CZ307877B6 - Způsob čištění daptomycinu - Google Patents

Způsob čištění daptomycinu Download PDF

Info

Publication number
CZ307877B6
CZ307877B6 CZ2012-332A CZ2012332A CZ307877B6 CZ 307877 B6 CZ307877 B6 CZ 307877B6 CZ 2012332 A CZ2012332 A CZ 2012332A CZ 307877 B6 CZ307877 B6 CZ 307877B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
daptomycin
lipopeptide
preferred
micelles
buffer
Prior art date
Application number
CZ2012-332A
Other languages
English (en)
Inventor
Thomas J. Kelleher
Jan-Ji Lai
Joseph P. Decourcey
Paul D. Lynch
Maurizio Zenoni
Auro R. Tagliani
Original Assignee
Cubist Pharmaceuticals Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26873002&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ307877(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Cubist Pharmaceuticals Llc filed Critical Cubist Pharmaceuticals Llc
Publication of CZ307877B6 publication Critical patent/CZ307877B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/145—Extraction; Separation; Purification by extraction or solubilisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/20—Partition-, reverse-phase or hydrophobic interaction chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

Předmětem vynálezu je způsob čištění daptomycinu zahrnující krokya) vystavení daptomycinu podmínkám, při nichž se změnou pH tvoří micelární roztok daptomycinu;b) separaci micel daptomycinu v micelárním roztoku daptomycinu od nízkomolekulárních kontaminantů velikostně selektivní technikou;c) vystavení daptomycinu podmínkám, při nichž se změnou pH tvoří monomerní roztk daptomycinu; ad) separaci monomerních molekul daptomycinu v monomerním roztoku daptomycinu od molekul s vysokou molekulární hmotností nebo agregátů velikostně selektivní technikou.

Description

Oblast techniky
Popisují se vysoce čisté formy lipopeptidu, včetně daptomycinu, lipopeptidového antibiotika se silnou baktericidní aktivitou proti gram-pozitivním baktériím, zahrnujících kmeny, které jsou resistentní vůči konvenčním antibiotikům. Vynález se týká způsobů přípravy vysoce čistých forem lipopeptidu. Popisují se rovněž micely lipopeptidu. Dále se popisují farmaceutické přípravky obsahující lipopeptidové micely a způsoby použití těchto přípravků. Předložený vynález se dále zabývá způsoby výroby lipopeptidových micel z neasociovaného monomeru lipopeptidu a přeměnou lipopeptidových micel na neasociované monomery. Tento vynález se také zabývá způsobem přípravy lipopeptidu s využitím micel, který je snadno rozšiřitelný do průmyslového měřítka.
Dosavadní stav techniky
Rychlý nárůst výskytu gram-pozitivních infekcí, včetně těch, které jsou způsobeny baktériemi resistentními vůči antibiotikům, vyvolal obnovený zájem o vývoj nových typů antibiotik. Jedním z těchto typů jsou lipopeptidová antibiotika, zahrnující daptomycin. Daptomycin má silnou baktericidní aktivitu in vitro proti klinicky důležitým gram-pozitivním baktériím, způsobujícím vážné, život ohrožující onemocnění. Tyto bakterie zahrnují resistentní pathogeny, jako jsou enterokoky resistentní vůči vankomycinu (VRE), Staphylococcus aureus resistentní vůči methicilinu (MRSA), Staphylococcus aureus s glykopeptidem zprostředkovanou vnímavostí (GISA), stafylokoky negativní vůči koaguláze (CNS) a Streptococcus pneumoniae resistentní vůči penicilinu (PRSP), pro které je jen velmi málo terapeutických alternativ. Viz např. Tally et al., 1999, Exp. Opin. Invest. Drugs 8: 1223-1238, dále zmiňovaný jako Tally. Inhibiční efekt daptomycinu je rychlý, vykazující koncentračně závislé působení in vitro i in vivo a dále relativně dlouhodobý koncentračně závislý post-antibiotický efekt in vivo.
Daptomycin je popsán v Baltz, Biotechnology of Antibiotics, 2. vydání, ed. W. R. Strohl (New York, Marcel Dekker, lne.), 1997, str. 415 až 435, dále označovaný jako Baltz. Daptomycin, také známý jako LY 146032, je cyklické lipopeptidové antibiotikum, které může být získáno fermentací Streptomyces roseosporus. Daptomycin je členem typu antibiotik Streptomycin roseosporus, majících faktor A-21978Co a skládá se z dekanoylového postranního řetězce připojenému k N-terminálnímu tryptofanu cyklického peptidu obsahujícího 13 aminokyselin (Obr. 1). Daptomycin má vynikající aktivitní profil, protože je vysoce efektivní vůči většině gram-pozitivních baktérií, je vysoce baktericidní a rychle působící, má nízký podíl resistence a je účinný vůči organismům resistentním proti antibiotikům. Sloučenina byla v současnosti rozvinuta do celé řady přípravků pro léčení vážných infekcí způsobených bakteriemi, zahrnujících (výčet není vyčerpávající) Staphylococcus aureus resistentní vůči methicilinu (MRSA) a enterokoky resistentní vůči vancomycinu (VRE).
Mnoho americký patentů popisuje A-21978C antibiotika a jejich deriváty včetně daptomycinu (LY 146032), stejně jako způsoby výroby a izolace A-21978C antibiotik a jejich derivátů.
US patenty Re. 32333, Re. 32455 a 4800157 popisují způsob syntézy daptomycinu kultivací Streptomyces roseosporus NRL 15998 za podmínek aerobní fermentace. US patent 4885243 popisuje upravenou metodu přípravy daptomycinu, při které se fermentační kultura živí děkanovou mastnou kyselinou, jejím esterem nebo solí.
US patenty Re. 32310, Re. 32311, 4537717, 4482487 a 4524135 popisují způsoby deacylace antibiotika A-21978C a reacylace peptidového jádra a antibiotických derivátů připravených tímto způsobem. Všechny tyto patenty popisují čištěné deacylované jádro antibiotika A-21978C nebo
- 1 CZ 307877 B6 jeho deriváty, které se izolují z fermentační kapaliny filtrací a poté čištěním pomocí Diaion HP20 chromatografie a chromatografie na silikagel/C18.
US patenty Re. 32333 a Re. 32455 popisují způsob čištění, při kterém se filtrát celé fermentační kapaliny čistí mnoha srážecími a extrakčními kroky za vzniku surového komplexu A-2197 8C. Surový komplex se dále čistí pomocí iontově výměnné chromatografie na IRA-68 a pomocí dvoukolové chromatografie na silikagelu. Individuální A-21978C faktory byly separovány pomocí chromatografie na reverzní fázi s využitím silikagelu nebo silikagel/C18. United US patenty Re. 32333 a Re. 32455 také popisují, že A-21978C může být čištěn dávkovou chromatografií s využitím Diaion HP-20 pryskyřice, následované chromatografií na silikagelové koloně.
US patent 4874843 popisuje způsob čištění daptomycinu, při kterém se fermentační kapalina zfiltruje a protlačí přes kolonu obsahující pryskyřici HP-20. Po eluování se částečně vyčištěný daptomycin protlačí přes kolonu obsahující HP-20ss a poté se opět separuje na HP-20 pryskyřici. Patent 4874843 říká, že finální resoluce a separace daptomycinu ze strukturně podobných sloučenin pomocí této metody je znesnadňována přítomností nečistot, které nejsou identifikovatelné pomocí ultrafialové analýzy fermentační kapaliny. Patent '843 dále říká, že pokusy o odstranění těchto nečistot pomocí silikagelové chromatografie na reverzní fázi, chromatografií na silikagelu s normální fází nebo pomocí iontově výměnné chromatografie nebyly úspěšné při zvyšování čistoty daptomycinu. Patent '843 dále popisuje reverzní metodu čištění zahrnující kroky kontaktování vodného roztoku fermentačního produktu s nefunkční pryskyřicí ve vodné fázi, fýzikální odstranění vody z pryskyřice, opětovné zvlhčení pryskyřice s polárním organickým rozpouštědlem, promytí pryskyřice organickým rozpouštědlem, eluování fermentačního produktu z pryskyřice zvyšováním polarity rozpouštědla a získání fermentačního produktu. Patent '843 popisuje, že tato metoda upravuje finální čistotu z asi 80 % na asi 93 % a zvyšuje výtěžek z asi 5 % na 35 %, ovšem patent '843 nepopisuje typ nečistot přítomných v daptomycinovém preparátu.
Patent US 5912226 popisuje identifikaci a izolaci dvou nečistot během přípravy daptomycinu. Daptomycin, α-aspartylpeptid, se transpeptiduje za vzniku stabilního intermediátu, ve kterém se aspartylová skupina stává anhydro-sukcinimidoskupinou (Obr. 3). Patent '226 říká, že přítomnost tohoto intermediátu, označovaného jako anhydro-daptomycin, je zvýšený při pH 4 až 6. Rehydrace anhydro-sukcinimidové formy poskytuje druhý degradační produkt, obsahující βaspartylovou skupinu a je označován jako β-isomemí forma daptomycinu (Obr. 2).
Patent 5912226 popisuje, že t-BOC derivát anhydro-daptomycinu může být izolován pomocí chromatografie s reverzní fází na koloně obsahující silikagel/C-18, srážením a dalším čištěním pomocí silikagel/C-18 chromatografie s reverzní fází. Patent 5912226 také popisuje, že βizomemí forma daptomycinu může být chromatografována na pryskyřici Diaion HP-20ss, odsolena chromatografií na Diaion HP-20 a dále čištěním pomocí chromatografie s reverzní fází na C-18 koloně následované kolonou s HP-20 pryskyřicí v reverzním módu.
Kirsch et al. (Pharmaceutical Research, 6:387-393, 1989, dále označovaný jako Kirsch) uvedl, že anhydro-daptomycin a β-isomer byly získány při čištění daptomycinu. Kirsch popsal metody minimalizace koncentrace anhydro-daptomycinu a β-isomeru prostřednictvím manipulace s hodnotami pH a teplotou. Ovšem Kirsch nebyl schopen stabilizovat daptomycin a zabránit jeho konverzi na anhydro-daptomycin a jeho následné isomerizaci na β-isomer. Kirsch také nebyl schopen zabránit degradaci daptomycinu na další degradační produkty, které nejsou příbuzné s anhydro-daptomycinem a β-isomerem.
Patent '226 říká, že daptomycin může být připraven s využitím popsaných procedur tak, že neobsahuje výše než celkem 2,5 % hmotnosti anhydro-daptomycinu a β-isomeru, ovšem neuvádí žádné konkrétní koncentrace dalších nečistot. Ve způsobu popsaném v US patent
-2CZ 307877 B6
4874843 a u přípravy daptomycinu pro klinické testování ve velkém měřítku, byla nejvyšší pozorovaná koncentrace kolem 90 až 93 %. Je tedy potřeba komerčně vhodné metody přípravy mnohem čistšího daptomycinu a pokud je to možné, i zvýšení jeho výtěžku po čištění. Dále by bylo vhodné získávat daptomycin, který by obsahoval méně nebo vůbec žádný anhydrodaptomycin a β-isomemí formu daptomycinu. Bylo by také žádoucí snížit koncentrace dalších nečistot v daptomycinu. Ovšem, v současném stavu techniky není dostupná žádná metoda, která by byla schopna dále snížit koncentrace anhydro-daptomycinu, β-isomemí formy a dalších nečistot v daptomycinovém produktu.
Podstata vynálezu
Předložený vynález řeší zmíněné problémy tím, že poskytuje komerčně zajímavé způsoby přípravy vedoucí k vysokým stupňům čistoty lipopeptidu. V jednom provedení tohoto vynálezu je popsána komerčně vhodná metoda, vedoucí k daptomycinu o stupni čistoty 95 až 97 %. V jiném provedení tohoto vynálezu je popsána komerčně výhodná metoda, která téměř zcela eliminuje hlavní nečistoty anhydro-daptomycin a β-isomer, stejně jako další nečistoty při přípravě daptomycinu. Vynález poskytuje komerčně přijatelné metody čištění lipopeptidů, včetně daptomycinu nebo lipopeptidů příbuzných s daptomycinem, zahrnující oddělení lipopeptidových micel od nízkomolekulámích kontaminantů a separaci lipopeptidových micel od vysokomolekulámích nečistot. Popisuje se také způsob analýzy čistoty daptomycinu pomocí vysokorozlišovací kapalinové chromatografie a dále detekci a charakterizaci dalších nečistot v daptomycinu, z nichž některé byly dosud neznámé.
Popis předkládá čištěný daptomycin, který vykazuje čistotu alespoň 98 % nebo který je v podstatě zbaven anhydro-daptomycinu a β-isomeru. Popis předkládá čištěný daptomycin, který je prakticky zbaven anhydro-daptomycinu a který obsahuje mnohem nižší koncentrace βisomeru a dalších kontaminantů, než bylo možné dosáhnout v současném stavu techniky. Popis také předkládá lipopeptidové micely. Ve výhodném provedení micely zahrnují daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid. Popis také předkládá farmaceutický přípravek zahrnující vysoce čistý daptomycin nebo micely obsahující daptomycinu příbuzný lipopeptid a způsoby využití těchto přípravků.
Objasnění výkresů
Obrázek 1 ukazuje strukturu daptomycinu.
Obrázek 2 zachycuje strukturu nečistoty 8, CB-131010 (dříve identifikovaný jako β-isomer, LY 213846).
Obrázek 3 ukazuje strukturu nečistoty 13, CB-130952 (dříve identifikovaný jako anhydrodaptomycin, LY178480).
Obrázek 4 ukazuje předpokládanou strukturu nečistoty 1, CB-131012 (dříve identifikovanou jako LY212218).
Obrázek 5 ukazuje předpokládanou strukturu nečistoty 2, CB-131011.
Obrázek 6 ukazuje předpokládanou strukturu nečistoty 3, CB-131008 (dříve identifikovanou jako LY213928).
Obrázek 7 ukazuje předpokládanou strukturu nečistoty 4, CB-131006.
-3 CZ 307877 B6
Obrázek 8 ukazuje předpokládanou strukturu nečistoty 6, CB-130989 (dříve identifikované jako LY213827).
Obrázek 9 ukazuje předpokládanou strukturu nečistoty 7, CB-131005.
Obrázek 10 ukazuje předpokládanou strukturu nečistoty 12, CB-131009.
Obrázek 11 ukazuje předpokládanou strukturu nečistoty 14, CB-131078 (dříve identifikovanou jako LY109208).
Obrázek 12 ukazuje HPLC chromatogram přípravy daptomycinu (velké měřítko), včetně nečistot 1 až 14.
Obrázek 13 ukazuje HPLC chromatogram přípravy daptomycinu po čištění na pryskyřici Poros P150.
Obrázky 14A až 14C ukazují micelámí struktury. Obrázek 14A ukazuje sférickou micelu, ve které jsou hydrofobní konce amfifilních molekul orientovány dovnitř směrem ke středu, zatímco hydrofilní hlavy amfifilních molekul jsou směrovány ven z micely a jsou v kontaktu s vodným prostředím. Obrázek 14A ukazuje příklad, ve kterém jsou hydrofilní hlavy s negativním nábojem. Obrázek 14B ukazuje lipidickou dvoj vrstvou strukturu, ve které jsou dvě vrstvy amfifilních molekul orientovány tak, že hydrofobní konce každé vrstvy jsou orientovány vůči sobě navzájem, zatímco hydrofilní hlavy jsou na obou stranách dvoj vrstvy a jsou v kontaktu s vodným prostředím. Lipidické dvojvrstvy mohou být buď kulovité, nebo rovinné. Obrázek 14C ukazuje liposom, ve kterém je lipidická dvojvrstva, jako třeba ta na obrázku 14B, ve formě kulovité struktury uzavírající uvnitř vodné prostředí. Hydrofilní hlavy liposomu jsou na vnitřní straně (interiér) a na vnější straně v kontaktu s vodným prostředím (exteriér).
Obrázek 15 ukazuje výsledky pokusu o určení kritické micelámí koncentrace (cmc) daptomycinu při pH 4,0.
Obrázek 16 ukazuje distribuci velikosti částic daptomycinových micel pomocí rozptylu světla. Daptomycinové micely mají průměrnou velikost částic 5,4 nm (54 Á).
Podrobný popis vynálezu
Předmětem vynálezu je způsob čištění daptomycinu vyznačující se tím, že zahrnuje
a) vystavení daptomycinu podmínkám, při nichž se změnou pH tvoří micelámí roztok daptomycinu;
b) separaci micel daptomycinu v micelámím roztoku daptomycinu od nízkomolekulámích kontaminantů velikostně selektivní technikou;
c) vystavení daptomycinu podmínkám, při nichž se změnou pH tvoří monomemí roztok daptomycinu; a
d) separaci monomemích molekul daptomycinu v monomemím roztoku daptomycinu od molekul s vysokou molekulární hmotností nebo agregátů velikostně selektivní technikou. Výhodně velikostně selektivní technikou je ultrafiltrace nebo velikostně vylučovací chromatografie.
Jedním z předmětů tohoto popisu je předložení způsobu čištění lipopeptidů, který je snadno rozšiřitelný na měřítko komerční výroby zahrnující unikátní kombinaci anion-výměnné chromatografie a chromatografie využívající hydrofobní interakce. V preferovaném provedení
-4CZ 307877 B6 tohoto vynálezu je popsán způsob výroby čištěného daptomycinu, jehož čistota je vyšší než 95 % a který vykazuje snížené koncentrace nečistot ve srovnání s daptomycinem připraveným postupy známými v současném stavu techniky. V dalším preferovaném provedení je popsán způsob výroby daptomycinu, využívající snížené hodnoty rozpouštědel ve srovnání se současným stavem techniky. V dalším provedení je popsán způsob čištění daptomycinu příbuzných lipopeptidů, majících vyšší než 95% čistotu.
Dalším předmětem tohoto popisu je zajištění způsobu zvyšování koncentrace lipopeptidů, vzniklých vyživováním mikroorganismů fermentační kultury se sníženými koncentracemi mastné kyseliny. Použití nižších koncentrací děkanové kyseliny než bylo popsáno v patentu US 4885243, vede ke zlepšení ekonomiky, kromě toho, že se vyrobí vysoce čistá forma daptomycinu nebo daptomycinu příbuzného lipopeptidů. Vpreferovaném provedení tohoto vynálezu je popsán způsob zvýšení koncentrace a množství daptomycinu vyrobeného Streptomyces roseosporus, přičemž je minimalizována produkce odpovídajících nečistot. Nižší úroveň kontaminantů ve fermentační kapalině vede k efektivnějšímu získávání a čištění daptomycinu, čímž je zajištěn způsob výroby s vyšším výtěžkem.
Dalším předmětem tohoto popisu je zajištění způsobu čištění daptomycinu nebo daptomycinu příbuzných lipopeptidů, zahrnující použití modifikované pufirem zvýšené anion-výměnné chromatografie. V preferovaném provedení je popsán způsob výroby daptomycinu s čistotou alespoň 98 % nebo takového, který je v podstatě zbaven anhydro-daptomycinu nebo β-isomeru. V dalším preferovaném provedení je popsán způsob čištění daptomycinu příbuzných lipopeptidů o čistotě alespoň 98 %.
Dalším předmětem popisu je zajištění chromatografické metody čištění lipopeptidů, zahrnující novou kombinaci anion-výměnné chromatografie, chromatografie využívající hydrofobní interakce a anion-výměnnou chromatografií zesílenou pufirem. V preferovaném provedení tohoto vynálezu je popsán způsob chromatografického čištění daptomycinu nebo daptomycinu příbuzných lipopeptidů. Modifikovaný pufř nečekaně dovoluje separaci anhydro-daptomycinu od daptomycinu, která nebyla možná s využitím dosud známých chromatografických metod.
Dalším předmětem tohoto popisu je zajištění způsobu čištění lipopeptidů, který je snadno rozšiřitelný pro výrobu lipopeptidových micel v komerčním měřítku. V jednom provedení je popsán způsob výroby zahrnující převedení lipopeptidového roztoku z monomemího nemicelámího stavu do micelámího stavu a poté zpátky během čisticího procesu. V preferovaném provedení zahrnuje způsob výroby vystavení lipopeptidů takovým podmínkám, při kterých se tvoří micely, separaci lipopeptidových micel od nízkomolekulámích kontaminantů, např. pomocí technik separujících na základě velikosti. V dalším preferovaném provedení způsob zahrnuje podrobení lipopeptidů takovým podmínkám, při kterých jsou lipopeptidy v monomemí formě a separaci monomemího lipopeptidů od molekul s vyšší molekulovou hmotností nebo od agregátů, např. pomocí separačních technik dělících na základě různé velikosti. V preferovanějším provedení vynálezu zahrnuje způsob oba kroky: podrobení lipopeptidů podmínkám, při kterých vznikají micely a separace lipopeptidových micel z nízkomolekulámích kontaminantů, a poté podrobení lipopeptidových micel podmínkám, při nichž jsou lipopeptidy ve formě monomerů a separace lipopeptidových monomerů od vysokomolekulámích molekul a agregátů. Tyto dva kroky mohou být provedeny v libovolném pořadí. V ještě preferovanějším provedení je separační metodou ultrafiltrace nebo velikostně vylučovací chromatografie.
Dalším předmětem tohoto popisu je předložení vylepšené metody měření čistoty lipopeptidů, včetně daptomycinu, pomocí vysokorozlišovací kapalinové chromatografie (HPLC).
Dalším předmětem tohoto popisu je zajištění čištěných lipopeptidů, jako je daptomycin nebo daptomycinu příbuzné lipopeptidy a jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo přípravky je obsahující. V preferovaném provedení se popisuje daptomycin nebo daptomycinu příbuzné lipopeptidy, čištěné jedním ze způsobů popsaných v tomto spisu. Tento popis také předkládá
-5 CZ 307877 B6 farmaceutické přípravky čištěného lipopeptidu nebo jeho soli a způsoby podávání těchto přípravků. V preferovaném provedení farmaceutický přípravek zahrnuje čištěný daptomycin.
Dalším předmětem tohoto popisu je předložení lipopeptidových micel a jejich farmaceuticky přijatelných přípravků. V preferovaném provedení se tento popis týká daptomycinových micel nebo micel z daptomycinu příbuzných lipopeptidů a jejich farmaceuticky přijatelných přípravků.
V dalším provedení se také popisuje způsob podávání lipopeptidových micel nebo jejich přípravků potřebným pacientům. V preferovaném provedení se lipopeptidové micely podávají intravenózně, parenterálně, intramuskulámě nebo místně.
Definice
Pokud není definováno jinak, všechny technické a vědecké termíny použité v tomto vynálezu mají význam, který je obvyklý pro odborníky v oboru, jimž je tento vynález určen. Provedení tohoto vynálezu používá, pokud není uvedeno jinak konvenční techniky chemie, biochemie a mikrobiologie a základní terminologii zde použitou.
Termín izolovaný označuje sloučeninu nebo produkt, který odpovídá sloučenině reprezentující nejméně alespoň 10 %, s výhodou alespoň 20 % nebo 30 %, výhodněji alespoň 50 %, 60 % nebo 70 % a nejvýhodněji alespoň 80 % nebo 90 % sloučeniny přítomné ve směsi.
Termín lipopeptid označuje molekulu zahrnující lipidovou skupinu kovalentně vázanou na peptidovou skupinu, stejně jako její soli, estery, amidy a ethery. Termín „lipopeptid také zahrnuje chráněné formy lipopeptidu, kde je jedna nebo více aminoskupin, karboxylových skupin nebo hydroxylových skupin ochráněna. Příklady chránících skupin viz např. Protective Groups in Organic Synthesis (Theodora W. Greene), John Wiley and Sons, New York, 1981. V preferovaném provedení tohoto vynálezu je lipopeptidem antibiotikum. V dalším preferovaném provedení tohoto vynálezu je lipopeptidem LY 303366, echinocandins, pneumocandins, aculeacins, surfactin, plipastatin Bl, amphomycin nebo lipopeptidový derivát popsaný v US patent 5629288. Tyto lipopeptidy jsou známé v současném stavu techniky. Viz např. patent US 5202309 a mezinárodní patentovou přihlášku WO 00/08197. V dalším preferovaném provedení tohoto vynálezu je lipopeptid daptomycinu příbuzná molekula, včetně (mimo jiné) daptomycinu, A54145, daptomycinu příbuzný lipopeptid popsaný v patentech US 4537717, 4482487, Re. 32.311, Re. 32.310, 5912226, v současné době ve znovu podaném US č. 09/547357, mezinárodní patentové přihlášce WO 01/44272, WO 01/44271, které jsou zde všechny zahrnuty jako reference, nebo antibiotikum A-21978, ve kterém je n-dekanoylový postranní řetězec daptomycinu nahrazen n-oktanoylovým, n-nonanoylovým, nundekanoylovým, n-dodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo n-tetradekanoylovým postranním řetězcem. Daptomycinu příbuzné lipopeptidy popsané ve WO 01/44272, WO 01/44274 a WO 01/44271 se vztahují k syntetickým a semisyntetickým lipopeptidům, kde jsou modifikovány omithinové nebo kynurinové zbytky nebo postranní řetězec mastné kyseliny.
V ještě preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin. Termín daptomycinu příbuzný lipopeptid označuje sloučeniny výše popsané a jejich soli.
Termín daptomycin označuje n-dekanoylový derivát antibiotického faktoru A-21978Co nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli. Daptomycin je synonymum s LY14 6032. Viz Obrázek 1.
Termín anhydro-daptomycin označuje daptomycinový derivát, kde je α-aspartylová skupina daptomycinu transpeptidována na anhydro-sukcinimidovou skupinu.
Termín β-isomer nebo β-isomer daptomycinu označuje daptomycinové deriváty, které obsahují β-aspartylovou skupinu namísto α-aspartylové skupiny. Viz Obrázek 2.
Daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid je v podstatě čistý, když alespoň 95 % vzorku je daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid. S výhodou, daptomycin nebo
-6CZ 307877 B6 daptomycinu příbuzný lipopeptid je prakticky čistý, když alespoň 97 % vzorkuje daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid. Daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid je prakticky čistý, když alespoň 98 % vzorku je daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid. S výhodou, daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid je prakticky čistý, když alespoň 99 % vzorkuje daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid.
Daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid je prakticky zbaven další látky, když další sloučenina je přítomna v množství, které není vyšší než 1 % hmotnosti daptomycinu nebo daptomycinu příbuzného lipopeptidového přípravku.
Daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid je v podstatě zbaven další sloučeniny, když další sloučenina je přítomna v množství, které není vyšší než 0,5 % hmotnosti daptomycinu nebo daptomycinu příbuzného lipopeptidového přípravku.
Daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid je zbaven další látky, když další sloučenina je přítomna v množství, které není vyšší než 0,1 % hmotnosti daptomycinu nebo daptomycinu příbuzného lipopeptidového přípravku. Alternativně, daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid je zbaven další sloučeniny, když tato sloučenina nemůže být detekována pomocí HPLC za podmínek maximální citlivosti, při kterém je detekční limit přibližně 0,05 % nebo nižší množství daptomycinu nebo daptomycinu příbuzného lipopeptidového přípravku. Příklady HPLC metod jsou popsány dále (Tabulka 1 a 2).
Čištěný daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid označuje prakticky čistý daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid, v podstatě čistý daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid nebo jejich soli nebo daptomycin, daptomycinu příbuzný lipopeptid nebo jejich soli, které jsou v podstatě čisté nebo zbavené další sloučeniny.
Částečně čištěný daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid označuje daptomycin, daptomycinu příbuzný lipopeptid nebo jejich sůl, která má nižší než 90 % čistotu.
Čistota daptomycinu, daptomycinu příbuzného lipopeptidu nebo jiného lipopeptidu označuje lipopeptid před jeho formulováním do farmaceutického přípravku. Čistota může být měřena libovolným prostředkem včetně nukleárně magnetické resonance (NMR), plynové chromatografie/hmotnostní spektroskopie (GC/MS), kapalina chromatografie/hmotnostní spektroskopie (LC/MS) nebo mikrobiologickým stanovením. Preferované prostředky pro měření čistoty daptomycinu je analytická vysokorozlišovací kapalinová chromatografie (HPLC).
Termín micela označuje agregáty amfifilních molekul. Ve vodném prostředí je lipofilní doména molekul agregátů orientována proti interiéru micely a hydrofilní domény jsou v kontaktu s mediem. Struktury micel zahrnují (výčet není vyčerpávající) sférické, laminámí, cylindrické, elipsovité, vesikulámí (liposomálni), lamerální a kapalné krystaly. Viz Obrázek 14.
Termín smíšené micely označuje konkrétní typ micely, ve kterém micela obsahuje více než jeden typ amfifilní molekuly. V kontextu tohoto vynálezu smíšené micely obsahují lipopeptid a alespoň jednu další amfifilní molekulu, kterou může být další lipopeptid. Smíšené micely obsahují alespoň 10 % lipopeptidu (hmotnostní %). V dalších provedeních obsahují smíšené micely alespoň 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % nebo 90 % lipopeptidu.
Termín micelámí roztok označuje roztok, ve kterém více než 50 % molekul lipopeptidu v roztoku je přítomno v micelách (hmotnostní údaje). S výhodou, alespoň 60 %, 70 % nebo 95 % molekul je ve formě micel. Micelámí roztok se zachycuje na ultrafiltrační membráně, pokud je vyrobena (cutoff) pro nominální molekulovou hmotnost 10 000 dalton.
-7 CZ 307877 B6
Termín kritická micelámí koncentrace (cmc) označuje určitou koncentraci molekul, která závisí na teplotě, koncentraci soli a typu amfifilní molekuly. Nad cmc existují v rovnováze neasociované molekuly a micely.
Termín monomer označuje amfifilní molekulu, která není částí agregátu, ovšem která existuje jako jediná molekula. V kontextu tohoto vynálezu označuje termín monomer neasociovaný lipopeptid.
Termín monomemí roztok označuje roztok, ve kterém je více než 50 % lipopeptidových molekul přítomno ve formě monomeru (hmotnostní údaje). S výhodou, alespoň 60 %, 70 %, 80 %, 90 % nebo 95 % je přítomno ve formě monomeru. Monomemí roztok není zachycen na ultrafiltrační membráně, pokud je vyrobena (cutoff) pro nominální molekulovou hmotnost 10 000 dalton, a spíše touto membránou prochází.
Termín pufir s nízkou iontovou silou označuje roztok, který má koncentraci soli pod 50 nM, termín pufir se střední iontovou silou označuje roztok mající koncentraci soli mezi 50 až 250 mM, termín pufir s vysokou iontovou silou označuje roztok mající koncentraci soli vyšší než 250 mM.
Způsoby výroby čištěných lipopeptidů
Jedno provedení tohoto způsobu popisuje chromatografickou metodu, která produkuje čištěný lipopeptid komerčně zajímavým způsobem. V preferovaném provedení je lipopeptidem daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid. Způsob chromatografické metody zahrnuje sekvenční použití anion-výměnné chromatografie, chromatografie s hydrofobními interakcemi (HIC) a anion-výměnné chromatografie k čištění přípravků obsahujících lipopeptid jako je daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid.
V preferovaném provedení způsob čištění dále zahrnuje změnu fermentačních podmínek, kdy vzniká A21978C obsahující surový produkt pomocí Streptomyces roseosporus, za účelem zvýšení produkce daptomycinu a snížení koncentrace nečistot a odpovídajících kontaminantů, vyráběných fermentační kulturou S. roseosporus.
Preferované provedení způsobu chromatografické metody je popsáno dále:
Streptomyces roseosporus je fermentován s živnou n-dekanovou kyselinou, podle popisu v patentu US 4885243, s modifikací kdy děkanova kyselina byla udržována na co nejnižších koncentracích bez toho, aby to ovlivnilo celkový výtěžek fermentace. V preferovaném provedení je udržována zbytková kyselina dekanová během aerobní fermentace na koncentraci nižší než 50 part per milion (ppm). V ještě preferovanějším provedení je udržována zbytková kyselina děkanova během aerobní fermentace na koncentraci nižší než 20 part per milion (ppm). V preferovaném provedení je udržována zbytková kyselina děkanova během aerobní fermentace na koncentraci přibližně 10 part per milion (ppm). V preferovaném provedení se koncentrace zbytkové děkanové kyseliny měří během fermentace a koncentrace živného roztoku děkanové kyseliny se adjustuje tak, aby koncentrace zbytkové děkanové kyseliny byla udržována během aerobní fermentace v rámci preferovaných parametrů. Současný stav techniky nepopisuje in sítu konkrétní a nízkou residuální koncentraci děkanové kyseliny, požadovanou pro dosažení optimální exprese daptomycinu obsahujícího nízké koncentrace nečistot.
Po fermentaci se extracelulámí roztok vyčeří odstraněním mycelia od fermentační kapaliny. Odstranění mycelia od fermentační kapaliny se provádí standardními separačními technikami jako je centrifugace nebo mikrofiltrace. V preferovaném provedení se fermentační kapalina čistí mikrofiltrací s využitím Pall Sep™ membránového systému. V preferovanějším provedení se fermentační kapalina čistí s využitím průmyslové centrifugy jako je Westfalia™, následované dokončením na hlubokém filtru. K odstranění mycelia od fermentační kapaliny mohou být
-8CZ 307877 B6 použity další přístroje, jako jsou filtrační lisy, rotační bubnové filtry nebo hluboké filtry pro jedno použití za vzniku čiré kapaliny vhodné pro sloupcovou chromatografií ve velkém měřítku.
V dalším provedení může být daptomycin extrahován z fermentace mycelia přímo s využitím organického rozpouštědla jako je butanol předtím, než je vyčeřeno separací na odstředivce nebo filtru. Podle tohoto provedení může být pro extrakci použit libovolný alkohol mající čtyři nebo více atomů. Preferovaným rozpouštědlem je n-butanol. Využití organického rozpouštědla vede k dodatečnému čištění daptomycinu ve srovnání s čistě vodnou separací daptomycinu. Například, daptomycin se rozděluje do n-butanolu, je-li butanol použit v koncentracích vyšších než 10% a když je proces prováděn za podmínek, při kterých n-butanol vytváří oddělenou fázi, např. při hodnotách pH 4 až 5, což je blízko isoelektrického bodu daptomycinu (viz Příklad 4).
V dalším provedení se daptomycin vyrábí v imobilizovaném reaktoru, který využívá předem aktivované mycelium pro nefermentační produkci daptomycinu s využitím zdroje energie, s výhodou cukru, základních složek jako jsou aminokyseliny a amoniak a děkanova kyselina. Produkce daptomycinu v reaktoru s imobilizovaným enzymem se poté provádí pomocí popsaných metod.
Po vyčeření fermentační kapaliny se koncentrace daptomycinu obohacuje (to jest zakoncentrovává se) pomocí anion-výměnné chromatografie. Vyčeřený roztok se nechá nejdříve kontaktovat s anion-výměnnou pryskyřicí za podmínek, kdy se většina daptomycinu váže na anion-výměnnou pryskyřici. Po navázání se pryskyřice promyje vodným pufřern s vhodnou iontovou silou kvůli odstranění nevázaného materiálu a daptomycinových nečistot. Nakonec se čištěný daptomycin vázaný na pryskyřici eluuje za podmínek, při nichž daptomycin disociuje z pryskyřice.
Navázání, promytí a eluování může být provedeno s využitím pufřů a metod známých v současném stavu techniky. Například, eluování může být provedeno s využitím pufru obsahujícího zvýšenou koncentraci soli ve srovnání s promývacím pufrem, s pufřern, který má nižší hodnotu pH ve srovnání s promývacím pufrem nebo s pufrem, který má jak vyšší koncentraci soli tak i nižší hodnotu pH než má promývací pufř. V preferovaném provedení se daptomycin váže na anion-výměnnou pryskyřici, která byla předtím nechána reagovat s pufrem neobsahujícím žádnou přidanou sůl nebo obsahující pouze nízké koncentrace soli při neutrálním až bazickém pH. Pryskyřice se po navázání daptomycinu promyje trojnásobným objemem vody a poté šesti objemy pufru se středním obsahem soli obsahujícím 30 až 60 mM NaCl. Daptomycin je eluován z kolony s jedním až třemi objemy pufru se zvýšeným obsahem soli nebo s nižším pH obsahujícím 300 až 500 nM NaCl. Vyšší koncentrace chloridu sodného a alternativní soli jako je chlorid draselný bude také eluovat daptomycin z pryskyřice. V preferovaném provedení se používá aniontová výměnná pryskyřice s nižším průtokem. V preferovanějším provedení se používá pryskyřice FP-DA 13 (Mitsubishi).
Anion-výměnná chromatografie může být prováděna pomocí chromatografické kolony nebo může být provedena v dávkovém módu. Pro komerční využití může být preferován dávkový mód. Anion-výměnná pryskyřice může být promyta a eluována postupným krokovým gradientem soli nebo kontinuálním gradientem. Vhodný krokový nebo kontinuální gradient je takový, který dovoluje separaci daptomycinu od kontaminantů. V preferovaném provedení se kontinuální solný gradient pohybuje v rozmezí od 0 do 1000 mM NaCl. V preferovanějším provedení se kontinuální solný gradient pohybuje v rozmezí od 100 do 500 mM NaCl nebo do 0 do 400 mM NaCl. Může být také použita chromatotronová chromatografie (chromatografie s radiálním tokem) podle patentů US 5756680, 4865729, 4840730 nebo 4708782.
Po anion-výměnné chromatografií je daptomycin dále čištěn pomocí chromatografie s hydrofobními interakcemi (HIC). Jedno z provedení je popsáno v patentu US 4874843, zahrnutém zde jako reference. Eluovaný daptomycinový přípravek se nechá kontaktovat s HIC pryskyřicí za podmínek, kdy většina daptomycinu nebo všechen daptomycin se váže na
-9CZ 307877 B6 pryskyřici. Obsah vody pryskyřice s navázaným daptomycinem se sníží kontaktem pryskyřice se zvýšenou koncentrací nepolárního rozpouštědla. Pryskyřice se promyje s vhodným polárním organickým rozpouštědlem za podmínek, kdy nečistoty disociují z pryskyřice zatímco daptomycin zůstává navázán. Nakonec se daptomycinový preparát eluuje za podmínek, při kterých daptomycin disociuje z pryskyřice. Obecně se daptomycin eluuje s využitím rozpouštědel obsahujících pufř s nižší polaritou (vyšší koncentrace polárního rozpouštědla) a/nebo s vyšší hodnotou pH než měl promývací pufř.
V preferovaném provedení se používá nefunkcionalizovaná pryskyřice HIC, kterou je HP-20ss s malými částicemi. Vázaný daptomycin se specificky odstraňuje z HP-20ss pryskyřice s fází s organickým rozpouštědlem jako např. fázi obsahující isopropylalkohol, acetonitril, butanol nebo jiné vhodné rozpouštědlo. V preferovanějším provedení je daptomycin nasycen na pryskyřici, promývanou s acetátovým pufrem obsahujícím 10 % acetonitrilu nebo ekvivalentního polárního rozpouštědla, jako je isopropylalkohol. Daptomycinem nasycená pryskyřice se promývá s alespoň trojnásobným objemem pufru použitého pro ekvilibraci. Pryskyřice nasycená s daptomycinem se dále zbavuje dalších nečistot promýváním se třemi až šesti objemy acetátového promývacího pufru obsahujícího neeluující koncentraci polárního rozpouštědla. V preferovaném provedení se daptomycinem nasycená pryskyřice promývá se 30 % acetonitrilem nebo 45 % isopropylalkoholem. Daptomycinem nasycená pryskyřice se eluuje s jedním až třemi objemy acetátového pufru obsahujícího 35 % nebo více acetonitrilu nebo více než 50 % isopropylalkoholu. V preferovaném provedení se daptomycin eluuje se 35% acetonitrilem při pH 4,0 až 5,0 nebo 55 až 60% isopropylalkoholem. V dalším provedení se daptomycinem nasycená pryskyřice eluuje s jedním až třemi objemy pufru při zvýšeném pH. V tomto provedení se pH pufru postupně zvyšuje, aby došlo k eluování různých sloučenin z kolony při různých hodnotách pH vzhledem k rozdílům v nábojích. Při zvýšeném pH, např. pH 6,0 až 7,0 se eluční koncentrace acetonitrilu snižuje na 10 až 20 %. Podobně, při zvýšeném pH, např. 6,0 až 7,0, se eluční koncentrace isopropylalkoholu snižuje na 20 až 25 %. Kontrola teploty, při které se provádí chromatografie, má také vliv na koncentraci rozpouštědla. Eluování při nižší teplotě, to jest za podmínek chlazení, vyžaduje zvýšené koncentrace rozpouštědla při všech hodnotách pH.
Po HIC se obsah organického rozpouštědlo v daptomycinovém preparátu sníží pomocí anionvýměnné chromatografie. V preferovaném provedení se používá FP-DA 13, diskutovaný v tomto popise.
Po druhé anion-výměnné chromatografii se čištěný daptomycin depyrogenuje, filtruje a koncentruje za chladicích podmínek. Filtrování daptomycinu může být provedeno libovolnou metodou známou v oboru. V jednom provedení se filtrování a depyrogenace provádí pomocí:
i) vyvolání takových podmínek, při kterých je daptomycin v daptomycinovém roztoku v monomemím a nemicelámím stavu, ii) filtrování daptomycinového roztoku za podmínek, při kterých bude daptomycin přecházet přes filtr, ovšem pyrogeny přes filtr nebudou procházet, např. tak, že se daptomycinový roztok udržuje při pH 6,0 až 7,0 a zfiltrováním roztoku přes ultrafiltr, který je nastaven na hodnotu 3000 až
000 NMW, iii) změnou podmínek daptomycinového roztoku tak, že daptomycin agreguje, např. změnou pH daptomycinového roztoku na 2,5 až 4,5, takže daptomycin tvoří micely, iv) zfiltrováním daptomycinového roztoku za podmínek, při kterých bude daptomycin zůstávat na filtru, např. zakoncentrováním daptomycinu na ultrafiltru při 30 000 NMW nebo méně, jako třeba na reverzní osmotické membráně, a
v) shromážděním depyrogenovaného daptomycinu. V preferovaném provedení se daptomycin z kroku (ii) filtruje za tlaku přes ultrafiltr s hranici molekulové hmotnosti 10 000 dalton při pH přibližně 7 až 8. V preferovanějším provedení daptomycin prochází přes filtr, ovšem pyrogeny jako třeba lipopolysacharidy (LPS) nikoliv. Po počáteční ultrafiltraci se pH filtrátu sníží na hodnotu 2,5 až 4,5 a filtrát se zkoncentruje na ultrafiltru s hranicí 10 000 MWCO na přibližně 120 mg/ml. Za těchto okolností daptomycin zůstává na filtru. V preferovaném provedení je pH substrátu 3,5. Po zkoncentrování je koncentrace daptomycinu adjustována na 105 mg/ml, je
- 10CZ 307877 B6 zkontrolována koncentrace endotoxinu a vzorek se plní do vialek za aseptických podmínek. V dalším provedení se provádí reverzní osmotická nanofiltrace při pH 1,5 až 3,0. Nižší pH a chlazení se používají kvůli zabránění degradace čištěného daptomycinu. Daptomycin může být dále zfiltrován přes 0,2pm filtr kvůli snížení bionečistot a poté se lyofilizuje vcelku nebo ve vialkách.
Jako alternativa k výše uvedenému ultrafiltračnímu a koncentračnímu kroku se eluované frakce obsahující daptomycin smíchají s butanolem (buď n-butanol, isobutanol, nebo terc-butylalkohol) při pH přibližně 4,5 v poměru vyšším než jedna část butanolu na devět částí daptomycinového roztoku. V preferovaném provedení se jeden díl butanolu smíchá se čtyřmi díly daptomycinového roztoku za vzniku 20% butanolového roztoku. Roztok daptomycinu v butanolu se nechá oddělit na organickou a vodnou fázi. Daptomycin přechází do organická fáze, která se oddělí. Dehydratace daptomycinu v organickém rozpouštědle může stabilizovat daptomycin a zabraňovat degradaci čištěného daptomycinu na anhydrodaptomycin a následnému vzniku βisomeru. Nakonec může být daptomycin vrácen do vodné fáze přídavkem pufru o hodnotě pH 6,5 až 7,5 do organické fáze. Po zkoncentrování nebo shromáždění daptomycinu se daptomycin lyofilizuje.
V dalším provedení se používá chromatografická metoda pro čištění lipopeptidu jiných než daptomycin, jako jsou třeba A54145, LY303366, echinocandiny, pneumocandiny, aculeacin, surfactin, plipastatin Bl, amphomycin nebo lipopeptidový derivát popsaný v patentu US 5629288. V dalším provedení se používá způsob čištění pomocí chromatografie pro čištění daptomycinu příbuzných lipopeptidů, včetně A54145 nebo lipopeptidu popsaného v patentech US 4537717, 4482487, Re. 32.311, Re. 32.310, 5912226, který je v současné době vydány jako US Seriál. No. 09/547.357, mezinárodních PCT přihláškách WO 01/44272, WO 01/44274 a WO 01/44271 nebo antibiotika A-21978, kde je n-dekanoylový postranní řetězec daptomycinu nahrazen n-oktanoylovým, n-nonanoylovým, n-undekanoylovým, n-dodekanoylovým, ntridekanoylovým nebo n-tetradekanoylovým postranním řetězcem.
V dalším provedení je použita Salt Cloud Method (Genetic Engineering News, vol. 19, č. 20, str. 1, 34 a 43, (15. listopadu 1999)) při čištění daptomycinu nebo jiných lipopeptidů. Metoda Salt Cloud je systém založený na membráně, který kombinuje selektivní separaci s vysokoobjemovou propustností. Metoda Salt Cloud může být použita ve spojení s procesními kroky popsanými v tomto popisu nebo může být použita odděleně k čištění daptomycinu nebo jiných lipopeptidů.
Další provedení podle tohoto popisu se zabývá chromatografickou metodou, která produkuje vysoce čistý lipopeptid, nedosažitelný metodami známými v současném stavu techniky. Chromatografická metoda zahrnuje použití anion-výměnné chromatografie s modifikovaným pufirem k čištění preparátů obsahujících lipopeptid. V preferovaném provedení se metoda používá k produkci vysoce čistého daptomycinu nebo daptomycinu příbuzného lipopeptidu. Tato metoda, je-li použita na částečně čištěný daptomycin, produkuje daptomycin o čistotě alespoň 98 %. Tento způsob také produkuje daptomycin, který je zbaven nebo prakticky zbaven anhydrodaptomycinu. Metoda zahrnuje následující kroky:
Částečně čištěný daptomycin se připraví libovolnou metodou známou v současném stavu techniky. Daptomycinový preparát se poté dále čistí pomocí anion-výměnné chromatografie zesílené modifikovaným pufrem. Daptomycin je navázán na anion-výměnnou pryskyřici v přítomnosti vhodného iontově modifikovaného pufru, za podmínek, při kterých se daptomycin váže na pryskyřici v monomemím nemicelámím stavu. Modifikovaný pufr zahrnuje pufrovací činidlo jako je např. (výčet není limitující) acetát, fosfát, citrát a Tris-HCl nebo libovolné jiné pufrovací činidlo, které dobře pufruje při neutrálním pH. Modifikovaný pufr dále zahrnuje jedno nebo více chaotropických činidel, včetně (bez omezení) guanidinu, amoniaku, močoviny, silně redukční činidla, benzoát, askorbát nebo jiné činidlo zvyšující iontovou sílu, schopné modifikovat pufr tak, aby byl daptomycin snadno oddělen od nečistot. Daptomycinem napuštěná
- 11 CZ 307877 B6 pryskyřice se promývá s vhodným iontově modifikovaným pufřem kvůli vymytí nečistot včetně anhydro-daptomycinu. Daptomycin se poté eluuje za podmínek, dovolujících separaci daptomycinu od nečistot, které zůstávají navázané k pryskyřici, včetně β-isomeru.
V preferovaném provedení je modifikovaný pufr při neutrálním pH (pH = 6 až 8) a obsahuje 2 až 6M močovinu. V dalším preferovaném provedení se používá anion-výměnná pryskyřice Porous Resin P150 nebo Porous D50 (PE Biosystems). Ve více preferovaném provedení se používá anion-výměnná pryskyřice Porous PÍ50. V preferovaném provedení se daptomycin váže na pryskyřici v pufru majícím nižší iontovou sílu, promyje se s pufřem o nízké až střední iontové síle a eluuje se s pufřem o vysoké iontové síle. V jednom z preferovaných provedení se daptomycin váže na pryskyřici Porous PÍ50 v Tris pufru o pH 7,0 obsahujícím močovinu. Pryskyřice Porous P150 s navázaným daptomycinem se promyje trojnásobným objemem Tris pufru nebo jiného vhodného pufru obsahujícího takovou koncentraci soli, která odstraní kontaminanty a anhydro-daptomycin bez toho, aby byl eluován daptomycin. Daptomycin se eluuje z pryskyřice Porous PÍ50 s Tris pufřem nebo jiným vhodným pufřem se zvýšeným obsahem soli, které nechají další nečistoty včetně významného podílu β-isomeru vázané na koloně. V dalším preferovaném provedení se používá pryskyřice Porous PÍ50 a daptomycin se váže na pryskyřici v pufru o pH 6,0 obsahujícím 2M močovinu. Pryskyřice Porous PÍ50 s navázaným daptomycinem se promyje a eluuje podobně jako ve výše popsané metodě, s tou výjimkou, že se použije acetátový pufr o pH 6,0 obsahující 2M močovinu. Frakce produktu mohou být měřeny pomocí HPLC nebo pomocí UV spektroskopie.
Anion-výměnná chromatografie s modifikovaným pufřem může být prováděna pomocí sloupcové chromatografie nebo může být provedena v dávkovém módu.
Může být také použita chromatografie s radiálním tokem, podle popisu v patentech US 5756680, 4865729, 4840730 nebo 4708782. Anion-výměnná pryskyřice s modifikovaným pufřem může být promývána a eluována s krokovým solným gradientem nebo s kontinuálním solným gradientem. Vhodný krokový nebo kontinuální gradient je takový, který dovoluje separaci daptomycinu od nečistot, včetně (výčet není limitující) anhydro-daptomycinu a β-isomeru. V preferovaném provedení se používá kontinuální solný gradient od 0 do 1000 mM NaCl. V preferovanějším provedení se používá solný gradient 100 až 500 mM NaCl nebo 0 až 400 mM NaCl.
V dalším provedení se používá anion-výměnná chromatografie s modifikovaným pufřem pro čištění lipopeptidových sloučenin jiných než daptomycinu. Tyto lipopeptidové sloučeniny zahrnují (bez omezení) A54145, LY303366, echinocandiny, pneumocandiny, aculeacin, surfactin a plipastatin B1 (Tsuge et al., 1996, Arch. Microbiol. 165: 243-51) a lipopeptidové deriváty uvedené v patentu US 5629288. V dalším provedení se používá anion-výměnná chromatografie s modifikovaným pufřem pro čištění daptomycinu příbuzných lipopeptidů jako jsou A54145 nebo lipopeptidů popsaných v patentech US 4537717, 4482487, Re. 32.311, Re. 32.310, 5912226, v současné době vydaných jako US Seriál. N. 09/547.357, mezinárodní PCT přihlášky WO 01/44272, WO 01/44274 a WO 01/44271 nebo antibiotika A-21978, ve kterých je ndekanoylový postranní řetězec daptomycinu nahrazen n-oktanoylovým, n-nonanoylovým, nundekanoylovým, n-dodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo n-tetradekanoylovým postranním řetězcem.
V dalším provedení podle tohoto popisu se používá nová kombinace chromatografických kroků k čištění daptomycinu nebo daptomycinu příbuzných lipopeptidů. Způsob zahrnuje anionvýměnnou chromatografii, chromatografii na reverzní fázi s malou velikostí částic a anionvýměnnou chromatografii s modifikovaným pufřem. Čisticí metoda může dále zahrnovat změnu fermentačních podmínek, při kterých je surový produkt obsahující A21978C produkován pomocí Streptomyces roseosporus. Tyto metody produkují daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid, mající alespoň 98% čistotu. V preferovaném provedení podle tohoto popisu produkuje metoda daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid, který má vyšší než 98% čistotu.
- 12CZ 307877 B6
Preferované provedení způsobu chromatografické metody je popsáno dále:
Streptomyces roseosporus je fermentován s přídavkem děkanové kyseliny, podle popisu v patentu US 4885243, s tou modifikací, že se dekanová kyselina udržuje na co nejnižší koncentraci bez toho, že by to mělo negativní vliv na celkový výtěžek fermentace, jak bylo popsáno výše. V alternativním provedení mohou být použity jiné živné látky, pokud zajišťují ndekanoylovou skupinu pro adici na daptomycinové jádro. Příklady těchto živných látek jsou (bez omezeníjamid kyseliny děkanové, estery děkanové kyseliny včetně butylesterů, surové zdroje kokosového nebo palmového oleje, živočišné zdroje děkanové kyseliny, různé soli děkanové kyseliny a petrochemické zdroje děkanové kyseliny. Po fermentaci se extracelulámí kapalina vyčeří podle výše uvedeného popisu. V alternativním provedení může být daptomycin extrahován od mycelia s využitím organického rozpouštědla jako je n-butanol, před tím než se provede vyčeření na centrifuze nebo filtru podle výše uvedeného popisu. Po vyčeření fermentační kapaliny je koncentrace daptomycinu ve vyčeřeném roztoku obohacena nejdříve pomocí anionvýměnné chromatografie a poté pomocí HIC, jak bylo popsáno výše.
Po provedení HIC se obsah rozpouštědla v daptomycinovém preparátu snižuje libovolnou metodou známou v oboru. V preferovaném provedení se obsah organického rozpouštědla snižuje pomocí anion-výměnné chromatografie podle výše uvedeného popisu. Daptomycin by měl být z kolony eluován pufrem, kompatibilním s pufirem požadovaným pro anion-výměnnou chromatografii s modifikovaným pufrem. Alternativně, eluční pufir může být zaměněn za modifikovaný pufr pomocí reverzní osmosy nebo filtrací přes filtr s hranicí 10 000 MWCO. V dalším provedení se obsah organického rozpouštědla snižuje odpařením nebo naředěním v pufru. Ve třetím preferovaném provedení se rozpouštědlo z chromatografie na reverzní fázi a zbytková sůl odstraňují s využitím reverzní osmosy při pH 1,5 až 4,0 nebo ultrafiltrací při pH 2,5 až 4,5. Vznikající produkt může být zmražen pro skladování ve velkém nebo sušen lyofilizací a poté rehydratován ve vodě nebo v pufru používaném pro anion-výměnnou chromatografii s modifikovaným pufrem.
Daptomycin je dále čištěn pomocí anion-výměnné chromatografie s modifikovaným pufirem, jak bylo popsáno výše.
Po anion-výměnné chromatografii s modifikovaným pufirem je čištěný daptomycin filtrován a zkoncentrován za chlazení. Filtrování daptomycinu může být provedeno libovolnou známou metodou v současném stavu techniky. V preferovaném provedení se daptomycin depyrogenuje a koncentruje podle výše uvedeného popisu. Alternativně, daptomycin může být zkoncentrován pomocí reverzní osmosy za chlazení při pH 1,5 až 4. Nižší pH a chlazení se používají kvůli zabránění degradace čištěného daptomycinu.
Jako alternativa k výše uvedené filtraci a koncentraci nebo kromě těchto kroků, mohou být frakce obsahující daptomycin z anion-výměnné chromatografie s modifikovaným pufrem smíchány s butanolem (buď n-butanolem, isobutanolem nebo terc-butylalkoholem) při pH přibližně 4,5 v poměru vyšším než jeden díl butanolu na devět dílů daptomycinového roztoku. V preferovaném provedení je jeden díl butanolu smíchán se čtyřmi díly daptomycinového roztoku za vzniku 20% butanolového roztoku. Butanolový roztok daptomycinu se nechá rozdělit na organickou a vodnou fázi. Daptomycin přechází do organické fáze, která je sebrána. Dehydratace daptomycinu v organickém rozpouštědle může stabilizovat daptomycin a zabraňovat degradaci čištěného daptomycinu na anhydro-daptomycin a následnému vzniku β-izomeru.
Po zkoncentrování nebo sebrání daptomycinu je daptomycin lyofilizován.
V dalším provedení podle tohoto popisu se používá chromatografická metoda pro čištění lipopeptidu jiných, než je daptomycin, jako jsou lipopeptidy popsané výše.
- 13 CZ 307877 B6
Vznik lipopeptidových micel a způsoby jejich použití
Další provedení podle tohoto popisu popisuje lipopeptidové micely, způsoby výroby lipopeptidových micel a způsoby použití lipopeptidových micel pro čištění lipopeptidů a farmaceutické přípravky. V preferovaném provedení je lipopeptidem daptomycinu příbuzná molekula, včetně (mimo jiné) daptomycinu, A54145 a daptomycinu příbuzného lipopeptidů popsaného v patentech US 4537717, 4482487, Re. 32.311, Re. 32.310, 5912226, které jsou v současné době vydány jako US Seriál. No. 09/547.357, mezinárodní PCT přihlášky WO 01/44272, WO 01/44274 a WO 01/44271 nebo antibiotika A-21978, kde je n-dekanoylový postranní řetězec daptomycinu nahrazen n-oktanoylovým, n-nonanoylovým, nundekanoylovým, n-dodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo n-tetradekanoylovým postranním řetězcem. V preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin.
Micely jsou agregáty amfifilních molekul. Ve vodném prostředí se lipofilní části molekul orientují dovnitř interiéru micely a hydrofilní části molekul jsou v kontaktu s vodným prostředím. Micely se tvoří spontánně v roztoku obsahujícím amfifilní molekuly, pokud je koncentrace molekul dostatečně vysoká.
Vznik micel způsobuje změny v některých makroskopických fyzikálních vlastnostech roztoku, včetně změn v osmotickém tlaku, turbiditě, elektrické vodivosti, povrchovém napětí, iontových a proti-iontových aktivitách (v případě, že amfifilní molekuly jsou iontové), indexu lomu, UV a NMR spektrech, parciálním molámím objemu, viskozitě, difuzním koeficientu a rozpustnosti barev. Cmc může být určena měřením jedné nebo více fyzikálních vlastností závislých na tvorbě micel, jako funkce koncentrace amfifilní sloučeniny. Velikost a tvar micel může být určen dynamickým rozptylem laserového záření, ultracentrifůgací, viskozitou a/nebo rentgenovou spektroskopií pod nízkým úhlem. Micely mohou existovat v kapalně krystalických fázích.
Lipopeptidy mohou agregovat do micel tehdy, když koncentrace lipopeptidů je vyšší než cmc daného lipopeptidů. Cmc je závislá na druhu lipopeptidů a teplotě, koncentraci soli a pH vodného roztoku obsahujícího lipopeptid. S ohledem na druh lipopeptidů, cmc lipopeptidů se sníží přidáním CH2 skupiny k lipofilnímu uhlíkovému řetězci. Máme-li tedy cmc pro daptomycin při konkrétní koncentraci soli, teplotě a pH, potom antibiotikum typu A-21978, kde je dekanoylový postranní řetězec mastné kyseliny nahrazen n-oktanoylovým nebo nonanoylovým postranním řetězcem bude mít vyšší cmc, zatímco antibiotikum A-21978, kde je dekanoylový postranní řetězec mastné kyseliny nahrazen n-undekanoylovým, n-dodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo n-tetradekanoylovým postranním řetězcem bude mít nižší cmc ve srovnání s daptomycinem.
V jednom provedení podle tohoto popisu může být cmc lipopeptidů měněno přidáním nebo odebráním CH2 skupiny lipopeptidů. V preferovaném provedení je lipopeptidem A-21978, ve kterém je n-dekanoylový postranní řetězec mastné kyseliny nahrazen n-oktanoylovým, nnonanoylovým, n-undekanoylovým, n-dodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo ntetradekanoylovým postranním řetězcem. V dalším provedení lze vypočítat přibližnou hodnotu cmc lipopeptidů podle uvedených specifikací. Máme-li hodnotu cmc lipopeptidů jako je daptomycin, lze přibližně vypočítat hodnotu cmc příbuzného lipopeptidů, ve kterém je ndekanoylový postranní řetězec mastné kyseliny nahrazen n-oktanoylovým, n-nonanoylovým, nundekanoylovým, n-dodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo n-tetradekanoylovým postranním řetězcem. Výpočet může být proveden způsoby známými odborníkům v oboru.
V dalším preferovaném provedení máme-li hodnotu cmc lipopeptidů, můžeme přibližně spočítat cmc lipopeptidů, který obsahuje odpovídající peptidovou skupinu. V preferovaném provedení máme-li hodnotu cmc pro daptomycin, lze jednoduše spočítat hodnotu cmc pro odpovídající lipopeptid jako je A54145, daptomycinu příbuzný lipopeptid popsaný v patentech US 4537717, 4482487, Re. 32.311, Re. 32.310, 5912226, které jsou v současné době vydány jako US Seriál. No. 09/547.357, mezinárodní PCT přihlášky WO 01/44272, WO 01/44274 a WO 01/44271.
- 14CZ 307877 B6
V dalším provedení se cmc lipopeptidu mění změnou teploty roztoku obsahujícího lipopeptid. Cmc lipopeptidu obvykle vzrůstá se vzrůstající teplotou roztoku. Tvorba micel je tedy zvýšena při snížené teplotě a je zabráněna při zvýšené teplotě. Například, roztok obsahující lipopeptid může tvořit micely při 4 °C, protože teplota cmc je snížena a koncentrace lipopeptidu je nad hodnotou cmc, ovšem, stejný roztok lipopeptidu může být monomemí při 20 °C, protože hodnota cmc se zvýšila s rostoucí teplotou a koncentrace lipopeptidu je pod cmc. V preferovaném provedení je tedy koncentrace lipopeptidu vyšší než cmc při jedné teplotě, a je nižší než hodnota cmc při jiné vyšší teplotě. V preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin nebo daptomycinu příbuzná molekula jako třeba výše popsané deriváty. V ještě preferovanějším provedení je použitým lipopeptidem daptomycin.
V dalším preferovaném provedení se schopnost manipulace se vznikem micel lipopeptidu provádí s využitím různých teplot, které ovlivňují hodnotu cmc při čištění lipopeptidu. V ještě preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin nebo příbuzná molekula, jako třeba deriváty popsané výše. V ještě preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin. V dalším preferovaném provedení se schopnost manipulovat se vznikem lipopeptidových micel pomoci změny teploty používá při výrobě farmaceutických přípravků, které jsou za určité teploty micelámí a jsou monomemí za jiné teploty. V preferovaném provedení zahrnují farmaceutické přípravky daptomycin nebo daptomycinu příbuznou molekulu, podle výše uvedeného popisu. V dalším preferovaném provedení zahrnuje farmaceutický přípravek daptomycin.
V dalším provedení se používá přídavek elektrolytu pro zvýšení cmc iontového lipopeptidu. V preferovaném provedení se přidává sůl, jako třeba NaCl, do roztoku obsahujícího lipopeptid, kvůli snížení repulze mezi nabitými skupinami v lipopeptidových micelách. V preferovaném provedení je lipopeptidem daptomycin nebo daptomycinu příbuzná molekula, jako třeba výše uvedené deriváty. Například, peptidová skupina daptomycinu obsahuje tri zbytky asparagové kyseliny a L-threo-3-methylglutamové kyseliny (3-MG), které budou všechny nabité při neutrálním pH. Přídavek elektrolytu jako třeba NaCl nebo podobné soli, tedy bude zvyšovat cmc hodnotu daptomycinu. V preferovaném provedení je koncentrace soli nejméně 100 mM. V ještě preferovanějším provedení je koncentrace soli 150 mM až 300 mM. V ještě preferovanějším provedení je solí NaCl.
Snížení hodnoty cmc je také pozorováno při přídavku elektrolytu do jiných lipopeptidu, jako třeba u molekul příbuzných daptomycinu, které obsahují zbytky asparagové kyseliny, 3-MG zbytky nebo jiné nabité skupiny. V preferovaném provedení se tedy sůl přidává do roztoku za účelem snížení cmc daptomycinu příbuzného lipopeptidu, jako třeba A54145, daptomycinu příbuzného lipopeptidu popsaného v patentech US 4537717, 4482487, Re. 32.311, Re. 32.310, 5912226, které jsou v současné době vydány jako US Seriál. No. 09/547.357, mezinárodní PCT přihlášky WO 01/44272, WO 01/44274 a WO 01/44271 nebo antibiotika A-21978, ve kterém je n-dekanoylový postranní řetězec mastné kyseliny nahrazen n-oktanoylovým, n-nonanoylovým, n-undekanoylovým, n-dodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo n-tetradekanoylovým postranním řetězcem. V dalším provedení se koncentrace soli snižuje za účelem zvýšení cmc iontového lipopeptidu. V preferovaném provedení je iontovým lipopeptidem daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid podle výše uvedeného popisu.
V dalším provedení se schopnosti manipulace se vznikem micel lipopeptidu pomocí změny koncentrace elektrolytu, a tím i ovlivňování cmc, využívá k čištění lipopeptidu. V ještě preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin nebo daptomycinu příbuzná molekula, jako třeba deriváty popsané výše. V ještě preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin.
V dalším preferovaném provedení se schopnosti manipulovat s tvorbou lipopeptidových micel pomocí koncentrace elektrolytu, používá k výrobě farmaceutických přípravků, které jsou micelámí při určité koncentraci elektrolytu a které jsou monomemí při jiné koncentraci elektrolytu. V preferovaném provedení zahrnuje farmaceutický přípravek daptomycin nebo
- 15 CZ 307877 B6 daptomycinu příbuzný lipopeptid, podle výše uvedeného popisu. V dalším preferovaném provedení zahrnuje farmaceutický prostředek daptomycin.
V dalším provedení podle tohoto popisu se manipuluje s pH roztoku obsahujícího lipopeptid za účelem ovlivnění cmc lipopeptidu. V preferovaném provedení je lipopeptidem daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid, jako třeba výše popsané struktury. V ještě preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin. V jednom provedení je manipulováno s pH tak, aby koncentrace lipopeptidu byla vyšší než hodnota cmc při jednom pH a byla nižší než cmc při jiném pH. Například, pro daptomycin je hodnota cmc při pH 4 ve vodě o teplotě 20 až 25 °C mnohem menší než při pH 6,0 až 7,5. Při pH 4,0 je cmc za těchto podmínek přibližně 400 pg/ml. Viz obrázek 15. Daptomycin je dále monomemí dokonce při 150 mg/ml při pH 6,5 (přičemž koncentrace soli je 150 mM až 300 mM NaCl a teplota je 4 °C). Takže pro daptomycin je hodnota cmc při pH 4,0 menší než u roztoků buď při vyšším pH, nebo při nižším pH. Změna cmc při různých hodnotách pH může být také použita pro další nabité lipopeptidy, včetně lipopeptidu, které jsou příbuzné daptomycinu podle výše uvedeného popisu.
V dalším preferovaném provedení podle tohoto popisu se schopnost manipulování se vznikem micel lipopeptidu změnou pH kvůli ovlivnění cmc používá k čištění lipopeptidu.
V preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin nebo daptomycinu příbuzná molekula, jako třeba výše uvedené deriváty. V ještě preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin. V dalším preferovaném provedení podle tohoto popisu se schopnost manipulování se vznikem micel lipopeptidu změnou pH používá k výrobě farmaceutických přípravků, které jsou micelámí při určitém pH a monomemí při jiném pH. V preferovaném provedení tohoto vynálezu farmaceutický přípravek zahrnuje daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid podle výše uvedeného popisu. V dalším preferovaném provedení zahrnuje farmaceutický přípravek daptomycin.
V dalším aspektu tohoto popisu může být lipopeptid částí smíšené micely. Smíšená micela je taková, kde lipopeptid vytváří micelu s jedním nebo více typy amfipatických molekul. Příklady amfipatických molekul zahrnují (bez omezení) mastné kyseliny se středním nebo dlouhým řetězcem, fosfoglyceridy (fosfolipidy), sfingomyelin, glykolipidy a cholesterol. V jednom provedení mohou být do micely zabudovány alkoholy se střední délkou řetězce, kde zmenšují elektrostatickou repulzi a sterické bránění, čímž se snižuje cmc lipopeptidu. V dalším provedení může být použit přídavek jednoho nebo více typů amfipatických molekul kvůli změně struktury micely z micely sférické (viz Obrázek 14, část a) na planámí lipidickou dvoj vrstevnatou strukturu (viz Obrázek 14, část b) nebo na strukturu liposomu (viz Obrázek 14, část c). Obecně, smíšené micely zahrnující fosfolipidy a/nebo glykolipidy budou způsobovat přeměnu sférických micel na lipidické dvoj vrstevnaté struktury, které slouží jako permeabilní bariéry pro ionty a většinu polárních molekul.
V dalším provedení může být směsná micela vytvořena ze dvou nebo více různých lipopeptidu. Například, smíšené micela může být tvořena z daptomycinu a dalšího lipopeptidu jako třeba A54145 nebo daptomycinu příbuzného lipopeptidu podle výše uvedeného popisu. V dalším provedení může směsná micela zahrnovat lipopeptid společně s jedním nebo více terapeuticky užitečných amfipatických molekul, jako jsou antibiotika, protizánětlivá nebo protihoubová činidla, která jsou známa odborníkům v oboru. V preferovaném provedení tohoto popisu je lipopeptidem daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid jako třeba A54145, daptomycinu příbuzné lipopeptidy popsané výše nebo antibiotikum A-21978, ve kterém je ndekanoylový postranní řetězec mastné kyseliny nahrazen n-oktanoylovým, n-nonanoylovým, nundekanoylovým, n-dodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo n-tetradekanoylovým postranním řetězcem. V preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin.
V dalším provedení tohoto popisu zahrnují micely, ať již směsné nebo z jednoho typu lipopeptidové molekuly, lipopeptid, který je terapeuticky užitečný. V preferovanějším provedení
- 16CZ 307877 B6 je lipopeptidem daptomycin. Daptomycin vytváří micely o velikosti přibližně 5,4 nm (54 Á) při koncentraci 1 mg/ml při pH přibližně 4,5 ve vodě. Viz Obrázek 16.
V dalším provedení podle tohoto popisu zahrnují micely jeden nebo více různých typů terapeutických látek. V jednom z provedení tohoto popisu může být terapeutická látka smíchána s lipopeptidem v roztoku tak, že vzniká micela lipopeptidu a terapeutická látka je uzavřena v hydrofobním interiéru. V dalším provedení tohoto popisu se terapeutická látka smíchá s lipopeptidem a jednou nebo více amfipatickými molekulami tak, že vznikají smíšené micely z lipopeptidu a dalších amfipatických molekul a terapeutická látka se nachází v hydrofobním interiéru. V preferovaném provedení podle tohoto popisu je terapeutickou látkou antibiotikum, protizánětlivé nebo protihoubové činidlo. V preferovanějším provedení podle tohoto popisu je terapeutickou látkou antibiotikum nebo protihoubové činidlo popsané výše. V dalším preferovaném provedení je terapeutická látka rozpustná v hydrofobním prostředí, ale není rozpustná ve vodném roztoku.
V dalším provedení podle tohoto popisu mohou být lipopeptidy formovány do liposomů, což jsou vesikuly, v nichž sférické lipidické dvojvrstvy ohraničují vodný interiér. Viz Obrázek 14, část c. Liposomy jsou výhodné pro terapeutické použití, protože snadno fúzují s plasmatickou membránou a mohou být také použity k zachycení látek v jejich vnitřním vodném prostředí. Látky mohou být takové, které jsou ve vodě rozpustné. V jednom provedení tohoto popisu může být sonifikován roztok obsahující lipopeptid a další amfipatickou molekulu za vzniku liposomů.
V dalším provedení tohoto vynálezu může být sonifikován samotný lipopeptid za vzniku liposomů. V preferovaném provedení může být sonifikován roztok obsahující daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid jako třeba A54145, lipopeptid popsaný v patentech US 4537717, 4482487, Re. 32.311, Re. 32.310, 5912226, v současné době vydané jako US Seriál. No. 09/547.357, mezinárodní PCT přihlášky WO 01/44272, WO 01/44274 a WO 01/44271 nebo antibiotika A-21978, kde je n-dekanoylový postranní řetězec daptomycinu nahrazen noktanoylovým, n-nonanoylovým, n-undekanoylovým, n-dodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo n-tetradekanoylovým postranním řetězcem. V preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin.
V dalším provedení podle tohoto popisu zahrnují liposomy jednu nebo více terapeutických látek v jejich vnitřním vodném prostoru. V preferovaném provedení jsou terapeutickou látkou antibiotika, protizánětlivá nebo protihoubová činidla. V ještě preferovanějším provedení je terapeutickou látkou antibiotikum nebo protihoubové činidlo podle níže uvedeného popisu. V dalším preferovaném provedení je terapeutické činidlo rozpustné ve vodném roztoku. V dalším preferovaném provedení obsahuje farmaceutický přípravek liposomy.
V preferovaném provedení podle tohoto popisu zahrnuje farmaceutický přípravek lipopeptidové uspořádání micelámího typu obsahující terapeutickou látku. Lipopeptidové uspořádání micelámího typu mohou být sférické micely, smíšené micely nebo liposomy. Farmaceutické přípravky zahrnující lipopeptidické micely mohou minimalizovat lokální podráždění v místě injekce nebo při intravenózním podávání. V jednom provedení zahrnuje farmaceutický přípravek sůl, pufr k udržení určitého pH a micely. V dalším provedení zahrnuje farmaceutický přípravek jedno nebo více činidel ke stabilizaci micel a/nebo ke stabilizaci lipopeptidu nebo další terapeutické látky. V jednom provedení farmaceutický přípravek také zahrnuje jednu nebo více terapeutických látek. V preferovaném provedení je terapeutickou látkou antibiotikum, protizánětlivé nebo protihoubové činidlo. V ještě preferovanějším provedení je terapeutickou látkou antibiotikum nebo protihoubové činidlo popsané níže. Terapeutická látka může být přítomna kromě terapeutické substance zabudované do micely nebo může být terapeutickým činidlem, které je zabudováno do micely.
Farmaceutický přípravek může být sušený nebo lyofilizovaný, přičemž v takovémto případě dochází ke vzniku micel poté, kdy jek farmaceutickému přípravku přidán vodný roztok, jako je voda nebo pufř. V preferovaném provedení je farmaceutický přípravek lyofilizován a obsahuje
- 17 CZ 307877 B6 fyziologickou koncentraci soli po rekonstituci a pufr, který udržuje takové pH, při kterém se spontánně tvoří micely při laboratorní teplotě, když se přidá sterilní voda nebo další pufr. V ještě preferovanějším provedení zahrnuje farmaceutický přípravek daptomycin nebo odpovídající lipopeptid jako je A54145, daptomycinu příbuzné lipopeptidy popsané výše nebo antibiotikum A-21978, ve kterém je n-dekanoylový postranní řetězec daptomycinu nahrazen noktanoylovým, n-nonanoylovým, n-undekanoylovým, n-dodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo n-tetradekanoylovým postranním řetězcem. V ještě preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin. V dalším provedení je farmaceutický přípravek vodný. Je preferováno použití liposomů. V preferovaném provedení zahrnuje farmaceutický přípravek stabilizační činidlo pro liposomy.
V dalším aspektu podle tohoto popisu se micelámí roztok izoluje a/nebo čistí. V jednom provedení tohoto popisu se micely izolují od menších substituentů ultrafiltrací. Výběr ultrafiltrační membrány bude záviset na velikosti micel. Obecně, membrány typu 10 000 NMW nebo 30 000 NMW budou dostatečné pro sebrání micel, přičemž dovolí menším substituentům, jako jsou kontaminanty procházet. V dalším provedení mohou být micely izolovány a/nebo čištěny dialýzou, centrifugací na základě hustotního gradientu nebo velikostně vylučovací chromatografií. Tyto metody jsou velmi dobře známy v oboru. V jednom provedení mají micely vyšší než 30% čistotu, kde čistota je měřena jako hmotnost micel ve srovnání s hmotností monomemí formy lipopeptidů nebo jiné molekuly. V preferovaném provedení mají micely vyšší čistotu než 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % nebo 95 %.
V dalším aspektu podle tohoto popisu poskytuje schopnost lipopeptidů tvořit micely a poté disociovat změnou teploty, pH, koncentrace elektrolytu a/nebo koncentrace lipopeptidů způsob čištění lipopeptidů. V jednom provedení metoda zahrnuje čištění lipopeptidů od nízkomolekulámích kontaminantů vystavením lipopeptidů takovým podmínkám, při kterých lipopeptidy tvoří micely a poté separaci micel od kontaminantů pomocí techniky selektivní na velikost jako je ultrafiltrace nebo velikostně-vylučovací chromatografie. V dalším provedení tohoto popisu je popsána metoda zahrnující zkoncentrování lipopeptidů tím, že se lipopeptidy vystaví podmínkám, při kterých lipopeptidy tvoři micely a poté se zkoncentrovávají pomocí velikostně-selektivní techniky.
V ještě preferovanějším provedení zahrnuje metoda jak čištění, tak i zkoncentrování v jediném kroku.
V dalším provedení zahrnuje způsob čištění lipopeptidů od vysokomolekulámích kontaminantů, včetně pyrogenů (např. lipopolysacharidů) tím, že se lipopeptid vystaví podmínkám, při kterých je lipopeptid v monomemí formě a poté separaci monomemího lipopeptidového roztoku od vysokomolekulámích kontaminantů pomoci velikostně-selektivní techniky. V preferovaném provedení je velikostně-selektivní technikou ultrafiltrace, jak je popsáno výše. V dalším provedení podle tohoto popisu je lipopeptidem daptomycin nebo příbuzný lipopeptid jako je A54145, daptomycinu příbuzný lipopeptid popsaný výše nebo antibiotikum A-21978, ve kterém je n-dekanoylový postranní řetězec mastné kyseliny nahrazen n-oktanoylovým, nnonanoylovým, n-undekanoylovým, n-dodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo ntetradekanoylovým postranním řetězcem. V ještě preferovanějším provedení je lipopeptidem daptomycin.
Preferované provedení způsobu chromatografického dělení s využitím micel za účelem získání čistého daptomycinu je popsáno dále:
Streptomyces roscosporus se fermentuje s živnou kyselinou n-dekanovou podle výše uvedeného popisu. Po fermentaci se extracelulámí kapalina vyčeri podle výše uvedeného popisu.
- 18 CZ 307877 B6
Vyčeřený roztok se poté aplikuje na anion-výměnnou pryskyřici, jako je FP-DA 13, podle výše uvedeného popisu. Daptomycin se eluuje z kolony s jedním až třemi objemy pufru se zvýšeným obsahem soli, obsahujícím 300 až 500 mM NaCl.
Eluovaný daptomycinový preparát se adjustuje při pH 2,5 až 5,0 s využitím kyseliny. V preferovaném provedení je kyselinou kyselina fosforečná. Při pH 2,5 až 4,7, koncentraci NaCl od 300 až 500 mM NaCl a teplotě od 2 do 15 °C tvoří daptomycin micely.
Daptomycinový preparát se zfiltruje na ultrafiltrační membráně s hranicí 10 000 až 30 000 NMW. Během ultrafiltrace se daptomycinový preparát promývá s pufrem obsahujícím 30 mM acetátu sodného při pH 3,5 a teplotě do 15 °C. Počáteční koncentrace soli je 300 mM NaCl vzhledem k podmínkám eluce, ovšem jak pokračuje promývání, koncentrace soli se snižuje. Protože daptomycin je v micelámí formě, je zadržován na filtru, zatímco nečistoty menší než 10 000 až 30 000 (v závislosti na použitém filtre) procházejí přes filtr. Takto získaný daptomycinový preparát má čistotu 85 až 90 %.
Jako případný krok může být daptomycin naředěn a jeho pH nastaveno až na 6,5 za účelem převedení daptomycinu na monomemí formu. Daptomycinový preparát poté prochází přes ultrafiltrační membránu s hranicí 10 000 NMW. Tento nepovinný krok významně snižuje obsah pyrogenů.
Způsoby analýzy čistoty daptomycinu
Další provedení podle tohoto popisu popisuje analytické metody měření čistoty daptomycinu.
V současném stavu techniky jsou mnohé kontaminanty, které se čistí společně s daptomycinem, nerozlišeny nebo neidentifikovány, protože možnosti jejich vizualizace a měření nečistot byly omezeny analytickými metodami a požadovaným vybavením. Viz např. patent US 4874843 a Kirsch et al. Rozvoj citlivějších analytických HPLC systémů a technik dovoluje rozlišení mnoha kontaminantů, které existují v daptomycinových várkách připravených metodami současného stavu techniky. Vyšší rozlišení HPLC metod demonstruje, že daptomycin čištěný metodami současného stavu techniky je kontaminován s dříve identifikovanými nečistotami, jako je anhydro-daptomycin a β-isomer, a dalšími dříve neznámými kontaminanty, které se čistí společně s daptomycinem (a eluují společně při dříve popsaných detekčních podmínkách) během čištění na základě metod současného stavu techniky. Identifikace těchto kontaminantů nyní dovoluje vývoj metod vedoucích k eliminaci těchto kontaminantů.
Jak bylo probráno výše, anhydro-daptomycin a β-isomer byly popsány dříve jako nečistoty, které se vytrvale a konsistentně vyskytovaly během přípravy daptomycinu. S využitím HPLC analýzy popsané v tomto popisu bylo rozlišeno dalších přibližně dvanáct nečistot, vyprodukovaných během výroby daptomycinu, přičemž některé z nich nebyly dříve identifikovány. Tyto nečistoty nebyly odstraněny po čištění pomoci metody popsané v patentu US 4874843. Alespoň deset z těchto nečistot bylo identifikováno (viz např. Obrázek 2 až 11). Kromě toho, alespoň šest z těchto sloučenin není přímým výsledkem reakce produkující anhydro-daptomycin a β-isomer z daptomycinu, spíše jde o sloučeniny produkované jinými nepříbuznými procesy, ke kterým dochází během fermentace nebo čištění daptomycinu. Způsob čištění podle tohoto popisu také významně snižuje koncentrace mnoha těchto nečistot (viz Příklady).
K měření množství dalších sloučenin v daptomycinovém preparátu mohou být použity libovolné metody známé v současném stavu techniky. Způsoby identifikace daptomycinových kontaminantů zahrnují (bez omezení) hmotnostní spektroskopii, infračervenou spektroskopii, kapilární elektroforézu a nukleární magnetickou resonanční spektroskopii. Preferovaný způsob měření množství dalších sloučenin v daptomycinovém preparátu je HPLC.
- 19CZ 307877 B6
K měření daptomycinových nečistot podle tohoto popisu byly použity dvě metody. První metoda je s lehce nižším rozlišením než metoda druhá. V obou metodách byl použit Shimadzu nebo HP HPLC systém s PE Nelson's Turbochrom Software verze 4.1.První rezoluční metoda je shrnuta v tabulce 1 a druhá resoluční metoda je popsána v tabulce 2:
Tabulka 1
1. Systém k dodávce rozpouštědla:
Mód: isokratické pumpování
Rychlost toku: 1,5 ml/min
Doba experimentu: 30 min
2. Rozpouštědlo A: 34% acetonitril v 0,5% NH4H2PO4 při pH 4,5 Rozpouštědlo B: 20% acetonitril v 0,5% NH4H2PO4 při pH 4,5
Cílovými podmínkami je udržet daptomycin při 15,0 +/-0,5 min. Rozpouštědlo B může být použito společně s rozpouštědlem A kvůli adjustaci HPLC mobilní fáze za účelem dosažení požadovaného retenčního času.
3. Chladič autosampleru: 5 (4 až 6) °C
4. Nastříknutý objem: 5 μΐ až 75 μΐ (20 μΐ normálně)
5. Kolona: IB-SIL (Phenomenex), C-8, 5 μηι, 4,6 x 250 (nebo ekvivalent)
6. Předkolonka: IB-SIL (Phenomenex), C-8, 5 μηι, 4,6 x 30 mm (nebo ekvivalent)
7. Detekční vlnová délka: 214 nm
8. Teplota kolony: laboratorní
9. Integrace: Počítačový systém nebo integrátor schopný měření plochy píku.
Tabulka 2
1. Systém k dodávce rozpouštědla:
Mód: isokratické pumpování
Rychlost toku: 1,5 ml/min
Doba experimentu: 75 min
2. Rozpouštědlo A: 20% acetonitril v 0,45% NH4H2PO4 při pH 3,25 Rozpouštědlo B: 50% acetonitril v 0,45% NH4H2PO4 při pH 3,25
Cílovými podmínkami je přibližně 35% acetonitril v 0,45% NH4H2PO4 při pH 3,25, aby byl daptomycin udržen při 36,0 +/-1,5 min. Ovšem, poměr rozpouštědel bude použit kvůli adjustaci HPLC mobilní fáze za účelem dosažení požadovaného retenčního času.
3. Chladič autosampleru: 5 (4 až 6) °C
4. Nastříknutý objem: 5 μΐ až 75 μΐ (20 μΐ normálně)
5. Kolona: IB-SIL (Phenomenex), C-8, 5 μηι, 4,6 x 250 mm (nebo ekvivalent)
6. Předkolonka: IB-SIL (Phenomenex), C-8, 5 μηι, 4,6 x 30 mm (nebo ekvivalent)
7. Detekční vlnová délka: 214 nm
-20CZ 307877 B6
8. Teplota kolony: 25 (22 až 28) °C
9. Integrace: Počítačový systém nebo integrátor schopný měření plochy píku.
Čištěné lipopeptidy, farmaceutické přípravky je obsahující a způsoby jejich využití
Dalším předmětem podle tohoto popisu je zajištění čištěných lipopeptidů, stejně jako jejich solí, esterů, amidů, etherů a chráněných forem, stejně jako farmaceutických přípravků obsahujících čištěné lipopeptidy nebo jejich soli. V preferovaném provedení podle tohoto popisu je lipopeptidem daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid podle výše uvedeného popisu. Dalším předmětem podle tohoto popisu je zajištění farmaceutických prostředků obsahujících lipopeptid v uspořádání micelámího typu. V preferovaném provedení podle tohoto popisu lipopeptidové micely jsou micely zahrnující daptomycin nebo jeden nebo více daptomycinu příbuzných lipopeptidů. Všechny zde uvedené reference na lipopeptidové micely označují nejen všechna lipopeptidová uspořádání micelámího typu, ale také konkrétně předpokládají daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid jako je A54145, daptomycinu příbuzné lipopeptidy popsané výše nebo antibiotikum A-21978, ve kterém je n-dekanoylový postranní řetězec mastné kyseliny nahrazen n-oktanoylovým, n-nonanoylovým, n-undekanoylovým, ndodekanoylovým, n-tridekanoylovým nebo n-tetradekanoylovým postranním řetězcem. Dále všechny reference na lipopeptidická uspořádání micelámího typu specificky předpokládají sférické nebo smíšené micely a liposomy, jak bylo diskutováno výše.
Čištěné lipopeptidy, jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo lipopeptidové micely mohou být formulovány pro orální, intravenózní, intramuskulámí, subkutánní, aerosolové, místní nebo parenterální podávání pro terapeutické nebo profylaktické léčení nemoci, obzvláště bakteriálních nemocí. V preferovaném provedení čištěný lipopeptid je čištěný daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid. Odkazy na čištěný daptomycin, čištěný daptomycinu příbuzný lipopeptid nebo čištěný lipopeptid zahrnují jejich farmaceuticky přijatelné soli. Daptomycin, daptomycinu příbuzný lipopeptid nebo jiné lipopeptidové micely mohou být formulovány s využitím libovolného farmaceuticky přijatelného nosiče nebo excipientu, který je kompatibilní s daptomycinem nebo s lipopeptidem našeho zájmu. Viz např. Handbook of Pharmaceutical Additives: An International Guide to More than 6000 Products by Trade Name, Chemical, Function, and Manufacturer, Ashgate Publishing Co., eds. M. Ash a I. Ash, 1996, The Měrek Index: An Encyclopedia of Chemicals, Drugs and Biologicals, ed. S. Budavari, Annual, Remingtonů Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA; Martindale: The Complete Drug Reference, ed. K. Parfitt, 1999; a Goodman & Gilmanů The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Pergamon Press, New York, NY, ed. L. S. Goodman et al., jejichž obsah je zde zahrnut jako reference pro obecný popis způsobů podávání různých antimikrobiálních činidel v lidské terapii. Čištěný daptomycin, daptomycinu příbuzný lipopeptid nebo jiný lipopeptidové micely podle tohoto popisu mohou být smíchány s konvenčními farmaceutickými nosiči a excipienty a mohou být použity ve formě tablet, kapslí, elixírů, suspenzí, sirupů, oplatek, krémů a podobně. Daptomycin, daptomycinu příbuzný lipopeptid nebo jiné lipopeptidové micely mohou být smíchány s dalšími terapeutickými činidly a antibiotiky jak bylo diskutováno v textu. Přípravky budou obsahovat sloučeninu podle tohoto popisu v množství od 0,1 do 90 % hmotnosti aktivní sloučeniny a obecněji od 10 do asi 30 %.
Přípravky podle tohoto popisu mohou být podávány s využitím kontrolovaného uvolňování (např. kapsle) nebo pomocí systémů s odloženým uvolňováním (např. biodegradovatelné matrice). Příklady systémů se zpožděným uvolňováním pro dodání léčiv, které jsou vhodné pro podávání přípravku podle tohoto popisu jsou popsaný v Patentech US 4452775 (Kent), 5239660 (Leonard), 3854480 (Zaffaroni).
Přípravky mohou obsahovat běžné nosiče a excipienty, jako jsou obilný škrob nebo želatina, laktóza, sacharóza, mikrokrystalická celulóza, kaolin, mannitol, fosfát divápenatý, chlorid sodný
-21 CZ 307877 B6 a alginová kyselina. Přípravky mohou obsahovat sodnou sůl kroskarmelózy, mikrokrystalickou celulózu, obilný škrob, sodný škrobglykolát a alginovou kyselinu.
Tabletová pojivá, která mohou být použita, zahrnují akácii, methylcelulózu, natriumkarboxymethylcelulózu, polyvinylpyrrolidon (Povidon), hydroxypropylmethylcelulózu, sacharózu, škrob a ethylcelulózu.
Lubrikanty, které mohou být použity, zahrnují stearát horečnatý nebo jiné metalické stearáty, kyselinu stearovou, silikonovou kapalinu, talek, vosky, oleje a koloidní oxid křemičitý.
Mohou být také použita chuťová činidla jako je pepermint, olej wintergreen, cherry a pod. Může být vhodné přidávat barvicí činidlo, aby vznikla dávková forma vzhledově estetičtější nebo aby byl produkt identifikován.
Pro orální použití jsou prakticky užitečné tuhé formulace, jako jsou tablety a kapsle. Také mohou být vhodné prostředky s odloženým účinkem nebo preparáty potažené pro průchod střevem. Pro pediatrické a geriatrické aplikace jsou obzvláště vhodné suspenze, sirupy a žvýkací tablety. Pro orální podávání jsou farmaceutické přípravky ve formě např. tablet, kapslí, suspenzí nebo kapalin. Farmaceutické přípravky jsou s výhodou připravovány ve formě dávkových forem obsahujících terapeuticky účinné množství aktivní složky. Příklady těchto dávkových forem jsou tablety a kapsle. Pro terapeutické účely mohou tablety a kapsle kromě aktivní složky obsahovat konvenční nosiče jako jsou pojivá, např. akáciovou gumu, želatinu, polyvinylpyrrolidon, sorbitol nebo tragant; pojivá jako např. fosfát vápenatý, glycin, laktóza, kukuřičný škrob, sorbitol nebo sacharóza; lubrikanty jako např. stearát horečnatý, polyethylenglykol, silikát nebo talek; desintegrační činidla jako např. bramborový škrob, chuťová nebo barvicí činidla nebo akceptovatelná smáčecí činidla. Orální kapalné přípravky jsou obecně ve formě vodných nebo olejových roztoků, suspenzí, emulzí, sirupů nebo elixírů a mohou obsahovat konvenční aditiva, jako jsou suspenzní činidla, emulgační činidla, nevodná činidla, preservativa, barvicí činidla a chuťová činidla. Orální kapalné přípravky mohou obsahovat lipopeptidové micely nebo monomemí formy lipopeptidu. Příklady přídavných látek pro kapalné přípravky zahrnují akácii, mandlový olej, ethylalkohol, frakcionizovaný kokosový olej, želatina, glukózový sirup, glycerin, hydrogenované jedlé tuky, lecitin, methylcelulózu, methyl-nebo propyl-para-hydroxybenzoát, propylenglykol, sorbitol nebo kyselina sorbová.
Pro intravenózní (IV) použití může být vodorozpustná forma daptomycinu, daptomycinu příbuzného lipopeptidu nebo jiného lipopeptidu rozpuštěna v libovolné běžně používané intravenózní kapalině a podávána infuzí. Pokud jde o lipopeptidové micely, lipopeptid se rozpustí v intravenózní formulaci za podmínek, při kterých je lipopeptid přítomný při koncentracích nad jeho cmc. Odborník v oboru může měnit hodnoty pH, teplotu nebo koncentraci soli podle tohoto popisu za účelem získání intravenózního roztoku zahrnujícího lipopeptidové micely. Dále může být lipopeptidový roztok sonifikován za účelem získání lipopeptidových liposomů. Intravenózní formulace mohou obsahovat nosiče, excipienty nebo stabilizátory včetně (bez omezení) vápníku, albuminu lidského séra, citrátu, acetátu, chloridu vápenatého, uhličitanu a dalších solí. Intravenózní kapaliny zahrnují (bez omezení) fýziologický roztok nebo Ringerův roztok. Daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid může být také umístěn do injektorů, kanuly, katetrů a vedení.
Formulace pro parenterální podávání může být ve formě vodných nebo nevodných isotonických sterilních roztoků nebo suspenzí pro injektování. Tyto roztoky nebo suspenze mohou být připraveny ze sterilních prášků nebo granulí majících jeden nebo více nosičů zmíněných u použití pro orální podávání. Lipopeptidové micely mohou být obzvláště vhodné pro parenterální podávání. Sloučeniny mohou být rozpuštěny v polyethylenglykolu, propylenglykolu, ethanolu, obilném oleji, benzylalkoholu, chloridu sodném a/nebo různých pufirech. Pro intramuskulámí přípravky mohou být sterilní formulace lipopeptidové sloučeniny nebo jejich vhodné rozpustné
-22CZ 307877 B6 solné formy, např. hydrochloridová sůl, rozpuštěny a podávány ve farmaceutickém ředidle jako je voda pro injekce (WFI), fyziologický slaný roztok nebo 5% glukóza.
Lipopeptidové micely mohou být obzvláště výhodné pro parenterální podávání, protože je pravděpodobné, že nebudou způsobovat žádné lokální podráždění v místě injekce. Bez toho aniž bychom se cítili být nějak vázání teorií, je pravděpodobné, že lipopeptidové micely budou způsobovat menší lokální podráždění než monomemí lipopeptidy, protože lipidické ocásky, které mohou při injekci způsobovat podráždění, budou nasměrovány dovnitř micely, zatímco peptidové jádro, u něhož je menší pravděpodobnost místního podráždění než u lipidických ocásků, bude vystaveno směrem ke tkáním. Lipopeptidové micely mohou být připraveny pro intramuskulámí a parenterální přípravky podle tohoto popisu za vzniku přípravku obsahujícího lipopeptidové micely. Dále může být lipopeptidový roztok sonifikován za účelem získání lipopeptidových liposomů. Vhodná nerozpustná forma sloučeniny může být také připravena a podávána jako suspenze ve vodném základu nebo farmaceuticky přijatelné olejové bázi, např. ester dlouhé mastné kyseliny, jako třeba ethyloleát.
Injektovatelné depotní formy mohou být vyrobeny zabudováním mikroenkapsulovaných matricí sloučeniny v biodegradovatelných polymerech jako je polyaktidepolyglykolid. V závislosti na poměru léčiva k polymeru a druhu konkrétního použitého polymeru může být řízena rychlost uvolňování léčiva. Příklady dalších biodegradovatelných polymerů zahrnují poly(orthoestery) a poly(anhydridy). Depotní injektovatelné přípravky se také připravují uzavřením léčiva v mikroemulzích, které jsou kompatibilní s tělními tkáněmi.
Pro místní použití mohou být sloučeniny a micely podle tohoto popisu připraveny ve vhodné formě k aplikaci na kůži nebo sliznice nosu a krku a mohou mít formu krémů, mazání, kapalných sprejů nebo inhalantů, bonbonů nebo krčních mazání. Tyto místní formulace mohou dále zahrnovat chemické sloučeniny jako je dimethylsulfoxid (DMSO) kvůli usnadnění povrchové penetrace aktivní složky. Jako místní přípravky mohou být podávány sterilní přípravky daptomycinu, daptomycinu příbuzného lipopeptidů, jejich vhodné solné formy nebo lipopeptidové micely ve formě krémů, mazání, sprejů nebo dalších přípravků pro místní aplikaci. Přípravky pro místní použití mohou být také ve formě bandáží, které byly impregnovány s čištěným daptomycinem, daptomycinu příbuzným lipopeptidem nebo přípravkem obsahujícím lipopeptidové micely.
Pro aplikace do očí nebo uší mohou být sloučeniny podle tohoto popisu přítomny v kapalné nebo polokapalné formě formulované v hydrofobních nebo hydrofilních základech jako mazání, lotion, nátěry nebo prášky.
Pro rektální podávání mohou být sloučeniny podle tohoto popisu podávány ve formě čípků, kde jsou smíchány s konvenčními nosiči, jako je kakaové máslo, vosk nebo jiný glycerid.
Pro aerosolové přípravky mohou být sterilní formulace čištěného daptomycinu nebo daptomycinu příbuzného lipopeptidů nebo solných forem těchto sloučenin použity v inhalátorech| jako jsou inhalátory s měřenou dávkou a rozprašovače. Pro aerosolové přípravky mohou být také použity sterilní formulace lipopeptidových micel. Aerosolizované formy mohou být obzvláště užitečné pro léčení respiračních infekcí jako je pneumonie a infekce dutin.
Alternativně, sloučeniny podle tohoto popisu mohou být v práškové formě pro rekonstituci ve vhodném farmaceuticky přijatelném nosiči v čase použití. Má-li být prášková forma rekonstituována ve formě lipopeptidových micel, může prášek obsahovat pufr a/nebo sůl tak, aby rekonstituce s určitým množstvím sterilní vody nebo solanky vedla ke vzniku micel. Alternativně, prášková forma může obsahovat instrukce týkající se množství a typu farmaceuticky přijatelného nosiče, který má být použit na rekonstituci lipopeptidů, aby byly získány micely. V dalším provedení jednotková dávková forma sloučeniny podle tohoto popisu může být roztok sloučeniny, její soli nebo lipopeptidových micel ve vhodném ředidle ve
-23 CZ 307877 B6 sterilních hermeticky uzavřených ampulích. Koncentrace sloučeniny v dávkové formě se může lišit, např. od 1 °Cdo asi 50 %, v závislosti na použité sloučenině a její rozpustnosti a na dávce vyžadované lékařem. Jestliže přípravek obsahuje dávkové formy, každá dávková forma s výhodou obsahuje od 50 do 500 mg aktivní látky. Pro léčení dospělých pacientů dávky s výhodou obsahují od 100 mg do 3 g denně, v závislosti na způsobu podávání a frekvenci podávání.
V dalším aspektu se tento popis zabývá způsobem léčení infekcí, obzvláště takových, které jsou způsobeny gram-pozitivními bakteriemi u lidí a u zvířat. Termín léčení je použit k označení jak prevence infekce, tak i kontroly již projevené infekce poté co byl živočich infikován. Projevená infekce může být akutní nebo chronická. Způsob léčení zahrnuje podávání lidem nebo jiným živočichům účinné množství sloučeniny podle tohoto popisu. Účinná dávka je obecně mezi 0,1 a asi 25 mg/kg čištěného daptomycinu, daptomycinu příbuzného lipopeptidu nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli. Daptomycin nebo daptomycinu příbuzný lipopeptid může být v monomemí formě nebo může být částí lipopeptidových micel. Preferovaná dávka je od asi 1 do asi 12 mg/kg čištěného daptomycinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli.
V jednom provedení podle tohoto popisu se popisuje způsob léčení infekcí, obzvláště takových, které jsou způsobeny gram-pozitivními baktériemi u subjektu s terapeuticky účinným množstvím daptomycinu nebo jiným antibakteriálnim lipopeptidem. Daptomycin nebo antibakteriální lipopeptid může být monomemí nebo ve formě lipopeptidových micel. Příklady způsobů podávání antibakteriálních činidel jsou popsány v US Patentu 5041567 (Rogers) a v PCT patentové přihlášce EP 94/02552 (publikace č. WO 95/05384), jejichž obsah je zde zahrnut jako reference. V tomto popisu označuje termín terapeuticky účinné množství množství daptomycinu nebo antibakteriálního lipopeptidu podle tohoto popisu, které zabraňuje počátku bakteriální infekce, zmírňuje její symptomy nebo zastavuje rozvoj bakteriální infekce. Termín léčení je definován jako podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle tohoto popisu subjektu, jak za účelem prevence výskytu infekce a kontroly nebo eliminace infekce. Termín subjekt v tomto popisu definuje savce, rostlinu nebo buněčnou kultura. V preferovaném provedení tohoto popisu je subjektem lidský nebo zvířecí pacient potřebný léčení lipopeptidovou sloučeninou.
Lipopeptidové antibiotická sloučenina může být podávána jako jediná denní dávka nebo ve vícenásobných dávkách za den. Režim léčení může vyžadovat podávání během dlouhé časové periody, např. několik dní nebo od dvou do čtyř týdnů. Množství v podávané dávce nebo celkové podávané množství bude záviset na takových faktorech, jako jsou drah a závažnost infekce, věk a obecné zdraví pacienta, tolerance pacienta k antibiotikům a mikroorganismům nebo na mikroorganismech zahrnutých v infekci. Způsob podávání je popsán v mezinárodní PCT přihlášce WO 00/18419.
Způsob podle tohoto popisu zahrnuje podávání čištěného daptomycinu nebo jiného lipopeptidového antibiotika nebo jejich farmaceutického přípravku pacientům v množství, které je dostatečné pro redukování nebo eliminaci infekce způsobené gram-pozitivními bakteriemi. Daptomycin nebo lipopeptidové antibiotikum mohou být monomery nebo mohou být přítomny ve formě micel. Antibiotikum může být podáváno orálně, parenterálně, inhalaci, místně, rektálně, nasálně, bukálně, vaginálně nebo pomocí implantovaného zásobníku, externí pumpou nebo katetrem. Antibiotikum může být připraveno pro oftalmické nebo aerosolové použití. Čištěný daptomycin, lipopeptidové antibiotikum nebo jejich farmaceutické přípravky mohou být přímo injektovány nebo podávány do abscesu, orgánové dutiny nebo kloubů. Parenterální podávání zahrnuje subkutánní, intravenózní, intramuskulámí, intraartikulámí, intrasynoviální, cistemální, intratheciální, intrahepatické, intralesionální a intrakraniální injekce nebo infůze.
V preferovaném provedení tohoto popisu se daptomycin nebo jiný lipopeptid podává intravenózně, subkutánně nebo orálně.
-24CZ 307877 B6
Způsob léčení podle tohoto popisu může být použit pro léčení pacientů majících bakteriální infekce, které jsou způsobené nebo zhoršené působením libovolného typu gram-pozitivních baktérií. V preferovaném provedení se čištěný daptomycin, daptomycinu příbuzný lipopeptid, jiný lipopeptid nebo farmaceutický přípravek je obsahující podává pacientovi v rámci způsobu léčení podle tohoto popisu. V dalším provedení mohou být bakteriální infekce způsobené nebo zhoršené působením baktérií zahrnujících (bez omezení) stafylokoky vnímavé a stafylokoky resistentní na methicilin (včetně Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus saprophyticus a stalylokoky negativní na koagulázu), Staphylococcus aureus středně vnímavý na glykopeptid (GISA), streptokoky vnímavé a resistentní k penicilinu (včetně Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Strepiococcus agalactiae, Streptococcus avium, Streptococcus bovis, Streptococcus lactis, Streptococcus sangius a Streptococci skupiny C, Streptococci skupiny G a viridans streptococci), enterokoky (včetně kmenů vnímavých a resistentních k vankomycinu jako jsou Enterococeus faecalis and Enterococcus faecium), Clostridium difficile, Clostridium clostridiiforme, Clostridium innocuum, Clostridium perfringens, Clostridium ramosum, Haemophilus influenzae, Listeria monocytogenes, Corynebacterium jeikeium, Bifidobacterium spp., Eubacterium aerofaciens, Eubacterium lentum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacilllus plantarum, Lactocoecus spp., Leuconostoc spp., Pediococcus, Peptostrepiococcus anaerobius, Peptostreptococcus asaccarolyticus, Peptostreptococcus magnus, Peptostreptococcus micros, Peptostreptococcus prevotii, Peptostreptococcus productus, Propionibacterium acnes afictinomyces spp.
Protibakteriální aktivita daptomycinu proti klasicky resistentním kmenům je srovnatelná s aktivitou proti klasicky vnímavým kmenům při in vitro experimentech. Kromě toho, hodnoty minimální inhibiční koncentrace (MIC) pro daptomycin vůči vnímavým kmenům je typicky čtyřikrát nižší než aktivita vankomycinu. V preferovaném provedení se tedy čištěný daptomycin, daptomycinu příbuzné lipopeptidové antibiotikum nebo jejich farmaceutické přípravky podávají pacientům, kteří vykazují bakteriální infekce, které jsou resistentní vůči antibiotikům včetně vankomycinu. Kromě toho, narozdíl od glykopeptidových antibiotik, daptomycin vykazuje rychlou koncentračně závislou baktericidní aktivitu proti gram-pozitivním organismům. V preferovaném způsobu léčení podle tohoto popisu se tedy čištěný daptomycin, lipopeptidové antibiotikum nebo jejich farmaceutické přípravky podávají pacientům vyžadujícím rychlou terapii pomocí antibiotik.
Způsob léčení podle tohoto popisu může být použit pro gram-pozitivní bakteriální infekce libovolných tělních orgánů nebo tkání. Tyto orgány nebo tkáně zahrnují (bez omezení) skeletální svaly, kůži, krevní oběh, ledviny, srdce, žaludek a kosti. Způsob léčení podle tohoto popisu může být použit pro léčení (bez omezení) kůže a infekcí měkkých tkání, bakterémie a infekcí vylučovacího traktu. Způsob léčení podle tohoto popisu může být použit pro léčení infekcí dýchacího traktu vzniklých nákazou ve společnosti včetně (bez omezení) otitis media, sinusitis, chronické bronchitidy a pneumonie, způsobené lékově-resistentními Streptococcus pneumoniae nebo Haemophilus influenzae. Způsob léčení podle tohoto popisu může být použit pro léčení smíšených infekcí zahrnujících různé druhy gram-pozitivních baktérií nebo zahrnujících jak gram-pozitivní/ tak i gram-negativní bakterie, včetně aerobních, kaprofilních nebo anerobních bakterií. Tyto typy infekcí zahrnují intra-abdominální infekce a porodnicko-gynekologické infekce. Způsoby léčení podle tohoto popisu mohou být použity v sestupné terapii nemocničních infekcí, včetně (bez omezení) pneumonie, intra-abdominální sepse, infekcí kůže a měkkých tkání a infekcí kostí a kloubů.
Způsob léčení podle tohoto popisu může být také použit pro léčení infekcí zahrnujících (bez omezení) endokarditis, nefritis, septickou arthritis a osteomyelitis. V preferovaném provedení může být libovolná výše popsaná nemoc léčená s využitím čištěného daptomycinu, lipopeptidového antibiotika nebo jejich farmaceutického přípravku. Dále mohou být nemoci léčeny s využitím daptomycinových nebo lipopeptidových antibiotik buď v monomemí nebo micelámí formě.
-25 CZ 307877 B6
Daptomycin, daptomycinu příbuzný lipopeptid nebo jiný lipopeptid mohou být také podávány v dietě nebo výživě pacientů nebo zvířat. Jsou-li podávány jako část celkového dietního přijmu, může být množství daptomycinu nebo jiného lipopeptidu menší než 1 % hmotnosti potravy a s výhodou ne více než 0,5 % hmotnosti. Dietou zvířat mohou být normální potraviny, do nichž může být daptomycin nebo lipopeptid přidán nebo zamíchán.
Způsob léčení podle tohoto popisu může být prováděn při současném podávání jednoho nebo více protihoubových činidel a/nebo jednoho nebo více antibiotik jiných než daptomycin nebo dalších lipopeptidových antibiotik. Současné podávání protihoubových činidel a antibiotik jiných než daptomycin nebo jiných lipopeptidových antibiotik může být užitečné při léčení smíšených infekcí, jako jsou infekce způsobené gram-pozitivními bakteriemi, infekce způsobené grampozitivními a gram-negativními bakteriemi nebo infekce způsobené jak bakteriemi, tak i houbami. Kromě toho, daptomycin nebo jiné lipopeptidové antibiotikum může zlepšit profil toxicity jednoho nebo více současně podávaných antibiotik. Bylo prokázáno, že podávání daptomycinu a aminoglykosidu může zlepšit renální toxicitu způsobenou aminoglykosidem. V preferovaném provedení tohoto popisu může být antibiotikum a/nebo protihoubové činidlo podáváno společně s čištěným daptomycinem, jiným lipopeptidovým antibiotikem nebo s farmaceutickými přípravky zahrnujícími čištěný daptomycin nebo jiné lipopeptidové antibiotikum.
Společné podávání jiného terapeutického činidla s daptomycinem nebo jiným lipopeptidovým antibiotikem může být prováděno s využitím daptomycinu nebo lipopeptidového antibiotika buď v monomemí nebo v micelámí formě. Jak bylo diskutováno výše, sférické lipopeptidové micely mohou být použity k rozpuštění činidla, které vykazuje nízkou rozpustnost ve vodě. Kromě toho, lipopeptidové liposomy mohou být použity k uzavření činidla, která jsou rozpustná ve vodných médiích uvnitř liposomů. Následováním popisu tohoto popisu bude odborník v oboru schopen připravit micely obsahující terapeutická činidla, jako jsou protizánětlivá činidla, protihoubové činidla nebo jiná antibiotika.
Antibakteriální činidla a jejich třídy, které mohou být podávány společně s daptomycinem nebo jinými lipopeptidovými antibiotiky zahrnují (bez omezení) peniciliny a příbuzná léčiva, karbapenemy, cefalosporiny a příbuzná léčiva, aminoglykosidy, bacitracin, gramicidin, mupirocin, chloramfenikol, thiamfenikol, natrium-fusidat, lincomycin, clindamycin, makrolidy, novobiocin, polymyxiny, rifamyciny, spektinomycin, tetracykliny, vankomycin, teikoplanin, streptograminy, činidla proti listové kyselině včetně sulfonamidů, trimethoprim a jeho kombinace a pyrimethamin, syntetické antibakteriální činidla včetně nitrofuranů, methenamin mandelát a methenamin hippurát, nitroimidazoly, chinolony, fluorochinolony, isoniazid, ethambutol, pyrazinamid, para-aminosalicylová kyselina (PAS), cykloserin, capreomycin, ethionamid, prothionamid, thiacetazon, viomycin, eveminomycin, glykopeptid, glycylcylcline, ketolidy, oxazolidinon; imipenen, amikacin, netilmicin, fosfomycin, gentamicin, ceftriaxon, Ziracin, LY 333328, CL 331002, HMR 3647, Linezolid, Synercid, Aztreonam a Metroriidazol, Epiroprim, OCA-983, GV-143253, Sanfetrinem sodium, CS-834, Biapenem, A-99058.1, A-165600, A179796, KA 159, Dynemicin A, DX8739, DU 6681; Cefluprenam, ER 35786, Cefoselis, Sanfetrinem celexetil, HGP-31, Cefpirom, HIvm-3647, RU-59863, Mersacidin, KP 736, Rifalazil; Kosan, AM 1732, MEN 10700, Lenapenem, BO 2502A, NE-1530, PR 39, K130, OPC 20000, OPC 2045, Veneprim, PD 138312, PD 140248, CP 111905, Sulopenem, ritipenam acoxyl, RO-65-5788, Cyclothialidine, Sch-40832, SEP 132613, micacocidin A, SB-275833, SR-15402, SUN A0026, TOC 39, carumonam, Cefozopran, Cefetamet pivoxil a T 3811.
V preferovaném provedení podle tohoto popisu, je antibakteriální činidlo, které může být podáváno společně s daptomycinem, zahrnuje (bez omezení) imipenen, amikacin, netilmicin, fosfomycin, gentamicin, ceftriaxon, teicoplanin, Ziracin, LY 333328, CL 331002, HMR 3647, Linezolid, Synercid, Aztreonam a Metronidazol.
-26CZ 307877 B6
Antibakteriální činidlo, které může být podáváno společně s daptomycinem nebo jiným lipopeptidovým antibiotikem zahrnuje (bez omezení) Caspofungen, Voriconazol, Sertaconazol, IB-367, FK-463, LY-303366, Sch-56592, Sitafloxacin, DB-289 polyeny, jako třeba Amphotericin, Nystatin, Primaricin; azoly, jako třeba Fluconazol, Itraconazol a Ketoconazol; allylaminy, jako třeba Naftifin a Terbinafin; a anti-metabolity jako třeba Flucytosin. Další protihoubová činidla zahrnují (bez omezení) ta, která jsou popsaná ve Fostel et al., Drug Discovery Today 5: 25-32 (2000), zahrnutém zde jako reference. Fostel et al. popisuje protihoubová činidla zahrnující Corynecandin, Mer-WF3010, Fusacandins, Artrichitin/LL 15G256y, Sordarins, Cispentacin, Azoxybacillin, Aureobasidin a Khafrefungin.
Daptomycin nebo jiné lipopeptidové antibiotikum, včetně daptomycinu-příbuzných lipopeptidu, mohou být podávány podle tohoto popisu až do vymizení bakteriální infekce nebo do jejího zredukování. V jednom provedení podle tohoto popisu daptomycin nebo jiný lipopeptid je podáván po dobu od 3 dnů do 6 měsíců. V preferovaném provedení se daptomycin nebo jiný lipopeptid podává 7 až 56 dní. V ještě preferovanějším provedení se daptomycin nebo jiný lipopeptid podává 7 až 28 dnů. V ještě preferovanějším provedení se daptomycin nebo jiný lipopeptid podává 7 až 14 dni. Daptomycin nebo jiný lipopeptid může být podáván po kratší nebo delší dobu, je-li to potřeba.
Za účelem plného pochopení tohoto popisu následují příklady provedení podle tohoto popisu. Tyto příklady jsou uvedeny za účelem ilustrace a v žádném případě nejsou zamýšleny jako omezující pro rozsah tohoto vynálezu.
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1
Fermentace kultury S. roseosporus NRRL kmen 15998 byla prováděna za podmínek kontrolovaného přísunu děkanové kyseliny při koncentracích optimalizovaných pro produkci antibiotika, přičemž byl minimalizován vznik kontaminantů. Zbytková koncentrace kyseliny děkanové byla měřena pomocí plynové chromatografie a cílová zbytková koncentrace byla 10 ppm děkanové kyseliny od nastartování indukce až do sběru (přibližně 30 h). Centrifugace kultury a následná analýza vyčeřené kapaliny byly použity pro měření produkce daptomycinu pomocí HPLC. Titr sebrané kapaliny byl typicky mezi 2,1 a 2,6 g na litr fermentační kapaliny.
Fermentace byla zpracována buď mikrofdtraci s využitím Pall-Sep, nebo pomocí průmyslové centrifugy a hlubokého filtru. Vyčeřený roztok byl aplikován na anion-výměnnou pryskyřici, Mitsubishi FP-DA 13, promyt s 30 mM NaCl při pH 6,5 a eluován se 300 mM NaCl při 6,0 až 6,5. Alternativně, FP-DA 13 kolona byla promyta se 60 mM NaCl při pH 6,5 a eluována s 500 mM NaCl při pH 6,0 až 6,5. Eluát byl aplikován na HIC pryskyřici, HP-20ss, promyt se 30% acetonitrilem a eluován se 35% acetonitrilem při pH 4,0 až 5,0. Alternativně, HIC pryskyřice byla promyta se 45% isopropylalkoholem a eluována 55 až 60% isopropylalkoholem. Eluát byl aplikován na FP-DA 13 pryskyřici a byl promyt jako předtím. Konečný anion-výměnný krok redukuje rozpouštědlo o jednu třetinu nebo více. Byla provedena reverzní osmotická diafiltrace a zkoncentrování při pH 1,5 až 2,5 s využitím 0,2μηι filtru a daptomycinový preparát byl zmražen. Finální reverzní osmotická diafiltrace byla prováděna s vodou pro injekce (WFI) kvůli vymytí daptomycinu a kvůli nastavení jeho koncentrace před plněním ve sterilních podmínkách. Vialky nebo velké objemy daptomycinu byly poté lyofilizovány.
Příklad 2
Daptomycin byl vyroben ve fermentační kultuře S. roseosporus a částečně čištěný daptomycin (9,9 kg) byl čištěn pomocí mikrofiltrace z 5500 1 fermentační kapaliny pomocí metody popsané v patentu US 4885243. Částečně čištěný daptomycin byl dále čištěn pomocí metody popsané v
-27 CZ 307877 B6
Pat. US 4874843 a vznikl daptomycinový preparát o čistotě 91 %. Daptomycinový preparát byl aplikován na Poros PÍ50 anion-výměnnou pryskyřici (PE Biosystems) v Tris pufru pH 7,0 obsahujícím 6H močovinu a byl ponechán navázat se na pryskyřici. Pryskyřice byla promyta se třemi objemy pufru před započetím NaCl gradientu v tom samém pufru.
Alternativně, kontaminanty mohou být účinně odstraněny z kolony s fixní úrovní 30 mM NaCl. K eluování čištěného daptomycinu z pryskyřice došlo při koncentraci přibližně 300 mM NaCl během 0 na 1000 mM NaCl gradientu. Daptomycin eluovaný z kolony měl čistotu vyšší než 99 % (měřeno HPLC první metodou). Čištěný daptomycin obsahoval pouze jednu detekovatelnou daptomycinovou nečistotu. Anhydro-daptomycin a β-isomer byly nedetekovatelné (méně než 0,01% kontaminace). Koncentrace neidentifikovaných nečistot byla vyšší než 0,1% a nižší než 0,5%.
Příklad 3
Daptomycinový preparát s čistotou 91 % byl připraven podle popisu v Příkladu 2. Produkt byl aplikován na Poros D50 anion-výměnnou pryskyřici (PE Biosystems) v acetátovém pufru pH 7,0 obsahujícím 6M močovinu. Poros D50 pryskyřice byla promyta a eluována stejným způsobem jako bylo popsáno v Příkladu 2. Daptomycin eluovaný z kolony měl čistotu 96, 92 % (měřeno HPLC druhou metodou). Produkt podle tohoto vynálezu obsahoval pouze dvě z počátečních čtrnácti nečistot (méně než 0,5% kontaminantů). Anhydro-daptomycin nemohl být detekován v čištěném daptomycinovém preparátu (méně než 0,01% kontaminace a s přesným obsahem méně než 0,05%).
Příklad 4
Fermentační kapalina obsahující daptomycin byla vyrobena podle popisu v Příkladu 2. Fermentační kapalina byla vyčeřena mikrofiltrací. Vyčeřený produkt byl extrahován 20% nbutanolem nebo iso-butanolem při pH 4,5 (jedna část butanolu na čtyři části vyčeřeného roztoku). Byla provedena následná extrakce vyčeřeného roztoku za vzniku částečně čištěného daptomycinu s čistotou vyšší než 90 % celkového obsahu daptomycinu ve vyčeřeném roztoku. Daptomycin byl získán z butanolové fáze přídavkem vodného pufru o pH 6,5 v objemu rovném jedné polovině nebo více objemu butanolu kvůli extrakci daptomycinu z butanolové fáze do fáze vodné: Butanolový extrakční krok vedl k částečně čištěnému daptomycinovému preparátu, který byl čištěný pětkrát a zkoncentrován desetkrát vzhledem k vyčeřenému roztoku.
Vodný daptomycinový preparát byl čištěn metodou popsanou v patentu US 4874843, což vedlo k daptomycinu o 91 % čistotě. Daptomycin obsahoval čtrnáct nečistot. Produkt byl aplikován na Poros D50 pryskyřici v Tris pufru při pH 7,0 obsahujícím 6M močovinu. Pryskyřice byla promyta s třemi objemy Tris pufru při pH 7,0 obsahujícím 6M močovinu před zahájením NaCl gradientu od 0 do 1000 mM ve stejném pufru. K eluování čištěného daptomycinu z pryskyřice došlo při přibližně 300 mM NaCl. Daptomycin měl 98% čistotu (měřeno druhou HPLC metodou).
Příklad 5
Daptomycin byl fermentován podle popisu v Příkladu 2. 5500 1 fermentační kapaliny obsahovalo 13 kg daptomycinu. Fermentační kapalina byla přímo extrahována 20% n-butanolem při pH 4,5, což vedlo k převedení daptomycinu do butanolu. Byla provedena opakovaná extrakce fermentační kapaliny butanolem za vzniku daptomycinu o celkové čistotě vyšší než 90 % ve fermentační kapalině. Butanolové fáze byla extrahována s vodným acetátovým pufrem při pH 6,5 což vedlo k daptomycinu pětinásobně čištěnému (35 %) a desetinásobně zkoncentrovánému vzhledem k fermentační kapalině. Vodný daptomycin byl mikrofiltrován metodou popsanou v patentu US 4885243, a poté čištěn pomocí metody popsané v Pat. US 4874843. Tato metoda vedla k daptomycinu o čistotě přibližně 91 %. Daptomycin obsahoval 14 nečistot pomoci HPLC
-28 CZ 307877 B6 metody používané v současném stavu techniky. Produkt byl aplikován na kolonu s pryskyřicí Poros D50 v acetátovém pufru při pH 7,0 obsahujícím 6M močovinu. Promytí a eluování pryskyřice bylo provedeno podle popisu v Příklad 2. Produkt chromatografického kroku měl přibližně 98 až 99% čistotu (měřeno druhou HPLC metodou).
Příklad 6
Daptomycin byl vyroben fermentací kultury S. roseosporus s tou výjimkou, že byla použita snížená zbytková koncentrace živné kyseliny děkanové, za účelem zlepšení kvality fermentace na přibližně 10% čistotu po vyčeření pomocí mikrofiltrace nebo centrifůgace. Koncentrace děkanové kyseliny byla monitorována a periodicky adjustována za účelem udržení zbytkové koncentrace děkanové kyseliny na úrovní nižší než 50 ppm a s výhodou mezi 1 až 10 ppm během fermentace. Fermentační kapalina byla mikrofiltrována metodou popsanou v patentu 4885243 za vzniku 12,1 kg částečně čištěného daptomycinu z 5500 1 fermentační kapaliny. Vyčeřená fermentační kapalina byla navázána na anion-výměnnou pryskyřici FP-DA 13 (Mitsubishi) v acetátovém pufru při neutrálním pH, promyta s acetátovým pufřem obsahujícím 30 mM NaCl a následně eluována s acetátovým pufrem 300 mM NaCl. Tento krok s anion-výměnnou pryskyřicí vedl k daptomycinu s čistotou vyšší než 70 %. Tento částečně čištěný daptomycin byl dále čištěn pomocí metody popsané v patentu US 4874843 s tou modifikací, že byla použita pryskyřice HP20ss. Částečně čištěný daptomycin byl navázán na pryskyřici HP-20ss v acetátovém pufru obsahujícím 10 % acetonitrilu, byl promyt s acetátovým pufrem obsahujícím 30 % acetonitril a byl eluován 40% acetonitrilem v acetátovém pufru, což vedlo k daptomycinu s čistotou od asi 94 do 96 % (měřeno druhou HPLC metodou). Produkt byl podroben anion-výměnné chromatografii s modifikovaným pufrem s využitím pryskyřice Poros D50 podle popisu v Příkladu 5. Daptomycin měl čistotu vyšší než 99 % a obsahoval pouze dvě ze čtrnácti nečistot vyrobených metodou známou v současném stavu techniky.
Příklad 7
Daptomycinový preparát s čistotou 93 % byl připraven podle popisu v Příkladu 2. Produkt byl aplikován na pryskyřici Poros PÍ50 (PE Biosystems) v acetátovém pufru pH 6,0 obsahujícím 2M močoviny. Pryskyřice Poros P150 byla promyta s trojnásobkem objemu pufru. Daptomycin byl eluován z pryskyřice s využitím 0 až 400 mM NaCl gradientu v acetátovém pufru pH 6,0, obsahujícím 2M močoviny. Daptomycin byl eluován mezi 150 a 300 mM NaCl. Daptomycin eluovaný z kolony měl čistotu 99,0 až 99,5 % (měřeno první HPLC metodou). Daptomycin obsahoval stopová množství čtyř nečistot, jejichž obsah byl menší než 1 % celkového daptomycinu. V čištěném daptomycinovém preparátu anhydro-daptomycin nemohl být detekován (méně než 0,02% kontaminace).
Příklad 8
Daptomycinový preparát s čistotou 93 % byl připraven podle popisu v Příkladu 2. Produkt byl aplikován na pryskyřici Poros PÍ50 (PE Biosystems) v acetátovém pufru pH 6,0, obsahujícím 2M močovinu. Kolona byla promyta se šestinásobným objemem 60 mM NaCl v acetátovém pufru pH 6,0, obsahujícím 2M močoviny (promývací pufř). Promývací pufř se může pohybovat v rozmezí od 50 do 75 mM NaCl. Promytí odstranilo v podstatě všechen anhydro-daptomycin. Daptomycin byl eluován s šestnácti objemy 250 mM NaCl v acetátovém pufru pH 6,0, obsahujícím 2M močovinu. Čistota daptomycinu je 98,5 až 99,5 % (měřeno první HPLC metodou).
Příklad 9
Daptomycinový preparát popsaný v Příkladu 2 byl připraven s využitím metody, která významně snížila koncentraci rozpouštědla požadovaného pro provedení HP-20ss chromatografie. Nečekaně, rozpouštědlo pro eloxování daptomycinu, 40 % acetonitril nebo 55 až 60 %
-29CZ 307877 B6 isopropylalkohol, bylo sníženo na 12 % a 25 %, když HP-20ss chromatografie byla prováděna při neutrálním pH raději než při kyselém pH jak bylo popsáno v patentu US 4874843. V preferovaném provedení tohoto vynálezu mohou být použity změny pH k recyklování HP-20ss pryskyřice bez odstranění rozpouštědla.
Po eluování z FP-DA13 kolony při pH 6,5 až 7,0 byl daptomycin navázán na ekvilibrovanou kolonu HP-20ss, jako třeba na kolonu ekvilibrovanou v 60 mM acetátu při pH 6,6. Kolona byla promyta s pěti až osmi objemy (objem sloupce pryskyřice = CBV) promývacího pufru. Příkladem promývacího pufru je 5% isopropylalkohoF60mM acetát při pH 6,6. Daptomycin byl eluován z kolony s elučním pufřem. Příkladem elučního pufru jsou dva až tři objemy CBV 25% isopropylalkohol/60 mM acetát při pH 6,6. Kolona byla promyta s vymývacím pufřem. V jednom provedení tohoto vynálezu byla kolona vymyta s jedním CBV 40% isopropylalkohoF60 mM acetát při pH 6,6 až 7,0. Daptomycinový roztok byl adjustován na pH 3,5 až 4,0 a byl znovu navázán na kolonu HP-20ss pryskyřice za účelem zvýšení čistoty. V jednom provedení tohoto vynálezu je daptomycin, eluovaný z kolony HP-20ss pryskyřice při pH 6,5, adjustován na pH 3,5 s využitím 0,25M fosforečné kyseliny. Daptomycinový roztok byl znovu navázán na dříve vymytou kolonu HP-20ss, která byla ekvilibrována v 60 mM acetátu při pH 3,5. Kolona byla promyta s pH adjustačním pufřem např. o pH 6,5. Příklad pH adjustačního pufru je pět až osm CBV 5% isopropylalkohol/60 mM acetát při pH 6,6. Daptomycin byl eluován s elučním pufřem a může být dále čištěn pomocí anion-výměnné chromatografie nebo jiné čisticí metody, pokud je to vyžadováno. HP-20ss kolona byla vymyta s vymývacím pufřem a vyčištěna před opětovným použitím. Příklad čisticího procesu zahrnuje promytí se třemi objemy (CBV) 0,5 M NaOH, promytí s jedním objemem vody a poté promytí s 0,25M fosforečnou kyselinou před ekvilibrací. Kolona může být uskladněna v 0,5M NaOH.
Příklad 10
Velký daptomycinový preparát připravený podle popisu v Příkladu 2 byl charakterizován pomocí semi-preparativní HPLC a charakterizovány pomocí kapalinové chromatografie/hmotnostní spktroskopie (LC/MS) s využitím jak pozitivního tak i negativního módu. Profil nečistot velkého daptomycinového preparátu před chromatografii na anion-výměnné pryskyřici Poros P150 je uveden v Tabulce 3 a chromatogram velkého daptomycinového preparátu je uveden na Obrázku 12.
-30CZ 307877 B6
Tabulka 3
ickiiííilkňčai liás Cubwí Tu
..........4.....„ 7 95 !63S I ' 2122ÍH CB-131017 XI. 5%, <i 9%
2. 9 11 1638 CB-13WH <0 5%. >6 1%
3 Π 54 1^213928 CB-131008 >0 5%, X 9%
......... 12.28 J624 CB-Í3W06 <0 5%, >0 1%
5 13 JO 1618 JVcxb ácný-1 <0 5%, >0 1 %
6 14 ÍS““' 5 §7 LY213827 CB-13G989 >0.5%, <1.9%
7' 14 43 í<5% CB-131005 -0 5%. <1.0%
8 H 10 1620 LY213846 CB-131010 >1 0%, <4 0¾
Dapío nrycsn 16.68 1620 LY146032 CB-109187 >90%
9 i 7 &2 S74 <0.5%, >9.1%
19.57 1810 <0 5%. >0 1%
H 19 57 1635 <0 5%, >0 i%
12 20 73 859 CB-131009 <0.5%, % 1%
.......1?......... 23.11 1602 LY17848Q CB-Í 30952 >1 0, <4'%.
14 2-1 53 1S34 LYI09208 CB-131078 <01 .
Nečistota 1 (CB-131012), která eluuje přibližně při 7,96 min (molekulární hmotnost: 1638). Předpokládá se, že jde o produkt hydrolýzy laktonu daptomycinu (Obrázek 4). Zdá se, že výsledky jsou v souhlase s LY212218, identifikovaném dříve Lilly jako derivát daptomycinu s otevřeným decylovým kruhem.
Nečistota 2 (CB-131011), která eluuje přibližně při 9,11 min (molekulární hmotnost: 1638). Předpokládá se, že jde také o produkt hydrolýzy laktonu β-isomeru daptomycinu (Obrázek 5).
Nečistota 3 (CB-131008), která eluuje přibližně při 11,54 min (molekulární hmotnost: 745). Předpokládá se, že jde o lineární lipopeptid skládající se z řetězce pěti aminokyselin obsahujícího tryptofan, asparagin, aspartát, threonin a glycin s řetězcem děkanové kyseliny (Obrázek 6). Zdá se, že výsledky jsou v souhlase s LY213928, identifikovaném dříve Lilly.
Nečistota 4 (CB-131006), která eluuje přibližně při 12,28 min (molekulární hmotnost: 1624). Předpokládá se, že jde o oxidovaný analog daptomycinu, ve kterém byla aminokyselina tryptofan oxidována na kyanurovou kyselinu (Obrázek 7).
Nečistota 5, která eluuje přibližně při 13,10 min (molekulární hmotnost: 1618). Její struktura zatím nebyla určena.
Nečistota 6 (CB-130989) a Nečistota 7 (CB-131005), které společně eluují přibližně při 14,43 min. Zdá se, že CB-130989 (MW: 587) je shodná s LY213827, lineárním lipopeptidem skládajícím se z řetězce tří aminokyselin obsahujícího tryptofan, asparagin a aspartát, s řetězcem děkanové kyseliny (Obrázek 8), jak bylo dříve identifikováno Lilly. CB-131005 (molekulární hmotnost: 1606) odpovídá daptomycinovému analogu, ve kterém dekanová kyselina postrádá jednu methylovou skupinu (Obrázek 9).
Nečistota 8 (CB-131010), která eluuje přibližně při 15,10 min (molekulární hmotnost: 1620) se shoduje s LY213846 (β-isomer) jak bylo dříve identifikováno Lilly (Obrázek 2) Koncentrace βisomeru je vyšší než 1%.
-31 CZ 307877 B6
Nečistota 9, která eluuje přibližně při 17,92 min (molekulární hmotnost: 874). Její struktura zatím nebyla určena.
Nečistoty 10a 11, které společně eluují přibližně při 19,57. Jejich struktura zatím nebyla určena.
Nečistota 12 (CB-131009), která eluuje přibližně při 20,93 min (molekulární hmotnost: 859). Předpokládá se, že jde o lineární lipopeptid skládající se z řetězce šesti aminokyselin obsahujícího tryptofan, asparagin, aspartát, threonin, glycin a omithin, s řetězcem děkanové kyseliny (Obrázek 10).
Nečistota 13 (CB-130952), která eluuje přibližně při 23,11 min (molekulární hmotnost: 1602). Předpokládá se, že jde o anhydro-daptomycin (Obrázek 3) a zdá se, že jde o stejnou sloučeninu jako LY178480. Koncentrace anhydro-daptomycinu je vyšší než 1 %.
Nečistota 14 (CB-131078), která eluuje přibližně při 24,53 min (molekulární hmotnost: 1634). Zdá se, že se shoduje s LY109208, který byl dříve identifikován Lilly jako daptomycinový analog obsahující jednu methylovou skupinu navíc v řetězci děkanové kyseliny (Obrázek 11).
Velký daptomycinový preparát může být čištěn na Poros PÍ50 podle popisu v Příkladech 2 nebo 7 až 8 nebo může být čištěn na Poros D50 podle výše uvedeného popisu v Příkladech 3 až 5. Po čištění na Poros PÍ50 podle popisu v Příkladu 2 vykazuje chromatogram (Obrázek 13), že čistota daptomycinu je vyšší než 99,0%, přičemž koncentrace β-isomeru a anhydro-daptomycinu je pod detekčním limitem (méně než 0,05% celkově). Je zde pouze jedna nečistota, která je přítomna v množství vyšším než 0,1 % ovšem zároveň méně než 0,5 %.
Příklad 11
Fermentace kultury S. roseosporus NRRL kmen 15998 byla prováděna za podmínek kontrolovaného přísunu děkanové kyseliny při koncentracích optimalizovaných pro produkci antibiotika, přičemž byl minimalizován vznik kontaminantů. Zbytková koncentrace kyseliny děkanové byla měřena pomocí plynové chromatografie a cílová zbytková koncentrace byla 10 ppm děkanové kyseliny od nastartování indukce až do sběru (přibližně 30 h). Centrifugace kultury a následná analýza vyčeřené kapaliny bylo použito pro měření produkce daptomycinu pomocí HPLC. Titr sebrané kapaliny byl typicky mezi 1,0 a 3,0 g na litr fermentační kapaliny.
Fermentace byla zpracována buď mikrofiltrací s využitím Pall-Sep nebo pomocí průmyslové centrifugy a hlubokého filtru. Vyčeřený roztok byl aplikován na anion-výměnnou pryskyřici, Mitsubishi FP-DA 13, promyt s 30 mM NaCl při pH 6,5 a eluován se 300 mM NaCl při 6,0 až 6,5. Alternativně, FP-DA 13 kolona byla promyta se 60 mM NaCl při pH 6,5 a eluována s 500 mM NaCl při pH 6,0 až 6,5. pH bylo adjustováno na 3,0 až 4,8 a teplota byla nastavena na 2 až 15 °C. Za těchto okolností tvoří daptomycin micely. Micelámí daptomycinový roztok byl čištěn promýváním micelámího preparátu zatímco byl preparát zachycen na ultrafiltru s využitím 10 000 NMW filtru (AG Technology Corp. UF duté vlákno nebo ekvivalent) v libovolné konfiguraci. Daptomycinové micely byly zachyceny na filtru, ovšem velké množství nečistot bylo eliminováno, protože prošlo přes 10 000 NMW filtr. Ultrafiltrace daptomycinových micel zvýšila čistotu daptomycinu ze 40 % na přibližně 80 % nebo vyšší.
Eluát byl aplikován na HIC pryskyřici, HP-20ss, promyt 30% acetonitrilem a eluován 35% acetonitrilem při pH 4,0 až 5,0. Alternativně, HIC pryskyřice byla promyta 20 až 30% isopropylalkoholem a eluována 30 až 40% isopropylalkoholem při pH 3,5 až 6,5. Eluát byl aplikován na FP-DA 13 pryskyřici a byl promyt jako předtím. Konečný anion-výměnný krok redukoval rozpouštědlo o jednu třetinu nebo více. Byla provedena reverzní osmotická diafiltrace a zkoncentrování při pH 1,5 až 2,5 s využitím 0,2μηι filtru a daptomycinový preparát byl zmražen. Finální reverzní osmotická diafiltrace byla prováděna s vodou pro injekce (WFI) kvůli
-32CZ 307877 B6 vymytí daptomycinu a kvůli nastavení jeho koncentrace před plněním ve sterilních podmínkách. Vialky nebo velké objemy daptomycinu byly poté lyofilizovány.
Příklad 12
Lyofilizovaný daptomycin čištěný podle popisu v libovolných výše uvedených příkladech, jako třeba v Příkladu 11, byl rekonstituován ve lyziologickém solném roztoku (přibližně 140 mM NaCl) při pH 4,0 až 5,0. Za těchto okolností je daptomycin přítomný ve formě micel a může být použit pro injekce nebo pro intravenózní, parenterální, orální nebo místní podávání.
Příklad 13
Daptomycin byl vyroben fermentací a fermentační kapalina byla vyčeřena mikrofiltrací podle popisu v Příkladu 11. Vyčeřená kapalina byla aplikována na anion-výměnnou pryskyřici, Mitsubishi FP-DA 13, promyta s 30 mM NaCl při pH 6,5 a eluována s 300 mM NaCl při pH 6,0 až 6,5 za vzniku daptomycinového preparátu o čistotě přibližně 40 %. Eluát byl adjustován na pH 3,5 pomocí ředěné kyseliny fosforečné, takže prakticky všechen daptomycin tvořil micely. Micelámí přípravek byl nanesen na 10 000 NMW ultrafiltrační membránu. Daptomycinový preparát byl promyt se 30 mM acetátu sodného při pH 3,5 a teplotě do 15 °C. Redukce objemu a promytí snížilo koncentraci kontaminantů, což vedlo k čistotě daptomycinového preparátu o čistotě 85 %. Daptomycinový preparát může být dále čištěn s využitím libovolné výše popsané metody.
Příklad 14
Daptomycin byl vyroben fermentací a fermentační kapalina byla vyčeřena mikrofiltrací a firakcionací na FP-DA 13 podle popisu v Příkladu 11. Eluát byl adjustován na pH 3,5 pomocí ředěné kyseliny fosforečné tak, že prakticky všechen daptomycin tvořil micely. Micelámí přípravek byl nanesen na 10 000 NMW ultrafiltrační membránu. Daptomycinový preparát byl promyt se 30 mM acetátu sodného při pH 3,5 a teplotě do 15 °C. Redukce objemu a promytí snížilo koncentraci kontaminantů, což vedlo k čistotě daptomycinového preparátu o čistotě 80 až 90 %. Daptomycinový preparát může být dále čištěn s využitím libovolné výše popsané metody.
Příklad 15
Daptomycin byl vyroben fermentací a fermentační kapalina byla vyčeřena mikrofiltrací podle popisu v Příkladu 11. Preparát byl čištěn pomocí chromatografie s hydrofobními interakcemi podle popisu v patentu US 4874843, který je zde zahrnutý jako reference. Čistota daptomycinu byla 93 % s viditelnými nečistotami na HPLC chromatogramu a měřitelným pyrogenem. Produkt byl naředěn s vodou a jeho pH bylo adjustováno na pH 6,5 s NaOH nebo jeho ekvivalentem. Daptomycinový přípravek byl zfiltrován přes 10 000 NMW ultrafiltrační membránu. Za těchto okolností je daptomycin monomemí a prochází přes ultrafiltrační membránu. Vzniklý produkt vykazuje 93% čistotu, ovšem několik nečistot, které byly přítomny v množstvích 0,1 až 0,2 % byly odstraněny ultrafiltrační membránou. Kromě toho byl redukován obsah pyrogenu na nedetekovatelnou úroveň.
-33 CZ 307877 B6
Příklad 16
Daptomycinový přípravek o čistotě 93 % byl připraven podle popisu v Příkladu 15. Daptomycinový přípravek byl převeden do micelámího stavu snížením pH na 4,7 pomocí HC1 nebo ekvivalentu a ochlazením daptomycinového přípravku na 2 až 5 °C. Produkt byl zkoncentrován ze 400 1 na tři litry a na finální koncentraci přibližně 100 mg/ml pomoci filtrace na 10 000 NMW ultrafiltrační membráně. Za těchto okolností byl daptomycin zadržen membránou. To vedlo k velkému zvýšení daptomycinové koncentrace. Čistota byla přibližně 93 %.
Příklad 17
Daptomycinový preparát byl připraven podle popisu v Příkladu 16. Vialky byly naplněny s přibližně 250 mg daptomycinu a lyofilizovány. Daptomycin byl rekonstituován v 50 ml sterilní 150 mM solance při pH 4,0 až 5,0 pro podávání lidem nebo zvířecím pacientům. Dávka daptomycinu, která má být podávána, bude záviset na druhu infekce, věku a hmotnosti pacienta a druhu zvířete. Při pH 4,0 až 5,0 bude daptomycin ve 150 mM solance přítomen v micelámím stavu, který je rozpustný a vhodný pro intravenózní, intramuskulámí nebo parenterální podávání. Formulace bude minimalizovat lokální podráždění vzhledem k lipopeptidické povaze daptomycinu.
Příklad 18
Daptomycinové micely byly vyrobeny s využitím daptomycinu při koncentraci 1,0 mg/ml ve vodě při pH 4,0 při teplotě 25 °C. Velikost daptomycinových micel byla změřena s využitím Zetasizer™ (Malvem Instruments, Model 3000 HS). Rychlost počítání 36,3, typem cely byla kapilární cela, detekční úhel (deg) byl 90° a vlnová délka (nm) byla 633. Výsledky naznačují, že průměr micel byl 54 Á, což je asi dvakrát větší než je průměr monomemí daptomycinové molekuly. Viz Obrázek 18.
Všechny publikace a patentové přihlášky citované v tomto vynálezu jsou zde zahrnuty jako reference. Ačkoliv předložený vynález byl v některých detailech popsán pomocí ilustrací a příkladů pro lepší pochopení a srozumitelnost, odborníkovi v oboru bude zřejmé, že ve světle tohoto vynálezu mohou být provedeny určité změny a modifikace aniž bychom se vzdálili duchu a rozsahu připojených nároků.
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (2)

1. Způsob čištění daptomycinu, vyznačující se tím, že zahrnuje
a) vystavení daptomycinu podmínkám, při nichž se změnou pH tvoří micelámí roztok daptomycinu;
b) separaci micel daptomycinu v micelámím roztoku daptomycinu od nízkomolekulámích kontaminantů velikostně selektivní technikou;
c) vystavení daptomycinu podmínkám, při nichž se změnou pH tvoří monomemí roztok daptomycinu; a
d) separaci monomemích molekul daptomycinu v monomemím roztoku daptomycinu od molekul s vysokou molekulární hmotností nebo agregátů velikostně selektivní technikou.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že velikostně selektivní technikou je ultrafiltrace nebo velikostně vylučovací chromatografie.
CZ2012-332A 2000-01-20 2001-01-18 Způsob čištění daptomycinu CZ307877B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17717000P 2000-01-20 2000-01-20
US09/735,191 US6696412B1 (en) 2000-01-20 2000-11-28 High purity lipopeptides, Lipopeptide micelles and processes for preparing same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ307877B6 true CZ307877B6 (cs) 2019-07-17

Family

ID=26873002

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2012-332A CZ307877B6 (cs) 2000-01-20 2001-01-18 Způsob čištění daptomycinu
CZ2002-2830A CZ305004B6 (cs) 2000-01-20 2001-01-18 Způsob čištění daptomycinu

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2002-2830A CZ305004B6 (cs) 2000-01-20 2001-01-18 Způsob čištění daptomycinu

Country Status (25)

Country Link
US (7) US6696412B1 (cs)
EP (6) EP2940034B1 (cs)
JP (2) JP5303087B2 (cs)
KR (4) KR101174140B1 (cs)
CN (5) CN102671181A (cs)
AT (2) ATE449785T1 (cs)
AU (1) AU784937B2 (cs)
BR (1) BRPI0107731B8 (cs)
CA (2) CA2743326C (cs)
CY (2) CY1109846T1 (cs)
CZ (2) CZ307877B6 (cs)
DE (2) DE60115383T2 (cs)
DK (2) DK2264047T3 (cs)
ES (4) ES2547281T3 (cs)
HK (1) HK1054240A1 (cs)
HU (1) HUP0203969A2 (cs)
IL (3) IL150733A0 (cs)
IS (1) IS6470A (cs)
MX (1) MXPA02007132A (cs)
NO (1) NO20023476L (cs)
NZ (1) NZ520324A (cs)
PL (3) PL236352B1 (cs)
PT (2) PT2264047E (cs)
RU (1) RU2311460C9 (cs)
WO (1) WO2001053330A2 (cs)

Families Citing this family (84)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6696412B1 (en) 2000-01-20 2004-02-24 Cubist Pharmaceuticals, Inc. High purity lipopeptides, Lipopeptide micelles and processes for preparing same
CA2301336A1 (en) * 2000-03-17 2001-09-17 Michael T. Kelly Topical treatment of rosacea
IL156394A0 (en) 2000-12-18 2004-01-04 Cubist Pharm Inc Methods for preparing purified lipopeptides
US20060014674A1 (en) * 2000-12-18 2006-01-19 Dennis Keith Methods for preparing purified lipopeptides
RU2348647C2 (ru) 2001-08-06 2009-03-10 Кьюбист Фармасьютикалз, Инк Новые депсипептиды и способы их получения
EP1932853A1 (en) 2001-08-06 2008-06-18 Cubist Pharmaceutical Inc. Novel depsipeptides and process for preparing same
WO2003097573A1 (en) * 2002-05-16 2003-11-27 Sepracor, Inc. Amines that inhibit a mammalian anandamide transporter, and methods of use thereof
US7317001B2 (en) 2002-06-06 2008-01-08 Oscient Pharmaceuticals Corporation Use of ramoplanin to treat diseases associated with the use of antibiotics
US20040106590A1 (en) * 2002-08-29 2004-06-03 Barry Eisenstein Methods and reagents for treating infections of clostridium difficile and diseases associated therewith
US7145762B2 (en) * 2003-02-11 2006-12-05 Taser International, Inc. Systems and methods for immobilizing using plural energy stores
KR100554481B1 (ko) * 2004-06-30 2006-03-03 씨제이 주식회사 반코마이신 염산염의 정제방법
EP1860943A4 (en) * 2005-03-10 2008-06-18 Smithkline Beecham Corp NOVEL PROCEDURE
EP1798237A1 (en) * 2005-12-16 2007-06-20 Pharmatex Italia Srl Process for the purification of macrolide antibiotics
EP2018864A1 (en) 2007-07-23 2009-01-28 Biomet Deutschland GmbH Pharmaceutical composition, substrate comprising a pharmaceutical composition, and use of a pharmaceutical composition
RU2356535C2 (ru) * 2007-07-23 2009-05-27 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Суппозитории комбинированного действия для лечения инфекционных гинекологических заболеваний (варианты)
EA017824B1 (ru) 2007-11-21 2013-03-29 Эйкеоджен, Инк. Антибактериальные аналоги аминогликозида
EP2297184B1 (en) * 2008-05-21 2013-09-04 Daedalus Innovations Llc Solubilization of proteins in reverse micelles by extraction from a solid support
WO2009144739A1 (en) * 2008-05-26 2009-12-03 Biocon Limited Amorphous daptomycin and a method of purification thereof
DE102008046610A1 (de) * 2008-09-09 2010-03-11 Biomet Deutschland Gmbh Verwendung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur lokalen Infektionstherapie sowie Medizinprodukt
DK2398817T4 (da) * 2009-02-19 2021-08-23 Xellia Pharmaceuticals Aps Fremgangsmåde til rensning af lipopeptider
CN101830970B (zh) * 2009-03-12 2012-06-27 成都雅途生物技术有限公司 一种高纯度达托霉素(Daptomycin)的纯化制备方法
CN101899094B (zh) * 2009-06-01 2012-11-21 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 一种高纯达托霉素的制备方法
WO2011002258A2 (ko) * 2009-07-02 2011-01-06 한양대학교 산학협력단 아르기닌 기제 양친성 펩티드 마이셀
WO2011035108A1 (en) * 2009-09-17 2011-03-24 Eagle Pharmaceuticals, Inc. Formulations of daptomycin
RU2607526C2 (ru) 2009-11-23 2017-01-10 Кьюбист Фармасьютикалз ЭлЭлСи Липопептидные композиции и родственные способы
WO2011062676A1 (en) * 2009-11-23 2011-05-26 Eagle Pharmaceuticals, Inc. Formulations of daptomycin
CN101777094B (zh) * 2010-02-01 2011-11-16 天津大学 达托霉素生产菌玫瑰孢链霉菌的代谢网络分析方法
KR101151878B1 (ko) * 2010-06-08 2012-05-31 미원상사주식회사 지방산 트리펩타이드염 및 이를 함유하는 항균 조성물
CN102276696B (zh) * 2010-06-09 2014-11-05 上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司 达托霉素的纯化方法
RU2448725C2 (ru) * 2010-07-13 2012-04-27 Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации Способ повышения бактерицидной активности
CN101957348B (zh) * 2010-09-17 2012-07-25 中华人民共和国珠海出入境检验检疫局 同时检测食品中氟喹诺酮类药物和氯霉素类药物的方法
KR200457763Y1 (ko) * 2010-09-30 2012-01-02 상 택 임 형광등 낙하 방지 기능을 갖는 안전소켓
US8709310B2 (en) 2011-01-05 2014-04-29 Hospira, Inc. Spray drying vancomycin
CN102206694B (zh) * 2011-04-06 2013-10-16 山东新时代药业有限公司 一种含有癸酸的缓释组合物
WO2013012101A1 (ko) * 2011-07-15 2013-01-24 미원상사주식회사 지방산 트리펩타이드염 및 이를 함유하는 항균 조성물
CN103159829B (zh) * 2011-12-08 2014-11-05 北大方正集团有限公司 达托霉素的提取方法
CN102492024A (zh) * 2011-12-09 2012-06-13 厦门大学 从发酵液中提取达托霉素的方法
CN102675426B (zh) * 2012-04-26 2013-12-11 杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司 一种达托霉素的提取纯化方法
CA2923595C (en) * 2012-05-18 2020-07-14 Tufts Medical Center, Inc. Polypeptide and lipophilic moiety conjugate compositions, formulations, and uses related thereto
US8809314B1 (en) 2012-09-07 2014-08-19 Cubist Pharmacueticals, Inc. Cephalosporin compound
US9655946B2 (en) 2012-09-11 2017-05-23 Hospira Australia Pty Ltd. Daptomycin formulations and uses thereof
CN103724400B (zh) * 2012-10-10 2015-12-16 北大方正集团有限公司 一种分离纯化脱水达托霉素的方法
CN103848894A (zh) * 2012-11-30 2014-06-11 杨子剑 含有达托霉素结构的新化合物以及制备方法和用途
CN104043104B (zh) 2013-03-15 2018-07-10 浙江创新生物有限公司 含盐酸万古霉素的喷雾干粉及其工业化制备方法
CN103224547B (zh) * 2013-04-28 2015-05-20 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 一种达托霉素的分离纯化方法
CN104511011A (zh) * 2013-09-29 2015-04-15 山东新时代药业有限公司 一种达托霉素无菌粉末及其制备方法
CN104650189A (zh) * 2013-11-19 2015-05-27 北大方正集团有限公司 一种异构达托霉素的制备方法
KR101601089B1 (ko) * 2014-04-22 2016-03-09 주식회사 종근당바이오 신규한 답토마이신 생산 균주 및 이를 이용한 답토마이신의 제조방법
EP3169345B1 (en) 2014-07-17 2025-01-29 Melinta Therapeutics, LLC High purity oritavancin and method of producing same
CN104387444B (zh) * 2014-11-13 2017-12-08 北大医药重庆大新药业股份有限公司 一种达托霉素杂质rs‑2高纯度样品的制备方法
KR101716879B1 (ko) * 2014-11-19 2017-03-17 주식회사 종근당바이오 데카노일 글리세라이드를 이용한 답토마이신의 생산방법
AR100034A1 (es) * 2015-01-30 2016-09-07 Consejo Nac De Investig Científicas Y Técnicas (Conicet) Una composición farmacéutica soluble en agua que comprende, al menos, una sustancia terapéuticamente activa y, al menos, una sustancia con capacidad para formar micelas
CN105001305A (zh) * 2015-04-29 2015-10-28 利穗科技(苏州)有限公司 利用层析技术提取高纯度达托霉素的方法
CN106866789A (zh) * 2015-12-11 2017-06-20 北大方正集团有限公司 一种分离纯化达托霉素rs-8杂质的方法
CN106866791A (zh) * 2015-12-11 2017-06-20 北大方正集团有限公司 一种高纯度达托霉素内酯水解物的制备方法
CN106866790A (zh) * 2015-12-11 2017-06-20 北大方正集团有限公司 达托霉素RS-5/6、RS-7和RS-7a/7b杂质的制备方法
US11667674B2 (en) 2016-04-08 2023-06-06 Versitech Limited Antibacterial cyclic lipopeptides
US10647746B2 (en) 2016-04-08 2020-05-12 Versitech Limited Antibacterial cyclic lipopeptides
IT201600127655A1 (it) 2016-12-16 2018-06-16 Gnosis Spa Processo per la purificazione di antibiotici lipopolipeptidici
JP7138702B2 (ja) 2017-09-22 2022-09-16 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー カテーテルロック溶液としての使用のための４％クエン酸三ナトリウム溶液
CN109589306A (zh) * 2017-09-30 2019-04-09 上海交通大学医学院附属第九人民医院 脂质体在制备用于清除蛋白结合毒素的药物制剂中的用途
CN107817307B (zh) * 2017-11-01 2020-12-25 重庆华邦制药有限公司 Hplc法分离测定帕司烟肼及其相关杂质的方法
CN109828037B (zh) * 2017-11-23 2021-11-23 中国科学院大连化学物理研究所 一种高通量富集和鉴定内源性n/o-连接糖肽的方法
EP3731804A4 (en) 2017-12-28 2022-01-05 Locus IP Company, LLC Oral health composition comprising purified biosurfactants and/or their derivatives
PL237299B1 (pl) * 2018-02-09 2021-04-06 Boruta Zachem Biochemia Spolka Z Ograniczona Odpowiedzialnoscia Sposób oczyszczania i/lub rozdzielania surfaktyny z wykorzystaniem Chromatografii Przeciwprądowej
CN108333272A (zh) * 2018-03-02 2018-07-27 重庆华邦胜凯制药有限公司 Lc-msms法分离测定对氨基水杨酸及其相关杂质的方法
CN110339342A (zh) * 2018-04-03 2019-10-18 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种达托霉素的盐或含盐的组合物及其制备方法
CN110577581A (zh) * 2018-06-07 2019-12-17 美国蓝博药业公司 一种新型的抑菌脂肽化合物、制备方法及其应用
US11643438B2 (en) 2018-07-20 2023-05-09 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Antimicrobial peptides and methods of use
US12239685B2 (en) * 2018-12-21 2025-03-04 Arecor Limited Composition
CN111366644B (zh) * 2018-12-25 2022-07-26 江苏先声药业有限公司 一种比阿培南侧链有关物质的hplc检测方法
CN109444294B (zh) * 2018-12-27 2021-06-22 苏州莱奥生物技术有限公司 一种分离利奈唑胺和其手性异构体的高效液相色谱方法
CN109917047A (zh) * 2019-04-15 2019-06-21 陕西科技大学 超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法同时筛查鱼中多类别药物残留的方法
CN110146620B (zh) * 2019-06-11 2022-04-19 福建医科大学孟超肝胆医院(福州市传染病医院) 一种uplc-ms/ms法同时检测血浆中五种抗结核药物的方法
CN113004373B (zh) * 2019-12-19 2024-08-13 鲁南制药集团股份有限公司 一种达托霉素的纯化方法
EP4117625A1 (en) 2020-03-12 2023-01-18 Baxter International Inc. Daptomycin formulations containing a combination of sorbitol and mannitol
CN113929747A (zh) * 2020-06-29 2022-01-14 鲁南制药集团股份有限公司 一种制备达托霉素杂质RS-7a的方法
CN113929743A (zh) * 2020-06-29 2022-01-14 鲁南制药集团股份有限公司 一种制备达托霉素杂质rs-1和杂质rs-3的方法
CN111892647B (zh) * 2020-08-18 2022-04-29 丽珠集团福州福兴医药有限公司 一种提高达托霉素发酵产量的补料方法
CN112089823B (zh) * 2020-09-25 2024-02-06 珠海中科先进技术研究院有限公司 一种短梗霉素a和制霉菌素组合物及其复合软膏、凝胶剂以及喷剂
CN112684043A (zh) * 2020-12-16 2021-04-20 南京健友生化制药股份有限公司 一种达托霉素有关物质的检测方法
CN116615219A (zh) * 2020-12-22 2023-08-18 中外制药株式会社 包括利用混合溶剂的冷冻干燥工序的药品的制造方法
CN112898383A (zh) * 2021-01-29 2021-06-04 深圳海创生物科技有限公司 一种寡肽、活性肽组合物及其在制备具有抗炎作用的产品中的应用
CN113866330B (zh) * 2021-10-26 2023-08-22 丽珠集团福州福兴医药有限公司 一种脱水达托霉素的分离纯化方法和应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4331594A (en) * 1978-10-16 1982-05-25 Eli Lilly And Company A-21978 Antibiotics and process for their production
EP0095295A1 (en) * 1982-05-21 1983-11-30 Eli Lilly And Company Cyclic peptide derivatives
EP0294990A2 (en) * 1987-06-10 1988-12-14 Eli Lilly And Company Chromatographic purification process
EP0337731A2 (en) * 1988-04-11 1989-10-18 Eli Lilly And Company Peptide antibiotics
EP0629636A1 (de) * 1993-06-08 1994-12-21 Hoechst Aktiengesellschaft Lipopeptide aus Actinoplanes sp. mit pharmakologischer Wirkung, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung derselben
US5912226A (en) * 1987-06-10 1999-06-15 Eli Lilly And Company Anhydro- and isomer-A-21978C cyclic peptides

Family Cites Families (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US21978A (en) 1858-11-02 Trap for animals
USRE21978E (en) 1941-12-16 Vacuum cleaner
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
USRE32455E (en) 1978-10-16 1987-07-07 Eli Lilly And Company A-21978 antibiotics and process for their production
USRE32333E (en) 1978-10-16 1987-01-20 Eli Lilly And Company A-21978 Antibiotics and process for their production
EP0014815A3 (de) 1978-12-20 1980-10-29 Ciba-Geigy Ag Peptidderivate, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte sowie pharmazeutische Präparate mit einer dieser Verbindungen
EP0087953B1 (en) 1982-02-27 1988-04-27 Beecham Group Plc Antibacterial 1-normon-2-yl-heterocyclic compounds
US4482487A (en) 1982-05-21 1984-11-13 Eli Lilly And Company A-21978C cyclic peptides
USRE32310E (en) 1982-05-21 1986-12-16 Eli Lilly And Company Derivatives of A-21978C cyclic peptides
US4537717A (en) 1982-05-21 1985-08-27 Eli Lilly And Company Derivatives of A-21978C cyclic peptides
US4524135A (en) 1982-05-21 1985-06-18 Eli Lilly And Company A-21978C cyclic peptides
USRE32311E (en) 1982-05-21 1986-12-16 Eli Lilly And Company Derivatives of A-21978C cyclic peptides
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
SU1452484A3 (ru) 1984-10-09 1989-01-15 Эли Лилли Энд Компани (Фирма) Способ получени производных антибиотиков А-21978С, штамм стрептомицета SтRертомYсеS RoSeoSpoRUS, используемый дл получени антибиотических веществ А-21978С
US4885243A (en) 1984-10-09 1989-12-05 Eli Lilly And Company Process for producing A-21978C derivatives
US4800157A (en) 1985-09-09 1989-01-24 Eli Lilly And Company Process for producing the A-21978C antibiotics
US4865729A (en) 1985-11-04 1989-09-12 Sepragen Corporation Radial thin layer chromatography
US4840730A (en) 1986-07-25 1989-06-20 Sepragen Corporation Chromatography system using horizontal flow columns
US4708782A (en) 1986-09-15 1987-11-24 Sepragen Corporation Chromatography column-electrophoresis system
CA1319886C (en) 1987-02-03 1993-07-06 Alberto Ferro Mixed micelle solutions
US4874843A (en) 1987-12-03 1989-10-17 Eli Lilly And Company Chromatographic purification process
US5271935A (en) 1988-02-05 1993-12-21 Hoechst Aktiengesellschaft Antibiotic, cammunocin, a process for the preparation thereof, and the use thereof as a pharmaceutical
IL93618A0 (en) 1989-03-06 1990-12-23 Lilly Co Eli Improved diluent formulation for daptomycin
US5202309A (en) 1989-06-30 1993-04-13 Merck & Co., Inc. Antibiotic cyclopeptide fermentation product
DK0438813T3 (da) 1990-01-26 1998-07-27 Hoechst Ag Nyt antibiotikum, deoxymulundocandin, en fremgangsmåde til dets fremstilling samt dets anvendelse som lægemiddel
ES2089133T3 (es) 1990-06-07 1996-10-01 Lilly Co Eli Desacilasa de lipopeptidos.
JPH04167172A (ja) 1990-10-31 1992-06-15 Nec Corp ベクトルプロセッサ
JPH04224197A (ja) 1990-12-26 1992-08-13 Fujitsu Ltd 生体高分子結晶化方法および装置
US5336756A (en) 1991-05-01 1994-08-09 Merck & Co., Inc. Process for crystalline cyclic lipopeptides
TW213468B (cs) 1991-06-29 1993-09-21 Hoechst Ag
DK0640095T3 (da) 1992-04-20 1999-04-12 Abbott Lab Fremgangsmåde til fremstilling af vancomycin
AU7497594A (en) 1993-08-13 1995-03-14 Smithkline Beecham Plc Derivatives of monic acids a and c having antibacterial, antimycoplasmatical, antifungal and herbicidal activity
US5756680A (en) 1994-01-05 1998-05-26 Sepragen Corporation Sequential separation of whey proteins and formulations thereof
DE4411025A1 (de) 1994-03-30 1995-10-05 Hoechst Ag Lipopeptid-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
IT1275427B (it) * 1995-05-16 1997-08-07 Bracco Spa Processo per la depirogenazione di soluzioni farmaceutiche iniettabili
US5955509A (en) 1996-05-01 1999-09-21 Board Of Regents, The University Of Texas System pH dependent polymer micelles
FR2755857B1 (fr) 1996-11-19 1998-12-24 Rhone Poulenc Rorer Sa Compositions pharmaceutiques stabilisees, a base de quinupristine et de dalfopristine et leur preparation
FR2771640B1 (fr) 1997-12-03 2000-02-11 Inst Nat Sante Rech Med Micelles mixtes de lipopeptides pour l'induction d'une reponse immunitaire et leurs utilisations a des fins therapeutiques
AU5528198A (en) 1997-12-03 1999-06-16 Immune Response Corporation, The Vaccination and methods against multiple sclerosis using specific tcr vbeta peptides
FR2772272B1 (fr) 1997-12-16 2000-01-14 Rhone Poulenc Rorer Sa Compositions pharmaceutiques a base de dalfopristine et de quinupristine et leur preparation
WO1999055310A1 (en) 1998-04-27 1999-11-04 Altus Biologics Inc. Stabilized protein crystals, formulations containing them and methods of making them
FR2774687B1 (fr) * 1998-02-06 2002-03-22 Inst Nat Sante Rech Med Lipopeptides contenant un fragment de l'interferon gamma, et leur utilisation dans des compositions pharmaceutiques
DE19807972A1 (de) 1998-02-25 1999-08-26 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Lipopeptidantibiotika-Calciumsalze, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung
EP1100947A4 (en) 1998-08-07 2001-09-05 Merck & Co Inc METHOD FOR PRODUCING AN ANTIBIOTIC ACTIVE SUBSTANCE
PL203689B1 (pl) 1998-09-25 2009-11-30 Cubist Pharmaceuticals Zastosowanie daptomycyny
WO2001044274A1 (en) 1999-12-15 2001-06-21 Cubist Pharmaceuticals, Inc. Lipopeptides as antibacterial agents
MXPA02006028A (es) 1999-12-15 2004-08-23 Cubist Pharm Inc Lipopeptidos novedosos como agentes antibacterianos.
CN1425025A (zh) 1999-12-15 2003-06-18 卡比斯特制药公司 作为抗菌剂的新颖的脂肽
US6696412B1 (en) 2000-01-20 2004-02-24 Cubist Pharmaceuticals, Inc. High purity lipopeptides, Lipopeptide micelles and processes for preparing same
US20060014674A1 (en) 2000-12-18 2006-01-19 Dennis Keith Methods for preparing purified lipopeptides
WO2002059145A1 (en) 2000-12-18 2002-08-01 Cubist Pharmaceuticals, Inc. Methods for preparing purified lipopeptides
IL156394A0 (en) 2000-12-18 2004-01-04 Cubist Pharm Inc Methods for preparing purified lipopeptides
KR20040032891A (ko) 2001-08-06 2004-04-17 큐비스트 파마슈티컬즈 인코포레이티드 답토마이신 생합성 유전자 클러스터에 관련된 조성물 및방법
US20030144362A1 (en) 2002-01-28 2003-07-31 Utterberg David S. High viscosity antibacterials for cannulae
US8912174B2 (en) 2003-04-16 2014-12-16 Mylan Pharmaceuticals Inc. Formulations and methods for treating rhinosinusitis
US20050074485A1 (en) 2003-05-14 2005-04-07 Lipton James M. Anti-inflammatory/anti-microbial peptides for use in dialysis
JP2008546429A (ja) 2005-05-31 2008-12-25 キュービスト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド バイオフィルム処理およびカテーテル救出のためのダプトマイシン
US9393093B2 (en) 2008-02-18 2016-07-19 Covidien Lp Clip for implant deployment device
WO2011035108A1 (en) 2009-09-17 2011-03-24 Eagle Pharmaceuticals, Inc. Formulations of daptomycin
RU2607526C2 (ru) 2009-11-23 2017-01-10 Кьюбист Фармасьютикалз ЭлЭлСи Липопептидные композиции и родственные способы
US9406568B2 (en) 2014-11-21 2016-08-02 International Business Machines Corporation Semiconductor structure containing low-resistance source and drain contacts
KR20220135825A (ko) 2021-03-31 2022-10-07 에스케이하이닉스 주식회사 반도체 장치 제조 방법

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4331594A (en) * 1978-10-16 1982-05-25 Eli Lilly And Company A-21978 Antibiotics and process for their production
EP0095295A1 (en) * 1982-05-21 1983-11-30 Eli Lilly And Company Cyclic peptide derivatives
EP0294990A2 (en) * 1987-06-10 1988-12-14 Eli Lilly And Company Chromatographic purification process
US5912226A (en) * 1987-06-10 1999-06-15 Eli Lilly And Company Anhydro- and isomer-A-21978C cyclic peptides
EP0337731A2 (en) * 1988-04-11 1989-10-18 Eli Lilly And Company Peptide antibiotics
EP0629636A1 (de) * 1993-06-08 1994-12-21 Hoechst Aktiengesellschaft Lipopeptide aus Actinoplanes sp. mit pharmakologischer Wirkung, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung derselben

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Debono M. et al.:"A21978C, a complex of new acidic peptide antibiotics: isolation, chemistry and mass spectral structure elucidation", The Journal of Antibiotics, 1987, 40(6), 761-767, ISSN: 0021-8820 *
Lin S.-C. et al.:"General approach for the development of high-performance liquid chromatography methods for biosurfactant analysis and purification" Journal of Chromatography A, 1998, 825, 149-159, ISSN: 0021-9673 *
Lin S.-C. et al.:"Recovery and purification of the lipopeptide biosurfactant of Bacillus subtilis by ultrafiltration", Biotechnology Techniques, 1997, 11(6), 413-416, ISSN: 0951-208X *

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0107731B1 (pt) 2015-08-11
JP2003520807A (ja) 2003-07-08
CA2743326C (en) 2015-04-07
ES2799706T3 (es) 2020-12-21
KR20020083151A (ko) 2002-11-01
JP2013173785A (ja) 2013-09-05
BR0107731A (pt) 2002-10-01
NO20023476L (no) 2002-09-20
CN107082798B (zh) 2021-10-15
IL226636A (en) 2017-03-30
HK1054240A1 (zh) 2003-11-21
EP1586580A2 (en) 2005-10-19
DE60140631D1 (de) 2010-01-07
EP2159229A1 (en) 2010-03-03
JP5303087B2 (ja) 2013-10-02
NO20023476D0 (no) 2002-07-19
WO2001053330A2 (en) 2001-07-26
US8853357B2 (en) 2014-10-07
CN101240013B (zh) 2012-05-23
CA2743326A1 (en) 2001-07-26
US9358267B2 (en) 2016-06-07
CZ305004B6 (cs) 2015-03-25
CA2398726C (en) 2012-01-10
DE60115383D1 (de) 2006-01-05
EP1586580A3 (en) 2005-11-09
CY1109846T1 (el) 2014-09-10
KR101174140B1 (ko) 2012-08-14
RU2311460C2 (ru) 2007-11-27
US20120149062A1 (en) 2012-06-14
AU784937B2 (en) 2006-08-03
US20130280760A1 (en) 2013-10-24
WO2001053330A9 (en) 2002-10-17
KR20120065440A (ko) 2012-06-20
ATE311405T1 (de) 2005-12-15
US20110207658A1 (en) 2011-08-25
PT1586580E (pt) 2010-02-17
US20050009747A1 (en) 2005-01-13
HK1120528A1 (en) 2009-04-03
EP1586580B1 (en) 2009-11-25
HK1217205A1 (en) 2016-12-30
HUP0203969A2 (hu) 2003-03-28
IS6470A (is) 2002-07-12
ES2547281T3 (es) 2015-10-02
EP2940034A1 (en) 2015-11-04
ES2799702T3 (es) 2020-12-21
CA2398726A1 (en) 2001-07-26
DK1586580T3 (da) 2010-03-29
US8129342B2 (en) 2012-03-06
CZ20022830A3 (cs) 2002-11-13
US20140371135A1 (en) 2014-12-18
PL214000B1 (pl) 2013-06-28
ATE449785T1 (de) 2009-12-15
US8604164B2 (en) 2013-12-10
CY1116827T1 (el) 2018-03-07
DK2264047T3 (en) 2015-07-13
IL226636A0 (en) 2013-06-27
US6696412B1 (en) 2004-02-24
JP5631439B2 (ja) 2014-11-26
CN101240013A (zh) 2008-08-13
BRPI0107731B8 (pt) 2021-05-25
CN102229650A (zh) 2011-11-02
MXPA02007132A (es) 2004-10-14
PL226956B1 (pl) 2017-10-31
NZ520324A (en) 2004-06-25
RU2002122114A (ru) 2004-02-27
IL150733A0 (en) 2003-02-12
PL236352B1 (pl) 2021-01-11
US20070191280A1 (en) 2007-08-16
EP2940036B1 (en) 2020-05-06
DE60115383T2 (de) 2006-08-17
RU2311460C9 (ru) 2009-06-10
EP2264047A1 (en) 2010-12-22
EP2940036A1 (en) 2015-11-04
HK1085746A1 (en) 2006-09-01
CN102671181A (zh) 2012-09-19
HK1217204A1 (en) 2016-12-30
HK1151546A1 (en) 2012-02-03
WO2001053330A3 (en) 2002-04-18
PL416764A1 (pl) 2016-05-23
KR20110126737A (ko) 2011-11-23
ES2336336T3 (es) 2010-04-12
PL356898A1 (en) 2004-07-12
PL400575A1 (pl) 2013-01-07
EP1252179A2 (en) 2002-10-30
KR101291494B1 (ko) 2013-10-17
EP1252179B1 (en) 2005-11-30
US8058238B2 (en) 2011-11-15
KR20070044079A (ko) 2007-04-26
IL219889A (en) 2017-01-31
EP2264047B1 (en) 2015-06-24
EP2940034B1 (en) 2020-05-06
IL219889A0 (en) 2012-06-28
CN107082798A (zh) 2017-08-22
AU3097801A (en) 2001-07-31
CN1404487A (zh) 2003-03-19
PT2264047E (pt) 2015-09-22
CN102229650B (zh) 2014-03-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9358267B2 (en) High purity lipopeptides
HK1085746B (en) Process for the purification of daptomycin
HK1217205B (en) High purity lipopeptides, lipopeptide micelles and processes for preparing same
HK1217204B (en) Process for the purification of daptomycin
HK1151546B (en) High purity lipopeptides, lipopeptide micelles and processes for preparing same
HK1163702A (en) High purity lipopeptides, lipopeptide micelles and processes for preparing same
HK1163702B (en) High purity lipopeptides, lipopeptide micelles and processes for preparing same

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20210118