CZ287239B6 - Polypeptides exhibiting antimicrobial and antiviral activity and pharmaceutical preparations containing thereof - Google Patents
Polypeptides exhibiting antimicrobial and antiviral activity and pharmaceutical preparations containing thereof Download PDFInfo
- Publication number
- CZ287239B6 CZ287239B6 CZ19951533A CZ153395A CZ287239B6 CZ 287239 B6 CZ287239 B6 CZ 287239B6 CZ 19951533 A CZ19951533 A CZ 19951533A CZ 153395 A CZ153395 A CZ 153395A CZ 287239 B6 CZ287239 B6 CZ 287239B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- residue
- amino acid
- polypeptides
- peptide
- group
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 185
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 140
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 135
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 6
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 title abstract 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title abstract 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 38
- -1 phenylthiocarbamoyl Chemical group 0.000 claims description 33
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 25
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 15
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 14
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 12
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 12
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 11
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 10
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims description 9
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 claims description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- AIXUQKMMBQJZCU-BDAKNGLRSA-N (2s)-1-[(2r)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-BDAKNGLRSA-N 0.000 claims description 2
- LQJAALCCPOTJGB-SFYZADRCSA-N (2s)-1-[(2r)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-SFYZADRCSA-N 0.000 claims description 2
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 2
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 2
- JLXVRFDTDUGQEE-UHFFFAOYSA-N glycyl-arginine Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 claims description 2
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 claims description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 58
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 44
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 description 42
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 27
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 15
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 13
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- VEFCXXLAPLJBFG-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethoxy-1,1-diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N(OC)OC)C1=CC=CC=C1 VEFCXXLAPLJBFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 8
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 7
- 108010070741 Tachypleus tridentatus tachyplesin peptide Proteins 0.000 description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 6
- WTKQMHWYSBWUBE-UHFFFAOYSA-N (3-nitropyridin-2-yl) thiohypochlorite Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CN=C1SCl WTKQMHWYSBWUBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- ZJQFYZCNRTZAIM-PMXBASNASA-N tachyplesin Chemical group C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(N[C@H]2CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC=CC=3)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)C(=O)N1)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZJQFYZCNRTZAIM-PMXBASNASA-N 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 241001529572 Chaceon affinis Species 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010026389 Gramicidin Proteins 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 4
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 244000309464 bull Species 0.000 description 4
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IUAYMJGZBVDSGL-XNNAEKOYSA-N gramicidin S Chemical compound C([C@@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1)C(C)C)=O)CC(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 IUAYMJGZBVDSGL-XNNAEKOYSA-N 0.000 description 4
- 229950009774 gramicidin s Drugs 0.000 description 4
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KCCSOSBUHIQUOT-UHFFFAOYSA-N n,n'-di(propan-2-yl)methanediimine;1-hydroxybenzotriazole Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 KCCSOSBUHIQUOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 4
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 241000239205 Merostomata Species 0.000 description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 3
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical group O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1,1-diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(NC)C1=CC=CC=C1 SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- VVQIIIAZJXTLRE-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-amino-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCC[C@H](N)C(O)=O VVQIIIAZJXTLRE-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 239000002259 anti human immunodeficiency virus agent Substances 0.000 description 2
- 229940124411 anti-hiv antiviral agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- IYYIVELXUANFED-UHFFFAOYSA-N bromo(trimethyl)silane Chemical compound C[Si](C)(C)Br IYYIVELXUANFED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- OVHQWOXKMOVDJP-UHFFFAOYSA-N melitin Chemical compound OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(OC4C(C(O)C(O)C(COC5C(C(O)C(O)C(CO)O5)O)O4)O)=C(C=4C=CC(O)=CC=4)O3)=O)=C(O)C=2)OC(C)C1O OVHQWOXKMOVDJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 2
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FTVLMFQEYACZNP-UHFFFAOYSA-N trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate Chemical compound C[Si](C)(C)OS(=O)(=O)C(F)(F)F FTVLMFQEYACZNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N tryptamine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN)=CNC2=C1 APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-tritylsulfanylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)SC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 1
- OIXLLKLZKCBCPS-RZVRUWJTSA-N (2s)-2-azanyl-5-[bis(azanyl)methylideneamino]pentanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N.OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N OIXLLKLZKCBCPS-RZVRUWJTSA-N 0.000 description 1
- QTWZCODKTSUZJN-LJAQVGFWSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,5,7,8-pentamethyl-3,4-dihydrochromen-6-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C(C(C)=C1C)=C(C)C2=C1OC(C)(C)CC2 QTWZCODKTSUZJN-LJAQVGFWSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 1,4a-dimethyl-7-propan-2-yl-2,3,4,4b,5,6,10,10a-octahydrophenanthrene-1-carboxylic acid Chemical compound C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUSGYEMSJUFFHT-UWABRSFTSA-N 2-[(4R,7S,10S,13S,19S,22S,25S,28S,31S,34R)-34-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-[[(2S,3S)-1-amino-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]-methylcarbamoyl]-25-(3-amino-3-oxopropyl)-7-(3-carbamimidamidopropyl)-10-(1H-imidazol-5-ylmethyl)-19-(1H-indol-3-ylmethyl)-13,17-dimethyl-28-[(1-methylindol-3-yl)methyl]-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-decaoxo-31-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-decazacyclopentatriacont-22-yl]acetic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@H](N)Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](Cc2cnc[nH]2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN(C)C(=O)[C@H](Cc2c[nH]c3ccccc23)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc2cn(C)c3ccccc23)NC(=O)[C@@H](NC1=O)C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)C(N)=O MUSGYEMSJUFFHT-UWABRSFTSA-N 0.000 description 1
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YVOOPGWEIRIUOX-UHFFFAOYSA-N 2-azanyl-3-sulfanyl-propanoic acid Chemical compound SCC(N)C(O)=O.SCC(N)C(O)=O YVOOPGWEIRIUOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGWULZWUXSCWPX-UHFFFAOYSA-N 2-sulfanylideneimidazolidin-4-one Chemical compound O=C1CNC(=S)N1 UGWULZWUXSCWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004217 4-methoxybenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1OC([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000006181 4-methyl benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 229930028154 D-arginine Natural products 0.000 description 1
- 125000002038 D-arginyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CCCNC(=N)N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 101100289061 Drosophila melanogaster lili gene Proteins 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002704 Leucyl aminopeptidase Human genes 0.000 description 1
- 108010004098 Leucyl aminopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 241000234435 Lilium Species 0.000 description 1
- 241000239220 Limulus polyphemus Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100330292 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cys-12 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100386053 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cys-3 gene Proteins 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- JNOJRRIGRCMXLQ-UHFFFAOYSA-N PPPPPPPPP Chemical compound PPPPPPPPP JNOJRRIGRCMXLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUIHJUOYGUMSOL-UHFFFAOYSA-N PPPPPPPPPPPP Chemical compound PPPPPPPPPPPP SUIHJUOYGUMSOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000239224 Tachypleus tridentatus Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XOTMZTIJOSMYFJ-MGLUWQALSA-K [Na+].[Na+].[Na+].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O XOTMZTIJOSMYFJ-MGLUWQALSA-K 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N acetic acid;butan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O.CCCCO MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N aldehydo-D-galacturonic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 229920003180 amino resin Polymers 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 230000021235 carbamoylation Effects 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- XLKIKNJYQPAKKM-MTHDQZMLSA-N chembl1673354 Polymers C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 XLKIKNJYQPAKKM-MTHDQZMLSA-N 0.000 description 1
- WGGSNNMSSGLKHI-HLICZWCASA-N chembl525205 Polymers C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H]2C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=3C=CC=CC=3)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CSSC2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)=O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 WGGSNNMSSGLKHI-HLICZWCASA-N 0.000 description 1
- 229940107200 chondroitin sulfates Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N diphenylphosphoryl azide Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=O)(N=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 231100000284 endotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002346 endotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003677 hemocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 description 1
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 description 1
- 108010065174 polyphemusin I Proteins 0.000 description 1
- 108010056903 polyphemusin II Proteins 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000000276 potassium ferrocyanide Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000005556 structure-activity relationship Methods 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-N sulfonic acid Chemical compound OS(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- VMAGWLOHJBPKIA-DAESJHERSA-N tachyplesin ii Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(N[C@H]2CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC=CC=3)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(C)=O)C(=O)N1)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VMAGWLOHJBPKIA-DAESJHERSA-N 0.000 description 1
- HMHANTFVNOFNNZ-CPFWMRGPSA-N tachyplesin iii Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 HMHANTFVNOFNNZ-CPFWMRGPSA-N 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(2+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Length Measuring Devices Characterised By Use Of Acoustic Means (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález se týká nových polypeptidů a jejich farmaceuticky přijatelných solí se silnou afinitou k lipopolysacharidům, zvláště endotoxinům. Používají se ve farmaceutických prostředcích, zejména jako protimikrobiální a protivirová činidla, např. činidla proti lidské imunitní nedostatečnosti (HIV).
Dosavadní stav techniky
Z krabů podkovovitých byly izolovány dvě skupiny antimikrobiálních polypeptidů, které mají afinitu k endotoxinům (viz například Shigenaga a spol.: J. Biol. Chem. 265, 21350 (1990), Kawano a spol.: J. Biol. Chem. 265, 15365 (1990), Muta a spol.: J. Biochem. 108, 261 (1990), japonský patentový vykládací spis č. 167230/1990, japonský patentový vykládací spis č. 152987/1990, japonský patentový vykládací spis č. 53799/1990, publikovaná výzkumná přihláška 500194/1990, Miyata a spol.: J. Biochem. 106, 663 (1989), Akaji a spol.: Chem. Pharm. Bull. 37,2661 (1989), Tokunaga a Iwanaga: Taisha (Metabolism) 26, 429 (1989), Shieh a spol.: FEBS Lett. 252, 121 (1989) aNakamura a spol.: J. Biol. Chem. 263, 16709 (1988).).
Jedna skupina, skupina tachyplesinů, byla izolována z japonského kraba podkovovitého Tachypleus. Byly izolovány tři tachyplesiny, I, II a III. Druhá skupina, skupina polyphemusinů, byla izolována z amerického kraba podkovovitého Limulus polyphemus. Byly identifikovány dva polyphemusiny, li a II. Jejich sekvence aminokyselin jsou uvedeny na obrázku 1.
Polypeptidy obou skupin sestávají ze 17 nebo 18 zbytků aminokyselin, obecně mají čtyři zachované oblasti a dva disulfídové můstky (viz obrázek 1).
Bylo zjištěno, že jak tachyplesiny, tak polyphemusiny inhibují růst jak gramnegativních, tak grampozitivních bakterií při nízkých koncentracích, stejně jako plísní, jako je Candida albicans, a tvoří komplexy s bakteriálními lipopolysacharidy (Shigenaga a spol.: J. Biol. Chem. 265, 21350 (1990) a Muta a spol.: J. Biochem. 108, 261 (1990).). Bylo zjištěno, že polypeptidy skupiny tachyplesinů vykazují také některé inhibiční aktivity vůči virům, jako je Influenza virus, vir vezikulámí stamatitidy (Murakami a spol.: Chemotheraphy 37, 327 (1991).) nebo virus lidské imunitní nedostatečnosti (Morimoto a spol.: Chemotheraphy 37, 206 (1991).). Je velice zajímavé, že tento polypeptid se shora uvedenými vlastnostmi může být jednou z klíčových sloučenin, které umožňují krabu podkovovitému adaptovat se na změny vnějšího okolí a zachovat tyto druhy ze starých dob do dneška jako žijící fosilie.
Na druhou stranu, vzhledem k přežití vysoce vyvinutého člověka je mimořádně žádoucí vývoj takových léčiv, které mají profylaktický nebo terapeutický účinek na syndrom získané imunitní nedostatečnosti (AIDS), způsobený infekcí virem lidské imunitní nedostatečnosti (HIV).
Autoři tohoto vynálezu a jejich spolupracovníci studovali vztah mezi molekulární strukturou a anti-HIV aktivitou na polypeptidech měněním nebo modifikováním aminokyselin, přičemž si uvědomovali to, že tyto polypeptidy mají souvislost s dlouhým zachováváním krabů podkovovitých. Výsledkem bylo vynalezení nových polypeptidů, které se zásadně liší od obvyklých struktur známých polypeptidů z krabů podkovovitých.
Překvapivě bylo zjištěno, že tyto novější známé polypeptidy mají vynikající biologickou aktivitu, jejíž anti-HIV hodnoty jsou alespoň pětkrát vyšší než hodnoty známých polypeptidů z krabů podkovovitých.
-1 CZ 287239 B6
Byly prostudovány následující odkazy: Nakashima a spol.: Antimicrob. Agents Chemother. 36, 1249 (1992), Masuda a spol.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 189, 845 (1992), Tamamura a spol.: Chem. Pharm. Bull. 41, 978 (1993), Tamamura a spol.: Biochim. Biophys. Acta 1163, 209 (1993), Masuda a spol.: J. Pharmacobio. Dyn. 15, s-90 (1992), mezinárodní vykládací spis WO 92/04374 a japonský patentový vykládací spis č. 163298/1993. (Z nových polypeptidů je zde dále odkazováno na sloučeninu T-22 jako nejlepší reprezentativní sloučeninu).
Při studiu strukturních požadavků pro to, aby nový polypeptid, sestávající ze 16 až 18 aminokyselin, jako je sloučenina T-22, vykazoval aktivitu, autoři tohoto vynálezu a jejich spolupracovníci došli k některým zásadně novým konceptům minimální podstatné struktury.
Obecně, jestliže se exogenní peptid s relativně vysokou molekulovou hmotností podává člověku, je často rozpoznáván samoobrannou schopností těla jako cizí látka. Výsledkem je, že se pravděpodobně stane antigenní látkou. Jestliže se používá pro lékařské účely, je žádoucí, aby biologicky aktivní látka na bázi peptidů byla sloučeninou s nízkou molekulovou hmotností, aby se snížila pravděpodobnost, že bude rozpoznávána jako cizí látka. Je také potřeba, aby tato látka měla vysokou aktivitu.
Bylo zjištěno, že sloučenina T-22 je polypeptid, sestávající z 18 zbytku aminokyselin. Účelem výzkumu, provedeného přihlašovatelem, bylo zachovat stejnou úroveň anti-HIV aktivity, jakou má sloučenina T-22, za snížení počtu aminokyselinových zbytků. Výsledně se dosáhlo snížení počtu zbytků o čtyři. Pokud sloučenina má základní strukturu, její aktivita se nesnižuje, i když se modifikují specifické oblasti. Navíc, uvedenou modifikací byl objeven nový polypeptid s významnou strukturou, která poskytuje širší rozsah fyzikálně chemických vlastností a také širší výběr terapeutických metod, tj. zvýšení nebo snížení hydrofilnosti a lipofilnosti (afinity k lipidům), selektivní akumulaci ve specifickém orgánu a/nebo buňce a zvýšení nebo snížení doby zdržení v lidském těle, a možný vývoj prostředků.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou polypeptidy s protimikrobiálními a protivirovými účinky, obecného vzorce I
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Ai-Trp-Cys-A2-A3-A3-X-A2-A3-A3-Cys-A3-A4 (I) ve kterém,
A] je bazický aminokyselinový zbytek nebo peptidový zbytek se dvěma bazickými aminokyselinami, vybranými ze skupiny, zahrnující lysin, arginin a omithin, přičemž uvedený bazický aminokyselinový zbytek nebo peptidový zbytek, v němž N-a-atom vodíku na aminoterminálním konci uvedeného aminokyselinovém zbytku je popřípadě nahražen acylem se 2 až 16 atomy uhlíku nebo fluoresceinthiokarbamoylem nebo fenylthiokarbamoylem, tvoří Ν-α-acylem substituovaný bazický aminokyselinový zbytek, Ν-α-acylem substituovaný peptidový zbytek, N-a-fluoresceinthiokarbamoylem nebo Ν-α-fenylthiokarbamoylem substituovaný bazický aminokyselinový zbytek nebo Ν-α-fluoresceinthiokarbamoylem nebo Ν-α-fenylthiokarbamoylem substituovaný peptidový zbytek,
A2 je tyrosinový nebo fenylalaninový zbytek,
A3 je lysinový nebo argininový zbytek,
-2CZ 287239 B6
A4 je hydroxyl nebo aminoskupina,
X je peptidový zbytek, vybraný ze skupiny peptidů, zahrnující D-omithyl-prolin, prolylD-omithin, D-lysyl-prolin, propyl-D-lysin, D-arginyl-prolin, prolyl-D-arginin, glycyl-omithin, omithyl-glycin, glycyl-lysin, lysyl-glycin, glycyl-arginin a arginylglycin, v nichž vodíkové atomy -aminoskupiny D-lysinu, L-lysinu, D-omithinu a Lomithinu jsou popřípadě nahraženy -aminoacylovou skupinou se 2 až 4 atomy uhlíku a uvedený peptidový zbytek je napojený na aminokyselinové zbytky v polohách 6 a 8 peptidovou vazbou,
Trp je tryptofanový zbytek, a
Cys je cysteinový zbytek, přičemž cysteinové zbytky v polohách 3 a 11 jsou popřípadě napojeny disulfídovými vazbami, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Výhodné jsou polypeptidy podle vynálezu obecného vzorce I, v němž Aj značí jeden nebo dva bazické aminokyselinové zbytky, v nichž Ν-α-atom vodíku aminoterminálního konce aminokyseliny je nahražen acylovou skupinou se 2 až 16 atomy uhlíku nebo substituovanou thiokarbamoylovou skupinou a ostatní substituenty mají shora uvedené významy, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Předmětem vynálezu jsou rovněž farmaceutické prostředky k inhibování HIV aktivity u lidí, které obsahují účinné množství polypeptidů podle nároku 1 a 2, nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem.
Polypeptidy podle tohoto vynálezu jsou odvozeny od novějších známých polypeptidů s vysokou anti-HIV aktivitou. Byly vypracovány na základě známé velké afinity polypeptidů z krabů podkovitých k endotoxinům. Peptidy podle vynálezu se však od nich značně liší.
Známé novější polypeptidy sestávají ze 16 až 18 zbytků aminokyselin, 4 zbytků cysteinu nebo 2 zbytků systinu a antiparalelní β struktury skládaného listu s β ohybem jako polohou otočení. Podobně jako známé novější polypeptidy mají polypeptidy podle tohoto vynálezu antiparalelní β strukturu skládaného listu s možným β ohybem umístěným v X v 7. poloze. V polypeptidech podle tohoto vynálezu je však počet zbytků aminokyselin a zbytků cysteinu snížen o čtyři, respektive o dva. Navíc, biologická aktivita se nesníží, i když se modifikuje specifická oblast. Polypeptidy podle tohoto vynálezu se mohou používat jako anti-HIV činidlo a jako složka systémů transfektujících DNA při genové terapii. Jak bude podrobně uvedeno dále, polypeptidy podle vynálezu mají takové hodnoty anti-HIV, které jsou významně vyšší než u známých novějších polypeptidů, odvozených od známých polypeptidů krabů podkovovitých s vysokou afinitou na endotoxiny.
Zde definované peptidové sekvence jsou reprezentovány trojpísmenkovými zkratkami zbytků aminokyselin a substituovaných zbytků aminokyselin následujícím způsobem:
Ala - alanin, Arg - arginin, Cys - cystein, lle - isoleucin, Gly - glycin, Leu - leucin, Lys - lysin, Om - omithin, Phe - fenylalanin, Pro - prolin, Trp - tryptofan, Tyr - tyrosin, Val - valin, DArg - D-arginin, DLys - D-lysin, DOm - D-omithin, Ac-Arg - N-a-acetylarginin, FTC-Arg - Na-fluorescein-thiokarbamoylarginin, Laur-Arg - Ν-α-lauroylarginin, Myr-Arg Ν-α-myristoylarginin, Nicot-Arg - Ν-α-nikotinoylarginin, Oct-Arg - N-a-oktanoylarginin, Parm-Arg - Ν-α-palmitoylarginin, Parm-Om - Ν-α-palmitoylomithin, PTC-Arg - N-afenylthiokarbamoylarginin, e-N-Ac-DLys - ε-Ν-ω-aminoacetyl-D-lysin a e-N-But-DLys ε-Ν-ω-aminobutyryl-D-lysin.
-3CZ 287239 B6
Následující pojmy tak, jak se zde používají, mají tyto významy:
HIV znamená viru lidské imunitní nedostatečnosti (všechny varianty),
MOI znamená multiplicita infekce,
SI znamená index selektivity (poměr CC50 k EC50).
Obrázek 1 ukazuje aminokyselinové sekvence tachyplesinu I, tachyplesinu II, tachyplesinu III, polyphemusinu I a polyphemusinu II. Zachované aminokyseliny jsou uvedeny v rámečku. Disulfídové vazby mezi Cys-3 nebo -4 a Cys-16 nebo -17 a Cys-7 nebo -8 a Cys-12 nebo -13 ío jsou vyznačeny plnými čarami.
Obrázek 2 ukazuje syntetické schéma syntetizování polypeptidu 1 podle vynálezu.
Specifické příklady polypeptidů podle vynálezu obecného vzorce I jsou uvedeny v tabulce 1 a 15 jsou očíslovány 1 až 25.
Každý symbol označuje odpovídající zbytek aminokyseliny mezinárodně přijatým třípísmenkovým výrazem (viz výše).
-4CZ 287239 B6
Tabulka 1 re
11 12 σ\ co
..................1111 tntntntntntntncntntntntnw cntncntntncntntn <PPPPPPPPPPPP>1PPPPPMPP <<<<<<<<<<<<4<<<<<<<<
• i :.....
Wcncncncntncntncncncncncntncncncncnincncnco
OUOOOUOOUtJUUOUOOOOOtJUO ώώώώώώώώώωόηιηεηωωωωωωωω J>iš>i>i>ií>t>t>i>i>iP N P >i>i>iÍP>t>lS>i *ι'ι4ι4(4ι4(4>4>4(4ι4ι4<ι4<(4»4ι4>4·4>4ι4ι4 . ι ι ι ι i t ι ι ι t ι ι ι ι > ι ι ι ι i < rttntntntntntntntncntncn tntntntntntntntntntn
....................
<<<<<<<<<<J<
III P P i Li re tn re re
I Li
I Li
I Li
I P OJ
PPPPPPPPP <<<<<<<<< . . I μμμμρρρρρ
E-« E-< H
EE- Η E->
CL lilii
i. ;. ;. ;. :.........
>, >1 >1 >1 >1 >1 >1 >1 >1
E- - - - .....
E->
EE->
EEE-<
EE-
| <M Z | ΓΧ | M | |
| z 1 | 1 | 1 | z 1 |
| tn | tn | tn | tn |
| P | P | P | P |
| < | < | < | < |
| 1 | 1 | 1 | 1 |
| tn | tt | tn | ω |
| >1 | >1 | >1 | Si |
| u t ω | O i | υ | | υ t |
| <n | m | co | |
| >1 | >1 | >< | >1 |
| P | P | P | P |
| 1 | 1 | 1 | 1 |
| tn | cn | tn | tn |
| P | P | P | P |
| < * | < | < 4 | < | |
| 1 P | P | 1 P | P |
| rH | >i | >1 | | |
| E- | Et | E- 1 0 | |
| 1 o | t 0 | 1 O | |
| P | P | P | P |
| CL | CL | CL | CL |
i ι
i
O P CL i ω
O Lt CL
I tn
O P CL
I tn
O Li CL i cn o o P CL
I tn ..
Si O >4 * * ‘ ' Q
Lt CL i tn >4 O i •η»
......o rtH >lP 0 0 4'
I l Q ω tn i
Li CL
CL I C Li O Q
O) Li < Q i O Li CL ω . . _ _ >iH ρ ρ 4 0 < CL lili >1 tn >i tn r4 o í-4 r-1 < ϋ o Li CL
I tn
O Lt CL
I tn o P CL i .. tn ..
£·ι ^1 P * * * *
Q •< >1 >1 tn σι tn (Λ tn tn tn ω _ .....
P >1 P > >1 tn w tn o Lt CL
I
I cn η tn r\ cn r\ cn n >x +4 >i p1 >i +4 >1 UM 3\4 34 3\4
Q----tn tn Si Si ω ><
tn
UP 3 Q <
I z
I (U tn m .. .. >1 >1 >1 ’4444444444<4<44444444 i I I I I I I I I I I I 1 I 1 I I I I l l l tntntntntntntntntntncn tn tn tntntntncntntnpi <PPPPPPPPPP>iP‘ <<<<<<<<<<P<
• i...........
N>1 (Η Η H Éť É-* Ét Ét Ět ět Ět CL . I I I I I I 1.....
jjjwwwtnwtnwtncntntntn i Li i Li i Li
I I Lt P i Li i Li
I
P <D
A CLCLCLCLCLCLCLCLCLCLCLCLCLCLCLCLCLCLCLCLCL Η*μρμρμρρρρρρρρρρρρρρΡΡ ^EtEtE-tEtEtE-iĚtEtEtEtEtEtEtE-iE-iEtE-iEtEtEtEt
I I I I I I I I
I i I l I t I I l l I I i tn tn cn tn Cn tn tn O) tn tn tn co „ _
PPPPPPPí-tSiPPhCiCiPPP <<<<<<<PP<<<<<<<< ι ι ι ι ι ι ι ι ι ι ι ι ι ι ι ι ι tntntntntDtntntntntncntncncntncntn ............... P < i P O u •H Z
P P < < ~ I < tn P <
Lt Lt < <
i tn P <
tntntntnCDtntntn
PPPPPPSiSiPP <<<<<<4 4<< I
Li < i
Li < i Li (ti
Li < i
Li < i ε Li <0
Li Si Σ CL
O O Η EU. CL
ΗΝΠ'φΐη'ηΝωοΌΗπη + ιηΌΜησίΟΗ J-1 x_^ / x-^ x^· / X-. x-z HH^rtHHrtHHHrere
Q CQ i i 'Z i tn tu >t 4
I tn p <
i
P ÍH Et i tn >i U
I
CL P ECQ i
Z I tu tn >1
I tn Li <
i Li
E-t i m
O • CL P
CO Q i
Z I tu tn
Ž* i tn Li <
i Lt
E i (0 >1 O
I cl P Et cn Lt <
i tn Lt <
tn P <
i tn P <
i <0 CL tn i C P O i
E Li (ti CL re re re re re
-5CZ 287239 B6
Shora uvedený polypeptid s vysokou anti-HTV aktivitou sestává ze 16 až 18 zbytků aminokyselin. U nejlepší sloučeniny (dále zde označené zkratkou „n-18 polypeptid“ nebo T-22) se předpokládá, že jako strukturní rys pro vysokou aktivitu je podstatná existence 4 (čtyř) zbytků cysteinu, čtyř nebo pěti zbytků aromatické aminokyseliny, osmi zbytků bazické aminokyseliny a jednoho zbytku glycinu. Navíc, vzhledem k polohovým vzájemným vztahům n-18 polypeptidu, jak ukazuje následující obecný vzorec A, vlastnosti zbytků aminokyselin v polohách 2 až 17 spolu úzce souvisí. U první polohy n-18 polypeptidu pro vztah mezi strukturou a aktivitou byl zjištěno, že relativní hodnoty anti-HIV aktivity se zvyšují se zvyšujícím se počtem zbytků aminokyselin.
Polypeptid n-18 je sloučeniny obecného vzorce A
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
Ai-A2-Cys-A2-A3-A3-Cys-A2-A3-Gly-A2-Cys-A2-A3-A3-Cys-A4-A5 (A), v němž
Ai znamená ne více než dvě aminokyseliny, které jsou vybrány ze skupiny, sestávající z lysinu a argininu,
A2 znamená zbytek tyrosinu, fenylalaninu nebo tryptofanu,
A3 znamená zbytek argininu nebo lysinu,
A4 znamená alespoň jednu a ne více než dvě aminokyseliny, vybrané ze skupiny, sestávající z lysinu a argininu,
A5 znamená skupinu -OH (odvozenou od karboxylové skupiny) nebo skupinu -NH2 (odvozenou od amidové skupiny),
Cys znamená zbytek cysteinu, a
Gly znamená zbytek glycinu.
Ve specifickém provedení zbytky cysteinu v polohách 3 a 16 a/nebo cysteinu v polohách 7 a 12 mohou být vázány disulfídovým můstkem (-S-S-).
V n-18 polypeptidu poloha ohybu s možnou strukturou β-ohybu je umístěna v polohách 9 a 10. Peptidová část od polohy 3 do polohy 8 a peptidová část od polohy 11 do polohy 16 jsou umístěny čelem k sobě.
Podobně jako n-18 polypeptid, polypeptidy podle tohoto vynálezu mají antiparalelní strukturu β skládaného listu díky existenci intramolekulámí vodíkové vazby a disulfidového můstku (—S—S—) s cysteinovými zbytky. V polypeptidech podle tohoto vynálezu poloha ohybu s možnou strukturou β ohybuje umístěna v X v poloze 7 tak, že peptidová část od polohy 3 do polohy 6 a peptidová část od polohy 8 do polohy 11 jsou umístěny čelem k sobě.
Podle tohoto vynálezu je vzájemný vztah četných zbytků aminokyselin v poloze 1 obecného vzorce podle tohoto vynálezu stejný jako u n-18 polypeptidu.
Je potvrzeno, že náhrada atomu vodíku α-aminové skupiny zbytku aminokyseliny na N-konci v uvedené poloze acylovou skupinou nebo substituovanou thiokarbamoylovou skupinou je důležitá pro to, aby nový polypeptid uvedeného obecného vzorce vykazoval vysokou anti-HTV aktivitu. Výběrem různých vlastností acylové nebo substituované thiokarbamoylové skupiny je možné získat u nového polypeptidu podle vynálezu hydrofilnost, afinitu k lipidům, různé
-6CZ 287239 B6 fluorescenční vlastnosti atd. Například fluorescenční vlastnosti fluoresceinem substituované thiokarbamoylové skupiny v polypeptidech podle tohoto vynálezu se mohou použít jako vysoce citlivé reportérové barvivo pro různé účely. Viz například Brand a Witholt v „Methods in Enmzymology“, díl 11, strana 776 až 856, red. Hirs, Academie Press, New York, New York 1967, Brand a Gohlke: Annu. Rev. Biochem. 41, 843 (1972) a Stryer: Annu. Rev. Biochem. 47, 819(1978).
Navíc je velice důležité a užitečné, že fluoresceinem substituované thiokarbamoylované polypeptidy podle tohoto vynálezu mohou vykazovat dokonce vyšší anti-HIV aktivitu. Uvedené polypeptidy podle tohoto vynálezu s fluorescenčními vlastnostmi se mohou používat jako důležité pomůcky pro objasnění mechanismu projevů anti-HIV aktivity polypeptidů podle tohoto vynálezu. Například zničení, metabolismus nebo distribuci v těle, orgánu, tkáni nebo buňce infikovaných nebo neinfikovaných HIV po podání lze detekovat fluorescenční mikroskopií. Na molekulární úrovni lze vnitřními fluorescenčními sondami uvedených polypeptidů získat informace o jemných konformačních změnách uvedených polypeptidů, interagujících s receptorovou molekulovou v buňce. Použitím fluorescenčních sond by bylo možné izolovat a identifikovat receptorovou molekulu samotnou.
Dále pak lze pomocí acylové skupiny nebo substituované thiokarbamoylové skupiny získat novou polypeptidovou bioaktivitu takových sloučenin, jako jsou sloučeniny s cukerným řetězcem, tuky, nukleové kyseliny, další peptidy nebo proteiny atd. To hraje důležitou roli při projevu aktivity nového polypeptidu podle vynálezu, v němž vlastnosti zbytku aminokyselin v polohách 4 až 6 a 8 až 10 obecného vzorce I podle tohoto vynálezu jsou stejné. Pokud jde o tvorbu trojrozměrné struktury nového polypeptidu podle tohoto vynálezu, pořadí aminokyselin v sekvenci peptidu je důležité v tom, že snadno umožňuje, aby peptidové strukturní části v polohách 3 až 7 až 11 byly ve stejné planámí struktuře otočeny proti sobě a peptidový zbytek, sestávající z dvou aminokyselin X v poloze 7, byl bodem ohybu. V případě, že cysteiny v poloze 3 a 7 jsou navázány disulfidovým můstkem, následující trojrozměrná struktura, vytvořená peptidovým základním skeletem nového polypeptidu podle tohoto vynálezu, je důležitou vlastností tohoto vynálezu. Je třeba říci, že struktura ohybu peptidového zbytku X v poloze 7, který sestává z páru glycinu a bazické aminokyseliny nebo prolinu a D-formy bazické aminokyseliny (v zásadě může být prolin nahrazen hydroxyprolinem se stejným účinkem), je nutným faktorem pro tvorbu planámí struktury se strukturou β-skládaného listu. Disulfidový vedlejší řetězec, spojující polohy 3 a 11 cysteinových zbytků a bazické vedlejší řetězce zbytků bazických aminokyselin v polohách 5 a 9 jsou na stejné straně roviny základního skeletu, zatímco aromatické postranní řetězce zbytků aromatických aminokyselin v polohách 4 a 8 a bazické postranní řetězce zbytků bazických aminokyselin v polohách 6 a 10 jsou na opačné straně roviny základního skeletu. Tvorba těchto trojrozměrných shora uvedených struktur je důležitá. Nový polypeptid shora uvedeného obecného vzorce byl tedy vynalezen s touto trojrozměrnou strukturou, což vede ke snížení o 4 (čtyři) zbytky aminokyselin při srovnání s n-18 polypeptidem.
Podobně jako n-18 polypeptid (polypeptidy) mají polypeptidy podle tohoto vynálezu velmi bazické vlastnosti. Díky jejich bazické povaze polypeptid (polypeptidy) podle tohoto vynálezu může (mohou) tvořit adiční soli s kyselinou. Například polypeptid tvoří sůl s anorganickými kyselinami (kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina fosforečná, kyselina dusičná, kyselina sírová nebo podobné) nebo organickými karboxylovými kyselinami (kyselina octová, halogenoctová kyselina, jako je trifluoroctová, kyselina propionová, kyselina maleinová, kyselina jantarová, kyselina jablečná, kyselina citrónová, kyselina vinná, kyselina salicylová), cukernými kyselinami (kyselina glukuronová, kyselina galakturonová, kyselina glukonová, kyselina askorbová nebo podobné), polysacharidovými kyselinami (kyselina hyaluronová, chondroitinsulfát, kyselina alginová nebo podobné) nebo organickou sulfonovou kyselinou (methansulfonová kyselina, p-toluensulfonová kyselina nebo podobné) včetně sulfonových kyselin esterů cukrů, jako jsou chondroitinsulfáty.
-7CZ 287239 B6
V následující části je podrobnější popis nového polypeptidu podle tohoto vynálezu.
Nový polypeptid podle vynálezu se může připravovat způsoby, známými odborníkům, například technikou syntézy v pevné fázi, popsanou v „Solid-Phase Peptide Synthesis“, Stewart a Young, Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois, 1984. Konkrétně, peptid s přímým řetězcem podle vynálezu shora uvedeného obecného vzorce I se připravuje navázáním karboxylové skupiny N-chráněného argininu v poloze 12 na nerozpustnou pryskyřici s aminovými skupinami, napojenými přímo nebo napojenými prostřednictvím spaceru s funkční skupinou, schopnou navázání na karboxylovou skupinu (např. skupinu, která je schopna převést karboxylovou skupinu argininu na p-karboxymethylbenzylester). Aminová skupina nerozpustné pryskyřice s argininovým (Arg) zbytkem v poloze 12 po odblokování N-chránicí skupiny je schopna postupného navázání, podle způsobu v pevné fázi, s odpovídajícími chráněnými aminokyselinami od polohy 11 do polohy 1 sekvence aminokyselin obecného vzorce I
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 (I) [v němž Ab A2, A3, A4, Cys, Trp a X znamenají jak shora uvedeno v obecném vzorci I].
V případě, že zbytek Ν-α-acylaminové kyseliny nebo Ν-α-acylpeptidu znamená A|, kde atom vodíku v poloze N-α zbytku aminokyseliny na aminovém konci je nahrazen acylovými skupinami, aminová skupina na N konci peptidové pryskyřice je acylována odpovídajícím anhydridem kyseliny nebo odpovídající kyselinou s použitím kondenzačních činidel na acylovou skupinu poskytující N-acylpeptidovou pryskyřici. Po odštěpení nerozpustné pryskyřice a chránících skupin aminokyseliny se získá polypeptid s přímým řetězcem podle vynálezu shora uvedeného obecného vzorce I. V případě zbytku Ν-α-substituované thiokarbamoylaminokyseliny nebo Ν-α-substituovaného thiokarbamoylpeptidu v Ai shora uvedeného obecného vzorce I, kde atom vodíku v poloze N-α zbytku aminokyseliny na aminovém konci je nahrazen substituovanými thiokarbamoylovými skupinami, Ν-α-substituovaný thiokarbamoylpeptid na N-konci podle vynálezu se získá reakcí se substituovanou izothiokyanatanovou sloučeninou za mírně alkalických podmínek.
V tomto případě karboxylový konec zbytku aminokyseliny v poloze 12 může být buď volný (A4 odpovídá skupině -OH) nebo může být převeden na amid kyseliny (A4 odpovídá skupině -OH) nebo může být převeden na amid kyseliny (A4 odpovídá skupině -NH2). V získaném polypeptidu dva cysteiny v polohách 3 a 11 mohou vytvořit disulfidovou vazbu (—S—S—) merkaptoskupinami.
Tato disulfidová vazba se může vytvořit například oxidací vzduchem nebo způsobem podle Athertona E. a spol.: J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 2065 (1985).
Pokud není jinak uvedeno, jednotlivé aminokyseliny, použité ve shora uvedeném způsobu syntézy v pevné fázi, znamenají L-formu. Bazická aminokyselina, kondenzovaná s prolinem v poloze 7, označená X, znamená D-formu.
Při syntéze nového polypeptidu podle vynálezu se může použít jakákoliv nerozpustná pryskyřice s aminovou skupinou, pokud se svými aminoskupinami váže na karboxylovou skupinu Nchráněného argininu nebo lysinu na C-konci nebo v některých případech na karboxylovou skupinu spaceru na ně navázaného a pak odstraněného. Mezi příklady takových nerozpustných pryskyřic patří, ale nejsou na ně omezeny, aminomethylované pryskyřice (aminomethylované styren-divinylbenzenové kopolymery), benzhydrylaminové pryskyřice, methylbenzhydrylaminové pryskyřice, aminomethylfenoxymethylové pryskyřice a jejich deriváty. Jestliže se použije benzhydrylaminová, methy lbenzhydry lam inová, dimethoxybenzhydrylaminová (DMBHA) pryskyřice nebo aminomethylfenoxymethylová pryskyřice, amid se získá přímo štěpením. Z hlediska výtěžku je výhodná aminomethylová pryskyřice.
-8CZ 287239 B6
Jako spacer s funkční skupinou, schopnou navázání na karboxylovou skupinu nebo mající karboxylovou skupinu, se může použít například spacer, který je schopen převést karboxylovou skupinu argininu na p-karboxymethylbenzylester, ale neexistuje žádné zvláštní omezení, pokud jde o spacer.
Chráněná aminokyselina je taková aminokyselina, jejíž funkční skupiny mohou být chráněny chránící skupinou postupy, známými odborníkům, nebo různé chráněné aminokyseliny získané komerčně. Odborníci jsou schopni rozpoznat, kdy metoda syntézy polypeptidů vyžaduje použití chránící skupiny pro stabilizování labilního postranního řetězce aminokyseliny, aby byl tento řetězec během syntézy chráněn před chemickou změnou.
Chrániči skupina α-aminové skupiny aminokyseliny se vybere ze skupiny, která zahrnuje, ale není omezena jenom na tyto, Boc (terc.butyloxykarbonylová) nebo Fmco (9-fluorenylmethyloxy-karbonylová). Chrániči skupina pro guanidinovou skupinu argininu (Arg) se vybere ze skupiny, sestávající, ale bez omezení jenom na tyto, zTos (tosylové skupiny), NO2 (nitroskupiny), Mtr (4-methoxy-2,3,6-trimethylbenzensulfonylové skupiny) nebo Pmc (2,2,5,7,8-pentamethyl-chroman-6-sulfonylové skupiny). Chrániči skupina merkaptoskupiny cysteinu (Cys) se vybere ze skupiny, sestávající z, ale bez omezení jenom na tyto, Bzl (benzylové), MBzl (4-methoxybenzylové), 4-MeBzl (4-methylbenzylové), Acm (acetamidomethylové), Trt (tritylové), Npys (3-nitro-2-pyridinsulfenylové), t-Bu (terč.butylové) nebo tBus (terc.butylthioskupiny). Výhodnými skupinami jsou Mbzl, 4-MeBzl, Trt, Acm a Npys. Chrániči skupina hydroxylové skupiny tyrosinu (Tyr) se vybere ze skupiny, sestávající z, ale bez omezení jenom na tyto, Bzl, C12Bzl (2,6-dichlorbenzylové) nebo t-Bu skupiny. Hydroxylová skupina nemusí být chráněna. Chrániči skupina e-aminové skupiny lysinu (Lys) je vybrána ze skupiny, sestávající z, ale bez omezení jenom na tyto, Z (benzyloxykarbonylové), C1Z (2-chlorbenzyloxykarbonylové), Boc nebo Npys skupiny. V případě, že atom vodíku postranního řetězce e-aminové skupiny D nebo L-lysinu znamená X v poloze 7, tato aminová skupina může být chráněna shora uvedenou Z, C1Z, Boc nebo NPys skupinou. Je výhodné, aby z těchto chránících skupin byla vybrána taková skupina, která je vhodná pro syntézu za daných podmínek.
Kondenzace chráněných aminokyselin se provádí kondenzačními způsoby, známými odborníkům, jako je například DCC (dicyklohexylkarbodiimidová) metoda, DIPCDI (diizopropylkarbodiimidová) metoda [Tartar A. a spol.: J. Org. Chem. 44, 5000 (1979).], metoda aktivního esteru, metoda smíšeného nebo symetrického anhydridů kyseliny, karbonyldiimidazolová metoda, DCC-HOBt (1-hydroxybenzotriazolová) metoda [Konig W. a spol.: Chem. Ber. 103 788, 2024, 2034 (1970).] nebo difenylfosforylazidová metoda. Výhodnou je použití DCC metody, DCC-HOBt metody, DIPCDI-HOBt metody nebo metody symetrického anhydridů kyseliny. Kondenzační reakce se provádí v organickém rozpouštědle, jako je například dichlormethan, dimethylformamid, N-methylpyrrolidon (NMP) nebo jejich směs. Pro odstranění chránící skupiny α-aminové skupiny se používá takové činidlo, jako je směs kyseliny trifluoroctové s dichlormethanem, HCl/dioxan, piperidin/dimethylformamid (DMF) nebo NMP. Stupeň postupu kondenzační reakce v každém stupni syntézy se provádí způsobem podle Kaisera a spol.: Anal. Biochem. 34, 595 (1970) (způsob ninhydrinové reakce).
Podle předcházejících způsobů se získává chráněná peptidová pryskyřice se žádanou sekvencí aminokyselin. Jestliže se jako nerozpustná pryskyřice používá derivát aminomethylové pryskyřice, chráněný polypeptid se z pryskyřice odstraní například reakcí pryskyřice s chráněným peptidem s amoniakem ve vhodném rozpouštědle. Výsledný chráněný peptid se pak nechá zreagovat s fluorovodíkem. Získá se tak amid polypeptidů shora uvedeného obecného vzorce I a všechny chránící skupiny se odstraní.
Jestliže se jako nerozpustná pryskyřice použije benzhydrylaminová pryskyřice, methylbenzhydrylaminová pryskyřice, aminomethylfenoxymethylová pryskyřice nebo DMBHA pryskyřice [Funakoshi S. a spol.: J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1988, 382.], polypeptid se z pryskyřice
-9CZ 287239 B6 může odstranit a současně se mohou z polypeptidu odstranit chránící skupiny reakcí pryskyřice s chráněným peptidem s fluorovodíkem, TFMSA (trifluormethansulfonová kyselina) [Yajima H. a spol.: „The Peptides“, díl 5, strana 65 (1983), publikováno Academie Press, red. E. Gross.], TMSOTf (trimethylsilyltriflát) [Fujii N. a spol.: J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1987, 274.], TMSBr (trimethylsilylbromid) [Fujii N. a spol.: Chem. Pharm. Bull. 35, 3880 (1987).] nebo podobně.
Ve výhodném provedení se výsledný polypeptid redukuje 2-merkaptoethanolem, DTT (dithiothreitol) nebo podobně, aby se zajistilo, že merkaptoskupiny cysteinů jsou v redukovaných formách. Merkaptoskupiny se mohou následně zoxidovat, takže se získá cyklický polypeptid.
Oxidační reakce se provádí známým způsobem. Obvykle se jako oxidační činidlo používá vzduch nebo hexakyanoželezitan (např. hexakyanoželezitan draselný).
Polypeptid(y) podle vynálezu se může (mohou) vyrábět technologií rekombinace DNA. Podle tohoto způsobu se nukleotidové sekvence kódující polypeptid(y) podle vynálezu klonují a exprimují způsoby, dobře známými odborníkům. Viz například Maniatis a spol.: Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, 1991.
Polypeptidy podle vynálezu se izolují a čistí způsoby, známými odborníkům z oblasti polypeptidů, například extrakcí, rekrystalizací, různými chromatografiemi (gelová filtrace, chromatografie na iontoměniči, rozdělovači chromatografie, adsorpční chromatografie, chromatografie na obrácených fázích), elektroforézou, protiproudým roztřepáváním atd. Nejúčinnější je vysokoúčinná kapalinová chromatografie na obrácených fázích.
Polypeptid(y) podle vynálezu obecného vzorce I má (mají) schopnost vázat se na endotoxiny, má (mají) antibakteriální aktivitu a aktivitu hemolyzovat endotoxinem senzitizované hemocyty. Polypeptid(y) podle vynálezu má (mají) také protivirovou aktivitu. Ve specifickém provedení polypeptid(y) podle vynálezu má (mají) anti-HIV aktivitu. Jak bude podrobně uvedeno v další části, polypeptidy podle vynálezu mají významně vyšší anti-HIV aktivitu než známé polypeptidy s vysokou afinitou k endotoxinům (např. tachyplesiny I, II nebo III nebo polyphemusiny I nebo II).
Nedávný rozvoj dodávacích systémů, schopných účinně zavádět DNA do cílové buňky, způsobil, že se v praxi používá terapie lidských genů při léčení genetických onemocnění, rakoviny, AIDSu atd. [Morgan a Anderson: Annu. Rev. Biochem. 62, 191 (1993).].
Systémy transfekce DNA zahrnují použití polykationtů, fosforečnanu vápenatého, fáze liposomů, retrovirů, mikroinjekcí, elektroporace a fáze protoplastů. Všechny tyto způsoby však trpí jedním nebo více problémy, týkajícími se buď buněčné toxicity, špatné reprodukovatelnosti, nevhodnosti nebo neúčinnosti dodávání DNA [Flegner a spol.: Proč. Nati. Acad. Sci. USA 84, 7413 (1987).].
Nedávno byl popsán vysokoúčinný postup transfekce DNA kationtovým komplexem lipid-DNA nebo komplexem cyklický amfipatický peptid-DNA [Legendre a Szoka, jr.: Proč. Nati. Acad. Sci. USA 90, 893 (1993).]. Mezi peptidy, které tvoří transfektující komplex sDNA, patří gramicidin S, tyrocidin, polymyxin B, polylysin a melitin, všechny kationtové povahy. Z těchto polypeptidů je nejúčinnějším kationtovým peptidem gramcidin S, který je znám jako amfipatické cyklické dekapeptidové antibiotikum s konformací β-skládaného listu a který může pronikat a ničit buněčné membrány. O pozitivním náboji i amfipatickém charakteru gramicidinu S se uvádí, že jsou důležité pro vysokou transfekci. Vezmou-li se v úvahu tyto strukturní vlastnosti, polypeptidy podle tohoto vynálezu mohou být alternativními kandidáty gramicidinu S pro komplex DNA s vysokou schopností transfekce, pro jejich silně kationtovou a amfipatickou povahu s konformací β-skládaného listu.
-10CZ 287239 B6
Ve skutečnosti tachyplesin I, jedna z rodičovských molekul polypeptidů podle tohoto vynálezu, může pronikat membránami a vázat se na DNA podobně jako gramicidin S [Matsuzaki a spol.: Biochim. Biophys. Acta 1070, 259 (1991) a Yonezawa a spol.: Biochemistry 31, 2998 (1992).]. Navíc, vyřešení struktury T-22, jednoho z polypeptidů podle tohoto vynálezu (1) potvrdilo, zeje velmi podobna struktuře tachyplesinu I s amfipatickou antiparalelní β-strukturou skládaného listu [Tamamura a spol.: Biochim. Biophys. Acta 1163, 209 (1993).].
Polypeptidy podle tohoto vynálezu se tedy mohou používat jako složka systémů transfektujících DNA při genové terapii.
Polypeptid(y) podle tohoto vynálezu se tedy může (mohou) používat ve farmaceutickém prostředku, obsahujícím polypeptid(y) podle vynálezu nebo jeho sůl a farmaceuticky přijatelný nosič, vybraný podle způsobu a formy podávání farmaceutického prostředku. Farmaceutickými nosiči mohou být slučitelné pufry, jako je Hankův nebo Ringerův roztok, fyziologický solný roztok, směs sestávající ze soli a glukózy a heparinizovaný roztok citrát sodný-kyselina citronová-glukóza. Farmaceutický prostředek se podává orálně nebo parenterálně, podle objektu podávání. Farmaceutický prostředek se připravuje ve formě prášku, granulí, roztoku pro injekci nebo pro orální podávání, tablet, čípků, pesarů, masti, krému nebo aerosolu, pomocí příslušných farmaceutických nosičů podle způsobu podávání.
Jestliže se farmaceutický prostředek podává přímo jako injekce pacientovi, polypeptid nebo jeho sůl podle vynálezu se mohou podávat kontinuálně nebo přerušovaně v množství od 10 do 5000 mg na kg tělesné hmotnosti člověka a den a intravenózní kapačkou jako roztok ve fyziologickém solném roztoku.
Příklady provedení vynálezu
Tento vynález je dále ilustrován následujícími příklady, které nejsou zamýšleny jako omezení tohoto vynálezu.
Ve zde uvedených příkladech je popsána syntéza polypeptidů 1. Jsou popsány také výsledky testů anti-HIV aktivity polypeptidů podle vynálezu a známých polypeptidů s vysokou afinitou k endotoxinům. Polypeptidy podle vynálezu mají významně vyšší anti-HIV aktivitu než známé polypeptidy s vysokou afinitou k endotoxinům.
V následujících příkladech se používají následující přístroje a reakční činidla:
HPL aparatura: Shimadzu Corporation, model LC-6AD, kolona přístroje: Asahipak ODP-90 (Asahi Chemical Industry Co., Ltd.),
Fmoc aminokyselina a aminopryskyřice: výroba Watanabe Chemical Industries, Ltd, kondenzační činidlo: výroba Peptide Institute, INC. and Apllied Biosystems, Japonsko, FAB-MS (FAB-hmotový spektrograf): VC Co. (USA), model ZAB-SE.
Příklad 1
Syntéza polypeptidů vzorce 1
Syntéza polypeptidů vzorce 1
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2 (1)
-11CZ 287239 B6 je popsána níže v odstavcích 1.1. až 1.7.. Ve shora uvedeném vzorci 1 Arg, Trp, Cys, Tyr, Lys, DLys a Pro znamenají shora uvedené zbytky aminokyselin, plná čára mezi Cys v poloze 3 a 11 znamená disulfidovou vazbu.
Podobnými způsoby byly syntetizovány polypeptidy 2 až 13, 22 a 23 a peptidové prekurzory těchto polypeptidů 14 až 21, 24 a 25 (struktury viz výše tabulka 1).
1.1. Zavedení Fmoc-DMBHA-CH2CH2COOH do aminomethylové pryskyřice [(3-{a-Fmoc-amino-4-methoxybenzyl)-4-methoxyfenyl)propionová kyselina]
Do kolony pro syntézu v pevné fázi se dá 270 mg (0,2 mmol) aminomethylové pryskyřice (0,74 ekv./g) a 268,5 mg (0,5 mmol, 2,5 ekv.) Fmoc-DMBHA-CH2CH2COOH (mol. hmot. 537). Kondenzační reakce se provádí 2 h způsobem DIPCDI-HOBt v DMF podle Guo L. a spol. [Chem. Pharm. Bull. 36, 4989 (1988).].
Po ukončení kondenzační reakce se volné aminokyseliny chrání reakcí s anhydridem kyseliny octové (DMBHA pryskyřice).
1.2. Zavedení argininu do polohy 12 v DMBHA pryskyřici
Po odstranění Fmoc skupin z DMBHA pryskyřice připravené shora v části 1.1. 20% piperidinem v DMF se přidá 2,5 ekvivalentu (ekv.) Fmoc-Arg(Pmc)-OH na DMBHA pryskyřici a provede se kondenzační reakce v DMF podle DIPCDI-HOBt způsobu. Postup kondenzační reakce se sleduje ninhydrinovým testem podle Kaisera E. a spol. [Anal. Biochem. 34, 595 (1970).].
1.3. Zavedení cysteinu do polohy 11
Po odstranění Fmoc skupin z DMBHA pryskyřice připravené shora v části 1.2. 20% piperidinem v DMF se přidá 2,5 ekvivalentu (ekv.) Fmoc-Cys(Trt)-OH na DMBHA pryskyřici a provede se kondenzační reakce v DMF podle DIPCDI-HOBt způsobu. Postup kondenzační reakce se sleduje podobně jako v části 1.2. ninhydrinovým testem.
1.4. Zavedení aminokyselin od polohy 10 do polohy 1
Podobně jako shora se na DMBHA pryskyřici zavede Lys(Boc), Arg(Pmc), Tyr(tBu), Pro, DLys(Boc), Lys(Boc), Arg(Pmc), Tyr(tBu), Cys(Trt), Trp, Arg(Pmc) a Arg(Pmc). Získá se tak pryskyřice s peptidem vzorce 1, chráněným chránícími skupinami.
Kondenzace každé aminokyseliny syntézou v pevné fázi se provádí za podmínek, uvedených v tabulce 2.
Tabulka 2
| postup | reakční činidlo | rozpouštědlo | doba x počet opakování |
| odstranění Fmoc skupiny | 20% piperidin/DMF | DMF | 5 min x 3 |
| promývání | — | DMF | 1 min x 6 |
| kondenzace | Fmoc-aminokyselina (2,5 ekv.) + DIPCDI + HOBt | DMF | 2 h x 1 |
| promývání | — | DMF | 1 min x 4 |
-12CZ 287239 B6
1.5. Příprava polypeptidu vzorce 1 odstraněním chránících skupin, odstranění polypeptidu vzorce 1 z pryskyřice a částečné čištění
Polypeptid vzorce 1 na pryskyřici, chráněný chránícími skupinami, se podrobí reakci s 20% piperidinem v DMF, aby se odstranila skupina Fmoc. Potom se 2 h při 25 °C nechá reagovat se systémem IM TMSOTf-thioanisol/TFA (kyselina trifluoroctová) (10 ml kyseliny trifluoroctové v přítomnosti m-kresolu (100 ekv.) a ethandithiolu (300 ekv.)) na 100 mg pryskyřice. Pryskyřice se odfiltruje od reakční směsi a promyje se dvakrát 1 ml kyseliny trifluoroctové. Ke směsi filtrátu a promývacích roztoků se potom přidá 100 ml ledem ochlazeného suchého etheru. Vytvořená sraženina se odstřeďuje, odparek se od supematantu oddělí dekantováním, výsledný zbytek se promyje studeným etherem, rozpustí se v 10 ml 4N kyseliny octové a přidá se 830 mg (80 ekv.) dithiothreitolu. Tato směs se míchá za teploty místnosti přes noc.
Reakční roztok se odstřeďuje, supematant se nechá zreagovat se Sephadexem G-10 (3,7 x 5 cm), zfiltruje se na gelu 4N kyselinou octovou (AcOH), frakce, která protéká Sephadexem, se shromáždí jako hlavní eluovaná část a lyofilizací se získá částečně vyčištěný necyklizovaný polypeptid vzorce 1 jako prášek.
1.6. Příprava polypeptidu vzorce 1 oxidací vzduchem
U poloviny množství, získaného filtrací na gelu Sephadexu, se upraví koncentrovaným vodným amoniakem pH na hodnotu 7,5 a tato směs se oxiduje provzdušňováním vzduchem, přičemž dochází k cyklizační reakci. Po ukončení oxidace vzduchem se cyklizovaný polypeptid vzorce 1 adsorbuje na 10 g pryskyřice Diaion HP-20 a eluuje se 60% acetonitrilem (v 1N kyselině octové).
Eluát se zahustí za teploty místnosti za sníženého tlaku, aby se odstranil acetonitril. Lyofilizací se získá prášek. Prášek se rozpustí v malém množství vody. Roztok se vlije na kolonu s náplní Asahipak ODP-90 a vyčistí se vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPL-model LC6AD, výrobek Shimadzu Corp.) gradientovou eluci acetonitrilem. Získá se polypeptid vzorce 1 jako jediné maximum ve výtěžku 27 % (hmot.) (vztaženo na polypeptid vzorce 1 na pryskyřici, chráněný chránícími skupinami).
1.7. Analýza polypeptidu
Bylo zjištěno, že složení aminokyselin po kyselé hydrolýze způsobem podle Liu a spol. [J. Biol. Chem. 251, 1936 (1976).], a složení, získané leucinaminopeptidázovým štěpením polypeptidu, vyčištěného jak uvedeno v odstavci 1.6, je v dobré shodě s vypočteným složením na bázi sekvence aminokyselin vzorce 1.
Molekulová hmotnost podle FAB-MS byla 1996,3, vypočtená hodnota [M+H]+ je 1996,1. Specifická rotace [α]2°ο získaného polypeptidu byla -17,2° (c 0,11, 1N kyselina octová).
Příklad 3
Syntéza polypeptidu vzorce 14 [Ν-α-acetylace zbytku aminokyseliny na aminovém konci polypeptidu vzorce 1]
Syntéza polypeptidu vzorce 14 je popsána v části 3.1. a 3.2.:
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Ac-Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-DLys-Pro-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2
-13CZ 287239 B6 (14)
Ac-Arg, Arg, Trp, Cys, Tyr, Lys, DLys a Pro ve shora uvedeném vzorci 14 znamenají shora uvedené zbytky aminokyselin. Plná čára mezi Cys v poloze 3 a 11 znamená disulfidovou vazbu.
3.1. Acetylace pryskyřice s peptidem (1), částečně chráněným chránícími skupinami
1,301 g (0,25 mmol) pryskyřice s peptidem (1), částečně chráněným chránícími skupinami, získané ve stupni 1.4. shora uvedeného příkladu 1, se umístí do reakční nádoby ruční syntézy v pevné fázi. Po odstranění Fmoc skupiny se aminová skupina na N-konci acetyluje způsobem podle Hudsona [J. Org. Chem. 53, 617 (1988).]. Získá se 1,241 g pryskyřice s peptidem (1), částečně chráněným na N-konci acetylovanou α-aminokyselinou (výtěžek suché hmotnosti: 100 % hmot.). Tento postup je souhrnně uveden v tabulce 3.
Tabulka 3
| č. operace | reakční činidlo | rozpouštědlo (objem) | doba x počet opakování |
| 1. promývání | DMF (15 ml) izopropanol (15 ml) dichlormethan (15 ml) DMF (15 ml) | 2 minx3 2 minx3 2 minx3 2 minx3 | |
| 2. acylace | i) AcOH, 0,057 ml (1,0 mmol) + HOBt, 153 mg (1,0 mmol) ii) BOP1, 442,3 mg (1,0 mmol) iii) diizopropylethylamin 0,35 ml (2 mmol) | DMF (6 ml) DMF (2 ml) DMF (2 ml) | 3 minxl 3 minxl 60 minxl |
| 3. promývání | DMF (15 ml) izopropanol (15 ml) dichlormethan (15 ml) DMF (15 ml) | 2 minx3 2 minx3 2 minx3 2 minx3 |
1 BOP znamená benzotriaxol-l-yl-oxy-tris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfát
Acetylace se provádí opakováním shora uvedených operací 1 až 3, dokud ninhydrinová reakce nepřestane být pozitivní.
2.2. Příprava peptidu vzorce 14 odstraněním chránících skupin a pryskyřice od pryskyřice s peptidem vzorce 1, částečně chráněným, s acetylovanou aminokyselinou na N-konci
Polypeptid vzorce 14 se připraví stejným způsobem, jako je to popsáno shora v části 1.5. a 1.6. Specifická rotace peptidu vzorce 14 byla -18,3° (c 0,08, IN kyselina octová). Polypeptid vzorce 14 se kysele hydrolyzuje ve 4M methansulfonové kyselině, obsahující 0,2 % tryptaminu, při 115°C po dobu 24 hodin způsobem podle Liu a spol. [J. Biol. Chem. 251, 1936 (1976).]. Výsledek analýzy aminokyselin je v dobré shodě s vypočtenou hodnotou.
-14CZ 287239 B6
Příklad 4
Syntéza polypeptidů vzorce 19 [N-a-fluoresceinthiokarbamoylderivát polypeptidů vzorce 1]
Syntéza polypeptidů vzorce 19 se provádí Ν-α-fluoresceinkarbamoylací aminokyseliny na Nkonci polypeptidů vzorce 1.
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
FT C-Arg-Arg-T rp-Cy s-T yr-Arg-Lys-DLy s-Pro-T yr-Arg-Lys-Cys-Arg-NFF (19)
FTC-Arg, Arg, Trp, Cys, Tyr, Lys, DLys a Pro ve shora uvedeném vzorci 19 znamenají shora uvedené zbytky aminokyselin. Plná čára mezi Cys v poloze 3 a 11 znamená disulfidovou vazbu.
mg (3,9 pmol) soli polypeptidů vzorce 1 s kyselinou octovou, získané v odstavci 1.6., se rozpustí v 1 ml PBS pufru (fosforečnanem pufrovaný solný roztok, pH 7,5). K tomuto roztoku se za chlazení ledem přidá 2,8 mg (7,2 pmol) fluoresceinizothiokyanát (FITC)-izomeru-I (Wako Pure Chemical Ind., Ltd.), rozpuštěného v 1 ml DMSO. Po 6 až 7 hodinách za teploty místnosti se volná aminová skupina fluoresceinthiokarbamolovala.
Reakční směs se nanese na kolonu se Sephadexem G-25 (jemný) [ekvilibrovaná 50mM PB (fosforečnanový pufr), pH 4,2], předem odsolená a frakcionovaná. Peptidová frakce se adsorbuje na koloně s náplní Sep-Pak C 18 plus ENV (Milipore Co.), eluuje se 80% roztokem acetonitrilu ve vodné kyselině octové, pH 4,2, a vysuší se vymrazením. Získá se tak 3,93 mg soli polypeptidů vzorce 19 s kyselinou octovou (výtěžek 35 % hmot.).
Specifická rotace získané soli polypeptidů vzorce 19 s kyselinou octovou byla -5,9° (c 0,06, voda).
Aminokyselinová analýza kyselých hydrolyzátů této sloučeniny způsobem podle Liu ukázala o jeden argininový zbytek méně než bylo vypočteno pro polypeptid vzorce 1.
Chromatografíe na tenké vrstvě (butanol-kyselina octová-voda v poměru 4:1:1) částečného kyselého hydrolyzátů této sloučeniny v kyselině trifluoroctové (teplota místnosti, 2 h) detekovala jednu skvrnu, která odpovídá FTH-Arg (thiohydantoin fluoresceinargininu).
Výsledky těchto analýz ukazují, že α-aminová skupina zbytku argininu na N-konci je selektivně fluoresceinthiokarbamoylována.
Příklad 2 a srovnávací příklady 1 a 2
Protivirová aktivita na virus lidské imunitní nedostatečnosti (HIV)
Protivirová aktivita na HIV polypeptidů vzorce 1, syntetizovaného v příkladu 1, byla testována a vyhodnocena následujícím způsobem.
Na mikrotitrovací desku s 96 jamkami se dají HlV-infikované MT-4 buňky (2,5.104 buněk na jamku, multiplicita infekce (MOI) : 0,001) ihned po infikování spolu s testovanou sloučeninou v různých koncentracích. Po 5 dnech inkubace při 37 °C v inkubátoru s oxidem uhličitým se počet přežívajících buněk změří MTT způsobem [Pauwels a spol.: J. Virol. Methods 20, 309 (1988).]. Protivirová aktivita se vyjádří jako koncentrace, při které množství mrtvých buněk k buňkám s HTV infekcí je z 50 % inhibováno (EC50 : 50% efektivní koncentrace). Na druhé straně však pro zjištění cytotoxicity testované sloučeniny na MT-A buňky se podobně jak shora
-15CZ 287239 B6 uvedeno inkubují buňky, neinfikované virem, spolu s testovanou sloučeninou v různých koncentracích. Cytotoxicita se vyjádří jako 50% cytotoxická koncentrace (CC5o) testované sloučeniny. Potom se zjistí efektivní poměr (SI) jako poměr CC50 k ECsoíCCso/ECso).
Následující vzorec T-22 představuje peptidové protivirové činidlo, použité pro srovnání s polypeptidem vzorce 1:
Arg-Arg-Trp-Cys-Tyr-Arg-Lys-Cys-Tyr-Lys-Gly-Tyr-Cys-Tyr-Arg-Lys-Cys-Arg-NH2 (T-22)
Tabulka 4 udává hodnoty EC50, CC50 a SI polypeptidu 1, shora uvedeného peptidu T-22 a antiHTV činidla AZT.
Tabulka 4
| testovaná sloučenina | CC50 (pg/ml) | EC50 (pg/ml) | SI | |
| příklad 2 | polypeptid 1 | 49,8 | 0,0034 | 14,647 |
| srovnávací př. 1 | T-22 | 54,1 | 0,0099 | 5,465 |
| srovnávací př. 2 | AZT (azidothymidin) μΜ | 6,68 | 0,0001 | 66,800 |
Shora uvedená tabulka zřetelně ukazuje, že polypeptid vzorce 1 podle vynálezu má stejnou cytotoxicitu jako T-22, jehož anti-HIV aktivita byla objevena dříve, ale vykazuje antivirovou aktivitu při jedné třetině koncentrace T-22. I když byly z peptidu odstraněny 4 zbytky aminokyselin a molekulová hmotnost byla snížena, polypeptid podle vynálezu vykazuje dokonce vyšší aktivitu.
Při srovnání s azidothymidinem (AZT) je hodnota EC50 polypeptidu 1 poněkud vyšší, ale vykazuje mimořádně nízkou cytotoxicitu. Očekáváme proto, že se může používat jako bezpečnější anti-HIV činidlo.
Příklad 5
Vlastnosti polypeptidů a jejich anti-HTV aktivita
Tabulka 5 ukazuje strukturní vzorec a vlastnosti polypeptidů podle vynálezu, připravených postupem podle příkladů 1, 3 a 4. Tabulka 5 uvádí také anti-HTV aktivitu polypeptidů, testovaných a vyhodnocených způsobem podle příkladu 2.
-16CZ 287239 B6
Tabulka 5
| ti μ •H > •H μ X | 'r u ω u υ >« M | 3352 | r·. tx ti* co | «Η CM CO r-l | co CM tx CM | <O tn CM CO | CO co co rH | tn co CM cn co | tn t> rM | 11095 | 2889 | CO cn O cti | |||
| (ΰ | *- | tn | tn | ti· | |||||||||||
| > H | β | cn | r- | \O | rM | <4» | to | r4 | O | to | Cx | rH | |||
| Ο» | r4 | tn | O | CM | CM | to | o | co | r-t | r-f | o | ||||
| w | Λ | o | O | O | O | O | o | o | o | o | o | o | |||
| I | U1 | » | · | rx | r· | X. | •te | ·· | «» | «X | r | ||||
| •H | o | o | O | o | o | o | o | o | o | o | o | ||||
| μ | |||||||||||||||
| c | |||||||||||||||
| ti | β | t | co | o | co | o | r> | kD | tx | co | |||||
| Cr | co | tM | CM | cn | r4 | kO | •sř | CM | o | ti· | tn | ||||
| k | ·» | ·· | *» | Μ» | X» | •w | ·» | ||||||||
| ř. | tn | CO | ϊ—1 | to | co | to | co | M* | CO | cn | 00 | ||||
| u | KO | cn | o | to | o | co | M* | co | ti· | ||||||
| r~4 | r-i | r4 | r-4 | ||||||||||||
| *H | |||||||||||||||
| μ | x—·. | x—X | X-x | z—x | ^-x | •*-s | X-Xk | x-x» | |||||||
| ω | o: | K | |||||||||||||
| 0 | H | o | o | ||||||||||||
| ±J | s | υ | o | υ | |||||||||||
| (fl | 1 & | < | E | E | £ | 5 | & | CM | < | E | |||||
| d | 7. | W | z | ||||||||||||
| 1-4 | r-4 | H | |||||||||||||
| > | 0 | % | X | X | > | X | X | X | X | w | |||||
| r-4 | ti< | tO | o | co | co | Ό | μ. | O | |||||||
| M | <—4 | o | O | r-4 | o | o | O | o | |||||||
| C | ·» | ex | *» | ||||||||||||
| r-4 | o | o | O | o | o | o | O | O | o | ||||||
| * | x_x | ' | |||||||||||||
| •H N | tt Λ | CM | cn | r-4 | to | cn | r-4 | cn | Γ' | ||||||
| ·» | *» | ·* | ·· | 9· | ·>. | *» | k. | ||||||||
| Ή | r-~ | o | CM | CM | co | σι | tin | co | CM | ||||||
| r4( 1 | 1 | r-4 | r-i * | rt 1 | r i 1 | r-l 1 | |||||||||
| i | í | ||||||||||||||
| í | X Z | É | š | tn k | 1 tn i. | I <n k | £* X | í | |||||||
| tr> | ř | Cn | tn | X | X | X | tn | ||||||||
| X | X | X | X | M >» | a N | M | k X | X | |||||||
| M | a | a | O | u | u | a | a | ||||||||
| H | K | tx | k. | s | |||||||||||
| O | u | O | U | >» | tx | >* | o | o | |||||||
| B | n | B | a | a | a | ||||||||||
| s | S | O* k | Dl k | κ | |||||||||||
| u | .1 | ►J | . 1 | Di k | γ | ||||||||||
| 9» | tn | » | tn | X | X | X | tn | cn | |||||||
| cú | 4 | X t | X | 2 | 4« s | k. | k | X | X | ||||||
| |4 | k | í-· | «♦ | k | k | ||||||||||
| M | s »- 1 0 | ►» t· | b | O k | o 1. | O ». | N ř· | b | |||||||
| μ | ►λ | B | ř. | <L | Λ. | Λ. | 0 | 0 | |||||||
| h | s | k | k | ||||||||||||
| *5 | A. | O | «4 | Ck | K | Λ. | a. | ||||||||
| « >< | B >x | « 0 | E | .4 n | «4 n | • 4 n | a ►» | a N | |||||||
| «Ρ tfl | O » | »4 1 | k CL i | O a I | a | a s | a | r? | r? | ||||||
| B | B | B | a | (j | a | a | |||||||||
| ti | u | ►> »4 | •J | ►. »4 | D« k | Dl h | Ol 1« | X 1 | ►« u | ? | ►> »4 | ||||
| r-x o rH | ř X k | Dl k X 1 k | Dl k X 1 k | Ol k X » 4« | X t k ♦ · | X 1 k ř | X I k £ | 1 w | Dl k X » k | i Z « w | Dl k X 1 k | ·· ti ti | CM CM l | CM | |
| ω V4 | ►» | r? | £ | ř | a N | M >» | O N | kl k· | H | >í | H | ||||
| « | B | B fr | a fr | w K u | O 1 & | O 1 ř | O 1 fi· | a ►» u | a O | a | |||||
| ti C | & t· | ř t* | ř 1« | & | H 1 Dt h | 1 k | i· 1 Di k | fr 1« | & H | Ή Q | |||||
| •H | tR | pi | Ď» | 01 | X | X | X | Dl | Ol | ti > •ti c | |||||
| c ti o | * i Dl k | ž 1 Ol k | k -X Cl k | i 1 Ol k | ζ X 1 | Di a i | 01 k X 1 | k X 1 Dl k | k X i tn k | ||||||
| 3 O | X | X | X | u X | k £ | O t | 2 | 2 | £ o | ||||||
| <—1 | S’’“* | ζ-χ. | r-\ | χ-“χ | í. | ||||||||||
| V) | r-4 | co | 10 | CO | ti· | Γ- | cn | CM | CO | in | |||||
| χ—' | V—* | '—' | ^4 | r-1 | CM | CM | |||||||||
| S-z» | •x—* | * |
-17CZ 287239 B6
Pokud není jinak uvedeno, Cys v poloze 3 a 11 příkladů sloučenin shora uvedených v tabulkách jsou spojeny disulfídovou vazbou.
Dále pak ve shora uvedené tabulce „AZT“ znamená azidothymidin (obvykle nazývaný zidovudin) a T-22 shora uvedený polypeptid.
Tento vynález poskytuje nový polypeptid s protivirovou účinností na virus lidské imunitní nedostatečnosti (HIV) a umožňuje získat hydrofilnost, afinitu k lipidům, vyšší aktivitu a užitečnost pro objasnění mechanismu projevu anti-virové aktivity.
Claims (3)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Polypeptidy s protimikrobiálními a protivirovými účinky, obecného vzorce I1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13A]—T rp-Cys-A2-A3-A3-X-A2-A3-A3—Cys—A3—A4 (I) ve kterém,A! je bazický aminokyselinový zbytek nebo peptidový zbytek se dvěma bazickými aminokyselinami, vybranými ze skupiny, zahrnující lysin, arginin a omithin, přičemž uvedený bazický aminokyselinový zbytek nebo peptidový zbytek, v němž N-a-atom vodíku na aminoterminálním konci uvedeného aminokyselinového zbytku je popřípadě nahrazen acylem se 2 až 16 atomy uhlíku nebo fluoresceinthiokarbamoylem nebo fenylthiokarbamoylem, tvoří Ν-α-acylem substituovaný bazický aminokyselinový zbytek, Ν-α-acylem substituovaný peptidový zbytek, N-a-fluoresceinthiokarbamoylem nebo Ν-α-fenylthiokarbamoylem substituovaný bazický aminokyselinový zbytek nebo N-a-fluoresceinthiokarbamoylem nebo Ν-α-fenylthiokarbamoylem substituovaný peptidový zbytek,A2 je tyrosinový nebo fenylalaninový zbytek,A3 je lysinový nebo argininový zbytek,A4 je hydroxyl nebo aminoskupina,X je peptidový zbytek, vybraný ze skupiny peptidů, zahrnující D-omithyl-prolin, prolylD-omithin, D-lysyl-prolin, prolyl-D-lysin, D-arginyl-prolin, prolyl-D-arginin, glycylomithin, omithyl-glycin, glycyl-lysin, lysyl-glycin, glycyl-arginin a arginyl-glycin, v nichž vodíkové atomy ω-aminoskupiny D-lysinu, L-lysinu, D-omithinu a L-omithinu jsou popřípadě nahrazeny ω-aminoacylovou skupinou se 2 až 4 atomy uhlíku a uvedený peptidový zbytek je napojený na aminokyselinové zbytky v polohách 6 a 8 peptidovou vazbou,Trp je tryptofanový zbytek, aCys je cysteinový zbytek, přičemž cysteinové zbytky v polohách 3 a 11 jsou popřípadě napojeny disulfidovými vazbami, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.-18CZ 287239 B6
- 2. Polypeptidy podle nároku 1, obecného vzorce I, v němž A] značí jeden nebo dva bazické aminokyselinové zbytky, v nichž Ν-α-atom vodíku aminoterminálního konce aminokyseliny je nahrazen acylovou skupinou se 2 až 16 atomy uhlíku nebo substituovanou thiokarbamoylovou5 skupinou a ostatní substituenty mají shora uvedené významy, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
- 3. Farmaceutické prostředky kinhibování HIV aktivity u lidí, vyznačující se tím, že obsahují účinné množství polypeptidu podle nároků 1 a 2, nebo jeho farmaceuticky přijatelné ío soli, ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28034693 | 1993-10-14 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ153395A3 CZ153395A3 (en) | 1995-12-13 |
| CZ287239B6 true CZ287239B6 (en) | 2000-10-11 |
Family
ID=17623732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19951533A CZ287239B6 (en) | 1993-10-14 | 1994-10-12 | Polypeptides exhibiting antimicrobial and antiviral activity and pharmaceutical preparations containing thereof |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5776899A (cs) |
| EP (1) | EP0677061B1 (cs) |
| JP (1) | JPH08504837A (cs) |
| KR (1) | KR100208873B1 (cs) |
| CN (1) | CN1038841C (cs) |
| AT (1) | ATE177114T1 (cs) |
| AU (1) | AU682405B2 (cs) |
| CA (1) | CA2151283A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ287239B6 (cs) |
| DE (1) | DE69416824T2 (cs) |
| FI (1) | FI952900A7 (cs) |
| HU (1) | HU217442B (cs) |
| NO (1) | NO952321L (cs) |
| NZ (1) | NZ274560A (cs) |
| RU (1) | RU2136696C1 (cs) |
| WO (1) | WO1995010534A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA948005B (cs) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6653442B1 (en) | 1993-07-20 | 2003-11-25 | Intrabiotics Pharmaceuticals, Inc. | Protegrins |
| US5708145A (en) * | 1993-07-20 | 1998-01-13 | University Of California | Immunglobulins reactive with protegrins |
| US5804558A (en) * | 1993-07-20 | 1998-09-08 | University Of California | Protegrins |
| US5693486A (en) * | 1993-07-20 | 1997-12-02 | Intrabiotics | DNA sequences encoding protegrins and protegrin analogs and their use in recombinant methods of producing protegrins |
| US6025326A (en) * | 1995-07-07 | 2000-02-15 | Intrabiotics Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for the prevention and treatment of oral mucositis |
| US5994306A (en) * | 1995-11-22 | 1999-11-30 | Intrabiotics Pharmaceuticals, Inc. | Fine-tuned protegrins |
| US5916872A (en) * | 1996-07-24 | 1999-06-29 | Intrabiotics Pharmaceuticals, Inc. | Cyclic peptides having broad spectrum antimicrobial activity |
| KR20000049105A (ko) * | 1996-10-15 | 2000-07-25 | 야마야 구따루 | 폴리펩티드 전이금속염 및 폴리펩티드의 항ｈｉｖ 활성증강법 |
| WO1998043995A1 (en) * | 1997-03-28 | 1998-10-08 | Seikagaku Corporation | Novel anti-hiv complexes and medicinal compositions |
| CN1377276A (zh) * | 1999-08-09 | 2002-10-30 | 特里帕普股份公司 | 含有三肽的药用组合物 |
| US6337317B1 (en) * | 2000-06-27 | 2002-01-08 | The University Of British Columbia | Antimicrobial peptides and methods of use thereof |
| RU2175973C1 (ru) * | 2000-08-10 | 2001-11-20 | Гепвитания Лимитед | Способ получения тетрадекапептида |
| US8435939B2 (en) | 2000-09-05 | 2013-05-07 | Biokine Therapeutics Ltd. | Polypeptide anti-HIV agent containing the same |
| EP1323730B1 (en) | 2000-09-05 | 2010-04-21 | Biokine Therapeutics Ltd. | Novel polypeptides and anti-hiv drugs containing the same |
| US6593455B2 (en) * | 2001-08-24 | 2003-07-15 | Tripep Ab | Tripeptide amides that block viral infectivity and methods of use thereof |
| CN1100564C (zh) * | 2001-08-29 | 2003-02-05 | 周根发 | 用于治疗hiv感染的药物、其组合物及其用途 |
| EP1436317A1 (en) * | 2001-09-19 | 2004-07-14 | Tripep Ab | Molecules that block viral infectivity and methods of use thereof |
| KR100932520B1 (ko) * | 2002-10-31 | 2009-12-17 | 박래옥 | 항암제 조성물 |
| EP2426139B1 (en) | 2002-08-27 | 2014-10-01 | Biokine Therapeutics Ltd. | CXCR4 antagonist and use thereof |
| JP4781621B2 (ja) * | 2002-08-27 | 2011-09-28 | バイオカイン セラピューティックス リミテッド | Ｃｘｃｒ４拮抗薬およびその用途 |
| JP4603891B2 (ja) * | 2002-10-31 | 2010-12-22 | パク，レ−オク | 抗癌剤組成物 |
| US20040132642A1 (en) * | 2002-11-12 | 2004-07-08 | Government Of The U.S.A., Represented By The Secretary, Dept. Of Health & Human Services | Methods of inhibiting metastasis or growth of a tumor cell |
| US20050096319A1 (en) * | 2003-02-21 | 2005-05-05 | Balzarini Jan M.R. | Identification of compounds that inhibit replication of human immunodeficiency virus |
| PL378163A1 (pl) * | 2003-02-21 | 2006-03-06 | Tripep Ab | Pochodna glicynoamidu do hamowania replikacji HIV |
| AU2003232253A1 (en) | 2003-05-02 | 2004-11-23 | Polyphor Ag | Template-fixed beta-hairpin peptidomimetics with cxcr4 antagonizing activity |
| SG170092A1 (en) | 2006-03-10 | 2011-04-29 | Peptcell Ltd | Peptides of regulatory or accessory proteins of hiv, compositions and the utilization thereof |
| CN100366633C (zh) * | 2006-04-18 | 2008-02-06 | 河北师范大学 | 棕点湍蛙抗病毒多肽及其在制药中的应用 |
| EP3011961B1 (en) | 2006-12-21 | 2020-11-11 | Biokine Therapeutics LTD. | 4f-benzoyl-tn14003 for the mobilisation of hematopoietic progenitor cells in view of transplantation |
| US9271933B2 (en) * | 2007-11-27 | 2016-03-01 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Graft copolymer polyelectrolyte complexes for drug delivery |
| US9789194B2 (en) | 2007-11-27 | 2017-10-17 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Graft copolymer polyelectrolyte complexes for drug delivery |
| US20120128684A1 (en) | 2008-08-25 | 2012-05-24 | Burnham Institute For Medical Research | Conserved Hemagglutinin Epitope, Antibodies to the Epitope and Methods of Use |
| US9427456B2 (en) | 2009-06-14 | 2016-08-30 | Biokine Therapeutics Ltd. | Peptide therapy for increasing platelet levels |
| BR112013031575B1 (pt) | 2011-06-07 | 2021-03-16 | Polyphor Ag | Composto peptídico ciclado de estrutura principal, composição farmacêutica, uso de um composto, e, processo para a manufatura de um composto |
| WO2013160895A1 (en) | 2012-04-24 | 2013-10-31 | Biokine Therapeutics Ltd. | Peptides and use thereof in the treatment of large cell lung cancer |
| CN104072579B (zh) * | 2014-06-11 | 2017-01-25 | 南方医科大学 | 具有抗菌抗病毒活性的小分子肽及其活性修饰物 |
| MX2017016844A (es) | 2015-07-16 | 2018-08-15 | Biokine Therapeutics Ltd | Composiciones y procedimientos para tratar cancer. |
| CA3014530A1 (en) | 2016-02-23 | 2017-08-31 | Biolinerx Ltd. | Methods of treating acute myeloid leukemia |
| RU2658781C1 (ru) * | 2017-12-28 | 2018-06-22 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) | Пептид, обладающий противоопухолевой активностью |
| CN110841607B (zh) * | 2019-11-22 | 2020-07-24 | 中国科学院地质与地球物理研究所 | 一种超低本底金特效树脂及其制备和应用 |
| CN115490756A (zh) * | 2021-06-18 | 2022-12-20 | 深圳市健翔生物制药有限公司 | 一种固液相结合制备依特卡肽的方法 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1337781C (en) * | 1987-08-21 | 1995-12-19 | Takanori Nakamura | Polypeptide from horseshoe crab exhibiting affinity for lipopolysaccharide and method of preparation |
| JP2641742B2 (ja) * | 1988-08-18 | 1997-08-20 | マルハ株式会社 | 新規ペプチド及び抗菌剤 |
| JP2641744B2 (ja) * | 1988-08-18 | 1997-08-20 | マルハ株式会社 | 新規ペプチド及び抗菌剤 |
| JP2798711B2 (ja) * | 1988-09-26 | 1998-09-17 | 生化学工業株式会社 | ポリペプチド系抗ウィルス剤 |
| WO1992004374A1 (fr) * | 1990-09-11 | 1992-03-19 | Seikagaku Kogyo Co., Ltd. | Nouveau polypeptide et medicament anti-vih prepare a partir de ce polypeptide |
| JP3266311B2 (ja) * | 1991-05-02 | 2002-03-18 | 生化学工業株式会社 | 新規ポリペプチドおよびこれを用いる抗ｈｉｖ剤 |
| OA09696A (en) * | 1991-05-02 | 1993-08-30 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Novel polypeptides with affinity to lipopolysaccharides and their uses |
| JP2500194B2 (ja) | 1993-08-10 | 1996-05-29 | 株式会社ヴァンドームヤマダ | 商品発注システム |
-
1994
- 1994-10-12 DE DE69416824T patent/DE69416824T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-10-12 KR KR1019950702431A patent/KR100208873B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1994-10-12 RU RU95112539/04A patent/RU2136696C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-10-12 AT AT94929644T patent/ATE177114T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-10-12 HU HU9501719A patent/HU217442B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-10-12 JP JP7511589A patent/JPH08504837A/ja active Pending
- 1994-10-12 CN CN94190947A patent/CN1038841C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-10-12 US US08/454,235 patent/US5776899A/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-10-12 CZ CZ19951533A patent/CZ287239B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-10-12 WO PCT/JP1994/001706 patent/WO1995010534A1/en not_active Ceased
- 1994-10-12 NZ NZ274560A patent/NZ274560A/en unknown
- 1994-10-12 EP EP94929644A patent/EP0677061B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-12 CA CA002151283A patent/CA2151283A1/en not_active Abandoned
- 1994-10-12 AU AU78628/94A patent/AU682405B2/en not_active Ceased
- 1994-10-13 ZA ZA948005A patent/ZA948005B/xx unknown
-
1995
- 1995-06-13 FI FI952900A patent/FI952900A7/fi unknown
- 1995-06-13 NO NO952321A patent/NO952321L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU95112539A (ru) | 1997-06-27 |
| KR100208873B1 (ko) | 1999-07-15 |
| RU2136696C1 (ru) | 1999-09-10 |
| NO952321D0 (no) | 1995-06-13 |
| DE69416824T2 (de) | 1999-07-08 |
| ZA948005B (en) | 1996-02-06 |
| FI952900A0 (fi) | 1995-06-13 |
| WO1995010534A1 (en) | 1995-04-20 |
| CN1038841C (zh) | 1998-06-24 |
| JPH08504837A (ja) | 1996-05-28 |
| CN1116427A (zh) | 1996-02-07 |
| HU217442B (hu) | 2000-01-28 |
| US5776899A (en) | 1998-07-07 |
| EP0677061B1 (en) | 1999-03-03 |
| FI952900A7 (fi) | 1995-06-13 |
| NO952321L (no) | 1995-08-09 |
| HUT72974A (en) | 1996-06-28 |
| AU7862894A (en) | 1995-05-04 |
| DE69416824D1 (de) | 1999-04-08 |
| EP0677061A1 (en) | 1995-10-18 |
| AU682405B2 (en) | 1997-10-02 |
| NZ274560A (en) | 1998-03-25 |
| CZ153395A3 (en) | 1995-12-13 |
| CA2151283A1 (en) | 1995-04-20 |
| ATE177114T1 (de) | 1999-03-15 |
| HU9501719D0 (en) | 1995-08-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0677061B1 (en) | Polypeptides and anti-hiv agents prepared therefrom | |
| US5449752A (en) | Polypeptides with affinity to lipopolysaccharides and their uses | |
| JP4006021B2 (ja) | ケモカインの生物学的活性の強化法 | |
| US5571892A (en) | Polypeptide and anti-HIV drug prepared therefrom | |
| AU662900B2 (en) | Novel polypeptides with affinity to lipopolysaccharides and their uses | |
| US7595298B2 (en) | Polypeptides having anti-HIV activity and compositions comprising same | |
| JPWO1992004374A1 (ja) | 新規ポリペプチドおよびこれを用いる抗ｈｉｖ剤 | |
| JPWO2008050830A1 (ja) | 抗ｈｉｖ剤 | |
| WO1998043995A1 (en) | Novel anti-hiv complexes and medicinal compositions |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 19941012 |