CZ302009B6 - Ockovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulacní cinidlo, kompozice pro imunitní stimulaci u kone, konská imunogenní kompozice nebo vakcína, použití uvedeného ockovacího adjuvans nebo nespecifického stimulacního cinidla a zpusob produkce ockovacíh - Google Patents
Ockovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulacní cinidlo, kompozice pro imunitní stimulaci u kone, konská imunogenní kompozice nebo vakcína, použití uvedeného ockovacího adjuvans nebo nespecifického stimulacního cinidla a zpusob produkce ockovacíh Download PDFInfo
- Publication number
- CZ302009B6 CZ302009B6 CZ20014377A CZ20014377A CZ302009B6 CZ 302009 B6 CZ302009 B6 CZ 302009B6 CZ 20014377 A CZ20014377 A CZ 20014377A CZ 20014377 A CZ20014377 A CZ 20014377A CZ 302009 B6 CZ302009 B6 CZ 302009B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- equine
- vaccine
- composition
- horse
- adjuvant
- Prior art date
Links
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 title claims abstract description 105
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 76
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 66
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 50
- 241000283086 Equidae Species 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title abstract description 12
- 230000036039 immunity Effects 0.000 title abstract description 8
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title abstract description 7
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims abstract description 57
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims abstract description 51
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 21
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 21
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 16
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 16
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 55
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 claims description 26
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 claims description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 22
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 18
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 13
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 6
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 6
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 claims description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 5
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 claims description 3
- 241000287219 Serinus canaria Species 0.000 claims description 3
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 claims description 2
- 241000230501 Equine herpesvirus sp. Species 0.000 claims description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims description 2
- 241000282330 Procyon lotor Species 0.000 claims 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 abstract description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 abstract 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 7
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- -1 n Species 0.000 description 5
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 4
- WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 2,3-di(tetradecoxy)propyl-(2-hydroxyethyl)-dimethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCO)OCCCCCCCCCCCCCC WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 description 2
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 2
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-2-(prop-2-enoxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CO)COCC=C RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 20-hydroxyecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 0.000 description 1
- GHUXAYLZEGLXDA-UHFFFAOYSA-N 8-azido-5-ethyl-6-phenylphenanthridin-5-ium-3-amine;bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 GHUXAYLZEGLXDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- XFTWUNOVBCHBJR-UHFFFAOYSA-N Aspergillomarasmine A Chemical compound OC(=O)C(N)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O XFTWUNOVBCHBJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 description 1
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 1
- 241000701081 Equid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701089 Equid alphaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 208000000832 Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 101150082239 G gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 101000740205 Homo sapiens Sal-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 101000746372 Mus musculus Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 108700006640 OspA Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 102100037204 Sal-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N Vinyl ether Chemical compound C=COC=C QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940086737 allyl sucrose Drugs 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 229940052303 ethers for general anesthesia Drugs 0.000 description 1
- 125000000816 ethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000046157 human CSF2 Human genes 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000010841 mRNA extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000005395 methacrylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 229940099789 ospa protein Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 229960000834 vinyl ether Drugs 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
- C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Predmetem rešení je ockovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulacní cinidlo pro kone obsahující in vivo expresní vektor obsahující nukleotidovou sekvenci definovanou v SEQ ID No.8 kódující konský GM-CSF za podmínek umožnujících expresi u kone funkcního konského proteinu GM-CSF, jakož i kompozice pro imunitní stimulaci u kone, obsahující výše definované nespecifické imunostimulacní cinidlo a veterinárne prijatelný excipient nebo nosic, a konská imunogenní kompozice nebo vakcína, obsahující výše definované ockovací adjuvans, imunogenní nebo ockovací prípravek proti konskému patogenu a veterinárne prijatelný excipient nebo nosic. Predmetem rešení je rovnež zpusob produkce ockovacího adjuvans nebo nespecifického imunostimulacního cinidla pro kone zahrnující transformaci nebo transfekaci bunky in vitro expresním systémem obsahujícím a exprimujícím nukleotidovou sekvenci definovanou v SEQ ID No.8 a kultivaci bunky za podmínek umožnujících expresi konského proteinu GM-CSF kódovaného nukleotidovou sekvencí definovanou v SEQ ID No.8, jakož i použití nespecifického stimulacního cinidla nebo ockovacího adjuvans pro prípravu kompozice pro imunitní stimulaci u kone.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká očkovacího adjuvans nebo nespecifického imunostimulačního činidla, kompo10 zice pro imunitní stimulaci u koně, koňské imunogenní kompozice nebo vakcíny, použití uvedeného očkovacího adjuvans nebo nespecifického stimulačního Činidla a způsobu produkce očkovacího adjuvans.
Dosavadní stav techniky
První objevy stimulačního faktoru tvoření granulo-makrofágových kolonií („GranulocyteMacrophage Colony-Stimulating Factor“ neboli GM-CSF) jsou z roku 1977 (Burgess A. W. a kol., J. Biol. Chem. 252, str. 1998 až 2003, 1977). Jde o myší GM-CSF vyčištěný ze super20 natantu kultury myších plic.
Biologické aktivity GM-CSF jsou popsány pro myší a lidský GM-CSF (Clark S. C. a kol·, Science 230, str. 1229,1987; Grant S. M. a kol·, Drugs 53, str. 516,1992).
GM-CSF má Četné fyziologické úlohy (Dy M., „Les cytokines“, Cavaillon J. M. vydavatel Masson, Paříž, Francie, str. 43 až 56, 1996). GM-CSF hlavně stimuluje produkci, vývoj a tvoření kolonií granulocytů, makrofágů, eosinofitů a megakaryocytů. GM-CSF vyvolává hlavně makrofágovou cytotoxicitu, stimuluje na protilátkách závislou cytotoxickou aktivitu (ADCC) a shromažďování leukocytů v úrovni zánětlivých míst.
Byly už objeveny GM-CSF různých druhů zvířat
Řady nukleotidových sekvencí, kódujících GM-CSF, známých u různých druhů kolísají mezi 381 až 432 nukleotidy. Nukleotidové sekvence lidské a myší mají 69% stupeň homologie. Stupeň homologie je na úrovni sekvence aminokyselin 54% (Cantrell M. A. a kol. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 82, str. 6250 až 6254, 1985). Tato homologie však neumožňuje žádnou zvýšenou aktivitu mezi dvěma druhy lidským a myším (Metcalf D. a kol., Blood 67, str. 37 až 45, 1986).
Podávání heterologového GM-CSF, tedy pocházejícího z jiného druhu, nežje druh léčený, neu40 možňuje získat optimální adjuvanční účinek, zejména stimulaci aktivity hematopoitních buněk a podstatné zvýšení imunitní odezvy. I
Až dosud nemohl být objeven koňský GM-CSF. Avšak tento cytokin představuje významný prospěch pro léčebné a vakcinační aplikace u koní.
Nyní se podařilo izolovat a sekvencovat gen koňského GM-CSF. Tento gen byl izolován po zesílení řetězce polymerázou (ACP nebo PCR) za pomoci oligonukleotidů popsaných v připojených příkladech.
Gen koňského GM-CSF má řetězec 432 nukleotidů (SEQ ID No. 8 a obr. 1) a kóduje protein 144 aminokyselin (SEQ ID No 9 a obr. 1). Protein kódovaný tímto genem představuje homologii alespoň 75% s polypeptidickými sekvencemi GM-CSF ostatních zvířecích druhů.
- i CZ 302009 Β6
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je očkovací adjuvans nebo specifické imunostimulační činidlo pro koně obsahující in vivo expresní vektor obsahující nukleotidovou sekvenci definovanou v SEQ ID No. 8 kódující koňský GM-CSF za podmínek umožňujících expresi u koně funkčního koňského proteinu GM-CSF.
Vektorem je výhodně virový vektor nebo plazmid. Virový vektor je výhodně zvolen ze souboru sestávajícího z viru neštovic, adenoviru a herpesviru. Herpesvirem je výhodně koňský herpesvir. Vir neštovic je výhodně zvolen ze souboru sestávajícího z viru kravských neštovic, kanárcích neštovic, drůbežích neštovic, prasečích neštovic, mýval ích neštovic a velbloudích neštovic.
Předmětem vynálezu je rovněž kompozice pro imunitní stimulaci u koně, obsahující výše definované nespecifické imunostimulační činidlo a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič.
Předmětem vynálezu je rovněž koňská imunogenní kompozice nebo vakcína, obsahující výše definované očkovací adjuvans, imunogenní nebo očkovací přípravek proti koňskému patogenu a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič.
Imunogenní nebo očkovací přípravek je výhodně zvolen ze souboru sestávajícího z inaktivovaného přípravku, zeslabeného živého přípravku, podjednotkového přípravku a rekombinantního přípravku. Výhodně koňská imunogenní kompozice nebo vakcína, obsahuje výše definované očkovací adjuvans, ve kterém vektorem je in vivo expresní vektor dodatečně obsahující alespoň jednu nukleotidovou sekvenci kódující alespoň jeden koňský imunogen nebo alespoň jeden imunologicky aktivní fragment imunogenu koňského patogenu a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič. Výhodně koňská imunogenní kompozice nebo vakcína obsahuje výše definované očkovací adjuvans a alespoň jeden in vivo expresní vektor obsahující alespoň jednu nukleotidovou sekvenci kódující alespoň jeden koňský imunogen nebo alespoň jeden imunologicky aktivní fragment imunogenu koňského patogenu a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič.
Předmětem vynálezu je rovněž očkovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulační činidlo pro koně, sestávajícího z koňského proteinu GM-CSF produkovaného expresním systémem obsahujícím nukleotidovou sekvenci definovanou v SEQ ID No.8.
Předmětem vynálezu je rovněž výše definované očkovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulační činidlo, ve kterém expresním systémem je in vitro expresní vektor virového nebo plazmidového původu. Výhodně je in vitro virovým expresním systémem je baculovirus.
Předmětem vynálezu je rovněž způsob produkce očkovacího adjuvans nebo nespecifického imunostimulaČního činidla pro koně zahrnující transformaci nebo transfekci buňky Jn vitro expresním systémem obsahujícím a exprimujícím nukleotidovou sekvenci definovanou v SEQ ID No.8 a kultivaci buňky za podmínek umožňujících expresi koňského proteinu GM-CSF kódovaného nukleotidovou sekvencí definovanou v SEQ ID No.8.
Výhodně je buňka zvolena ze souboru sestávajícího z hmyzí buňky, prokaryotické buňky, eukaryotické buňky, kvasničné buňky a savčí buňky. Výhodně je prokaryotickou buňkou buňka E. colí. Výhodně je kvasničnou buňkou buňka Saccharomyces cerevisiae. Výhodně je savčí buňkou buňka křečka. Výhodně je savčí buňkou koňská buňka.
Předmětem vynálezu je rovněž kompozice pro imunitní stimulaci u koně, obsahující výše definované nespecifické imunostimulační činidlo a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič.
-2CZ 302009 B6
Předmětem vynálezu je rovněž koňská imunogenní kompozice nebo vakcína, obsahující výše definované očkovací adjuvans, imunogenní nebo očkovací přípravek proti koňskému patogenu a veterinárně přijatelný excípient nebo nosič.
Výhodně je imunogenní nebo očkovací přípravek zvolen ze souboru sestávajícího z inaktivovaného přípravku, zeslabeného živého přípravku, podjednotkového přípravku a rekombinantního přípravku.
Předmětem vynálezu je rovněž použití výše definovaného nespecifického stimulačního činidla io pro přípravu kompozice pro imunitní stimulaci u koně.
Předmětem vynálezu je rovněž použití výše definovaného očkovacího adjuvans pro přípravu koňské imunogenní kompozice nebo vakcíny dodatečně obsahující koňský imunogen nebo imunogenní očkovací přípravek.
Sekvence podle vynálezu se s výhodou zavádí do expresních vektorů in vivo v podmínkách umožňujících expresi funkčního proteinu koňského GM-CSF u koně a případně nukleotidovou sekvenci kódující alespoň jeden imunogen nebo alespoň jeden imunologicky působící fragment nebo alespoň jeden epitop imunogenu. Těmito expresního vektory mohou být plazmidy, virové vektory, jako je virus neštovic, například virus kravských neštovic, virus ptačích neštovic (kanárek, folw) mezi něž patří viry neštovic specifické pro druh (vepř, racoon, velbloud), adenoviry a viry oparu, jakoje vir koňského oparu.
Pod pojmem plazmíd se míní všechny jednotky přepisu ADN ve formě polynukleotidové sek25 vence zahrnující sekvenci koňského genu GM-CSF a prvky potřebné kjeho expresi in vivo. Přednost se dává formě cirkulámího plazmidu sbaleného nebo neslabeného. Do rámce vynálezu spadá také lineární forma.
Každý plazmíd má promotor schopný zaručit v hostitelských buňkách expresi genu začleněného v závislosti na něm. Obecně jde o silný eukaryotický promotor a zejména o ranný promotor cytomegaloviru CMV-IE, lidského nebo myšího původu nebo případně jiného původu jako krysího nebo morčatového. Ještě obecněji je promotor virového nebo buněčného původu. Jako virový promotor, jiný než CMV-IE, je možno uvést ranný nebo opožděný promotor viru SV40 nebo promotor LTR viru Rousova sarkomu. Může se jednat také o promotor viru, z něhož pochází gen, například čistý genový promotor. Jako buněčný promotor je možno uvést promotor genu cytoskeletu, jako je například promotor desminu nebo ještě promotor aktinu. Jelikož je ve stejném plazmidu obsaženo více genů, mohou se vyskytovat ve stejné transkripční jednotce nebo ve dvou odlišných jednotkách.
Plazmidy mohou rovněž obsahovat jiné regulační nebo transkripční prvky jako jsou například stabilizující sekvence typu intronu II genu králičího β-globinu (van Ooyen a kol, Science 206, str. 337 až 344, 1979), signální sekvence proteinu kódovaná genem aktivátoru tkáňového plazmidogenu (tPA Montgomery a kol., Cell. Mol. Biol. 43, str. 285 až 292, 1997) a signál polyadenylace (póly A), jmenovitě genu hovězího růstového hormonu (bGH) (USA 5 122 458) nebo genu králičího β-globinu.
Do rozsahu vynálezu spadají také imunogenní sloučeniny a vakcíny obsahující protein koňského GM-CSF podle vynálezu a alespoň imunogenní nebo vakcínový prostředek koňského patogenu a excípient nebo veterinárně přijatelný nosič. Pod pojmem imunogenní prostředek se zde míní všechny prostředky schopné u koně vyvolat imunitní odezvu zaměřenou proti uvažovanému koňskému patogenu, odezvu, která je zvětšena přítomností proteinu GM-CSF. Jde s výhodou o vakcínový prostředek schopný vyvolat účinnou ochranu nebo určitý stupeň ochrany proti patogenu, stupeň ochrany, který se zvyšuje přítomností koňského proteinu GM-CSF. Imunogenní a vakcínové prostředky podle vynálezu zahrnují všechny známé typy, jako jsou prostředky inaktivované, živé zeslabené, podružné a rekombinantní (používající expresní vektor
-3CZ 302009 B6 in vivo zejména virového nebo plazmidového původu). Jak bylo shora uvedeno, může být protein GM-CSF připojen k imunogennímu nebo vakcínovému prostředku k vytvoření za přítomnosti veterinárně přijatelného excipientú nebo nosiče, imunogenního nebo vakcínového prostředku pro přímé podávání. Je možno také uvažovat o kombinování proteinu GM-CSF se systémem prodlouženého uvolňování zaměřeným na postupné uvolňování proteinu.
S výhodou se podle vynálezu dává přednost uplatnění proteinu GM-CSF in vivo, za použití expresního vektoru in vivo, jak shora popsáno. V tomto případě je také výhodné, aby imunogenní nebo vakcínový prostředek byl také rekombinantního typu, založený na použití expresního vekto10 ru in vivo stejného nebo odlišného typu. Je možno také předvídat použití téhož expresního vektoru in vivo obsahujícího a exprimujícího alespoň jeden imunogen koňského patogenu a koňský protein GM-CSF.
Výhodami použití GM-CSF k vakcinaci jsou zejména snížení dávky imunogenu nebo vektoru is nebo použité ADN. Kromě toho u některých zvířat nereagujících na podávání obvyklé vakcíny, umožňuje použití GM-CSF stimulaci imunogenní odezvy a její zvyšování až na úroveň ochrany.
Vynález tedy zahrnuje s výhodou imunogenní a v akci nač ní prostředky, které obsahují:
- expresní vektor in vivo obsahující nukleotidovou sekvenci kódující koňský protein GM-CSF, za podmínek umožňujících expresi u koně funkčního koňského proteinu GM-CSF,
- alespoň jeden expresní vektor in vivo obsahující alespoň jednu nukleotidovou sekvenci kódující alespoň jeden koňský imunogen, přičemž tento vektor nebo některé nebo všechny tyto vektory (pokud jde o více vektorů kódujících odlišné imunogeny) mohou sestávat také z vektoru GM-CSF (přičemž vektor obsahuje alespoň jednu imunogenní sekvenci GM-CSF, a
- veterinárně přijatelný nosič nebo excipient.
Podle výhodného provedení zahrnuje vynález imunogenní sloučeniny a vakcíny typu ADN obsahující plazmíd kódující a expresující koňský GM-CSF podle vynálezu a alespoň jeden jiný plazmid kódující a expresující koňský imunogen nebo imunologicky účinný fragment z něho odvozený. Příklady konstrukce plazmidů, použitelných podle vynálezu a obsahujících koňský imunogen, jsou popsány (světový patentový spis číslo WO-A-98/03198). Vynález zahrnuje rovněž vakcíny ADN obsahující plazmid kódující a expresující současně koňský protein GMCSF a alespoň jeden koňský imunogen.
Vynález je zaměřen na všechny koňské patogeny. Zvláště se uvádějí: koňský virus herpes typu 1 nebo typu 4 (vynález je zaměřen na kombinaci obou typů), virus koňské chřipky, tetanu, boreliosy Borrelia burgdorferi, encefalitidy východní, západní, venezuelské a virus vztekliny. Pro podjednotkové a rekombinantní vakcíny se koňské imunogeny volí s výhodou ze souboru zahrnujícího glykoproteiny gB, gC, gD viru koňského oparu typu 1 nebo typu 4, hemaglutinin (HA) a nukleprotein (NP) viru koňské chřipky, podjednotkový fragment C toxinu tetanu, protein OspA Borrelia burgdorferi, geny E2 a C koňské encefalitidy východní, západní, venezuelské, gen G viru vztekliny.
Vynález se týká také stimulačních prostředků specifických pro imunitu, tedy použitelných jako všeobecný stimulant imunity koní. Tyto prostředky se podávají koňům napadeným nebo nenapadeným určitou patologií, obecně nezávisle na všech vakcínách k posílení imunitní obrany koně. Tyto prostředky obsahují GM-CSF podle vynálezu ve všech dále popsaných formách, protein nebo rekombinant s výhodou rekombinant (expresní vektoru in vivo virový nebo plazmidový) a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič. Vlastnosti těchto vektorů byly už popsány.
Stimulující nespecifikované prostředky a imunogenní prostředky a vakcíny podle vynálezu mohou také obsahovat jeden nebo několik adjuvantů imunity, jmenovitě vybraných mezi obvykle používanými k vakcinaci koní proti (účinnosti) uvažovaného patogenu nebo patogenů. Klasické stimulační prostředky a imunogenní a vakcinační prostředky (neaktivované, živé zeslabené, pod-4CZ 302009 B6 jednotkové) mohou také obsahovat jako klasické adjuvantové prostředky karbomer, hydroxidu hlinitého, nebo mohou být formulovány ve formě emulse olej ve vodě. Jako stimulační prostředky a prostředky imunogenní a vakcinační rekombinantní na bázi virového expresního vektoru je možno jmenovat emulze olej ve vodě.
Podle výhodného provedení vynálezu je možno s výhodou formulovat známým způsobem stimulační prostředky plazmidového typu a imunogenní prostředky a vakcíny plazmidového typu, plazmid kódující a expresující koňský GM-CSF, plazmid kódující a expresující GM-CSF a alespoň jeden koňský imunogen, stejně jako směsi plazmidů obsahující koňský imunogen a alespoň jeden plazmid kódující koňský imunogen, s kationtovým lipidem obsahujícím kvartémí amoniovou sůl obecného vzorce
CH3
Rl-0-CH2-CH-CH2-N*-Rž-X □Rl CH3 kde znamená
Ri lineární alifatickou nasycenou nebo nenasycenou skupinu se 12 až 18 atomy uhlíku,
R2 jinou alifatickou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku a X hydroxylovou skupinu nebo aminoskupinu.
Výhodný je DMRIE (N-(2-hydroxyethyí)-N,N-dimethy 1-2,3-bis(tetradecyloxy)-l-propanamonium, světový patentový spis číslo (WO-A-9634109) s výhodou spojený s neutrálním lipidem, DOPE (dioleoylfosfatidylethanolamin) k vytvoření přednostně DMRIE-DOPE. S výhodou se vytváří směs rekombinantního vektoru s tímto adjuvantem improvizovaně a před podáním koňovi je výhodné ponechat čas na vytvoření komplexu takto vytvořené směsi, například 10 až 60 minut, obzvláště 30 minut.
Je-li přítomen DOPE je molámí poměr DMRIE:DOPE 95:5 až 5:95, obzvláště 1:1.
Hmotnostní poměr plazmidů kadjuvantu DMRIE nebo DMRIE-DOPE může být 50:1 až 1:10, jmenovitě 10:1 až 1:5, s výhodou 1:1 až 1:2.
Ptxlle jiného výhodného provedení vynálezu pro stimulační prostředky rekombinantního typu a pro imunogenní prostředky a vakcíny rekombinantního typu (virový nebo plazmidový vektor) je možno použít jako adjuvantu polymerů akrylové nebo metakrylové kyseliny a kopolymerů maleinanhydridu a alkenylového derivátu. Přednost se dává polymerům akrylové nebo metakrylové zesítěné kyseliny, jmenovitě polyalkeny lovými ethery cukrů nebo polyalkoholů. Tyto sloučeniny jsou známy pod označením karbomery (Pharmeuropa sv. 8, č. 2, červen 1996). Pracovníci v oboru se odkazují také na americký patentový spis US 2 909 452, popisující takové akrylové polymery zesítěné polyhydroxylovou sloučeninou mající nejméně 3 hydroxylové skupiny, s výhodou méně než 8 atomů vodíku a alespoň 3 hydroxylové skupiny substituované nenasycenými alifatickými skupinami majícími alespoň 2 atomy uhlíku. Výhodnými skupinami jsou skupiny se 2 až 4 atomy uhlíku, například skupina vinylová, allylová a další nenasycené ethylenové skupiny. Nenasycené skupiny mohou samy obsahovat substituenty, jako je skupina methylová. Obchodní produkty Carbopol® (BF Goodrich, Ohio, USA) jsou obzvlášť vhodné. Jsou zesítěné allylem sacharózy nebo allylpentaerytritolem. Příkladně se uvádějí Carbopol® 974P, 934P a 97 IP.
-5CZ 302009 B6
Z kopolymeru maleinanhydridu a afkenylových derivátů se dává přednost EMA® (Monsanto), což jsou kopolymery maleinanhydridu a ethylenu, lineární nebo zesítěné, například zesítěné divinyletherem (J. Fields a kol., Nátuře 186, str. 778 až 780, 1960). Polymery kyseliny akrylové nebo metakrylové a EMA® sestávají s výhodou ze základních motivů obecného vzorce
Ri
K2 i
-C -(CH2V i
COOH —- C -CCH2)x i
COOH kde znamená
Ri a R2 na sobě nezávisle atom vodíku nebo methylovou skupinu, x Onebo l,s výhodou l, y 1 nebo 2, přičemž x + y = 2
Pro EMA®, x = 0 a y = 2. Pro karbomery x = y = 1.
Rozpuštěním těchto polymerů ve vodě se získá kyselý roztok, který se neutralizuje s výhodou až na fyziologickou hodnotu pH k získání roztoku adjuvantu, do kterého se vakcína začlení. Karboxylové skupiny polymeru jsou tedy částečně ve formě COO“.
S výhodou se připraví roztok karbomeru nebo EMA® v destilované vodě, s výhodou v přítomnosti chloridu sodného, přičemž získaný roztok má kyselou hodnotu pH. Tento roztok karbomeru se zředí přidáním potřebného množství (k získání žádané finální koncentrace) nebo jeho významným podílem, vody nasycené chloridem sodným, s výhodou fyziologického roztoku (obsah chloridu sodného 9 g/1) a jednou nebo několikrát se současně nebo následně neutralizuje (na hodnotu pH 7,3 až 7,4), s výhodou hydroxidem sodným. Tento roztok s fyziologickou hodnotou pH se použije jako takový ke smísení s imunogenním prostředkem nebo s vakcínou, zejména konzervovanou v lyofilizované formě, kapalné nebo zmrazené.
Koncentrace polymeru v konečném vakcínovém prostředkuje 0,01% až 2%, obzvláště 0,06% až 1%, s výhodou 0,6%, vyjádřená jako hmotnost/objem.
Vynález se týká dále způsobu stimulace imunity a/nebo imunizace a/nebo vakcinace koní, při kterém se podává zvířeti, obzvláště koňovi stimulační, imunizační nebo vakcinační prostředek podle vynálezu. S výhodou jde o podání parenterální cestou, jako je cesta intramuskulámí, intradermální a podkožní. Je možno jedno nebo několik podání obzvláště v případě vakcinace.
Množství ADN použité ve stimulačním prostředku a v imunogenním a vakcinačním prostředku podle vynálezu je přibližně 10 gg až přibližně 2000 gg a s výhodou přibližně 50 až 100 gg pro daný plazmíd. Pracovníci v oboru jsou schopni přesně definovat účinnou dávku ADN k použití pro každý léčebný nebo vakcinační protokol.
Použije-Ii se živého vektoru, mohou být činit 104 až 1010 ufp (unité formatrice de plaque), s výhodou 106 až 108 pfu.
-6CZ 302009 B6
U prostředků obsahujících protein GM-CSF mohou být dávky 1 a 5 mg, s výhodou 50 pg a 1 mg.
Objemy dávek mohou činit jmenovitě 0,5 až 5 ml, s výhodou 2 až 3 ml.
Vynález je dále podrobně objasněn přiloženými obrázky a příklady praktického provedení, které však vynález nijak neomezují.
Seznam obrázků na výkresech
Obr. 1: Sekvence genu koňského proteinu GM-CSF
Obr.2: Restrikční mapa plazmidu pJP097
Seznam sekvencí SEQ ID ke konstrukci prostředku podle vynálezu
SEQ ID No 1 Oligonukleotid JP705
SEQ ID No 2 Oligonukleotid JP706
SEQ ID No 3 Oligonukleotid JP729
SEQ ID No 4 Oligonukleotid JP730
SEQ ID No 5 Oligonukleotid JP731
SEQ ID No 6 Oligonukleotid JP734
SEQ ID No 7 Oligonukleotid JP735
SEQ ID No 8 Sekvence koňského genu GM-CSF (obr. 1)
SEQ ID No 9 Sekvence koňského proteinu GM-CSF (obr. 1)
Příklady provedení vynálezu
Všechny konstrukce plazmidu jsou provedeny za použití standardních technik molekulární biologie (například klonování, digesce restrikěními enzymy, syntéza komplementární ADN jednoduché větve, zesílení řetězce polymerázou, prodloužení oligonukleotidu polymerázou ADN), které popsal Sambrook J. a kol. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor New York, 1989). Všechny restrikční fragmenty použité podle vynálezu, stejně jako různé fragmenty k zesílení řetězce polymerázou (=ACP nebo PCR) jsou izolovány a vyčištěny za použití kitu „Geneclean®** (BIO101 včetně La Jolla, CA).
Příklad 1
Příprava celkové ARN koňských lymfocytů stimulovaných in vitro mitogeny
Koňská krev se vnese do zkumavky obsahující EDTA odběrem krve zjugulámí žíly. Jednojademé buňky se oddělí odstředěním pod gradientem Ficoll, načež se vnesou do kultury na Petriho misce o průměru 60 mm. Jednojademé koňské buňky se v kultuře stimulují jednak konkavalinem A (conA) (konečná koncentrace přibližně 5 pg/ml), jednak ťytohemaglutininem (PHA) (konečná koncentrace přibližně 10 pg/ml). Po stimulaci se sklidí lymfoblasty „ConA4* a „PHA** sejmutím koláče z kultivačních misek a veškerá ARN buněk se extrahuje za použití kitu „mRNA isolation kit for White Blood Cells“ (Boehringer Mannheim/Roche Cat # 1 934 325).
Příklad 2
Izolace genu kódujícího koňský GM-CSF
-7CZ 302009 B6
Syntetizují se oligonukleotidy použitím JP075 a JP076 a mají následující sekvence:
JP705 (SEQ ID No 1)(20 mer)
5TGGGCACTGTGGYCTGCAGC3'
JP706 (SEQ ID No 2) (17 mer)
5AGCATGTGRATGCCATC 3'
Těchto oligonukleotidů se použije s kitem 5 73'RACE (Boehringer Mannheim/Roche Cat # 1734 792) k vytvoření klonů 3 'RACE 6S4, 6W6 a 6 W7. Souhlasné sekvence 3' zřízené z těchto io tří klonů se použije k syntéze oligonukleotidů JP290, JP730 a JP731 před použitím k vytvoření odpovídajících klonů 5'RACE: JP729 (SEQ ID No 3) (21 mer)
5'AGCTCCCAGGGCTAGCTCCTA 3'
JP730 (SEQ ID No 4) (21 mer)
5'CCCTGTTTGTACAGCTTCAGG 3'
JP731 (SEQ ID No 5) (21 mer)
5'TGTTGTTCAGAAGGCTCAGGG 3'
Získanými odpovídajícími klony 5'RACE jsou klony 7D2 a 7D10. Souhlasné sekvence, vytvořené z klonů 3 RACE a z klonů 5'RACE, se použijí k zesílení celkové sekvence koňského genu
GM-CSF za použití reversní transkriptázy následované ACP. Celkový ARN extrakt koňských lymfocytů stimulovaný ConA nebo PHA (příklad 1) slouží jako matrice pro syntézu první větve komplementární ADN. Tato první větev komplementární ADN se vytvoří prodloužením oligonukleotidu p(dT)15 (Boehringer Mannheim/Roche Cat # 814 270). Získané jednoduché větve komplementární ADN se dále použije jako matrice pro reakci ACP s následujícími oligonukleo25 tidy:
JP734 (SEQ ID No 6) (44 mer)
5'CATCATCATGTCGACGCCACCATGTGGCTGCAGAACCTGCTTCT 3' aJP735(SEQ ID No 7)(41 mer) 'CATCATCATGCGGCCGCTACTTCTGGGCTGCTGGCTTCCAG 3' k zesílení fragmentu ACP přibližně 500 základních párů (pb). Tento fragment se čistí elektroforézou na agarovém gelu (=fragment) A).
Příklad 3
Konstrukce plazmidu pJP097 a sekvence koňského genu GM-CSF
Fragment A (z příkladu 2) se digeruje pomocí Notl a Sal 1 a takto získaný fragment Notl-Sal 1 se naváže na plazmid pVR1012 (HartikkaJ. a kol., Human Gene Therapy 7., str. 1205 až 1217,
1996) předběžně digerovaný Not 1 a Sal 1 k získání plazmidu pJP097 (5334 pb, obr. 2). Fragment
Notl-Sall, klonovaný na tento plazmid, se úplně sekvencuje. Tato sekvence (SEQ ID No 8), která kóduje protein 144 aminokyselin (SEQ ID No 9) je koňský cytokin (GM-CSF (koňský =GM-CSF) znázorněný na obr. 1.
Příklad 4
Biologická aktivita in vitro produktu koňského genu GM-CSF
Buňky CGO-K1 (vaječníkové buňky křečka (získatelné ze sbírky kmenů American Type Culture Collection pod číslem CCL-61) se vnesou do kultury v prostředí v podstatě minima nebo MEM (Gibco-BRL) v Petriho miskách o průměru 60 mm a naplněných 5 pg plazmidu pJP097, předběžně doplněných 10 μΐ Lipofectaminu PLUS® (Cat# 10964-013, Gibco-BRL, Cleveland, OH, USA). Podmínky vytváření komplexů ADN/Lipofect Amine® a transfekce těchto buněk se prove55 de podle doporučení dodavatele (Gibco-BRl); 48 hodin po transfekci se kultur sklidí a zmrazí.
-8CZ 302009 B6
Buňky kostní dřeně, odebrané vepřům, se vnesou do kultury v polotekutém prostředí Methocult (Cat# H4230 StemCell Technologies). K těmto kulturám se pak přidá nebo nepřidá (negativní kontrola) 10 μΐ supematantu buněk transfektovaných splazmidem pJP087. Provedou se dvě nezávislé transfekce s plazmidem pJP087, kódovaným pJP087Tl a pJP097T2. Každý supematant (10 μΐ zředěný na desetinu) se testuje paralelně na třech kultivačních miskách. Negativní kontrola sestává ze supematantu kultury CHO. Po 14-denní kultivaci se misky zkoumají z hlediska vytvoření kolonií makrofágů a případné kolonie se shromáždí.
Supematant buněk CHO transfektovaných s plazmidem pJP097 poskytuje tyto výsledky:
Plasmid/zředění nb misek střední počet kolonií Odchylka suernatantu na misku svědek 3 PJP097T1CeGM-CSFÍ 3 PJP097T2 C eGM-CSF) 3
O
Tyto výsledky ukazují, že produkt koňského genu GM-CSF, expresovaný plazmidem pJP097 má účinnost typu GM-CSF na buňky in vitro.
Příklad 5
Příprava plazmidu podle vynálezu
K přípravě plazmidů, určených kvakcinaci koní, je možno použít veškeré techniky umožňující získat suspenzi vyčištěných plazmidů. Tyto techniky jsou pracovníkům v oboru dobře známé. Produkce plazmidů spočívá v kultivaci bakterií Escherichia coli K12, transformovaných plazmidy podle vynálezu. Používá se hlavně alkalická lýze následovaná dvojím následným ultraodstředěním na gradientu chloridu česného v přítomnosti bromethidia, jak je popsáno v literatuře (Sambrook J. a kol. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor New York, 1989); světové patentové spisy WO-A-95/21250 a WO-A-96/02658 popisují výrobu plazmidů vhodných pro vakcinaci v průmyslovém měřítku. Pro potřeby výroby vakcín jsou plazmidy resuspendovány k získání vysoce koncentrovaných roztoků (>2 mg/ml) vhodných ke skladování. Za tímto účelem se plazmidy resuspendují buď v ultračisté vodě, nebo v pufru TE (Tris-HCl 10 mM; EDTA 1 mM; pH 8,0).
Příklad 6
Výroba a podávání vakcín podle vynálezu
Zásoba plazmidu pJP097 se zředí v pufru TE, ve fyziologické vodě nebo v pufru PBS a smísí se s různými vakcinačními plazmidy expresujícími ochranné imunogeny. Těmito plazmidy mohou být plazmidy citované například podle světového patentového spisu PCT WO 98/03198.
Koně se vakcinují dávkami 100 pg, 250 pg nebo 500 pg na plazmid.
-9CZ 302009 B6
Různé směsi „imunogenních“ plazmidů a plazmidu pJP097 „koňského GM-CSF“, takto získané, se podávají společně intramuskulámě (injekční stříkačkou s jehlou) do krčních nebo hrudních svalů. V tomto případě se injektují dávky 2 ml vakcíny.
Intramuskulámí injekce se mohou také realizovat s použitím injekčního přístroje s kapalinovou tryskou (bez jehly), který vystřikuje dávku například 0,5 ml. Je-li to nutné, je možno provést u jednoho zvířete několik po sobě následujících podání k dodání objemu většího než 0,5 ml. Po sobě následující podání se provedou odděleným způsobem tak, že místa injektáže jsou od sebe vzdálená přibližně 1 až 2 centimetry.
io
Injekce je možno provést také intradermálně s použitím injekčního přístroje s kapalinovou tryskou (bez jehly), dodávajícího dávky 0,2 ml v 5 místech (0,04 ml na místo vstřiku) (například přístrojem „PIGJET*“, Endoscoptic, Laon, Francie).
Obvykle se koně vakcinují dvěma injekcemi směsí plazmidu podle vynálezu prováděnými ve 4 až 5týdenním intervalu.
Příklad 7
Formulace plazmidů podle vynálezu
Směs „imunogenních“ plazmidů a plazmidu pJP097 se zředí v pufru TE, ve fyziologické vodě a v pufru PBS k získání koncentrace 1 mg/ml. Připraví se roztok DMRIE-DOPE s 0,75 mM pomocí lyofílizátu DMRIE-DOPE objemem upraveným sterilní vodou.
Vytvoření plazmidicko-lipidových komplexů ADN se provede zředěním na stejné díly DMRIEDOPE 0,75 mM roztokem ADN po 1 mg/ml. Roztok ADN se zavádí postupně pomocí sterilní jehly 26G podél stěny flakonu obsahujícího roztok kationtového lipidu tak, aby se zabránilo vzniku pěny. Pokračuje se mírným mícháním až do smísení obou roztoků. Získá se konečný prostředek obsahující 0,375 m DMRIE-DOPE a 500 pg/ml ADN.
Doporučuje se používat souboru roztoků při teplotě okolí k provedení shora popsaných operací. Komplex ADN/DMRIE-DOPE se připravuje přímo na místě při teplotě okolí 30 minut před imunizací zvířat, jak je popsána v příkladu 6.
Je zřejmé, že vynález definovaný patentový nároky není omezen na vyznačené způsoby použití v příkladech, zahrnuje však varianty, které nevybočují z rámce ani ducha vynálezu.
Průmyslová využitelnost
Vynález se týká nukleotidové sekvence genu kódujícího cytokin GM-CSF koně a expresních vektorů, které obsahuje a jeho použití jako adjuvantu v koňské vakcinaci a jako nespecifického imunitního stimulátoru.
Claims (24)
- PATENTOVÉ NÁROKY5 1. Očkovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulační činidlo pro koně, vyznačující se tím, že obsahuje in vívo expresní vektor obsahující nukleotidovou sekvenci definovanou v SEQ ID No. 8 kódující koňský GM-CSF za podmínek umožňujících expresi u koně funkčního koňského proteinu GM-CSF.io
- 2. Očkovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulační činidlo podle nároku 1, vyznačující se tím, že vektorem je virový vektor nebo plazmid.
- 3. Očkovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulační činidlo podle nároku 2, vyznačující se tím, že virový vektor je zvolen ze souboru sestávajícího z viru neštovic, adeno15 viru a herpesviru.
- 4. Očkovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulační činidlo podle nároku 3, vyznačující se tím, že herpesvirem je koňský herpesvir.20
- 5. Očkovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulační činidlo podle nároku 3, vyznačující se tím, že vir neštovic je zvolen ze souboru sestávajícího z viru kravských neštovic, kanárčích neštovic, drůbežích neštovic, prasečích neštovic, mývalích neštovic a velbloudích neštovic.25
- 6. Kompozice pro imunitní stimulaci u koně, vyznačující se tím, že obsahuje nespecifické imunostimulační činidlo podle některého z nároků 1 až 5 a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič.
- 7. Koňská imunogenní kompozice nebo vakcína, vyznačující se tím, že obsahuje30 očkovací adjuvans podle některého z nároků 1 až 5, imunogenní nebo očkovací přípravek proti koňskému patogenu a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič.
- 8. Koňská imunogenní kompozice nebo vakcína podle nároku 7, vyznačující se tím, že imunogenní nebo očkovací přípravek je zvolen ze souboru sestávajícího z inaktivovaného35 přípravku, zeslabeného živého přípravku, podjednotkového přípravku a rekombinantního přípravku.
- 9. Koňská imunogenní kompozice nebo vakcína, vyznačující se tím, že obsahuje očkovací adjuvans podle některého z nároků 1 až 5, ve kterém vektorem je in vivo expresní vek40 tor dodatečně obsahující alespoň jednu nukleotidovou sekvenci kódující alespoň jeden koňský imunogen nebo alespoň jeden imunologicky aktivní fragment imunogenu koňského patogenu a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič.
- 10. Koňská imunogenní kompozice nebo vakcína, vyznačující se tím, že obsahuje45 očkovací adjuvans podle některého z nároků 1 až 5 a alespoň jeden in vivo expresní vektor obsahuj ící alespoň jednu nukleotidovou sekvenci kódující alespoň jeden koňský imunogen nebo alespoň jeden imunologicky aktivní fragment imunogenu koňského patogenu a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič.50
- 11. Očkovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulační činidlo pro koně, vyznačující se tím, že sestává z koňského proteinu GM-CSF produkovaného expresním systémem obsahujícím nukleotidovou sekvenci definovanou v SEQ ID No.8.-11CZ 302009 B6
- 12. Očkovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulační Činidlo podle nároku 11, vyznačující se tím, že expresním systémem je in vitro expresní vektor virového nebo plazmidového původu.
- 13. Očkovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulační činidlo podle nároku 12, vyznačující se tím, žein vitro virovým expresním systémem je baculovirus.
- 14. Způsob produkce očkovacího adjuvans nebo nespecifického imunostimulační ho činidla pro koně, vyznačující se tím, že zahrnuje transformaci nebo transfekaci buňky in vitro expresním systémem obsahujícím a exprimuj ícím nukleotidovou sekvenci definovanou v SEQ ID No.8 a kultivaci buňky za podmínek umožňujících expresi koňského proteinu GM—CSF kódovaného nukleotidovou sekvencí definovanou v SEQ ID No.8.
- 15. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že buňka je zvolena ze souboru sestávajícího z hmyzí buňky, prokaryotické buňky, eukaryotické buňky, kvasničné buňky a savčí buňky.
- 16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že prokaryotickou buňkou je buňka E. coli.
- 17. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že kvasničnou buňkou je buňka Saccharomyces cerevisiae.
- 18. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že savčí buňkou je buňka křečka.
- 19. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že savčí buňkou je koňská buňka.
- 20. Kompozice pro imunitní stimulaci u koně, vyznačující se tím, že obsahuje nespecifické imunostimulační činidlo podle některého z nároků 11 až 13 a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič.
- 21. Koňská imunogenní kompozice nebo vakcína, vyznačující se tím, že obsahuje očkovací adjuvans podle některého z nároků 11 až 13, imunogenní nebo očkovací přípravek proti koňskému patogenu a veterinárně přijatelný excipient nebo nosič.
- 22. Koňská imunogenní kompozice nebo vakcína podle nároku 21, vyznačující se tím, že imunogenní nebo očkovací přípravek je zvolen ze souboru sestávajícího z inaktivovaného přípravku, zeslabeného živého přípravku, podjednotkového přípravku a rekombinantního přípravku.
- 23. Použití nespecifického stimulačního činidla podle některého z nároků 1, 2, 3, 4, 5j 11, 12 nebo 13 pro přípravu kompozice pro imunitní stimulaci u koně.
- 24. Použití očkovacího adjuvans podle některého z nároků 1, 2, 3, 4, 5, 11, 12 nebo 13 pro přípravu koňské imunogenní kompozice nebo vakcíny dodatečně obsahující koňský imunogen nebo imunogenní očkovací přípravek.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US13884399P | 1999-06-10 | 1999-06-10 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20014377A3 CZ20014377A3 (cs) | 2002-04-17 |
| CZ302009B6 true CZ302009B6 (cs) | 2010-09-01 |
Family
ID=22483915
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20014377A CZ302009B6 (cs) | 1999-06-10 | 2000-06-08 | Ockovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulacní cinidlo, kompozice pro imunitní stimulaci u kone, konská imunogenní kompozice nebo vakcína, použití uvedeného ockovacího adjuvans nebo nespecifického stimulacního cinidla a zpusob produkce ockovacíh |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6645740B1 (cs) |
| EP (1) | EP1185655B1 (cs) |
| JP (1) | JP2003502044A (cs) |
| AT (1) | ATE444366T1 (cs) |
| AU (1) | AU781107B2 (cs) |
| BR (1) | BR0011469A (cs) |
| CA (1) | CA2375619C (cs) |
| CZ (1) | CZ302009B6 (cs) |
| DE (1) | DE60043062D1 (cs) |
| ES (1) | ES2333093T3 (cs) |
| NZ (1) | NZ515989A (cs) |
| PL (1) | PL205608B1 (cs) |
| RU (1) | RU2279476C2 (cs) |
| WO (1) | WO2000077210A1 (cs) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2823222B1 (fr) | 2001-04-06 | 2004-02-06 | Merial Sas | Vaccin contre le virus de la fievre du nil |
| US20040091503A1 (en) | 2002-08-20 | 2004-05-13 | Genitrix, Llc | Lectin compositions and methods for modulating an immune response to an antigen |
| BR0314629A (pt) | 2002-09-19 | 2005-08-02 | Us Gov Health & Human Serv | Polipeptìdeos de p. ariasi polipeptìdeos de p. perniciosus e métodos e uso |
| JP2006516187A (ja) | 2002-10-29 | 2006-06-29 | アメリカ合衆国 | ルツォーミアロンギパルピスポリペプチドおよび使用方法 |
| EP1689858B1 (en) | 2003-11-13 | 2013-05-15 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Methods of characterizing infectious bursal disease virus |
| WO2006115843A2 (en) | 2005-04-25 | 2006-11-02 | Merial Limited | Nipah virus vaccines |
| US7862821B2 (en) | 2006-06-01 | 2011-01-04 | Merial Limited | Recombinant vaccine against bluetongue virus |
| UA100370C2 (uk) | 2006-12-11 | 2012-12-25 | Мериал Лимитед | Спосіб вакцинації птахів проти salmonella |
| CN102066411A (zh) | 2008-05-08 | 2011-05-18 | 梅里亚有限公司 | 使用白蛉唾液免疫原的利什曼原虫疫苗 |
| US20130197612A1 (en) | 2010-02-26 | 2013-08-01 | Jack W. Lasersohn | Electromagnetic Radiation Therapy |
| TR201901466T4 (tr) | 2011-07-20 | 2019-02-21 | Centre Nat Rech Scient | Opti̇mi̇ze edi̇lmi̇ş feli̇n lösemi̇ vi̇rüsü zarf geni̇ni̇ i̇çeren rekombi̇nant feli̇n lösemi̇ vi̇rüsü |
| BR112014023414B1 (pt) | 2012-03-20 | 2022-08-30 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Vacina de herpesvirus-1 equino recombinante contendo uma glicoproteína c mutante e seus usos |
| CN104768577B (zh) | 2012-08-30 | 2020-06-09 | 梅里亚有限公司 | 高压设备和用于制备灭活疫苗和用于重折叠/增溶重组蛋白的方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992005255A1 (en) * | 1990-09-13 | 1992-04-02 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Ovine cytokine genes |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5162111A (en) * | 1986-07-30 | 1992-11-10 | Grabstein Kenneth H | Treatment of bacterial diseases with granulocyte-macrophage colony stimulating factor |
| CA2139756A1 (en) | 1992-07-08 | 1994-01-20 | Eric M. Bonnem | Use of gm-csf as a vaccine adjuvant |
| AUPM543894A0 (en) * | 1994-05-04 | 1994-05-26 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | An adjuvant |
| FR2751226B1 (fr) | 1996-07-19 | 1998-11-27 | Rhone Merieux | Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval |
-
2000
- 2000-06-07 US US09/589,460 patent/US6645740B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-08 PL PL352484A patent/PL205608B1/pl unknown
- 2000-06-08 CA CA2375619A patent/CA2375619C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-08 DE DE60043062T patent/DE60043062D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-08 JP JP2001503654A patent/JP2003502044A/ja active Pending
- 2000-06-08 CZ CZ20014377A patent/CZ302009B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-06-08 NZ NZ515989A patent/NZ515989A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-06-08 RU RU2002100209/13A patent/RU2279476C2/ru active
- 2000-06-08 EP EP00940472A patent/EP1185655B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-08 WO PCT/FR2000/001590 patent/WO2000077210A1/fr not_active Ceased
- 2000-06-08 ES ES00940472T patent/ES2333093T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-08 BR BR0011469-3A patent/BR0011469A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-06-08 AU AU55403/00A patent/AU781107B2/en not_active Expired
- 2000-06-08 AT AT00940472T patent/ATE444366T1/de not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-07-07 US US10/614,481 patent/US7250161B2/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992005255A1 (en) * | 1990-09-13 | 1992-04-02 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Ovine cytokine genes |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Inumaru S. and Takamatsu H.: "cDNA cloning of porcine granulocyte-macrophage colony-stimulating factor", Immunology and Cell Biology, vol. 73(5), 474-476, 1995 * |
| Sin J.I. et al.: "Protective immunity against heterologous challenge with encephalomyocarditis virus by VP1 DNA vaccination: effect of coinjection with a granulocyte-macrophage colony stimulating factor gene", Vaccine, Vol. 15(17-18), 1827-1833, 1997 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6645740B1 (en) | 2003-11-11 |
| ATE444366T1 (de) | 2009-10-15 |
| RU2279476C2 (ru) | 2006-07-10 |
| EP1185655B1 (fr) | 2009-09-30 |
| WO2000077210A1 (fr) | 2000-12-21 |
| ES2333093T3 (es) | 2010-02-17 |
| US20050059121A1 (en) | 2005-03-17 |
| BR0011469A (pt) | 2002-03-05 |
| CA2375619C (en) | 2013-01-22 |
| CA2375619A1 (en) | 2000-12-21 |
| NZ515989A (en) | 2003-06-30 |
| US7250161B2 (en) | 2007-07-31 |
| CZ20014377A3 (cs) | 2002-04-17 |
| EP1185655A1 (fr) | 2002-03-13 |
| PL205608B1 (pl) | 2010-05-31 |
| PL352484A1 (en) | 2003-08-25 |
| JP2003502044A (ja) | 2003-01-21 |
| AU781107B2 (en) | 2005-05-05 |
| AU5540300A (en) | 2001-01-02 |
| DE60043062D1 (de) | 2009-11-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7572152B2 (ja) | コンセンサス前立腺抗原、それをコードする核酸分子、ならびにそれを含むワクチンおよび用途 | |
| JP5992337B2 (ja) | インフルエンザ核酸分子及びそれから作製したワクチン | |
| CN110904127A (zh) | 非洲猪瘟病毒疫苗 | |
| US10799572B2 (en) | Consensus antigen constructs and vaccines made therefrom, and methods of using the same to treat malaria | |
| MX2010005229A (es) | Vacunas novedosas contra sub-tipos multiples de virus de influenza. | |
| KR20180121896A (ko) | 재조합 아데노바이러스 벡터화 fmdv 백신 및 이의 용도 | |
| JP7123800B2 (ja) | がんのワクチン及びそれを用いた処置の方法 | |
| CZ302009B6 (cs) | Ockovací adjuvans nebo nespecifické imunostimulacní cinidlo, kompozice pro imunitní stimulaci u kone, konská imunogenní kompozice nebo vakcína, použití uvedeného ockovacího adjuvans nebo nespecifického stimulacního cinidla a zpusob produkce ockovacíh | |
| JP2003502345A (ja) | ペットまたはスポ−ツ用動物のためのｄｎａワクチン | |
| JP2023510112A (ja) | アフリカ豚熱ウイルスに対するワクチン、およびそれを使用する方法 | |
| US6187759B1 (en) | Canine parvovirus DNA vaccination | |
| AU783730B2 (en) | Method of enhancing immune responses to herpes simplex virus vaccine | |
| US12390521B2 (en) | Canine distemper vaccines and methods of treatment using the same | |
| Leng et al. | Co-administration of a plasmid encoding CD40 or CD63 enhances the immune responses to a DNA vaccine against bovine viral diarrhea virus in mice | |
| US12268735B2 (en) | Marburgvirus consensus antigens, nucleic acid constructs and vaccines made therefrom, and methods of using same | |
| JP2019516741A (ja) | マラリア感染症を予防及び治療するための合成マラリア免疫原、その組み合わせ、及びそれらの使用 | |
| JP6525949B2 (ja) | ボツリヌス菌の各血清型の重鎖を使用する１価または多価のボツリヌス神経毒素ワクチン | |
| EP0863151A1 (en) | "Canine parvovirus dna vaccines" | |
| US20190275138A1 (en) | Foot and mouth disease virus serotype o (fmdv-o) vaccine | |
| HK1177150B (en) | Influenza nucleic acid molecules and vaccines made therefrom | |
| HK1177150A (en) | Influenza nucleic acid molecules and vaccines made therefrom |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20200608 |