CZ287178B6 - Stable lyophilized pharmaceutical preparation - Google Patents

Description

Stabilní lyofilizovaný farmaceutický přípravek

Oblast techniky

Tento vynález se týká farmaceutického přípravku ve formě lyofilizátu s obsahem nejméně jedné aktivní složky neproteinické povahy. Zvláště pak se vynález týká přípravků, stálých za teplot, které lze obměňovat od 25 do 40 °C, které lze zpětně upravit do kapalné formy přidáním rozpouštědla pro podávání jak orální, tak i parenterální cestou, případně výlučně orálně, a to lidem či zvířatům.

Dosavadní stav techniky

Aktivní složka v přípravku dle tohoto vynálezu se může použít co taková, nebo napojená na jinou složku aktivní, proteinickou či nikoli. Tvrdí se, že lyofilizování může mít podstatný a zásadní vliv na odbourání účinných farmaceutických složek v přípravku, jakož i může mít silný dopad na jejich stálost v lyofilizované formě. Další proměnné, které ovlivňují uvedené parametry, jsou hodnota pH, množství přítomných solí, typ a množství excipientií v přípravku, typ zvoleného kiyoproteinu, jakož i teploty, tlak a doba, potřebná při kogelování, dále sublimace a zvolené prostředí vysýchání. Tyto různé obměnitelné složky mají vliv na fyzikální stav získaného lyofilizátu, tedy na jeho stav amorfně sklovitý, amorfní či krystalinické vločky nebo kombinaci těchto situací.

Při konzervování lyofilizátů se často používají aminokyseliny, s výhodou glycin, a polyoly, s výhodou mannitol, ale literatura, v tomto směru skutečně bohatá, nedává žádné výsledky srovnávání při řešení tohoto problému tak, aby se získal farmaceutický přípravek, stabilní se zřetelem na různé proměnné parametry⁷, které zasahují do postupů přípravy a lyofilizování účinné složky neproteinické povahy ve spojitosti s aminokyselinou a některým polyolem.

Zvláště pak třeba připomenout, že literatura uvádí, že současná přítomnost aminokyseliny, polyolu, například mannitolu, krystalické fáze či další fáze amorfní může vést kromě někteiých výhod také k nevýhodám, které se projeví v případě, že lyofilizáty obsahují zvláště citlivou aktivní složku zkrácením doby trvanlivosti na dobu poměrně krátkou a/nebo při skladování za teplot v případě takových lyofilizátů pod 8 °C. Bylo by proto obzvláště výhodné, zvláště z hlediska ambulantního ošetřování, mít zde přípravky, stálé za obvyklých teplot až do chvíle jejich konečné úpravy s tím, že bude možno se vyvarovat uchovávání v ledničce, a to i bezprostředně při používání.

Úlohy polyolu a aminokyseliny byly studovány odděleně v případě lidského růstového hormonu (1‘hormone de croissance humaine, hGH), ale jejich synergický účinek je až dosud skutečně málo objasněn, viz Pikal M.J., Dellermann K.M., Roy M.L., Rigin M.N., The effects of formulation variables on the stability of fřeeze-dried Human Growth Hormone, Pharm. Research 8, č. 4, 427-436 (1991).

Výhody, jakož i nedostatky, spojené s přítomností aminokyselin, mannitolu, krystalické anebo amorfní fáze jsou zde dále rozebírány.

Výhody, spojené s přítomností aminokyselin

Bylo dokázáno, že přítomnost glycinu v lyofilizátu indukuje krystalizaci molekul, přítomných v roztoku v průběhu etapy kongelování při lyofilizování, viz Korey D.J., Schwartz J.B., Effects of excipiens on the crystallization of pharmaceutical compounds during lyophilization, J. Parenteral Sci. Těch., 43, č. 2, 80-83 (1989). Toto krystalování aktivní základní složky dovoluje zlepšit odpovídající stálost.

Alanin v krystalické formě má výhodu vtom smyslu, že zabraňuje hromadění se lyofilizátu během sublimování, sušení a dovoluje tak získat lyofilizát se specifickým povrchem mnohem

-1 CZ 287178 B6 výhodnějším a dovoluje tak rychlejší vysušení, viz Pikal M.J., Freeze-Drying of proteinsm Biopharm., 1990, 26-30, říjen, což bývává nevýhodou ve spojitosti s přítomností aminokyselin.

Přidání aminokyseliny k sacharidu nebo polyolu v roztoku, který je určen k lyofilizování je obvykle spojeno s možným snížením teploty přechodu sklovitého stavu sacharidu. K tomu viz de Booy M.P.W.M., de Ruiter R.A. a de Meere A.L.J., Evaluation of the physical stability of freeze-dried sucrose containing formulations by differential scanning calorimetry, Pharm. Research 1992, č. 9, 109-114. Nebo snížení teploty přechodu sklovitého tvaru je obecně náznakem nižší stálosti lyofílizátu, viz Franks F., Freeze-drying, from Empiricism to predictability, Cryoletter 11, 93-110 (1990).

Výhody spojené s přítomností mannitolu

Přítomnost mannitolu v přípravku lyofílizátu je obecně oprávněna potud, že vyvažuje průběh lyofilizování, to znamená, že dovoluje udržet pevnou a rigidní strukturu v objemu lyofílizátu, jak to odpovídá objemu roztoku, určeného k lyofilizování, ale jeho přítomnost rovněž dovoluje upravit isotonii roztoku při rekonstituování k injikování. Ačkoliv je mannitol převažujícím excipiens v kompozici lyofílizátu, nejčastěji je tamže ve formě krystalické, viz Hora M.S., Rana R.K., Lyophilized formulations recombinant tumor necrosis factor, Pharm. Res. 9, č. 1, 33-36 (1992).

Nevýhody spojené s přítomností mannitolu

Bylo již zveřejněno, že míra hydrolýzy sodné soli methylprednisolonjantaranu ve formě lyofílizované je vyšší za přítomností mannitolu ve srovnání s přítomností laktosy a že se tato míra zvětšuje v závislosti na množství mannitolu v lyofílizátu. Bylo to vysvětlováno tak, že krystalováním mannitolu v průběhu lyofilizování se mění distribuování vody v matrici lyofílizátu. Zvětšení množství vody, přítomné vnejbližším okolí aktivní látky, což je bezprostředním důsledkem, podporuje hydrolýzu účinné látky a snižuje její stálost, viz Herman B.D., Sinclair B.D., Milton N., Nail W.L., The effect of bulking agent on the solid statě stability of freeze dried methylprednisolone sodium succinate, Pharm. Res. 11, č. 10, 1467-1473 (1994).

Výhody, spojené s přítomností krystalické fáze

Přítomnost rozpuštěné krystalické látky v roztoku ke kongelování je možností, jak stabilizovat proteiny v průběhu sušení, viz Carpenter J.F. a Crowe J.H., Modes of stabilization of a protein by organic solutes during dessication, Cryobiology 25, 459 (1988). Navíc krystalování - během kongelování - převážného množství excipientií, přítomných v lyofílizovaném roztoku, poskytuje více prostoru pro postupy sublimování a sekundárních sušení, zvětšuje se tím specifický povrch mezi vnější atmosférou lyofílizovaného povrchu a pevnými podíly, určenými k sublimování. Toto zvýšení specifického povrchu krystalických forem ve vztahu k formám amorfním usnadňuje tepelnou výměnu během lyofilizování. Důsledkem této zvýšené účinnosti lyofilizování je získání lyofílizovaných forem, jejichž obsah zbylé vody je nižší, což znamená zvýšenou stálost lyofílizátu za vyšších teplot, viz Korey D.J., Schwartz J.B., Effects of excipients on the crystallization of pharmaceutical compounds during lyophilization, J. Parenteral Sci. Těch. 43, č. 2, 80-83 (1989).

Nevýhody spojené s přítomností krystalické fáze

Obecně řečeno se krystalické látky rozpouštějí méně rychle než látky amorfní. Ve skutečnosti je třeba více energie pro rozrušení molekuly s organizovaným stavem v krystalickém uspořádání, než jak je tomu při rozrušení neorganizovaného seskupení stavu amorfního. Někdy a často je rychlost rozpouštění nedostačující, aby bylo možno dosáhnout dostatečně rychlého absorbování těchto látek, což může vést k snížení jejich účinnosti, zvláště pak v případě molekul, méně stálých v roztoku. V tomto směru dokonalá pravidelnost krystalů by byl stav ideální, zatímco heterogenita krystalické fáze a tím vzniklý polymorfísmus téže látky ve spojitosti s asociovanými látkami vede k lišícím se rychlostem rozpouštění téže látky i každé další v roztoku, což může

-2CZ 287178 B6 vyústit k nereprodukovatelným terapeutickým výsledkům, viz Galénica 2, Biopharmacie, 2. vyd., 1982, technika a dokumentace.

Kromě toho bylo zjištěno, že ztráta účinnosti lyofilizovaného proteinu je v přímém vztahu k míře krystalinity kryoprotektivní molekuly, viz Izutsu K.L., Yoshioka S., Terao T., Decreased proteinstabilizing effects of cryoprotectants due to crystallization, Pharm. Research 10, č. 8, 1232-1237 (1993); Isutzu K.I., Yoshioka S., Kojima S., Increased stabilizing effects of amphiphilic excipients on freeze drying of lactate deshydrogenase (LDH) by dispersion into sugar matrixes, Pharm. Res. 12, č. 6, 838-843 (1995). V přípravcích léků s obsahem proteinů je třeba vyvarovat se krystalování excipientií, viz Heřmanský M., Pěšák M., Lyophilization of drugs, VI. Amorphous and Ciystalline Forms.

Výhody spojené s přítomností amorfní fáze

Ve stejném pořadí postupu se amorfní forma rozpouští rychleji než forma krystalická a nedochází zde ke komplikacím ve spojitosti s heterogenitou a polymorfismem krystalických látek.

Na druhé straně přítomností látek v amorfním stavu se stabilizuje účinnost některých enzymů úměrně jejich přísad, viz Isutzu K.L., Yoshioka S., Terao T., Decreased protein-stabilizing effects of cryoprotectants due to crystallization, Pharm. Research 10, č. 8,1232-1237 (1993).

Kryoproteční účinek excipientií je připisován amorfnímu stavu glycinu v získaném lyofilizátu, viz Pikal M.J., Dellermann K.M., Roy M.L., Riggin M.N., The effects of formulation variables on the stability of freeze-dried Human Growth Hormone, Pharm. Research 8, č. 4, 427-436 (1991).

Nevýhody, spojené s přítomností amorfní fáze

Za přítomnosti samotné pevné amorfní fáze se lyofilizát mění za vyšších teplot než je teplota přechodu do sklovitého tvaru během kongelování. V důsledku měkké amorfní fáze má chemická reakce při degradování mnohem vyšší kinetiku ve srovnání s fází krystalickou, viz Ashizawa K., Uchikawa K., Hattori T., Ishibashi Y., Miyake Y., Sáto T., Solid statě stability and preformulation study of a new parenteral cephalosporin antibiotics (E 104P), Yakugaku Zasshi 110, č. 3, 191-201 (1990).

Dále pak větší lychlost rozpouštění amorfních látek je mnohdy doprovázena větší nestálostí, což je dáno přechodem ze stavu amorfního do stavu krystalického, viz Galénica 2, Biopharmacie, 2. vydání, 1982, technika a dokumentace.

Důsledkem toho je konstatování, že vědecká literatura, týkající se vlivu excipientií na stabilizování účinných látek farmaceutických prostředků, dává zcela protichůdné informace o jejich vlastnostech, což nedovoluje získat přesné informace na téma „vztah mezi strukturou lyofilizátu a jeho stálostí“. Rovněž úloha polyolů a aminokyselin, jednotlivě nebo v kombinaci, není popsána z hlediska celku zobecněných vlastností, a lze se opět setkat s protichůdnými sděleními a výsledky v otázce účinných látek, jak byly studovány, a množství excipientií, zahrnutých do postupu.

Podstata vynálezu

Bylo nyní nalezeno, že je zde synergický efekt mezi mannitolem a alaninem na stabilizování účinných látek lyofílizovaných farmaceutických prostředků a současně bylo zjištěno, že k tomuto synergickému účinku dochází jen ve velmi úzkém rozmezí relativních koncentrací každého z obou dvou excipientií.

Na podkladu tohoto vynálezu bylo dále zjištěno, že dochází k překvapujícímu synergickému výsledku v důsledku koexistence fáze amorfní a druhé krystalické, a důsledkem toho je stabilizování hlavní účinné látky lyofilizovaného přípravku.

-3CZ 287178 Β6

Tento vynález pak popisuje dosažení tohoto výsledku za výhodných poměrů mannitolu a alaninu. Takže tento vynález se týká lyofilizovaných farmaceutických přípravků, sestávajících zjedné fáze amorfní a druhé krystalické s obsahem účinného množství nejméně jedné účinné farmaceutické látky povahy neproteinu, s obsahem mannitolu a alaninu s tím, že poslední dvě excipientia jsou v hmotnostním poměru R mezi 0,1 až 1, přičemž R znamená poměr mezi hmotností mannitolu a hmotností alaninu.

Účinná látka, zahrnutá do takovéhoto přípravku, je stabilní za teplot v rozmezí 25 až 40 °C v lyofilizované formě. Rozhodujícím výsledkem je to, že rozpouštění lyofílizátu je rychlé a úplné. Vzhled lyofílizátu se nemění a jeho obsah vody je kompatibilní s přihlédnutím k udržení stálosti účinné látky. Bylo zde již řečeno, že R může znamenat poměr mezi 0,1 až 1

- lyofilizát je složen z fáze amorfní a kiystalické,

- fáze amorfní je hlavně dána obsahem mannitolu a účinné látky,

- fázi krystalickou představuje z největší míry alanin.

Aniž by se vynález vázal na jakoukoli případnou teorii se zřetelem na stabilizaci, dosaženou spojením jedné či více účinných látek neproteinické povahy, mannitolu a alaninu v uvedených poměrech, lze nanést tuto další teorii:

Amorfní fáze, prokázaná a sledovaná diferenční tepelnou analýzou, chrání za chladu účinnou farmaceutickou složku během kongelování, přičemž vlastní účinná látka je dispergována v této amorfní hmotě, a fáze krystalická, prokázaná a sledovaná difraktometrií použitím paprsků X, fixuje strukturu lyofílizátu a brání jeho zhroucení či rozpadu.

Podle dalšího aspektu tohoto vynálezu má týž za předmět získání stálých lyofílizátů s obsahem účinné farmaceutické složky, chráněné za chladu pevnou amorfní fází, kterou představuje zcela nebo zčásti mannitol, přičemž tato amorfní fáze koexistuje se získaným lyofílizátem po sublimování nebo vysušení kongelovaných roztoků s fází krystalickou, kterou představuje v podstatě alanin.

Rovněž tak je jedním z předmětu dle tohoto vynálezu postup přípravy lyofilizovaných farmaceutických přípravků, obsahujících nejméně jednu účinnou složku neproteinické povahy a vyznačuje se tím, že se lyofilizuje směs uvedené účinné látky, mannitolu a alaninu, ve které jsou mannitol a alanin obsaženy v poměru R mezi 0,1 až 1, kde R znamená poměr mezi hmotami mannitolu a alaninu.

Do přípravku dle tohoto vynálezu lze použít další, farmaceuticky vhodná excipientia, používaná obvykle v lyofilizovaných formách, jako jsou například pufry, nebo směsi kyselin a zásad, dovolující úpravu hodnoty pH, tenzněaktivní látky, soli, konzervační činidla, zvláště antibakteriální, antioxidantia a chelatotvomé látky s výjimkou takových excipientií, která v lyofílizátu s obsahem účinné složky ruší koexistenci krystalické fáze, kterou představuje hlavně mannitol a fáze krystalické, kterou představuje hlavně alanin, jako je tomu například u některých proteinových derivátů původu živočišného či rostlinného, jako jsou želatiny, dextriny a proteiny, extrahované ze zrn obilných či sóji, gumy, jako je agar či xanthany, polysacharidy, algináty, karboxymethylcelulózy, pektiny, syntetické polymery jako je polyvinylpyrrolidon nebo komplexy povahy polysacharidů, jako je želatina z akacie. Mezi pufry lze uvést jako použitelné při přípravě léčivého přípravku zvláště pufiy uhličitanové, borátové, fosforečnanové, na bázi kyseliny citrónové, tri(hydroxymethyl)aminomethan, pufry na základě kyseliny jablečné a vinné, přičemž kyseliny a báze, představující pufr, lze rovněž přidávat do přípravku jednotlivě.

Mezi tenzněaktivními látkami, které lze přidávat do kompozice dle tohoto vynálezu, je možno citovávat hlavně polysorbáty, poloxamery, tyloxapol a lecithiny. Ze solí, které lze přidávat do přípravku dle tohoto vynálezu, lze jmenovat zvláště soli sodné, jako je tetrasodná sůl kyseliny ethylendiamintetraoctové, chloridy, sodnou sůl kyseliny l,4-bis-(2-ethylhexyl)-suIfojantarové, hydrogenuhličitany, glutamáty, octan draselný, neutrální uhličitan draselný a hořečnatou sůl kyseliny stearové.

-4CZ 287178 B6

Mezi konzervační činidla, která lze přidávat do přípravků dle tohoto vynálezu, je možno uvést zvláště methylester a propylester kyseliny p-hydroxybenzoové, benzothoniumchlorid, merkurothiolatnatrium, fenylmerkurinitrát, benzylalkohol, fenol a m-kresol.

Koexistence mannitolové amorfní fáze a krystalické alaninové fáze není závislá na přítomnosti a koncentraci použitého pufru, který slouží k úpravě hodnoty pH roztoku, závislost je zde hlavně na poměru R, jak zde již byl definován.

Jako příklady přípravy roztoků k lyofilizování, které pak vedou k přípravkům dle tohoto vynálezu, lze uvést:

Soustavu základních farmaceuticky účinných látek tvoří pufr, který je z hlediska farmaceutického přijatelný pro úpravu hodnoty pH, mannitolu a alaninu mezi 0,1 až 1, vodu pro přípravu injikovatelných roztoků, jakož i - je-li to třeba - antibakteriální konzervační činidla i excipientia, umožňující solubilizování aktivní látky nebo aktivních látek.

Podle jedné z možností, a to výhodných dle tohoto vynálezu, je převažujícím faktorem směs alaninu a mannitolu.

Množství přítomné účinné složky je dáno její rozpustností ve vodě. Přípravky dle tohoto vynálezu jsou ve skutečnosti výsledkem lyofilizování vodných roztoků, ve kterých jsou aktivní složky dokonale rozpuštěny.

Z téhož důvodu jsou všechna excipientia obsažena v přípravku v množství menším ve srovnání s množstvím směsi alaninu a mannitolu.

Roztoky, určené k lyofilizování, se připravují takto:

Potřebná množství pufru, alaninu, mannitolu, konzervační látky a hlavní účinné složky se protřepávají za teploty, vhodné k rozpuštění za použití vhodného objemu vody, jak je to třeba k rozpuštění pro získání injikovatelného přípravku nebo i za přítomnosti solubilizačního činidla, nutného k rozpuštění, a to až do vzniku dokonalého roztoku. Takto připravené roztoky se filtrují ve sterilním prostředí a rozdělí se do vhodných zásobníčků, s výhodou lahviček nebo jiných jímadel.

Lyofilizování roztoků se provádí takto:

Roztok proběhne těmito cykly: kongelování, dále sublimace a vysušení, uzpůsobené objemu pro lyofilizování a zásobníčků, který bude obsahovat roztok.

S výhodou se volí rychlost kongelování za teploty -2 °C za minutu v lyofilizačním zařízení Usifroid (Francie) typu SMH15, SMJ100 nebo SMH2000.

Doba, teplota a tlaky při sublimování a sušení se upravují se zřetelem k objemům roztoku pro lyofilizování a obsahu vody, jak je žádoucí jako zbytek v lyofilizátu.

Získá se tak lyofilizát, kde je alanin obsažen ve formě krystalické a mannitol ve formě zcela nebo částečně amorfní. Lyofilizát lze uchovávat za teploty 25 °C, případně až 40 °C, aniž by se měnila přitom jeho chemická stálost a z hlediska biologického hlavní součást, tam obsažená.

Přesná informace o způsobu přípravy injikovatelných přípravků rozpouštěním složek dle tohoto vynálezu je k dispozici odborníkům v „Remington‘s Pharmaceutical Sciences, 1985, 17. vydání“ nebo viz William N.A. a Polli G.P., The lyophilisation of pharmaceuticals (literární přehled), J. Parenteral Sci. Těch. 38. č. 2, 48-59 (1984), nebo Franks F., Freeze-diying: from empiricism to predictability, Cryo-letters, 11, 93-110 (1990).

Účinná látka nebo účinné látky neproteinového typu, obsažené v přípravku dle tohoto vynálezu, mohou být typu antalgického, protizánětlivého, protikřečového, antikancerogenní nebo to mohou být účinné látky, použitelné v kardiologii, angiologii, gastro-enterologii, hematologii a při hemostasích, hepatologii, infectologii, neurologii-psychiatrii, rhinologii, rheumatologii, toxikologii, urologii, nebo na úseku diagnostiky vůbec nebo v případech, kdy jde o úpravu metabolismu i výživy.

-5CZ 287178 B6

Na úseku léčebném a v oblasti biologických aktivit, jak o nich zde výše byla zmínka jako o vhodných příkladech, nezáleží na tom, který produkt představuje hlavní účinnou složku přípravku dle tohoto vynálezu, který představuje pozoruhodný technický pokrok v technologii farmaceutických přípravků. S výhodou jsou nejzpůsobilejšími účinnými látkami pro přípravky dle tohoto vynálezu ty látky, jejichž stálost ve vodných roztocích je problematická. Jest tedy výhodné aplikovat tento vynález při použití účinných látek, které neznamenají zvláštní problém z hlediska odpovídající stálosti.

V následujícím textu byly upraveny obvyklé názvy mezinárodní při označování účinných složek. Účinnou látku lyofílizovaných farmaceutických přípravků dle tohoto vynálezu lze zvolit zvláště ze skupin, dále uvedených:

kyseliny fenylalkanové, například ketoprofen, nesteroidní protizánětlivé látky typu „oxicam“, například piroxicam, isoxicam, ténoxicam, paracetamol, sůl kyseliny acetylosalicylové s lysinem či argininem, kortikosteroidym, například methylprednisolon, floroglucinol, kyseliny močové, například kyselina ursodesoxycholová, či některá z jejich solí, vhodná z farmaceutického hlediska, ať již se zásadou anorganickou či organickou, s výhodou sůl sodná, anthracykliny, například doxorubicin, epirubicin, idarubicin, daunorubicin, pirarubicin, deriváty platiny, například cisplatine, exaliplatine, carboplatine, deriváty alkaloidů z brčálu-barvínku (Vinca minor), například vinblastin, vincristin, deriváty alkaloidů z námele, například dihydroergotamin, dihydroergotoxin, nivergolin, deriváty pyrinových či pyrimidinových bází, například acyclovir, gancyclovir, cytarabin, prostaglandiny, například sulproston, alprostadil, benzodiazepiny, například dikalium-clorazepát, devazepid, antibiotika β-laktamového typu, například piperacilin, tazobactam, makrolidní antibiotika, například erythromycin, některé jeho deriváty, obvykle leukomycin, antibiotika tetracyklinové skupiny, například aminocyklin, antibiotika chloramfenikolového typu, například thiamfenikol, antibiotika spiramycinového typu, dusíkaté látky, například chlorambucil a nitrosomočoviny, například carmusin a streptozocin, popsané podrobněji ve Pharmacologie, M. Schorderet a spol., 1992, 2. vydání, kapitola 69, vydavatel Frison-Roche, Paříž,

Hr-antagonisty, například ranitidin, famotidin a jejich soli, pokud jsou farmaceuticky přijatelné, omeprazol a obdobné látky, vitaminy, například thiamin, riboflavin, nikotinamid, pyridoxin, sodná sůl kyseliny pantothenové, biotin, kyselina askorbová, folová, kyankobalamin, retinol, cholekalciferol, atokoferol, kobalamin, hydroxykobalamin, protinádorově působící látky, mezi kterými lze jmenovat taxol, taxoter a jejich analoga, dakarbazin, methotrexát, plikamycin, thiotepa, streptozocin, kardiovaskulární léčiva, zvolená ze skupiny molsidominu a jeho solí, pochopitelně farmaceuticky přijatelných, zvláště odpovídajícího hydrochloridu, linsidomin, acetazolamin, meciofenoxát, ditiazem, natriumnitroprusid, hematologická léčiva ze skupiny ticiopidin a odpovídajících, farmaceuticky vhodných solí, zvláště hydrochloridu, molgramostim, kyselina folová, antikoagulační a antithromboticky působící léky ze skupiny heparinu, dále heparinu s nízkou mol. hmotností ve formě kalcium-nadropannu, natrium-pamaparinu, natrium-daltépannu, natriumenoxapanu, natrium-ordépannu, natrium-certopannu, natrium-revipannu, natriumminoltéparinu, dále antithrombotických pentasacharidů, přírodních či syntetických, heparinoidů, například lomoparanu,

-6CZ 287178 B6 dále sůl kyseliny oxoglutarové se dvěma moly argininu, jakož i jiné farmaceuticky přijatelné soli kyseliny oxoglutarové, rostlinné extrakty, například na podkladu extraktů z vrby, Harpagophytum, radix ginseng atd., některý z genů, fragment ADN nebo ARN s určením pro genovou therapii, oligonukleotid, nukleotidy, navázané na proteinové složky, jako jsou například extrakty frakcí ribosomů, virů živých či nesaktivovaných, kyselina valproová a analoga, metopimazin, moxisylit, pralidoxim, deferoxamin, fenobarbital nebo jiné barbituráty, clomethiazol, natriumpamidronát, natriumalandroát, natriumrisendronát a další aktivní bifosfonáty, jakož i činidla antiosteoporotická, zvláště tiludronát nebo disodná sůl {[4-chlorfenyl)-thio]-methylen}-bifosfonátu (SR 41319), a to ve formě hemihydrátu nebo monohydrátu, antagonisti 5-HT₂, zvláště pak ketanserin, ritanserin, (lZ,2E)-l-(2-fluorofenyl)-3-(4-hydroxyfenyl)-prop-2-en-l-on-0-(2-dimethylaminoethyl)oxim (SR 46349) nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, antagonisti angiotensinu II, zvláště tasosartan, telmisartan, kalium-Losartan, losartan vázaný na hydrochlorothiazid (HCTZ), eprosartan, candésartan-celexetil, valsartan, irbésartan nebo 2nbuty 1—3—{[2 ‘-(1 H-tetrazol-5-yl)-bifenyl-4-yl]-methyl }-l ,3-diazaspiro-[4,4]-non-l-en-^4-on (SR 47436) a jejich farmaceuticky přijatelné soli, fanfaron nebo l-{[p-(3,4-dimethoxyfenethyl)-methylamino]-propoxy)-fenyl)sulfonyl}-2isopropylindolizin a jeho farmaceuticky přijatelné soli, tirapazamin nebo 3-amino-l,2,4-benzotriazin-l,4-<iioxid a jeho farmaceuticky přijatelné soli, (2S)-l-[2R,3S)-5-chlor-3-(2-chlorfenyl)-l-(3,4-dimethoxybenzensulfonyl)-3-hydroxy-2,3dihydro-lH-indoI-2-karbonyl]-pyrrolidin-2-karboxamid (SR 49059) a jeho farmaceuticky přijatelné soli, N,N-dibutyl-3-{4-[(2-butyI-5-methyslulfonamido)-benzofuran-3-yl-karbonyl]-fenoxy}propylamin a jeho farmaceuticky přijatelné soli, zvláště hydrochlorid (SR 33589)

6-(2-diethylamino-2-methyl)-propylamino-3-fenyl-4-propylpyridazin (SR 46559) a jeho farmaceuticky přijatelné soli,

Ethylester kyseliny {(7S)-7-[(2R)-2-(3-chlorfenyl)-2-hydroxyethylamino]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-yloxy}-octové a odpovídající farmaceuticky vhodné soli, zvláště hydrochlorid (SR 5861 IA), l-(2,4-dichlorfenyl)-3-(N-piperidin-l-yl-karboxamido)-4-methyl-5-(4-chlorfenyl)-lHpyrazol a jeho farmaceuticky přijatelné soli, zvláště hydrochlorid (SR 141716A), 4-{[N-(3,4-dimethoxyfenethyl)]-N-methylaminopropoxy}-2-benzensulfonyl-3-isopropyI-lmethylindol (SR 33805) a jeho farmaceuticky přijatelné soli, kyselina 2-{[l-(7-chlorchinolin-4-yl)-5-(2,6-<iimethoxyfenyl)-lH-pyrazol-3-karbonyl]amino}-adamantan-2-karboxylová (SR 48692) a její farmaceuticky přijatelné soli, N-cyklohexyl-N-ethyl-3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-prop-2-enylamin (SR 31747), (-)-N-methyl-N-[4-(4-acetylamino-4-fenylpiperidino)-2-(3,4-dichlorfenyl)-butyl]-benzamid (SR 48968) a odpovídající, farmaceuticky přijatelné soli, chlorid (S)-l-{2-[3-(3,4-dichlorfenyl)-l-(3-isopropoxyfenylacetyl)-piperidin-3-yl]-ethyl}4-fenyl-l-azobicyklo-[2,2,2]-oktanu (SR 140333A) a jeho farmaceuticky přijatelné soli, například soli kyseliny benzensulfonové, 4-amino-l-(6-chlorpyrid-2-yl)-piperidin a jeho farmaceuticky přijatelné soli, zvláště hydrochlorid (SR 57227A), (S)-N-{l-[3-(l-benzoyl-3-(3,4-dichlorfenyl)-piperidin-3-yl]-propyl}-4-fenylpiperidin-4yl-N-methylacetamid (SR 142801) a jeho farmaceuticky přijatelné soli, kyselina 2-{[4-(2-chlorfenyl)-thiazol-2-yl]-aminokarbonyl}-indol-l-octová (SR 27897), a její farmaceuticky přijatelné soli, clopidogrel nebo methylester kyseliny (+)-(S)-a-(2-chlorfenyl)-4,5,6,7-tetrahydrothieno-[3,2c]-pyridin-5-(4H)-octové a odpovídající farmaceuticky vhodné soli, zvláště hydrogensíran, hydrochlorid l-(2-naftaIen-2-ylethyl)-4-(3-trifluormethylfenyl)-l,2,3,6-tetrahydropyridinu (SR 57748A) a jeho farmaceuticky vhodné soli, zvláště zmíněný hydrochlorid,

N,N-dimethyl-N‘-(pyridin-2-yl)-methyl-N‘-[4-(2,4,6-triisopropylfenyl)-thiazol-2-yl]ethan-l,2-diamin a jeho farmaceuticky vhodné soli, zvláště sůl kyseliny fumarové (SR 27417), kyselina 2-{[5-(2,6-dimethoxyfenyl)-l-4—(3-dimethylaminopropyl)-methylkarbamoyl]-2-isopropylfenyl}-lH-pyrazol-3-karbonyl)-amino]-adamantan-2-karboxylová a její farmaceuticky přijatelné soli (SR 142948A), 3-{l-[2-(4-benzoyl-2-(3,4-difluorfenyl)-morfolino-2-yl]-ethyl)-4-fenylpiperidin-4-yl}-

1.1- dimethylmočovina a její farmaceuticky přijatelné soli (SR 144190A), trihydrochlorid kyseliny 3-{N-[4-(4-aminoiminomethylfenyl)-l ,3-thiazol-2-yl]-N-( 1karboxymethylpiperidin-4-yl}-amino]-propionové a její farmaceuticky přijatelné soli (SR 121566), ethylester kyseliny 3-{N-[4-(4-amino-N-ethoxykarbonylimino)-methylfenyl]-l ,3-thiazol-2yl)-N-(l-ethoxykarbonylmethyl)-piperidin-4-yl]-amino}-propionové (SR 121787) a odpovídající farmaceuticky přijatelné soli, 5-ethoxy-l-[4-(N-terc.butylkarbamoyl)-2-methoxybenzensulfonyl]-3-spiro-[4-(2-morfolinoethyloxy)-cykolohexan]-indolin-2-on (SR 121463) a odpovídající farmaceuticky přijatelné soli. Zvláště pak z hlediska tohoto vynálezu jsou zvláště výhodné přípravky, ve kterých je účinná složka zvolena z látek skupiny, kterou tvoří:

kyselina 2-{[4-(2-chlorfenyl)-thiazol-2-yl]-aminokarbonyl}-indol-l-octová nebo její draselná sůl, irbésartan, clopidogrel, kyselina ursodesoxycholová a její sodná sůl, hydrochlorid l-(2-naftalen-2-ylethyl)-4-(3-trifluormethylfenyl)-l,2,3,6-tetrahydropyridinu, sůl kyseliny fumarové a N,N-dimethyl-N‘-(pyridin-2-yl)-methyl-N‘-[4-(2,4,6-triisopropylfenyl)-thiazol-2-yl]-ethan-l,2-diaminu, kyselina 2-{[5-(2,6-dimethoxyfenyl)-l-{4-[(3-dimethylaminopropyl)-methylkarbamoyl]-2isopropylfenyl)-lH-pyrazol-3-karbonyl]-amino}-adamantan-2-karboxylová, 3-{l-[2-(4-benzoyl-2-(3,4-difluorfenyl)-morfolino-2-yl]-ethyl}-4-fenylpiperidin-4-yl)-

1.1- dimethylmočovina, trihydrochlorid kyseliny 3-{N-[4-(4-aminoiminomethyl)-fenyl]-l ,3-thiazol-2-yl}-N-(lkarboxymethylpiperidin-4-yl)-aminopropionové, ethylester kyseliny 3-{N-[4-(4-amino-N-ethoxykarbonylimino)-methyl]-fenyl}-l ,3-thiazol2-yl]-N-[l-(ethoxykarbonylmethyI)-piperidin-4-yl)-amino]-propionové, 5-ethoxy-l-[4-(N-terc.butylkarbamoyl)-2-methoxybenzensulfonyl]-3-spiro[4~(2-morfolinoethyloxy)-cyklohexan]-indolin-2-on a jejich soli přijatelné farmaceuticky.

Dále uvedené přípravky jsou zvláště výhodné:

přípravek, získaný lyofílizováním roztoku s koncentrací mannitolu 9 mg na 1 ml, alaninu 18 mg na 1 ml stím, že účinnou složkou je kyselina 2-{[4-(2-chlorfenyl)-thiazol-2-yl]-aminokarbonyl}-indol-l-octová v koncentraci 1,18 mg na 1 ml, nebo některá z jejích solí, farmaceuticky přijatelná, použitá v odpovídající rovnocenné koncentraci, přípravek, získaný lyofílizováním roztoku o koncentraci mannitolu 10 mg na 1 ml, alaninu 23 mg na 1 ml s tím, že účinnou složkou je irbésartan v koncentraci 1 mg na 1 ml, nebo některá z jeho solí, farmaceuticky přijatelných, v odpovídající koncentraci, přípravek, získaný lyofílizováním roztoku o koncentraci mannitolu 9 mg na 1 ml, alaninu 18 mg na 1 ml s tím, že účinnou složkou je hydrochlorid l-(2-naftalen-2-ylethyl)-4-(3-trifluormethylfenyl)-l,2,3,6-tetrahydropyridinu v koncentraci mezi 0,01 mg až 0,2 mg na 1 ml, nebo některá z jeho farmaceuticky přijatelných solí v odpovídající koncentraci.

Farmaceuticky přijatelná sůl kterékoli z uvedených hlavních složek, jak zde byly vyjmenovány, se může rovněž volit se zřetelem na povahu účinné složky.

Účinná farmaceutická složka se s výhodou volí ze skupiny látek, kterou tvoří draselná sůl kyseliny SR 27897, uvedená zde dříve jako SR 27897B, irbésartan, nebo SR 47436, clopidogrel, kyselina ursodesoxycholová či její sodná sůl, SR 57746A a SR 27417A.

-8CZ 287178 B6

Pro bližší porozumění tomuto vynálezu, bez jakéhokoli úmyslu jeho rozsah jakkoli omezovat, byla provedena vyhodnocení za zvolení účinné látky SR 27897B, SR 47436 (irbésartan) a SR 57746A. Také byl připraven větší počet roztoků s obsahem SR 27897B 1 mg/ml, fosforečnanového pufru (Na₂HPO4/NaH₂PO4) o různých molaritách a hodnotách pH mezi 7,5 až 8,25, 5 s obsahem mannitolu a alaninu v hmotnostním poměru R = hmotnost mannitolu/hmotnost alaninu, tyto roztoky byly lyofilizovány a analyzovány.

Navíc větší počet roztoků s obsahem SR 47436 1 mg/ml, s obsahem hydroxidu draselného v molámím poměru KOH/SR 47436 vyšším či rovném 1, salaninem samotným či směsí mannitolu a alaninu v hmotnostním poměru R = hmotnost mannitolu/hmotnost alaninu mezi 0,1 10 . až 1, a s ethanolem byl připraven, lyofilizován a analyzován.

Posléze byl připraven, lyofilizován a analyzován roztok obsahující SR 57746A ve formě hydrochloridu o koncentraci 0,11 mg/ml, s obsahem bezvodé kyseliny citrónové a směsí mannitolu a alaninu v hmotnostním poměru R mannitol/alanin rovném 0,5.

V tabulce 1, jež následuje, jsou složení roztoků, které byly sledovány a obsahovaly SR 27897B. 15 Pro každý z těchto roztoků hodnota R jako koncentrace mannitolu a alaninu = 0,5, dále pak SR 27897B odpovídá 9 mg/ml, 18 mg/ml a 1 mg/ml.

Tabulka 1

Pokus č.	Pufr fosforečnan sodný mM	pH pufru fosforečnan sodný
1	5	7,5
2	5	8
3	10	8
4	25	8
5	25	8,5
6	15	8
7	25	7,75
8	25	8
9	25	8,25
10	35	8,25
11	25	8

V další tabulce 2 je složení roztoků, lyofilizovaných a studovaných, s obsahem SR 47436.

-9CZ 287178 B6

Tabulka 2

Pokus č.	Mannitol mg/ml	Alanin mg/ml	R	KOH mg/ml	SR 47436 mg/ml
12	10	18	0,55	0,137	1
13	10	25	0,43	0,137	1

V další tabulce 3 jsou složení roztoků, lyofilizovaných a studovaných s obsahem SR 577466A ve formě hydrochloridu.

Tabulka 3

Pokus č.	Mannitol mg/ml	Alanin mg/ml	R	kys. citrónová bezv. mg/ml	SR 57746A mg/ml	polysorbát 80 mg/ml
14	9	18	0,5	7,7	0,11	0
15	9	18	0,5	7,7	0,11	1

Zakalení (turbidita) lyofílizátů v roztoku séra byla stanovena turbidimetrem Ratio Hach 18900-00. Výsledky jsou vyjadřovány v nefelometrických jednotkách zákalu (NTU), jak byly definovány v „Standard methods for the examination of water and wastewater, Američan Public Health Association“. Organoleptická kriteria lyofílizátů byla sledována vizuálně a berou v úvahu zbarvení lyofílizátů, jeho strukturu (zborcenou či nikoli) jakož i pozorování případného rozvrstvení v lyofílizátů. Obsah vody v lyofílizátů byl stanoven kolorimetricky postupem, popsaným v Pharm. Fr., 10. vyd., V.3.5.6.A použitím injikování přísl. stříkačkou 2 ml methanolu do lahvičky s lyofílizátem. Obsah vody je vyjádřen v %, přepočteno na hmotnost lyofílizátů.

Difraktometrická analýza pomocí paprsků X u lyofílizátů byla prováděna použitím difraktometru Siemens D500 TT, zdroj: CuKal, generátor: 40 KV, 25 mA, zadní monochromátor, štěrbiny 1/1/1/0, 16/0,6. Vzorky: pyrexová nádobka, doba sledování od 4° do 40° za minutu v jednotkách theta/Bragg.

Diferenční termická analýza (DSC) byla prováděna použitím přístroje DSC 7, Perkin Elmer s těmito charakteristikami: kalibrování, indium a olovo, vzorek mezi 5 a 10 mg v kapsli 50 μΐ, počáteční teplota 10 °C, rychlost vyhřívání 10 °C za minutu, koncová teplota 300 °C.

Dávkování SR27897B pomocí kapalinové chromatografie (Pharm. Eur., 2, (I), V.6.20.4) při 254 nm za použití kolony C 18 délky 25 cm, vnitřní průměr 4,6 mm, granulometrie 10 pm (viz Bischoff 25461840). Mobilní fází byla směs, objem na objem acetátového pufru o pH 4,0 (ledová kyselina octová a koncentrovaný roztok amoniaku, Měrek) a acetonitrilu pro chromatografii (Shanau, ref. Ac33). Zkušební roztok: roztok SR 27897B (Sanofí Recherche), 50 pg na 1 ml methanolu (Měrek, 6009). Roztok k analyzování byl připraven rozpuštěním lyofílizátů v 100 ml vody, a to supračisté (Millipore, označení „Milli-Q“). Průtok 2 ml/min. Propočte se povrch specifických píků, jak byly získány po vstřiku 20 pl kontrolního roztoku pro každý z chromatogramů. Obsah SR 27897B v lyofílizátů byl vyjádřen v mg/lahvičku s možností stanovení z propočtu obou dvou povrchů.

Vznik zjevných látek (nečistot) v SR 27897B v lyofílizátů během konzervování, což je zásadní parametr k vyhodnocení stálosti produktu, byl rovněž sledován kapalinovou chromatografií na koloně Cl8, (Bischoff, 25461840). Mobilní fáze: gradient acetonitrilu kacetátovému pufru, pH 4,0, složení viz další tabulka A.

-10CZ 287178 B6

Tabulka A

Doba (min)	Acetonitril objem	Acetátový pufr, pH 4,0 objem
0	20	80
5	30	70
15	60	40
25	70	30
28	20	80
40	20	80

Kontrolním roztokem byl roztok SR27897B (Sanofí Recherche), 10 pg na 1 ml methanolu. Analyzovaný roztok byl získán rozpuštěním obsahu lyofílizované lahvičky v 5 ml methanolu. Průtok 2 ml/min. Stejným způsobem se propočte povrch specifických píků neznámých nečistot na chromatogramech po injikování 20 μΐ analyzovaného roztoku ve vztahu k povrchu specifického píku SR27897B, jak byl získán po injikování 20 μΐ kontrolního roztoku. Obsah každé z neznámých nečistot a celkový obsah nečistot v SR 27897B po lyofilizování za vyjádření v hmotnostních procentech produktu lze stanovit na podkladě těchto propočtů.

Dávkování SR 47436 se provede použitím kapalinové chromatografie HPLC, tedy vysokotlakové (Pharm. Eur. 2 (I), V6.20.4) při 220 nm za použití kolony C18 z nerez-oceli, délka 25 cm, vnější průměr 8 mm, vnitřní průměr 4 mm, náplň sférický oxid křemičitý průměr částeček 7 μΜ, průměr pórů 1,2.10^-6 cm (120 Á) po úpravě pomocí „end capping“ (referenční kolona 720042 (Chromoptic). Mobilní fází je směs 60 obj. roztoku fosfátového pufru (pH3,0, kyselina fosforečná Prolabo, 20624295, triethylamin Fluka, 90340) a 40 obj. acetonitrilu pro chromatografování (Měrek 14291), průtok 1 ml/min.

Prvým kontrolním roztokem je roztok SR 47436 (Sanofí Recherche) 0,5 g na 1 ml mobilní fáze. Druhým kontrolním roztokem je roztok s obsahem 0,5 mg SR 47436 a 0,5 mg nečistot, odpovídající původnímu produktu (Sanofí Recherche) na 1 ml mobilní fáze. Roztok, určený k analýze, se připraví rozpuštěním lyofílizátu v 10 ml mobilní fáze. Zajistí se následnými injekcemi prvého a druhého kontrolního roztoku, že pracovní podmínky jsou uspokojující (faktor rozpouštění nad 2 mezi oběma píky pro injikování 10 μΐ druhého kontrolního roztoku, koeficient změny povrchu nižšího píku nižší nebo roven 1 % pro sérii 5 injekcí 10 μΐ prvého kontrolního roztoku). Po injikování 10 μΐ každého z kontrolních roztoků a 20 μΐ každého z analyzovaných roztoků se propočte s přihlédnutím k povrchům těchto píků na chromatogramu obsah SR 47436 v mg, přepočteno na lyofílizát.

Dávkování pozorovaných a pozorovatelných látek (nečistoty) v SR 47436 se provede rovněž vysokotlakovou kapalinovou chromatografií (Pharm. Eur. 2 (I) V 6.20.4) při 220 nm za použití kolony Cl8 s oxidem 60 obj. fosfátového pufru o pH 3,1 a 40 obj. acetonitrilu pro chromatografování s průtokem ml/min.

Oba kontrolní roztoky mají toto složení: jednak roztok SR 47436 (Sanofí, Recherche) 0,5 mg na 1 ml methanolu (SDS, ozn. 0930221), jednak roztok SR 47436 0,5 pg na 1 ml methanolu. Roztok, který je určen pro analýzu, se získá rozpuštěním lyofílizátu v 10 ml vody pro přípravu injekčních roztoků (PPI). Analýzu je třeba provést nejvýše za půlhodiny po rekonstituování roztoku. Uspokojující pracovní podmínky se zjistí následnými injekcemi 10 μΐ vody v případě injikovatelných následných přípravků a 10 μΐ vody pro roztoky kontrolní (retenční doba hlavních píků a jejich okolí pro oba kontrolní vzorky, odezva nad 10 či rovná 10 pro prvý kontrolní vzorek). Po injekci 10 μΐ roztoku, určeného k analyzování se stanoví propočtem povrchů specifických píků, získaných z chromatografie obsah zjevných látek i obsah globální látek zjevných (nečistot) za vyjádření ve formě %, přepočteno na hmotnost produktu.

-11 CZ 287178 B6

Dávkování SR 57746A (Sanofí Recherche) se provede použitím kapalinové chromatografíe při 224 nm za použití kolony s oxidem křemičitým C 18 délky 25 cm, vnitřním průměrem 4 mm a s granulometrií 7 pm (Macherey Nagel, cit. 720042). Mobilní fází je směs 45 objemů acetonitrilu pro chromatografii (Rathbum, cit. RH 1016) a 55 objemů roztoku pufru o pH 3,0 (připraveného ředěním 5,4 ml kyseliny fosforečné do 950 ml vody, demineralizované a filtrované (Millipore Alpha-Q), s následnou úpravou pH na hodnotu 3,0 použitím roztoku triethylaminu (Fluka, cit. 90340) s dalším přidáním 10 ml acetonitrilu a s doplněním na objem 1000 ml vodou, filtrovanou a demíneralizovanou. Kontrolní vzorek se připraví z roztoku SR57746A, 15,0 mg na 100 ml methanolu (Carlo Erba, cit. 414814). Roztok určený k analýze se získá rozpuštěním dialyzátu v 3,0 ml směsi z 25 objemů methanolu a 75 objemů demineralizované, filtrované vody. Průtok: 1 ml za minutu. Změří se povrch píků, specificky získaných po injikování 10 μΐ kontrolního roztoku, pak roztoku, určeného k analýze pro každý z chromatogramů. Obsah SR57746A v lyofilizátu ve vyjádření mg/lahvičku lze zjistit proměřením plochy obou dvou povrchů.

Stanovení látek zdánlivých (nečistot) vSR57746A v jeho lyofilizátu během konzervování se rovněž provede pomocí kapalinové chromatografíe na koloně za podmínek, popsaných v „Dosages“, Pharm. Eur. 2 (I) V.6.20.4. Kontrolní roztok je roztokem SR 57746A v množství 15 pg na 1 ml methanolu. Roztok k analýze se připraví rozpuštěním obsahu lyofilizátu v 3 ml směsi 25 objemů methanolu a 75 objemů demineralizované, filtrované vody. Průtok: 1 ml za minutu. Stejným způsobem se změří povrchy píků, charakteristických a specifických pro získané neznámé nečistoty na chromatogramech po injikování 10 pl roztoku, určeného k analyzování, a to ve vztahu k povrchu specifického píku SR57746A, jak byl zjištěn po injikování 10 pl kontrolního roztoku. Obsah každé z neznámých nečistot a celkový obsah nečistot v SR 57746A po lyofilizování za vyjádření %-podílů povrchu, lze stanovit za použití těchto měření jako výchozích bodů.

Takto získané analytických výsledky za použití různých postupů jsou uvedeny zde dále.

V tabulce 4, jež následuje, jsou výsledky původních kontrolních vzorků, za provedení s použitím lyofilizátu SR 27897B se zřetelem na obsah vody (% hmotn., přepočteno na lyofílizát), teplota přechodu sklovitého přechodu Tg (ve °C) při stanovení pomocí DSC, i pro lyofilizáty, po zředění vodou PPI pro zakalení (v hodnotách NTU) a pH.

Tabulka 4

Pokus č.	Voda, %	Tg°C	Zakalení NTU	PH
1	0,39	27	58	7,25
2	0,47	25	23	7,2
3	0,6	27	11	7,4
4	0,91	35	2,2	7,6
5	0,89	40	29	7,5
6	0,61	36,7	17	7,6
—	0,93	45,5	33	7,6
8	1,07	46,1	1,4	7,8
9	1,04	45,7	0,5	7,7
10	1,94	45,8	0,8	7,8
11			4,5	7,6

Z důvodů dalších dodatkových pokusů bylo sledováno několik lyofilizátů SR 27897B se zřetelem na stabilitu při 5 °C, 25 °C, 40 °C a 50 °C během měsíce, 3 a pak 6 měsíců.

-12CZ 287178 B6

V následující tabulce 5 je uveden obsah (celkový) zdánlivých látek (nečistot) za vyjádření hmotn. % po přepočtu na výchozí SR 27897B, zjištěný v lyofílizátech SR 27897B po době konzervování. Ukázalo se, že stálost po takové době konzervování je vynikající.

Tabulka 5

Pokus č.	5 °C	Nečistoty, % 25 °C 40 °C	50 °C
1	pod 0,27	pod 0,26		pod 0,25
2	pod 0,23	pod 0,26		pod 0,24
3	pod 0,23	pod 0,26		pod 0,25
4	pod 0,26	pod 0,24		pod 0,24
5	pod 0,23	pod 0,25		pod 0,26
6			pod 0,1
7			pod 0,1
8			pod 0,1
9			pod 0,1
10			pod 0,1
11		pod 0,1	pod 0,1

V tabulce 6 je zachycen celkový obsah zdánlivých látek (nečistot), nalezených v lyofílizátech SR 27897B po 3 měsících konzervování při 50 °C. Je to důkazem vynikající stálosti po uvedené době konzervování.

Tabulka 6

Pokus č.	Nečistoty v % 50 °C
1	pod 0,1
2	pod 0,1
3	pod 0,1
4	pod 0,1
5	pod 0,1

Posléze v tabulce 7 je celkový obsah zdánlivých látek (nečistot), jak byly zjištěny v lyofílizátech io SR27897B po 6 měsících uchovávání za teploty 5 °C a 40 °C. Je to opět důkaz vynikající stálosti po takové době konzervování.

Tabulka 7

Pokus č.	Nečistoty v %
5 °C	40 °C
7	pod 0,1	0,13
8	pod 0,1	0,1
9	pod 0,1	0,1
11		pod 0,1

-13CZ 287178 B6

Difrakce paprsků X

Výsledek analýzy difrakcí paprsků X u dvou práškovaných lyofilizátů, obsahujících směs mannitolu a alaninu ve vztahu R = hmotnost mannitolu/hmotnost alaninu = 0,5 je zachycen na obr. 1, viz difraktogramy 1 a 2. Difraktogramy 3 a 4 na obr. 1 odpovídají kontrolním vzorkům alaninu a mannitolu. Jak lze vypozorovat z tohoto vyobrazení, linie mezi 10° a 11°, charakteristická pro krystalický mannitol, nebyla dosažena pro dva lyofílizáty SR 27897B. Rovněž pro R = 0,5, kdy alanin je sám ve formě krystalické, mannitol jako takový ve formě amorfní.

Tepelná diferenční analýza

Na obr. 2 je vliv hmotnostního poměru alaninu na mannitol na teplotu přechodu sklovitého stavu lyofilizátů. Ukazuje se z tohoto obr., že teplota přechodu sklovitého stavu maximální se dosahuje pro (1/R) > 1, to je tedy pro hodnotu R mezi 0 a 1. Obecně řečeno, teplota přechodu sklovitého stavuje příkladem nejvyšší teploty, odpovídající stabilitě lyofilizátů. Právě tak se této nejvyšší teploty stability lyofilizátů dosahuje pro R mezi 0 a 1.

V následující tabulce 8 jsou výsledky počátečních kontrol, provedených s lyofílizáty SR 47436 se zřetelem na obsah vody, celkový obsah zdánlivých látek (nečistot) a pro lyofílizáty po zředění vodou PPI pro odpovídající pH.

Tabulka 8

Pokus č.	Voda, %	nečistoty %	PH
12	0,5	0,24	6,6
13	0,2	0,1	6,7

V další tabulce 9 je celkový obsah zřejmých látek za vyjádření v % čistoty SR 47436 lyofilizátů SR 47436, pokus 12 po týdnu, dvou týdnech uchovávání při 5 °C, 25 °C, 35 °C a 50 °C.

Tabulka 9

Pokus č.12	5 °C	25 °C	35 °C	50 °C
týden	99,89	99,89	99,71	98,47
2 týdny	99,90	99,82	99,47	97,05

V tabulce 10 jsou celkové hodnoty obsahů látek zdánlivých v % nečistot u lyofilizátů SR 47436, pokus 13, po 3 měsících, 6 měsících a 9 měsících při konzervování za teploty 5 °C, 25 °C a 35 °C.

Tabulka 10

Pokusč.13	5 °C	25 °C	35 °C
3 měsíce	0,1 %	0,2 %	0,3 %
6 měsíců	0,2 %	0,3 %	0,6 %
6 měsíců	0,3 %	0,3 %	—

V tabulce 11 zde dále je celkový obsah zřejmých látek vyjádřený v % nečistot pro lyofílizáty SR 57746A po měsíci a 3 měsících konzervování při 5 °C, 25 °C a 40 °C a jednoho lyofilizátů SR 57746A (referenční příklad) bezprostředně po jeho přípravě.

-14CZ 287178 B6

Tabulka 11

Pokus č.14 a 15	5 °C	25 °C	40 °C
referenční příklad		<0,1 %
1 měsíc	pod 0,1 %	<0,1 %	pod 0,1 %
3 měsíce	pod 0,1 %	<0,1%	pod 0,1 %

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Složení lyofilizátu SR 27897 (báze) k převzetí do 1 ml vody PPI

Složka Obsah v mg

SR 27897B (odpovídá 5 mg kyseliny SR 27897)1,18 apyrogenní alanin18,0 mannitol9,0 mononatriumfosfát (dihydrát, apyr.)0,3 dinatriumfosfát (dodekahydrát, apyr.)8,5 skleněná lahvička bílá, typ 1, 3 ml1 chlorbutylová zátka1 kapsle z hliníku, průměr 13 mm1

Příklad 2

Složení lyofilizátu SR 27897 (báze) k převzetí do 5 ml vody PPI

Složka Obsah vmg

SR 27897B (odpovídá 5 mg kyseliny SR 27897)5,9 apyrogenní alanin90,0 apyrogenní mannitol45,0 mononatriumfosfát, apyrogenní dihydrát1,5 dinatriumfosfát dodekahydrát, apyrogenní42,5 skleněná lahvička, typ 1, 20 ml1 chlorbutylová zátka, průměr 20 mm1 kapsle z hliníku, průměr 20 mm1

Příklad 3

Složení lyofilizátu SR 47436, 5 mg, k převzetí do 5 ml vody PPI

Složka Obsah v mg

SR 474365,0 apyrogenní alanin115,0 apyrogenní mannitol50,0 hydroxid draselný0,687 bílá lahvička, typ 1, 20 ml1 zátka z chlorbutylu, průměr 20 mm1 hliníková kapsle, průměr 20 mm1

-15CZ 287178 B6

Příklad 4

Složení lyofilizátu SR 57746A (hydrochlorid) k převzetí do 4 ml vody PPI

Složka	Obsah v mg
SR 57746A apyrogenní alanin apyrogenní mannitol apyrogenní kys. citrónová, bezv. bílá lahvička, typ 1, 20 ml chlorbutylová zátka, průměr 20 mm hliníková kapsle, průměr 20 mm	0,44 72,0 36,0 30,8 1 1 1

Příklad 5

Složení roztoku SR57746A (hydrochloridu) k lyofilizování, vyjádřeno vobj.% konečného dosaženého roztoku 100 ml přidáním dostatečného odpovídajícího množství vody PPI

Složka	Množství v mg/ml
SR 57746A apyrogenní alanin apyrogenní mannitol apyrogenní bezv. kys. citrónová voda pro injekční účely bílá lahvička, typ 1 chlorbutylová zátka hliníková kapsle	0,11 mg/ml 18,0 mg/ml 9,0 mg/ml 7,7 mg/ml lml 1 kus 1 kus 1 kus

Příklad 6

Složení lyofilizátu SR 57746A (hydrochlorid) s obsahem 0,01 mg až 0,1 mg SR 57746A (hydro-

chloridu) do 1 ml vody PPI Složka	Množství v mg
apyrogenní alanin apyrogenní mannitol apyrogenní bezv. kys. citrónová bílá lahvička, typ 1, 3 ml chlorbutylová zátka hliníková kapsle, průměr 13 mm	18,0 9,0 7,7 mg 1 1 1

Příklad 7

Složení lyofilizátu SR 57746A (hydrochloridu) k převzetí do 4 ml vody PPI

Složka	Množství v mg
SR57746A apyrogenní alanin apyrogenní mannitol apyrogenní bezv. kys. citrónová polysorbát 80 bílá lahvička, typ 1,20 ml chlorbutylová zátka hliníková kapsle, průměr 20 mm	0,44 mg 72,0 38,0 30,8 4,0 1 1 1 -16-

Příklad 8

Složení roztoku SR 57746A (hydrochloridu) k lyofilizování za vyjádření koncentrací konečných objemů roztoku 100 ml přidáním odpovídajícího vhodného množství vody PPI

Složka	Množství mg/ml
SR 57746A apyrogenní alanin apyrogenní mannitol apyrogenní kys. citrónová, bezv. polysorbát 80 voda pro injekční účely lahvička bílá, typ 1 chlorbutylová zátka, typ 1 hliníková kapsle	0,11 mg/ml 18,0 mg/ml 9,0 mg/ml 7,7 mg/ml 1,0 mg/ml 1 ml 1 1 1

Příklad 9

Složení lyofílizátu SR 57746A (hydrochloridu) s obsahem 0,01 mg až 0,2 mg SR 57746A (hydrochloridu) k převzetí do 1 ml vody PPI

Složka	Množství v mg
apyrogenní alanin apyrogenní mannitol apyrogenní bezv. kys. citrónová polysorbát 80 bílá lahvička, typ 1, 3 ml chlorbutylová zátka hliníková kapsle, průměr 13 mm	18,0 mg 9,0 7,7 mg 1,0 mg 1 1 1

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (8)

1. Stabilní lyofílizovaný farmaceutický přípravek, složený z fáze amorfní a fáze krystalické, farmaceuticky přijatelných, obsahujících nejméně jednu aktivní neproteinickou látku, vyznačený tím, že obsahuje mannitol a alanin v poměru R mezi 0,1 až 1, kde R znamená poměr hmotnosti mannitolu k hmotnosti alaninu s tím, že přípravek obsahuje dále ještě jedno či více činidel, tvořících matrici, zvolených ze skupiny, kterou tvoří pektiny, proteiny, extrahované z obilí či sóji, dextriny, xantháty, želatiny, agar, polysacharidy, algináty, karboxymethylcelulózy, polyvinylpyrrolidon, akáciová želatina a jejich směsi.

2. Přípravek podle nároku 1, vyznačený tím, že aktivní látka je obsažena spolu s další aktivní látkou proteinové povahy.

3. Přípravek podle nároku 1 nebo 2, vyznačený tím, že obsahuje dále ještě nejméně jednu přidanou látku, zvolenou ze skupiny, kterou tvoří pufry, tenzněaktivní složky, konzervující látky, soli, činidla antioxidační a chelátotvomá.

4. Přípravek podle nároku 1 nebo 2, vyznačený tím, že je určen pro rekonstituování svého roztoku pro podávání parenterální cestou.

-17CZ 287178 B6

5. Přípravek podle nároku 1 nebo 2, vyznačený tím, že je určen pro rekonstituování svého roztoku pro podávání orální cestou.

6. Přípravek podle nároku 4, vyznačený tím, že je určen pro rekonstituování injikovatelného roztoku.

5

7. Přípravek podle nároku 1, vyznačený tím, že je určen k přímému podávání orální cestou.

8. Přípravek podle nároku 1, vyznačený tím, že použitá aktivní látka je zvolena ze skupiny, kterou tvoří kyseliny fenylalkanové, protizánětlivé nesteroidní látky typu „oxicam“, paracétamol, soli kyseliny acetylosalicylové s lysinem a argininem, žlučové kyseliny, kortiko10 steroidy, anthracykliny, floroglucinol, deriváty platiny, deriváty alkaloidů z barvínku (Vinca minor), deriváty námelových alkaloidů ze žita, deriváty spurinovým nebo pyrimidinovým základem, prostaglandiny, benzodiazepiny, β-laktamy a antibiotika.