CZ302330B6 - Zpusob výroby a izolace proteinu, který má prokoagulacní aktivitu faktoru VIII a bunecná linie - Google Patents

Zpusob výroby a izolace proteinu, který má prokoagulacní aktivitu faktoru VIII a bunecná linie Download PDF

Info

Publication number
CZ302330B6
CZ302330B6 CZ20012024A CZ20012024A CZ302330B6 CZ 302330 B6 CZ302330 B6 CZ 302330B6 CZ 20012024 A CZ20012024 A CZ 20012024A CZ 20012024 A CZ20012024 A CZ 20012024A CZ 302330 B6 CZ302330 B6 CZ 302330B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
leu
protein
ser
glu
thr
Prior art date
Application number
CZ20012024A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20012024A3 (cs
Inventor
Cho@Myung-Sam
Chan@Sham-Yuen
Kelsey@William
Yee@Helena
Original Assignee
Bayer Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Corporation filed Critical Bayer Corporation
Publication of CZ20012024A3 publication Critical patent/CZ20012024A3/cs
Publication of CZ302330B6 publication Critical patent/CZ302330B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2799/00—Uses of viruses
    • C12N2799/02—Uses of viruses as vector
    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/028—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a herpesvirus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)

Abstract

Rešení popisuje zpusob výroby a izolace proteinu, jenž má prokoagulacní aktivitu faktoru VIII, který zahrnuje pestování bunek oznacených v American Type Culture Collection jako CRL-12568, které obsahují sekvenci kódující protein operabilne spojenou s promotorem, pricemž rust probíhá za podmínek dostacujících k expresi proteinu a izolaci proteinu. Je také popsána lidská bunecná linie pripravená vnesením sekvence kódující protein s prokoagulacní aktivitou faktoru VIII, operativne spojené s promotorem, do bunek uložených v ATCC jako CRL-12568.

Description

Oblast techniky
Předložený vynález se týká zlepšeného způsobu výroby a izolace proteinu, který má prokoagulační aktivitu faktoru Vlil. Týká se také lidské buněčné linie vyrobitelné vnesením sekvence kódující protein, který má prokoagulačni aktivitu faktoru VIII. Obzvláště se tento vynález týká io způsobu výroby proteinu s prokoagulačni aktivitou faktoru VIII v průmyslovém měřítku.
Dosavadní stav techniky
Lidský faktor Vlil je stopovým plazmatickým proteinem, který se jako kofaktor účastní aktivace faktoru X a faktoru IXa. Dědičná deficience faktoru Vili vede ke krvácivé poruše hemofílii A spjaté s faktorem X, která se dá úspěšně léčit čištěným faktorem VIII. Substituční terapie hemofilie A se vyvinula z používání faktoru Vlil odvozeného z plazmy až k použití rekombinantního faktoru VIII získaného klonováním a expresí cDNA faktoru VIII v savčích buňkách. (Wood a kol., Nátuře, 312, 330 (1984)).
Faktor VIII má organizaci domén A1-A2-B-A3-C1-C2 a syntetizuje se jako polypeptid s jediným řetězcem s 2351 aminokyselinami, z nichž se při translokaci do lumen endoplazmatického retikula odštěpí signální peptid s 19 aminokyselinami. V důsledku skutečnosti, že faktor
Vlil je silně glykosylován, bylo těžké dosáhnout vysokou míru exprese faktoru Vlil (vyšší než 0,2 pg/buňka za den (Lind a kok, Eur. J. Biochem., 232. 19 až 27 (1995), Kaufman a kol., Mol, Cell Biol., 9, 1233 až 1242 (1989)). Exprese faktoru VIII v savčích buňkách je obvykle o 2 až 3 řády nižší než exprese pozorovaná u jiných genů využívajících podobné vektory a přístupy. Produktivita produkčních buněčných linií pro faktor VIII je v rozmezí od 0,5 do 1 pU/bufika/den (0,1 až 0,2 pg/buňka za den).
Bylo ukázáno, že doména B faktoru VIII je pro prokoagulačni aktivitu nahraditelná. Za použití zkrácených variant faktoru VIII byla různými skupinami sdělena zlepšená exprese faktoru VIII v savčích buňkách (Lind a kol., Eur. J. Biochem., 232, 19 až 27 (1995), Tajima a kol., Proč 6th
Int. Symp. Η. T. str. 51 až 63, patent US 5 661 008 patřící firmě Almstedt, 1997). Expresní hladina variant faktoru Vlil však zůstává u stabilních buněčných klonů pod 1 pg/buňka/den.
Přihláška původce Choa označená MSB-7241 (US sériové č. 09/209 920), „Human Hybrid Host Cell for Mammalian Gene Expression” a přihláška původců Choa a Chana označená MSB-7254
4n (US sériové č. 09/209 915) „Vectors Having Terminál Repeat Sequence of Epstein-Barr Virus“ obsahují související předmět. Obě přihlášky byly podány 10. prosince 1998.
Podstata vynálezu
Předmětem tohoto vynálezu je způsob výroby a izolace proteinu, který má prokoagulačni aktivitu faktoru VIII, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje pěstování buněk označených v American Type Culture Collection jako CRL-12568, které obsahují sekvenci kódující protein operabilně spojenou s promotorem, přičemž růst probíhá za podmínek dostačujících k expresi proteinu a následnou izolaci proteinu.
Výhodným provedením vynálezu je způsob, při kterém protein má aminokyselinovou sekvenci označenou jako SEQ ID NO: 1.
Jiným výhodným provedením vynálezu je způsob, při kterém protein je exprimován s hladinou alespoň 2 pU/buňka za den, když jsou buňky pěstovány v médiu prostém plazmových proteinů. Přitom je při uvedeném způsobu účelné, když protein je exprimován s hladinou alespoň 4 pU/buňka za den, zvláště je účelné, když protein je exprimován s hladinou alespoň 5 pU/buňka za den.
Předmětem tohoto vynálezu je také lidská buněčná linie připravitelná vnesením sekvence, kódující protein s prokoagulační aktivitou faktoru VIII, operativně spojené s promotorem, do buněk uložených v ATCC jako CRL-12568.
io
Výhodným provedením tohoto vynálezu je svrchu popsaná lidská buněčná linie, která exprimuje faktor Vlil s delecí domény B. Podle předmětného vynálezu jde o buněčnou linii, která je v American Type Culture Collection označena jako CRL-12582.
Dále se uvádějí podrobnější údaje k předmětnému vynálezu i údaje, které dokreslují předmětné řešení v celé jeho šíři.
V popisu vyskytující se veličina ,J/buňka“ je ekvivalentní veličině „U/buňka“ a obdobně tomu je i u jejich podílů. V obou případech jde pouze o rozdílný zápis jedné a téže veličiny.
Původci nyní nalezli (i) způsob, který odvozuje buněčné linie s mimořádně vysokou produktivitou proteinů, které mají prokoagulační aktivitu faktoru VIII a (ii) způsob výroby proteinů, které mají prokoagulační aktivitu faktoru VIII, nevyžadující přítomnost plazmatických proteinů.
Způsob výroby proteinů, které mají prokoagulační aktivitu faktoru VIII, lze používat v průmyslovém měřítku. Za použití nově vytvořené hostitelské buňky jsou odvozeny buněčné klony se specifickými produktivitami v rozmezí od 2 do 4 pg/buňka za den (10 až 20 pU/buňka za den). Za podmínek nepřítomnosti séra má jeden klon prodlouženou denní produktivitu od 2 do 4 pg/bufika/den. Klony s takto vysokou hladinou produktivity jsou schopny produkovat od 3 do 4 milionů io jednotek za den v 15litrovém perfuzním fermentoru. Jedna jednotka aktivity faktoru Vlil je podle definice aktivita přítomná v 1 ml plazmy. Jeden pg faktoru VIII je obecně ekvivalentní asi 5 pU aktivity faktoru Vlil.
Jak je zde používáno, protein, který má pro-koagulační aktivitu faktoru VIII je protein, který .15 způsobuje aktivaci faktoru X v systémech modelů in vitro a in vivo. Jako neomezující příklad tato definice zahrnuje rekombinantní lidský faktor VIII v plné délce a faktor VIII bez domény B, jehož sekvence je popsána na obr. 1.
Vysoká míra exprese proteinu, který má prokoagulační aktivitu faktoru VIII znamená alespoň asi io 2 pU/buňka za den, nebo výhodněji alespoň asi 4 pU/buňka za den, nebo nejvýhodněji alespoň asi 5 pU/buňka za den aktivity faktoru VIII pokud se pěstuje v médiu prostém proteinů odvozených z plazmy, nebo alespoň asi 4 pU/buňka za den, nebo výhodněji alespoň asi 8 pU/buňka za den, nebo nejvýhodněji alespoň asi 10 pU/buňka za den aktivity faktoru Vlil, pokud se pěstuje v médiu doplňovaném proteinem odvozeným z plazmy. Pokud je exprimovaným proteinem
BDD- FVH1, mohou se buněčné linie, které mají specifické produktivity až asi 15 pU/buňka za den, výhodněji až asi 20 pU/buňka za den, získat způsobem zde popsaným.
Jak je zde používáno k popisu původu buněčných linií, „připravitelný“ je zamýšleno tak, že zahrnuje normální mitotické buněčné dělení a způsoby, jako jsou transfekce, fúze buněk nebo další techniky genetického inženýrství používané ke změnám buněk nebo tvorbě buněk s novými vlastnostmi, přičemž výčet tím však není omezen.
-2 CZ 302330 B6
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1: Sekvence aminokyselin BDD-FVIII (SEQ ID NO: 1).
Obr. 2: Sekvence terminální opakované (TR) sekvence izolované z viru Epstein-Barrové (SEQ ID NO: 2).
Obr. 3: Plazmidová mapa pCIS25DTR.
io Obr. 4(a): Odvození klonu 20B8.
Obr. 4(b): Srovnání produktivit několika klonů v různých médiích. Třídatové body jsou předloženy z dvouměsíčního testu stability každého klonu.
i? Obr. 5: Objemová produktivita klonu 20B8.
Specifická ztělesnění
Stanovení faktoru VIII
Aktivita derivátů faktoru VIII získaného expresí rekombinantního genu v populacích buněk odolných vůči metotrexatu (MTX) se měří chromogenním stanovením. Aktivita se kvantifikuje za použití kitu Coatesťk' factor VIII:C/4 (Cromogenix, Molndal, Švédsko) podle návodu výrobce. V USA standardní antihemofilícký faktor (faktor VIII), známý jako MEGA 1 (Office of
Biologics Research and Review, Bethesda, MD), se při tomto stanovení použije jako standard měření. Víz Barrowcliffe, Thromb. Heam., 70, 876 (1993).
Konstrukce expresních vektorů pro faktor VIII bez domény B so Sekvence faktoru VIII bez domény B (BDD-FVIII) je ukázána na obr. I. Řetězce o hmotnosti 90 kD a 80 kD jsou spojeny můstkem sestávajícím ze 14 aminokyselin. Viz Chán, S.-Y. „Production of Rekombinant Factor VIII in the Presence of Liposome-like Substances of Mixed Composition,“ US patentová přihláška 08/634 001, podaná 16. dubna 1996. Expresní vektor pro BDD-FVIII se připraví za použití standardních postupů rekombinace DNA. Struktura expresního vektoru (pCIS25DTR) je ukázána na obr. 3. Vektor obsahuje transkripční jednotku pro BDDFVIII a volitelný markér, dihydrofolatreduktasu (dhfr). Navíc se ke zvýšení účinnosti integrace do vektoru vloží koncová opakovaná sekvence z viru Epstein-Barrové, která vykazuje zvýšený poměr selekce léčivem, (obr. 2). Vektor je v podstatě konstruktem vektoru (uložen ATCC 98879), který byl vytvořen k zahrnutí transkripční jednotky odpovídající sekvenci ukázané na obr. 1. Další informace o koncové opakované sekvenci se dají nalézt v související patentové přihlášce, zahrnuté zde formou odkazu, původců Choa a Chana označená MSB-7254, Terminál repeat sequence of Epstein-Barr virus enhances drug selection ratio, podané stejného dne jako předložená přihláška.
Odborník v oboru může konstruovat a používat podobné vektory k získání buněk exprimujících proteiny, které mají prokoagulační aktivitu faktoru VIII. například kódující sekvence kódující známé varianty faktoru VIII, které si zachovávají prokoagulační aktivitu mohou nahradit sekvenci kódující BDD-FVIII. Rovněž místo dhfr mohou být použity jiné volitelné markéry, jako je glutaminsyntetasa (gs) nebo gen odolnosti vůči četným léčivům (multidrug resistance gene50 mdr). Podle toho se musí provést volba selekčního činidla, jak je v oboru známo, tj. pro dhfr je výhodným selekčním činidlem mototrexat, pro gs je výhodným selekčním činidlem methioninsulfoximin, a pro mdr je výhodným selekčním činidlem kolchicin.
- j CZ 302330 B6
Příklady provedení vynálezu
Odvození buněčných linií exprimujících BDD-FVIII: Transfekce, volba léčiva a amplifikace genu pg pClS25DTR se transfekuje do buněk HKB11 (ATCC deposit č. CRL 12568 - hybrid buněk 293S a buněk lidského Burkittova lymfonu, viz US patentová přihláška původců Choa a kol., podaná stejného dne jako tato přihláška a označená MSB-7241, zahrnutá zde formou odkazu) elektroporační soupravou při 300 volt a 300 mikrofarad (BTX Electro cell Manipulátor 600) za použití 2mm kyvety (BTX část č. 620). Ve srovnávacích experimentech prováděných pro srovnání s buňkami HKB11 se buňky CHO (ovariální čínského křečka, Chinese hamster ovary) a 293S (lidská embryonální ledvinová) transfekují za použití kationtového lipidového činidla DMRIE-C (Life technologies, Gaithersburg, MD) podle protokolu poskytnutého firmou Life Technologies. Množení transfekovaných buněk se provede pomocí zvyšujících se koncentrací mototrexatu (MTX) (100 nM, 200 nM, 400 nM a 800 nM) na 1 x 106 buněk na desku s 96 jamkami v metotrexatovém selekčním médiu postrádajícím hypoxanthin a thymidín (médium DME/F12 bez hypoxanthinu a thymidinu plus 5% dialyzovaného fetálního hovězího séra od firmy Hycloně, Logan, UT). Buňky odolné vůči metotrexatu se shromáždí k pěstování a sekrece BDD FVI1I se testuje pomocí kitu Coatest® factor Vlil asi 2 až 3 týdny po transfekci. Kultivace buněk se provádí při teplotě 37 °C ve zvlhčovaném inkubátoru s 5 % oxidu uhličitého.
Omezující klonování ředěním
Klony jediné buňky (SCC) se odvodí omezujícím klonováním ředěním (LDC) populací s vysokou produkcí na deskách s 96 jamkami za podmínek prostých séra. Buňky se očkují v množství 1 až 10 buněk na jamku v médiu DME/F12 doplněném rekombinantním inzulínem Humulin® (Lilly, Indianapolis, IN) v koncentraci 10μg/ml, esenciálními aminokyselinami 10X (Life Technology, Gaithersburg, MD) a proteinovou frakcí lidské plazmy Plasmanate® (Bayer, Clayton, NC). Proteinová frakce lidské plazmy (HPP) Plasmanate® obsahuje lidský albumin (88 %) a různé globuliny (12 %). Klony se testují na produktivitu BDD-FVIU za použití kitů Coatest® factor Vílí. Klony s nejvyšší produkcí se vyberou k vyhodnocení stability vtřepacích nádobách. U buněk HKB se první kolo LDC provede za použití selekčního média doplněného 5 % dialyzovaného fetálního hovězího séra. Druhé kolo LDC se provede v médiu prostém séra, ale obsahujícím proteinovou frakci lidského séra Plasmanate® za použití prvního SCC upraveného na médium prosté séra doplněné proteinovou frakci lidského séra Plasmanate®.
Odvození HKB klonu 20B8
Jak je shrnuto na obr. 4(a), odvodí se počáteční populace 1C10 z buněk HKB transfekovaných pCIS25DTR po namnožení v koncentraci metotrexatu 400 nM v selekčním médiu s 5 % fetálního hovězího séra. Jeden z prvních klonů jedné buňky (SCC), 10A8, odvozený z 1CI0 omezujícím klonováním ředěním (LDC) za použití selekčního média doplněného 5 % fetálního hovězího séra se upraví v médiu prostém séra doplněném proteinovou frakci lidského séra Plasmanate®. 10A8 neočekávaně vykazuje v tomto stadiu mimořádně zvýšené hladiny produkce rFVIIl (obr. 4(b)). Původci proto provedli druhé omezující klonování ředěním za použití média doplněného proteinovou frakci lidského séra Plasmanate®. Produktivita klonů jedné buňky (např. 20B8) odvozených z druhého omezujícího klonování ředěním je u 10A8 adaptovaných na proteinovou frakci lidského séra Plasmanate® podobná. 20B8 vykazuje vyšší hladiny BDD-FVIII než původní 10A8 odvozený z prvního omezujícího klonování ředěním v médiu obsahujícím sérum. Konečně, 20B8 se adaptuje na růst v médiu prostém proteinů. Vzorky 20B8 se uloží v American type Culture Collection (Manassas, VA) (ATCC deposit č. CRL-12582).
Jak je ukázáno v tabulce 1, klony HKB vykazují vyšší produktivitu BDD-FVIII. U buněk HKB se pozoruje 10- až 20-násobné zvýšení produktivity ve srovnání s klony z transfekovaných buněk CHO a 293S. Buňky HKB, které netvoří velké shluky buněk, pokud se pěstují v suspenzní
-4CZ 302330 B6 kultuře, i snu vvhodnvmi buř kam i nro exnresi nrnteinů. které maií nro koacu lační aktivitu faktoru
S lil ' «/i
Vlil.
Tabulka 1
Exprese FVIII a BDD-FVIII u lidských a hlodavcích buněčných linií Specifická produktivita (pJ/buňka/den)*
Deriváty FVIII BHK 293S CHO HKB
FVIII s plnou
délkou 0,45 1,2 0,5 1,0
BDD-FVIII ND 2,5 1,0 20
’ Průměr 5 vysoce produkujících klonů (v médiu prostém séra)
ND = neprovedeno
Adaptace klonů na nepřítomnost plazmatických proteinů 20 Klony HKB, které se adaptují na růst jako suspenzní kultury prosté séra se dále odvykají doplftovnní r*1 o-zrvi oki í x/a ctpri 1 rt ír*K αι^ρηαΤΛννρΙΐ trATACipίιΉ v Ul II J-/ lUCjlllUkl Vil |_*1 \_r IV II a V*· Wl » J ^44 VZ 9 HM1 Τ V 1 j 1 ti vá I IVU* txkxt J vn Lt t lahvích (Corning, Corning, NY) pri hustotě buněk okolo 0,5 x 106 buněk/ml za použití média prostého proteinů odvozených z plazmy. Médiem prostým plazmatických proteinů je médium DME/F12 doplněné pluronic F68 (0,1 %), CuSO4 (50 nM) a FeSOVEDTA (50 pM). Každých
48 hodin se provede úplná výměna média a třepací lahve se znovu naočkují na koncentraci 0,5 x
106 buněk/ml.
Fermentace klonu 20B8
Produktivita klonu 20B8 se vyhodnotí v 15Iitrovém perfuzním fermentoru. Fermentor se naočkuje buňkami klonu 20B8 v hustotě okolo 3 x 106 buněk/ml. Fermentor se perfunduje rychlostí 4 objemy za den produkčním médiem prostým séra podle popisu v předchozím odstavci. Konečná hustota 2x10' buněk/ml se udržuje během doby hodnocení (45 dní). Jak je ukázáno na obr. 5, během prvních 4 týdnů fermentace se klon 20B8 perfunduje produkčním médiem prostým séra doplněným proteinovou frakci lidského séra Plasmanate® a udržuje si vysokou produktivitu. Od 28. dne do konce běhu fermentace se buňky perfundují stejným médiem prostým séra, ale bez proteinové frakce lidského séra Plasmanate®. Jak je ukázáno na obr. 5, buňky udržují vysoké hladiny produkce FVIII v prostředí prostém proteinů odvozených z plazmy. „Prostý proteinů odvozených z plazmy** znamená, že do média se nepřidávají v podstatě žádné proteiny izolované z plazmy.
Diskuze
Odvození buněk HKB poskytuje produkční systém prostý proteinů k tvorbě nikoli pouze BDD45 FVIII, ale i dalších terapeutických proteinů.Proteiny tvořené buňkami HKB mají lidské glykosylační vzory, které mohou zlepšit poločas jistých glykoproteinů in vivo. Tyto buňky mohou být také užitečné k produkci adenovirových kmenů a kmenů spjatých s adenoviry, které jsou určeny pro účely genové terapie.
Výše uvedené příklady jsou zamýšleny k ilustraci vynálezu a má se za to, že odborníkovi v oboru budou zřejmé jeho variace. Rozumí se tudíž, že rozsah tohoto vynálezu je omezen pouze patentovými nároky uvedenými dále.
- 5 CZ 302330 B6
Seznam sekvencí <110> Cho, Myung-Sam Chán, Sham-Yuen
Kelsey, William
Yee, Helena < 120> Expresní systém faktoru VIII io <130> MSB-7255 <140>
<14l>
<160> 2 <170> Patentln Ver. 2.0 <2l0> 1 <211> 1438 <212> PRT <213> Umělá sekvence <220>
<223> Popis umělé sekvence: Odvozena ze sekvence lidského faktoru VIII <400> 1
Ala 1 Thr Arg Arg Tyr 5 Tyr Leu Gly Ala Val 10 Glu Leu Ser Trp Asp 15 Tyr
Met Gin Ser Asp 20 Leu Gly Glu Leu Pro 25 Val Asp Ala Arg Phe 30 Pro Pro
Arg Val Pro Lys 35 Ser Phe Pro Phe 40 Asn Thr Ser Val Val 45 Tyr Lys Lys
Thr Leu 50 Phe Val Glu Phe Thr 55 Val His Leu Phe Asn 60 Ile Ala Lys Pro
Arg 65 Pro Pro Trp Met Gly 70 Leu Leu Gly Pro Thr 75 Ile Gin Ala Glu Val 80
Tyr Asp Thr Val Val 85 Ile Thr Leu Lys Asn 90 Met Ala Ser His Pro 95 Val
Ser Leu His Ala 100 Val Gly Val Ser Tyr 105 Trp Lys Ala Ser Glu 110 Gly Ala
Glu Tyr Asp Asp 115 Gin Thr Ser Gin 120 Arg Glu Lys Glu Asp 125 Asp Lys Val
Phe Pro 130 Gly Gly Ser His Thr 135 Tyr Val Trp Gin Val 140 Leu Lys Glu Asn
Gly 145 Pro Met Ala Ser Asp 150 Pro Leu Cys Leu Thr 155 Tyr Ser Tyr Leu Ser 160
His Val Asp Leu Val 165 Lys Asp Leu Asn Ser Gly 170 Leu lle Gly Ala 175 Leu
Leu Val Cys Arg 180 Glu Gly Ser Leu Ala 185 Lys Glu Lys Thr Gin 190 Thr Leu
His Lys Phe 195 Xle Leu Leu Phe Ala 200 Val Phe Asp Glu Gly 205 Lys Ser Trp
His Ser 210 Glu Thr Lys - Asn Ser 215 Leu Met Gin Asp Arg 220 Asp Ala Ala Ser
Ala 225 Arg Ala Trp Pro Lys 230 Met His Thr Val Ash 235 Gly Tyr Val Asn Arg 240
Ser Leu Pro Gly Leu 245 lle Gly Cys His Arg Lys 250 Ser Val Tyr Trp 255 His
Val lle Gly Met 260 Gly Thr Thr Pro Glu 265 Val His Ser Xle Phe 270 Leu Glu
Gly His Thr 275 Phe Leu Val Arg Asn 280 His Arg Gin Ala Ser 285 Leu Glu lle
Ser Pro 290 lle Thr Phe Leu Thr 295 Ala Gin Thr Leu Leu 300 Met Asp Leu Gly
Gin 305 Phe Leu Leu Phe Cys 310 His lle Ser Ser His 315 Gin His Asp Gly Met 320
Glu Ala Tyx Val Lys 325 Val Asp Ser Cys Pro Glu 330 Glu Pro Gin Leu 335 Arg
Met Lys Asn Asn 340 Glu Glu Ala Glu Asd 345 Tyr Asp Asp Asp Leu 350 Thr Asp
Ser Glu Met 355 Asp Val Val Arg Phé 360 Asp Asp Asp Asn Ser 365 Pro Ser Phe
lle Gin 370 lle Arg Ser Val Ala 375 Lys Lys His Pro Lys 380 Thr Trp Val His
Tyr 385 : lle 1 : Ala Ala Glu , Glu 390 Glu Asp Trp Asp Tyr 395 Ala Pro Leu Val Leu 400
Ala Pro Asp Asp Arg 405 Ser Tyr Lys Ser Gin 410 Tyr Leu Asn Asn Gly 415 Pro
Gin Arg lle Gly Arg 420 Lys Tyr Lys Lys 425 Val Arg Phe Met Ala 430 Tyr Thr
Asp Glu Thr 435 Phe Lys Thr Arg Glu 440 Ala Xle Gin His Glu 445 Ser Gly lle
Leu Gly 450 Pro Leu Leu Tyr Gly 455 Glu Val Gly Asp Thr 460 Leu Leu Xle lle
Phe 465 Lys Asn Gin Ala Ser 470 Arg Pro Tyr Asn lle 475 Tyr Pro His Gly lle 480
Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys Gly Val Lys 485 490 495
His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe Lys Tyr Lys 500 505 510
Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp Pro Arg Cys 515 520 525
Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg Asp Leu Ala 530 535 540
Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu Ser Val Asp
545 550 555 560
Gin Arg Gly Asn Gin Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val Ile Leu Phe
565 570 575
Ser Val Phe Asp 580 Glu Asn Arg Ser Trp 585 Tyr Leu Thr Glu Asn 590 Ile Gin
Arg Phe Leu 595 Pro Asn Pro Ala Gly 600 Val Gin Leu Glu Asp 605 Pro Glu Phe
Gin Ala 610 Ser Asn Ile Met His 615 Ser Ile Asn Gly Tyr 620 Val Phe Asp Ser
Leu 625 Gin Leu Ser Val Cys 630 Leu His Glu Val Ala 635 Tyr Trp Tyr Ile Leu 640
Ser Ile Gly Ala Gin 645 Thr Asp Phe Leu Ser 650 Val Phe Phe Ser Gly 655 Tyr
Thr Phe Lys His 660 Lys Met Val Tyr Glu 665 Asp Thr Leu Thr Leu 67 0 Phe Pro
Phe Ser Gly 675 Glu Thr Val Phe Met 680 Ser Met Glu Asn Pro 685 Gly Leu Trp
Ile Leu 690 Gly Cys His Asn Ser 695 Asp Phe Arg Asn Arg 700 Gly Met Thr Ala
Leu 705 Leu Lys Val Ser Ser 710 Cys Asp Lys Asn Thr 715 Gly Asp Tyr Tyr Glu 720
Asp Ser Tyr Glu Asp 725 Ile Ser Ala Tyr Leu 730 Leu Ser Lys Asn Asn 735 Ala
Ile Glu Pro Arg 740 Ser Phe Ser Gin Asn 745 Pro Pro Val Leu Lys 750 Arg His
Gin Arg Glu 755 Ile Thr Arg Thr Thr 760 Leu Gin Ser Asp Gin 765 Glu Glu Ile
Asp Tyr 770 Asp Asp Thr Ile Ser 775 Val Glu Met Lys Lys 780 Glu Asp Phe Asp
Ile 7B5 Tyr Asp Glu Asp Glu 790 Asn Gin Ser Pro Arg 79S Ser Phe Gin Lys Lys 800
Thr Arg His Tyr Phe 805 Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp Tyr Gly
810 815
Met Ser Ser Ser 820 Pro His Val Leu Arg Asn Arg 825 Ala Gin Ser Gly Ser 830
Val Pro Gin Phe 835 Lys Lys Val Val Phe Gin Glu 840 Phe Thr Asp Gly Ser 845
Phe Thr Gin Pro 850 Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn 855 Glu His Leu Gly Leu 860
Leu 865 Gly Pro Tyr Zle Arg 870 Ala Glu Val Glu Asp 875 Asn Ile Met Val Thr 880
Phe Arg Asn Gin Ala 885 Ser Arg Pro Tyr Ser Phe 690 Tyr Ser Ser Leu Ile 895
Ser Tyr Glu Glu 900 Asp Gin Arg Gin Gly Ala Glu 905 Pro Arg Lys Asn Phe 910
Val Lys Pro Asn c Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp 920 Lys Val Gin His His 925
Met Ala Pro Thr 930 Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys 935 Ala Trp Ala Tyr Phe 940
Ser S45 Asp Val Asp Leu Glu 950 Lys Asp Val His Ser 955 Gly Leu Ile Gly Pro 960
Leu Leu Val Cys His 965 Thr Asn Thr Leu Asn Pro 970 Ala His Gly Arg Gin 975
Val Thr Val Gin 980 Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr 985 Ile Phe Asp Glu Thr 990
Lys Ser Trp Tyr 995 Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg 1000 Asn Cys Arg Ala Pro 1005
Cys Asn Ile Gin Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr Arg Phe
1010 1015 1020
His Ala 11« Asn Gly Tyr 11« Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met 1025 1030 1035 1040
Ala Gin Asp Gin Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn 1045 1050 1055
Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr Val Arg 1060 1065 1070
Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val 1075 1080 1085
Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp Arg Val 1090 1095 1100
Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr Leu Phe 1105 1110 1115 1120
- 9 CZ 302330 B6
Leu Val Tyr Ser Asn 1125 Lys Cys Gin Thr Pro 1130 Leu Gly Met Ala Ser 1135 Gly
His Ile Arg Asp Phe 1140 Gin Ile Thr Ala Ser 1145 Gly Gin Tyr Gly Gin 1150 Trp
Ala Pro Lys 1155 Leu Ala Arg Leu His 1160 Tyr Ser Gly Ser Ile 1165 Asn Ala Trp
Ser Thr 1170 Lys Glu Pro Phe Ser 1175 Trp Ile Lys Val Asp 1180 Leu Leu Ala Pro
Met Ile 1185 Ile His Gly Ile 1190 Lys Thr Gin Gly Ala 1195 Arg Gin Lys Phe Ser 1200
Ser Leu Tyr Ile Ser 1205 Gin Phe Ile Ile Met 1210 Tyr Ser Leu Asp Gly 1215 Lys
Lys Trp Gin Thr Tyr 1220 Arg Gly Asn Ser Thr 1225 Gly Thr Leu Met Val 1230 Phe
Phe Gly Asn 1235 Val Asp Ser Ser Gly 1240 Ile Lys His Asn Ile 1245 Phe Asn Pro
Pro Ile 1250 Ile Ala Arg Tyr Ile 1255 Arg Leu His Pro Thr 1260 His Tyr Ser Ile
Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys
1265 1270 1275 1280
Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gin Ile 1285 1290 1295
Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser 1300 1305 1310
Lys Ala Arg Leu His Leu Gin Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro Gin 1315 1320 1325
Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gin Val Asp Phe Gin Lys Thr Met 1330 1335 1340
Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gin Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr Ser
1345 1350 1355 136Q
Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gin Asp Gly His Gin
1365 1370 1375
Trp Thr Leu Phe Phe Gin Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gin Gly Asn 1380 1385 1390
Gin Asp Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leví 1395 1400 1405
Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gin Ser Trp Val His Gin Ile Ala 1410 1415 1420
Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Cln Asp Leu Tyr 1425 1430 1435
- 10CZ 302330 Β6 <210> 2 <211> 402 <212> DNA <213> Umělá sekvence <220>
<223> Popis umělé sekvence: Odvozena ze sekvence viru Epstein-Barrové <400> 2 ggcaatggag ggsgtgacec ggccccccag cgggtcatgc cctagccccc gggctccggg gsggggcgct cgtgacgaag ggccceaggg ctgaccccgg caaacgtgac ccggggctcc 60 aggcaagcgt ggccaagggg cccgtgggtg acacaggcaa eectgacaaa 120 gaaagacccc cggggggcat cgggggggtg ttggcgggtc atgggggggg 180 cgcgcattcc tggaaaaagt ggagggggcg tggccttccc eccgcggccc 240 ccgcagagag cggcgcaaeg gegggcgagc ggcggggggt cggggtccgc 300 ggctgcgggc ggtggatgge ggctggcgtt ecggggatcg ggggggggtc 360 gcgcgggcgc agccatgcgt gaccgtgatg ag 402

Claims (8)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Způsob výroby a izolace proteinu, který má prokoagulační aktivitu faktoru VIII, vyznačující se tím, že zahrnuje pěstování buněk označených v American Type Culture Collection jako CRL-12568, které obsahují sekvenci kódující protein operabilně spojenou s promotorem, přičemž růst probíhá za podmínek dostačujících k expresi proteinu, a následnou izolaci proteinu.
  2. 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že protein má aminokyselinovou sekvenci označenou jako SEQ ID NO: 1.
  3. 3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že protein je exprimován s hladinou alespoň 2 pU/buňka za den, když jsou buňky pěstovány v médiu prostém plazmových proteinů.
  4. 4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že protein je exprimován s hladinou alespoň 4 pU/buňka za den.
  5. 5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že protein je exprimován s hladinou alespoň 5 pU/buňka za den.
  6. 6. Lidská buněčná linie připravitelná vnesením sekvence, kódující protein s prokoagulační aktivitou faktoru VIII, operativně spojené s promotorem, do buněk uložených v ATCC jako CRL-12568.
  7. 7. Lidská buněčná linie podle nároku 6, která exprimuje faktor VIII s deleci domény B.
  8. 8. Buněčná linie podle nároku 7, která je v American Type Culture Collection označena jako CRL-12582.
    5 výkresů
CZ20012024A 1998-12-10 1999-12-08 Zpusob výroby a izolace proteinu, který má prokoagulacní aktivitu faktoru VIII a bunecná linie CZ302330B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/209,916 US6358703B1 (en) 1998-12-10 1998-12-10 Expression system for factor VIII

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20012024A3 CZ20012024A3 (cs) 2001-10-17
CZ302330B6 true CZ302330B6 (cs) 2011-03-16

Family

ID=22780858

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20012024A CZ302330B6 (cs) 1998-12-10 1999-12-08 Zpusob výroby a izolace proteinu, který má prokoagulacní aktivitu faktoru VIII a bunecná linie

Country Status (26)

Country Link
US (10) US6358703B1 (cs)
EP (1) EP1137797B1 (cs)
JP (1) JP4240818B2 (cs)
KR (1) KR100616028B1 (cs)
AT (1) ATE412765T1 (cs)
AU (1) AU761801B2 (cs)
BG (1) BG65431B1 (cs)
BR (1) BRPI9916069B8 (cs)
CA (1) CA2354845C (cs)
CZ (1) CZ302330B6 (cs)
DE (1) DE69939839D1 (cs)
DK (1) DK1137797T3 (cs)
ES (1) ES2315026T3 (cs)
HU (1) HU228489B1 (cs)
IL (2) IL143353A0 (cs)
NO (1) NO329544B1 (cs)
NZ (1) NZ512234A (cs)
PL (1) PL200676B1 (cs)
PT (1) PT1137797E (cs)
RO (1) RO121604B1 (cs)
RU (1) RU2249041C2 (cs)
SI (1) SI20644B (cs)
SK (1) SK286945B6 (cs)
TR (1) TR200101592T2 (cs)
UA (1) UA77383C2 (cs)
WO (1) WO2000034505A1 (cs)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6475725B1 (en) 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
US6180108B1 (en) * 1998-12-10 2001-01-30 Bayer Corporation Vectors having terminal repeat sequence of Epstein-Barr virus
US6358703B1 (en) 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII
EE200200538A (et) * 2000-03-22 2004-04-15 Octagene Gmbh Rekombinantsete verehüübimisfaktorite produtseerimine inimese rakuliinides
ES2331909T3 (es) 2001-06-14 2010-01-20 The Scripps Research Institute Factor viii estabilizado con enlaces disulfuro modificados geneticamente.
BRPI0407882B1 (pt) * 2003-02-26 2021-07-27 Nektar Therapeutics Composição compreendendo conjugados de polímero-porção de fator viii e seu método de fabricação
US7485291B2 (en) * 2003-06-03 2009-02-03 Cell Genesys, Inc. Compositions and methods for generating multiple polypeptides from a single vector using a virus derived peptide cleavage site, and uses thereof
WO2005017149A1 (en) * 2003-06-03 2005-02-24 Cell Genesys, Inc. Compositions and methods for enhanced expression of recombinant polypeptides from a single vector using a peptide cleavage site
AU2005302516A1 (en) * 2004-10-29 2006-05-11 Centocor, Inc. Chemically defined media compositions
PT2363414T (pt) * 2004-11-12 2022-08-04 Bayer Healthcare Llc Modificação de fviii direcionada a sítio
DK1969007T3 (da) * 2005-12-20 2013-11-25 Bristol Myers Squibb Co Sammensætninger og fremgangsmåder til fremstilling af en sammensætning
AR058568A1 (es) 2005-12-20 2008-02-13 Bristol Myers Squibb Co Metodos para producir una composicion con moleculas ctla4-ig a partir de un medio de cultivo
SG187397A1 (en) 2007-12-27 2013-02-28 Baxter Int Cell culture processes
KR101005967B1 (ko) * 2008-04-12 2011-01-05 (주)셀트리온 우수한 재조합 단백질을 생산하기 위한 인간 숙주 세포
JP2011526151A (ja) * 2008-06-25 2011-10-06 バイエル・ヘルスケア・エルエルシー 低下した免疫原性を有する因子ｖｉｉｉ変異タンパク質
MX2011001624A (es) 2008-08-21 2011-03-28 Octapharma Ag Factor viii y ix humano producido en forma recombinante.
WO2010026186A1 (en) * 2008-09-03 2010-03-11 Octapharma Ag New protecting compositions for recombinantly produced factor viii
ES2610356T3 (es) 2009-02-03 2017-04-27 Amunix Operating Inc. Polipéptidos recombinantes extendidos y composiciones que comprenden los mismos
JP5739865B2 (ja) * 2009-03-24 2015-06-24 バイエル・ヘルスケア・エルエルシー 第ｖｉｉｉ因子変異体および使用の方法
CA2771999A1 (en) 2009-08-24 2011-03-10 Amunix Operating Inc. Coagulation factor vii compositions and methods of making and using same
US20110150843A1 (en) * 2009-10-30 2011-06-23 National Institute Of Immunology Method for the therapeutic correction of hemophilia a by transplanting bone marrow cells
US20130017997A1 (en) * 2010-08-19 2013-01-17 Amunix Operating Inc. Factor VIII Compositions and Methods of Making and Using Same
ES2970057T3 (es) 2011-05-13 2024-05-24 Octapharma Ag Un procedimiento para aumentar la productividad de células eucarióticas en la producción de FVIII recombinante
CN104271150A (zh) 2012-01-12 2015-01-07 比奥根艾迪克Ma公司 嵌合因子viii多肽及其用途
JP6256882B2 (ja) * 2012-02-15 2018-01-10 アムニクス オペレーティング インコーポレイテッド 第ｖｉｉｉ因子組成物、ならびに組成物の作製方法および用途
EP2822577B1 (en) 2012-02-15 2019-02-06 Bioverativ Therapeutics Inc. Recombinant factor viii proteins
TW202003554A (zh) 2013-08-14 2020-01-16 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ｖｉｉｉ－ｘｔｅｎ融合物及其用途
AU2015204646B2 (en) 2014-01-10 2020-08-27 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor VIII chimeric proteins and uses thereof
EA201890423A1 (ru) 2015-08-03 2018-07-31 Биовератив Терапьютикс Инк. Слитые белки фактора ix, способы их получения и применения
CA3020346A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Baxalta Incorporated Method and apparatus for providing a pharmacokinetic drug dosing regimen
JP7618383B2 (ja) 2016-07-22 2025-01-21 ネクター セラピューティクス オキシム含有リンケージを有する第ｖｉｉｉ因子部分のコンジュゲート
MX2019006444A (es) 2016-12-02 2019-10-30 Bioverativ Therapeutics Inc Métodos de tratamiento de artropatía hemofílica utilizando factores de coagulación quiméricos.
US10896749B2 (en) 2017-01-27 2021-01-19 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Drug monitoring tool
US20200245667A1 (en) * 2017-09-13 2020-08-06 Evolve Biosystems, Inc. Oligosaccharide compositions and their use during transitional phases of the mammalian gut microbiome
KR20190086269A (ko) * 2018-01-12 2019-07-22 재단법인 목암생명과학연구소 체내 지속형 재조합 당단백질 및 이의 제조방법
PL3793588T3 (pl) 2018-05-18 2025-09-01 Bioverativ Therapeutics Inc. Sposoby leczenia hemofilii a
JP7672334B2 (ja) * 2018-10-23 2025-05-07 ザ・チルドレンズ・ホスピタル・オブ・フィラデルフィア 第ｖｉｉｉ因子機能を調節するための組成物および方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5612213A (en) * 1993-06-10 1997-03-18 Bayer Corporation Method of selecting mammalian cell lines having improved productivity
US5804420A (en) * 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
WO2000034462A1 (en) * 1998-12-10 2000-06-15 Bayer Corporation Human hybrid host cell for mammalian gene expression
EP1137797A1 (en) * 1998-12-10 2001-10-04 Bayer Corporation Expression system for factor viii

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6045849B2 (ja) 1980-08-25 1985-10-12 林原 健 ヒトエリトロポエチンの製造方法
US4766075A (en) 1982-07-14 1988-08-23 Genentech, Inc. Human tissue plasminogen activator
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4757006A (en) 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US4703008A (en) 1983-12-13 1987-10-27 Kiren-Amgen, Inc. DNA sequences encoding erythropoietin
KR890002004B1 (ko) * 1984-01-11 1989-06-07 가부시끼 가이샤 도오시바 지폐류 판별장치
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4970300A (en) * 1985-02-01 1990-11-13 New York University Modified factor VIII
ES8801674A1 (es) 1985-04-12 1988-02-16 Genetics Inst Un procedimiento para la preparacion de una proteina que presenta actividad procoagulante.
US5198349A (en) 1986-01-03 1993-03-30 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C and analogs
EP0254076B1 (en) * 1986-07-11 1991-05-08 Miles Inc. Improved recombinant protein production
AU613316B2 (en) 1986-09-12 1991-08-01 Genentech Inc. Improved recombinant expression
IL86693A (en) * 1987-06-12 1994-06-24 Stichting Centraal Lab Proteins with factor VIII activity, process for their preparation using genetically engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
CA2351200A1 (en) * 1989-12-01 1991-06-13 Gene Pharming Europe Bv Production of recombinant polypeptides by bovine species and transgenic methods
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
US5661008A (en) 1991-03-15 1997-08-26 Kabi Pharmacia Ab Recombinant human factor VIII derivatives
US5859204A (en) 1992-04-07 1999-01-12 Emory University Modified factor VIII
US5952198A (en) * 1995-05-04 1999-09-14 Bayer Corporation Production of recombinant Factor VIII in the presence of liposome-like substances of mixed composition
DE19517194A1 (de) * 1995-05-11 1996-11-14 Giesecke & Devrient Gmbh Vorrichtung und Verfahren zur Prüfung von Blattgut, wie z.B. Banknoten oder Wertpapiere
MX9504215A (es) 1995-10-05 1997-04-30 Inst Politecnico Nacional Procedimiento mejorado para la purificacion de oligopeptidos con pesos moleculares de 1000 a 10,000 daltones, a partir de estractos leucocitos y su presentacion farmaceutica.
US5922959A (en) * 1996-10-15 1999-07-13 Currency Systems International Methods of measuring currency limpness
US5923413A (en) * 1996-11-15 1999-07-13 Interbold Universal bank note denominator and validator
EP1036177A1 (en) * 1997-12-05 2000-09-20 The Immune Response Corporation Novel vectors and genes exhibiting increased expression
US6040584A (en) * 1998-05-22 2000-03-21 Mti Corporation Method and for system for detecting damaged bills
US6528286B1 (en) 1998-05-29 2003-03-04 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing glycoproteins
US6180108B1 (en) 1998-12-10 2001-01-30 Bayer Corporation Vectors having terminal repeat sequence of Epstein-Barr virus

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5612213A (en) * 1993-06-10 1997-03-18 Bayer Corporation Method of selecting mammalian cell lines having improved productivity
US5804420A (en) * 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
WO2000034462A1 (en) * 1998-12-10 2000-06-15 Bayer Corporation Human hybrid host cell for mammalian gene expression
EP1137797A1 (en) * 1998-12-10 2001-10-04 Bayer Corporation Expression system for factor viii

Also Published As

Publication number Publication date
IL143353A0 (en) 2002-04-21
BR9916069A (pt) 2001-09-04
RU2249041C2 (ru) 2005-03-27
US8945869B2 (en) 2015-02-03
HUP0200558A3 (en) 2004-11-29
SI20644B (sl) 2009-04-30
US7459525B2 (en) 2008-12-02
EP1137797A1 (en) 2001-10-04
IL143353A (en) 2010-12-30
HU228489B1 (en) 2013-03-28
BG105567A (en) 2002-03-29
JP4240818B2 (ja) 2009-03-18
NO329544B1 (no) 2010-11-08
CZ20012024A3 (cs) 2001-10-17
PL200676B1 (pl) 2009-01-30
UA77383C2 (uk) 2006-12-15
EP1137797B1 (en) 2008-10-29
TR200101592T2 (tr) 2001-11-21
US6358703B1 (en) 2002-03-19
SK7922001A3 (en) 2002-01-07
US20020115152A1 (en) 2002-08-22
BRPI9916069B8 (pt) 2021-05-25
US20160115219A1 (en) 2016-04-28
NO20012718L (no) 2001-06-01
NO20012718D0 (no) 2001-06-01
ATE412765T1 (de) 2008-11-15
KR100616028B1 (ko) 2006-08-28
US20170267745A1 (en) 2017-09-21
JP2002531137A (ja) 2002-09-24
US8207117B2 (en) 2012-06-26
EP1137797A4 (en) 2005-06-22
CA2354845A1 (en) 2000-06-15
PL349284A1 (en) 2002-07-15
US20110144025A1 (en) 2011-06-16
BRPI9916069B1 (pt) 2016-08-02
US20130143818A1 (en) 2013-06-06
PT1137797E (pt) 2008-12-26
US20090036358A1 (en) 2009-02-05
ES2315026T3 (es) 2009-03-16
US20020102730A1 (en) 2002-08-01
DK1137797T3 (da) 2009-02-23
BG65431B1 (bg) 2008-07-31
SK286945B6 (sk) 2009-08-06
DE69939839D1 (de) 2008-12-11
US9650431B2 (en) 2017-05-16
HUP0200558A2 (en) 2002-06-28
US20130267468A1 (en) 2013-10-10
KR20020013481A (ko) 2002-02-20
RO121604B1 (ro) 2007-12-28
SI20644A (sl) 2002-02-28
WO2000034505A1 (en) 2000-06-15
US9249209B2 (en) 2016-02-02
AU2170100A (en) 2000-06-26
CA2354845C (en) 2008-08-12
AU761801B2 (en) 2003-06-12
NZ512234A (en) 2002-12-20
US20030077752A1 (en) 2003-04-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ302330B6 (cs) Zpusob výroby a izolace proteinu, který má prokoagulacní aktivitu faktoru VIII a bunecná linie
AU2017214378B2 (en) Optimized Factor VIII genes
ES2248812T3 (es) Proceso para controlar la sialilacion de proteinas producidas por cultivo de celulas de mamiferos.
KR20210100661A (ko) 인자 ix를 발현하는 렌티바이러스 벡터의 용도
AU2017204955A1 (en) Mutated truncated von Willebrand Factor
JP4804356B2 (ja) 第ＶＩＩＩ因子及びその誘導体の高発現レベルのための改変されたｃＤＮＡ
MXPA01005667A (en) Expression system for factor viii
HK1256525B (en) Mutated truncated von willebrand factor

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20191208