CZ299718B6 - Styrylsulfonová sloucenina a farmaceutický prostredek ji obsahující - Google Patents

Styrylsulfonová sloucenina a farmaceutický prostredek ji obsahující Download PDF

Info

Publication number
CZ299718B6
CZ299718B6 CZ20001174A CZ20001174A CZ299718B6 CZ 299718 B6 CZ299718 B6 CZ 299718B6 CZ 20001174 A CZ20001174 A CZ 20001174A CZ 20001174 A CZ20001174 A CZ 20001174A CZ 299718 B6 CZ299718 B6 CZ 299718B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
compound
styrylsulfone
breast
pharmaceutical composition
group
Prior art date
Application number
CZ20001174A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20001174A3 (cs
Inventor
E. Reddy@Premkumar
M. V. Reddy@Ramana
Original Assignee
Temple University - Of The Commonwealth System Ofhigher Education
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Temple University - Of The Commonwealth System Ofhigher Education filed Critical Temple University - Of The Commonwealth System Ofhigher Education
Publication of CZ20001174A3 publication Critical patent/CZ20001174A3/cs
Publication of CZ299718B6 publication Critical patent/CZ299718B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/12—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/02—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C317/10—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/14—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Graft Or Block Polymers (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)

Abstract

Styrylsulfonová sloucenina obecného vzorce I, v nemž R.sub.1.n. a R.sub.2.n. znamenají nezávisle skupinu vybranou z atomu chloru, fluoru a bromu, a R.sub.3.n. znamená skupinu vybranou z atomu vodíku a atomu fluoru, R.sub.1.n. i R.sub.2.n. nemuže znamenat atom chloru, jestliže R.sub.3.n. znamená atom vodíku, a R.sub.1.n. nemuže znamenat atom chloru, jestliže R.sub.2.n. znamená atom fluoru a R.sub.3.n. znamená atom vodíku ve stejné sloucenine. Je popsán také farmaceutický prostredek, který obsahuje styrylsulfonovou slouceninu obecného vzorce II,III nebo IV, a použití pri lécení rakoviny nebo jiného proliferacního onemocnení.

Description

Oblast techniky
Tento vynález se týká styrylsulfonové sloučeniny a farmaceutického prostředku, který ji obsahuje.
Dosavadní stav techniky ' Extracelulámí signály docházející na transmembránové receptory jsou převáděny do buněk signálními transdukěními cestami (Pelech a spol.: Science, 1992, 257, 1335), které jsou zahrnuty v rozmanitých fysiologických procesech, jako je indukce přoliferace, diferenciace a apoptóza buněk (Davis a spol.: J. Biol. Chem. 1993, 268, 14553).' Kaskáda mitogenem aktivované proteinové kinasy (MAPK) je hlavním signálním systémem, kterým buňky transdukují extracelulámí pokyny na intracelulární odpovědi (Niskida a spol.: Trends Biochem, Sci. 1993,18, 128; Blumer a spol.: Trends Biochem. Sci. 1994,19, 236). Bylo objeveno, že mnohé stupně této kaskády jsou zachovány a jsou homologní pro MAP kinasy u různých druhů.
U savčích buněk jsou extracelulámím signálem regulované kinasy (ERK), ERK-1 a ERK-2, prototypovými a nejlépe studovanými členy skupiny MAPK, které všechny mají jedinečný znak, a to schopnost být aktivovány fosfory lácí na threoninovém a tyrosinovém zbytku duální specifickou kinasou proti směru řetězce (Posada a spol.: Science 1992, 255, 225; Biggs III a spol.: Proč.
Nati. Acad. Sci. USA, 1992, 89, 6295; Gamer a spol.: Genes Dev. 1992, 6, 1280).
Nedávné studie identifikovaly další podskupinu MAPK, známou jako c-Jun NH2-koncové kinasy 1 a 2 (JNK-1 a JNK-2), které mají různé substrátové specifičnosti a jsou regulovány různými stimuly (Hibi a spol.: Genes Dev. 1993, 7, 2135). JNK jsou členy skupiny stresem aktivo30 váných proteinových kinas (SPK). Bylo ukázáno, že JNK jsou aktivovány tak, že se na buňky nechá působit UF záření, pro-zánětlivé cytokiny a stres prostředí (Derijard a spol.: Cell 1994, 1025). Aktivovaná JNK se váže na aminový konec proteinu c-Jun a zvyšuje transkripční aktivitu tohoto proteinu fosforylací na ser63 a ser73 (Adler a spol.: Proč. Nati. Acad. Sci. USA 1992, 89, 5341; Kwok a spol.: Nátuře 1994, 370, 223).
Analýza odvozené primární sekvence JNK ukazuje, že jsou vzdáleně příbuzné s ERK (Davis: Trends Biochem. Sci. 1994, 19, 470). Jak ERK tak JNK jsou fosforylovány na Tyr a Thr jako odpověď ňa vnější stimuly vedoucí k jejich aktivaci (Davs: Trends Biochem. Sci. 1994,19, 470). Fosforylace (Thr a Tyr) míst, která hrají rozhodující roli v jejich aktivaci, jsou zachovány mezi
ERK a JNK (Davis: Trends Biochem. Sci. 1994, 19, 470). Tato místa fosforylace jsou však umístěna v různých duálních fosforylačních motivech: Thr-Pro-Tyr (JNK) a Thr-Glu-Tyr (ERK). Fosforylace MAPK a JNK vnějším signálem často zahrnuje aktivaci proteinových ty ros f nových kinas (PTK) (Gille a spol.: Nátuře 1992, 358, 414), což dává vznik velké skupině proteinů zahrnujících několik receptoru růstového faktoru a dalších molekul transdukujících signál.
Proteinové tyrosinové kinasy jsou enzymy, které katalyzují dobře definovanou chemickou reakci: fosforylací tyrosinového zbytku (Hunter a spol.: Annu Rev. Biochem.\9$5, 54, 898). Zvláště receptorové tyrosinové kinasy jsou přitažlivými cíli pro navrhování léčiva, protože blokátory substrátové domény těchto kinas vedou pravděpodobně k efektivnímu a selektivnímu antiproliferaě50 nímu činidlu. Potenciální použití blokátorů proteinové tyrosinové kinasy jako antiprolíferačních činidel bylo poznáno již v roce 1981, když byl jako PTK blokátor navržen quercetin (Graziani a spol.: Eur. J. Biochem. 1983, 135, 583 až 589).
Nejlépe pochopená MAPK cesta zahrnuje extracelulámím signálem regulované kinasy, které představují Ras/Raf/MEK/ERK kinasovou kaskádu (Boudewijn a spol.: Trends Biochem. Sci.
-1CZ 299718 B6
1995, 20, 18). Jakmile je tato cesta jednou různými stimuly aktivována, MAPK fosforyluje rozmanité proteiny zahrnující několik transkripčních faktorů, které se přenášejí do jádra a aktivují transkripci genu. Negativní regulace této cesty by mohly kaskádu těchto událostí uzavřít.
Co je potřeba, jsou nová protirakovinová chemoterapeutícká činidla s cílovými receptorovými tyrosinovými kinasami a uzavírající Ras/Raf/MEK/ERK kinasovou kaskádu. Onkoproteiny obecně, a signální transdukční proteiny zvláště, jsou pravděpodobně selektivnějšími cíly chemoterapie, protože představují část proteinů, jejichž aktivity jsou podstatné pro proliferaci buněk, protože tyto aktivity jsou u proliferačních onemocnění velice amplifíkovány.
Podstata vynálezu
Podle jednoho provedení tohoto vynálezu se získávají nové styiylsulfonové sloučeniny obecného 15 vzorce I
v němž
R, a R2 znamenají nezávisle skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z atomu chloru, fluoru a bromu, a
R3 znamená skupinu vybranou ze skupiny sestávající z atomu vodíku a atomu fluoru, oba Ri a R2 nemohou znamenat atom chloru, jestliže R3 znamená atom vodíku, a ii)
Ri nemůže znamenat atom chloru, jestliže R2 a znamená atom fluoru a R3 znamená atom vodíku ve stejné sloučenině.
’ Podle jiného provedení vynálezu se získává'farmaceutický prostředek, který obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič a styrylsulfonovou sloučeninu obecného vzorce II v němž
(II).
n znamená číslo nula nebo jedna,
Rt znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z atomu vodíku, chloru, fluoru a bromu,
-2CZ 299718 B6
R2 znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z atomu vodíku, chloru, fluoru a bromu, methylové skupiny a methoxy skupiny a
R3 znamená skupinu vybranou ze skupiny sestávající z atomu vodíku, atomu chloru a atomu fluoru,
R2 nemůže znamenat methylovou skupinu nebo methoxyskupinu, jestliže jak R( tak R3 znamená atom vodíku a n znamená číslo nula nebo jedna, a všechny Rb R2 a R3 nemohou znamenat atom vodíku, jestliže n znamená číslo jedna.
Podle výhodného provedení tento farmaceutický prostředek obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič a sloučeninu obecného vzorce II, v němž R3 znamená atom vodíku a Rj a R2 jsou nezávisle na sobě vybrány ze skupiny sestávající z atomu chloru, fluoru a bromu.
Podle jiného provedení tohoto vynálezu se získává farmaceutický prostředek, který obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič a styiylsulfonovou sloučeninu obecného vzorce III
v němž
Ri znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z atomu vodíku, chloru, fluoru a bromu.
Podle jiného provedení tohoto vynálezu se získává styrylsulfonová sloučenina obecného vzorce II nebo III pro použití při léčení rakoviny prsu nebo prostaty jedince, samostatně nebo spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem. Podle jiného provedení se získává styrylsulfonová sloučenina obecného vzorce III pro použití při inhibování růstu nádorových buněk prsu nebo prostaty jedince, který je zasažen rakovinou prsu nebo prostaty, samostatně nebo spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem. Dále se získává styrylsulfonová sloučenina obecného vzorce III pro použití při - indukování apoptózy nádorových buněk prsu nebo prostaty jedince, který je zasažen rakovinou prsu nebo prostaty, samostatně nebo spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.
Tento vynález se týká také farmaceutického prostředku a shora uvedených způsobů léčení, které obsahují styrylsulfonovou sloučeninu obecného vzorce IV
-3CZ 299718 B6 v němž
Ri znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z atomu fluoru a bromu a R2 je vybrána ze skupiny sestávající z 2-chlorfenylové skupiny, 4-chlorfenylové skupiny, 4-fluorfenylové skupiny a 2-nitrofenylové skupiny.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1A a IB jsou sloupcové grafy účinku £-2,4-difluorstyryl-4-fluorbenzylsulfonu(FRI-2), £-4-fluorstyryl-4-brombenzylsulfonu (FRI-6), £-4-bromstyiyM-fluorbenzylsulfonu (FRI-7), £-4-fluorstyiyM-chlorbenzylsulfonu (FRI-20) a £-4-chIorstyryM~chlorbenzylsulfonu (FRI22) na buňky NIH3T3, MCF7, BT-20 a LnCaP. Buňky byly ošetřeny těmito sloučeninami v koncentraci 2,5 μΜ (obr. 1A) nebo 5,0 μΜ (obr, IB). Životaschopnost buněk byla stanovena po 48 hodinách způsobem s trypanovou modří. Každý bod dat představuje průměr ze tří nezávislých pokusů. Standardní odchylka nepřesahuje 10 %.
Obrázek 2A je sloupcový graf inhibice buněk MCF7, BT20, LnCaP a NIH3T3 po ošetření FR1-20 v závislosti na koncentraci. Buňky byly ošetřeny 0,250nM, 500nM, ΙμΜ, 2,5μΜ a 5,0μΜ FRI-20 po dobu 48 hodin. Procento žijících buněk bylo stanoveno trypanovou modří. Je uvedena střední hodnota ze tří nezávislých pokusů.
Obrázek 2B je sloupcová graf životaschopnosti .buněk MCF7, BT20, LnCaP a NIH3T3 po ošetření FRl-20 v různých dobách. Všechny buňky byly ošetřeny 2,5μΜ FRI-20. Počet životaschopných buněk byl stanoven trypanovou modří po 12, 24,48 a 72 hodinách. Je uvedena střední hodnota ze tří nezávislých pokusů.
Obrázek 3 A je graf aktivity sloučeniny FRI-20 na normální buněčné linie NIH3T3, HeLa a HFL, linie nádorových buněk prsu MCF7 a 361 positivních na estrogenový receptor a na linie nádorových buněk prsu SKBR-3, 435 a BT-20 negativních na estrogenový receptor. Obr. 3B je podobný jako obr. 3A až na to, že ošetřené buňky obsahují buněčnou linii LnCaP prostaty závislou na androgenu a buněčné line DU-145 a PC-3 prostaty nezávislé na androgenu. Všechny buňky byly ošetřeny 2,5 a 5,0μΜ koncentracemi FRI-20 a testovány na životaschopnost buněk po 48 hodinách trypanovou modří. Je uvedena střední hodnota ze tří nezávislých pokusů. Odchylky nepřevyšují 10%.
Obrázek 4 zahrnuje série blotů analýzy buněčného cyklu buněk LnCaP ošetřených FRI-20 nebo kontrolních buněk. LnCaP buňky byly ošetřeny 120 ml DMSO (kontrolní buňky) nebo 2,5μΜ FRI-20 v 10 ml DMSO. Buňky byly isolovány . 6, 12, 24 a 48 hodin po ošetření, obarveny propidiumjodidem a podrobeny průtokové cytometrii.
40
Obr. 5 je SDS-PAGE autoradiograf účinku FRI-20 na aktivitu ERK/MAPK. Buňky LnCaP, MCF-7 a ΝΓΗ3Τ3, ošetřené FRI-20, spolu s buňkami ošetřenými DMSO (kontrola) byly podrobeny testu ERK/MAPK imunitní komplexní kinasy použitím myelinového bazického proteinu (MBP) jako substrátu. Aktivita ERK-2 vzhledem k MBP byla pak testována v přítomnosti 45 [y^PjATP. Fosforylovaný MBP byl oddělen na 12% (hmotn.) SDS-PAGE a zrviditelněn autoradiografií.
Obrázek 6 je blot distribuce ERK-2 a JNK/SAPK proteinů v buňkách NIH3T3, LnCaP a MCF-7. Na pás byly naneseny lysáty kultivovaných buněk obsahující 100 mg proteinů. Po elektroforese a přenosu na polyvinylidenovou membránu byly proteiny blotovány proti ERK-2 a JNK-2 polyklonálním protilátkám a zviditelněny chemiluminiscencí.
Obr. 7 je SDS-PAGE autoradiograf účinku FRI-20 na aktivitu JNK/SAPK. JNK byla imunoprecipitována ze 100 mg lysátu kultivovaných buněk JNK polyklonální protilátkou. Test imunitní
-4CZ 299718 B6 komplexní kinasy byl proveden s GST-c-Jun(l-79) jako substrátem. Fosforylované proteiny byly odděleny SDS-PAGE a zviditelněny autoradiografií. Pokus byl třikrát zopakován s podobnými výsledky.
V další Části spisu bude tento vynález popsán podrobně.
Podle předloženého vynálezu některé styrylsulfonové deriváty ovlivňují MAPK signální transdukční cestu, čímž ovlivňují růst a životaschopnost nádorových buněk. Tyto sloučeniny ovlivňují růst a proliferací nádorových buněk prsu a prostaty v závislosti na dávce bez toho, aby ovlivfio10 vály růst normálních buněk. Tato inhibice růstu buněk souvisí s regulací ERK a JNK typů MAPK. Schopnost styiylsulfonátů regulovat tyto MAPK a indukovat bránění růstu buněk je dána povahou a polohou funkčních skupin přítomných v této sloučenině.
Ošetření nádorových buněk prsu a prostaty styrylsulfonovými sloučeninami podle vynálezu vede k inhibici proliferace buněk a indukci smrti apoptických buněk. Tento účinek je pozorován u buněk positivních na androgenový receptor stejně jako u buněk negativních na androgenový receptor, i když jedna testovaná buněčná linie rakoviny prsu, buněčná linie 361, vykazovala vůči· styrylsulfonům značnou rezistenci. Inhibice proliferace buněk a indukce smrti apoptických buněk je pozorována také u nádorových buněk prostaty závislých na androgenu stejně jako nezávislých na androgenu, i když první z nich jsou na styrylsulfony značně citlivější.
Nádorové buňky ošetřené sloučeninami podle vynálezu se akumulují v G2/M fázi buněčného cyklu. Jak buňky opouštějí GM/2 fázi, zdá se, že podléhají apoptóze. Ošetření normálních buněk styrylsulfony nevede k podobnému účinku na progresi buněčného cyklu. Normální buňky vyká25 zují normální progresi buněčného cyklu v přítomnosti i nepřítomností styrylsulfonového léčiva.
Jak buňky ošetřené styrylsulfonovými sloučeninami podle vynálezu, tak neošetřené buňky vykazují podobné hladiny intracelulámí ERK-2, ale biochemická aktivita ERK-2, podle posouzení schopnosti fosforylovat substrátový myelinový bazický protein (MBP), je u buněk ošetřených léčivem značně snížena pří srovnání s neošetřenými buňkami. U nádorových buněk prostaty výhodná sloučenina podle tohoto vynálezu FR-20 snižuje fosforylaci MBP o více než 80 % při srovnání s buňkami kontrolními. Westernová blotová analýza lysátů buněk ošetřených léčivem a kontrolních buněk (ošetřených slepým roztokem) s ERK-2 protilátkou ukazuje stejné množství proteinu v obou lysátech, což. znamená, že vyšší hladiny fosforylovaného MBP u kontrolních buněk nepochází od nestejného množství proteinu ERK-2 v těchto lysátech. Tyto výsledky ukazují na to, že styrylsulfony podle předloženého vynálezu blokují fosforylacní schopnost ERK-2.
Styrylsulfony podle předloženého vynálezu zvyšují schopnost JNK fosforylovat c-Jun protein při srovnání s kontrolními buňkami. Bez ohledu na teorii tyto výsledky ukazují na to, že styryl40 sulfonáty mohou působit jako prozánětlivé cytokiny nebo jako UF světlo aktivující cestu JNK, což dále může zapnout geny zodpovědné za inhibici růstu buněk a za apoptózu buněk.
V této části spisu bude popsána syntéza styrylsulfonů.
Sloučeniny podle vynálezu se vyznačují cis-trans isomerií, která pochází z přítomnosti jedné nebo více dvojných vazeb. Sloučeniny jsou nazývány podle Cahn-Ingold-Prelogova systému, (IUPAC 1974 Recommendation, Section E: Stereochemistiy, v Nomenclature of Organic Chemistry, Pergamon, Elmsford, NY, 1979 („Blue Book“). Viz také March: Advanced Organic Chemistry, John Wiley and Sons, lne., New York, 4. vydání, 1992, str. 127 až 138). Sterické vztahy kolem dvojné vazby jsou označovány jako „Z“ nebo „E“.
E-Styryl a benzyl-sulfonáty se připravují Knoevenagelovu kondenzací aromatických aldehydů s aktivními methylenovými molekulami, jako jsou aryl- benzyl- a styrylsulfonyloctové kyseliny, fenacylarylsulfony a sylfonyldioctová kyselina. Tento postup je popsán v Reddy a spol.: Acta
Chitn. Hung. 1984,115, 269, Reddy a spol.: Sulfur Letters 1991, 13, 83, Reddy a spol.: Synthesis
-5CZ 299718 B6
1984, 322 a Reddy a spol,: Sulfur Letters 1987, 7, 43, jejich úplné popisy jsou zde zahrnuty jako odkazy. (Z)-benzyl- a (Z)-styrytsulfony jsou syntetizovány nukleofilní adicí aromatických a alifatických thiolů na feny lacety len a následující oxidací produktu 30% (hmotn.) peroxidem vodíku.
Příprava benzylsulfonyl- a arylsulfonyloctových kyselin: Aryl- a benzylsulfonyloctové kyseliny jsou výchozí sloučeniny pro syntézu (£)-styrylaryl- a (£)-sťyrylbenzylsulfonů. Arylsulfonyloctové kyseliny se mohou připravit kondenzací arylsulfmátu sodného s chloroctovou kyselinou při alkalickém pH. Jiný způsob syntézy stejných sloučenin zahrnuje oxidaci produktů získaných kondenzací arylthiolátu sodného s chloroctovou kyselinou,
Benzylsulfonyloctové kyseliny mohou být syntetizovány oxidací kondenzačních produktů kondenzace benzylchloridů s thioglykolátem sodným 30% (hmotn.) peroxidem vodíku. Benzylsulfonyloctové kyseliny mohou být syntetizovány také oxidací produktů kondenzace sodných solí benzylthiolů s chloroctovými kyselinami 30% (hmotn.) peroxidem vodíku.
. Syntéza (£)-styrylary 1- a (£)-benzylsulfonů: Pro přípravu (£)-styrylbenzyl- a (£)-styrylbenzylsulfonů se směs příslušné sulfonyloctové kyseliny (např. 10 mmol), aromatického aldehydu (např. 10 mmol) a katalytického množství benzylaminu v kyselině octové (např. 15 ml) vaří 2 až 3 hodiny pod zpětným chladičem. Po ochlazení se přidá suchý ether a reakční směs se ochladí pres noc v ledničce. Etherový roztok se promyje postupně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, hydrogensiřičitanem sodným, zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a nakonec vodou. Odpařením etherového roztoku vysušeného síranem sodným se získá pevný produkt (£)-styrylaryl- nebo benzylsulfonů, které se mohou překrystalovat z 2-propanolu nebo 95% (hmotn.) ethanolu.
Syntéza (Z)-styrylaryl- a (Z)-styrylbenzylsulfonů: (Z)-Styrylaryl- a (Z)-styrylbenzylsulfony se mohou připravovat přidáním arylthiolátu nebo benzylthiolátu sodného připraveného z příslušného thiolu (např. 10 mmol) a hydroxidu sodného (např. 20 mmol) k čerstvě předestilovanému fenylacetylenu v methanolu. Tato směs se vaří 24 hodin pod zpětným chladičem. Potom se vlije na roztlučený led. (Z)-styrylaryl- a (Z)-styrylbenzylsulfidy se zoxidují 30% (hmotn.) peroxidem vodíku. Získají se tak (Z)-styrylaryl- a (Z)-styrylbenzylsulfony.
Syntéza (£),(£)- a (£),(Z)-bis(styiyl)sulfonů: (£),(£)-bis(styryl)sulfony se mohou vyrábět kondenzací sulfonyldioctové kyseliny s aromatickými aldehydy v přítomnosti benzylaminu jako katalyzátoru. Reakční směs se vaří 2 hodiny pod zpětným chladičem v kyselině octové. Po ochlazení se k reakční směsi přidá absolutní ether, ta se pak promyje postupně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, hydrogensiřičitan sodným, zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a vodou. Odpařením vysušené etherové vrstvy se získají (£),(£)-bis(styryl)sulfonyl.
(£),(Z)-Bis(styryl)sulfonyl se mohou vyrobit smícháním roztoku (Z)-styrylsulfonyloctové kyseliny v ledové kyselině octové s araldehydem a benzylaminem. Tento roztok se vaří 3 hodiny. Reakční směs se ochladí a přidá se suchý ether. Jakýkoliv oddělený produkt se odfiltruje. Filtrát se zředí dalším etherem, promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, hydrogensiřičitan sodným, zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a vodou. Etherová vrstva se oddělí, vysuší se a odpaří. Získají se tak (£),(Z)-bis(styryl)sulfonyl.
V další části je popsáno terapeutické podávání. Styrylsulfony podle vynálezu se mohou podávat ve formě farmaceutického prostředku v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem. Účinná složka může být v těchto prostředcích obsažena v množství od 0,1 do 99,99 % hmotn. „Farma50 ceuticky přijatelným nosičem“ se zde rozumí jakýkoliv nosič, ředidlo nebo excipiens, které je slučitelné s jinými složkami prostředku a není škodlivé pro příjemce.
Sloučeniny podle vynálezu se mohou podávat jedincům (savcům, včetně zvířat a lidí), kteří jsou zasaženi rakovinou prsu nebo prostaty. Tyto sloučeniny se mohou podávat jakoukoliv cestou včetně orálního a parenterálního podávání. Mezí parenterální podávání patří například intra-6CZ 299718 B6 venózní, intramuskulámí, intraarteriální, intraperitoneální, intranazální, rektální nebo subkutánní podávání. Účinná složka se s výhodou podává s farmaceuticky přijatelným nosičem vybraným podle zvolené cesty podávání a podle standardní farmaceutické praxe,
Účinná složka se může připravovat ve formě dávkových forem podle standardní praxe v oblasti farmaceutických přípravků. Viz Gennaro Alphonso, red., Remingrton 's Pharmaceutical Sciences, 18. vydání, 1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa. Mezi vhodné dávkové formy patří například tablety, tobolky, roztoky, parenterální roztoky, sáčky, čípky nebo suspenze.
Pro parenterální podávání se účinná složka může smíchat s vhodným nosičem nebo ředidlem, jako je voda, olej, solný roztok, vodná dextrosa (glukosa) a podobné cukerné roztoky, nebo s glykolem, jako je propylenglykol nebo polyethylenglykol. Roztoky pro parenterální podávání s výhodou obsahují ve vodě rozpustnou sůl účinného činidla. Mohou se přidat také stabilizační činidla, antioxidační činidla a ochranná činidla. Mezi vhodná antioxidační činidla patří siřiěitan, kyselina askorbová, kyselina citrónová a její soli a sodná sůl EDTA. Mezi vhodná ochranná činidla patří benzalkoniumchlorid, methyl- nebo propyl-paraben a chlorbutanol.
. Pro orální podávání se účinná složka může zkombinovat s jednou nebo více pevnými neaktivními složkami pro přípravu tablet, tobolek nebo jiných vhodných orálních, dávkových forem. Napří20 klad se účinná složka může zkombinovat s vápenatou solí karboxymethylcelulosy, stearátem hořečnatým, mannitolem a škrobem a potom se vyrobit ve formě tablet konvenčními způsoby tabletování.
Specifická dávka sloučeniny podle tohoto vynálezu pro dosažení terapeutického účinku bude ovšem stanovena podle příslušných okolností, podle individuálního pacienta, velikosti, hmotnosti, věku a pohlaví pacienta, podle povahy a stavu onemocnění, podle agresivity onemocnění a podle cesty podávání. Například se může používat denní dávka od 0,05 do 50 mg/kg/den. Lze použít také vyšší nebo nižší dávky.
Praxe podle vynálezu je ilustrována následujícími neomezujícími příklady.
Příklady provedení vynálezu
Postup 1
Obecný postup syntézy styryl— a benzyl-l-arylsulfonů
K roztoku (8 g, 0,2 molu) hydroxidu sodného v methanolu (200 ml) se pomalu přidá příslušný thiofenol nebo benzylmerkaptan (0,1 molu). Po částech se pak přidá kyselina chloroctová (0,1 molu) a reakční směs se vaří 2 až 3 hodiny pod zpětným chladičem. Ochlazené obsahy se nalijí na roztlučený led a zneutralizují se zředěnou kyselinou chlorovodíkovou (200 ml). Výsledné aryl- a benzylthiooctové kyseliny (0,1 mol) se podrobí oxidaci 30 % (hmotn.) peroxidem vodíku (0,12 mol) v ledové kyselině octové (25 ml) varem pod zpětným chladičem po dobu 1 až
2 hodin. Obsahy se ochladí a nalijí se na roztlučený led. Oddělená pevná látka se překrystaluje z horké vody. Získají se tak čisté aryl- a benzylsulfonyloctové kyseliny.
Směs příslušné aryl- nebo benzylsulfonyloctové kyseliny (0,001 molu), aromatického aldehydu (0,001 molu) a benzylaminu (1 ml) v ledové kyselině octové (15 ml) se vaří 2 až 3 hodiny pod zpětným chladičem. Obsahy se ochladí a zpracují se se suchým etherem (50 ml). Jakýkoliv oddělený produkt se odfiltruje. Filtrát se zředí dalším etherem a postupně se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml), hydrogensiř i čítaném sodným (20 ml), zředěnou kyselinou chlorovodíkovou (20 ml) a nakonec vodou (35 ml). Odpařením vysušené etherové vrstvy se získá v mnoha případech pevná látka. V některých případech se však získá sirupovitý
-7CZ 299718 B6 materiál, který působením 2-propanolu ztuhne. Čistota sloučenin se zkontroluje TLC (silikagel BDH, hexan s ethylacetátem v poměru 3:1).
Postup 2
Obecný postup syntéz (£}(£)- a (£}(Z)-bis(styryl)sulfonů
K čerstvě přidestilovanému fenylacetylenu (51,07 g, 0,5 molu) se přidá thioglykolát sodný připravený z kyseliny thioglykolové (46 g, 0,5 molu) a hydroxidu sodného (40 g, 1 molu) v metha10 nolu (250 ml). Tato směs se vaří 24 hodin pod zpětným chladičem. Po ochlazení se pak nalije na roztlučený led (500 ml). Kyselina styiy lthiooctová, která se vytvoří neutralizací zředěnou kyselinou chlorovodíkovou (250 ml), se zfiltruje a vysuší. Získá se tak 88 g (90 % hmotn.) produktu s t.t. 84 až 86 °C.
Tato styrylthiooctová kyselina se pak zoxiduje na styrylsulfonyloctovou kyselinu následujícím způsobem. Směs styrylthiooctové kyseliny (5 g, 25 mmol) v ledové kyselině octové (35 ml) a 30% (hmotn.) peroxidu vodíku (15 ml) se zahřívá 60 minut za varu pod zpětným chladičem. Tato směs se pak po ochlazení nalije na roztlučený led (200 ml). Oddělená sloučenina se odfiltruje a překrystaluje se z horké vody. Získají se tak bílé krystalické vločky (Z)-styrylsulfonyloctové kyseliny, výtěžek 2,4 g (41 % hmotn.), t.t 150 až 151 °C.
Roztok (Z)-styrylsulfonyloctové kyseliny (2,263 g, 10 mmol) v ledové kyselině octové (6 ml) se smíchá s aromatickým aldehydem (10 mmol) a benzylaminem (0,2 ml) a směs se vaří 3 hodiny pod zpětným chladičem. Reakční směs se ochladí. Přidá se suchý ether (50 ml) a jakýkoliv oddělený produkt se odfiltruje. Filtrát se zředí dalším etherem a promyje se postupně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml), hydrogensiřičitanem sodným (15 ml), zředěnou kyselinou chlorovodíkovou (20 ml) a nakonec vodou (30 ml). Odpaření vysušené etherové vrstvy poskytne (£)(Z)-bis(styryl)sulfony.
(£),(£)_Bis(styryl)suIfony se připravují podle stejného postupu, jak je shora uvedeno, stou výjimkou, že se místo (Z)-styryIsulfonyloctové kyseliny použije sulfonyldioctová kyselina a že se používá dvojnásobek aromatického aldehydu (20 mol).
Postup 3
Obecný postup syntézy 2-(arylsulfonyl)-l-fenyl-3-aryL-2-propen-l-onů
Tyto sloučeniny se syntetizují dvěma způsoby, které používají různé reakční podmínky, rozpouštědla a katalyzátory.
Způsob 1: Fenacylarylsulfonyl se vyrobí vařením a-bromacetofenonů (0,05 mol) a arylsulfmátů sodných (0,05 mol) v absolutním ethanolu (200 ml) po dobu 6 až 8 hodin. Produkt, který se ochlazením oddělí, se odfiltruje a několikrát se promyje vodou, aby se odstranil bromid sodný. Tento produkt se překrystaluje z ethanolu. Získá se fenacylfenylsulfon, t.t. 90 až 91 °C, fenacyl45 ' p-fluorfenylsulfon, t.t. 148 až 149 °C, fenacyl-p-bromfenylsulfon, t.t. 121 až 122 °C, fenacyl-pmethoxyfenylsulfon, t.t. 104 až 105 °C, a p-nitTofenacylfenylsulfon, t.t. 136 až 137 °C.
Roztok fenacylarylsulfonu (0,01 mol) v kyselině octové (10 ml) se smíchá saraldehydem (0,01 mol) a benzylaminem (0,02 ml) a směs se vaří 3 hodiny pod zpětným chladičem. Roztok se ochladí a přidá se suchý ether (50 ml). Etherový roztok se promyje postupně zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodným 10% (hmotn.) roztokem hydroxidu sodného, nasyceným roztokem hydrogensiřičitanu sodného a vodou. Odpaření vysušené etherové vrstvy poskytlo pevný produkt, který se vyčistí rekrystalízací.
-8CZ 299718 B6
Způsob 2: Do 500ml konické baňky propláchnuté dusíkem se nalije suchý tetrahydrofuran (200 ml). Za nepřetržitého míchání se k němu přikape roztok chloridu titaničítého (11 ml, 0,01 molu) v absolutním tetrachlormethanu. Obsah baňky se během přidávání udržuje na-20 °C. K reakční směsi se přidá směs fenacylarylsulionu (0,01 mol) a aromatického aldehydu (0,01 mol) a během jedné hodiny se pomalu přidá pyridin (4 ml, 0,04 mol) v tetrahydrofuranu (8 ml). Obsah se míchá 10 až 12 hodin, zpracuje se s vodou (50 ml) a potom se přidá ether (50 ml). Etherová vrstva se oddělí a promyje se 15 ml nasycených roztoků 10% hydroxidu sodného, hydrogensiřičitanu sodného a solného roztoku. Odpaření vysušené etherové vrstvy poskytne 2-(aryl$ulfonyl)-l-fenyl-3-aryl-2-propen~l-ony.
ío
Příklad 1 £-S ty ryl fenyl sulfon
Roztok fenylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a benzaldeHydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1.
Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 68 až 72 % (hmotn.).
Příklad 2 £-4-Chlorstytylfenylsulfon
Roztok fenylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-chlorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1, Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 78 až 80 % (hmotn.).
Příklad 3
A-2,4-DicMorstyiy] fenyl sulfon
Roztok fenylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 2,4-dichlorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 60 až 65 % (hmotn.).
Příklad 4 £-4-Bromstyrylfenylsulfon
Roztok fenylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-brombenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 78 až 80 % (hmotn.).
Příklad 5
E—4-ChlostyryM-chlorfcnylsulťon
Roztok 4-chlorfenylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-chlorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 70 až 72 % (hmotn.).
Příklad 6 £-4-Methy 1 styry 1-4-ch 1 orfenyl sulfon
Roztok 4-chlorfenylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-methylbenzaldehydu (0,01 mol) se 45 podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 60 až 64 % (hmotn,).
-9CZ 299718 B6
Příklad 7
Zí-4-Methoxystyry]^4-chlorfenylsulfon
Roztok 4-chlorfenylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-methoxybenzaldehydu (0,01 mol) se J podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 68 až 70 % (hmotn.). 1
Příklad 8 j £-E-Bromstyryl-4-chlorfenylsulfon
Roztok 4-chlorfenylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-brombenzaldehydu (0,01 mol) se io podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 80 % (hmotn.).
Příklad 9 £-2-Chlorstyiylbenzylsulfon
Roztok benzylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 2-chlorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 72 % hmotn.).
Příklad 10 £-4-Chlorstyrylbenzylsulfon
Roztok benzylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-chlorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina vě výtěžku 78 % (hmotn.).
Příklad 11 £-4-FluorstyryM-chlorbenzylsulfon
Roztok 4-chlorbenzylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-chlorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 72 % (hmotn.).
Příklad 12 £M-Chlorst}r\lM:A:hlorbenzylsulfon ' - Roztok 4-chlorbenzylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-chlorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 80 % (hmotn.).
Příklad 13 £-4-F luorstyry 1-4-fl uorbenzy 1 su 1 fon
Roztok 4-fluorbenzylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-fluorbenzaldehydu (0,01 mol) se 40 podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 73 % (hmotn.).
Příklad 14 £-2,4-Difluorstyryl-4-fluorbenzylsulfon
Roztok 4-fluorbenzylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 2,4-difluorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 68 % (hmotn.).
-10CZ 299718 B6
Příklad 15 £-4-FluorstyryM-brombenzylsulfon
Roztok 4-brombenzylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4_fluorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 82 % (hmotn.).
Příklad 16
EM-Bromstyryl-4-brombenzylsulfon
Roztok 4-brombenzylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-brombenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 88 % (hmotn.).
Příklad 17
Ε-Λ-BromstyryM-fluorbenzylsulfon
Roztok 4-fluorbenzylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-brombenzatdehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 82 % (hmotn.).
Příklad 18
E-4-ChlorstyryM-brombenzylsulfon
Roztok 4-brombenzylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-chlorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu l. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 88 % (hmotn.).
25
Příklad 19 £-4-BromstyryM-chlorbenzylsulfon
Roztok 4-chlorbenzylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-brombenzaldehydu (0,01 mol) se 30 podrobí postupu 1. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 92 % (hmotn.).
Příklad 20 (Z)-Styryl-(E)-4-fluorstyrylsulfon
Roztok (Z)-styrylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a 4-fluorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 2. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 68 % (hmotn.).
Příklad 21 (Z>-Styryl-(E)-4-bromstyrylsulfon
Roztok (Z)-styrylsulfonyloctové kyseliny (0,01 mol) a brombenzaldehydu (0,091 mol) se podrobí postupu 2. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 70 % (hmotn.).
Příklad 22 (Z)-Styryl-(E)-4-chlorstyrylsulfon
-11 CZ 299718 B6
Roztok (Z)-styrylsulfony1octové kyseliny (0,01 mol) a 4_chlorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí postupu 2. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 64 % (hmotn.).
Příklad 23
2-[(4-Fluorfenyl)sulfonyl]-l-fenyl-3-(4-fluorfenyl)-2-properi-l-on
Roztok fenacyl-4-fluorfenylsulfonu (0,01 mol) a 4-chlorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí způsobu 1 z postupu 3. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 63 % (hmotn.).
io
Příklad 24
2-[(4-Fluorfenyl)sulfonyl]-l-fenyl-3-(4-fluorfenyl)-2-propen-l-on
Roztok fenacyl-2-chlorfenylsulfonu (0,01 mol) a fluorbenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí způsobu 1 z postupu 3. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 58 % (hmotn.).
Příklad 25 . 2-[(4-Chlorfenyl)sulfonyl]-l-fenyl-3-(4-bromfenyl)-2-propen-2-on
Roztok fenacyl-2-chlorfenylsulfonu (0,01 mol) a 4-brombenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí způsobu l z postupu 3. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 66 % (hmotn).
Příklad 26
2-[(4-Ch lorfenyl)su lfony 1]-1-feny 1-3-(4-bromfeny l)-2-propen-l-on
Roztok fenacyl-4-chlorfenylsulfonu (0,01 mol) a 4-brombenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí způsobu 1 z postupu 3. Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 60 % hmotn.).
Příklad 27
2-[(2-Nitrifenyl)sulfonyl]-l-fenyl-3^(4-bromfenyl)-2-propen-l-on
Roztok fenacyl-2-nitrofenylsulfonu (0,01 mol) a 4-brombenzaldehydu (0,01 mol) se podrobí způsobu 1 z postupu 3; Získá se titulní sloučenina ve výtěžku 56 % (hmotn.). =
Příklad 28
Inhibice růstu nádorové buňky styrylsulfony A. Buňky
Byl zkoumán účinek styrylsulfonů na růst normálních a nádorových buněk prsu a prostaty pomocí čtyř buněčných linií, NIH3T3, MCF-7, BT-20 a LnCap. Buňky NIH3T3 představují normální fibroblasty, zatímco LnCap je nádorová buněčná linie prostaty závislá na androgenu. MCF-7 je nádorová buněčná linie prsu odpovídající na estrogen, zatímco BT-20 byly pěstovány v Dulbeccem modifikovaném Eaglově mediu (DMEM) obsahujícím 10% (hmotn.) plodové hovězí sérum doplněné penicilinem a streptomycinem. LnCaP byly kultivovány vRPMI s 10% (hmotn.). plodovým hovězím sérem obsahujícím 10% (hmotn.) telecí sérum doplněné penicilinem a streptomycinem. Všechny buněčné kultury byly uchovávány při 37 °C ve vlhké atmosféře s 5% CÓ2.
-12CZ 299718 B6
B. Ošetření styrylsulfony test životaschopnosti
Buňky byly ošetřeny testovanou sloučeninou o koncentraci 2,5 μΜ nebo 5,0 μΜ. Životaschopnost buněk byla stanovena po 48 hodinách způsobem s trypanovou modří. Sloučeniny identifikované v tabulkách 1, 2 a 3 inhibovaly růst buněk a indukovaly smrt buněk v různých stupních. Tabulky uvádějí procenta životaschopných buněk LnCap a MCF-7 ošetřených 5,0 μΜ sloučeniny.
Tabulka 1
příklad Rí Ra Ra % životaschopných buněk LnCaP a MCF-7
1 0 H H H 89
2 0 H Cl H 90
3 0 H Cl Cl 88
4 0 H Br H 68
5 0 ČI Cl H 64
6 0 Cl ch3 H 92
7 0 Cl OCHa H 90
8 0 Ci Br H 69
9 1 H H Cl 94
10 1 H Cl H 87
11 1 Cl F H 6
12 1 Cl Cl H 49
13 1 F F H 43
14 1 F F F 56
15 1 Br F H 7
16 1 Br Br H 51
17 1 F Br H 42
18 1 Br Cl H 7
19 1 Cl Br H 20
-13CZ 299718 B6
Tabulka 2
příklad Ri % životaschopných buněkLnCaP a MCF-7
F 76
příklad Rt Rz β % životaschopných buněk LnCaP a MCF-7
23 F 4-fluorfenyl 76
24 F 2-chlorfenyl 64
25 Br 2-chlorfenyl 72
26 Bř 4-chlorfenyl 58
27 Br 2-nitro 74
- 14CZ 299718 B6
Pět z účinnějších sloučenin, které vykazovaly nejvyšší aktivitu, bylo označeno FR(-2 (E-2,4—difluorstyryl-4-fluorbenzylsulfon), FRI-6 (£-4-fluorstyryM-brombenzylsulfon), FRI-7 (£-4— bromstyryM-fluorbenzylsulfon), FRI-20 (£-4-fluorstyryl-4-chlorbenzylsulfon) a FRI-22 (£-4-chlorstyryl-4-chlorbenzyl$ulfon). Bylo zjištěno, že tyto sloučeniny podstatně inhibují růst a indukují smrt buněk LnCaP, BT-20 a MCF-7 v množství 2,5 mM (obrázek 1A) a 5,0 mM (obrázek 1B) po 48 hodinách od ošetření těmito sloučeninami. Za stejných podmínek bylo více než 80 % buněk NIH3T3 životaschopných po 48 hodinách inkubace (obrázek 1A a 1B). Vysoce aktivní byl také £~4-chIorstyryI-4—brombenzylsulfon a £-4-bromstyryl-4-chlorbenzylsulfon.
io C. Test závislosti na dávce
Závislost účinnosti styrylsulfonu na dávce byla stanovena ošetřením buněk FRI-20 jednou s pěti nej účinnějších sloučenin. Buňky NIH3T3, MCF-7, BT-20 a LnCaP byly ošetřeny FRI-20 rozpuštěných v DMSO na koncentraci 250 nm, 500 nm, 1 μΜ, 2,5 μΜ a 5 μΜ a byla zkoumána jejích přoliferace a životaschopnost po 48 hodinách (obrázek 2A). Procento žijících buněk bylo is stanoveno trypanovou modří. Kontrolní buňky byly ošetřeny DMSo, aby se určil vliv tohoto rozpouštědla na buňky. Při koncentraci 250 nM došlo k asi 10% smrti buněk MCF-7, BT-20 a
LnCaP a asi 15 až 20% inhibici dělení buněk při srovnání s neošetřenými buňkami po 48 hodinách. Při 500 nM koncentraci došlo k 30 až 50% inhibici přoliferace buněk a 25 až 30% smrtí buněk u LnCap, BT-20 a MCF-7. Za těchto podmínek pouze 2 až 3 % buněk NIH3T3 nebylo životaschopných při obou koncentracích. Růst buněk LnCaP, BT-20 a MCF-7 byl velice inhibován 1 μΜ koncentrací FRI-20 se současnou ztrátou životaschopnosti buněk. Po 48 hodinách inkubace bylo 60 až 75 % buněk LnCaP, BT-20 a MCF-7 mrtvých při 2,5 mM koncentraci FRI20, zatímco více než 90 % buněk NIH3T3 bylo životaschopných (obrázek 2A). Buňky LnCap, BT-20 a MCF-7 ošetřené 5 μΜ FRI-20 (obrázek 2A) vykazovaly téměř 90% smrt. NIH3T3 vykazovaly malou nebo žádnou změnu ve své schopnosti růst a zachovávaly si svoji životaschopnost z více než 80 % v přítomnosti FR1-2, -6, -7,20 nebo -22 při 5μΜ koncentraci.
D. Test závislosti na době
Závislost aktivity FRI-20 na čase byla demonstrována následujícím způsobem. NIH3T3, MCF30 7, BT-20 a LnCap byly ošetřeny 2,5μΜ FRI-20. Počet životaschopných buněk byl stanoven po
12,24,48 a 72 hodinách trypanovou modří. Střední hodnota tří nezávislých pokusuje uvedena na obr. 2B. Studium závislosti na době odhalilo, že více než 95 % MCF-7, LnCaP a BT-20 buněk bylo mrtvých po 72 hodinách od ošetření FRI-20 v množství 2,5 μΜ (obrázek 2B).
Příklad 29
Inhibice růstu nádorových buněk působením FRI-20
A. Buňky . Účinek FR-20 na růst normálních a nádorových buněk prsu a prostaty byl zkoumán s použitím devíti buněčných linií: NIH/3T3 a HFL (normální fibroblastové buněčné linie), MCF-7 a 361 (nádorové buněčné linie prsu negativní na estrogenový receptor), BT-20, 435 a SKBR-3 (nádorové buněčné linie prsu positivní na estrogenový receptor), LnCaP (nádorová buněčná linie prostaty citlivá na androgen) a PC-3 a DU-145 (nádorová buněčná linie prostaty necitlivá na androgen).
B. Ošetření FRI-20 a test životaschopnosti
Buňky byly nechány růst jako v příkladu 22A. FR-20 byl rozpouštěn v DMSO a přidán k buňkám v koncentraci 2,5 μΜ a 5,0 μΜ. Ke kontrolním buňkám byl přidán DMSO v ekvivalentu k objemu rozpouštědla (DMSO) přítomnému v nejvyšší koncentraci sloučeniny. Aktivita sloučeniny byla vyhodnocena po 48 hodinách trypanovou modří. Bylo zjištěno, že buňky NIH3T3 a HFL si udržují 85 až 90 % životaschopnosti při 2,5 a 5,0 μΜ koncentraci. Ze sedmi nádorových
-15CZ 299718 B6 buněčných linií prsu ošetřených sloučeninou FRJ-20 vykazovaly MCF-7, HTB126, T470 a 435 velmi vysokou úmrtnost s menší než 25% a 10% životaschopností při 2,5μΜ a 5,0μΜ koncentraci léčiva (obrázek 3A). Téměř 50 % buněk SKBR-3 a BT-20 bylo mrtvých při 2,5μΜ a 75 % při 5,0μΜ koncentraci sloučeniny. Nádorová buněčná linie prsu 361 naopak vykazovala značnou rezistenci vůči FRI-20 s 50 až 75 % buněk, které jsou životaschopné při 2,5 a 5,0μΜ koncentraci. FRI-20 měl významný účinek na životaschopnost nádorové buněčné linie prostaty LnCaP závislé na androgenu, jestliže se srovnává s buněčnými liniemi prostaty DU-145 a PC-3 nezávislými na androgenu. Při 2,5 mM FRI-20 bylo zabito 80 % buněk LnCaP, 40% PC-3 a 20 % DU-145. Při 5,0 mM FRI-20 bylo zabito 72 % LnCaP buněk, 47 % PC-3 a 40 % DU-145 buněk (obrázek 3B).
Příklad 30
Vliv FRI-20 na regulaci buněčného cyklu
Nádorová buněčná linie LnCaP prostaty závislá na androgenu byla nechána růst jako v příkladu 22A a byla ošetřena 2,0μΜ FRI-20 rozpouštěným v DMSO nebo ekvivalentním množstvím (10 ml) DMSO samotného. Buňky byly isolovány po 6,12, 24 a 48 hodinách od ošetření, obarveny propidiumjodidem a podrobeny analýze obsahu DNA průtokovou cytometrií (FACS). Jak je uvedeno na obrázku 4, přidání FR-20 ke kultivačnímu médiu vede k akumulaci buněk v G2M/fázi buněčného cyklu a jakmile buňky vycházejí z této fáze buněčného cyklu, což ukazuje na to, že uvedené účinky souvisejí s přidáním FRI-20. Ošetření normálních buněčných linií NIH3T3 nebo HFL sloučeninou FRI-20 neposkytuje podobný účinek na progresi buněčného cyklu. NIH3T3 a HFL vykazovaly normální progresi buněčného cyklu v přítomnosti i neprítom25 nosti léčiva.
Příklad 31
Vliv FRI-20 na MPK cestu
A. Test imunního komplexu ERK-2
Pro zkoumání vlivů FRI-20 na MAPK cestu byly buňky NIH3T3, LnCaP a MCF-7 inkubovány 48 hodin s FRI-20 v koncentraci 2,5 mM. Po inkubaci buněk v přítomnosti a nepřítomnosti
FRI-20 byly buňky lysovány použitím pufru pro lysy ERK obsahujícího 20mM HEPES (pH 7,4), 50mM β-giycerolfosfát, 0,5% Triton X-l00 2mM MgCl2, lmM EGTA, lmM dithiothreitol, pg/ml léupeptinu, 2 pg/nil leupeptinu, 2 μΙ/ml aprotininu, 100μΜ fenylmethylsulfonylfluorid a 1 pm benzamidin. ERK-2 ve 100 buněčného lysátu byla imunoprecipitována inkubováním lysátového proteinu s 1 mg ERK-2 polyklonální protilátky (protilátka sc-154 na ERK2 od Santa Cruz
Biotechnology, lne.) po dobu jedné hodiny. Následovala další inkubace 20 μϊ protein A Seipharosy (Phamarmacia) po dobu jedné hodiny. Imunitní komplex - navázaný protein A perličky Sepharosy byly promyty dvakrát lysačním pufrem a dvakrát pufrem ERK/MAPK obsahujícím 20mM HEPES (pH 7,4), 50mM β-glycerolfosfát, lOmM MgCl2, lmM EGTA, lmM dithiothreitol a 100 μ Na3VO4,
Imunoprecipitáty byly pak testovány na MAP kinasovou aktivitu testem in vitro který používá myelinový bazický protein (MBP) jako substrát pro ERK-2 v přítomnosti [γ-32Ρ]ΑΤΡ. Perličky byly tedy resuspendovány ve 40 μϊ pufru MAPK obsahujícím ΙΟΟμΜ [γ-32Ρ]ΑΤΡ (5000 impulsů za minutu/pmol) a test kinasy byl prováděn 20 minut při 30 °C použitím 5 μg MBP jako substrá50 tu. Reakce byla zastavena přidáním Laemmliho pufru a následujícím povařením vzorků po dobu minut. Proteiny byly rozděleny na 12% (hmotn.) SDS-PAGE; gel byl vysušen a byl vyvinut autoradiogram. Výsledky ukazují, že jak ošetřené tak neošetřené buňky vykazovaly podobné hladiny intracelulámího ERK-2, ale biochemická aktivita ERK-2, posuzovaná na základe schop-16CZ 299718 B6 nosti fosforylovat MBP, byla značně snížena u buněk ošetřených léčivem při srovnání s buňkami ošetřenými samotnými DMSO. U nádorových buněk prostaty FRI-20 snižoval fosforylační status MBP více než o 80 % při srovnání s kontrolními buňkami (obrázek 5).
B. Westernová blotová analýza
Buněčné lysáty buněk ošetřených FRI-20 byly připraveny Westernovou blotovou analýzou následujícím způsobem. Buňky NIH3T3, LnCaP nebo MCF-7 byly vysuté v hustotě 2.105 buněk/jamku na desku o šesti jamkách a nechány růst 24 hodin. Do každé jamky byly přidány čerstvé médium dvě hodiny před ošetřením FRI-20. Tato sloučenina byla rozpouštěna v DMSO tak, aby se získal 2mM zásobní roztok a byla přidána k médiu (2 ml) tak, aby se získala konečná koncentrace 2,5 a 5,0 μΜ. Po 48 hodinách při 37 °C se buňky dvakrát promyjí 10 ml ledem ochlazeného fosforečnanového pufrovacího solného roztoku a isolují se do 400 μΐ lyzačního pufru, který obsahuje 25mM HEPES (pH 7,6), 0,1% Triton X-100, 300mM NaCl, l,5mM MgCl2, 20mM β-glycerofosfát, 100μΜ Na3VO4, 0,2mM EDTA, 0,5mM dithiothreitol, 2 μg/ml aprotininu, 2 pg/ml leupeptinu, 100 μΜ' fenylmethylsulfonylchlorid a lmM benzamidin. Buněčné lysáty byly uchovávány na ledu 30 minut a potom byly odstřeďovány 10 minut vmikroodstředivce (16 000 x g). Buněčné lysáty byly odděleny od zbytků buněk a normalizovány na obsah proteinů.
f
Westernová blotová analýza byla provedena na lysátu buněk ošetřených léčivem a u kontrolních buněk protilátkou ERP-2. Na každý pás SDS-PAGE gelu (10 až 12% (hmotn.)) byla nanesena stejná množství celkového proteinu (100 μg) a přenesena na lmmobilon-P (Millipore, USA). Po přenosu byly membrány blokovány ve 3% (hmotn.) mléku, sondovány ERK-2 a JNK-1 králičími polyklonálními protilátkami (Santa Cruz Biotechnology, ínc. Santa Cruz, Ka, USA) a potom sondovány oslí protikráličí íg sekundární protilátkou navázanou na křenovou peroxidasu (Amersham) (ředění 1:10 000) použitím sestavy pro ECL Westernovou blotovací analýzu (Amersham) podle instrukcí výrobce. Westernová blotovací analýza buněčných lysátů ošetřených léčivem a kontrolních lysátů ERK-2 protilátkou vykázala stejné množství proteinu v obou lysátech (obrázek 6), což ukazuje, že vyšší hladiny MBP fosforylace v kontrolních buňkách neexistují díky nestejnému množství ERJ-2 proteinu v lysátech. Tyto výsledky ukazují, že FRI-20 blokuje fosforylační schopnost ERK-2.
Příklad 32
Vliv FŘRI-20 na stresem aktivovanou proteinovou aktivitu
Pro další zjištění toho, jestli aktivita stresem aktivovaných proteinových inas (SAPK), jejichž členem je JNK, je souvisí s přítomností FRI-20, byly buňky (NÍH3T3, MCF-7 a LnCaP) ošetřeny FRI-20 rozpouštěným v DMSO nebo DMSO samotným (kontrola). O 48 hodin později byly buňky lysovány kinasovým pufrem a lysáty byly použity pro vyhodnocení množství JNK přítomné v každém lysátu Westernovou blotovací analýzou použitím JNK polyklonální protilátky. Biochemická aktivita JNK přítomné v buněčných lysátech ošetřených FRI-20 a v kontrolních lysátech byla stanovena také imunoprecipitací JNK s následující inkubací s GCT-c-Jun proteinem jako substrátem pro JNK v přítomnosti [γ-32Ρ]ΑΤΡ.
JNK-1 ve 100 mg buněčných extraktů byla tedy imunoprecipitovaná inkubací s lysátem s 1 mg JNK-1 polyklonální protilátky (sc od Santa Cruz Biotechnology) jednu hodinu, načež následovala další inkubace s 20 μί protein A - Sepharosy (Pharmacia) po dobu jedné hodiny. Perličky byly dvakrát promyty JNK lysačním pufrem (jak shora popsáno) s následujícími dvěma promytími JNK reakčním pufrem. Perličky byly resuspendovány ve 40 μΐ JNK pufru obsahujícího 20 mM [γ-32Ρ]ΑΤΡ (5000 impulsů za minutu/pmol). Kinasová rekce byla prováděna 20 minut při 30 °C s použitím 3 pg vyčištěné CST-c-Jun(l-79) jako substrátu. Reakce byla zastavena a byla vyhodnocena radioaktivita fosforylovaného GST-c-Jun proteinu. Výsledky ukazují, že ošetření
-17CZ 299718 B6 s FRI-20 zvyšuje schopnost JNK fosforylovat rekombinantní GST-c-Jun protein o 60 až 80 % při srovnání s kontrolními buňkami (obrázek 7). í <5
Bylo ukázáno, že JNK je aktivována ošetřením buněk UF zářením, prozánětlivymi cytokiny a rí stresem z prostředí (Derijard a spol.: Cell 1994, 1025). Aktivovaná JNK se váže na aminový ý konec c-jun a zvyšuje jeho transkripční aktivitu fosforylaci na ser63 a ser73 (Adler a spol.: Proč.
Nati. Acad. Sci. USA 1992,89, 5341; Kwok a spol.: Nátuře 1994, 370, 223). Bez ohledu na teorii , * výsledky, které jsou zde uvedeny, ukazují na to, že FRI-20 může působit jako protizánětlivý cytokin nebo UF světlo při aktivování JNK cesty, což dále může zapnou t-geny zodpovědné za ío inhibici růstu buněk a za jejich apoptózu.
Příklad 33
Srovnání FRI-20 a cisplatiny
Protinádorové aktivity
Zabíjecí účinek FR-20 na nádorové buňky prostaty citlivé na androgen (LcCaP) a necitlivé na androgen (DU145) byl srovnáván s účinkem cisplatiny (cis-diamindichlorplatina), široce rozšířenému protirakovinovému činidlu používanému u prostaty. Buňky byly nechány růst tak, jako v příkladu 26. FRI-20 nebo cisplatina byla rozpouštěna v DMSO a přidána v buňkách v různých koncentracích. Životaschopnost byla stanovena po 72 hodinách způsobem s trypanovou modří.
Koncentrace FRI-20 požadovaná pro úplné zabití buněk LnCaP a Dul45 byla 2,5 μΜ a 5,0 μΜ.
Za stejných podmínek byly pro úplné zabití buněk LnCaP a DUI45 cisplatiňou potřebné koncentrace 25 μΜ a 15 μΜ; FRI-20 je tedy alespoň desetkrát účinnější než cisplatina při zabíjení nádorových buněk prostaty, a to jak závislých na hormonu, tak nezávislých na hormonu.
Všechny uvedené citace, týkající se syntetických, preparativních a analytických postupů, jsou zcela zahrnuty jako odkazy.
Předložený vynález může existovat v jiných specifických formách, aniž by se odchýlil od ducha a podstatných vlastností. Odkazy, pokud jde o rozsah vynálezu, je tedy potřeba dělat spíše na připojené nároky než na předcházející popis.

Claims (9)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Styrylsulfonová sloučenina obecného vzorce I v němž
    -18CZ 299718 Bó
    Ri a R2 znamenají nezávisle skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z atomu chloru, fluoru a bromu, a
    R3 znamená skupinu vybranou ze skupiny sestávající z atomu vodíku a atomu fluoru', oba Rt a R2 nemohou znamenat atom chloru, jestliže R3 znamená atom vodíku, a
    5 Ri nemůže znamenat atom chloru, jestliže R2 a znamená atom fluoru a R3 znamená atom vodíku ve stejné sloučenině.
  2. 2. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 1, kterou je £-4-fluorstyryM~fluorbenzy[sufón.
    io
  3. 3. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku l, kterou je E-2,4-difluorstyryM-fluorobenzylsulfon.
    i
  4. 4. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 1, kterou je £-4-f1uorstyryl-4-brombenzylsuIfon.
    15 5. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 1, kterou je £M-bromstyrvl-4-brombenzy Isulfon.
    6. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 1, kterou je £-4-chlor$tyryl-4-brombenzyIsulfon·.
    7. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 1, kterou je £—4-bromstyryl-4-chlorbenzyIsulfon.
    8. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 1, kterou je £M-bromstyryI-4-fluorbenzyIsulfcn.
    9. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič a styrylsulfonovou sloučeninu obecného vzorce II v němž n znamená číslo nula nebo jedna,
    Ri znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z atomu vodíku, chloru, fluoru a bromu,
    30 R2 znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z atomu vodíku, chloru, fluoru a bromu, methylové skupiny a methoxyskupiny a
    R3 znamená skupinu vybranou ze skupiny sestávající z atomu vodíku, atomu chloru a atomu fluoru s tím, že
    R2 nemůže znamenat methylovou skupinu nebo methoxyskupinu, jestliže jak Ri tak R3 35 znamená atom vodíku a n znamená číslo nula nebo jedna, a všechny Rb R2 a R3 nemohou znamenat atom vodíku, jestliže n znamená číslo jedna.
    - 19CZ 299718 B6
    10. Farmaceutický prostředek podle nároku 9, vyznačující se tím, že sloučeninou je £-4-bromstyryM-fluorbenzylsulfon.
    11. Farmaceutický prostředek podle nároku 9, v y z n a č u j í c í se tím, že sloučeninou je j
  5. 5 £-2,4~difluor$tyryM-fIuorbenzylsulfon. '
    12. Farmaceutický prostředek podle nároku 9, vyznačující se tím, že v obecném ái vzorci II R3 znamená atom vodíku a Ri a R2 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající r z atomu chloru, fluoru a bromu.
    13. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že sloučeninou je £-4-chlorstyryl^l-chlorfenylsulfon.
    14. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že sloučeninou 15 je £-4-bromstyryl^-chlorfenylsulfon,
    15. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že sloučeninou je £-4-fluorstyryl-4-chlorbenzyísulfon.
    16. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, je£-4-chlorstyryM-chlorbenzylsulfon.
    že sloučeninou
    17. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím,, je £-4-fluorstyryl-4-fluorbenzylsuIfon.
    18. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, je £-4'fluorstyry'M~bronibenzylsulfon.
    19. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, je £-^-bromstýryl-4-brombenzylsulfon.
    20. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, je £-^-bromstyryl-4-fluorbenzylsulfon.
    21. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, je £-4-chlorstyryl-4-brombenzylsulfon.
    že sloučeninou že sloučeninou že sloučeninou že sloučeninou že sloučeninou
    22. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že sloučeninou je £M-bromstyryM-chlorbenzylsulťon.
    23. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič a styrylsulfonovou sloučeninu obecného vzorce III
    -20CZ 299718 B6 v němž
    Ri znamená skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z atomu vodíku^ chloru, fluoru a bromu.
    24. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič a styrylsulionovou sloučeninu obecného vzorce IV v němž
  6. 10 R| znamená skupin, která je vybrána ze skupiny sestávající z atomu fluoru a bromu, a R2 je vybrána ze skupiny sestávající z 2-chlorfenylové skupiny, 4-chlorfenylové skupiny, 4-fluorfenylové skupiny a 2-nitrofenylové skupiny.
    25. Styrylsulfonová sloučenina obecného vzorce II uvedeného v nároku 9 pro použití při léčení
  7. 15 rakoviny nebo jiného proliferačního onemocnění.
    26. Styrylsulfonová sloučenina obecného vzorce II uvedeného v nároku 9 pro použití při inhibování růstu nádorových buněk jedince, který je zasažen rakovinou.
  8. 20 27. Styrylsulfonová sloučenina obecného vzorce II uvedeného v nároku 9 pro použití při indukování apoptózy nádorových buněk jedince, který je zasažen rakovinou,
    28. Styrylsulfonová sloučenina obecného vzorců III nebo IV uvedených v nárocích 23 nebo 24 ’ pro použití při léčení rakoviny nebo jiného proliferačního onemocnění jedince.
    29. Styrylsulfonová sloučenina obecného vzorců III nebo IV uvedených v nárocích 23 nebo 24 pro použití při inhibování růstu nádorových buněk jedince, který je zasazen rakovinou.
    30. Styrylsulfonová sloučenina obecného vzorců III nebo IV uvedených v nárocích 23 nebo 24
    30 pro použití při indukování apoptózy nádorových buněk jedince, který je zasažen rakovinou.
    31. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 25 pro použití při léčení rakoviny prsu nebo prostaty.
    -21 CZ 299718 B6
    32. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 26 pro použití pro inhibování růstu nádorových buněk prsu nebo prostaty u jedince zasaženého rakovinou prsu nebo prostaty.
    5 33. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 27 pro použití pří indukování apoptózy nádorových buněk prsu nebo prostaty u jedince zasaženého rakovinou prsu nebo prostaty.
    34, Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 28 pro použití pro léčení rakoviny prsu a prostaty.
    i o 35. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 29 pro inhibování růstu nádorových buněk prsu. nebo prostaty u jedince zasaženého rakovinou prsu nebo prostaty.
    36. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 30 pro indukování apoptózy nádorových buněk prsu nebo prostaty u jedince zasaženého rakovinou prsu nebo prostaty.
    37. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 25, která je vybrána ze skupiny sestávající z (£)-4-fluorstyryl-4-chlorbenzylsulfonu, (£)-4-fluorstyryl-4-brombenzylsulfonu a (£)-4-ehíorstyryl-4-brombenzylsulfonu.
    20 38. Styrylsulfonylová sloučenina podle nároku 26, která je vybrána ze skupiny sestávající z (£)-4-fluorstyiyl-4-chlorbenzylsulfonu, (£pí-fíuorstyryl-4-brornbenzylsulfonu a (£/-4-chlorstyryl-4-brombenzylsulfonu.
    39. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 27, která je vybrána ze skupiny sestávající z
  9. 25 (£)-4-f1uorstyryM-chIorbenzylsulfonu, (£)-4-fluorstyryM-brornbenzylsulfonu a (£)-4-ehlorstyryM-brombenzylsulfonu.
    40. Styrylsulfonylová sloučenina podle nároku 37 pro použití při léčení rakoviny prsu nebo prostaty.
    41. Styrylsulfonová sloučenina podle nároku 3 pro použití při inhibování růstu nádorových buněk prsu nebo prostaty u jedince, který je zasažen rakovinou prsu nebo prostaty.
    42. Styrylsulfonylová sloučenina podle nároku 39.pro použití pří indukování apoptózy nádoro35 vých buněk prsu nebo prostaty u jedince, který je zasažen rakovinou prsu nebo prostaty.
CZ20001174A 1997-10-03 1998-10-01 Styrylsulfonová sloucenina a farmaceutický prostredek ji obsahující CZ299718B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US6093397P 1997-10-03 1997-10-03

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20001174A3 CZ20001174A3 (cs) 2000-09-13
CZ299718B6 true CZ299718B6 (cs) 2008-10-29

Family

ID=22032642

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20001174A CZ299718B6 (cs) 1997-10-03 1998-10-01 Styrylsulfonová sloucenina a farmaceutický prostredek ji obsahující

Country Status (15)

Country Link
US (1) US6359013B1 (cs)
EP (1) EP1027330B1 (cs)
JP (1) JP4294217B2 (cs)
KR (1) KR100579355B1 (cs)
CN (1) CN1163480C (cs)
AT (1) ATE284386T1 (cs)
AU (1) AU741042B2 (cs)
BR (1) BR9814059B1 (cs)
CA (1) CA2305790C (cs)
CZ (1) CZ299718B6 (cs)
DE (1) DE69828079T2 (cs)
IL (1) IL135438A (cs)
NZ (1) NZ503479A (cs)
RU (1) RU2201919C2 (cs)
WO (1) WO1999018068A1 (cs)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6548553B2 (en) 1997-10-03 2003-04-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Styryl sulfone anticancer agents
US6762207B1 (en) * 1999-04-02 2004-07-13 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education (E)-styryl sulfone anticancer agents
WO2000059495A1 (en) * 1999-04-02 2000-10-12 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education (e)-styryl sulfone anticancer agents
CA2375511A1 (en) 1999-06-16 2000-12-21 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education (z)-styryl acetoxyphenyl sulfides as cyclooxygenase inhibitors
US6767926B1 (en) 1999-10-12 2004-07-27 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Method for protecting normal cells from cytotoxicity of chemotherapeutic agents
IL149064A0 (en) * 1999-10-12 2002-11-10 Univ Temple Method for protecting normal cells from cytotoxicity of chemotherapeutic agents
US6486210B2 (en) 2000-04-14 2002-11-26 Temple University—Of the Commonwealth System of Higher Education Substituted styryl benzylsulfones for treating proliferative disorders
US6541475B2 (en) 2000-04-14 2003-04-01 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education α, β-unsaturated sulfones for treating proliferative disorders
CA2424884C (en) 2000-10-05 2009-12-15 E. Premkumar Reddy Substituted (e)-styryl benzylsulfones for treating proliferative disorders
WO2002067913A1 (en) * 2001-02-27 2002-09-06 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education (z)-styrylbenzylsulfones and pharmaceutical uses thereof
US6667346B2 (en) * 2001-02-28 2003-12-23 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Method for protecting cells and tissues from ionizing radiation toxicity with α, β unsaturated aryl sulfones
NZ535232A (en) * 2002-02-28 2007-05-31 Univ Temple Amino-substituted (E)-2,6-dialkoxystyryl 4-substituted benzylsulfones for treating proliferative disorders
IL163608A0 (en) * 2002-02-28 2005-12-18 Univ Temple Amino-substituted sulfonanilides and derivatives thereof for treating proliferative disorders
US7012100B1 (en) 2002-06-04 2006-03-14 Avolix Pharmaceuticals, Inc. Cell migration inhibiting compositions and methods and compositions for treating cancer
AU2004289281C1 (en) * 2003-11-14 2011-12-08 Onconova Therapeutics, Inc. Alpha, beta-Unsaturated sulfoxides for treating proliferative disorders
AU2005222947B2 (en) 2004-03-16 2010-12-23 Onconova Therapeutics Inc. Substituted phenoxy- and phenylthio- derivatives for treating proliferative disorders
US8058313B2 (en) 2004-06-24 2011-11-15 Temple University—Of the Commonwealth System of Higher Education Alpha, beta-unsaturated sulfones, sulfoxides, sulfonimides, sulfinimides, acylsulfonamides and acylsulfinamides and therapeutic uses thereof
US20090306207A1 (en) * 2005-01-05 2009-12-10 Reddy M V Ramana Treatment of Drug-Resistant Proliferative Disorders
US8143453B2 (en) * 2005-02-25 2012-03-27 Temple University—Of the Commonwealth System of Higher Education Unsaturated sulfides, sulfones, sulfoxides and sulfonamides synthesis
US8664272B2 (en) 2006-08-30 2014-03-04 Temple University—Of the Commonwealth System of Higher Education Composition and methods for the treatment of myelodysplastic syndrome and acute myeloid leukemia
CA2663375A1 (en) * 2006-09-15 2008-03-20 Onconova Therapeutics, Inc. Activated cytotoxic compounds for attachment to targeting molecules for the treatment of mammalian disease conditions
EP2091527B1 (en) * 2006-12-13 2016-03-23 Temple University - Of The Commonwealth System of Higher Education Sulfide, sulfoxide and sulfone chalcone analogues, derivatives thereof and therapeutic uses thereof
CA2885217C (en) 2012-09-20 2019-10-08 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Substituted alkyl diaryl derivatives, methods of preparation and uses
ES2864681T3 (es) 2012-12-07 2021-10-14 Onconova Therapeutics Inc Tratamiento del cáncer hematológico refractario a un agente contra el cáncer
US10383831B2 (en) 2015-08-03 2019-08-20 Temple University—Of the Commonwealth System of Higher Education 2,4,6-trialkoxystryl aryl sulfones, sulfonamides and carboxamides, and methods of preparation and use

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4937388A (en) * 1985-08-09 1990-06-26 Imperial Chemical Industries Plc Insecticidal ethers
WO1995019169A2 (en) * 1994-01-07 1995-07-20 Sugen, Inc. Treatment of platelet derived growth factor related disorders such as cancer using inhibitors of platelet derived growth factor receptor
WO1995021613A1 (en) * 1994-02-09 1995-08-17 Sugen, Inc. Compounds for the treatment of disorders related to vasculogenesis and/or angiogenesis
WO1996040629A1 (en) * 1995-06-07 1996-12-19 Sugen, Inc. Tyrphostin-like compounds for the treatment of cell proliferative disorders or cell differentiation disorders

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2532612A (en) 1945-08-29 1950-12-05 Union Oil Co Preparation of unsaturated thio-ethers
US3185743A (en) 1960-08-24 1965-05-25 Union Carbide Corp Production of olefinic compounds from allyl sulfones
US3418101A (en) 1965-12-15 1968-12-24 Pennsalt Chemicals Corp Process for plant desiccation
US3514386A (en) 1967-12-11 1970-05-26 Exxon Research Engineering Co Stereoselective addition of thiols to acetylenic compounds
US3917714A (en) 1972-09-06 1975-11-04 American Cyanamid Co Bis(alkylsulfonyl)vinylbenzenes
US4161407A (en) 1977-10-06 1979-07-17 Eastman Kodak Company Crosslinkable polymers having vinylsulfonyl groups or styrylsulfonyl groups and their use as hardeners for gelatin
US4386221A (en) 1981-10-28 1983-05-31 Eastman Kodak Company Process for the preparation of aryl alkyl sulfones and aryl vinyl sulfones
FR2645536B1 (fr) * 1989-04-10 1991-05-31 Rhone Poulenc Agrochimie Composes herbicides et les compositions les contenant
US5659087A (en) 1995-06-07 1997-08-19 Eli Lilly And Company Diarylvinyl sulfoxides

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4937388A (en) * 1985-08-09 1990-06-26 Imperial Chemical Industries Plc Insecticidal ethers
WO1995019169A2 (en) * 1994-01-07 1995-07-20 Sugen, Inc. Treatment of platelet derived growth factor related disorders such as cancer using inhibitors of platelet derived growth factor receptor
WO1995021613A1 (en) * 1994-02-09 1995-08-17 Sugen, Inc. Compounds for the treatment of disorders related to vasculogenesis and/or angiogenesis
WO1996040629A1 (en) * 1995-06-07 1996-12-19 Sugen, Inc. Tyrphostin-like compounds for the treatment of cell proliferative disorders or cell differentiation disorders

Also Published As

Publication number Publication date
BR9814059B1 (pt) 2010-08-24
CZ20001174A3 (cs) 2000-09-13
DE69828079T2 (de) 2005-12-22
AU741042B2 (en) 2001-11-22
CN1273580A (zh) 2000-11-15
IL135438A (en) 2005-12-18
BR9814059A (pt) 2000-09-26
DE69828079D1 (de) 2005-01-13
IL135438A0 (en) 2001-05-20
RU2201919C2 (ru) 2003-04-10
WO1999018068A1 (en) 1999-04-15
ATE284386T1 (de) 2004-12-15
NZ503479A (en) 2002-08-28
JP4294217B2 (ja) 2009-07-08
CA2305790A1 (en) 1999-04-15
US6359013B1 (en) 2002-03-19
KR20010015689A (ko) 2001-02-26
JP2001519326A (ja) 2001-10-23
KR100579355B1 (ko) 2006-05-12
CA2305790C (en) 2008-09-23
EP1027330A4 (en) 2003-09-10
EP1027330A1 (en) 2000-08-16
EP1027330B1 (en) 2004-12-08
HK1031373A1 (en) 2001-06-15
AU9595498A (en) 1999-04-27
CN1163480C (zh) 2004-08-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ20001174A3 (cs) Styrylsulfonová sloučenina a farmaceutický prostředek ji obsahující
EP1180024B1 (en) Z-styryl sulfone anticancer agents
US6548553B2 (en) Styryl sulfone anticancer agents
US6642410B2 (en) Substituted benzylthioacetic acids and esters
AU2001251615A1 (en) Substituted styryl benzylsulfones for treating proliferative disorders
AU2001251614B2 (en) Alpha,beta-unsaturated sulfones for treating proliferative disorders
EP1173160B1 (en) (e)-styryl sulfone anticancer agents
WO2000059494A1 (en) Styryl sulfone anticancer agents
HK1031373B (en) Styryl sulfone anticancer agents

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20161001