CZ303383B6 - Dvojdimenzionální zpusob izolace a analýzy látek z biologických vzorku - Google Patents
Dvojdimenzionální zpusob izolace a analýzy látek z biologických vzorku Download PDFInfo
- Publication number
- CZ303383B6 CZ303383B6 CZ20110040A CZ201140A CZ303383B6 CZ 303383 B6 CZ303383 B6 CZ 303383B6 CZ 20110040 A CZ20110040 A CZ 20110040A CZ 201140 A CZ201140 A CZ 201140A CZ 303383 B6 CZ303383 B6 CZ 303383B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- chip
- analysis
- capillary electrophoresis
- substances
- magnetizable particles
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title abstract description 20
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 38
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 12
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 9
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 claims 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 abstract description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 8
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 6
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 206010063045 Effusion Diseases 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 239000006148 magnetic separator Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000007630 basic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000009141 biological interaction Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000010249 in-situ analysis Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 108010087904 neutravidin Proteins 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Predmetem rešení je zpusob izolace a analýzy látek z biologických vzorku pomocí povrchove modifikovaných magnetizovatelných cástic a cipové kapilární elektroforézy. Metoda je založena na manipulaci s magnetizovatelnými cásticemi prímo v elektroforetickém rezervoáru cipu pro kapilární elektroforézu, kdy se pusobením vnejšího magnetického pole z biologického vzorku izoluje požadovaný analyt, který se následne separuje, identifikuje a kvantifikuje pomocí cipové kapilární elektroforézy.
Description
Dvojdimenzionální způsob izolace a analýzy látek z biologických vzorků
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu selektivní izolace biomolekul ze složitých biologických vzorků pomocí magnetizovatelných částic v kombinaci s rychlou a jednoduchou analýzou pomocí kapilární elektroforézy.
Dosavadní stav techniky
Komplexnost biologických vzorkuje základním problémem ztěžujícím stanovení vybraných analytů. Každému stanovení musí předcházet určitá forma extrakČního, separačního nebo izolačního procesu. Metody co nejjednodušší detekce biologicky významných látek z velmi malých objemů vzorku jsou obec ně velmi důležité.
Extrakce případně izolace minoritních složek komplikované směsi vede k výrazným ztrátám v objemu vzorku a tento jev představuje významný problém především u vzorků, jejichž získání ve větších objemech může být komplikované (mozkomíšní mok, nádorové výpotky aj.). Současný trend vede k intenzivnímu tlaku na rychlost, jednoduchost a komplexnost analytických metod. S tím souvisí také snaha o miniaturizaci analytických přístrojů, které by umožnily přenositelnost těchto zařízení a jejich použití mimo laboratoř, tedy přímo v místě odběru vzorku (např. v přírodě nebo u lůžka pacienta). Analýza in šitu urychluje celý analytický proces a snižuje celkové náklady na analýzu.
Podstata vynálezu
Výše uvedené požadavky jsou do značné míry splněny způsobem izolace a analýzy biologicky významných látek podle tohoto vynálezu.
Podstatou vynálezu je dvojdimenzionální způsob izolace a analýzy látek z biologických vzorků, kdy se analyzované látky před zahájením analýzy kapilární elektroforézou izolují pomocí povrchově modifikovaných magnetizovatelných Částic (jedna dimenze) v elektroforetickém rezervoáru čipu kapilární elektroforézy, poté se v elektroforetickém rezervoáru čipu pro kapilární elektroforézu působením vnějšího magnetického pole separují od modifikovaných magnetizovatelných částic a teprve pak se provede druhá separace a analýza látek pomocí standardní kapilární elektroforézy v čipovém uspořádání (druhá dimenze).
Izolace pomocí povrchově modifikovaných magnetických částic se provádí přímo v elektroforetickém rezervoáru čipu pro kapilární elektroforézu působením vnějšího magnetického pole, které je realizováno pomocí stacionárního magnetu nebo elektromagnetu. Při tomto způsobu je možné využít velmi malého objemu snadno dostupného vzorku, jako jsou veškeré typy tělních tekutin (krev, krevní sérum, mozkomíšní mok, pot, moč, nádorové výpotky).
Způsob podle vynálezu integruje proces izolace látek pomocí magnetizovatelných částic s povrchem selektivně modifikovaným pro studovaný analyt a identifikaci analyzovaných látek pomocí kapilární gelové elektroforézy v mikrofluidním uspořádání. Magnetizovatelné částice s povrchem selektivně modifikovaným pro záchyt proteinů, nukleových kyselin nebo dalších analytů, umístěné do rezervoáru komerčního mikrofluidního čipu specifického pro určitý analyt slouží jako extrakční fáze s velkým povrchem, a tím také s vysokou extrakČní kapacitou. Kapilární elektroforéza optimalizovaná pro analýzu specifického analytu následně poskytuje informace nejen o koncentraci sledované látky, ale například i čistotě, velikost molekul a dalších parametrech.
Ve výhodném uspořádání se využívá komerčně dodávaného elektroťoretického čipu, v jehož rezervoáru je prováděna izolace sledované látky (nukleové kyseliny, proteinu) pomocí modifikovaných magnetizovatelných částic. Pro manipulaci s magnetizovatelnými částicemi se ve výhodném uspořádání používá vnějšího magnetického pole, jehož zdroj je umístěn pod eletroforetickým čipem. Alternativní možností je využití tubulárního magnetu vkládaného do rezervoáru elektroťoretického čipu. Magnetické pole lze realizovat buď pomocí stacionárního magnetu požadované velikosti, nebo elektromagnetu. Po ukončení promývacíeh procesů spojených s izolací je možné „odpadní“ (nebo použité) magnetické částice v rezervoáru ponechat, protože nedochází k jejich migraci separačním kanálem, a tím rušení procesu stanovení, případně je lze odstranit pomocí z míněného tubulárního magnetu.
Pojem „povrchově modifikované magnetizovatelné částice“ zahrnuje Částic vyrobené z magnetických materiálů (např, Fe2O3, Fe,O4 aj.) o rozměrech v řádu nano- nebo mikrometrů modifikované látkou schopnou interagovat sanalytem (např. protilátka, oligonukleotidová komplementární sekvence, aj.).
Pojem „rezervoár elektroťoretického čipu“ pojmenovává prostor na elektroforetickém čipu, který je určen k nanášení roztoků. Jde o miniaturní nádobku, která je součástí plastového pláště čipu a vymezuje vstupy do jednotlivých kanálů v čipu.
Pojem „tubulární magnet“ pojmenovává magnet tyčinko vitého tvaru o rozměrech vhodných pro vsunutí do rezervoáru elektroťoretického čipu.
Pojem „elektromagnet“ pojmenovává magnet tyčinkovitého tvaru o rozměrech vhodných pro vsunutí do rezervoáru elektroťoretického čipu, jehož magnetické vlastnosti jsou ovládány pomocí průchodu elektrického proudu.
Základní postup izolace biomolekul pomocí magnetizovatelných částic je uveden na obr. 1. Ve zkumavce (a) je homogenát vzorku, do kterého byly přidány magnetizovatelné částice. Při procesu zvaném hybridizace (interakce dvou vláken nukleových kyselin), konjugace (protein-protein interakce) či dalších fyzíkálně-chemických interakcích (adsorpce, iontová interakce) dochází k navázání konkrétních biomolekul (DNA, RNA, proteiny) na specificky modifikovaný povrch magnetizovatelných částic (b), který je upraven podle druhu izolovaných molekul. Například pro izolaci nukleové kyseliny je povrch magnetizovatelných částic modifikován řetězcem komplementárním k hledané sekvenci nebo řetězcem tvořeným repetitivní sekvencí (oligo dT, oligo G apod.). Při izolaci proteinů se používá modifikace streptavidinem, avidinem, neutravídinem, proteiny G, A, polymemími sloučeninami nebo například protilátkami (monoklonální, polyklonální). Konjugované složky při hybridizaci bývají pro výslednou detekci biologické interakce značené; nejčastěji technologicky využívané způsoby značení zahrnují streptavidin-biotin nebo avidin— biotin, neutravidin-biotin apod. Poté následuje promytí magnetizovatelných částic sjiž navázanými molekulami, při kterém se odstraní ostatní interferující látky (c). Oddělení izolovaných biomolekul od magnetizovatelných částic se docílí zvýšením teploty (d), změnou iontové síly, změnou složení elučního roztoku či dalšími fyzikálně-chemickými změnami prostředí, ve kterém hybridizace probíhá (e). Po oddělení izolovaných biomolekul se magnetizovatelné částice přitáhnou magnetem a cílové biomolekuly se odpipetují do nové zkumavky (f). Takto separované biomolekuly jsou připraveny pro další analýzu.
Předmětem vynálezu je spojení principu izolace biomolekul pomocí magnetizovatelných částic se separací a následnou analýzou pomocí čipové kapilární elektroforézy (obr. 2). Schematické znázornění komerčně dodávaného čipu je uvedeno v části (A). K tomuto čipu je připojen magnet, umožňující práci s magnetizovatelnými částicemi přímo v čipu (A), (B). Obrázek (C) ukazuje princip separace pomocí magnetizovatelných částic, homogenát s cílovými biomolekulami, interakci částic s cílovou skupinou biomolekul, promytí a odstranění interferujících látek, denaturaci a následnou separaci ve spojení s detekcí cílových biomolekul pomocí čipové kapilární elektroforézy.
-2CZ 303383 Β6
Možnosti manipulace s magnetickými částicemi v jamce elektroforetického Čipu jsou znázorněny na obr. 3. Částice je možné přidržet na dně jamky pomocí planámího magnetu umístěného pod čipem (obr. 3 A), případně lze částice z jamky vyjmout pomocí tenkého tubulámího magnetického mechanismu (obr. 3B, 3C). Přesná manipulace s čipem podél osxay, stejně jako manipulace s magnetickým separátorem v ose z, je v ideálním případě zajištěna pomocí 3D mikromanipulátoru. Realizace magnetického separátoru je možná pomocí permanentního magnetu o vhodném tvaru a rozměrech nebo pomocí elektromagnetu.
Kapilární elektroforéza pomocí jakéhokoli čipu poskytuje informace nejen o koncentraci sledované látky, ale násobí separační potenciál předkládaného patentu o druhou dimenzi, tzn. izolované molekuly pomocí magnetických částic jsou dále rozlišeny dle velikosti a stanovena jejich koncentrace podle určení daného čipu. Způsob podle vynálezu umožňuje rozšířit možnosti běžně dostupných čipů kapilární elektroforézy na efektivní, snadnou a rychlou izolaci a analýzu látek z velmi malých objemů biologických vzorků i mimo laboratoř bez nutnosti specializovaných separačních kanálů s magnety.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1: Postup izolace biomolekul pomocí magnetizovatelných částic
Obr. 2: Izolace biomolekul pomocí magnetizovatelných částic ve spojení sčipovou kapilární elektroforézou
Obr. 3: Možnosti manipulace s magnetickými částicemi
Vynález bude podrobněji popsán pomocí příkladu provedení a přiložených obrázků. Uvedený příklad není omezující z hlediska dalších možných provedení v rozsahu patentových nároků.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1:
Izolace oligonukleotidů specifických pro virus žloutenky typu B
Streptavidinem modifikované magnetické částice byly konjugovány s biotinem značeným oligonukleotidem (HBV) komplementárním k hledanému oligonukleotidu specifickému pro virus žloutenky typu B.
Příprava magnetizovatelných částic k hybridizaci mimo Čip v mikrozkumavce
Magnetizovatelné částice v nativním roztoku se odebraly v objemu 110 μΐ, umístily se do mikrozkumavky, mikrozkumavka se přiložila k magnetu a nativní roztok se odsál. Přidalo se 200 μ 1 promývacího roztoku (50 mM HEPES), roztok se pipetou Sx promíchal, přiložil k magnetu a promývací roztok se odsál.
HBV olígonukleotid značený biotinem se rozpustil v 2 M NaCl roztoku na výslednou koncentraci 5 pg/ml a přidal se k promytým částicím. Mikrozkumavka se vložila do termostatu a třepala se 30 min při 1100 rpm a teplotě 25 °C. Pak se přenesla na magnet, 2 M roztok NaCl s HBV oligonukleotidem se odsál 3x promyl 50 mM roztokem HEPES, po posledním promytí se roztok odstranil, takže v mikrozkumavce zůstaly pouze HBV oligonukleotidem modifikované magnetizovatelné částice.
K promytým modifikovaným magnetizovatelným částicím v mikrozkumavce s HBV oligonukleotídem se přidalo 110 μΐ hybridizačního roztoku (100 mM Na^HPCh, 100 mM NaPhPO^ 0,5 M NaCl a 0,15 M Tris-báze s upraveným pH = 7,5.
Vlastni izolace a analýza cílových molekul na čipu
Do každé z 11 jamek na čipu, určených pro vzorky, se napipetovalo 6 μΐ připravených částic na hybridizaci a do každé jamky se napipetovalo maximálně 5 μΐ vzorku. Vzorek s magnetizovatelnými částicemi se pipetou 5x promíchal.
Celý čip s napi petovaným i vzorky se překryl parafilmem a umístil do termostatu a třepal se 10 min pri 600 rpm a teplotě 25 °C. Čip se pak umístil na 30 až 60 s na magnet (viz obr. 2A), až se magnetizovatelné částice přitáhly k magnetu, opatrně se odsál roztok nad částicemi a přidalo se 10 μΐ promývacího roztoku (50 mM HEPES). Poté se čip odstranil z dosahu magnetu a vzorek s promývacím roztokem v jednotlivých jamkách se 5x promíchal pipetou. Promývání se třikrát zopakovalo, při posledním promytí se promývací roztok odsál a čip se ponechal na magnetu.
Do jednotlivých jamek se přidalo 10 μΐ 50 mM HEPES, čip se překryl parafinem, umístil na termostat a třepal se 10 min pří 600 rpm a teplotě 85 °C. Po uvolnění vzorku z magnetických částic (eluci) se čip okamžitě umístil na magnet a led. Analýza vzorků pomocí kapilární čipové elektroforézy se provedla podle návodu dodávaného k vlastnímu čipu a kapilární čipové elektroforéze a spustila se analýza. Pomocí streptavidinem modifikovaných magnetických částic se takto přímo v elektroforetickém čipu izoloval hledaný biotinem značený HBV oligonukleotid, který se následně analyzoval kapilární elektroforézou. Pomocí softwaru dodávaného k čipu se vyhodnotily vzorky a získala se informace o množství oligonukleotidů specifických pro virus žloutenky typu B, jejich čistotě a také velikosti oligonukleotidového fragmentu.
Průmyslová využitelnost
Dvojdimenzionální způsob izolace a analýzy látek v čipovém uspořádání kapilární elektroforézy umožňuje současně izolaci biologicky významných molekul z biologických vzorků i analýzu na jednom zařízení. Při tomto způsobu izolace analytu pomocí povrchově modifikovaných magnetizovatelných částic nevznikají ztráty odebraného biologického vzorku. Způsob podle vynálezu umožňuje rozšířit možnosti běžně dostupných čipů kapilární elektroforézy na efektivní, snadnou a rychlou izolaci a analýzu látek z velmi malých objemů biologických vzorků i mimo laboratoř bez nutnosti specializovaných separačních kanálů s magnety.
Claims (3)
1, Dvojdimenzionální způsob izolace a analýzy látek z biologických vzorků, vyznačující se tím, že analyzované látky se před zahájením analýzy kapilární elektroforézou izolují pomocí povrchově modifikovaných magnetizovatelných částic v elektroforetickém rezervoáru čipu kapilární elektroforézy, poté se v elektroforetickém rezervoáru čipu pro kapilární elektroforézu působením vnějšího magnetického pole separují od modifikovaných magnetizovatelných částic a teprve pak se provede druhá separace látek a analýza pomocí standardní kapilární elektroforézy v čipovém uspořádání.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že magnetické pole je realizováno pomocí stacionárního magnetu nebo elektromagnetu.
-4CZ 303383 B6
3. Způsob podle nároků la 2, vyznačující se tím, že magnetizovatelné částice jsou paramagnetické mikro- nebo nanočástice.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20110040A CZ303383B6 (cs) | 2011-01-27 | 2011-01-27 | Dvojdimenzionální zpusob izolace a analýzy látek z biologických vzorku |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20110040A CZ303383B6 (cs) | 2011-01-27 | 2011-01-27 | Dvojdimenzionální zpusob izolace a analýzy látek z biologických vzorku |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ201140A3 CZ201140A3 (cs) | 2012-08-22 |
| CZ303383B6 true CZ303383B6 (cs) | 2012-08-22 |
Family
ID=46671075
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20110040A CZ303383B6 (cs) | 2011-01-27 | 2011-01-27 | Dvojdimenzionální zpusob izolace a analýzy látek z biologických vzorku |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ303383B6 (cs) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ2008494A3 (cs) * | 2006-01-19 | 2008-11-26 | Hadidy@Mohamed Roshdy Soliman El | Biocip dva v jednom |
| US20090218222A1 (en) * | 2003-06-09 | 2009-09-03 | Andreas Manz | Free flow electrophoresis microchip, system and method |
-
2011
- 2011-01-27 CZ CZ20110040A patent/CZ303383B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090218222A1 (en) * | 2003-06-09 | 2009-09-03 | Andreas Manz | Free flow electrophoresis microchip, system and method |
| CZ2008494A3 (cs) * | 2006-01-19 | 2008-11-26 | Hadidy@Mohamed Roshdy Soliman El | Biocip dva v jednom |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Dapeng Wu, Jianhua Qin, Bingcheng Lin : Electrophoretic separations on microfluidic chips : Journal of Chromatography A, 1184 (2008), str. 542-559 * |
| Nicole Pamme, Jan C.T. Eijkel, Andreas Manz : On-chip free-flow magnetophoresis: Separation and detection of mixtures of magnetic particles in continuous flow, Journal of Magnetism and Magnetic Materials 307 (2006), str. 237-244 * |
| Sandrine Bronzeau, Nicole Pamme : Simultaneous bioassays in a microfluidic channel on plugs of different magnetic particles, Analytica Chimica Acta 609 (2008), str. 105-112 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ201140A3 (cs) | 2012-08-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6649419B1 (en) | Method and apparatus for protein manipulation | |
| CN101010592B (zh) | 将磁性粒子与流体分离、混合和浓缩的设备和方法及其在提纯方法中的用途 | |
| EP0885958B1 (en) | Method for treating biopolymers, microorganisms or materials by using more than one type of magnetic particles | |
| Serra et al. | The power of solid supports in multiphase and droplet-based microfluidics: towards clinical applications | |
| US9103843B2 (en) | Device and methods for detecting analytes in saliva | |
| CN110167674B (zh) | 用于隔离散液体中的物质的系统和方法 | |
| JP6684868B2 (ja) | 核酸の精製のための１工程法 | |
| CN109416312A (zh) | 利用表面附着结构的流动池，以及相关的系统和方法 | |
| JP2011522219A (ja) | マイクロ流体チップ装置およびその使用 | |
| WO2007085980A1 (en) | Device for analyzing fluids | |
| JP2022509369A (ja) | 粒子捕捉システムおよび方法 | |
| WO2010041230A2 (en) | Microfluidic integrated device for sample processing | |
| CN205570357U (zh) | 一种提取及检测生物样本的装置 | |
| CN110023758B (zh) | 用于从体液样本中分离分析物的设备、系统、方法和套件 | |
| CN110609146B (zh) | 自动分析装置 | |
| EP2805164B1 (en) | Determining a presence of target molecules in a body fluid comprising cells | |
| US20120077184A1 (en) | Electromagnetic multiplex assay biosensor | |
| KR101928333B1 (ko) | 복수개의 금속 나노 태그를 이용한 복수개의 타겟의 동시 분석 방법 | |
| CZ303383B6 (cs) | Dvojdimenzionální zpusob izolace a analýzy látek z biologických vzorku | |
| US20220090166A1 (en) | Preparation methods and apparatus adapted to filter small nucleic acids from biological samples | |
| CZ23748U1 (cs) | Sestava pro selektivní izolaci a analýzu látek z biologických vzorků | |
| WO2022159717A1 (en) | Method for enhancing signals associated with electrophoretically separated analytes using post-electrophoresis treatment | |
| JP3691786B2 (ja) | 核酸を分析する装置、およびそれを用いた核酸を分析する方法 | |
| CN105973682A (zh) | 样本分离装置及分离方法、生物芯片及其应用方法 | |
| WO2022248979A1 (en) | Enzyme-conjugated magnetic beads suspended in internal standard buffer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20121112 |
|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20190127 |