CZ296428B6 - Krystalická alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[1-(2-karboxy-3-(N2-methansulfonyllysylamino)propyl)-1-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu, gamma- a hydratovanádelta-forma téze slouceniny, jejich pouzití, zpusoby a meziprodukty pro jejich výrobu a farmaceutick - Google Patents

Abstract

Krystalická alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[1-(2-karboxy-3-(N.sup.2.n.-methansulfonyllysylamino)propyl)-1-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I, gamma- a hydratovaná delta-forma téze slouceniny, jejich pouzití jako lécivo, pro výrobu léciv a pro lécení choroby závislé na inhibici enzymu konvertujícího angiotenzin a/nebo neutrální endopeptidázy E.C.3.4.24.11. závislé na zinku, zpusoby a meziprodukty pro jejich výroby a farmaceutické prostredky na jejich bázi.

Description

JUDr. Jan Matějka, Národní 32, Praha 1, 11000 (54) Název vynálezu:

Krystalická alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[1(2-karboxy-3-(N2methansulfonyllysylamino)propyl)-1 cyklopentylkarbonyljtyrosinu, gamma- a hydratovaná delta-forma téže sloučeniny, jejich použití, způsoby a meziprodukty pro jejich výrobu a farmaceutické prostředky na jejich bázi (57) Anotace:

Krystalická alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-1 cyklopentylkarbonyljtyrosinu vzorce I, gamma- a hydratovaná delta-forma téže sloučeniny, jejich použití jako léčivo, pro výrobu léčiv a pro léčení choroby závislé na inhibici enzymu konveitujícího angiotenzin a/nebo neutrální endopeptidázy E.C.3.4.24.11. závislé na zinku, způsoby a meziprodukty pro jejich výroby a farmaceutické prostředky na jejich bázi.

CD m

CN

CD

CN

N

O yHSOjCHj

Krystalická alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu, gamma- a hydratovaná delta-forma téže sloučeniny, jejich použití, způsoby a meziprodukty pro jejich výrobu a farmaceutické prostředky na jejich bázi

Oblast techniky

Vynález se týká krystalické alfa-polymorfní formy (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methan10 sulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I

která je dále označována názvem „alfa-forma“ sloučeniny vzorce I. Dále se vynález týká gamma- a hydratované delta-formy téže sloučeniny, použití výše uvedených forem, způsobů a meziproduktů pro jejich výrobu a farmaceutických prostředků na jejich bázi.

Dosavadní stav techniky

Amorfní forma (dále označovaná názvem „beta-forma“) sloučeniny vzorce I byla popsána v pří20 kladu 181 evropské patentové přihlášky EP-A-0 358 398. Tato sloučenina je silným inhibitorem neutrální endopeptidázy závislé na zinku [E.C.3.4.24.11] a je proto schopna zesilovat biologické účinky atriálního natriuretického faktoru. Díky tomu je tato sloučenina natriuretickým, antihypertenzním a diuretickým činidlem, které je užitečné pro léčení různých kardiovaskulárních chorob. Tato sloučenina je také silným inhibitorem enzymu konvertujícího angiotenzin, což je další 25 enzym, který se podílí na regulaci krevního tlaku. Tato sloučenina vykazuje tedy dvojí farmakologický účinek tím, že je schopna inhibovat dva klíčové enzymy, které se podílejí regulaci krevního tlaku. Může být tedy užitečná při léčbě různých forem hypertenze a s ní spojených kardiovaskulárních poruch, jako je městnavé srdeční selhání aglaukom.

Beta-formu je možno získat takovými způsoby, jako je lyofilizace roztoku sloučeniny vzorce I, rychlé odpaření rozpouštědla z takového roztoku nebo vysrážení z takového roztoku přídavkem špatného rozpouštědla. Beta-forma nemá ostrou teplotu tání, nýbrž obvykle „měkne“ při teplotě asi 160 °C.

Zjistilo se však, že beta-forma má určité vlastnosti, které ji nečiní zvláště vhodnou pro zpracování na farmaceutické prostředky. Má zejména hygroskopickou povahu, nízkou sypnou hmotnost a špatnou sypkost. Při zpracovatelských pokusech za použití beta-formy se projevily problémy při výrobě tablet ze směsí s jejím obsahem.

Úkolem tohoto vynálezu je vyvinout formu sloučeniny vzorce I, kterou by bylo možno efektivně zpracovávat na stabilní a účinné lékové prostředky.

-1 CZ 296428 B6

Podstata vynálezu

Výše uvedený problém byl vyřešen na základě překvapujícího zjištění, že je možno připravit sloučeninu vzorce I v alfa-formě, která je nehygroskopická, krystalická a která má ve srovnání s beta-formou vyšší sypnou hmotnost a lepší sypkost. Tato alfa-forma se obzvláště hodí pro použití ve farmaceutických prostředcích vhodných jako léčiva.

Předmětem vynálezu je tedy krystalické alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3(N²-methansulfonylly sy laminojpropy 1)~ 1 -cyklopentylkarbonyljtyrosinu vzorce I

která vykazuje vnujolové suspenzi infračervené spektrum obsahující absorpční pásy při ný = 3407, 3386, 3223, 3153, 1698, 1652, 1626, 1594, 1516, 1457 (nujol), 1377 (nujol), 1344, 1334, 1317, 1267, 1241, 1228, 1210, 1164, 1151, 1137, 1118, 1109, 1093, 1074, 1045, 1019, 1003, 981, 965,911, 897, 862, 818, 800, 778, 762, 721 a 655 cm’¹.

Tato forma, tj. alfa-forma, vykazuje dále práškový rentgenový difrakční obrazec získaný za použití měděného záření přefiltrovaného grafitovým monochromátorem (lambda = 0,15405 nm) obsahující hlavní píky při 7,5, 8,9, 9,9, 11,6, 15,6, 17,2, 17,5, 18,0, 20,2, 22,1 a 23,3 stupně 2 théta.

Tato alfa-forma vykazuje dále při diferenciální kalorimetrii DSC ostrý endotherm v teplotním rozmezí 248 až 259 °C a teplotu rozkladu nad 260 °C při rychlosti snímání 20 °C/min.

Alfa-forma vykazuje obvykle ostrou teplotu tání v teplotním rozmezí 242 až 252 °C, přestože u ní byly zaznamenány i nižší rozmezí teploty tání.

Také byly získány jiné formy sloučeniny vzorce I (dále označované názvem gamma- a deltaforma). I tyto formy jsou součástí předmětu vynálezu, poněvadž jich lze použít jako meziproduktů pro výrobu alfa-formy.

Předmětem vynálezu je tedy také polymorfhí gamma-forma sloučeniny vzorce I, která vykazuje v nujolové suspenzi infračervené spektrum obsahující absorpční pásy při ný - 3377, 3240, 1665, 1639, 1594, 1527, 1518, 1494, 1457 (nujol), 1443, 1377 (nujol), 1344, 1321, 1304, 1254, 1195, 1178, 1162, 1143, 1111, 1098, 1046, 1031, 1012, 972, 962, 945, 932, 907, 879, 849, 815, 806, 780, 753, 729 a 658 cm¹.

Tato gamma-forma vykazuje dále práškový rentgenový difrakční obrazec získaný za použití měděného záření přefiltrovaného grafitovým monochromátorem (lambda = 0,15405 nm) obsahující hlavní píky při 9,0, 9,6, 10,6, 11,6, 12,7, 13,3, 14,6, 16,2, 17,9, 18,8, 20,2 a 21,8 stupně 2 théta.

Tato gamma-forma vykazuje dále při diferenciální kalorimetrii DSC ostrý endotherm v teplotním rozmezí 176 až 186 °C, exotherm při asi 207 °C, slabý endotherm při asi 213 °C a teplotu rozkladu nad 250 °C při rychlosti snímání 20 °C/min.

-2CZ 296428 B6

Gamma-forma vykazuje obvykle ostrou teplotu tání v teplotním rozmezí 170 až 185 °C.

Předmětem vynálezu je tedy také hydratovaná delta-forma sloučeniny vzorce I, jejíž obsah vody stanovený Karl-Fischerovou analýzou je 1 až 7 %, přednostně 2 až 4 % hmotnostní, která vykazuje v nujolové suspenzi infračervené spektrum obsahující absorpční pásy při ný = 3667, 3425, 3380, 3287, 3137, 3098, 1709, 1673, 1637, 1619, 1596, 1568, 1556, 1516, 1458 (nujol), 1448, 1419, 1390, 1378 (nujol), 1356, 1338, 1300, 1270, 1249, 1229, 1198, 1174, 1141, 1108, 1091, 1075, 1064, 1045, 1033, 1019, 1001, 985, 962, 941, 909, 889, 877, 841, 822, 807, 763, 744, 732, 721 a 655 cm*¹.

Tato delta-forma vykazuje dále práškový rentgenový difrakční obrazec získaný za použití měděného záření přefiltrovaného grafitovým monochromátorem (lambda = 0,15405 nm) obsahující hlavní píky při 10,5, 10,8, 12,3, 14,5, 17,2, 17,6, 17,9, 18,9, 20,4, 21,5, 22,4, 23,0, 23,1, 24,7, 27,1 27,8 a 28,9 stupně 2 théta.

Tato delta-forma vykazuje dále při diferenciální kalorimetrii DSC ostrý endothermpři teplotě asi 162 °C a v teplotním rozmezí od asi 166 do asi 168 °C a teplotu rozkladu nad 200 °C při rychlosti snímání 20 °C/min.

Delta-forma vykazuje obvykle ostrou teplotu tání v teplotním rozmezí 165 až 175 °C.

Přestože gamma- a delta-forma sloučeniny vzorce I vykazuje stejné farmakologické účinnosti jako alfa- a beta-forma, nejsou vhodné pro účely zpracování na farmaceutické prostředky tak, jako alfa-forma.

Alfa-formu sloučeniny vzorce I je možno vyrobit následujícími způsoby:

1) Alfa-formu je možno vyrobit katalytickou hydrogenací vodného roztoku sodné, draselné, amonné nebo alkylamoniové (kde alkyl obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku) soli sloučeniny vzorce II

za použití vhodného katalyzátoru pro odstranění benzyloxykarbonylové chránící skupiny, například palladia na uhlíku, po které následuje okyselení vzniklé soli sloučeniny vzorce I s bází na pH 3 až 5, přednostně asi pH 4 při 35 až 45 °C za vzniku alfa-formy. Přednostně se používá dvojsodné soli sloučeniny vzorce II. Další vhodné katalyzátory pro odstranění benzyloxykarbonylové chránící skupiny jsou dobře známy odborníkům v tomto oboru a jsou například uvedeny v publikaci T. W. Greene a P. G. Wuts, „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. vydání, 1991. Tato citace je zde uvedena náhradou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

Při obvyklém provedení tohoto způsobu se postupuje tak, že se roztok sloučeniny vzorce II ve vhodném organickém rozpouštědle, například ethylacetátu, třepe s vodným roztokem hydroxidu sodného, aby vznikla dvojsodná sůl sloučeniny vzorce II. Vodný roztok obsahující tuto dvojsodnou sůl se potom oddělí a hydrogenuje za přítomnosti 5% palladia na uhlíku, jako katalyzátoru, při tlaku asi 414 kPa a teplotě místnosti, aby se odštěpila benzyloxykarbonylová skupina. Potom se katalyzátor odfiltruje a hodnota pH filtrátu se pomocí vhodné kyseliny, jako je například vod

-3CZ 296428 B6 ná kyselina chlorovodíková, nastaví na asi 4. Z roztoku se vysráží alfa-forma, kterou lze oddělit filtrací.

Sloučeninu vzorce lije možno připravit způsobem znázorněným ve schématu 1.

Schéma 1

(VI) (V)

(VOD

-4CZ 296428 B6

I I

ΟΧ)

(XI) sloučenina vzorce I

Při obvyklém provedení tohoto způsobu se terč-butylakry lát vzorce IH nechá reagovat a paraformaldehydem za přítomnosti 3-chinuklidinolu za vzniku terc.butylhydroxymethakrylátu vzorce IV. Na tuto sloučeninu se nejprve působí thionylchloridem za přítomnosti triethylaminu 5 a pyridinu a vzniklý odpovídající chlormethylakrylát se potom nechá reagovat s (S,S)-alfa,alfa'dimethyldibenzylaminem za vzniku akrylátu vzorce V. Tento akrylát se převede na sloučeninu vzorce IX způsobem popsaným v Tet. Lett., 1993, 34(8), 1323 až 1326. Sloučenina vzorce IX se potom kondenzuje s derivátem lysinu vzorce X podobným způsobem, jako je způsob popsaný v EP-A-0358398, přičemž vznikne sloučenina vzorce XI. Tato sloučenina se potom převede na ío sloučeninu vzorce II působením roztoku kyseliny trifluoroctové a anisolu vdichlormethanu.

2) Alfa-formu je možno vyrobit z delta-formy mícháním roztoku delta-formy ve vodě nebo ve vodném roztoku vhodného organického rozpouštědla, jako je například alkanol s 1 až 4 atomy uhlíku, jako methanol nebo izopropylalkohol, nebo alkanon se 3 až 6 atomy uhlíku, jako aceton.

-5CZ 296428 B6

Přitom se obvykle delta-forma rozpustí ve směsi vody a methanolu v poměru 1 : 5 nebo vody a acetonu v poměru 1 : 10 a vzniklý roztok se několik dnů míchá při teplotě místnosti. Alfaforma, která se z roztoku vysráží se může oddělit filtrací.

3) Alfa-formu je možno vyrobit z gamma-formy mícháním roztoku gamma-formy ve vodě nebo ve vodném roztoku vhodného organického rozpouštědla, jako je například alkanol s 1 až 4 atomy uhlíku, jako methanol nebo izopropylalkohol, nebo alkanon se 3 až 6 atomy uhlíku, jako aceton.

Přitom se obvykle gamma-forma rozpustí ve směsi vody a methanolu v poměru 1:1a vzniklý roztok se asi 17 hodin míchá při teplotě místnosti. Alfa-forma, která se z roztoku vysráží se může oddělit filtrací.

4) Alfa-formu je možno vyrobit z beta-formy podobným způsobem, jaký byl uveden při způsobu 3).

5) Alfa-formu je možno vyrobit odštěpením chránících skupin, přednostně za kyselých podmínek, ze sloučeniny obecného vzorce XII nhso₂cii₃

(XII) kde P¹, P², P³ a P⁴ představuje vždy vhodnou chránící skupinu, kterou lze odštěpit, přednostně za kyselých podmínek, přičemž se po úpravě pH na hodnotu 3 až 5, přednostně asi 4, při zpracování reakční směsi získá alfa-forma.

Vhodné chránící skupiny pro tento účel a vhodné podmínky jejich odštěpování jsou dobře známé odborníkům v tomto oboru a jsou například uvedeny v publikaci T. W. Greene a P. G. Wuts, „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. vydání, Wiley Interscience. P¹ přednostně představuje formylskupinu nebo benzyloxykarbonylskupinu a P², P³ a P⁴ přednostně představuje vždy terc.butylskupinu.

Pokud P¹ představuje formylskupinu nebo benzyloxykarbonylskupinu a P², P³ a P⁴ představuje vždy terc.butylskupinu, obvykle se postupuje tak, že se roztok sloučeniny vzorce XII vevhodném rozpouštědle, například 1,4-dioxanu nebo ethylacetátu, nechá reagovat s vhodnou kyselinou, například chlorovodíkem, aby se odštěpily chránicí skupiny, přičemž po úpravě pH na asi 4 během zpracování reakční směsi se získá požadovaná alfa-forma.

Meziprodukty vzorce XII je možno vyrobit konvenčními technologiemi. Sloučenina vzorce XII, kde P¹ představuje benzyloxykarbonylskupinu a P², P³ a P⁴ představuje vždy terc.butylskupinu odpovídá sloučenině vzorce XI ve schématu 1, jejíž syntéza je dále popsána ve způsobu 1). Sloučenina vzorce XII, kde P¹ představuje formylskupinu a P², P³ a P⁴ představuje vždy terc.butylskupinu se může vyrobit tak, že se nejprve ve sloučenině vzorce XI odštěpí benzyloxykarbonylskupina hydrogenolýzou za použití vhodného katalyzátoru, například palladia na uhlíku, a potom se vzniklý amin formyluje, například za použití směsného anhydridu kyseliny mravenčí a octové.

-6CZ 296428 B6

6) Alfa-formu je také možno vyrobit odštěpením chránící skupiny, přednostně za kyselých podmínek, ze sloučeniny obecného vzorce XIII

(XIII) kde P⁵ představuje vhodnou chránící skupinu, kterou lze odštěpit, přednostně za kyselých podmínek, přičemž se po úpravě pH na hodnotu 3 až 5, přednostně asi 4, při zpracování reakční směsi získá alfa-forma.

Vhodné chránící skupiny pro tento účel a vhodné podmínky jejich odštěpování jsou dobře známé odborníkům v tomto oboru a jsou například uvedeny v publikaci T. W. Greene a P. G. Wuts, „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. vydání, Wiley Interscience. P⁵ přednostně představuje formylskupinu a jako další příklady P⁵ je možno uvést benzyloxykarbonylskupinu a terč.butoxykarbonylskupinu.

Pokud P⁶ představuje formylskupinu, obvykle se postupuje tak, že se roztok sloučeniny vzorce XIII ve vhodném rozpouštědle, například 1,4-dioxanu, nechá reagovat s vodným roztokem vhodné kyseliny, například kyseliny chlorovodíkové, aby se odštěpila chránící skupina, přičemž po úpravě pH na asi 4 během zpracování reakční směsi se získá požadovaná alfa-forma.

Meziprodukty vzorce XIII je možno vyrobit konvenčními technologiemi, jako je selektivní deprotekce sloučeniny vzorce XII, při níž se odstraní pouze chránící skupiny P², P³ a P⁴. Když například P¹ představuje formylskupinu a P², P³ a P⁴ představuje vždy terc.butylskupinu, mohou se chránící terc.butylové skupiny selektivně odštěpit působením kyseliny trifluoroctové ve vhodném rozpouštědle, například dichlormethanu, na sloučeninu vzorce XII.

Beta-, gamma- a delta-formu, kterých se používá jako meziproduktů pro výrobu alfa-formy, je možno vyrobit následujícími způsoby:

i) Beta-formu je možno vyrobit katalytickou hydrogenací roztoku sloučeniny vzorce II ve vhodném rozpouštědle za použití vhodného katalyzátoru pro odstranění chránící skupiny, například palladia na uhlíku.

Při obvyklém provedení se postupuje tak, že se roztok sloučeniny vzorce II ve vodném ethanolu hydrogenuje za přítomnosti palladia na uhlíku, jako katalyzátoru, při tlaku asi 414 kPa a teplotě místnosti. Potom se katalyzátor odfiltruje a filtrát se buď zkoncentruje za sníženého tlaku za vzniku pěny, která se rozmíchá v alkanolu se 3 až 6 atomy uhlíku, například acetonu, nebo se filtrát lyofilizuje za vzniku beta-formy, kterou lze odfiltrovat. Při tomto postupu příležitostně vznikne také alfa-forma, pokud se použije alkanonu se 3 až 6 atomy uhlíku.

ii) Delta-formu je možno vyrobit katalytickou hydrogenací roztoku sloučeniny vzorce II ve směsi vhodného rozpouštědla, které je nemísitelné s vodou, například ethylacetátu, a vody a za přítomnosti vhodného katalyzátoru pro odstranění chránící skupiny, například palladia na uhlíku. Po odstranění katalyzátoru se oddělí vodná vrstva a produkt se z této vrstvy vysráží alkanolem s 1 až 4 atomy uhlíku, například methanolem. Při obvyklém provedení tohoto postupu se k roztoku sloučeniny vzorce II v ethylacetátu přidá voda a směs se hydrogenuje za tlaku asi 414 kPa a při teplotě místnosti za přítomnosti palladia na uhlíku, jako katalyzátoru. Potom se katalyzátor odfiltruje, z filtrátu se oddělí vodná fáze a tato vodná fáze se zkoncentruje za sníženého tlaku na malý objem, načež se vzniklý zbytek nalije do methanolu. Delta-formu, která ze vzniklého roztoku vykrystaluje, je možno odfiltrovat. Při tomto postupu se také příležitostně získá alfa-forma.

iii) Beta-formu je možno vyrobit zmrazením vodného roztoku delta-formy a následující lyofilizací vzniklé tuhé hmoty.

iv) Gamma-formu je možno vyrobit mícháním delta-formy s n-propanolem nebo acetonitrilem. Při obvyklém provedení tohoto postupu se vzniklá směs míchá asi 24 hodin při teplotě místnosti a vzniklá gamma-forma se odfiltruje.

v) Gamma-formu je možno vyrobit mícháním suspenze beta-formy v acetonitrilu nebo n-propanolu obvykle po dobu asi 5 dnů při teplotě místnosti. Vzniklá gamma-forma se odfiltruje.

vi) Gamma-formu je možno vyrobit působením alkanonu se 3 až 6 atomy uhlíku, například acetonu na vodný roztok delta-formy. Při obvyklém provedení tohoto postupu se vodný roztok delta-formy nalije do intenzivně míchaného objemového nadbytku acetonu o teplotě místnosti. Gamma-formu, která se z roztoku vysráží, je možno odfiltrovat. Při tomto postupu také příležitostně vzniká alfa-forma.

vii) Beta-formu je možno vyrobit lyofílizací koncentrovaného vodného roztoku alfa-formy. Při typickém provedení tohoto postupu se vyrobí koncentrovaný roztok alfa-formy v horké vodě, vzniklý roztok se přefiltruje, aby se odstranily případné nerozpuštěné složky, ochladí, zmrazí a nakonec lyofilizuje za vzniku beta-formy.

Jak již bylo uvedeno výše, alfa-forma je silným inhibitorem neutrální endopeptidázy (E.C.3.4.24.11). Tento enzym se podílí na rozkladu řady peptidových hormonů a peptidových autokoidních látek, zejména na rozkladu atriálního natriuretického faktoru (ANF). Alfa-forma může prostřednictvím prevence degradace ANF působením neutrální endopeptidázy (E.C.3.4.24.11) potenciovat biologické účinky ANF a je proto diuretickým, natriuretickýma antihypertenzním činidlem použitelným při léčení řady chorob, jako je hypertenze, srdeční selhání, angína, renální insuficience, chronické renální selhání, premenstruační syndrom, cyklikální edém, Mennieresova choroba, hyperaldosteronismus (primární a sekundární) a hyperkalciurie. Díky schopnosti potenciovat účinky ANF může být alfa-forma kromě toho užitečná také při léčení glaukomu. Dále může být alfa-forma díky svým schopnostem inhibovat neutrální endopeptidázu (E.C.3.4.24.11) užitečná při léčení astma, zánětů, bolesti, epilepsie, afektivních poruch, demence, geriatrické konfuse, obezity, gastrointestinálních chorob (zejména diarrhoey a syndromu podráždění střev) a hyperreninaemie, jakož i při modulaci sekrece žaludeční kyseliny.

Účinnost proti neutrální endopeptidáze (E.C.3.4.24.11) je možno zjistit za použití postupu založeného na zkoušce popsané vBarclay, P. L. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 1989, 164, 58 až 65. Tato metoda zahrnuje stanovení koncentrace sloučeniny, které je zapotřebí pro snížení rychlosti uvolňování radioizotopem značené kyseliny hippurové z hippuryl-L-fenylalanyl-Largininu působením neutrálního endopeptidázového přípravku z krysích ledvin o 50 %.

Jak již bylo uvedeno výše, je alfa-forma také inhibitorem enzymu způsobujícího konverzi angiotenzinu (ACE). Jako taková je také užitečná při léčení různých chorob, o nichž je známo, že jsou užitečné ovlivňovány inhibitory ACE, jako je například hypotenze nebo městnavé srdeční selhání. Podobně mohou sloužit k omezení ischemického poškození myokardu, ochraně ledvin před poškozením hyperfiltrací, prevenci nebo reverzi hypertrofie levého ventrikula, zlepšení paměti, regulace kognitivních funkcí, pro léčení demence a zabránění reokluzi po koronární angioplastice nebo operaci by-pass koronární artérie. Účinnost proti tomuto enzymu je možno zjistit za použití postupu, který je založen na modifikaci zkoušky popsané v Rohrbach, M. S., Anal. Biochem, 1978, 84, 272. Tato metoda zahrnuje stanovení koncentrace sloučeniny, které je zapotřebí pro

-8CZ 296428 B6 snížení rozsahu uvolňování radioizotopem značené kyseliny hippurové z hippuryl-L-histidyl-Lleucinu působením enzymu konvertujícího angiotenzin izolovaného zkrysích ledvin o 50 %.

Inhibiční účinnost je také možno měřit in vivo po intravenózní injekci anestetizovaným krysám za použití způsobů popsaných v I. L. Natoff et al., Joumal of Pharmacological Methods, 1981, 5, 305 a D. M. Gross et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1981, 216, 552. Při této zkoušce se stanovuje dávka inhibitoru, které je zapotřebí pro snížení odpovědi presoru vyvolané intravenózní injekcí angiotenzinu I (50ng bolus) o 50 %.

Účinnost alfa-formy, jako diuretického činidla, se může stanovit změřením její schopnosti zvýšit vylučování moči a sodíkových iontů u AV-blokovaných psů při vědomí za použití metod popsaných v Alabaster C. T. et al., Brit. J. Pharmacol., 1989, 98, 823P.

Antihypertenzní účinnost alfa-formy je možno vyhodnotit měřením poklesu krevního tlaku po jejím orálním nebo intravenózním podání spontánně hypertenzivním krysám, které byly zbaveny soli předběžným podáním diuretika; renálně hypertenzivním psům zbaveným soli nebo hypertenzivním krysám ošetřeným kombinací desoxykortikosteronacetátu (DOCA) asoli.

Pro podávání živočichům za účelem léčení hypertenze, městnavého srdečního selhání nebo renální insufícience přicházejí v úvahu denní orální dávky alfa-formy v rozmezí 1 až 500 mg. V případě léčení humánních pacientů přichází pro průměrného dospělého pacienta v úvahu přednostně denní dávka 5 až 200 mg. Pro typického dospělého humánního pacienta jsou tedy vhodné jednotlivé tablety nebo kapsle obsahující 1 až 200 mg sloučeniny ve vhodném farmaceuticky přijatelném ředidle nebo nosiči. Takové lékové formy se mohou podávat jednotlivě nebo po několika kusech, jednou nebo několikrát denně. Dávkování pro intravenózní podávání bude obvykle ležet v rozmezí od 0,01 do 50 mg, přednostně od 0,1 do 10 mg sloučeniny, vztaženo na jednu dávku, přičemž se bude přizpůsobovat podle potřeb. Skutečné dávkování v praxi stanoví vždy ošetřující lékař tak, aby bylo nejvhodnější pro konkrétního pacienta. Dávkování se bude měnit v závislosti na takových faktorech, jako je věk, hmotnost a odpověď konkrétního pacienta. Výše uvedené údaje vztahující se k dávkování mají výhradně povahu příkladů vhodných pro průměrné případy a samozřejmě se v praxi budou vyskytovat jednotlivé případy, při nichž bude účelnější používat vyššího nebo nižšího dávkování. Jakékoliv dávkování spadá do ro2sahu tohoto vynálezu.

Pro humánní aplikaci je možno alfa-formy používat samotné, ale obvykleji se bude podávat ve směsi s farmaceuticky vhodným ředidlem nebo nosičem, které bude v souladu se standardní farmaceutickou praxí zvoleno s ohledem na zamýšlenou cestu podávání. Pro orální podávání se například hodí tablety obsahující takové excipienty, jako je škrob nebo dibazický fosforečnan vápenatý, nebo kapsle nebo ovule obsahující účinnou látku buď samotnou, nebo její směs s excipienty. Pro orální podávání se také může použít elixírů nebo suspenzí obsahujících aromatizační činidla a barvicí činidla. Alfa-formu je také možno podávat parenterálně, například ve formě intravenózních, intramuskulámích nebo subkutánních injekcí. Pro parenterální podávání se nejlépe hodí sterilní vodné roztoky, které mohou obsahovat další látky, jako například dostatečné množství solí nebo glukózy pro izotonizaci roztoku vzhledem ke krvi.

Alfa-formu lze také podávat současně s jinými činidly, která jsou užitečná pro regulaci krevního tlaku, léčení srdečních chorob nebo renální insufícience. Tak například je možno ji podávat současně s kardiostimulanty, jako jsou například digitalis, alfa-blokátory, například doxazosin, betablokátory, blokátory vápníkového kanálu, například amiodipine, exogenním ANF, aktivátorem draslíkového kanálu nebo s jinými diuretiky na základě volby lékaře s ohledem na konkrétního pacienta a chorobný stav.

Pod označením „léčení“ se v kontextu tohoto popisu rozumí jak vlastní léčení, tak také profylaktické podávání.

Předmět vynálezu tedy zahrnuje také tyto další aspekty:

-9CZ 296428 B6

a) farmaceutický prostředek obsahující alfa-formu, gamma-formu nebo hydratovanou deltaformu sloučeniny vzorce I spolu s farmaceuticky vhodným ředidlem nebo nosičem;

b) alfa-formu, gamma-formu nebo hydratovanou delta-formu sloučeniny vzorce I nebo farmaceutický prostředek na jejich bázi pro použití jako léčivo;

c) použití alfa-formy, gamma-formy nebo hydratované delta-formy sloučeniny vzorce I nebo farmaceutického prostředku na jejich bázi pro výrobu léčiva pro léčení choroby závislé na inhibici enzymu konvertují čího angiotenzin a/nebo neutrální endopeptidázy E.C.3.4.24.11. závislé na zinku;

d) použití podle odstavce c), kde chorobou je kardiovaskulární choroba, jako je hypertenze, městnavé srdeční selhání, renální insuficience nebo glaukom;

e) alfa-forma, gamma-forma nebo hydratovaná delta-forma sloučeniny vzorce I nebo farmaceutický prostředek na jejich bázi pro léčení choroby závislé na inhibici enzymu konvertujícího angiotenzin a/nebo neutrální endopeptidázy E.C.3.4.24.11. závislé na zinku u živočichů, včetně člověka;

f) stejný aspekt jako e), kde chorobou je choroba uvedená v odstavci d);

g) sodná, draselná a amonná nebo alkylamoniová (s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu) sůl sloučeniny vzorce Π;

h) gamma-forma sloučeniny vzorce I;

i) hydratovaná delta-forma sloučeniny vzorce I;

j) sloučenina obecného vzorce XII, v níž však P¹ nepředstavuje benzyloxykarbonylskupinu, pokud každý ze symbolů P², P³ a P⁴ představuje Zerc-butylskupinu;

k) sloučenina obecného vzorce XIII, v níž však P⁵ nepředstavuje benzyloxykarbonylskupinu.

Přehled obrázků na výkresech

Na obr. 1A je znázorněno infračervené spektrum alfa-formy sloučeniny vzorce I definované výše.

Na obr. 1B je znázorněno infračervené spektrum alfa-formy sloučeniny vzorce I definované výše.

Na obr. 2A je znázorněno infračervené spektrum beta-formy sloučeniny vzorce I definované výše.

Na obr. 2B je znázorněno infračervené spektrum beta-formy sloučeniny vzorce I definované výše.

Na obr. 3 A je znázorněno infračervené spektrum gamma-formy sloučeniny vzorce I definované výše.

Na obr. 3B je znázorněno infračervené spektrum gamma-formy sloučeniny vzorce I definované výše.

- 10CZ 296428 B6

Na obr. 4A je znázorněno infračervené spektrum delta-formy sloučeniny vzorce I definované výše.

Na obr. 4B je znázorněno infračervené spektrum delta-formy sloučeniny vzorce I definované výše.

Na obr. 5 je znázorněn rentgenový difrakční obrazec alfa-formy sloučeniny vzorce I definovaný výše.

Na obr. 6 je znázorněn rentgenový difrakční obrazec beta-formy sloučeniny vzorce I definované výše.

Na obr. 7 je znázorněn rentgenový difrakční obrazec gamma-formy sloučeniny vzorce I definované výše.

Na obr. 8 je znázorněn rentgenový difrakční obrazec delta-formy sloučeniny vzorce I definované výše.

Na obr. 9 je znázorněn thermogram alfa-formy sloučeniny vzorce I definované výše získané metodou DSC.

Na obr. 10 je znázorněn thermogram beta-formy sloučeniny vzorce I definované výše získaný metodou DSC.

Na obr. lije znázorněn thermogram gamma-formy sloučeniny vzorce I definované výše získaný metodou DSC.

Na obr. 12 je znázorněn thermogram delta-formy sloučeniny vzorce I definované výše získaný metodou DSC.

Na obr. 13 je znázorněn graf závislosti síly, kterou působí vrchní lisovadlo na počtu tablet pro placebové směsi Avicel^(R)/DCP.

Na obr. 14 je znázorněn graf závislosti síly, kterou působí vrchní lisovadlo na počtu tablet pro směsi obsahující alfa-nebo beta-formu.

Na obr. 15 je znázorněn graf závislosti vyhazovači síly (kN) na počtu tablet u směsí obsahujících alfa- nebo beta-formu.

Na obr. 16 je znázorněn graf závislosti střední procentické změny hmotnosti alfa- nebo betaformy v závislosti na čase při 40 °C a různých hodnotách relativní vlhkosti (RH).

Na obr. 17 je znázorněn graf závislosti sorpce vlhkosti alfa-formy nebo beta-formy při 40 °C na čase při expozici zvyšující se relativní vlhkosti (RH).

Způsob výroby alfa-formy je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.

-11 CZ 296428 B6

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 (S,S,S)-N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, alfa-forma

Roztok (S,S,S)-[l-(3-(N⁶-benzyloxykarbonyl-N²-methansulfonyllysylamino)-2-karboxypropyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu v ethylacetátu (1190 ml) (dávka roztoku získaného způsobem popsaným v preparativním postupu 9 obsahující 219 g výchozí látky) se třepe s roztokem hydroxidu sodného (23,1 g) ve vodě (503 ml). Vodná fáze se oddělí a 5 hodin hydrogenuje za tlaku 414 kPa při teplotě místnosti za přítomnosti 5% palladia na uhlíku (20 g), jako katalyzátoru. Poté se katalyzátor odfiltruje a pH filtrátu se 5N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové nastaví na 4, přičemž vysráží se bílá pevná látka. Po 18-hodinové granulaci při teplotě místnosti se odfiltruje pevný produkt, který se promyje vodou a vysuší. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě bílé pevné látky (124,4 g) o teplotě tání 248 až 250 °C.

Analýza pro C26H40N4O9S:

vypočteno: C 53,41, H 6,90, N 9,58 nalezeno: C 53,47, H 7,25, N 9,50 %.

Příklad 2 (S,S,S)-N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, alfa-forma

Roztok hydrátu (S,S,S)-N-[ l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyljtyrosinu (delta-forma, viz preparativní postup 2) (3,0 g) ve směsi vody a methanolu v poměru 1:5 (18 ml) nebo směsi vody a acetonu v poměru 1 : 10 (33 ml) se míchá 3 dny při teplotě místnosti. Získaná pevná látka se shromáždí filtrací a vysuší. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 246 až 248 °C (v případě použití vodného methanolu) nebo o teplotě tání 242 až 243 °C (v případě použití vodného acetonu).

Příklad 3 (S,S,S)-N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, alfa-forma (S,S,S)-N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, gamma-forma (viz preparativní postupy, 4, 5, 7 a 8) (0,5 g) se rozpustí ve vodě (4 ml) a k roztoku se přidá methanol (4 ml). Získaný roztok se míchá 17 hodin při teplotě místnosti. Vznikne bílá pevná látka, která se shromáždí filtrací a vysuší, čímž se získá sloučenina uvedená v nadpisu (0,43 g) o teplotě tání 250 až 252 °C.

-12CZ 296428 B6

Příklad 4 (S,S,S)-N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, alfa-forma (S, S, S)-N-[ 1 ~(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)- 1 -cyklopentylkarbonyl] tyrosin, beta-forma (viz preparativní postupy 1, 3 a 6) (0,5 g) se rozpustí ve vodě (4 ml) a k roztoku se přidá methanol (4 ml). Získaný roztok se míchá 17 hodin při teplotě místnosti. Vznikne bílá pevná látka, která se shromáždí filtrací a vysuší, čímž se získá sloučenina uvedená v nadpisu (0,43 g) o teplotě tání 249 až 251 °C.

Příklad 5 (S ,S, S)-N-[ 1 -(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propy 1)-1 -cyklopentylkarbonyl] tyrosin, alfa-forma

K. roztoku sloučeniny z preparativního postupu 12 (2,50 g, 3,20 mmol) v 1,4-dioxanu (20 ml) se přidá roztok 1,4-dioxanu (20 ml) nasycený plynným chlorovodíkem. Po 30 minutách se ze zpočátku čirého roztoku vyloučí olej, který se míchá 24 hodin při teplotě místnosti. Po přídavku vody (20 ml) se získá čirý roztok, který se míchá 60 hodin při teplotě místnosti a za sníženého tlaku odpaří. Olejovitý zbytek se rozpustí ve vodě, vodný roztok se zalkalizuje vodným roztokem hydroxidu sodného na pH 4 a za sníženého tlaku se z něj odpaří rozpouštědlo. Zbytek se nechá granulovat za použití methanolu a vzniklá špinavě bílá pevná látka se shromáždí filtrací a resuspenduje ve vodě (4 ml). Suspenze se nechá stát přes noc, pevná látka se odfiltruje a vysuší. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu (0,97 g) o teplotě tání 225 až 230 °C. IR a PXRD analýzy potvrdí, že produkt má požadovanou alfa-formu.

Příklad 6 (S,S,S)-N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, alfa-forma

K roztoku sloučeniny z preparativního postupu 13 (1,78 g) v 1,4-dioxanu (18 ml) se přidá 4M vodná kyselina chlorovodíková (18 ml). Čirý žlutý roztok se míchá 60 hodin při teplotě místnosti a poté dalších 18 hodin při 35 °C. Po odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku se získá 5,42 g látky. 4,22 g této látky se rozpustí ve vodě (10 ml). Získaný roztok se zalkalizuje vodným roztokem hydroxidu sodného na pH 4,0 a zaočkuje sloučeninou z příkladu 1. Vzniklá směs se míchá 18 hodin při teplotě místnosti. Získaný čirý roztok se za sníženého tlaku zkoncentruje na objem asi 10 ml, zředí methanolem (15 ml) a nechá granulovat 48 hodin. Vytvořená pevná látka se shromáždí filtrací a vysuší. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu (1,25 g) o teplotě tání 232 až 235 °C. IR a PXRD analýzy potvrdí, že produkt má požadovanou alfa-formu.

Příklad 7 (S, S, S)-N-[ 1 -(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysy lamino)propyl)-1 -cyklopentylkarbonyl] tyrosin, alfa-forma

K chlazenému (10 °C) roztoku terc.butyl-(S,S,S)-N-[l-(3-(N⁶-benzyloxykarbonyl-N²-methansulfonyllysylamino)-2-(terc.butoxykarbonyl)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]-O⁴-terc.butyltyrosinátu (13,3 g, 15,0 mmol) v ethylacetátu (27 ml) se přidá 5,1M roztok chlorovodíku vethylacetátu (70 ml) (357 mmol chlorovodíku). Po 30 minutách se z původně čirého roztoku vyloučí dehet. Získaná směs se míchá 18 hodin při teplotě místnosti. Od dehtu se dekantuje čirý roztok

- 13CZ 296428 B6 a dehet se trituruje s ethylacetátem (75 ml) za vzniku lepivé pevné látky. Tento postup dekantace a triturace se pětkrát opakuje. Vyrobená hygroskopická pevná látka se rozpustí ve vodě (12 ml). Vzniklý vodný roztok se promyje dvakrát ethylacetátem, zalkalizuje vodným hydroxidem sodným na pH 4,0 a zaočkuje sloučeninou z příkladu 1. Tato směs se míchá 42 hodin při 45 až 50 °C. Filtrací se shromáždí špinavě bílá pevná látka, která se promyje vodou a acetonem a vysuší. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu (1,95 g) o teplotě tání 237 až 238 °C. IR a PXRD analýzy potvrdí, že produkt má požadovanou alfa-formu.

Následující preparativní postupy ilustrují přípravu některých intermediámích sloučenin, jichž bylo použito při syntéze alfa-formy.

Preparativní postup 1 (S,S,S)-N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, beta-forma

Roztok (S,S,S)-N-[ 1—(3—(N⁶-benzyloxykarbonyl-N²-methansulfonyllysylamino)-2-karboxypropyl)-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu (viz preparativní postup 9) (371 g) ve směsi ethanolu a vody v poměru 9 : 1 (2,225 litru) se 4 hodiny hydrogenuje za tlaku 414 kPa při teplotě místnosti za přítomnosti 10% palladia na uhlíku (37,0 g), jako katalyzátoru. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se odpaří. Získá se surový produkt ve formě pěny. Tato látka se míchá 24 hodin s acetonem (3,13 litru), čímž se získá sloučenina uvedená v nadpisu (283 g) ve formě amorfní pevné látka.

Analýza pro C26H40N4O9S:

vypočteno: C 53,41, H 6,90, N 9,58 nalezeno: C 52,97, H 7,02, N 8,97 %.

Preparativní postup 2

Hydrát (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyljtyrosinu (delta-forma)

Roztok (S,S,S)-N-[l-(3-(N⁶-benzyloxykarbonyl-N²-methansulfonyllysylamino)-2-karboxypropyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu (viz preparativní postup 9) (351 g) v ethylacetátu (1300 ml) se přidá k vodě (385 ml). Dvoufázová směs se 20 hodin hydrogenuje za tlaku 414 kPa při teplotě místnosti za přítomnosti 5% palladia na uhlíku (35 g), jako katalyzátoru. Katalyzátor se odfiltruje, vodná fáze se oddělí a za sníženého tlaku zkoncentruje na malý objem. Viskózní roztok se nalije do methanolu (2,85 litru) a vzniklá směs se míchá 18 hodin při teplotě místnosti. Během této doby se pomalu vysráží pevná látka, která se nechá 2 hodiny granulovat při 5 až 10 °C, odfiltruje, promyje methanolem a vysuší. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě bílé pevné látky (178,1 g) o teplotě tání 168 až 171 °C.

Analýza pro C26H40N4O9S . _ChiH₂O (kde chí = 1):

vypočteno: C 51,81, H 7,02, N 9,30 nalezeno: C 51,37, H 7,47, N 9,06 %

Obsah vody = 3,6 % hmotnostního stanoveno Karl-Fischerovou analýzou (při hodnotě chí = 1 je teoretický obsah vody 3,0 % hmotnostního).

-14CZ 296428 B6

Preparativní postup 3 (S,S,S)-N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, beta-forma

Hydrát (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyljtyrosinu (delta-forma, viz preparativní postup 2) (20,0 g) se při teplotě místnosti rozpustí ve vodě (250 ml). Vzniklý čirý roztok se zmrazí v lázni z pevného oxidu uhličitého a acetonu. Vzniklá pevná látka se lyofílizuje, čímž se získá sloučenina uvedená v nadpisu (19,0 g) ve formě bílé pevné látky. Tato látka se pomalu rozkládá při teplotě v rozmezí 155 až 170 °C.

Preparativní postup 4 (S, S ,S)-N-[ 1 -(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)- 1 -cyklopentylkarbonyl] tyrosin, gamma-forma

Hydrát (S, S, S)-N-[ 1 -(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-1 -cyklopentylkarbonyl]tyrosinu (delta-forma, viz preparativní postup 2) (1,0 g) se 24 hodin při teplotě místnosti míchá bud’ v n-propanolu, nebo v acetonitrilu (10 ml). V obou případech se filtrací oddělí bílá pevná látka, která se vysuší. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu o teplotě tání 172 až 176 °C.

Preparativní postup 5 (S, S ,S)-N-[ 1 -(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-1 -cyklopentylkarbonyl] tyrosin, gamma-forma

Hydrát (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosmu (delta-forma, viz preparativní postup 2) (847,0 g) se rozpustí ve vodě (762 ml) a vodný roztok se zředí acetonem (1,0 litru). Vzniklý roztok se při teplotě místnosti pomalu přidá k intenzivně míchanému acetonu (18,05 litru) a vysráží se bílá pevná látka. Směs se míchá 18 hodin při teplotě místnosti, pevná látka se shromáždí filtrací, promyje acetonem a vysuší. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě bílé pevné látky (775 g) o teplotě tání 179 až 181 °C.

Analýza pro C26H40N4O9S:

vypočteno: C 53,41, H 6,90, N 9,58, S 5,48 nalezeno: C 53,42, H 6,88, N 9,37, S 5,49 %

Preparativní postup 6 (5.5.5) -N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, beta-forma (5.5.5) -N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, alfa forma (viz příklady 1 až 4) (4,0 g) se přidá k vodě (200 ml). Vzniklá směs se míchá 30 minut při 90 až 95 °C. Nerozpustná látka se odfiltruje, filtrát se zředí další vodou (50 ml) a ochladí na teplotu místnosti. Filtrací se odstraní mírný zákal a čirý filtrát se zmrazí za použití lázně z pevného oxidu uhličitého a acetonu. Připravená pevná látka se lyofílizuje, čímž se získá sloučenina uvedená v nadpisu ve formě bílé pevné látky (3,0 g). Tato látka se pomalu rozkládá při teplotě v rozmezí 155 až 165 °C.

- 15CZ 296428 B6

Preparativní postup 7 (S,S,S)-N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, gamma-forma (5.5.5) -N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, beta-forma (viz preparativní postupy 1, 3 a 6) (0,3 g) se suspenduje v acetonitrilu (15 ml). Tato suspenze se míchá 5 dní. Vytvořená bílá pevná látka se shromáždí filtrací a vysuší za sníženého tlaku. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu (0,26 g).

Preparativní postup 8 (5.5.5) -N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylammo)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, gamma-forma (5.5.5) -N-[l-(2-Karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosin, beta-forma (viz preparativní postupy 1, 3 a 6) (0,3 g) se suspenduje vn-propanolu (10 ml). Tato suspenze se míchá 5 dní. Vytvořená bílá pevná látka se shromáždí filtrací a vysuší za sníženého tlaku. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu (0,26 g) o teplotě tání 175 až 180 °C

Preparativní postup 9 (5.5.5) -N-[l-(3-(N⁶-benzyloxykarbonyl-N²-methansulfonyllysylamino)-2-karboxypropyl)-lcyklopentylkarbonyljtyrosin

Terc.butyl-(S,S,S)-N-[l-(3-(N⁶-benzyloxykarbonyl-N²-methansulfonyllysylamino)-2-(terc.butoxykarbonyl)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]-O⁴-terc.butyltyrosinát (404 g) se rozpustí v dichlormethanu (810 ml). K roztoku se v jedné dávce přidá anisol (769 g) a poté během asi 10 minut přikape trifluoroctová kyselina (1,158 kg). Po dokončení přídavku se reakční směs míchá 6 hodin při 35 °C a poté přes noc při teplotě místnosti, načež se k ní přidá voda (1000 ml). Vytvoří se tři vrstvy. Vrchní a spodní vrstva se spojí a rozpustí v ethylacetátu (2 litry) a vzniklý roztok se promyje roztokem chloridu sodného. Organická fáze se smísí s roztokem chloridu sodného, pH směsi se nastaví na 3 a nechají se oddělit vrstvy. Vzniknou tři vrstvy. Organické fáze se oddělí, vyjmou do ethylacetátu a extrahují nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (1,6 litru) a roztokem chloridu sodného (0,5 litru). Spojené vodné vrstvy se promyjí ethylacetátem, poté okyselí a extrahují ethylacetátem. Získá se ethylacetátový roztok (1,54 litru) sloučeniny uvedené v nadpisu. Tohoto roztoku se buď použije přímo (například viz příklad 1), nebo se z něj odstraní rozpouštědlo, čímž se získá sloučenina uvedená v nadpisu.

Preparativní postup 10 (S)-N⁶-Benzyloxykarbonyl-N²-methansulfonyllysin (S)-N⁶-Benzyloxykarbonyllysin (1,5 kg) se suspenduje v methylenchloridu (7,5 litru). Ke vzniklé suspenzi se během 10 minut přidá chlortrimethylsilan (1,36 litru). Získaná směs se 30 minut zahřívá ke zpětnému toku, připravený roztok se ochladí na 3 °C a přidá se k němu současně diizopropylethylamin (1,87 litru) a methansulfonylchlorid (435 ml) takovou rychlostí, aby se teplota udržela pod 25 °C. Reakční směs se míchá další 2,5 hodiny a poté nalije do 2M vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové. Vrstvy se oddělí a methylenchloridová fáze se promyje 2M vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové a potom vodou a za sníženého tlaku se odpaří rozpouštědlo, které se nahradí n-butylacetátem. Získaný roztok se ochladí, vyloučená krystalická látka se shromáždí filtrací, promyje n-butylacetátem a vysuší za sníženého tlaku. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu (1,63 kg) o teplotě tání 83,5 až 84 °C.

[a]²⁵ _D = -13,4° (c = 1, methanol)

- 16CZ 296428 B6

Analýza pro C_I5H₂₂N₂O₆S:

vypočteno: C 50,27, H 6,19, N 7,82 % nalezeno: C 50,23, H 6,40, N 7,76 %

Ή NMR (300 MHz, d₆-DMSO): δ 1,23 - 1,78 (6H, m), 2,85 (3H, s), 2,98 (2H, q), 3,80 (1H, dt), 5,00 (2H, s), 7,25 (1H, t), 7,30 - 7,43 (5H, m), 7,51 (1H, d) ppm.

Preparativní postup 11

7erc-butyl-(S,S,S)-N-[l-(2-terc.butoxykarbonyl-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-lcyklopentylkarbonyl]-O⁴-terc-butyltyrosinát

K roztoku terc.butyl-(S,S,S)-N-[ l-(3-(N⁶-benzyloxykarbonyl-N²-methansulfonyllysylamino)2-(terc ,butoxykarbonyl)propyl)-1 -cyklopentylkarbonyl]-O⁴-/erc-butyltyrosinátu (48,64 g,

54.8 mmol) v průmyslovém lihu denaturovaném methanolem (1,0 litru) se přidá 5% palladium na uhlí (5 g) (zvlhčené vodou) a vzniklá směs se 19 hodin hydrogenuje při teplotě místnosti a tlaku 345 až 414 kPa. Katalyzátor se odstraní filtrací a získaný roztok se zkoncentruje za sníženého tlaku za vzniku sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvého oleje (46,56 g), který obsahuje ethanol.

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 1,27 (9H, s), 1,41 (9H, s), 1,44 (9H, s), 1,45 - 1,62 (1H, br m),

1.8 - 2,0 5(4H, br m), 2,21 (2H, m), 2,72 (2H, T), 2,79 (3H, br), 2,96 (3H, s), 3,1 (2H, m), 3,59 (1H, m), 3,96 (1H, t), 4,73 (1H, m), 6,43 (1H, dt), 6,89 (2H, dt), 7,09 (2H, dt), 7,51 (1H, dt) ppm.

Preparativní postup 12

Terc-butyl-(S,S,S)-N-[l-(2-terc.butoxykarbonyl-3-(N⁶-forrnyl-N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-1 -cyklopentylkarbonyl]-O⁴-/erc-butyltyrosinát

K chlazenému (0 °C) roztoku směsného anhydridu kyseliny mravenčí a kyseliny octové v kyselině octové (který se vyrobí tak, že se smísí 45,3 ml acetanhydridu s 22,8 ml kyseliny mravenčí, vzniklý roztok se 15 minut zahřívá na 50 až 60 °C a ochladí na 0 °C) se během 10 minut při 0 °C přidá roztok sloučeniny z preparativního postupu 11 (27,3 g, 36,3 mmol) v kyselině mravenčí (33,7 ml). Roztok se nechá ohřát, míchá 45 minut při teplotě místnosti a rozloží ledem. Vodná směs se neutralizuje vodným roztokem hydroxidu sodného a extrahuje dichlormethanem (2 x). Spojené organické vrstvy se promyjí dvakrát roztokem chloridu sodného a odpaří za sníženého tlaku. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě žluté pěny (28,0 g).

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 1,26 (9H, s), 1,41 (18H, s), 1,45 - 2,03 (16 H, br), 2,23 (2H, br m), 2,97 (3H, s), 3,08 (2H, m), 3,28 (2H, m), 3,51 (1H, m), 3,98 (1H, brm), 4,73 (1H, q), 5,57 (1H, br dt), 5,91 (1H, br), 6,32 (1H, dt), 6,90 (2H, dt), 7,08 (2H, dt), 7,29 (1H, br), 8,17 (1H, s) ppm.

Preparativní postup 13 (S,S,S)-N-[l-(2-Karboxy-3-(N⁶-formyl-N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyljtyrosin

K chlazenému (0 °C) roztoku sloučeniny z preparativního postupu 12 (2,71 g, 3,46 mmol) v dichlormethanu (4,8 ml) se přidá trifluoroctová kyselina (4,8 ml). Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá 24 hodin. Poté se směs zkoncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá sloučenina uvedená v nadpisu ve formě pevné látky (2,4 g) o teplotě tání 56 až 60 °C.

- 17CZ 296428 B6 'H NMR (300 MHz, d₆-DMSO): δ 1,2 - 1,6 (14, br m), 1,71-1,86 (3H, m), 1,86 - 1,99 (1H, m), 2,28 - 2,41 (1H, m), 2,78 (3H, s), 2,8 - 3,09 (4H, m), 3,12 - 3,25 (2H, m), 3,7 (1H, m), 4,35 (1H, m), 6,6 (2H, dt), 6,98 (2H, dt), 7,25 (1H, dt), 7,50 (1H, dt), 7,91 (2H, m), 7,97 (1H, s) ppm.

Charakterizace alfa-, beta-, gamma- a delta-formy analýzou IR, PXRD a DSC a stanovením teploty tání

a) Infračervená spektroskopie (IR) io Infračervená spektra různých forem se stanoví v nujolové suspenzi za použití spektrometru Nicolet 800 FT-IR. Hodnoty vlnočtu (cm^-1) absorpčních pásů všech forem jsou uvedeny v tabulce 1.

Tabulka 1

a-forma	β-forma
3407*
3386’	3384
3223
3153
	1708
1699
1652*
	1638
1626
	1615
1594	1595
	1533
1516	1516
1457 (nujol)	1458 (nujol)
	1396
1377 (nujol)	1378 (nujol)
1344
1334
1317	1313
1267
1241	1245
1228
1210

γ-forma	δ-forma
	3667’ 3425*
3377	3380
3240	3287 3137 3098 1709 1673*
1665’
1639	1637 1619
1594	1596 1568 1556
1527
1518	1516
1494*
1457 (nujol)	1458 (nujol)
1443	1448 1419 1390
1377 (nujol)	1378 (nujol) 1356
1344
	1338
1321
1304	1300 1270
1254
	1249 1229

-18CZ 296428 B6

a-forma	β-forma	γ-forma	δ-forma
		1195	1198
	1172	1178	1174
1164		1162
1151*	1144	1143	1141
1137
1118		1111
1109	1106		1108
1093		1098	1091
1074			1075
			1064
1045		1046	1045
		1031	1033
1019		1012	1019
1003			1001
981	980	972	985
965		962	962
		945	941
		932
911		907	909
897*	889		889
		879	877
862	830	849	841
			822
818		815
800	808	806	807
		780
778
762		753	763
			744
	737		732
721	721	729	721
	665
655	I	658	655

Tímto symbolem jsou označeny pásy, které jsou považovány za nej významnější s ohledem na rozlišení různých forem.

Reprezentativní infračervená spektra různých forem jsou znázorněna na obr. ΙΑ, 1B,2A, 2B, 3 A, 3B, 4A a 4B. Na obr. IA je znázorněno infračervené spektrum alfa-formy sloučeniny vzorce I definované výše v nujolové suspenzi na disku z chloridu sodného za použití vzduchu, jako referenční látky (ný = 4000 až 400 cm“¹). Na obr. IB je znázorněno infračervené spektrum alfaformy sloučeniny vzorce I definované výše v nujolové suspenzi na disku z chloridu sodného za ío použití vzduchu, jako referenční látky (ný = 2000 až 400 cm“¹). Na obr. 2A je znázorněno infračervené spektrum beta-formy sloučeniny vzorce I definované výše v nujolové suspenzi na disku

-19CZ 296428 B6 z chloridu sodného za použití vzduchu, jako referenční látky (ný - 4000 až 400 cm“¹). Na obr. 2B je znázorněno infračervené spektrum beta-formy sloučeniny vzorce I definované výše vnujolové suspenzi na disku z chloridu sodného za použití vzduchu, jako referenční látky (ný = 2000 až 400 cm'¹). Na obr. 3A je znázorněno infračervené spektrum gamma-formy sloučeniny vzorce I definované výše v nujolové suspenzi na disku z chloridu sodného za použití vzduchu, jako referenční látky (ný = 4000 až 400 cm'¹). Na obr. 3B je znázorněno infračervené spektrum gammaformy sloučeniny vzorce I definované výše v nujolové suspenzi na disku z chloridu sodného za použití vzduchu, jako referenční látky (ný = 2000 až 400 cm“¹). Na obr. 4A je znázorněno infračervené spektrum delta-formy sloučeniny vzorce I definované výše v nujolové suspenzi na disku z chloridu sodného za použití vzduchu, jako referenční látky (ný = 4000 až 400 cm“¹). Na obr. 4B je znázorněno infračervené spektrum delta-formy sloučeniny vzorce I definované výše v nujolové suspenzi na disku z chloridu sodného za použití vzduchu, jako referenční látky (ný - 2000 až 400 cm'¹).

b) Práškový rentgenový difrakční obrazec (PXRD)

Práškové rentgenové difrakční obrazce různých forem se získají za použití difraktometru Siemens D500, který se provozuje při napětí 40 kV a proudové intenzitě 30 mA. V tomto difřaktometru se používá měděného záření filtrovaného grafitovým monochromátorem (lambda = 0,15405 nm) a scintilačního počítače, jako detektoru. U každé formy se zaznamená intenzita svazku, jakožto funkce úhlu 2 théta v rozsahu 2 théta 2° až 45° za použití stupňovitého snímání, šestisekundového počítání a stupňovitých intervalů 2 théta 0,03°. U každé formy jsou hlavní píky (stupně 2 théta) pozorované v obrazcích uvedeny v tabulce 2.

Tabulka 2

! a-forma (ostré píky)	β-forma	γ-forma (ostré píky)	δ-forma (ostré píky)
7.5
8,9
9,9	Široké	9.0, 9,6
	píky se	10,6	10,5, 10,8
11,6	středy při	11,6
	12,7	12,3
	11 a 20	13,3
		14.6	14,5
15,6		16,2
17,2, 17,5		17,9	17,2, 17,6,
			17,9
18,0		18,8	18,9
20,2		20,2	20,4
		21,8	21,5
22,1			22,4
23,3			23,0, 23,1 24,7 27,1, 27,8
			28,9

Reprezentativní rentgenové práškové difrakční obrazce různých forem jsou znázorněny na obr. 5 až 8.

-20CZ 296428 B6

c) Diferenciální kalorimetrie DSC

Vzorky (asi 5 mg) různých forem se analyzují za použití tepelného analyzátoru Perkin-Elmer 7 Series při rychlosti snímání 20 °C/min. Naměřené výsledky jsou pro různé formy souhrnně 5 uvedeny v tabulce 3.

Tabulka 3

Forma	Charakteristika analýzy DSC
alfa	ostrý endotherm v rozmezí 248 až 259‘C rozklad nad 260’C
beta	široký endotherm v rozmezí 60 až 130 °c slabý endotherm při asi 147’C rozklad nad 200 *C
gamma	ostrý endotherm v rozmezí 176 až 186*C ostrý exotherm při asi 207’C slabý endotherm při asi 213 *C rozklad nad 250C
delta	slabé endothermy při asi 162 a asi 166 až 168’C rozklad nad 200C

Reprezentativní DSC thermogramy různých forem jsou znázorněny na obr. 9 až 12.

Termogram alfa-formy na obr. 9 vykazuje tyto parametry:

endotermický pík max.	254 °C
XI	235,200 °C
X2	264,000 °C
pík	253,744 °C
plocha	719,520 mJ
delta H	144,279 J/g
výška	34,639 mW

Termogram beta-formy na obr. 10 vykazuje tyto parametry:

endotermické píky max.

XI

X2 pík plocha °C, 149 °C rozklad nad 200 °C

50,2660 °C

141,466 °C

89,593 °C

508,465 mJ

-21 CZ 296428 B6 delta H výška

95,919 J/g

3,698 mW

Termogram gamma-formy na obr. 11 vykazuje tyto parametry:

endotermické píky max. exotermický pík max. TI

T2 pík plocha delta H výška asi 63 °C, 185 °C, 277 °C

207 °C

154.800 °C

195.800 °C

184,959 °C

275,822 mJ

52,921 J/g

10,147 mW

Termogram delta-formy na obr. 12 vykazuje tyto parametry:

endotermické píky max. XI	asi 65 °C, asi 135 °C, 162 °C, 168 °C 162,533 °C
X2	181,600 °C
pík plocha delta H	167,550 °C 7,366 mJ 1,474 J/g
výška	3,665 mW

d) Teplota tání ío Teploty tání různých forem se stanoví mikroskopicky za použití zařízení Wettler FP5/FP52 při rychlosti zahřívání 2 °C/min. Typická rozmezí teploty tání různých forem jsou uvedena v tabulce 4.

Tabulka 4

Forma	Ostrá teplota tání v teplotním rozmezí (*C)
alfa	242 až 252
gamma	170 až 185
delta	165 až 175

Srovnávací studie

Alfa-forma se porovnání s beta-formou pokud se týče zpracovatelnosti a hygroskopičnosti.

a) Studie zpracovatelnosti

Tabletovací stroj vybavený měřicími přístroji (Manesty Machines Limited, Model F3) se odpovídajícím způsobem kalibruje na sílu a posun vrchního lisovadla.

-22CZ 296428 B6

Při kalibraci v tomto stroji zpracovává jako placebo směs Ávicelu^(R) a dibazického fosforečnanu vápenatého (DCP) za použití 13mm lisovadel s plochými lícními plochami, za účelem zjištění reprodukovatelnosti této technologie. Za použití alikvotní části této směsi se stroj vhodně nastaví 5 tak, aby se dosáhlo cílové hmotnosti lisované tablety (400 mg) a dostatečné tvrdosti. Odděleně se naváží 20 jednotkových alikvotních částí a ty se umístí do botky stroje. Stroj se nechá v provozu tak dlouho, dokud se směs v botce nevyčerpá a dokud stroj vyrábí tablety. Na obr. 13 je znázorněn graf závislosti síly, kterou působí vrchní lisovadlo, na počtu tablet pro tři placebové směsi Avicel^(R)/DCP (20 jednotek každá). V tabulce 5 je uvedena střední hmotnost a tvrdost deseti nejío těžších tablet (předpokládá se, že se jedná o prvních desítku vyrobených tablet). Z dat uvedených na obr. 13 je zřejmé, že celý postup za použití této směsi je dobře reprodukovatelný. Snížení síly, kterou působí vrchní lisovadlo, jež je pozorována na konci pokusu, je možno vysvětlit sníženým množstvím směsi v botce a v důsledku toho špatným plněním lisovnice.

Tabulka 5

Střední hmotnost a tvrdost tablet vyrobených za použití placebové směsi Aviceí^R)/DCP

Pokus 1 1	| Střední | hmotnost 1 (mg) I	Směrodatná | odchylka | 1 |	| Střední | tvrdost 1 (kPa)	Směrodatná odchylka
i i 1	1 | 394,3	1 7,82 |	i | 16,0	1,68
2 I	| 389,6	9,20 |	ί 14,6	2,04
3 I	| 393,3	6,93 |	15,1	1,22

Po provedení pokusu s placebem za účelem zjištění reprodukovatelnosti této technologie se odděleně vyrobí směsi obsahující alfa-formu nebo beta-formu podle následujícího předpisu: alfanebo beta-forma (100 mg), předželatinovaný škrob (40 mg), dibazický fosforečnan vápenatý (bezvodý) (256 mg) a stearan hořečnatý (2 mg). Směs pro zpracování ve stroji (20 g) se vyrobí postupem zahrnujícím míšení, protlačení sítem a další míšení. Použije se hmotnosti tablet

1 00 mg, poněvadž dřívější zkušenosti ukázaly, že čím vyšší je plnění lisovnice, tím více potíží se za provozu vyskytuje. Parametry stroje se přizpůsobí zpracovávané směsi a potom se z každé konkrétní směsi vyrobí jedna souvislá dávka 50 tablet.

Optimalizace provozu stroje je obtížnější za použití směsi obsahující beta-formu, poněvadž tato 30 forma má špatné sypné vlastnosti. Přestože se pečlivě nastaví proměnné hodnoty procesu, není možno dosáhnout stejné síly horního lisovadla u obou směsí a v důsledku toho se směs obsahující beta-formu lisuje na tablety s vyšší tvrdostí. Hodnoty síly vrchního lisovadla při zpracování obou směsí jsou uvedeny na obr. 14. Velká variabilita síly, kterou působí vrchní lisovadlo (a hmotnosti tablety), v případě směsi obsahující beta-formu, je spojena s nerovnoměrným plněním lisovnice 35 touto směsí. Data uvedená v tabulce 6 potvrzují, že zpracování prostředku obsahujícího betaformu je mnohem obtížnější a dochází při něm k větší variabilitě provozních parametrů, než když se použije prostředku obsahujícího alfa-formu.

-23CZ 296428 B6

Tabulka 6

Variabilita provozních parametrů při zpracování směsí obsahujících alfa- nebo beta-formu

Směs obsahující

Vzorek	alfa-formu	beta-formu
Střední hodnota síly, kterou působí vrchní lisovadlo (kN)	18,0	23,3
Směrodatná odchylka	1,85	7,07
střední hmotnost tablety (mg)	398	446
Směrodatná odchylka	17,6	48,7
Střední tvrdost tablety (kP)	5,0	18,5
Směrodatná ochylka	1,15	4,69

Naměřené hodnoty vyhazovači síly u posledních deseti tablet z každé směsi jsou uvedeny na obr. 15. Tablety zhotovené ze směsi obsahující beta-formu vyžadují pro odstranění zlisovnice mnohem větší sílu. Tento efekt se projevuje tím, že jsou tablety vyhozeny z lisovnice botkou.

Získaná data ukazují, že beta-forma vykazuje horší zpracovatelné vlastnosti ve srovnání s alfaformou. Beta-forma má podobu „chmýří“ s nízkou sypnou hmotností (0,09 g/ml) ve srovnání se sypnou hmotností alfa-formy (0,36 g/ml) a špatné sypné vlastnosti. Při tabletování směsí obsahujících beta-formu vykazují získané tablety značné rozdíly v hmotnosti a pro jejich vyhazování z tabletovacího stroje je zapotřebí velké síly. Alfa-forma vykazuje ve všech ohledech lepší vlastnosti a je proto obzvláště vhodná pro výrobu farmaceutických prostředků.

b) Studie hygroskopicity

i) Hygroskopicita alfa- a beta-formy se stanovuje dále uvedeným postupem gravimetrické analýzy.

Vzorky alfa- a beta-formy se odděleně umístí do Kilnerových nádob (Kilner je ochranná známka) za následujících podmínek: 40 °C; 40 °C a relativní vlhkost 70 %; a 40 °C a relativní vlhkost 95 %. Příjem vody u každého vzorku se stanovuje gravimetricky po předem určitých časových intervalech. Každé měření se třikrát reprodukuje.

U vzorku beta-formy uskladněných po dobu jednoho dne při teplotě 40 °C a relativní vlhkosti 75 % nebo při teplotě 40 °C a relativní vlhkosti 95 % dochází k morfologické změně. Vzorky beta-formy uskladněné jeden den při teplotě 40 °C a relativní vlhkosti 95 % vykazují malý hmotnostní úbytek (předpokládá se, že tento jev je způsoben tím, že nejprve dojde k hmotnostnímu nárůstu díky absorpci vody a poté k morfologické změně, jejímž důsledkem je ztráta vlhkosti), zatímco vzorky uskladněné při 40 °C a relativní vlhkosti 75 % nabudou v průměru o 6 % své původní hmotnosti.

-24CZ 296428 B6

Na obr. 16 jsou uvedeny výsledky získané při této gravimetrické analýze. Zjistilo se, že alfaforma není hygroskopická, zatímco beta-forma je velmi hygroskopická při 40 °C a relativní vlhkosti 75 %.

ii) Pokusy se stanovením vlhkosti za použití mikrovah na alfa- a beta-formě potvrzují, že alfaforma není hygroskopická, zatímco beta-forma je vysoce hygroskopická. Vzorky alfa- a betaformy se odděleně umístí do zařízení při 40 °C a před tím, než se příslušný vzorek vystaví působení zvyšující se relativní vlhkosti, se nechá vzorek ekvilibrovat s okolím. Ekvilibrační perioda se také zařazuje před každé zvýšení relativní vlhkosti. Naměřené výsledky jsou znázorněny na ío obr. 17. Tyto výsledky ukazují, že beta-forma v průběhu pokusu nabude až o 8 % hmotnostních vody (procenta jsou vztažena původní hmotnost vzorku).

Také se studuje morfologická změna, které beta-forma podléhá při vysokých hodnotách relativní vlhkosti. Přitom se pozoruje přechod od prášku s velmi nízkou sypnou hmotností na sklovitou 15 pevnou látku o vysoké hustotě.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (26)

1. Krystalická alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I která vykazuje v nujolové suspenzi infračervené spektrum obsahující absorpční pásy při ný = 3407, 3386, 3223, 3153, 1698, 1652, 1626, 1594, 1516, 1457 (nujol), 1377 (nujol), 1344, 1334, 1317, 1267, 1241, 1228, 1210, 1164, 1151, 1137, 1118, 1109, 1093, 1074, 1045, 1019, 1003, 981, 965, 911, 897, 862, 818, 800, 778, 762, 721 a 655 cm“¹.

2. Krystalická alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 1, která vykazuje dále práškový rentgenový difrakční obrazec získaný za použití měděného záření přefiltrovaného grafitovým monochromátorem (lambda = 0,15405 nm) obsahující hlavní píky při 7,5; 8,9; 9,9; 11,6;

35 15,6; 17,2; 17,5; 18,0; 20,2; 22,1 a 23,3 stupně 2 théta.

3. Gamma-polymorfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I uvedeného v nároku 1, která vykazuje v nujolové suspenzi infračervené spektrum obsahující absorpční pásy při ný = 3377, 3240, 1665, 1639,

40 1594, 1527, 1518, 1494, 1457 (nujol), 1443, 1377 (nujol), 1344, 1321, 1304, 1254, 1195, 1178,

1162, 1143, 1111, 1098, 1046, 1031, 1012, 972, 962, 945, 932, 907, 879, 849, 815, 806, 780, 753, 729 a 658 cm“¹.

-25CZ 296428 B6

4. Gamma-polymorfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 3, která vykazuje dále práškový rentgenový difrakční obrazec získaný za použití měděného záření přefiltrovaného grafitovým monochromátorem (lambda = 0,15405 nm) obsahující hlavní píky při 9,0; 9,6; 10,6; 11,6; 12,7; 13,3; 14,6; 16,2; 17,9; 18,8; 20,2 a 21,8 stupně 2 théta.

5. Hydratovaná delta-forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I uvedeného v nároku 1, jejíž obsah vody stanovený Karl-Fischerovou analýzou je 1 až 7 % hmotnostních, která vykazuje v nujolové suspenzi infračervené spektrum obsahující absorpční pásy při ný = 3667, 3425, 3380, 3287, 3137, 3098, 1709, 1673, 1637, 1619, 1596, 1568, 1556, 1516, 1458 (nujol), 1448, 1419, 1390, 1378 (nujol), 1356, 1338, 1300, 1270, 1249, 1229, 1198, 1174, 1141, 1108, 1091, 1075, 1064, 1045, 1033, 1019, 1001, 985, 962, 941, 909, 889, 877, 841, 822, 807, 763, 744, 732, 721 a 655 cm'¹.

6. Hydratovaná delta-forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 5, která vykazuje dále práškový rentgenový difrakční obrazec získaný za použití měděného záření přefiltrovaného grafitovým monochromátorem (lambda = 0,15405 nm) obsahující hlavní píky při 10,5; 10,8; 12,3; 14,5; 17,2; 17,6; 17,9; 18,9; 20,4; 21,5; 22,4; 23,0; 23,1; 24,7; 27,1; 27,8 a 28,9 stupně 2 théta.

7. Hydratovaná delta-forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 5 nebo 6 obsahující 2 až 4 % hmotnostní vody podle Karl-Fischerovy analýzy.

8. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje krystalickou alfapolymorfní formu (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-lcyklopentylkarbonyljtyrosinu vzorce I podle nároku 1 nebo 2 nebo gamma-polymorfní formu (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylainino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 3 nebo 4 nebo hydratovanou delta-formu (S,S,S)-N-[l-(2karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároků 5, 6 nebo 7 a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

9. Farmaceutický prostředek podle nároku 8, vyznačující se tím, že obsahuje krystalickou alfa-polymorfní formu (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 1.

10. Krystalická alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 1 nebo 2, gamma-polymorfní forma (S,S,S)-N-[ 1 -(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-1 -cyklopentylkarbonyljtyrosinu vzorce I podle nároku 3 nebo 4 nebo hydratovaná delta-forma (S,S,S)-N[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároků 5, 6 nebo 7 pro použití jako léčivo.

11. Farmaceutický prostředek podle nároku 8 nebo 9 obsahující některou z látek uvedených v nároku 10 pro použití jako léčivo.

12. Krystalická alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 1 pro použití jako léčivo.

13. Použití krystalické alfa-polymorfní formy (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 1 nebo 2, gamma-polymorfní formy (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 3 nebo 4 nebo hydratované delta-formy (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopen

-26CZ 296428 B6 tylkarbonyljtyrosinu vzorce I podle nároků 5, 6 nebo 7 pro výrobu léčiva pro léčení choroby závislé na inhibici enzymu konvertujícího angiotenzin a/nebo neutrální endopeptidázy E.C.3.4.24.11. závislé na zinku.

5

14. Použití farmaceutického prostředku obsahujícího některou z látek uvedených v nároku 13 pro výrobu léčiva pro léčení choroby závislé na inhibici enzymu konvertujícího angiotenzin a/nebo neutrální endopeptidázy E.C.3.4.24.11. závislé na zinku.

15. Použití podle nároku 13 nebo 14, kde chorobou je kardiovaskulární choroba, jako je hyperío tenze, městnavé srdeční selhání, renální insuficience nebo glaukom.

16. Použití krystalické alfa-polymorfní formy (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčení choroby uvedené v nároku 13 nebo 15.

17. Použití farmaceutického prostředku obsahujícího sloučeninu uvedenou v nároku 16 pro výrobu léčiva pro léčení choroby uvedené v nároku 14 nebo 15.

18. Krystalická alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysyI20 amino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 1 nebo 2, gamma-poly- morfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyljtyrosinu vzorce I podle nároku 3 nebo 4 nebo hydratovaná delta-forma (S,S,S)-N[ 1 -(2-karboxy-3-(N²-methansul fonyllysylaminojpropy 1)-1 -cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároků 5, 6 nebo 7 pro použití při léčení choroby závislé na inhibici enzymu konver25 tujícího angiotenzin a/nebo neutrální endopeptidázy E.C.3.4.24.11. závislé na zinku u živočichů, včetně člověka.

19. Farmaceutický prostředek podle nároku 8 nebo 9 obsahující některou z látek uvedených v nároku 18 pro použití při léčení choroby uvedené v nároku 18.

20. Krystalická alfa-polymorfní forma (S,S,S)-N-[l-(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 1 nebo farmaceutický prostředek s jejím obsahem pro použití při léčení choroby závislé na inhibici enzymu konvertujícího angiotenzin a/nebo neutrální endopeptidázy E.C.3.4.24.11. závislé na zinku u živočichů,

35 včetně člověka.

21. Farmaceutický prostředek podle nároku 8 nebo 9 obsahující sloučeninu uvedenou v nároku 20 pro použití při léčení choroby uvedené v nároku 20.

40

22. Sodná, draselná, amoniová nebo alkylamoniová, kde alkyl obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, sůl sloučeniny vzorce II jako meziprodukt pro výrobu sloučenin obecného vzorce I podle nároku 1.

45

23. Sodná sůl sloučeniny vzorce II podle nároku 22, jako meziprodukt pro výrobu sloučenin obecného vzorce I podle nároku 1.

-27CZ 296428 B6 (XII),

24. Sloučenina obecného vzorce XII kde P¹, P², P³ a P⁴ představuje nezávisle vždy vhodnou chránící skupinu, kterou lze odštěpit, 5 přednostně za kyselých podmínek za vzniku krystalické alfa-polymorfní formy (S,S,S)-N-[1(2-karboxy-3-(N²-methansulfonyllysylamino)propyl)-l-cyklopentylkarbonyl]tyrosinu vzorce I podle nároku 1, přičemž však P¹ nepředstavuje benzyloxykarbonylskupinu, pokud každý ze symbolů P², P³ a P⁴ představuje terc.butylskupinu, jako meziprodukt pro výrobu sloučenin obecného vzorce I podle nároku 1.

25. Sloučenina podle nároku 24, kde P¹ představuje formylskupinu nebo benzyloxykarbonylskupinu, jako meziprodukt pro výrobu sloučenin obecného vzorce I podle nároku 1.

26. Sloučenina podle nároku 24 nebo 25, kde každý ze symbolů P², P³ a P⁴ představuje terc15 butylskupinu a P’ má význam uvedený v nároku 24 nebo 25, přičemž však nepředstavuje benzyloxykarbonylskupinu, jako meziprodukt pro výrobu sloučenin obecného vzorce I podle nároku 1.