 1-3 mM kationtů, např. Ca2+, Mg2+ nebo kombinaci Ca2+/ Mg2+; toto setkání může být také provedeno při kyselém pH za nepřítomnosti přídavných kationtů.
Toto dopravení může být prováděno in vitro, jako např. pro diagnostické účely nebo ex vivo dopravení léčebné látky nebo nukleové kyseliny do buněk kostní dřeně, kde v tomto případě prostředek obsahující lipozóm obsahuje také dvojmocné kationty. Druhou možností je provedení setkání in vivo, kde dané buňky jsou přednostně savčí, je použit farmaceuticky přijatelný nosič a lipozómy přednostně obsahují naváděcí látku. Při lipozomálním dopravování bioaktivní látky in vivo, podle provedení tohoto vynálezu, může být dopravováno terapeuticky nebo diagnosticky účinné množství léčebných nebo diagnostických látek do buňky savce, postiženého nemocí, poruchou nebo stavem, ·· ··
·*« · umožňujícím diagnózu nebo léčení danou látkou. Od této doby může být takovéto dopravování použito pro diagnózu nebo léčení nemocí, poruch nebo stavů u savců. Savci mohou být například postiženi infekční mikrobiální nemocí, např. virálními nebo bakteriálními infekcemi; rakovinou, např. rakovinou mozku, prsu, tlustého střeva, plic, vaječníků, prostaty či žaludku; záněty, např. artritidou nebo autoimunitními onemocněními jako je revmatoidní artrtitida nebo juvenilní diabetes; a do buněk těchto savců může být dopraveno terapeuticky účinné množství antibakteriální, protirakovinné nebo protizánětlivé látky.
Dopravení obsahů lipozomů může bý usnadněno tím, že se do lipozomů začlení NAPĚ, jelikož NAPĚ destabilizují lipozomální dvojvrstvu v přítomnosti vhodných koncentrací, např. fyziologické, kationtů, nebo při kyselém pH za nepřítomnosti dalších složek. Destabilizace, zprostředkovaná NAPĚ, může dokonce vést k fúzi lipozomů s buněčnými membránami a tedy k přímému dopravení lipozomálních obsahů do buněk.
Fúze zahrnuje jak vazbu lipozóm-buňka tak i promíchání lipidů lipozómu a membrány, což je možno stanovit řadou způsobů, které jsou známé běžnému odborníkovi v oboru, který má k dispozici popis tohoto vynálezu. Mezi ně patří například, ale ne pouze, pokusy založené na fluorescenci, detailněji popsané dále v příkladu 4. Stručně, lipozómy jsou značeny fluorescenčními markéry, jako je N-(7-nitro-2,l,3-benzoxadiazol-4-yl)fosfatidyethanolamin („NBD-PE“) a N-(lissamin-rhodamin B-sulfonyl)fosfatidyethanolamin („Rh-PE“) a poté se spojí s bezbarvými erytrocyty, to jest erytrocyty, zbavenými hemoglobinového obsahu; bezbarvé erytrocyty jsou obzvláště vhodné pro použití při měření fúze lipozóm-buňka, jelikož tyto buňky nejsou schopny endocytózy lipozomů a začleňují lipozomální lipidy do svých buněčných membrán pouze pomocí fúze. Bezbarvé erytrocyty mohou být připraveny tak, jak již bylo dříve popsáno (viz Williamson P., Algarin L., Bateman J., Choe H. R. & Schlegel R. A. (1985) J. Cell Physiol. 123, 209-214; Clague M. J., Schod C., Zech L. & Blumenthal R (1990) Biochemistry 29, 1303-1309, jejichž obsahy jsou zde zahrnuty odkazem), např.. pomocí bobtnání erytrocytů v hypotonickém roztoku, za účelem jejich prasknutí a uvolnění jejich hemoglobinu, a následného uzavření erytrocytů pomocí jejich inkubace ve vhodném pufru.
Značené lipozómy mohou být inkubovány s bezbarvými erytrocyty v přítomnosti dvoj mocných kationtů, např. Ca2+, Mg2+ nebo Ca2+/ Mg2+, v různých koncentracích, např.
1-3 mM. Po odstranění nenavázaných lipozomů je stupeň vazby lipozóm-bezbarvý erytrocyt stanoven pomocí měření množství fluorescence spojené s bezbarvými erytrocyty.
φφ φφ φ φ φ · φ φ φ · φ φφφ φφφ φ φ φφ ♦ · ··· • I φ· ·· • · φ φ φ · · · φ φ φφ» φ φ · • Φ φ*
Promíchání lipidů je měřeno řadou způsobů, které dobře známé běžnému odborníkovi v oboru, včetně např. rezonančního přenosu energie („RET“), uvedenému dále v příkladu 4 (a popsanému detailněji v Struck D. K., Hoekstra D. & Pagano R. E. (1981) Biochemistry 20, 4093-4099, jehož obsah je zde zahrnut odkazem).
Jak ukazuje obrázek 2, výsledkem inkubace N-C12-DOPE/DOPC lipozómů (70 molárních procent/30 molárních procent) s bezbarvými erytrocyty v přítomnosti 3 mM Ca2+ bylo vázání lipozóm-erytrocyt i promíchání lipidů. Obrázky 4 a 5 navíc jasně ukazují, že přítomnost NAPĚ, např. N-C12-DOPE, v lipozómech byla pro fúzi lipozómů s buňkami nutná. Výsledky (viz obrázek 8) dále ukazují, že k vázání i promíchání, a tedy fúzi lipozómbuňka, může docházet v nepřítomnosti dvojmocných kationtů, avšak v kyselém pH.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1.
Kinetika vazby a promíchávání lipidů mezi lipozómy N-C12-DOPE/DOPC (70 ; 30) a bezbarvými erytrocyty při 37 °C, měřeno pomocí NBD/Rh RET. Lipozómy a erytrocyty byly inkubovány při 37 °C po uvedené časové úseky v přítomnosti 3 mM Ca2+; NBD a Rh fluorescence byly měřeny poté, co byly centrifugaci odstraněny nenavázané lipozómy. Promíchání lipidů a vázání bylo vyjádřeno v procentech hodnot při použití detergentů, jak jest popsáno dále. Horní křivka : vázání lipozómů; spodní křivka : promíchání lipidů. Osa X : Čas (min); Osa Y % maximální vázání lipozómů a promíchání lipidů.
Obrázek 2.
Závislost vázání lipozómů (A) a promíchání lipidů (B) mezi N-C12-DOPE/DOPC (70 : 30) a bezbarvými erytrocyty na dvojmocných kationtech, měřená pomocí NBD/Rh RET. NBD/Rh-značené lipozómy a neznačené erytrocyty byly inkubovány při 37 °C po dobu 1 hodiny v přítomnosti uvedených koncentrací kationtů. (A) a (B) : plné čtverečky : Ca2+/Mg2+; plné trojúhelníčky : Ca2+, plná kolečka : Mg2+. Osa X : Koncentrace kationtů (mM); Osa Y : (A) : % maximální vázání lipozómů; (B): % maximální promíchání lipidů.
Obrázek 3
Závislost vázání lipozómů (A) a promíchání lipidů (B) na N-C12-DOPE, měřená pomocí NBD/Rh RET. Značené lipozómy a neznačené erytrocyty byly inkubovány při 37 °C po dobu ft • φ ··· φ φ φ φ φφ φ* • φ φ • φ · φ · · φ φ φφ φφ φ
φ φφφ φ φ φ« φφ φφ φ φ φ φ φ φ φφφ φ φ
φ φφφ »
φφ φφ hodiny v přítomnosti 3 mM Ca2+. Osa X : Molární poměr N-C12-DOPE : DOPC; Osa Y : (A) : % maximální vázání lipozómů; (B): % maximální promíchání lipidů.
Obrázek 4
Porovnání lipozómů obsahujících DOPG/DOPC -(80:20), mozkový PS/DOPC -(80:20) a N-C12-DOPE/DOPC -(80:20), co do vázání lipozómů (A) a promíchání lipidů (B) s bezbarvými erytrocyty, měřené pomocí NBD/Rh RET. Lipozómy a erytrocyty byly inkubovány při 37 °C po dobu 1 hodiny v přítomnosti 3 mM Ca2+. Osa Y : (A) : % maximální vázání lipozómů; (B) : % maximální promíchání lipidů.
Obrázek 5
Fluorescenční mikrofotografie promíchání lipidů mezi N-C12-DOPE/DOPC - (70:30) a bezbarvými erytrocyty. NBD/Rh značené lipozómy byly inkubovány s erytrocyty po dobu 30 minut s (A) nebo bez (B) 1,25 mM Ca2+/Mg2+. Po inkubaci byly erytrocyty promyty, za účelem odstranění nenavázaných lipozómů. Celkové zvětšení je lOOOx pro každou fotografii.
Obrázek 6
Fluorescenční mikrofotografie dopravení obsahu z N-C12-DOPE/DOPC - (70:30) lipozómů do bezbarvých erytrocytů při 37 °C. TMR-70kD dextran obalující lipozómy byly inkubovány s erytrocyty po dobu 30 minut s (A) nebo bez (B+C) 1,25 mM Ca2+/Mg2+. Na fotografii D byly erytrocyty inkubovány po dobu 30 minut volným TMR-70kD dextranem v přítomnosti 1,25 mM Ca /Mg . Po inkubaci byly erytrocyty promyty, za účelem odstranění nenavázaných lipozómů. Celkové zvětšení je 400x pro A, B a D a lOOOx pro C.
Obrázek 7
Vázání a promíchání lipidů mezi lipozómy obsahujícími N-C12-DOPE/DOPC - (70:30) a buňkami U-937, měřené pomocí NBD/Rh RET. Lipozómy a buňky U-937 byly inkubovány
A , při 37 °C po dobu 1 hodiny v přítomnosti 3 mM Ca . Osa Y : (A) : % maximální vázání lipozómů (levé sloupce); (B) : % maximální promíchání lipidů (pravé sloupce).
Obrázek 8 pH-závislost vázání a promíchání lipidů mezi lipozómy obsahujícími N-C12-DOPE/DOPC • · · · • · · ·
(70:30) a bezbarvými erytrocyty, měřená pomocí NBD/Rh RET. Lipozómy a erytrocyty byly inkubovány při uvedených hodnotách pH po dobu 1 hodiny v nepřítomnosti dvojmocných kationtů. Osa Y : (A) : % maximální vázání lipozómů; (B) : % maximální promíchání lipidů.
Tento vynález bude lépe vysvětlen v následující příkladech. Avšak odborníci v oboru snadno pochopí, že tyto příklady pouze objasňují tento vynález, jak je definován v po nich následujících nárocích.
Příklady provedení vynálezu
Materiál : DOPC, mozkový PS, diolejoylfosfatidylethanolamin (DOPE), diolejoylfosfatidylglycerol (DOPG) byly zakoupeny od Avanti Polar Lipids (Alebaster, AL). N-(7-nitro-2,l,3-benzoxadiazol-4-yl)fosfatidylethanolamin (vejce) (NBD-PE), N-(lissaminrhodamin B-sulfonyl)fosfatidylethanolamin (vejce) (Rh-PE), s tetramethylrhodaminem spojený 70kD dextran (TMR-70D) byly zakoupeny od Molecular Proces (Eugen, OR). Oktaethylenglykolmonododecylether (Ci2E8) a triethylamin byly zakoupeny od Fluka (Roukonkoma, NY). N-[tris(hydroxymethyl]-2-aminoethansulfonová kyselina (TES) byla zakoupena od Calbiochem (La Jolla, CA). Anhydrid kyseliny laurové byla zakoupen od Aldrich (Milwaukee, WI). Lidský protrombin, faktor V/Va a faktor Xa byly zakoupeny od Enzyme Research Laboratories Inc. (South Bend, IN). Sarkosin-Pro-Arg-p-nitroanilid byl zakoupen od Sigma (St. Louis, MO). Buňky U-937 byly zakoupeny od American Type Culture Collection (Rockville, MD).
Příklad 1
Syntéza a charakterizace NAPĚ
DOPE, rozpuštěný v CHCI3 (500 mg, 0,67 mmol) byl míchán po dobu 24 hodin při pokojové teplotě s anhydridem kyseliny laurové (513 mg, 1,34 mmol) a triethylaminem (726 mg,
7,2 mmol). Chromatografíe na tenké vrstvě ukázala, že zmizely všechny výchozí látky. Rozpouštědlo bylo odpařeno a zbytek byl vyčištěn kolonovou chromatografií (flash) na silikagelu (230-400 mesh, Aldrich, Milwaukee, WI), za použití gradientů rozpouštědel CHCL/MeOH, 100:0, 98:2, 95:5, 90:10 a 80:20. Žádaná látka byla shromážděna a zakoncentrována ve vakuu. Získaný produkt byl rozpuštěn v minimálním množství CHCI3 a ··· ···· ···· ···· · ·· · · ·· · • · · · · · ··· · ··· ··· ····· · · · ····· ·· ·· · · ·· tento roztok byl protlačen přes stříkačkový filtr Acrodisc® CR (0,2 pm, Fischer Scientific, Malvem, PA), za účelem odstranění silikagelu. Po odstranění chloroformu byl produkt lyofilizován z cyklohexanu a byl charakterizován pomocí protonové nukleární magnetické rezonance (H1 NMR, Bruker Instrument lne., Manning MA, 300 MHz, CDCI3) a TLC. Větší množství N-C12-DOPE bylo zakoupeno od Avanti Polar Lipids.
Příklad 2
Příprava lipozómů
Velké jednovrstevné vezikuly (LUV), značené NBD/Rh, byly připraveny tak, jak bylo popsáno dříve (Mayer L. D., Hope M. J. & Cullis P. R. (1986) Biochim. Biophys. Acta 858, 161-168, jehož obsah je zde zahrnut odkazem) Stručně, směs 70 molárních procent N-dodekanoyl-diolejoylfosfatidylethanolaminu a 30 molárních procent diolejoylfosfatidylcholinu v chloroformu byla vysušena pomocí dusíku na tenkou vrstvičku, která se poté nechala přes noc ve vakuu, za účelem odstranění rozpouštědla. Lipidická vrstvička byla poté hydratována roztokem NaCI pufrovaným TES (10 mM TES, 0,1 mM EDTA, 154 mM NaCI, pH 7,4); pro zajištění úplné hydratace bylo použito lehké zatřepání. Po deseti cyklech zmrazení/rozmrazení v tekutém dusíku/vodní lázni pokojové teploty byl vzorek deset krát protlačen přes 0,1 pm polykarbonátový membránový filtr (Poretics Corp., Livermore, CA). Výsledné lipozómy byly uloženy při 4 °C.
Pro LUV obalující dextran nebyly použity žádné fluorescenčně značené lipidy. Suchá lipidická vrstvička byla hydratována 50 mg/ml TMR-70D v roztoku pufrovaném 10 mM TES. Po zmrazení/rozmrazení a protlačení byly LUV odděleny od nezabaleného dextranu pomocí 45 x 1,3 kolony Biogel-A50 pro gelovou filtraci (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA). Lipozómy byly uskladněny při 4 °C a byly použity do jednoho týdne od přípravy. Koncentrace pro každou přípravu lipozómů byla určena pomocí fosfátového pokusu (Bartlett G. R. (1959) J. Biol. Chem, 234, 466-468. Přibližně lpm velikost lipozómů byla potvrzena na Nicomp submicron particle sizer (Nicomp Instruments lne., Goleta, CA) za použití quasielektrického rozptylu světla.
Příklad 3
Příprava znovu uzavřených a otevřených lidských bezbarvých erytrocytů
Znovu uzavřené bezbarvé erytrocyty se nazývají bezbarvé erytrocyty, pokud není uvedeno jinak, a byly připraveny tak, jak bylo dříve popsáno (Williamson P., Algarin L., Bateman J.;
• ·· · · flfl ·· ·· • · · · · · · ···· • ••fl · flfl · · flfl ·
Clague M. J., Schod C., Zech L. & Blumenthal R (1990) Biochemistry 29, 1303-1309. Stručně, čerstvá lidská krev byla několikrát promyta studeným roztokem NaCl pufrovaným 10 mM TES, za účelem odstranění plazmy a bílých krvinek. 2 ml promytých erytrocytů (50% hematokrit) se nechaly nabobtnat v studeném hypotonickém roztoku, obsahujícím 8 ml H2O a 9,6 ml roztok NaCl pufro váného 10 mM TES. Tyto erytrocyty byly centrifugo vány při 850xg po dobu 5 minut. Pelet byl resuspendován ve 40 ml studeného lyzačního pufru (10 mM Tris, 0,1% BSA, 2 mM MgCl2 a 0,1 mM EGTA) a byl inkubován v ledu po dobu alespoň 2 minut. Po přidání 5,5 ml 10 x pufru pro znovuuzavření (1,22 M NaCl, 30 mM KC1, 0,15 M Na2HPO4, 50 mM KH2PO4, a 2 mM MgCl2) byl vzorek inkubován při 37 °C po dobu 40 minut. Znovu uzavřené bezbarvé erytrocyty byly centrifugovány při 1750xg po dobu 10 minut a byly několikrát promyty dokud nebyl v supernatantu pozorován žádný hemoglobin. Znovu uzavřené bezbarvé erytrocyty byly uskladněny při 4 °C a byly použity do jednoho týdne.
Otevřené bezbarvé erytrocyty byly připraveny tak, jak bylo popsáno dříve (Steck T. L. & Kant J. A. (1974) Methods Enzymol. 31, 4231-4241, jehož obsah je zde zahrnut odkazem). Stručně, erytrocyty byly několikrát promyty roztokem NaCl pufrovaným 10 mM TES, za účelem odstranění plazmy a bílých krvinek. Pelet byl resuspendován ve studeném 5 mM Na2HPO4 a byl centrifugo ván při 14000xg po dobu 15 minut. Výsledný pelet byl promýván stejným pufrem do pročištění supernatantu. Otevřené bezbarvé erytrocyty byly uskladněny ve stejném pufru při 4 °C a byly použity do jednoho týdne.
Příklad 4
Fluorescenční pokusy s vázáním a promícháváním lipidů
V každém pokusu bylo smícháno buď 10 nmol lipozómů a 5x108 bezbarvých erytrocytů nebo 10 nmol lipozómů a lxlO7 buněk U-937. Celkový objem byl doplněn na 100 μΐ roztokem NaCl pufrovaným 10 mM TES. Pro pokusy při nízkém pH byl smíchán stejný objem roztoku NaCl pufrovaného 10 mM citrátem (50 mM citrát, 90 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, pH 4,7) a směsi lipozómy-erytrocyty a tak bylo získána konečná hodnota pH 4,9 a konečný objem 106 μΐ. Směs byla inkubována při 37 °C po uvedené časové intervaly s nebo bez dvojmocných kationtů. Směs byla centrifugována po dobu 5 minut při 3500xg, v případě bezbarvých krvinek, nebo 300xg, v případě buněk U-937. Nenavázané lipozómy byly odstraněny se supernatantem, pelet byl resuspendován v 100 μΐ roztoku NaCl pufrovaném TES a poté byl přenesen do kyvety obsahující stejný pufr, při pokojové teplotě. Celkový • ·
objem kyvety byl 2 ml. Všechny údaje jsou průměry tří stejných pokusů, pokud není uvedeno jinak.
Promíchání lipidů mezi lipozómy značenými NBD/Rd a neznačenými bezbarvými erytrocyty nebo buňkami U-937 bylo měřeno v roztoku NaCl pufrovaném 10 mM TES pomocí rezonančního přenosu energie NBD/Rd (Struck D. H., Hoekstra D. & Pagano R. E. (1981) Biochemistry 20, 4093-4241. Fluorescence NBD byla měřena při pokojové teplotě na PTI Alphascan™ fluolometru (South Brunswick, NJ) v kyvetě za stálého míchání. Excitační vlnová délka byla 450 nm s 450±20 nm filtrem (Griot, Irvine, CA) pro další pročištění světelných paprsků. Emisní vlnová délka byla 530 nm s a > 500 nm homofrekvenčním filtrem (Schott Glass Technologies, Duryea, PA). Fluorescence NBD čerstvě připravených směsí lipozóm-buňka, to jest bez inkubace a točení, byla také měřena s nebo bez 0,2% Ci2E8, za účelem získání 0% respektive 100% promíchání lipidů. Fluorescence Rh v přítomnosti 0,2% Ci2E8 byla použita pro měření vázání lipozómů. Excitační vlnová délka byla 560 nm s 550±20 nm filtrem (Griot, Irvine, CA) pro další pročištění světelných paprsků. Emisní vlnová délka byla 600 nm s a > 570 nm homofrekvenčním filtrem (Schott Glass Technologies, Duryea, PA). Rh fluorescence samotných buněk v přítomnosti 0,2% CnEe, byla vzata jako 0% vázání. Rh fluorescence čerstvě připravených směsí lipozóm-buňka byla měřena v přítomnosti 0,2% Ci2E3, za účelem získání 100% vázání. Rozsahy promíchání lipidů a vázání byly vypočítány tak, jak uvedeno dále % promíchání lipidů = 100 x [(Ns-Nc) x Rod/ Rsd] +Nc-No [(Nsd-Ncd) x Rod/ Rsd] +Ncd_No ; a % vázání = 100 x Rsd-Rcd Rod-Rcd , kde : Ns: NBD fluorescence vzorku; Nc: NBD fluorescence samotných buněk; No: NBD fluorescence čerstvě připravené směsi lipozóm-buňka; Nsd: NBD fluorescence vzorku v přítomnosti detergentu; Ncd: NBD fluorescence samotných buněk v přítomnosti detergentu; Rod: Rh fluorescence čerstvě připravené směsi lipozóm-buňka v přítomnosti detergentu; Rsd: Rh fluorescence vzorku v přítomnosti detergentu; Rcd : Rh fluorescence samotných buněk v přítomnosti detergentu.
Procento vázání v případě bezbarvých krvinek bylo upraveno na zbytkovou nenavázanou fluorescenci předpokládaného 10% supernatantu, který zůstal v každém peletu. Tudíž :
% vázání (uprav.) =1,11 (měřené procento) -11,1
Obdobné úpravy pro promíchání lipidů kterýchkoliv vzorků s významným vázáním byly zanedbatelné.
Příklad 5
Fluorescenční mikroskopie nmol N-C12-DOPE/DOPC (70/30) lipozómů, oba!ujícíchTMR-70kD dextran nebo značených pomocí NBD/Rh, a 5xlO8 bezbarvých erytrocytů bylo inkubováno při 37 °C po dobu 30 minut s nebo bez 1,25 mM Ca2+/Mg2+’ Na konci inkubace byl ke každému vzorku přidán ledový roztok NaCl pufrovaný 10 mM TES s nebo bez Ca2+/Mg2+ do konečného objemu 1 ml.. Vzorek byl centrifugován po dobu 5 minut při 3500xg a výsledný pelet byl jednou promyt stejným pufrem, za účelem odstranění nenavázaných lipozómů. Pelet byl poté resuspendován ve stejném pufru a byl pozorován na fluorescenčním mikroskopu Olympus BH-2 (Olympus Corp., Lake Succes, NY), který byl vybaven 545 nm excitačním filtrem (Olympus Corp) a a >580 dichroickým zrcadlem (Olympus Corp.).
Příklad 6
Vázání a promíchávání s bezbarvými erytrocyty závislé na pH
Bezbarvé erytrocyty, připravené podle výše popsaného postupu, byly inkubovány při 30 °C po dobu 1 hodiny buď v mediu s pH 7,4 nebo pH 4,9 v nepřítomnosti dvojmocných kationtů, s N-C12-DOPE/DOPC (70/30) lipozómy, připravenými podle výše popsaných postupů. Rozsahy vázání lipozómů a promíchání lipidů byly poté určeny podle uvedených výše postupů.
Výsledky těchto pokusů jsou uvedeny na obrázku 8.
Claims (26)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje (a) farmaceuticky přijatelný nosič; a (b) lipozóm, mající lipidickou složku, která obsahuje (i) N-acylfosfatidylethanolamin, který má vzorec :ch2-o-r1ICH-O-R2ICH2-O-P(O)2-O-CH2CH2NH-R3 a (ii) přídavný lipid kde:kde každý z R1, R2 a R3 je nezávisle skupinou, která má vzorec : C(O)(CH2)n,(CH=CH)n2(CH2)n3(CH=CH)n4(CH2)n5(CH=CH)n6(CH2)n7(CH=CH),l8(CH2)n9CH3;nl je nula nebo celé číslo, rovné od 1 do 22;n3 je nula nebo celé číslo, rovné od 1 do 19;n5 je nula nebo celé číslo, rovné od 1 do 16;n7 je nula nebo celé číslo, rovné od 1 do 13;n9 je nula nebo celé číslo, rovné od 1 do 10;pro každé R1 a R2 nezávisle, je součet nl+2n2+n3+2n4+n5+2n6+n7+2n8+n9 celé číslo, rovné od 12 do 22;pro R3 je součet nl+2n2+n3+2n4+n5+2n6+n7+2n8+n9 celé číslo, rovné od 2 do 22; každý z n2, n4, n6 a n8 je nezávisle roven 0 nebo 1; alespoň jeden z n2, n4, n6 a n8 je roven 1;tato lipidická složka obsahuje destabilizaceschopné množství N-acylfosfatidylethanolaminu a tento lipozóm je mnohovrstevný nebo velký jednovrstevný lipozóm.
- 2. Lipozóm podle nároku 1, kde projeden nebo oba z R1 a R2 je alespoň jeden z n2, n4, n6 nebo n8 roven 1.ΦΦ φφ φφ φ φ φ · · φ · • · · φ φ φ φ φ φφφφ φφφ φφφ • φ · φ φφ φφφφ
- 3. Lipozóm podle nároku 2, kde pro oba z R1 a R2 je alespoň jeden z n2, n4, n6 nebo rí8 roven 1.
- 4. Lipozóm podle nároku 3, kde jsou oba R1 i R2 -C(O) (CH2)7(CH=CH)(CH2)7CH3.
- 5. Lipozóm podle nároku 1, kde R3 je -C(O)(CH2)4CH3, -C(O)(CH2)10CH3 nebo C(O)(CH2)14CH3.
- 6. Lipozóm podle nároku 5, kde R3 je -C(0)(CH2)ioCH3.
- 7. Lipozóm podle nároku 1, kde N-acylfosfatidylethanolamin jeCH2-O-C(O)(CH2)7(CH=CH)(CH2)7CH3ICH- O-C(O)(CH2)7(CH=CH)(CH2)7CH3ICH2-O-P(O)2-O-CH2CH2NH-C(O)(CH2)10CH3,
- 8. Lipozóm podle nároku 1, kde N-acylfosfatidylethanolamin představuje alespoň asi 10 molárních procent lipidické složky.
- 9. Lipozóm podle nároku 8, kde N-acylfosfatidylethanolamin představuje od asi 10 molárních procent do asi 90 molárních procent lipidické složky.
- 10. Lipozóm podle nároku 9, kde N-acylfosfatidylethanolamin představuje od asi 20 molárních procent do asi 80 molárních procent lipidické složky.
- 11. Lipozóm podle nároku 10, kde N-acylfosfatidylethanolamin představuje asi 70 molárních procent lipidické složky.
- 12. Lipozóm podle nároku 1, kde přídavným lipidem je fosfolipid.
- 13. Lipozóm podle nároku 12, kde tímto fosfolipidem je fosfatidylcholin.
- 14. Lipozóm podle nároku 13, kde fosfatidylcholinem je diolejoylfosfatidylcholin.φ φ φ φ φ · φ · φφφ φφφ φ φ • φ φ φ
- 15. Lipozóm podle nároku 1, kde lipidickáN-dodekanoylfosfatidylethanolamin a diolejoylfosfatidylcholin.• · • ·· • · φ φ • Φ φφ φ φ φ φ • φ φ φ φ φ ΦΦΦ· φ φ φ složka zahrnuje
- 16. Lipozóm podle nároku 15, kde N-dodekanoylfosfatidylethanolamin představuje asi 70 molárních procent lípidické složky lipozómů a diolejoylfosfatidylcholin představuje asi 30 molárních procent lípidické složky .
- 17. Lipozóm podle nároku 1, kde přídavným lipidem je fosfatidylethanolamin.
- 18. Lipozóm podle nároku 17, kde je fosfatidylethanolamin vybrán ze skupiny, obsahující transesterifikovaný fosfatidylethanolamin, dipalmitoylfosfatidylethanolamin, palmitolylolejoylfosfatidylethanolamin a diolejoylfosfatidylethanolamin.
- 19. Lipozóm podle nároku 17, kde fosfatidylethanolamin je fosfatidylethanolamin spojený s látkou, vybranou ze skupiny obsahující dikarboxylové kyseliny, polyethylenglykoly, polyalkylethery a gangliosidy.
- 20. Lipozóm podle nároku 1, obsahující naváděcí látku, vybranou ze skupiny obsahující protilátky, ligandy buněčných receptorů a lektiny.
- 21. Lipozóm podle nároku 1, obsahující bioaktivní látku, vybranou ze skupiny obsahující antivirální látky, antibakteriální látky, antifungální látky, antineoplastické látky, protizánětlivé látky, radioaktivní značky, látky nepropouštějící záření, fluorescenční látky; mydriatické látky, bronchodilatátory; lokální anestetika; sekvence nukleových a bioaktivní lipidy.
- 22. Způsob dopravování bioaktivní látky do buňky, vyznačující se tím, že zahrnuje setkání se buňky s prostředkem nároku 1.
- 23. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že k tomuto setkání dochází in vitro a tím, že k tomuto setkání dochází v přítomnosti fyziologické koncentrace kationtu nebo při kyselém pH.·· 999 9 9 99 9 9 99 999 99 99 99 9 99 • ·· »· 9 • ··· • · · »9 9 9999 9999 999 9 9 99 9 9 99 9 9 999 9 · ·· »·
- 24. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že touto buňkou je buňka savčí a tato buňka se setká s prostředkem v těle savce.
- 25. Způsob podle nároku 24, vyznačující se t í m, že lipozóm dále obsahuje naváděcí látku.
- 26. Způsob podle nároku 24, vyznačující se t í m, že tento savec je postižen rakovinou a lipozóm obsahuje protirakovinně účinné množství protirakovinné látky.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19992380A CZ238099A3 (cs) | 1997-10-15 | 1997-10-15 | Farmaceutický prostředek, lipozóm a způsob dopravování bioaktivní látky do buňky |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19992380A CZ238099A3 (cs) | 1997-10-15 | 1997-10-15 | Farmaceutický prostředek, lipozóm a způsob dopravování bioaktivní látky do buňky |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ238099A3 true CZ238099A3 (cs) | 2000-01-12 |
Family
ID=5464848
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19992380A CZ238099A3 (cs) | 1997-10-15 | 1997-10-15 | Farmaceutický prostředek, lipozóm a způsob dopravování bioaktivní látky do buňky |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ238099A3 (cs) |
-
1997
- 1997-10-15 CZ CZ19992380A patent/CZ238099A3/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK99399A3 (en) | N-acyl phosphatidylethanolamine-mediated liposomal drug delivery | |
| Środa et al. | Repeated injections of PEG-PE liposomes generate anti-PEG antibodies | |
| US6043094A (en) | Therapeutic liposome composition and method | |
| Fendler et al. | Liposomes as drug carriers | |
| US4235871A (en) | Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles | |
| KR100381449B1 (ko) | 에테르지질리포좀과이들의제약학적용도 | |
| JPH01502590A (ja) | 循環時間の長いリポソーム | |
| EP0036277B1 (en) | Covalently bonded liposome-protein-compositions and method of producing them | |
| US7368254B2 (en) | Lipid-based systems for targeting diagnostic agents | |
| JP2001510457A (ja) | インビボ送達に有効な、脂質―核酸複合体の安定な製剤の調製 | |
| US20020192274A1 (en) | pH sensitive liposomal drug delivery | |
| NL8501010A (nl) | Verbeteringen van of verband houdende met de interleukinetherapie. | |
| PT86090B (pt) | Lipossoma de aerossol em particulas pequenas e preparacoes lipossoma-medicamento para utilizacao em medicina | |
| WO2004098537A2 (en) | Activation agents on the surface of encapsulation vesicles | |
| MXPA00006196A (es) | Metodo para desarrollar, evaluar y utilizar asociaciones de macromoleculas y agregados complejos para obtener mejores tasas de asociacion/desasociacion controlable y carga efectiva. | |
| US20040047903A1 (en) | D and L etherlipid stereoisomers and liposomes | |
| Gray et al. | Liposomes in haematology | |
| JP2010505880A (ja) | ｐＨ感受性リポソーム組成物 | |
| CZ238099A3 (cs) | Farmaceutický prostředek, lipozóm a způsob dopravování bioaktivní látky do buňky | |
| US5419914A (en) | Phospholipid analogue vesicle | |
| JPWO2004087106A1 (ja) | リポソームからの搬送目的物の放出速度調節方法 | |
| CN112641757B (zh) | 一种用于跨膜递送分子的载体及其制备方法 | |
| Langner et al. | The macromolecular aggregate as a drug carrier | |
| JP2002241313A (ja) | リポソームベクター |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |