CZ301654B6 - Peptidy, zpusob jejich prípravy a jejich použití - Google Patents
Peptidy, zpusob jejich prípravy a jejich použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ301654B6 CZ301654B6 CZ20080128A CZ2008128A CZ301654B6 CZ 301654 B6 CZ301654 B6 CZ 301654B6 CZ 20080128 A CZ20080128 A CZ 20080128A CZ 2008128 A CZ2008128 A CZ 2008128A CZ 301654 B6 CZ301654 B6 CZ 301654B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- lys
- val
- ile
- peptides
- gly
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 43
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 claims abstract description 4
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims abstract 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract 2
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000016630 Lasioglossum <genus> Species 0.000 claims 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 claims 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000002574 poison Substances 0.000 abstract description 3
- 241000018066 Lasioglossum laticeps Species 0.000 abstract description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 11
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 8
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 3
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[[4-[2-[bis(4-methylphenyl)methylamino]-2-oxoethoxy]phenyl]-(2,4-dimethoxyphenyl)methyl]carbamate Chemical compound COC1=CC(OC)=CC=C1C(C=1C=CC(OCC(=O)NC(C=2C=CC(C)=CC=2)C=2C=CC(C)=CC=2)=CC=1)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 108010050820 Antimicrobial Cationic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000014133 Antimicrobial Cationic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 241000256837 Apidae Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000256856 Vespidae Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002919 insect venom Substances 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 108010051173 lasioglossin I Proteins 0.000 description 1
- 108010007373 lasioglossin II Proteins 0.000 description 1
- 108010001077 lasioglossin III Proteins 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 150000002669 lysines Chemical class 0.000 description 1
- MASXKPLGZRMBJF-MVSGICTGSA-N mastoparan Chemical group CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O MASXKPLGZRMBJF-MVSGICTGSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Rešení se týká nových peptidu izolovaných z jedových vácku samotárských vcel Lasioglossum laticeps následujících vzorcu I až III H-Val-Asn-Trp-Lys-Lys-Val-Leu-Gly-Lys-Ile-Ile-Lys-Val-Ala-Lys-NH.sub.2.n. (I), H-Val-Asn-Trp-Lys-Lys-Ile-Leu-Gly-Lys-Ile-Ile-Lys-Val-Ala-Lys-NH.sub.2.n. (II) a H-Val-Asn-Trp-Lys-Lys-Ile-Leu-Gly-Lys-Ile-Ile-Lys-Val-Val-Lys-NH.sub.2.n. (III), zpusobu jejich prípravy a jejich použití pro výrobu léciva pro lécení mikrobiálních, virových a plísnových onemocnení a pro lécení rakovin.
Description
Peptidy, způsob jejich přípravy a jejich použití
Oblast techniky
Vynález se týká nových peptidů izolovaných z přírodního materiálu následujících vzorců I až III
H-Val-Asn-Trp-Lys-Lys-Val-Leu-Gly-Lys-Ile-Ile-Lys-Val-Aía-Lys-NH^ (I)
H-Val-Asn-Trp-Lys-Lys-Ile-Leu-Gly-Lys-Ile-IIe-Lys-Val-Ala-Lys-NH2 (II)
H-Val-Asn-Trp-Lys-Lys-Ile-Leu-Gly-Lys-Ile-Ile-Lys-Val-Val-Lys-NH2 (ΙΠ), způsobu jejich výroby a jejich použití jako antimikrobiálních, antivirových, protiplísňových a protirakovinných látek.
Dosavadní stav techniky
Pro přežití v přírodě se všechny živé organismy musí bránit proti svým přirozeným nepřátelům, jako jsou například mikroorganismy. První obrana proti mikrobiální infekci, kterou si příroda během evoluce vyvinula, spočívá v sekreci látek peptidové povahy dnes v odborné terminologii označované jako antimikrobiální peptidy [1]. Například v říši hmyzu představují antimikrobiální peptidy hlavní prostředek obrany proti mikrobům [2]. S přihlédnutím k prostředí, ve kterém se hmyz pohybuje, se musí jednat o peptidy velmi účinné. Tyto peptidy jsou schopny velice rychle zabíjet bakterie a některé další mikroorganismy, a to mechanismem zcela odlišným než jaký využívá imunitní systém vyšších organismů. I když tento mechanismus ještě není zcela objasněn, v podstatě spočívá v narušení buněčné membrány tvorbou transmembránových pórů nebo ionto25 vých kanálů. To způsobí únik metabolitů a zborcení celé mikrobiální struktury [3]. Obecné je též známo, že antimikrobiální peptidy u bakterií nevyvolávají rezistenci, jako třeba tradiční antibiotika. Zvláštní skupina peptidů s antimikrobiálním účinkem se nachází vjedu hmyzu řádu Hymenoptera [4]. V přírodě je antimikrobiální účinek peptidů izolovaných z jedu vos, včet, Čmeláků a mravenců většinou sekundární, ajejich hlavní úloha spočívá spíše v toxicitě či vyvolání bolestí a zánětu, jako třeba u peptidů patřících do skupiny mastoparanů [5],
Podstata vynálezu
Tento vynález se týká nových peptidů izolovaných z přírodního materiálu následujících vzorců I až III
H-Val-Asn-Trp-Lys-Lys-V al-Leu-Gly-Ly s-Ile-Ile-Lys- Val-Ala-Lys-NH2 (I)
H-Val-Asn-Trp-Lys-Lys-Ile-Leu-Gly-Lys-Ile-Ile-Lys-Val-Ala-Lys-NH2 (Π)
H-Val-Asn-Trp-Lys-Lys4le-Leu-Gly-Lys-lle-Ile-Lys-Vai-Val-Lys-NH2 (ΠΙ) způsobu jejich výroby a použití peptidů vzorců l až IH jako antimikrobiálních, antivírálních, protiplísftových a protirakovinných látek.
Podrobný popis vynálezu 45
Peptidy vzorců (I, II a III) jsme nazvali lasioglossin I, lasioglossin II a lasioglossin III, a byly izolovány z jedových váčků samotářských včel Lasioglossum laticeps. Peptidy I, II a III mají výrazný antimikrobiální účinek a nízkou hemolytickou aktivitu.
1CZ 3U1654 B6
Jedná se o jedinečné nové peptidy s výraznými antimikrobiálními účinky a minimální hemolytickou aktivitou. Tyto peptidy mají jedinečnou primární strukturu, která tvoří účinnou sekundární strukturu v přítomnosti buněčné membrány a chemických látek membráně podobných.
Sekundární struktura lasioglossinů, která je neuspořádaná ve vodném prostředí, snadno přechází na strukturu α-helixu v přítomnosti látek tuto strukturu podporujících, jako jsou trifluorethanol či SDS [6], či v kontaktu s biologickou membránou. V tzv. Edmundsonově kruhové projekci (Obr 1) je patrný amphipathický charakter [6, 7] lasioglossinů s jednotlivými aminokyselinami io seskupenými do dobře definovaného hydrofobního (v šedém poli) i hydrofilního sektoru. Rozdělení těchto dvou odlišných sektorů na opačné strany α-helixu, nebo-li tzv. amphipathicita [7], hraje výraznou úlohu při interakci antimikrobiálního peptidu s bakteriální membránou a je tedy jedním z nejdůležitějších faktorů vedoucích k narušení bakteriální membrány a v konečném výsledku ke smrti bakterie [8]. V tomto procesu se zároveň uplatňuje kationicita peptidu [6], která je v případě lasioglossinů zajištěna přítomností pěti lysinu soustředěných v hydrofilních sektorech peptidů. Toto prostorové uspořádání umožňuje elektrostatickou atrakci kladně nabitého sektoru peptidů k záporně nabitým fosfátovým skupinám bakteriální membrány. Hydrofobní sektor peptidů je poté vnořen do lipofílní části membrány a po dosažení určité koncentrace peptidu na bakteriální stěně dojde k jejímu narušení. Teoreticky mohou popisované lasioglossiny vzorců I až Hl v tzv. anisotropním prostředí vytvořit strukturu optimálního α-helixu o čtyřech závitech. Tyto helikální struktury jsou stabilizovány spojením jednotlivých závitů pomocí vodíkových můstků mezi kyslíky α-karbonylů jednoho závitu a vodíky -NH- skupin závitu následujícího. Jakékoliv chemické změny provedené v molekulách lasioglossinů vedou ke změně jejich sekundární struktury, čímž dojde ke snížení Či zvýšení jejich biologických aktivit.
Příklady
Příklad 1
Izolace z přírodního materiálu
Včely Lasiolossum laticeps byly pochytány a po několikadenním skladování při -20 °C byly vypreparovány jedové váčky z pěti jedinců. Ty byly extrahovány směsí 50% vodného acetonitrilu s obsahem 0,1% kyseliny trifluoroctové (TFA) (25 μΐ). Extrakt byl frakcionován pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografíe (HPLC) na koloně Vydac C-18 (250 x 4,6 mm) při průtoku 1 ml/min za použití gradientu od 5 % acetonitril/voda/0,1 % TFA do 70 % acetonitril/voda/0,1 % TFA. Hlavní peptidové frakce, které byly detekovány UV absorpcí, byly sebrány a koncentro40 vány v rotačním vakuovém koncentrátoru. Jejich primární struktura byla stanovena pomocí hmotové spektrometrie a metodou automatického Edmanova odbourávání. Lasioglossiny představují hlavní peptidovou složku extraktu.
Příklad 2
Syntéza sloučenin vzorců I, II, III
Na základě stanovené sekvence byly tyto peptidy syntetizovány metodou syntézy peptidů na so pevné fázi (SPPS). Syntéza byla provedena manuálně v 5 ml polypropylenových injekčních stříkačkách s teflonovým filtrem na dně stříkačky s využitím protokolu Fmoc-chemie. Jako pevný nosič byla použita Rink Amide MBHA pryskyřice o substituci 0,7 mmol/g. Chráněné Fmocaminokyseliny byly kondenzovány ve 4-násobném přebytku v dimethylformamidu a ke kondenzaci byl použit diisopropylkarbodiimid v přítomnosti 1-hydroxybenzotriazolu. Lasioglossiny (I,
II a III) byly získány odštěpením z pryskyřice a deprotekcí působením směsi TFA/H2O/TIS (95 :
-22,5 : 2,5) po dobu 3,5 h a poté precipitací terc-buty Imethy letherem. Tímto postupem bylo získáno 100 až 140 mg surových peptidů. Část tohoto materiálu (15 mg) byla v každém případě čištěna preparativní HPLC na koloně Vydac C—18 (250 x 10 mm) při průtoku 3.0 ml/min a s využitím stejného gradientu, jak je popsáno výše. Takto bylo získáno 7-9 mg HPLC Čistých pepti5 dů, jejichž identita byla ověřena hmotovou spektrometrií, jak udává Tabulka 1.
CL JU1034 BO
-3CZ 301654 B6 o ci r-i n m r* r-
| ci | SO |
| ΓΊ | m |
| Γ- | C' |
ύ i—i ai ►3*
Tabulka 1. Sekvence lasioglossinů (I, II a III) i
M >» t
s u
I >
Jl (Λ u Jj en kJ £
I £
<
i-Tip-Lys-Lys-Ile-Leu-Gly-Lys-Ile-Ue-Lys-Val-Val-Lys-NH2 1764,19 1764,9
Ě i 1
73 > > ώ ώ
-4CZ JU1004 BO
Příklad 3
Stanovení antimikrobiální aktivity 5
Antimikrobiální aktivita byla stanovena jako tzv. minimální inhibiční koncentrace (MIC) pozorováním růstu bakterií v přítomnosti různých koncentrací peptidů (Tabulka 2). Bakterie v exponenciální fázi růstu byly přidány k roztoku testovaného antimikrobíálního peptidu o různé koncentraci (0,5 až 100 μΜ) v LB médiu v inkubačních destičkách a inkubovány při 37 °C po 20 h za io stálého třepání v přístroji Bioscreen C. Absorbance byla měřena při 540 nm každých 15 min.
V experimentech bylo použito 1 x 104 - 5 x 104 CFU bakterií. Jako standard byl použit tetracyklin v koncentraci 1 - 50 μΜ.
Tabulka 2. Antimikrobiální a hemolytické aktivity lasioglossinů (I, II a III)
| peptid | antimikrobiální aktivita MIC (μΜ] | hemolytická aktivita IC50 [μΜ] | |||
| B.s. | S.a. | E.c. | P.a | ||
| (D | 1,0 | 20 | 2,4 | 22 | >200 |
| (H) | 1,0 | 12,5 | 2,0 | 20 | >200 |
| (ΙΠ) | 1,0 | 5,4 | 2,0 | 23 | >200 |
B.s,. Bacillus subtilis; S.a., Staphylococcus aureus; E.c., Escherichia coli; P.a„ Pseudomonas 20 aeruginosa
Příklad 4
Stanovení hemolytické aktivity
Peptidy v koncentraci 1-100 (200) μΜ byly inkubovány s potkaními červenými krvinkami (5%) v 0,2 ml fyziologického roztoku po dobu 1 h při 37 °C. Poté byly vzorky centrifugovány při 250 g po dobu 5 min, Absorbance supematantu byla stanovena při 540 nm. Jako kontrola pro
1 00% hemolýzu byl místo peptidu použit 0,2% roztok TRITONU XI00. Výsledky testování jsou uvedeny v Tabulce 2.
Příklad 5
Cytostatický účinek na rakovinné buňky
Rakovinné buňky byly inkubovány s peptidy v 2-20 mikromolámí koncentraci v patřičných růstových médiích po dobu 24, 48 nebo 72 hodin a poté se počet živých buněk stanovoval rutin-5CZ JU1654 B6 nimi testy např. MTT. Stanovovala se koncentrace peptidu IC50, při které přežívá 50 % buněk vzhledem ke kontrolám (místo peptidu pouze fyziologický roztok). V předběžných testech byly použity buňky: myší lymfatické leukémie L1210, lidské akutní lymfoblastické leukémie CCRFCEM T, lidské promyelotické leukémie HL-60, lidského karcinomu děložního čípku HeLaS3 a buněčná linie PC 12 odvozená z nádoru pheochromocytomu potkaní adrenální meduly. Peptidy lasioglossiny (I, II a III) vykazovaly IC50 4-20 mikromolámí (Tabulka 3).
Tabulka 3. Cytostatický účinek lasioglossinů (I, II a III) na rakovinné buňky
| Peptid | IC50 [μΜ] | ||||
| L1210 | CCRF-CEMT | HL-60 | HeLaS3 | PC12 | |
| (I) | 20 | ||||
| (11) | 7.11 | 9,06 | 7,67 | >10 | 15 |
| (IH) | 4,72 | 4,99 | 4,44 | 8,40 | 10 |
Literatura
1. Hancock R. E. W., Sáhl H.-G. Antimicrobial and host-defense peptides as new antiinfective therapeutic strategies. Nátur. Bitech. 24, 1551-1557 (2006).
2. Otvos L. Jr. Antimicrobial peptides isolated from insects. J. Peptide Sci. 6,497-511 (2000).
3. Oren Z, Shai Y. Mode of action of linear amphipathic α-helical antimicrobial peptides.
Biopolymers 47, 451-463 (1998).
4. Kuhn-Nentwig L. Antimicrobial and cytolytic peptides of venomous arthropods. Cell. Mol. Life Sci. 60, 2651-2668 (2003).
5. Mendes M. A., de Souza Β. M, Palma M. S. Structural and biologieal characterization of three novel mastoparan peptides from the venom of the neotropical sociál wasp Protopolybia exigua (Saussure), Toxicon 45; 101-106 (2005).
6. Tossi A., Sandri L., Giangaspero A. Amphipathic, α-helical antimicrobial peptides. Biopolymers (Peptide Science) 55,4-30 (2000).
7. Pathak N., Salas-Auvert R., Ruche G., Janna Μ-H., McCarthy D., Harrison R. G. Comparison of the effect of hydrophobicity, amphiphilicity, and a-helicity on the activities of antimicrobiol peptides. Proteins. Struct. Funct. Genet. 22, 182-86 (1995).
8. Yeman M. R., Yount N. Y. Mechanisms of antimicrobial peptide action and resistance. Pharm. Rev. 55, 27-55 (2003).
Claims (4)
1. Peptidy následujících vzorců I až 111
H-Val-Asn-Tip-Lys-Lys-Val-Leu-Gly-Lys-Ile-Ile-Lys-Val-Ala-Lys-NHj
H-Val-Asn-Trp-Lys-Lys-Ile-Leu-Gly-Lys-Ile-Ile-Lys-Val-Ala-Lys-NHi
H’Val-Asn-Trp-Lys-Lys-Ile-Leu-Gly-Lys-lle-Ile-Lys-Val-Val-Lys-NH2 (I) (H) (ΙΠ)
2. Způsob přípravy peptidů vzorce I až III podle nároku 1, vyznačující se tím, že se io po vypreparování jedových váčků včel Lasioglossum laliceps tyto váčky extrahují směsí 50% vodného acetonitrílu s obsahem 0,1% kyseliny trifluorooctové (TFA) (25 μΐ), extrakt se frakcionuje vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií za použití gradientu od 5 % acetonitrilu/voda/0,1 % TFA do 70 % acetonitrilu/voda/0,1 % TFA a hlavní peptidové frakce se zpracují, čímž se získají peptidy vzorce I až III.
3. Způsob přípravy peptidů vzorce I až III podle nároku 1, vyznačující se tím, že se syntetizují metodou syntézy peptidů na pevné fázi, SPPS.
4. Použití peptidů vzorců I až III podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčení mikrobiálních, 20 virových a plísňových onemocnění a pro léčení rakovin.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20080128A CZ301654B6 (cs) | 2008-03-04 | 2008-03-04 | Peptidy, zpusob jejich prípravy a jejich použití |
| AT09716413T ATE555120T1 (de) | 2008-03-04 | 2009-03-03 | Neue antimikrobielle peptide und ihre anwendung |
| PCT/CZ2009/000034 WO2009109156A2 (en) | 2008-03-04 | 2009-03-03 | Novel antimicrobial peptides and their application |
| EP09716413A EP2265631B1 (en) | 2008-03-04 | 2009-03-03 | Novel antimicrobial peptides and their application |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20080128A CZ301654B6 (cs) | 2008-03-04 | 2008-03-04 | Peptidy, zpusob jejich prípravy a jejich použití |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2008128A3 CZ2008128A3 (cs) | 2009-09-16 |
| CZ301654B6 true CZ301654B6 (cs) | 2010-05-12 |
Family
ID=41061047
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20080128A CZ301654B6 (cs) | 2008-03-04 | 2008-03-04 | Peptidy, zpusob jejich prípravy a jejich použití |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ301654B6 (cs) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ301595B6 (cs) * | 2008-06-10 | 2010-04-28 | Ústav organické chemie a biochemie, Akademie ved CR v. v. i. | Nové syntetické peptidy a jejich použití |
-
2008
- 2008-03-04 CZ CZ20080128A patent/CZ301654B6/cs not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Cerovsky a kol. (2008) Peptides 29, 992-1003 * |
| Krishnakumari a Nagaraj (1997) J. Peptide Res. 50, 88-93 * |
| Kuhn-Nentwig (2003) Cell. Mol. Life Sci. 60, 2651-2668 * |
| Otvos a kol. (2000) J. Peptide Sci. 6, 497-511 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2008128A3 (cs) | 2009-09-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU758698B2 (en) | Anti-endotoxic, antimicrobial cationic peptides and methods of use therefor | |
| Papo et al. | Host defense peptides as new weapons in cancer treatment | |
| JP5688290B2 (ja) | 抗菌性ペプチド | |
| Lee et al. | Hydrophobicity and Helicity Regulate the Antifungal Activity of 14-Helical β‑Peptides | |
| Rajasekaran et al. | The design of a cell-selective fowlicidin-1-derived peptide with both antimicrobial and anti-inflammatory activities | |
| WO2013038201A1 (en) | Short designed peptides possessing selective actions against bacteria and cancer cells | |
| TWI403330B (zh) | 低血球溶解性之抗微生物胜肽、醫藥組成物及其用途 | |
| EP2265631B1 (en) | Novel antimicrobial peptides and their application | |
| JP6124139B2 (ja) | 低赤血球溶解性の抗微生物ペプチド、医薬組成物およびその使用 | |
| EP1599499A2 (en) | Periodic antimicrobial peptides | |
| CA2451310C (en) | Antimicrobial peptides | |
| KR20140039449A (ko) | 다제내성균에 높은 항균 효과를 보이는 프로태티아마이신 항균펩타이드 유도체 및 그 용도 | |
| KR20030024961A (ko) | Ｃａ－ｍａ 펩타이드의 아미노산 중 하나 또는 그 이상을치환하여 ＋ 전극과 소수성 영역이 증가된 신규한펩타이드 및 그를 포함하는 약학적 조성물 | |
| Soares et al. | Antimicrobial peptides: a review of how peptide structure impacts antimicrobial activity | |
| CZ200983A3 (cs) | Antimikrobiální peptidy | |
| KR101847051B1 (ko) | 병원균에 대한 항생활성을 갖는 펩타이드 및 이를 포함하는 항생 펩타이드 조성물 | |
| Kim et al. | Effects of the synthetic coprisin analog peptide, CopA3 in pathogenic microorganisms and mammalian cancer cells | |
| KR20030077363A (ko) | 항균 활성을 갖는 펩타이드, 이들의 유도체 및 이들을포함하는 항균 조성물 | |
| Blondelle et al. | Progress in antimicrobial peptides | |
| CZ301822B6 (cs) | Peptid, zpusob jeho prípravy a jeho použití | |
| CZ2008128A3 (cs) | Nové peptidy, zpusob jejich prípravky a jejich použití | |
| Dimitrova et al. | Antimicrobial peptides and temporin family in the context of rising resistance-view on current development | |
| CZ301595B6 (cs) | Nové syntetické peptidy a jejich použití | |
| Park et al. | Antibiotic activity of Leu-Lys rich model peptides | |
| CZ301774B6 (cs) | Syntetické peptidy a jejich použití |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20110304 |