CZ323095A3

CZ323095A3 - Synergistically stabilized liquid enzymatic mixtures

Info

Publication number: CZ323095A3
Application number: CZ953230A
Authority: CZ
Inventors: Percy A Jaquess
Original assignee: Buckman Labor Inc
Priority date: 1993-06-07
Filing date: 1994-06-06
Publication date: 1996-05-15
Also published as: ATE174956T1; EP0702712A1; JPH08510786A; ES2126764T3; DK0702712T3; CN1128543A; ZA943640B; NO954957D0; NO954957L; DE69415524T2; EP0702712B1; AU7058694A; CA2164615A1; NZ267909A; FI955851L; BR9407029A; SK153695A3; FI955851A7; FI955851A0; SG104908A1

Description

Předložený vynález se týká nových prostředků pro stabilizování nejméně jednoho enzymu obsaženého v kapalné enzymatické směsi. Jedinečné reologické vlastnosti složek těchto stabilizovaných prostředků přednostně poskytují synergistickou stabilizační kapacitu převyšující jiné vodné směsi enzymatických disperzi a to dokonce v podmínkách středně vysokých až vysokých teplot a v širokém rozmezí pH. Vynález se proto také týká stabilizovaných kapalných enzymatických prostředků. Dále se vynález vztahuje k nové metodě přípravy stabilizovaných enzymatických směsí a metodám používajícím stabilizované prostředky na bázi kapalných enzymatických směsi

Dosavadn1 stav t echn i ky

Používání enzymů a kapalných enzymatických směsí v průmyslu a na průmyslovém trhu v posledních několika letech rychle vzrostlo. Jak je dobře známo, enzymy mohou být kyselé, alkalické nebo neutrální, v závislosti na rozmezí pH, ve kterém jsou aktivní. Je zamýšleno všechny tyto typy enzymů využít ve vztahu s předkládaným vynálezem.

Mnoho enzymů a kapalných enzymatických směsi souvisí s kapalnými detergenty a používá se jako rozpouštěcl a čistící prostředky. Dále ve spojeni s kapalnými detergenty se enzymy a kapalné enzymatické směsi také používají v řadě různých obchodních a průmyslových oblastí, v nichž se nyní uplatňuje široký rozsah tříd enzymů.

Proteásy, dobře známá třída enzymů, jsou často používány v širokém rozsahu průmyslových aplikaci, kde hydrolyžují peptidové vazby v proteinech a proteinových substrátech. Z obchodního hlediska mají proteásy největší použití v průmyslu čistírenských detergentů, kde pomáhají odstraňovat skvrny proteinového původu, jako jsou skvrny od krve nebo vajec, a v sýrařském průmyslu, kde pomáhají při sýřeni mléka. Proteásy se také používají jako pros2 tředky pro zjemněni oasa, pro změkčování kůži, pro úpravu potravinářských přísad a pro uvolňování vůní. Bylo prokázáno, že kapalné enzymatické prostředky obsahující alkalické proteasy lze používat jako dispergační činidla pro bakteriální filmy a povlaky řas a hub ve vodních chladících věžích a v zadržovacích nádržích kapalin v kovoprůmyslu.

Proteasy mohou být charakterisovány jako kyselé, neutrální nebo basické proteasy v závislosti na rozmezí pH, ve kterém jsou aktivní. Mezi kyselé proteasy patři mikrobiální rennety, rennin (chymotrypsln), pepsin, a kyselé proteasy hub. Mezi neutrální proteasy patří trypsin, papain, bromelain/ficin, a neutrální bakteriální proteasy. Mezí alkalické proteasy patří subtilisin a podobné enzymy. Komerční kapalné enzymatické směsi obsahující proteasy jsou dostupné pod názvy Rennilase®, “PTN“ (pankreatický trypsin NOVO), PEM (protéciytická enzymatická směs), Neutrase®, A1calase®, Esperase®, a Savínaše®, které všechny dodává Novo Nordlsk Biondustrials, lne. Danbury, CT. Jiná komerční proteasa je dostupná pod názvem HT-Proteolytic a dodává ji firma Solvay Enzyme Products.

Amylasy, jiná třída enzymů, jsou také používány v mnoha průmyslových a komerčních postupech, ve kterých katalyzují nebo urychluji hydrolysu škrobu. Amylasy mají široké uplatnění v průmyslovém zpracování kukuřičných sirupů při výrobě glúkosových sirupů, maltosových sirupů, a řady jiných výše rafinovaných konečných produktů hydrolysy škrobu, kterými jsou sirupy s vysokým obsahem frutosy. Jako třída amylasy zahrnují «-amylasu, p-amylasu, amyloglukosidasu (glukoamylasu), amylasu z hub a pullulanasu. Komerční kapalné enyzmatické prostředky obsahující amylasu jsou dostupné pod názvy BAN, Termamyl®, AMG, Fungamyl® a Promozyme® od dodavatele Novo Nordisk, a Diazyme L/200 výrobce Solvay Enzyme Products.

Jiné komerčně hodnotné třídy enzymů jsou takové, které způsobují hydrolysu vláken. Tyto třídy zahrnují celulasy, hemicelulasy, pektinasy a p-g1ukanasy. Celulasy jsou enzymy, které odbourávají celulosu, lineární polymer glukosy, vyskytující se v buněčných stěnách rostlin. Hemicelulasy jsou zapojeny v hydrolyse hemlcelulos, které jsou obdobně jako celulosa rostlinným polysacharldem. Pektinasy jsou enzymy účastníci se odbourání pektl3 nu, sacharidu, jehož hlavní složkou je cukerná kyselina. 0-Glukanasy jsou enzymy zapojené do hydrolysy 0-glukanú, které jsou též podobné celulose, a to v tom, že jsou lineárními polymery glukosy. Z obchodního hlediska tyto enzymy mají menžl nebo vě t S í využ ití ve výrobn í ch procesech využ í va j ί c í ch odbourán1 vláken.

Celulasy se používají při postupu odstraněni tiskařské černě ze starého odpadového novinového papíru (ONP), takže není nutno používat žádné povrchově aktivní látky a alkalické chemikálie. Enzymy vytlačí tiskařskou čerň z povrchu vláken a dispergují částice černi do konečné podoby. Viz S. Say-Kyoun Ov, Metody biologického odstraňování tiskařské černi z novinového odpadového papíru, World Pulp and Paper Technology, pp. 63, 64 (1992). Souhrnně celulasy zahrnují endocelulasu, exocelulasu, exocelo/biohydrolasu, mannasu a celobiasu. Komerční kapalné enzymatické prostředky obsahující celulasy jsou dostupné pod názvy Celluclast® a Novozyn^l88, oba dodávané Novo Nordlsk.

Hemicelulasy jsou také používány pří odstraňování tiskařské černě k vytlačení částic černě z povrchu vláken ONP. Viz. D. Y. Prasad a spol., Enzyaatické odstraňování tiskařské černi z černobílých tiskařských odpadních novinových papírů, Progress in Paper Recycling, May 1992, pp 21 , 22. Dále se hemicelulasy jako jsou xylanasy používají v postupu běleni buničiny. Předběžná úprava sulfátové buničiny vede k značnému snížení spotřeby bělících chemikálií jako je molekulární chlor a rovněž zvySuje kvalitu buničiny, což se odráží v jejím vySSÍm dosaženém lesku. Viz D.J. Senior a spol., Snížení spotřeby chloru při bělení sulfátové buničiny po působeni stylanas, Ta ppi Journal (předběžné sdělení, aspekty publikace byly předneseny na Mezinárodni konferenci o bělení buničiny, Stockholm, 1991). PULPZYtí®, produkt dodávaný Novo Nordlsk, ECOPULF®, produkt dodávaný Alko Biotechnology, jsou dvěma příklady komerčně dostupných kapalných enzymatických přípravků obsahujících bělící enzymy na bází xylanas.

Hemicelulasy jako třída zahrnují směs hemlcelulas a galaktomananasu. Obchodní kapalné enzymatické směsi obsahující hemicelulasy jsou také dostupné jako PULPZYrí® od firmy Novo, ECOPULP^ od Alko Biotechnology, Novozyii® a Gamaňase®, tyto dva produkty jsou od Novo Nordlsk.

Pektinasy jsou komerčně používány k zeslabování buněčných stěn a ke zvýšeni extrakce ovocných šťáv a rovněž ke snížení viskosity a zabránění gelovatění v těchto extraktech. Pektinasy se skládají z endopolygalakturonasy, exopoly-galakturonasy, endopektát lyasy < transe 1 iminasy) , a endopektln lyasy (transe 1 i tn i nasy). Obchodní kapalné enzymatické přípravky obsahující pektinasy jsou dostupné pod názvy Pectine^®, Ultra SP and Pectinex®, oba vyrábí Novo Nordlsk.

/3-Glukanasy mají důležitou úlohu ve sladovnictví a pivovarnictví, kde je nutno modifikovat buněčné stěny ječmene obsahující p-glukany. p-Glukanasy zahrnují lichenasu, laminarinasu a exoglukanasu. Obchodními kapalnými enzymatickými přípravky obsahujícími p-glukanasy jsou Novozynř®234, Cerefld®, BAN, Finizym®, a Cereml x® výrobce Novo Nordlsk.

Dvě další třídy průmyslově a obchodně významných enzymů jsou lipasy a fosfolipasy. Lipasy a fosfolipasy jsou esterasové enzymy, které hydrolysují tuky a oleje napadením esterové vazby těchto sloučenin. Lipasy působí na triglyceridy, zatímco fosfolipasy na fosfolipidy. Pro průmysl jsou lipasy a fosfolipasy komerčně dostupnými esterasami a obě tyto třídy mají řadu průmyslových a obchodn1ch použ i t í.

V průmyslu papíru a celulosy se kapalné enyzmatické přípravky osvědčily zvláště při snížení smolných úsad na válcích a jiných zařízeních používaných ve výrobním postupu. Například, zpracování nebělené buničiny lipasami před bělením buničiny chlorem snižuje obsah chlorovaných triglyceridů, o nichž bylo udáno, že způsobují smolné úsady v postupu výroby papíru. Viz K. Fischer a K. Messner, Snížení obtížných úsad v drtičích buničiny lipolytickými enzymy, Tappi Journal, únor 1992, str. 130. Novo Nordlsk dodává na trh dva kapalné enzymatické přípravky pod názvy Resinase™ A a Resinaše™ A 2X, oba za určitých podmínek podle sdělení snižují významně smolné úsady odbouráním pryskyřic ze dřeva obsažených v buničlně.

Jiné důležité použití lipas je při odmašťování kůží a holin v koželužských výrobách. Alkalické lipasy se používají pro odmaštění ve spojení se speciálními proteasaai a emulgačními systémy, což rovněž zlepšuje namáčecí a loužicí účinky při zpracování kůží. Viz J. Chrlstner, Použití lipas v mokrých koželuž5 ských procesech, 87 J.A.L.C.A. 128 (1992).

Lipasy se rovněá používají k rozvinutí chuti sýrů a ke zlepšení chutnosti hovězího loje pro psy. V nevodných systémech se používají lipasy k synthese esterů z karboxylových kyselin a alkoholů.

Komerčně jsou dostupné kapalné enzymatické přípravky obsahující lipasy, například pod obchodními názvy Lipolase 100, Greasex 50L, Pal latase™A, Palatase™M a Lipozyme™, které dodává Novo Nordlsk.

Z hlediska komerčně používaných fosfollpas se používá pankreatlcká fosfolipasa Aa ke konverzi lecithinu na lysolecithin. Lysolecithin je podle sděleni výtečný emulgátor pro výrobu majonézy a pečení chleba. Obchodně je fosfolipasa Az dostupná v kapalném enyzmatickém přípravku dodávaném jako LECITASE™ firmou Novo Nordlsk.

Jinou komerčně hodnotnou třídou enyzmů jsou isomerasy, které katalyzujl konverzní reakce mezi isomery organických sloučenin. Isomerasy mají významně použití ve výrobě kukuřičných sirupů s vysokým obsahem fruktosy. Například, Isomerisace aldosy na ketosu katalyžovaná g1ukosoisomerasou zahrnuje rovněž přeměnu glukosy na fruktosu a je tedy jednou ze tří klíčových enzymatických reakci v průmyslu. Prostředek Sweetzyme® je kapalný enzymatický přípravek obsahující glukosoisomerasu a je dodáván firmou Novo Nord1sk.

Redoxní enzymy jsou enzymy, které působí jako katalyzátory v chemických οχ1dačn1ch/redukčních reakcích a tedy se uplatňují při odbourávání a synthese mnoha biochemlkáli i. V současné době ještě mnoho redoxnlch enzymů nenašlo významné uplatnění v průmyslu, protože většina redoxnlch enzymů vyžaduje přítomnost kofaktoru. Ovšem, tam, kde kofaktory jsou integrální součásti enzymu nebo nemusí být přidávány, jsou redoxní enzymy komerčně používány, zvláště v potravinářském průmyslu.

Redoxní enzym, g1ukosoox1dasa se používá k zabránění nežádoucích reakcí vedoucích ke zhnědnutl, které ovlivňují barvu a chuť jídla. G1ukosoox1dasa je též používána jako odstraňovač kyslíku“ k zabráněni vyvíjení pachuti ve šťávách a k ochraně barev a stability některých citlivých potravinářských přísad.

Redoxní enzym, katalasa, je používán k rozkladu zbytkového pero6 xldu vodíku použitého jako steří 1 izačniho prostředku. Třetí redoxní enzym, lipoxldasa (1ipoxygenasa) přírodně obsažený v sojové moučce a málokdy čištěný pro průmyslové použití, se používá při pečení, nejen k získání bělejšlho chleba, ale též k zabránění měknutí těsta způsobenému určitými činidly. Jiné redoxnf enzymy mají možné použiti od enzymatických synthes derivátů steroidů až k diagnostickým testům. Tyto redoxní systémy zahrnují peroxidasy, superoxiddlsmutasu, alkoholoxidasu, polyfenoloxidasu, xanthinoxidasu, sufhydryloxidasu, hydroxylasy, cholesteroloxidasy, lakasu, alkoholdehydrooxygenasu a steroidni dehydrogenasy.

Jsou-li enzymy, takové jaké byly výše popsané, připraveny nebo prodávány pro průmyslové použiti, obvykle jsou ve formě vodných nebo převážně vodných kapalných enzymatických přípravků určených pro určitý postup. Převážně vodné kapalné enzymatické přípravky mohou obsahovat další rozpouštědla v závislosti na určitém enzymu nebo použití přípravku. Tyto kapalné enzymatické přípravky jsou tradičně spojeny s problémy, jakými je chemická nestabilita, která může vyústit ve ztrátu enzymatické aktivity zvláště při skladováni. Tyto značné problémy ztráty enzymatické aktivity při skladováni obzvláště postihují průmysl kapalných detergentů.

Pro průmyslové produkty, jakými jsou kapalné enzymatické přípravky, není neobvyklé, že jsou skladovány v prodejnách v různých vyskytuj icích se klimatických podmínkách, kdy výrobky jsou vystaveny teplotám od mrazu až po více než 50°C po dlouhou dobu. Po skladováni při teplotních extrémech v rozsahu od 0°C do 50°C po řadu měsíců mnoho kapalných enzymatických přípravků ztrácí 20 až 100 procent jejich enzymatické aktivity v důsledku nestab11 i ty enzymu.

Byly konány mnohé pokusy stabilizovat enzymy obsažené v kapalných enzymatických přípravcích. Pokusy zvýšit stabilitu kapalných enzymatických přípravků použitím přípravků obsahujích alkoholy, glyceroly, dialkyglykolethery, jejich směsi a další látky měly pouze okrajový úspěch a to i v rozsahu mírných skladovacích teplot.

V U.S. patentu 4,801,544 byl použit jako stabilizátor systém ethylenglykolu a ethoxylováného lineárního neionogenního tenzidu s uhlovodíkovým rozpouštědlem a popsána enkapsulace enzymu v mi7 celách vytvořených ve směsi rozpouštědlo - tenzid. Obsah vody ve směsi byl udržován na méně než 5 procentech a enzymová stabilita byla ověřována při 35°, 70° a 100°F.

Stabilizace vodného enzymatického přípravku jistými estery byla popsána v U.S. patentu 4.548.727. Ester použitý jako stabilizátor měl vzorec RC00R', kde R je alkyl s jedním až třemi uhlíkovými atomy nebo vodík, a R’ je alkyl s jedním až šesti uhlíkovými atomy. Ester je obsažen ve vodném enzymatickém přípravku v množství od 0.1 až 2.5 hmotnostního procenta.

U.S patent 4,318,818 popisuje stabilizační systém pro vodné kapalné enzymatické přípravky, kde stabilizační systém obsahuje vápenaté ionty a nízkomolekuiární karboxylovou kyselinu nebo její sůl. pH stabilizačního systému je v rozmezí pH od asi 6.5 do asi 10.

U.S. patent 4,243,543 se týká stabilizace kapalných detergentnich přípravků obsahujících proteolytické enzymy. Detergentní přípravek se stabilizuje přídavkem antioxidantu a hydrofilního polyolu do přípravku, přičemž se stabilizuje pH přípravku.

U.S. patent 4,169,817 se vztahuje ke kapalným čistícím přípravkům obsahujícím stabilizované enzymy. Přípravek je vodným roztokem, který obsahuje od 10 do 50 hmotnostních % pevných látek a obsahuje detergentní plniva, povrchově aktivní látky, enzymatický systém odvozený od Bači JIus subtilis a enzym stabilizující činidlo. Stabilizační činidlo obsahuje ve vodě dobře rozpustné sodné nebo draselné sole a/nebo ve vodě rozpustné hydroxya1koholy a umožňuje skladovat roztok prodlouženou dobu bez deaktivace enzymu.

Evropský patent 0 352 244 A2 popisuje stabi1isovaný kapalný detergentní přípravek za použiti amfoterniho tenzidu.

δ

Podstata vynálezu

Předložený vynález poskytuje prostředek, který je schopný synerglsticky stabilizovat jeden nebo vice enzymů obsažených v kapalné enzymatické směsi.

Vynález tedy poskytuje stabilizovanou kapalnou enzymatickou směs.

Dále vynález poskytuje postupy pro přípravu stabilizovaných kapalných enzymatických směsi.

Různé aspekty vynálezu lze v širokém rozsahu splnit použitím prostředku pro stabilizaci kapalné enzymatické směsi obsahujícího:

(a) nejméně jeden polymer vybraný z polyetheru celulosy, akrylov ého polymeru, a polyamidu, (b) Ca-Cg vícesytný alkohol, a (c) vodu, kde složky (a) a (b) jsou obsaženy v množství účinném ke stabilizaci nejméně jednoho enzymu obsaženého v kapalné enzymatické směsi. Výhodně polymer (a) a Cz-C& vícesytný alkohol (b) jsou obsaženy v množství, které v jejich vzájemné kombinaci synerglsticky stabilizuje nejméně jeden enzym obsažený v kapalné enzymatické směsi.

Stabilizační prostředek, který je předmětem vynálezu, může být používán pro široký rozsah enzymů používaných v kapalných enzymatických směsích při zabezpečení širokého rozsahu jejich funkci. Enzymy a třídy enzymů, které lze s tímto stabilizačním prostředkemm použit zahrnují, ale neomezuji se, na výše uvedené enzymy a třídy enzymů.

Předmětem vynálezu jsou rovněž stabilizované kapalné směsi obsahuj ící^: (a) nejméně jeden polymer vybraný z polyetheru celulosy, akrylového polymeru, a polyamidu, (b) Ca-Ce vícesytný alkohol, (c) vodu, (d) nejméně jeden enzym:

kde složky (a) a (b) jsou přítomny ve množství účinném ke stabilizaci nejméně jednoho enzymu v kapalné enzymatické směsi.

Výhodně polymer (a) a Ca-Ca vícesytný alkohol (b) jsou pří9 tomny ve množství, které v jejích vzájemné kombinací synergisticky stabilizuje nejméně jeden enzym obsažený v kapalné enzyma11cké směs i.

Dále se vynález vztahuje k metodě přípravy stabilizované kapalné enzymatické směsi spojením enzymu s výše uvedeným stabilizačním prostředkem. Rovněž se vynález vztahuje k metodě používání stabilizovaného prostředku ke stabilizaci kapalného enzymatického prostředku zahrnující postup spojení stabilizačního prostředku s kapalnou enzymatickou směsí.

Vynález poskytuje ve výhodném provedení prostředek pro stabilizaci kapalné enzymatické směsi obsahující·' (a) nejméně jeden polýmer vybraný z polyetheru celulosy, akrylového polymeru, a polyamidu, (b) Cz-Ca vícesytný alkohol, a (c) vodu, kde složky (a) a (b) jsou přítomny v množství, které v jejich vzájemné kombinaci synergieticky účinně stabilizuje nejméně jeden enzym obsažený v kapalné enzymatické směsi.

Ve vodě rozpustný nebo alespoň ve vodě částečně rozpustný polymer je použit v prostředku pro stabilizaci kapalných enzymatických směsí nebo v stabilizovaných kapalných enzymatických směsích, které jsou předmětem vynálezu. Tedy, polymer musí mít dostatečnou rozpustnost, aby bylo dosaženo misi telnostl s vodou a vytvořena jedna fáze. Pokud má polymer tuto rozpustnost, nesmí se tento polymer oddělit po spojení s C2-C6 vicesytným alkoholem a vodou obsaženou ve stabilizačním prostředku nebo s kapalnou enzymatickou směsi. Prostředek nemusí být čirý roztok. Výhodně je prostředek emulze se zdánlivě homogenní strukturou.

V prostředku pro stabilizaci kapalné enzymatické směsi nebo v stabilizované kapalné směsi, které jsou předmětem vynálezu, množství přítomného polymeru také závisí na molekulové hmotnosti použitého určitého polymeru. Čím vySSí je molekulová hmotnost použitého polymeru, tím nižSÍ je obecně množství polymeru potřebné ke stabilizaci enzymu.

Polymer může být s výhodou použit ve množstvích do asi 50 hmotnostních % stabilizačního prostředku. Jeětě výhodnějfií je a nejvýhodněji od 1 do 10 % hmot obsah polymeru od 0,05 do 30 hmotnostních procěnl~V~Ve~VýlTOilném— provedeni je samozřejmě polymer obsažen v množství, které posky10 tuje žádanou synergistickou stabilizaci kapalné enzymatické směsi, je-li spojen s vícesytným alkoholem ve vodném nebo převážně vodném prostředku.

Polymer použitý v předloženém vynálezu je vybrán z polyetherů celulosy, akrylových polymerů a polyamidů. Polymer může být substituován nebo nesubstituován. Polymer může mít nižší iontový náboj, ale výhodně je svou povahou neionogenní.

Pokud je vybraným polymerem polyether celulosy, polymer je výhodně zvolen z polyíkarboxymethyl)etherů celulosy, polyíhydroxypropylmethyl)etherů celulosy,polyíhydroxyethylmethyl)etherů celulosy, polyíhydroxybutylmethyl)etherů celulosy, polyíhydroxypropyl)etherů celulosy, polyíethylhydroxyethyl)etherů celulosy.

S výhodou je polymerem polyíkarboxymethyl)ether celulosy. Určité polyethery celulosy použité v předloženém vynálezu, jako polyíkarboxymethyl)ethery celulosy jsou dodávány jako sole, t.j. sodné sole, a mají nevysoký anionický charakter. Výhodné jsou polyethery celulosy s molekulovou hmotnosti v rozsahu 15.000 až 100.000, ale ještě vhodnější jsou tyto polymery s rozsahem molekulárních hmotností 20.000 až 75.000.

Akrylové polymery použité v tomto vynálezu jsou výhodně polymery nebo kopolymery akrylové kyseliny, methakrylové kyseliny nebo jejich derivátů, např. esterů nebo solí akrylové kyseliny. Příklady výhodně vybraných akrylových polymerů jsou polymery firmy Rohm a Haas Acrysol GS ípolyakrylát sodný), Acrysol TI-935 íakrylový polymer), a Acrylin 22 íakrylový polymer). Molekulová hmotnost akrylových polymerů může být v rozmezí od asi 5.000 až více než 4.000.000. Výhodné akrylové polymery mají molekulové hmotnosti od 100.000 do více než 4.000.000, ale výhodnější jsou polymery s molekulovou hmotností v rozsahu 750.000 až více než 4.000.000. Obzvláště výhodné jsou akrylové polymery s molekulovou hmotnosti od 1.250.000 do 4.000.000. Akrylové polymery s těmito molekulovými hmotnostmi jsou dostupné od Aldrich Chemical Company. Akrylové polymery mohou mít aniontový charakter. Výhodné akrylové polymery jsou ty polymery nebo jejich deriváty, které mají mírný aniontový charakter nebo jsou nenabity, nejvýhodnější jsou iontově elektroneutrálnl polymery.

Pokud je použitým polymerem polyamid, nejvýhodnějším polyamidem je polyvinylpyrrolidon. Výhodné jsou polyvinylpyrrolidony s molekulovou hmotností v rozsahu 5.000 až 400.000, výhodnější pak ty s molekulovou hmotnosti v rozsahu 300.000 až 400.000, přičemž nejvíce výhodné jsou polymery s vyšší molekulovou hmotnost i.

Stabilizační prostředek také obsahuje C2-C6 vícesytný alkohol jako druhou složku. Ca-Ce vícesytný alkohol má synergietický účinek s výše popsaným polymerem na stabilizaci enzymu v kapalné enzymatické směsi. C2-C6 vícesytný alkohol je s výhodou glykol nebo trojsytný alkohol. Výhodněji je Ca-Ce vícesytným alkoholem glycerol, sorbitol, propy1eng1yko1, butylenglykol, hexylenglykol nebo ethylenglykol. Nejvýhodnějšlm Ca-Ce vícesytným alkoholem je glycerol.

Stabilizační prostředek obsahuje C2-C6 vícesytný alkohol v množství dostatečném, spolu s polymerem, stabilizovat alespoň jeden enzym v kapalné enzymatické směsi. Výhodně je C2-C6 vícesytný alkohol přítomen v množství Oj 50 až 60 hmotnostních procent stabilizačního přípravku, výhodněji v množství 5 až 50 hmotnostních procent, a dokonce ještě výhodněji mezi 10 až 30 hmotnostními procenty. Nejvýhodněji stabilizační přípravek nebo enzymatická směs obsahuje Ca-Ce vícesytný alkohol v množství spojeném s polymerem k dosaženi synergistlckého účinku.

Prostředky, které jsou předmětem vynálezu, jsou prostředky obsahující vodu nebo vodné prostředky, které obsahují dostatek vody k tomu, aby polymer byl mísitelný s prostředkem a neodděloval se. Obecně, C2-C6 vícesytné alkoholy jsou rozpustné ve vodě, ale je třeba přítomnosti dostatečného množství vody, aby prostředek tvořil jednu fázi. Jak již bylo uvedeno, neni vyžadováno, aby prostředek byl čirý roztok, s výhodou se jedná o emulsi se zdánlivě homogenní strukturou. Prostředky obsahující vodu mohou obsahovat ještě další rozpouštědlo kromě vody.

Ačkoliv stabilizační prostředky, které jsou předmětem vynálezu, mohou být připraveny smísením složek v jakémkoliv pořadí, prostředky jsou s výhodou připravovány přidáním potřebného množství polymeru ke směsi Ca-Ce vícesystného alkoholu a vody. Směs Ca-Ce vícesytného alkoholu s vodou může být připravena běžným postupem. Například, směs může být připravena prostým smísením vybraného vícesytného alkoholu s odpovídajícím množstvím vody, nebo zředěním předem připravené směsi.

Výhodná směs Ca-Ce vícesytného alkoholu a vody může obsahovat jakékoliv množství Cz-C© alkoholu dostatečné společně s výše uvedeným polymerem stabilizovat, výhodně synergistleky, alespoň jeden enzym v kapalné enzymatické směsi. S výhodou, směs obsahuje 1-95 hmotnostních procent vícesytného alkoholu nebo ve vodě rozpustného polymeru; výhodněji 10-50 hmotnostních procent; nejvýhodněji 30-50 hmotnostních procent. Pokud je vícesytným alkoholem glycerol, směs obsahuje s výhodou 50 hmotnostních procent glycerolu ve směsi s vodou. Bez vazeb na určité teorie se přihlašovatel domnívá, že směs působí navlhčení polymeru použitého v předloženém vynálezu, který ve směsi s Cz-Ce vícesytným alkoholem synergistleky stabilizuje enzym.

K odpovídající stabilizaci enzymu v kapalné enzymatické směsi v souladu s předloženým vynálezem je třeba, aby enzym vykazoval alespoň 90% své aktivity po 30 dnech při 25°C. Niže uvedené příklady demonstrují výhodnou synergistickou stabilizaci různých enzymů při 50°C po 30 dnech.

Stabilizační prostředek zde popsaný může být použit pro Široký rozsah enzymů, průmyslových postupů a obchodních produktů. Enzymy, průmyslové postupy a obchodní produkty, se kterými může být tento stabilizační prostředek použit, zahrnují výše uvedené, ale nejsou jimi omezené.

Použití stabilizačního prostředku ke stabilizaci kapalné enzymatické směsi vyúsťuje ve druhý předmět předloženého vynálezu, ve stabilizovanou kapalnou enzymatickou směs. Vynález se také týká stabilizované kapalné směsi obsahující nejméně jeden polymer vybraný z polyetherů celulosy, akrylových polymerů a polyamidů; C2-C6 vícesytný alkohol; vodu; a nejméně jeden enzym. Polymer a Ca-Ce vícesytný alkohol jsou obsaženy v celkovém množství účinném ke stabilizaci, zejména synergistické stabilizaci, nejméně jednoho enzymu obsaženého v kapalné enzymatické směsi. Výhodné prostředky odpovídající tomuto vynálezu jsou schopny dosáhnou vySSí viskosity než kvantitativně odpovídající vodné směsi se stejným polymerem.

Pozorovaná a výhodná provedení vzhledem k polymeru, Cz-Ce vicesytnému alkoholu a vodě přítomných v této stabilizované kapal13 né enzymatické smést jsou tatáž jako ta, která byla výše diskutována v případě stabilizovaného přípravku, který je též předmětem tohoto vynálezu.

Jako u stabilizačního přípravku, kapalná enzymatická směs, která je též předmětem tohoto vynálezu, může být využita pro Široký okruh enzymů. Tyto enzymy zahrnují enzymy a enzymové třídy dřivé zde diskutované, ale neomezuji se na ně. Enzymy, které mohou být použity, mohou pocházet ze zvířecích, rostlinných, fungálních, bakteriálních a syntetických zdrojů. Výhodně ve vodě dispergovatelné enzymy v tomto systému jsou proteásy včetně kyselých, alkalických a neutrálních proteas, které mají Široké použití v čistírenských detergentech a sýrařském průmyslu; amylasy, včetně kyselých, alkalických a neutrálních amylas, které jsou používány např. při zpracování kukuřičného sirupu; lipasy používané k rozvinuti chuti sýrů, v průmyslu papíru a celulosy a v kožedělném průmyslu: celulasy a xylasy.

V závislosti na předpokládaném použiti jsou enzymy často baleny a prodávány v koncentrovaných kapalných enzymatických směsích a zřeďovány před použitím. Enzymy mohou být rovněž dodávány v práSkové nebo vysušené formě. Množství enzymu přítomného po zředění koncentrovaného enzymu závisí na formě, v jaké byl enzym dodán. Obecně, množství enzymu má výhodně být v rozmezí 0.005 až 40 hmotnostních procent koncentrované kapalné enzymatické směsi, výhodněji v rozmezí 0,5 až 25%, a nejvýhodněji v rozmezí 10-20 %. Stabilizační prostředek, který je předmětem tohoto vynálezu, je specificky zamýšlen pro použiti v koncentrované kapalné směsi stejně jako pro směsi již naředěné pro použití. Množství stabilizačního prostředku potřebné ke stabilizaci nebo k synergistické stabilizaci koncentrovaného roztoku se může a pravděpodobně se bude lišit od množství pro zředěnou směs. Určeni odpovídajícího množství stabilizačního prostředku nebo jeho složek může být snadno zjištěno jednou z běžných metod oboru uvedenou v příkladech uvedených dále. Jak je běžně známo v oboru, množství přítomného enzymu je však závislé na aktivitě určitého enzymu a na požadovaném konečném použiti.

V závislosti na obsaženém enzymu a jeho zamýšleném použiti, pH konečné stabilizované enzymatické směsi je výhodné v rozmezí 5,0 až 10,0, ale výhodnější kolem 7,0. Nejvýhodnějšl je ponechat systém nastavit si své vlastní pH, obecně zhruba neutrální. Ale jak je v oboru známo, může být nezbytné nastavit pH malým množstvím kyselé nebo alkalické látky.

Stabilizovaná kapalná enzymatická směs může obsahovat vodu nebo být vodným roztokem a obsahovat jiná rozpouštědla nebo aditiva se zaměřením na použití směsi v určitém průmyslovém postupu. Např. stabilizovaná kapalná enzymatická směs může obsahovat aditiva jako povrchově aktivní látky, odpěňovače a podobně , což je běžně známo v oboru. Při synergistické stabilizaci tato aditiva mohou být přidána ve množstvích neinterferujících se synergistickou stabilizaci kapalné enzymatické směsi. Zkušený pracovník v oboru může snadno určit tato množství. Výhodně může být stabilizovaná kapalná enzymatická směs, která je předmětem tohoto vynálezu, použita a stabilizačního prostředku využito jako dispergačního činidla enzymu v průyslovýčh procesních vodách.

Předmětem tohoto vynálezu je rovněž postup přípravy stabilizované kapalné enzymatické směsi s krokem zahrnujícím spojení nejméně jednoho enzymu se stabilizačním prostředkem, který je rovněž předmětem tohoto vynálezu. Vynález dále zahrnuje metodu použiti stabilizačního prostředku ke stabilizaci kapalné enzymatické směsi obsahujíc! krok spojení kapalné enzymatické směsi se stabilizačním prostředkem. Ilustrativní a výhodné složky, stejně jako jejich množství, použité v postupu,jsou stejné jako v předchozí diskusi.

Průměrný odborník ví, že složky prostředku pro stabilizaci kapalné enzymatické směsi mohou být spojeny v jakémkoliv pořadí nebo dokonce současně. Nicméně, je výhodnější toto pořadí^: (a) smísit C2-Ce> vícesytný alkohol s vodou, (b) přidat ke směsi připravené v kroku (a) nejméně jeden polymer vybraný z polyetherů celulosy, akrylových polymerů, a polyamidů, a (c) přidat nejméně jeden enzym ke směsi vzniklé v kroku (b). Polymer a Ca-Ců vícesytný alkohol jsou přednostně přítomny ve spojeném množství synergistleky účinném stabilizovat nejméně jeden enzym ve vzniklé kapalné enzymatické směsi.

Alternativním postupem pro přípravu stabilizované kapalné směsi jsou tyto kroky:

(a) smísení Ca-Ce vícesytného alkoholu s vodou, (b) přidat ke směsi připravené v bodě (a) nejméně jeden polymer vybraný z polyetherú celulosy, akrylových polymerů a polyamidů, a (c) spojit prostředek vzniklý v krocích (a) a (b) s kapalnou enzymatickou směsi obsahující nejméně jeden enzym. Polymer a s výhodou přítomny ve spojeném stabilizovat nejméně jeden enzym

Ca-Ce vícesytný alkohol jsou množství synerglsticky účinném v kapalné enzymatické směsi.

V postupech odpovídajících tomuto vynálezu polymer přidaný v kroku (b) může být přidán samotný, jako vodná disperze nebo roztok, kde polymer je rozpuštěn ve vodě nebo ve vhodném organickém rozpouštědle. Maji - 11 být do stabilizované enzymatické směsi přidána další aditiva, mohou být přidána kdykoliv, ale výhodně před krokem (c) nebo v dalším kroku po přidání enzymu.

Následující příklady jsou uvedeny k objasněni předmětu vynálezu. Je však třeba upozornit na to, že vynález není omezen na určité podmínky nebo podrobnosti v těchto příkladech uvedené.

Příklady provedeni vynálezu

Příklad 1

Synerglsmus byl prokázán testováním glycerolu, označeného jako Složka A, a poly(karboxymethyl)etheru celulosy (CMC) s molekulovou hmotností 250.000 označené jako Složka B nebo polyvinylpyrrolidonu <PVP) s molekulovou hmotnosti 360.000 označeného jako Látka B* . Jak je zřejmé z Tabulek 1 a 2, experimenty byly provedeny s proměnným množstvím Látky A k Látce B nebo B' v rozsahu koncentraci a ověřeny různé typy enzymů pro zlepšeni stabilizace enzymatické aktivity při 50°C po 30 dnech. Koncentrace každé složky potřebná pro dosažení 90% původní enzymatické aktivity byla vzata jako koncový bod. Koncentrace jsou vyjádřeny jako hmotnostní procenta látky v konečné směsi při započteni přidaného enzymu, kde zbytek tvoří voda. Voda byla přidána k Látce A, glycerolu, za vzniku směsi glycerol-voda. Koncové body pro směsi obsahujíc! Látku A a Látku B nebo B' byly porovnány s kon16 covými body pro samotnou látku A a samotnou B, resp. B'.

Synergismus byl určen metodou, kterou popsali Kuli, F.C., Sylwestrowlcz, H.D., a Mayer, R.L., Applied 538-541 (1961) při použití poměru určeného vztaElsman, P.C,, Microblology 9 hem:

QA

Qa

QB

Qb kde Qa - množství v hmotnostních procentech vodné směsi Látky A působící samostatně, které poskytlo koncový bod,

Qb = množství v hmotnostních procentech vodné směsi Látky B působíc! samostatně, které poskytlo koncový bod,

QA - množství v hmotnostních procentech vodné směsi Látky A k látce B, které poskytlo koncový bod,

QB » Množství v hmotnostních procentech vodné směsi Látky B k Látce A, které poskytlo koncový bod.

Je-li součet QA/Qa a QB/Qb větší než jedna, indikuje antagonismus. Je-li tento součet roven jedné, Indikuje aditlvltu. Je-li tento součet menší než jedna, prokazuje synergismus.

Tento postup pro prokázání synergIsmu směsi, která je předmětem vynálezu, je široce používán a přijat. Podrobnější informace k tomuto postupu obsahuje U.S. patent 3.231.509 , jehož uvedení zde je odkazem.

Získané výsledky, které vyplývají z Tabulek 1 a 2 prokazují zvýšenou stabilizaci enzymu, HT-Proteolytic L-175, alkalické proteasy dodávané Solvay Enzymes, lne. Použitím metody, kterou popsal Kuli a spol, byly vypočteny součty QA/Qa + QB/Qb pro všechny směsi obsahující glycerol (Látka A) a CMC (Látka B). Vzory výpočtů jsou uvedeny pro některé koncové body, kde je patrný synergismus v těchto případech. Jak vyplývá z Tabulky 1 a vzoru výpočtu, hodnoty koncových bodů jsou 0,58, 0,67, 0,67 a 0,67, resp., což prokazuje existenci synergismu. Obdobně byly vypočteny součty pro QA/Qa + QB’/Qb’ pro všechna složení obsahující glycerol (Látka A) a PVP (Látka B’). Jak vyplývá z Tabulky a vzoru výpočtu, konečné body 0,85, 0,95, 0,65, 0,85 opět prokazují existenci synergismu.

TABULKA 1

Látka A (hmotnostní %)

30 20 10

Látka B (hmotnostní %) +

+ + + +* + +^x + * + x +

+*

( 1) ( *) koncový bod	90% enzymové aktivity po	30 dnech při
	50° C
(2) (+) -	£ 90% enzymové	aktivity po 30 dnech při	50° C
(3) (-) =	< 90% enzymové	aktivity zůstává po 30 dnech při 50°C
(4) Látka	A » glycerol
(5) Látka	B - CMC

Výpočty:

Qa	Qb	QA	QB	QA/Qa	+	QB/Qb
60	6	5	3	5/60		3/6 - 0,58
		10	3	10/60	+	3/6 = 0,67
		20	2	20/60	+	2/6 - 0,67
		30	1	30/60	+	1/6 - 0,67

TABULKA 2

Látka A (hmotnostní %)

30 20 10

Látka B' (hmotnostní %)

40	+	+	+	+	+	+ *
30	+	+	+	+*	+ *	-
20	+	+	+	-	-	-
10	+		+*	-	-	-
5	+	-	-	-	-	-
0

( 1) ( *) « koncový bod 2:	90% enzymové aktivity po	30 dnech při
	50° C
(2)	( +) -	ž 90% enzymové	aktivity po 30 dnech při	50° C
(3)	( -) -	< 90% enzymové	aktivity zůstává po 30 dnech při 50°C
(4)	Látka	A - glycerol
(5)	Látka	B* - PVP

Výpočty ··
Qa	Qb’	QA	QB'	QA/Qa ♦ QB’/Qb'
% 50	40	5	30	5/50 + 30/40 - 0,85
		10	30	10/50 + 30/40 - 0,95
		20	10	20/50 + 10/40 - 0,65
		30	10	30/50 + 10/40 - 0_;85

Příklad 2

Stabilizační přípravek , který je předmětem vynálezu jako v Příkladu 1 byl testován jiným enzymem, Diazyme L-200, glukoamylasou dodávanou Solvay Enzymes, Inc. Výsledky vyplývající z Tabulek 3 a 4 rovněž ukazují zvýšenou stabilizaci s tímto enzymem. Byl vypočten součet QA/Qa + QB/Qb pro všechny směsi obsahující glycerol (Látka A) a CMC (Látka B). Vzory výpočtů jsou uvedeny pro některé koncové body, kde je v tomto případě zřetelný synergismus. Jak vyplývá z Tabulky 3 a vzoru výpočtů, hodnoty těchto koncových bodů jsou 0,59, 0,67, 0,67, a 0,84, resp. prokazují existenci synergismu. Obdobně byly vypočteny součty QA/Qa * QB*/Qb* pro všechny směsi obsahující glycerol (Látka A) a PVP (Látka B'). Hodnoty koncových bodů vyplývající z Tabulky 4 a vzorů výpočtu byly 0,77, 0,53, 0,53, a 0,77 resp. a opět svědčící o existencí synergismu.

TABULKA 3

Látka A (hmotnostní %)

30 20 10

Látka B (hmotnostní %)

6	+	+		+	+	+x
3	+	+	*	+*	+*	-
2	+		+*	-	-	-
1	+	-	-	-	-	-
0	+*

( 1)	(*) =	^! koncový bod 2 50° C	90% enzymové aktivity po	30 dnech při
(2)	( +) »	2 90% enzymové	aktivity po 30 dnech při	50° C
(3)	( -) -	< 90% enzymové	aktivity zůstává po 30 dnech při 50°C
(4)	Látka	A - glycerol
(5)	Látka	B « CMC

Výpočty:

	Qa	Qb’	QA	QB’	QA/Qa	♦	QB' /Qb'
%	60	6	5	3	5/60	♦	3/6 - 0,59
			10	3	10/60	+	3/6 = 0,67
			20	2	20/60	+	2/6 = 0,67
			30	2	30/60		2/6 = 0,84

TABULKA 4

Látka A (hmotnostní %)

30 20 10

Látka B* (hmotnostní %)

(t) (*> =	¹ koncový bod Ž 50° C	90% enzymové aktivity po	30 dnech při
(2)	(+> >	ž 90% enzymové	aktivity	po 30 dnech při	50° C
(3)	( - ) »	< 90% enzymové	aktivity	zůstává po 30 dnech při 50°C
(4)	Látka	A - glycerol
(5)	Látka	B* - PVP

Výpočty i

Qa	Qb'	QA	QB'	QA/Qa	+	QB'/Qb'
%	50	30	5	20	5/50	+	20/30 -	0,77
			10	10	10/50		10/30 -	0,53
			20	10	20/50	+	10/30 -	0,73
			30	5	30/50	+	5/30 -	0,77

Příklad 3

Enzymy s esterasovou aktivitou byly testovány se stabilizační směsí, která je předmětem vynálezu, obdobně jako v Příkladu 1. Výsledky získané s enzymem , LIpolase, lipasou dodávanou Novo Nordlsk Bioindustries, lne. vyplývají z Tabulek 5 a 6 a ukazují zvýšenou stabilizaci tohoto enzymu. Byly vypočteny součty QA/Qa + QB/Qb pro všechny směsi obsahuj líc vodný glycerol (Látka A) a CMC (Látka B). Vzory výpočtů jsou uvedeny pro některé koncové body, kde je prokázán synergismus v tomto případě. Jak vyplývá z Tabulky 5 a vzoru výpočtu, hodnoty koncových bodů 0,43, 0_}37, 0j57, a 0_}77 resp. ukazuji přítomnost synergismu. Obdobně byly vypočteny součty QA/Qa + QB/Qb' pro všechny směsi obsahující glycerol (Látka A) a PVP (Látka B’). Hodnoty koncových bodů vyplývající z Tabulky 6 a vzoru výpočtu byly 0,60, 0,70, 0,65, a 0,85 resp. a svědčí o existenci synergismu.

TABULKA 5

Látka A (hmotnostní *)

30 20 10

Látka B (hmotnostní %)

6	4·	+	+	+	+	+*
3	+	+	+	+	+	-
2	+	+	+	+	+*	-
1	+	+ *	+*		-	-
0	₊ X

( 1)	(*) =	koncový bod 2 50° C	90X enzymové aktivity po	30 dnech při
(2)	(+) -	2 90X enzymové	aktivity po 30 dnech při	50° C
(3)	( -) =	< 90k enzymové	aktivity zůstává po 30 dnech při 50°C
(4)	Látka	A glycerol
(5)	Látka	B ° CMC

Výpočty:

Qa	Qb'	QA	QB*	QA/Qa	»·	QB* /Qb·
%	50	6	5	2	5/50	+	2/6 - 0,43
			10	1	10/50	+	1/6 - 0,37
			20	1	20/50	+	1/6 - 0,56
			30	1	30/50	+	1/6 - 0,76

TABULKA 6

Látka A (hmotnostní %)

30 20 10

Látka B* (hmotnostní %)

30	+	+	+	+		+ ^x
20		♦	+	+	+	+
10	+	+	+	♦*		-
5	+			-	-	-
0	+*

( 1)	( *>	koncový bod ž	90% enzymové aktivity po	30 dnech při
		50° C
(2)	(+) -	> 90% enzymové	aktivity	po 30 dnech při	50° C
(3)	( -) =	< 90% enzymové	aktivity	zůstává po 30 dnech při 50°C
(4)	Látka	A » glycerol
(5)	Látka	B' - PVP

Výpočty: Qa	Qb’	QA	QB'	QA/Qa +	QB* /Qb’
% 50	20	5	10	5/50	+	10/20 -	Q, 60
		10	10	10/50	+	10/20 =	0,70
		20	5	20/50	+	5/20 =	0,65
		30	5	30/50	+	5/20 =	0,85

Příklad 4

Hemlcelulasa , Pulpzyme HB, xylanasa dodávaná Novo Nordlsk Bioindustrials, lne. byla vybrána pro testování zvýšené stability směsi jako v Příkladu 1. Pro tento přiklad vyplývají z Tabulek 7 a 8 následující výsledky. Byly vypočteny součty QA/Qa + QB/Qb pro všechny směsi obsahující glycerol (Látka A) a CMC (Látka B). Vzorové výpočty jsou uvedeny pro koncové body, v nichž je zřejmý v tomto přikladu synergismus. Z Tabulky 7 a vzorového výpočtu vyplývají hodnoty koncových bodů 0,43, 0,53, 0,57, a 0,77 resp., které ukazuji přítomnost synergisrnu. Obdobně byly vypočteny součty QA/Qa + QB'/Qb*pro všechny směsi obsahující glycerol (Látka A) a PVP (Látka B’). Hodnoty koncových bodů 0,35, 0,45, 0,65, a 0,85, resp. indikují existenci synergismu.

TABULKA 7

Látka A (hmotnostní %)

30 20 10

Látka B (hmotnostní %)

6	4	4	4	4	4	+*
3	4	4	4	4	4	-
2	4	4	4	4*	+ *	-
1	4	4*	4*	-	-	-
0	4*

(1) (*) koncový bod £	90% enzymové aktivity po	30 dnech při
	50° C
(2)	(+) -	£ 90% enzymové	aktivity po 30 dnech při	50° C
(3)	( -) -	< 90% enzymové	aktivity zůstává po 30 dnech při 50°C
(4)	Látka	A » glycerol
(5)	Látka	B = CMC

Výpočty:
Qa	Qb'	QA	QB·	QA/Qa + QB’/Qb'
% 50	6	5	2	5/50 + 2/6 - 0,43
		10	2	10/50 + 2/6 - 0,53
		20	1	20/50 + 1/6 - 0,56
		30	1	30/50 + 1/6 - 0_;76

TABULKA 8

Látka A (hmotnostní %)

30 20 10

Látka B* (hmotnostní %)

40	+	4·	+	+	+	+*
30	+	4	♦	+	4-	-
20	+	4	+	4·	+	-
10	+	+*	+*	+*	+^x	-
5	+	-	-	-	-	-
0	+*	-	-	-	-	-

(1) (^x) « koncový bod 2: 90% enzymové aktivity po 30 dnech při

50° C

(2)	(+) =	2 90% enzymové aktivity po 30 dnech při 50°C
(3)	( -) =	< 90% enzymové aktivity zůstává po 30 dnech při 50°C
(4)	Látka	A » glycerol
(5)	Látka	B’ = PVP

Výpočty:

Qa	Qb'	QA	QB'	QA/Qa	+	QB' /Qb'
50	40	5	10	5/50	4*	10/40 - 0,35
		10	10	10/50	4·	10/40 - 0,45
		20	10	20/50	+	10/40 - 0,65
		30	10	30/50	4-	10/40 - 0,85

W 5K0-D5

Claims

1. Prostředek pro stabilizaci kapalných enzymatických směsí vyznačující se tím, že obsahuje·' (a) nejméně jeden polymer vybraný ze souboru zahrnujícího polyether celulosy,akrylový polymer a polyamid (b) C2-C6 vícesytný alkohol, a íc) vodu, kde uvedené složky (a) a (b) jsou přítomny ve spojeném množství synergisticky účinném stabilizovat nejméně jeden enzym obsažený v kapalné enzymatické směsi.

2. Prostředek podle nároku 1, vyznačující se t í m, že uvedený polymer je polyether celulosy vybraný ze souboru zahrnuj ί σ í ho poly(karboxymethyl)ether celulosy, polyí hydroxypropylmethyl)ether celulosy, polyí hydroxyethy1 methyl)ether celulosy, poly(hydroxybutylmethyl)ether celulosy, polyí hydroxypropyl)ether celulosy, polyí ethylhydroxyethyl)ether celulosy.

3. Prostředek podle nároku 1, vyznačující se t í m, že uvedený C2-C6 vícesytný alkohol je glycerol, sorbitol, propylenglykol, butylenglykol, hexylenglykol nebo ethylenglykol a uvedené složky (b) a íc) jsou obsaženy ve směsi obsahující 1-95 hmotnostních % uvedeného C2-C6 vícesytného alkoholu a zbytek je voda.

upravené nároky

- 29

4. Stabilizovaná kapalná enzymatická směs vyznačující se tím, Se obsahuje·’ <a> nejméně jeden polymer vybraný ze souboru zahrnujícího polyether celulosy, akrylový polymer a polyamid.

(b) směs C2-C6 vícesytných alkoholů, (c) vodu, a (d) nejméně jeden enzym, kde složky (a) a (b) jsou přítomny ve spojeném množství synergisticky účinném pro stabilizaci nejméně jednoho enzymu v kapalné enzymatické směsi.

5. Směs podle nároku 4, vyznačujíc! se t í m, že uvedeným polymerem je polyether celulosy vybraný ze ze souboru zahrnujícího poly(karboxymethyl)ether celulosy, poly(hydroxypropy1)ether celulosy, poly<hydroxyethylmethyl)ether celulosy, polyí hydroxybutymethyl)ether celulosy, polyíhydroxypropyl)ether celulosy a poly(ethylhydroxyethyl)ether celulosy.

6. Směs podle nároku 4, vyznačující se t í m, že uvedený Ca - Ce vícesytný alkohol je glycerol, sorbitol, propylenglyko1, butylenglykol, hexylenglykol nebo ethylenglykoluvedené složky (b) a (c) jsou obsaženy ve směsi 1-95 hmotnostních % uvedeného Ca-Ce vícesytného alkoholu a zbytek je voda; a uvedený enzym je vybrán z proteásy, amylasy, lipasy, celulasy, mannasy, a xylasy.

7. Směs podle nároku 4, vyznačující se tim, že uvedená směs je emulze.

upravené nároky

- 30

8. Stabilizovaná kapalná enzymatická směs vyznačující se tím, že obsahuje:

(a) nejméně jeden polymer zvolený ze souboru zahrnujícího polyether celulosy, akrylový polymer a polyamid, (b) směs C2-C6 vícesytných alkoholů, (c) vodu, a (d) nejméně jeden enzym, kde složky (a) a (b) jsou obsaženy v množství účinném stabilizovat uvedený nejméně jeden enzym v kapalné enzymatické směsi.

9. Způsob výroby kapalné stabilizované enzymatické směsi vyznačující se tím, že zahrnuje stupeň smíchání nejméně jednoho enzymu a směsi obsahující·’ (a) nejméně jeden polymer zvolený ze souboru zahrnujícího polyether celulosy, akrylový polymer a polyamid, (b) Ca-C& vícesytný alkohol, a < c) vodu, kde složky (a) a (b) jsou přítomny ve spojeném množství, které je synergisticky účinné stabilizovat nejméně jeden enzym v uvede né směsi.

10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se t í m, že před uvedeným stupněm smíchání dále zahrnuje stupně smíchání uvedeného Cz-Ce vícesytného alkoholu a vody a přidání polymeru zvoleného ze souboru zahrnujícího polyether celulosy, akrylový polymer a polyamid do uvedené směsi Cz-Ce vícesytného alkoholu a vody.

11. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že uvedený C2-C6 vícesytný alkohol je glycerol, sorbitol, propylenglykol, butylenglykol, hexylenglykol nebo ethylenglykol: uvedená směs obsahuje 1-95 hmotnostních % uvedeného C2-C& vícesytného alkoholu a zbytkem je voda: uvedený nejméně jeden enzym je vybrán z proteasy, amylasy, lipasy, celulasy, mannasy á xylasy.

c upravené nároky

- 31

12. Způsob použití prostředku vyznačující se t í m, že prostředek obsahuje:

(a) nejméně jeden polymer vybraný ze souboru zahrnujícího polyether celulosy, akrylový polymer a polyamid, (b) C2-C6 vícesytný alkohol, a (c) vodu, kde složky (a) a (b) jsou přítomny ve spojeném množství, které je synergistleky účinné stabilizovat nejméně jeden enzym obsažený v kapalné enzymatické směsi, pro stabilizaci kapalné enzymatické směsi zahrnující stupeň smícháni kapalné enzymatické směsi obsahující alespoň jeden enzym s uvedeným prostředkem.

13. Způsob podle nároku 12, vyznačující se tím, že uvedeným polymerem je polyether celulosy vybraný z poly(karboxymethyl)etheru celulosy a uvedeným C2-C6 vícesytným alkoholem je glycerol a uvedený nejméně jeden enzym je vybrán z proteasy, amylasy, lipasy, celulasy, mannasy a xylasy.

14. Způsob podle nároku 12, vyznačující se tím, že uvedený polymer je polyamid vybraný z polyvlnylpyrrolidonu a uvedený C2-C6 vícesytný alkohol je glycerol a uvedený nejméně jeden enzym je vybrán z proteasy, amylasy, lipasy, celulasy, mannasy a xylasy.